A cromatografia um mtodo fsico-qumico de separao.

. Ela est fundamentada na migrao diferencial dos componentes de uma mistura, que ocorre devido a diferentes interaes, entre duas fases imiscveis, a fase mvel e a fase estacionria. A grande variedade de combinaes entre fases mveis e estacionrias a torna uma tcnica extremamente verstil e de grande aplicao. O termo cromatografia foi primeiramente empregado em 1906 e sua utilizao atribuda a um botnico russo ao descrever suas experincias na separao dos componentes de extratos de folhas. Nesse estudo, a passagem de ter de petrleo (fase mvel) atravs de uma coluna de vidro preenchida com carbonato de clcio (fase estacionria), qual se adicionou o extrato, levou separao dos componentes em faixas coloridas. Este provavelmente o motivo pelo qual a tcnica conhecida como cromatografia (chrom = cor e graphie = escrita), podendo levar errnea idia de que o processoseja dependente da cor. A cromatografia pode ser utilizada para a identificao de compostos, por comparao com padres previamente existentes, para a purificao de compostos, separando-se as substncias indesejveis e para a separao dos componentes de uma mistura. As diferentes formas de cromatografia podem ser classificadas considerando- se diversos critrios, sendo alguns deles listados abaixo: 1. Classificao pela forma fsica do sistema cromatogrfico Em relao forma fsica do sistema, a cromatografia pode ser subdividida em cromatografia em coluna e cromatografia planar. Enquanto a cromatografia planar resume-se cromatografia em papel (CP), cromatografia por centrifugao (Chromatotron) e cromatografia em camada delgada (CCD), so diversos os tipos de cromatografia em coluna, os quais sero mais bem compreendidos quando classificados por outro critrio. 2. Classificao pela fase mvel empregada Em se tratando da fase mvel, so trs os tipos de cromatografia: a cromatografia gasosa, a cromatografia lquida e a cromatografia supercrtica (CSC), usando-se na ltima um vapor pressurizado, acima de sua temperatura crtica. A cromatografia lquida apresenta uma importante subdiviso: a cromatografia lquida clssica (CLC), na qual a fase mvel arrastada atravs da coluna apenas pela fora da gravidade, e a cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE), na qual se utilizam fases estacionrias de partculas menores, sendo necessrio o uso de uma bomba de alta presso para a eluio da fase mvel. A CLAE foi inicialmente denominada cromatografia lquida de alta presso, mas sua atual designao mostra-se mais adequada. No caso de fases mveis gasosas, separaes podem ser obtidas por cromatografia gasosa (CG) e por cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR). A diferena entre os dois tipos est na coluna. Enquanto na CGAR so utilizadas colunas capilares, nas quais a fase estacionria um filme depositado na mesma, a CG utiliza colunas de maior dimetro empacotadas com a fase estacionria. 3. Classificao pela fase estacionria utilizada Quanto fase estacionria, distingue-se entre fases estacionrias slidas, lquidas e quimicamente ligadas. No caso da fase estacionria ser constituda por um lquido, este pode estar simplesmente adsorvido sobre um suporte slido ou imobilizado sobre

ele. Suportes modificados so considerados separadamente, como fases quimicamente ligadas, por normalmente diferirem dos outros dois em seus mecanismos de separao. 4. Classificao pelo modo de separao Por este critrio, separaes cromatogrficas se devem adsoro, partio, troca inica, excluso ou misturas desses mecanismos. Dentre os vrios tipos de cromatografia, especial nfase ser dada cromatografia em camada delgada (CCD), cromatografia lquida clssica e de alta eficincia (CLAE) e cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR). Cromatografia planar A cromatografia em papel (CP) uma tcnica de partio lquidolquido, estando um deles fixado a um suporte slido. Baseia-se na diferena de solubilidade das substncias em questo entre duas fases imiscveis, sendo geralmente a gua um dos lquidos. O solvente saturado em gua e a partio se d devido presena de gua em celulose (papel de filtro). Este mtodo, embora menos eficiente que a CCD, muito til para a separao de compostos polares, sendo largamente usado em bioqumica. A cromatografia em camada delgada (CCD) uma tcnica de adsoro lquidoslido. Nesse caso, a separao se d pela diferena de afinidade dos componentes de uma mistura pela fase estacionria. Por ser um mtodo simples, rpido, visual e econmico, a CCD a tcnica redominantemente escolhida para o acompanhamento de reaes orgnicas, sendo tambm muito utilizada para a purificao de substncias e para a identificao de fraes coletadas em cromatografia lquida clssica. Cromatografia em coluna Cromatografia lquida clssica Esta tcnica muito utilizada para isolamento de produtos naturais e purificao de produtos de reaes qumicas. As fases estacionrias mais utilizadas so slica e alumina, entretanto estes adsorventes podem servir simplesmente como suporte para uma fase estacionria lquida. Fases estacionrias slidas levam separao por adsoro e fases estacionrias lquidas por partio. Suportes quimicamente modificados tambm tm sido usados, sendo o processo de separao misto neste caso. Esses suportes so acondicionados em tubos cilndricos geralmente de vidro, de dimetros variados, os quais possuem uma torneira em sua extremidade inferior. A Fig. 3 uma ilustrao de uma coluna cromatogrfica

empacotada com slica, sendo mostrados seus demais constituintes. Os adsorventes possuem partculas na faixa de 60-230 mesh, de modo a possibilitar um fluxo razovel do solvente atravs da coluna. O uso de slica de partcula menor (230-400 mesh) como adsorvente para essas colunas requer a utilizao de um sistema de bombeamento para o empacotamento e eluio, sendo conhecido como Cromatografia Flash. A principal etapa ao se utilizar essa tcnica o empacotamento, o qual, entre outros fatores, definir a eficincia da separao. Enquanto a alumina empacotada em sua forma original, a slica deve s-lo na forma de suspenso. coluna adiciona-se uma pequena quantidade de solvente e deposita-se na sua extremidade inferior um chumao de algodo com espessura de aproximadamente 0,5 cm para impedir a passagem de partculas da fase estacionria. A adio de slica deve ser feita com a torneira semi-aberta. O adsorvente adicionado lentamente coluna fixada na posio vertical, batendo-se continuamente ao longo da mesma para que todo o ar seja expulso, de modo a se obter uma compactao uniforme. A existncia de ar entre as partculas leva formao de canais na coluna, os quais alargam as bandas eludas. Nunca se deve permitir que o nvel do solvente desa abaixo do nvel do adsorvente, o que poderia acarretar rachaduras, comprometendo a eficincia da coluna. Aps o empacotamento, conveniente que se passe uma certa quantidade do eluente (duas a trs vezes o volume da coluna) a ser utilizado atravs da coluna antes da introduo da amostra. Esta adicionada coluna com o auxlio de uma pipeta no momento em que o nvel do eluente esteja o mais prximo possvel do adsorvente. Esse procedimento ameniza o alargamento das bandas a serem eludas. Tendo a amostra penetrado no adsorvente, o eluente ento adicionado cuidadosa e continuamente. A escolha do eluente segue os

princpios discutidos em CCD, mas neste caso ele pode ser mudado durante o processo cromatogrfico. Se, por exemplo, a amostra constituda por duas substncias, uma apolar e outra polar, utiliza-se primeiramente um eluente apolar e em seguida um
eluente polar. O volume das fraes a serem recolhidas funo da quantidade de amostra e do grau de dificuldade da
Figura 3: Ilustrao de uma coluna croma