CULTIVO DE ABCESOS Y SECRECIONES DE HERIDAS

I. MARCO TERICO
Las bacterias infecciosas se reproducen rpidamente en el organismo y muchas excretan sustancias qumicas llamadas toxinas las cuales pueden daar los tejidos. Las infecciones de piel y tejidos blandos son, junto con las infecciones de las vas respiratorias, las infecciones ms frecuentes en clnica humana

Tipos:  Agudas  Crnicas

Microbiologa de las heridas

El tejido subcutneo expuesto es un excelente medio de cultivo para la colonizacin y proliferacin de los microorganismos, que dependen de las caractersticas de la lesin. Los microorganismos provienen del entorno ambiental, de la propia microbiotaflora de la piel y de la flora bacteriana comensal de mucosas.

Potencialmente patgenos: Estreptococos beta-hemolticos, Staphylococcus. aureus, Enterococcus spp., Bacillus anthracis, Pseudomonas aeruginosa y otros bacilos gramnegativos como las Enterobacteriaceae, tanto en las heridas agudas como en las crnicas.

Son factores predisponentes de la infeccin la edad, la diabetes, la inmunosupresin, la obesidad, la malnutricin y las alteraciones circulatorias.

INFECCIN DE

LA HERIDA QUIRRGICA

Infeccin que se produce en la herida de una incisin quirrgica

La infeccin posoperatoria de la herida quirrgica es la mayor causa de morbilidad infecciosa en el paciente quirrgico.

Epidemiologa
Constituye la segunda causa de infeccin nosocomial y la desarrollan entre el 2-20% de los enfermos operados, segn el tipo de ciruga.
Se ha demostrado que cuando el sitio operatorio se encuentra contaminado con ms de 105 microorganismos por gramo de tejido, el riesgo de infeccin de la herida quirrgica se incrementa significativamente y la cantidad de grmenes requeridos para producir infeccin es mucho menor cuando se encuentran materiales extraos presentes en el sitio operatorio.

En las heridas sucias infectadas es frecuente encontrar como colonizadores, microorganismos como la E. coli, Klebsiella, B. fragilis, Clostridium species y estreptococo anaerobio

En los abscesos e infecciones intrahospitalarias la microflora del sitio operatorio es diferente; son grmenes multirresistentes, como la Pseudomona sp, Enterobacter sp y el Enterococo.

Microorganismo

Nmero de aislados (%)

Ciruga limpia

Ciruga limpiacontaminada

Ciruga sucia

Enterobacterias

470 (32,5)

110

187

173

Staphylococcus aureus

240 (16,5)

140

51

49

Enterococcus spp. BGNa no fermentadores

212 (14,6)

63

70

79

197 (9,1)

44

54

99

Staphylococcus epidermidis

118 (8,1)

59

26

33

Anaerobios

69 (4,8)

39

21

Otros

59 (4,0)

12

36

11

Levaduras Otros CGPbCGP

49 (3,4)

13

16

20

42 (3,0)

17

22

Total

1456

467

501

488

Infecciones post-parto

Las infecciones que ocurren durante el puerperio son una causa relativamente frecuente de morbilidad, y raramente incluso de mortalidad.

Tcnica

Factores que predisponen a infecciones post parto

y Obesidad. y Nivel econmico bajo. y Anemia. y Inmunosupresin. y Enfermedad crnica ( ejm diabetes mellitus). y Infeccin vaginal, especialmente vaginosis bacteriana.

Complicaciones
ENDOMETRITIS
y Infeccion al utero y Causa mas frecuente de infeccion despues de una cesarea. y Estas infecciones usualmente se extienden bastante ms all de la delgada capa

endometrial limitando con el miometrio adyacente, los tejidos blandos fibroareolares que se ubican dentro del parametrio, e incluso algunas veces ms all, con formacin de absceso plvico. y Pacientes con mayor riesgo de infeccin: aquellas que sufren de desnutricion, obesas, trabajo de parto prolongado, fiebre intraparto, ciruga laboriosa.

INFECCION DE HERIDA
y Es poco frecuente y Fiebre acompaada de dolor, sensibilidad, y eritema alrededor de la incisin se

observa ms frecuentemente al tercer o cuarto das despus del parto. y Se debe obtener el cultivo del sitio de incision, luego del cual se inicia con frecuencia el tratamiento antibitico de amplio espectro. y Absceso de la herida operatoria el drenaje del material purulento y el aseo con antispticos. y Fasctores que aumentan el riesgo: DM, malnutricion, duracion de cirugia, material de cirugia, obesidad, uso de corticoides, anemia

INCIDENCIA
13,823 cesreas

Organismos comnmente asociados con infecciones plvicas

Staphylococcus Escherichia coli Streptococcus

Klebsiella Clostridium Proteus

Materiales:
y

Hisopo de algodn o sinttico estril

Lmina porta objetos

Materiales:
y

Tubo con tapa de rosca estril conteniendo medio de transporte Medios de cultivo: Caldo Thioglicolato (CTh)
caldo de enriquecimiento ms utilizado en Microbiologa (Caseina, extractos de Levadura y Carne,Vitaminas, etc)

Materiales
y

Agar Sangre (AS), Agar Mac Conkey (MC), Medio Hipertnico (MH) y Agar Sabouraud (SAB)

Agar Sangre

usada para ver la capacidad hemoltica de los microorganismos patgenos

Agar Mac Conkey

Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos. Los organismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras
Microorganismos Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Salmonella typhimurium Shigella flexneri Proteus mirabilis Enterococcus faecalis Colonias Rojas con halo turbio Rosadas mucosas Incoloras, transparentes Incoloras, transparentes Incoloras, transparentes Diminutas, incoloras, opacas

Medio Hipertnico

Es un medio de cultivo conteniendo 6,5% de cloruro de sodio. Se usa para identificar la tolerancia salina de las bacterias

Agar Sabouraud
Medio utilizado para el aislamiento, identificacin y conservacin de hongos patgenos y saprfitos. Tambin es til para el cultivo de levaduras.
Microorganismos Saccharomyces cerevisiae Aspergillus niger Candida albicans ATCC 10231 Crecimiento Bueno Bueno Bueno

Obtencin de la muestra

La muestra fue tomada de una paciente mujer de 37 aos de edad la cual fue sometida a un parto por cesrea el 25 de octubre del presente ao, estuvo hospitalizada durante 5 das debido a la cesrea y por propias complicaciones producidas en el parto.

Obtencin de la muestra
La muestra de la herida que fue obtenida dos das despus de su ltimo da de hospitalizacin, todava presentaba los puntos realizados tras la operacin. y Se tuvo en cuenta adems, que la paciente no se encontraba en tratamiento con antibitico y que la nica recomendacin dada por su doctor para el tratamiento de la herida fue el de higiene diaria con agua y jabn.
y

Obtencin de la muestra
Para poder obtener una muestra de buena calidad se le pidi a la paciente que no realizara la limpieza de la herida 24 horas previas al examen realizado, para el cual se emple un hisopo de algodn esterilizado, el cual se humedeci con la secrecin y teniendo el cuidado necesario para no tocar superficie de piel evitando as la contaminacin con la microbiotaflora normal. y El hisopo con la muestra se coloc dentro del tubo con medio de transporte y se conserv a 5C durante 1 da.
y

Coloracin Gram
y

Con el hisopo se hizo un pequeo frotis en el portaobjetos, al cual luego se le aplic la tcnica de coloracin Gram

Siembra
y

Con el hisopo se hizo un pequeo frotis en un ngulo de cada medio de cultivo, y luego con el asa de siembra se distribuy la muestra por agotamiento. Luego se incubaron las placas a 37C por 48 horas.

Siembra
y

Al tubo con el medio de transporte se le aadi +/- 3 ml de caldo thioglicolato y tambin se incub a 37C.

oEn el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. o Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en las colonias, y la precipitacin de las sales biliares. Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras.

 Indica: Fermenta Lactosa o no Resultado: Positivo Posibles bacterias: Escherichia coli Klebsiella

oSe trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina. oLos estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias sospechosas, se repicarn en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa.

oEn el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH. oLas bacterias que crecen en un medio con alta concentracin de sal y fermentan el manitol, producen cidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo. oLos estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol.

 Indica: Metaboliza manitol o no Desarrolla en medio salado o no Resultado: Positivo Posible bacteria: Staphylococcus aureus

oEs una combinacin de un Agar base (Agar nutritivo) con el agregado de 5 % de sangre ovina, tambin puede usarse sangre humana, para cultivos en una placa de Agar. o El Agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. oSe usa tambin para ver la capacidad hemoltica de los microorganismos patgenos (que es un factor de virulencia). o Observando los halos hemolticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemlisis que posee: alfa: halos verdosos beta: halos incoloros gamma: inexistencia de halos

 Indica: Capacidad hemoltica de microorganismos patgenos Resultado: Gamma hemolticos ( no hemolticos) Posibles bacterias: Streptococcus fecales

oMedio selectivo para el cultivo de hongos patgenos y no patgenos, en particular de levaduras y dermatofitos. oEl pH acido (5.6) del medio inhibe muchas especies de bacterias. oLa adicin de cloranfenicol hace el medio ms selectivo. o Diagnstico caractersticas tales como estructuras de esporas y la pigmentacin estn bien desarrollados en este medio.

40 g / L de dextrosa 10 g / L de peptona 20 g/L agar pH 5.6 pH 5,6

 Indica: Presencia de hongos o no Resultado: Positivo Posibles bacterias: Candida albicans