Prtica 2 - Bioqumica e Biofsica

Eletroforese de Protenas

Eletroforese
y Mtodo Biofsico de estudo de solues; y Mtodo muito utilizado em laboratrios; y Separao de componentes de uma soluo pela

aplicao de um campo eltrico; y Ctions migram para o ctodo (plo negativo) e os nions para o nodo (plo positivo); y Separao pela carga e pela quantidade de carga; y Separao pelo tamanho e forma da partcula

Separao eletrofortica de protenas do Soro

y Material  Cuba e fonte de eletroforese  Tampo Tris-HCl pH=9,5  Corante negro amido  Descorante  Suportes  Papel de filtro  Placas de Petri  Pina  Estufa ou secador de cabelos  Cronmetro

Protenas do Soro
y Albumina (pI=4,6) y Globulinas  1 (pI=4,9)  2 (pI=4,9)  (pI=5,8)  (pI=7,0)

Se o pH do sistema for acima do pI da protena, ela fica com cargas negativas e migra para o plo positivo. Protenas com pI mais distantes do pH do sistema migraro com maior velocidade.

Mtodo
y Colocar 120ml de tampo na cuba; y Separar gel de agarose da placa de acrlico y Aplicar soro nas canaletas com microcapilar y Colocar gel na cuba (+ do gel com + da cuba) y Tampar a cuba e lig-la: 100V por 30 min; Verificar formao de bolhas

nos cantos

y Desligar a cuba e retirar o gel y Eliminar excesso de tampo das borda do gel com papel de filtro y Mergulhar o gel (sempre voltado para cima) em 200ml de corante (negro

amido) por 30 min

y Retirar gel do corante com pina e mergulh-lo em descolorante por 15min

sob agitao cabelos)

y Retirar excesso de descolorante e secar gel a 60oC (estufa ou secador de

Resultados e Concluso
y Valores de referncia para protenas totais so de 6 a

8g/dL (Oliveira Lima, 2001)



Valores aumentados (hiperproteinemia): desidratao (vmito, diarria, doena de Addison, acidose diabtica); Valores diminuidos (hipoproteinemia): jejum prolongado, m absoro.
Aplicao (-) -globulina (pI=7,0) pH do meio = 9,5 -globulina (pI=5,8) 2-globulina (pI=4,9) 1-globulina Albumina (pI=4,6)

Perfil eletrofortico de protenas

Processo inflamatrio agudo 2 1A

y Reao aguda: qalbumina e

Normal

2 1A

o 2-globulina (infeces agudas, infarto, necrose tecidual,queimaduras graves, cirurgias, outras condies estressantes, doenas reumticas);

y Inflamatrio crnico: normal

Processo crnico

2 1A

ou o 2-globulina e o -globulina (doenas granulomatosas, cirrose, doenas reumticas do colgeno);

Perfil eletrofortico de protenas

y Sndrome nefrtica: qalbumina e o 2-globulina com ou

sem o -globulina;
y Cirrose avanada: qalbumina e o -globulina; y Gamaglobulina policlonal: o -globulina (infeces

crnicas, doenas granulomatosas como sarcoidose ou tuberculose pulmonar avanada, endocardite bacteriana subaguda, doenas reumticas do colgeno como artrite reumatide, lpus ou poliartrite nodosa);
y Hipogamaglobulinemia: q -globulina (mieloma

mltiplo)