Coordenadoria de Biotecnologia Curso de Bioqumica

Prtica: Consumo de glicose por clulas de levedura Alunos: Gabriel Moura, Ivanilson, Jeremias Soares e Victor Baetas Turma: QM161 Professores: Ana Paula e Cristiano Riger Data da realizao da prtica: 06/06/2011 Data da entrega do relatrio: 13/06/2011 Avaliao:

Critrio: Apresentao Introduo Objetivos Mtodos Resultados Discusso Bibliografia Total:

Nota:

ndice: Introduo..........................................................................................................................3 Objetivos............................................................................................................................4 Materiais, equipamentos e reagentes.................................................................................4 Mtodos.............................................................................................................................6 Resultados.........................................................................................................................7 Discusso...........................................................................................................................8 Concluso..........................................................................................................................9 Bibliografia......................................................................................................................10 Anexo...............................................................................................................................11

I Introduo: Os carboidratos so as biomolculas mais abundantes na natureza e desempenham uma grande variedade de funes, como funo estrutural, de fonte e reserva de energia, servindo tambm de matria-prima para a biossntese de outras biomolculas. Dentre os principais carboidratos destaca-se a glicose. O nome glicose tem origem no grego e significa doce, sabor adocicado (o que seria uma caracterstica geral dos carboidratos). A glicose o carboidrato mais importante da biologia, pois as clulas a usam como fonte de energia e intermedirio metablico, ela apresenta seis tomos de carbono e um grupo aldedo, sendo assim, intitulada como uma aldohexose (Frmula Molecular: C6H12O6) Frmula estrutural:

Alfa

Beta

Cadeia Aberta

A principal diferena entre a alfa e beta glicose a posio da hidroxila do Carbono 2 em relao hidroxila do Carbono 1 e, assim, a distribuio das cargas na molcula. A alfaglicose apresenta a hidroxila abaixo do plano do anel e o polissacardeo formado pela associao de molculas de alfa-glicose amido, por sua vez, na beta-glicose, a hidroxila fica acima do plano do anel e o polissacardeo formado pela associao de molculas de betaglicose a celulose. Em determinadas condies, apresenta cadeia aberta. A Glicose encontrada nas uvas e em vrios frutos. Industrialmente obtida a partir do amido. No organismo humano, a glicose armazenada no sangue (e a concentrao de glicose no mesmo controlada pelo fgado), no metabolismo, uma das principais fontes de energia e fornece em torno de 4 calorias de energia por grama. A sua degradao qumica durante o processo de respirao celular d origem a energia qumica (armazenada em molculas de ATP - aproximadamente 30 molculas de ATP por molculas de glicose), gs carbnico e gua. A elevao (descontrole) da taxa de glicose no sangue (hiperglicemia) resulta da falha na secreo e/ou ao da insulina (hormnio produzido no pncreas, responsvel justamente pelo controle da taxa de glicose no sangue) e um sintoma da doena chamada diabetes. Ela provoca uma srie de complicaes no organismo que podem levar, inclusive, morte.

II Objetivos: Quantificar glicose atravs do mtodo do DNS. III Materiais e reagentes: Dosagem de glicose pelo mtodo do DNS:

Solues: Soluo padro de glicose 10 mM Soluo de DNS (DNS 1%p/v, Tartarato duplo Na/K 30%p/v em NaOH 0,4mol/L): Soluo de Glicose 0,5% (27,8M) Material: (15) tubos de ensaio grandes (4) Pipetas de 1mL, 1 pipeta de 5mL e 1 pipeta de 10mL (3) Beckers 50mL (3) Pr-pipetes (10) cubetas (1) agitador de bandeja (1) pipeta automtica Ponteiras amarelas (1)basto de vidro (1) Erlenmeyer de 250 mL (1) bexiga de aniversrio verde (1) estante de tubos Fermento biolgico seco Pedaos de Parafilm Equipamentos: Banho-Maria (100C): De Leo & Cia Ltda.

Espectrofotmetro: Spectronic (r) Genesys(tm) 5 Centrfuga Excelsa Baby: Modelo: 206-R Marca: FANEM

IV Mtodos: Dosagem de glicose pelo mtodo do DNS: Colocou-se 1g de fermento em um erlenmeyer de 250 mL e adicionou-se 70 mL de glicose 0,5%, agitou-se vigorosamente at formao de suspenso homognea. Pipetou-se 5mL da suspenso, transferiu-se para um tubo de ensaio e colocou-se em banho de gelo como o tempo 0. Colocou-se o erlenmeyer sobre agitao com a bexiga tapando a boca do mesmo, e retirou-se 5mL em tempos sucessivos de 15, 30 e 45 minutos, colocando-os em banho de gelo, para interromper o consumo glicoltico. Esperou-se 5minutos aps o ltimo tubo. Centrifugou-se as amostras por 10 minutos, retirou-se alquotas de 0,1mL do sobrenadante, com pipeta automtica, em outros tubos. Pipetou-se gua destilada, DNS e glicose 10mM conforme a tabela abaixo. Tubo no gua destilada sol. padro de glicose 10 mM Sol glicose [?] desconhecida sol. DNS

1 2 3 4 5 6 T0 T15 T30 T45

1,0 0,9 0,8 0,7 0,6 0,5 0,9 0,9 0,9 0,9

0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 -

0,1 0,1 0,1 0,1

1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0 1,0

Tabela 1: Alquotas das solues reagentes. Em seguida, homogeneizou-se os tubos. Aqueceu-os em banho-maria 100C por 5 min. Aguardou-se que os tubos esfriassem , em seguida acrescentou-se 8 mL de gua em cada tubo, obtendo-se um volume final de 10 mL em todos os tubos.

Tampou-se os tubos com Parafilm e homogeneizou-se os tubos. Ento, fez-se a leitura espectrofotomtrica da absorbncia (a 540 nm) de cada um dos tubos, utilizando o tubo 1 branco como referncia de calibrao para o aparelho

V Resultados Dosagem da glicose pelo mtodo do DNS: Tubos (n) 1 2 3 4 5 6 T0 T15 T30 T45 Tabela 3: Absorbncias das solues padres diludas de glicose. VI Discusso Dosagem da glicose pelo mtodo do DNS: Mediante a interao com DNS (cido 3,5-dinitrosaliclico), pode-se dosar a concentrao de glicose desconhecida a partir das amostras de concentrao 10mM deste acar redutor. O mtodo constitui em reduzir o DNS (composto de colorao amarelo forte) a cido 3-amino-5nitrosaliclico (composto de colorao laranja amarronzado), oxidando o grupo aldedo do acar a grupo carboxlico, e este composto gerado a partir da ao do acar redutor que absorve luz a 540nm. Na absorbncia, dois dos resultados saram com valores inesperados, o que foi devido ao tempo de espera que os tubos foram deixados em banho-maria, pois este foi ultrapassado em 2 minutos. Porm, ainda com este equvoco, pode-se calcular a concentrao aproximada da soluo de glicose desconhecida. O que feito mediante ao Fator de Calibrao Mdia (FCM). Os clculos para tais esto em anexo. [ ] Soluo padro de glicose (mmol/L) Absorbncia (540 nm) 0,000 0,133 0,220 0,316 0,450 0,515 0,331 0,295 0,260 0,192

VII Concluso Pode-se calcular, mediante s absorbncias apresentadas por intermdio da anlise espectrofotomtrica, a concentrao desconhecida de uma soluo com o mesmo soluto e solvente das analisadas pelo aparelho (no caso, soluo de glicose).

VIII Bibliografia Referncias digitais:

<http://www.feq.unicamp.br/~cobeqic/tBT04.pdf> acessado em 08/06/2011 s 19:20h; <http://www2.iq.usp.br/docente/srmarana/exerciciosquim.pdf> acessado em 08/06/2011

s 19:30h; Referncias bibliogrficas: LEHNINGER, Albert Lester; Princpios de Bioqumica; Traduzido por W. R. Lodi & A. A. Simes; 3 Ed. So Paulo, 2002; Editora Sarvier; STRYER, Lubert; Bioqumica; 4 Ed. Rio de Janeiro, 1996. Editora Guanabara Koogan.

IX Anexo Dosagem de glicose: a) Clculo da concentrao de glicose nos tubos:

1) Tubo 1:
Ci . Vi = Cf . Vf 10 . 0,2 = 2 . Cf 2 = 2 . Cf Cf = 1 mmol/L

2) Tubo 2 Ci . Vi = Cf . Vf 10. 0,4 = 2 . Cf 4 = 2 . Cf Cf = 2 mmol /L

3) Tubo 3: Ci . Vi = Cf . Vf 10 . 0,6= 2 . Cf 6 = 2 . Cf Cf = 3 mmol/L

4) Tubo 4:
Ci . Vi = Cf . Vf 10 . 0,8= 2 . Cf 8 = 2 . Cf Cf = 4 mmol/L

5) Tubo 5:
Ci . Vi = Cf . Vf 10 . 1,0= 2 . Cf 10 = 2 . Cf Cf = 5 mmol/L

b) Clculo da concentrao desconhecida de glicose:

FCM =

FCM = FCM = 0,103466667 (mmol/L)-1 Abs [?] glicose = 0,220

[?] glicose =

[?] glicose =

= 2,12628866 mmol/L

[?] glicose ~ 2,1 mmol/L