6

Espectrofotometria
6.1 Introduo ca

Medir basicamente chacoalhar o objeto sob estudo, e ver o que acontece. Uma maneira boa de cutucar e molculas, com radiao eletromagntica (luz). A palavra espectrofotometria designa um mtodo de e e ca e e anlise baseado em medidas de absoro de radiao eletromagntica. A tcnica que aqui se descreve est a ca ca e e a restrita a uma pequena regio de comprimento de onda da radiao eletromagntica, que corresponde a ca e a ` luz vis ou ultra-violeta: a faixa entre aproximadamente 200 e 700 nm (1 nanometro = 109 m, vel e 700 nm = 0,7 m.)

6.2

Absoro de Radiao ca ca

Vrias coisas podem acontecer com a radiao luminosa que atinge uma certa substncia (ver Figura 6.1) a ca a A radiao incidente pode sofrer reexo, refrao, espalhamento ou ser absorvida pelo material. ca a ca Disso resulta que somente uma parte da radiao incidente transmitida atravs do material. ca e e O processo de absoro ocorre ao n molecular. Assim, como acontece num tomo, cada molcula ca vel a e caracteriza-se por possuir n veis de energia moleculares quantizados, os quais podem ser ocupados pelos eltrons das molculas. Por outro lado, a radiao carrega energia, sendo que o valor dessa energia e e ca depende do comprimento de onda da radiao. A absoro da radiao se d quando a energia que ca ca ca a ela transporta igual ` diferena entre dois n e a c veis de energia da molcula; nessa situao, a energia da e ca radiao transferida para a molcula e ocorre a chamada absoro de radiao. ca e e ca ca Como molculas de substncias de substncias diferentes tm diferentes n e a a e veis moleculares de energia, ocorre que cada substncia absorve a radiao de maneira peculiar. Dito de outra forma, os compria ca mentos de onda que uma certa substncia absorvero so caracter a a a sticos da sua estrutura e outras substncias absorvero outros comprimentos de onda. Se levantarmos dados referentes ` intensidade de a a a luz absorvida por uma substncia, em funo dos comprimentos de onda da radiao, estaremos obtendo a ca ca uma curva chamada espectro de absoro da substncia. O importante que cada substncia tem um ca a e a espectro caracter stico e, desse modo, se queremos identicar um material desconhecido, poderemos faz-lo a partir de sua curva de absoro, comparada com curvas de substncias conhecidas. e ca a Uma vez conhecido o espectro de absoro de uma dada substncia pode-se tambm determinar em ca a e que quantidade essa substncia se apresenta em uma soluo analisada. Isso feito atravs da medida a ca e e da intensidade de luz que atravessa a amostra, como veremos a seguir.

Figura 6.1: Reexo, refrao, espalhamento e absoro fazem com que a luz que sai da amostra tenha a ca ca uma intensidade menor do que a luz que incide. 1

6.3. Lei de Lambert-Beer

Figura 6.2: Experimento ao qual se refere a lei de Lambert-Beer.

6.3

Lei de Lambert-Beer

Lambert estudou a transmisso de luz por slidos homogneos. Beer estendeu o trabalho de Lambert a o e ao estudo de solues. Pode-se apresentar as concluses dois dois pesquisadores na forma de uma lei co o conhecida como a Lei de Lambert-Beer. Atravs dessa lei, intensidades da radiao incidente e emergente podem ser relacionadas com as e ca concentraes do material presente na soluo. Vamos discorrer brevemente sobre essa lei, com os co ca seguintes esclarecimentos: 1. So considerados desprez a veis os efeitos de reexo, refrao e espalhamento. a ca 2. A radiao incidente deve ser monocromtica, isto , conter somente um comprimento de onda. ca a e Isto posto, vamos considerar a situao ilustrada na Figura 6.2. I0 e I so, respectivamente, as intensica a dades da radiao incidente e transmitida pela amostra. Muitas vezes, a intensidade transmitida decai ca exponencialmente com o aumento do caminho percorrido na soluo (comprimento l da Figura 6.2), e ca tambm com o aumento da concentrao c: e ca I = I0 10lc sendo c a concentrao do material em estudo, l o comprimento interno do recipiente que contem a ca soluo, e (), o coeciente de extino ou absortividade ou coeciente de absoro, um fator caracca ca ca ter stico da substncia absorvedor (e o solvente), que depende do comprimento de onda da radiao. a ca A grandeza que medimos experimentalmente a transmitncia T que a razo entre a intensidade e a e a incidente e a transmitida: T = I/I0 (6.1) Em relaao a essa grandeza, a lei de Lambert-Beer assume ento a forma c a T = 10lc A absorbncia A denida como a e A = log10 T Assim, em relao ` absorbncia a lei de Lambert-Beer escrita ca a a e A = log10 T = log10 (1/T ) = log10 (10lc ) e portanto, A = lc (6.3) Vemos o porque da denio da absorbncia: nas condies da validade da lei de Lambert-Beer uma ca a co e quantidade proporcional ` concentrao. O espectrofotmetro se torna um medidor de concentrao a ca o ca seletivo para um determinada substncia, atravs da relao c = A/l. a e ca De uma maneira geral, para uma soluo de dada substncia, em um certo solvente, analisada a ca a um certo comprimento de onda da radiao, pode-se traar uma curva da absorbncia A em funo da ca c a ca concentrao c; a partir dessa curva ser poss determinar a concentrao de qualquer amostra dessa ca a vel ca soluo. ca (6.2)

6.4. Instrumentao ca

6.4

Instrumentao ca

De maneira global, um espectrofotmetro tem trs partes: o e Fonte de radiao normalmente uma lmpada incandescente. Existe tambm um controle de inca e a e tensidade da radiao, mas fundamental um meio de controle do comprimento da onda (por ca e exemplo, ltros ou monocromatizadores como prismas ou grades de difrao). No nosso aparelho, ca pode-se selecionar o comprimento de onda da luz incidente atravs de um controle manual. e Amostra deve estar contida em um recipiente apropriado do tipo tubos de ensaio ou cubetas. Como normalmente medidas comparativas so feitas (uma medida com s solvente, outra com solvente a o e soluto), as cubetas vm emparelhadas. As cubetas so fabricadas o mais igual poss e a vel. Assim, no resultado nal, somente o soluto faz uma contribuio ` absoro. ca a ca Detetor um elemento sens ` radiao e que pode nos dar uma medida da intensidade da mesma; e vel a ca varia desde foto-molculas at o prprio olho. Um indicador no aparelho converte o sinal do e e o elemento em um nmero. Os instrumentos em geral dispe de duas indicadores: uma delas nos d u o a a transmitncia T (Eq. 6.1) e a outra d a absorbncia A (Eq. 6.2) direto, evitando a necessidade a a a de uma calculadora.

6.5

Experimento

A molcula guaiazuleno (C15 H18 , 198,31 g/mol) foi isolado originalmente a partir do leo essencial e o de camomila. E usado como corante em alimentos e cosmticos. Temos uma soluo de 19,8 mg de e ca guaiazuleno em 100 ml de ethanol. Queremos levantar o espectro de absoro no vis (de 400 at 700 ca vel e nm) e medir o coeciente de extino (no comprimento de onda de maior absoro). ca ca

Medida do espectro de absoro de um corante ca

A receita para medir o espectro segue: 1. Ligue o aparelho, e espere cinco minutos para o aquecimento e estabilizao dos circuitos. ca 2. Ajuste o comprimento de onda para o valor mximo ( = 700 nm). a 3. Em alguns aparelhos, sem cubeta no aparelho, tem um obstculo entre a lmpada e o detetor. A a a transmitncia neste situao deve ser zero: regule a transmitncia T para zero, usando o boto a ca a a apropriado. Em outros aparelhos este ajuste feito de outra forma, ou no precisa ser feito. e a 4. Coloque uma cuba com somente solvente na porta-amostra do aparelho. Nesta situao, vamos ca denir a transmitncia sendo 100% (T = 1). Portanto, regule a transmitncia para 100%, usando a a o boto apropriado. Este ajuste feito para que, ao analisarmos a soluo, tenhamos eliminado a e ca a absoro por parte do solvente e a cuba. Ao contrrio do ajuste do item anterior, a regulagem ca a da transmitncia 100% deve ser feita para todo valor de , uma vez que o solvente pode absorver a diferentemente em cada . 5. Retire a cubeta com o solvente e coloque em seu lugar a que contem a soluo. O indicador ca dar a transmitncia T ou a absorbncia A, dependendo da posio de um boto. Anote os dois. a a a ca a (Verique com a sua calculadora que o aparelho d de fato A = log T ) a 6. Varie a intervalos adequados, repetindo sempre os itens (4) e (5). Levante o espectro entre 400 e 700 nm, com uma resoluo melhor (mea mais pontos) na regio de maior absorbncia. ca c a a 7. Faa um grco com dois eixos verticais, um para T , outro para A. c a

Medida da curva de concentrao ca

Vai agora xar o comprimento de onda e obter dados da absorbncia da soluo em funo da concena ca ca trao do soluo, am de conseguir o coeciente de extino da molcula em questo. ca ca ca e a 1. A partir dos dados da parte anterior, xe o comprimento de onda no valor correspondente ` a mxima absoro. Mea o comprimento interno l da sua cubeta. Qual a concentrao molar da a ca c e ca sua soluo? ca 2. Coloque o solvente no porta-amostras e faa os ajustes de transmitncia zero e 100%, como na c a parte anterior.

6.6. Relatrio o

3. Mea a absorbncia, dilua a soluo e repete, at no conseguir medir mais porque a transmitncia c a ca e a a (T ) cou perto de 100% (a absorbncia A cou muito pequena). a 4. Faa o grco dos seus dados (A contra a concentrao). A proporcionalidade de A com c (Eq. 6.3) c a ca vericada? Tire o coeciente de extino a partir da derivada (coeciente angular) do seu e ca grco. (Qual unidades tem ? Como poderia estimar a incerteza no seu valor?) a

6.6

Relatrio o

Vamos se preocupar sobretudo com uma apresentao boa dos dados e uma discusso. Descreve tambm ca a e eventuais diculdades que tinha com o seu aparelho. Discute a relao entre o seu espectro e a cor da ca soluo que usou. A lei de Lambert-Beer (proporcionalidade entre concentrao e absorbncia) foi ca ca a vericada?

Comentrios e sugestes so bem vindos: ewout@if.usp.br a o a