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Introduo / state of art

Metodologia
2 populaes
Taxonomia Stio I (Mina de S. Domingos) pH 7.35; condutividade a 236 S/cm; oxignio dissolvido 9.7 mg/L Stio R (stio de referncia) pH 6.37; condutividade a 295 S/cm; oxignio dissolvido 9.2 mg/L NOME CIENTFICO: DAPHNIA LONGISPINA DOMNIO: Eukaria REINO: Animalia FILO: ARTHROPODA CLASSE: BRANCHIOPODA ORDEM: CLADOCERA FAMLIA: DAPHNIIDAE GNERO: DAPHNIA SUGNERO: HYALODAPHNIA

12 linhagens clonadas de D. Longispina.

Metodologia
Teste de evitamento a concentraes letais a cobre

130 linhagens clonadas

LC50 CE20
48 h

3 linhagens mais tolerantes 3 linhagens mais sensveis

I 1-6 R 1-6

Metodologia
Teste de evitamento a concentraes letais a cobre

Condies de controlo

Temperatura 25C 1C Fotoperodos 14h de luz e 10h de escuro Meio de cultura gua dura ASTM Adio de vitaminas Adio de extracto orgnico padro - Marinure 25 Alimento - algas verdes Pseudokirchneriella subcapitata

130 linhagens clonadas

LC50 CE20
48 h

3 linhagens mais tolerantes 3 linhagens mais sensveis

I 1-6 R 1-6

Metodologia
Cmara de teste de evitamento: gradiente de cobre
2 solues teste : gua dura ASTM Soluo cobre 100g/L 4 sistemas de fluxo interligados a uma bomba peristltica; 1 reservatrio de resduos; 1 cmara de testes
3g/L 10g/L 49g/L 80g/L 87g/L

5 compartimentos interligados, por 10 garrafas de polipropileno (200 mL); 4 tubos de entrada; 5 tubos de sada.

Metodologia
Cmara de teste de resistncia: Cmara de teste de evitamento: gradiente de cobre gradiente de cobre

Ensaio inicial com gua dura ASTM : 10 indivduos, com 6 dias de vida, em cada compartimento; 2 repeties Foram feitas observaes da distribuio dos indivduos a 5, 10, 20, 40, 60, 100, 140, 220, 300, 440, 580 e 720 min

Distribuio aleatria nos compartimentos


Ensaio com cobre sob as mesmas condies

3g/L

10g/L

49g/L

80g/L

87g/L

Parmetros fisico-qumicos : pH; Condutividade; Oxignio dissolvido

Sempre que ocorreu mortalidade, os indivduos mortos no foram retirados dos compartimentos para evitar interferncia no gradiente qumico.

Metodologia
A resistncia (A em %) dos indivduos durante a sua exposio ao gradiente de cobre, foi calculado para cada tempo de observao (t) e para cada um dos trs compartimentos mais contaminados (III, IV e V).
N o nmero inicial de indivduos em cada compartimento; i o nmero de indivduos que entraram no compartimento; o nmero de indivduos que saram do compartimento para o prximo com um compartimento menor concentrao.

Clculos efectuados por um programa: PriProbit.

De modo a comparar as diferenas nos comportamentos de evitamento entre as linhagens para cada compartimento, calculou-se mais 2 parmetros: o tempo de evitamento (AT) e a concentrao de evitamento (AC), a 720 min (=12h) induzindo respostas a 20 e 50%.

Resultados
Parmetros fisico-qumico sofreram pequenas variaes entre compartimentos e ensaios Oxignio dissolvido < 8.6mg/L pH neutro Condutividade 574S/cm

Compartimento V foi sempre significativamente diferente do I, II e III. No compartimento I e II as linhagens R1 a R3 e I1 foram sempre significativamente diferentes do compartimento IV e V.

Evitamento calculado apenas para os compartimentos III, IV e V

Resultados
Compartimentos

III
IV V

Evitamento significativo de R1 a R3 e I1 aps 140 min de exposio

Evitamento significativo em todas as linhagens excepto I1 e R4 R1 a R3 comearam a evitar este compartimento mais cedo.
Evitamento significativo em todas as linhagens R1 a R3 e I1 comearam a evitar este compartimento mais cedo TM de evitamento sempre < a 720 min 24 a 594 min. AT 20 entre 3.6 e 127 min

As linhagens mais sensveis da populao referncia exibiram mortalidade nestes compartimentos. Comea a ocorrer entre os 100 e os 140 min aps a observao de evitamento significativo

Resultados
Convergncia de comportamento de evitamento de altos para baixo nveis de cobre
no foi observada correlao significativa entre a AC50,12h e o rcio AC20,12h/AC50,12h

Evitamento vs depresso alimentar no foi observada correlao significativa entre EC20,48h e AC20, 12h. foi observada correlao significativamente positiva entre EC20,48h e AC50,12h Evitamentos vs mortalidade foi observada correlao significativa entre os valores AC20, 12h e LC50, 48h e entre AC50,12h e LC50,48h.

Discusso e concluso

Discusso e concluso

Discusso e concluso

Discusso e concluso

Discusso e concluso