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Fisiologia
Porto, 22 de Abril de 2003
As subunidades 1 dos canais de clcio VOC so transmembranares e constituem o sensor de voltagem e o poro selectivo para o Ca2+. Apresentam uma vasta distribuio, consoante os subtipos de subunidades consideradas: 1A (CACNA1A; tipo P/Q): crebro, neurnios motores, rim 1B (CACNA1B; tipo N): SNC, SNP 1C (CACNA1C; tipo L): corao, fibroblastos, pulmo, msculo liso 1D (CACNA1D; tipo L): crebro, pncreas 1E (CACNA1E; tipo R): crebro, msculo 1F (CACNA1F): retina 1G (CACNA1G; tipo T): crebro 1S (CACNA1S): msculo esqueltico; receptor de DHP tipo L. As subunidades , e , quando presentes, exercem funes de regulao da activao/ desactivao dos canais. A 2 (CACNA2D1) aumenta a amplitude das correntes de Ca2+. (CACNB), que possui locais especficos de fosforilao pela cnase dependente do AMPc - a protena cnase A (PKA)-, modifica as correntes de Ca2+ e a dependncia da voltagem, a inactivao e a activao do canal. A (CACNG) conduz activao do canal a potenciais de membrana inferiores (mais negativos). Recentes progressos experimentais e tericos permitiram idealizar a estrutura dos canais de Ca , a qual os torna particularmente selectivos e eficazes. Diferentemente dos canais de K+ (que tm elevada selectividade graas a um poro rgido, que se adapta justa aos ies K+ e que forrado pelos oxignios dos grupos carbonilos do esqueleto do polipeptdeo), os canais de Ca2+ servem-se de resduos glutamato, cujas cadeias laterais carboxlicas provavelmente atingem o lmen do poro, de modo a bloquear o fluxo de Na+, mas rearranjando-se de maneira a interagirem com mtiplos ies Ca2+ e a permitirem o fluxo de clcio. De salientar que os resduos de glutamato no so iguais, o que parece ser importante para a permeabilidade ao clcio. O fluxo de ies atravs dos membros da famlia VOC controlado pelo potencial transmembranar elctrico, da a designao de sensveis voltagem. A reaco global do transporte por eles catalisado a seguinte: catio (fora) catio (dentro)
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So sensveis aos agonistas da dihidropiridina DHP- (como, por exemplo, o agonista BayK S8644) e aos seus antagonistas (como a nifedipina, a nimodipina e a nicardipina); So activados por uma forte despolarizao; a despolarizao tem pouco efeito sobre a sua inactivao; Localizam-se no msculo esqueltico (1S), msculo cardaco (1C), crebro (1D) e retina (1F); O seu principal papel no msculo o acoplamento excitao contraco (fig. 4 Anexos), ao permitirem a entrada do Ca2+ extracelular para o sarcoplasma. A subida da [Ca2+]i subsequente activao dos canais tipo L estimula a contraco quer directamente (por fixao do Ca2+ troponina C)
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quer indirectamente (atravs da activao dos receptores rianodnicos, com consequente aumento do Ca2+ mioplasmtico, graas sua libertao das reservas intracelulares).
So activados por uma forte despolarizao; a sua inactivao lenta; Localizam-se nos terminais pr-sinpticos; O seu principal papel na libertao de neurotransmissores. Os canais de clcio dos tipos N, P, Q e R acoplam os potenciais de aco libertao de neurotransmissores, processo este que requer concentraes citoplasmticas de Ca2+ entre 10 e 100 M. Fazem-no interagindo com a maquinaria molecular de exocitose do terminal pr-sinptico, nomeadamente o complexo SNARE (soluble NSF attachment protein receptors), que inclui protenas como a sintaxina 1, a SNAP-25 (soluble NSF attachment protein) e sinaptotagminas. O influxo de Ca2+ atravs de canais tipos N, P, Q e R um passo chave na libertao de neurotransmissores dos terminais pr-sinpticos. responsvel pela activao da sintaxina 1, a qual medeia a ancoragem das vesculas, a sua fuso com a membrana pr-sinptica e a libertao dos neurotransmissores. Por sua vez, a actividade dos canais modulada pela sintaxina 1 e por inibio pela protena G.
Tm baixa condutncia; So activados por uma despolarizao prxima do potencial de repouso, i.e., com baixo limiar; a sua inactivao rpida e a reactivao requer uma forte hiperpolarizao; Localizam-se no sistema nervoso e nos msculos cardaco e liso vascular; O seu principal papel , provavelmente, nos potenciais de aco rtmicos das clulas musculares cardacas e neurnios. Destes seis tipos de canais de Ca2+ dependentes da voltagem, apenas os canais tipo T so activados por uma despolarizao de baixo limiar; todos os restantes so activados por potenciais de membrana mais prximos de 0 do que do repouso (despolarizao de elevado limiar). Os canais de Ca2+ tipo T foram inicialmente denominados canais activados por baixa voltagem (LVA), porque podiam ser activados por pequenas despolarizaes da membrana plasmtica.
A clonagem molecular revelou recentemente a existncia de trs genes de canais tipo T. A sua sequncia aminoacdica mostra uma estrutura semelhante dos canais activados por altas voltagens (HVA) e dos canais de Na+, indicando que esto relacionados do ponto de vista evolutivo. Actualmente, as subunidades 1 dos canais tipo T so designadas Cav3. Apesar dos mRNA para os trs subtipos de Cav3 serem igualmente expressos no crebro, variam na sua expresso perifrica, sendo o Cav3.2 o que tem maior expresso. As actividades electrofisiolgicas dos canais Cav3 distinguem-se das dos canais HVA pela sua activao a voltagens menores, activao mais rpida, desactivao mais lenta e menor condutncia para o Ba2+. 2. Canais de Ca2+ dependentes de ligandos
Transportam ies Ca2+ assim que so activados por trs molculas de ATPc.
ATPases transportadoras de Ca2+, que so activadas pela ligao duma molcula de Ca2+ e que podem assumir diferentes formas (e, consequentemente, diferentes capacidades e modos de actuao), conforme o tecido em que se expressam: ATP2A1: actuao rpida (principalmente no msculo esqueltico) ATP2A2: actuao mais lenta; existem 2 isoformas:
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SERCA2a: existe no msculo cardaco e, em menor quantidade, no esqueltico; est inactiva quando ligada ao fosfolamban, mas, quando este fosforilado pela PKA, ela fica activa
SERCA2b: existe no msculo liso e em tecidos no musculares (principalmente na pele). Tanto quanto se sabe, inactivada pela interaco funcional do seu terminal carboxlico (luminal) com a calreticulina, com a calnexina ou com a calmegina, quando estas so fosforiladas pela protena cnase C (PKC).
Estudos imunocitoqumicos demonstraram que as duas isoformas de ATPA2 possuem o seu terminal carboxlico em lados opostos da membrana do RE: a SERCA2a tem o seu no citosol, enquanto que a SERCA2b tem o seu no lmen do RE. Esta diferena na localizao do terminal provavelmente explica o diferente modo como cada uma regulada (pela interaco com uma protena citoslica fosfolamban - ou do RE - calreticulina, calnexina ou calmegina -, respectivamente). ATP2B1 e ATP2B2: existem na membrana plasmtica
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Activados graas actividade dos canais de Ca2+ sensveis DHP e utilizando como via de segundos-mensageiros o ADPRc (ADPRibose cclico) - Ca2+ - calmodulina, os receptores rianodnicos tm por funo a amplificao dos sinais de Ca2+. Esto, actualmente, identificados trs tipos de RyRs: RYR1: localiza-se no msculo esqueltico, onde est envolvido no acoplamento excitao contraco RYR2: localiza-se no msculo cardaco, onde permite a libertao do clcio induzida pelo clcio (calcium-induced calcium release CICR), fundamental para a contraco; regulado por fosforilao pela PKA RYR3: localiza-se no crebro
Receptores do IP3
Estruturalmente semelhantes aos RyRs, os receptores do IP3 (inositol-1,4,5-trifosfato) provocam a libertao do clcio das reservas intracelulares aps estimulao dos receptores. Localizam-se no RE das clulas nervosas e so activados por aumento nos nveis intracelulares de IP3. 3. Outros transportadores de Ca2+ ATPases de Ca2+ As ATPases de Ca2+ da famlia P localizam-se quer na membrana plasmtica, quer em membranas intracelulares (RE e mitocndrias) e catalisam o efluxo ou o uptake de Ca2+, respectivamente, usando a energia libertada na hidrlise do ATP. Por exemplo, no msculo esqueltico, durante a fase de recuperao que se segue contraco muscular, o nvel de Ca2+ no citosol mantido baixo pela aco da bomba de clcio movida a ATP existente na membrana do RS a Ca2+-ATPase. Esta bomba tem um mecanismo de aco semelhante ao da Na+/K+-ATPase e, num ciclo de modificaes conformacionais impelidas por fosforilao e desfosforilao, transporta, contra o gradiente, dois Ca2+ por cada ATP hidrolisado. O bloqueio da extruso contra-gradiente de Ca2+ pela bomba de Ca2+ da membrana plasmtica tem como consequncia a perda do controlo sobre a [Ca2+]i, a composio catinica da camada externa da membrana, o potencial de membrana e a estabilidade do volume da clula.
Trocador Na+-Ca2+ A troca de ies Na+ com ies Ca2+ atravs da membrana plasmtica um componente essencial
O trocador Na+-Ca2+ uma protena com 9 segmentos transmembranares, que transporta Na+ e Ca2+ e que regulada por estes substratos, pelo PIP2 (fosfatidil-inositol-4,5-bifosfato) e por fosforilao. A actividade deste trocador maior no msculo cardaco (apesar de tambm existir nos msculos esqueltico e liso), onde ele um importante regulador da contractilidade, ao enviar, por transporte activo secundrio, 1 io Ca2+ para fora da clula em troca de 3 ies Na+, permitindo, assim, a diminuio da [Ca2+]i e, consequentemente, o relaxamento do msculo. A direco do movimento de ies atravs do trocador Na+-Ca2+ depende do potencial de membrana e do gradiente qumico para estes ies, o que, por sua vez, se correlaciona com a actividade da bomba Na+-K+. Por exemplo, em casos de hipxia (devido queda dos nveis de ATP) ou de uso de digitlicos, a actividade da bomba Na+-K+ diminui, levando ao aumento da [Na+]i. Nestas condies, o trocador expulsa o excesso de ies Na+ para fora da clula, em troca de ies Ca2+ que entram, o que conduz ao aumento da [Ca2+]i. No caso dos digitlicos, isto resulta em inotropia. No caso duma situao de hipxia, devido aos baixos nveis de ATP, aquela no ocorre; ao invs, os elevados nveis de Ca2+, em vez de serem benficos, podem danificar as mitocndrias e afectar os processos subcelulares. Tanto verdade que se acredita que certos estados patofisiolgicos, como o enfarte de miocrdio no fatal e a morte coronria por excesso de ies Ca2+ se devem a diminuies na expresso do trocadorNa+-Ca2+.
Receptores Rianodnicos
Os receptores rianodnicos (RyRs) so uma famlia de canais de libertao do Ca2+ existente em organelas intracelulares que possuem reservas de clcio (como o RE ou o RS e as mitocndrias). So molculas complexas, com grandes domnios citoplasmticos contendo numerosos stios de ligao para agentes que controlam o estado de actividade do domnio que forma o canal. As interaces entre os domnios citoplasmtico e intramembranar parecem controlar a funo do canal. Os RyRs so ubiquamente expressos em muitos tipos de clulas e participam numa variedade de fenmenos cuja sinalizao feita pelo Ca2+ (neurotransmisso, secreo, etc.). Os RyRs do RS/RE, alm de serem funcionalmente mais importantes que os mitocondriais, esto melhor estudados que estes ltimos. Os RyRs do RS localizam-se em regies especializadas do mesmo, onde se encontram estrutural e funcionalmente associados a outras protenas intrnsecas e, indirectamente, protena de ligao intraluminal do clcio, a calsequestrina. No msculo estriado, os canais RyRs constituem a principal via de libertao do clcio durante o processo do acoplamento excitao-contraco.
A activao dos RyRs durante a parte inicial do acoplamento excitao-contraco iniciada pela actividade dos canais de clcio dihidropiridnicos (RDHPRs) da membrana plasmtica, que permitem o influxo do Ca2+ atravs do sarcolema. A diversidade dos mecanismos do acoplamento excitao-contraco nos msculos esqueltico e cardaco deve-se existncia de distintas isoformas de RyRs e de RDHPRs. De modo geral, os sinais que activam os RyRs so conhecidos (influxo de Ca2+, despolarizao), porm, os mecanismos especficos envolvidos so ainda debatidos. Na ltima dcada, vrios estudos sobre a libertao de Ca2+ mediada por RyRs foram realizados, todavia, pouco permitiram o efectivo conhecimento do RyR. H acordo sobre o facto de que o controlo da funo do RyR, pelo menos no que concerne ao CICR, uma propriedade local. Contudo, existe desacordo no que diz respeito ao mecanismo autoregulador subjacente que leva cessao da actividade do RyR. Um ponto central de discrdia se os RyRs conseguem adaptar-se [Ca2+] local, onde a adaptao significa que um aumento progressivo da [Ca2+] em direco a 1 M causa um padro bifsico de activao em cada RyR, com activao rpida, seguida por uma lenta diminuio na probabilidade de abertura do canal, e que o receptor pode ser reactivado por um outro aumento na [Ca2+]. Parte das dvidas que ainda existem sobre a complexa regulao dos RyRs provm da complexa cintica dos RyRs, que exibe mltiplos modos de abertura/encerramento e um complicado padro de inactivao que ocorre a uma [Ca2+] relativamente elevada (>1 M) e reflecte uma complexa interaco entre o Ca2+ e a voltagem. Assim, os sinais que modulam e/ou desligam os RyRs permanecem por esclarecer, assim como os mecanismos envolvidos.
O sensor de clcio das clulas musculares, nomeadamente, contm calmodulina. A ligao do Ca2+ calmodulina induz nesta mudanas conformacionais, activando-a, e permitindo que ela estimule ou inactive uma variedade de enzimas. Dessas enzimas reguladas pela calmodulina (e, consequentemente, pelo clcio), destacam-se a cclase do adenilato e a fosfolpase C. A activao do sensor de clcio tem dois grandes efeitos: - inibio da cclase do adenilato e consequente diminuio da [AMPc]i - activao da fosfolpase C, que conduz formao dos mensageiros secundrios diacilglicerol (DAG) e IP3, a partir da hidrlise do PIP2 da membrana celular. O DAG activa a PKC, levando inibio da SERCA2b. O IP3 liga-se a receptores de membrana do retculo sarcoplasmtico, induzindo a libertao de clcio. Dos sensores de clcio das clulas nervosas, destaca-se o sensor-1 neuronal de clcio (NCS-1), que medeia a dessensibilizao do receptor dopaminrgico D2, pois leva inibio (mediada pelo AMPc) do receptor D2, aps estimulao dopaminrgica. Nos neurnios do estriado, os NCS-1 e os receptores D2 localizam-se ambos prximos das reservas intracelulares de clcio. A interaco receptor D2 - NCS-1 parece acoplar as vias sinalizadoras de clcio e de dopamina, exercendo, portanto, um papel fundamental na regulao da sinalizao dopaminrgica em crebros normais e doentes. Por constituir um verstil regulador de numerosas funes celulares, o CaR pode servir como um importante alvo teraputico.
celular. Contudo, tambm desempenham um papel importante na apoptose, fornecendo a energia necessria para os processos apoptticos. Evidncias recentes sugerem que o Ca2+ que confiscado pelas mitocndrias fundamental no despoletar das respostas apoptticas. Um passo crucial no processo apopttico quando, por excesso de ies Ca2+ no seu interior, a mitocndria liberta protenas pr-apoptticas habitualmente localizadas no espao intermembranar (pr-caspases, por exemplo), iniciando-se a cascata que leva desordem celular e a clivagem proteoltica que resulta na apoptose. As mitocndrias so altamente sensveis a defeitos na sinalizao do Ca2+. A quantidade de Ca2+ que por elas detectada depende de vrios factores, designadamente: a actividade dos canais de libertao de clcio do RE (RyRs e receptores do IP3) a quantidade de Ca2+ acumulada no RE a proximidade entre as mitocndrias e o RE.
Um aumento em qualquer um destes factores aumenta a recaptao de Ca2+ pelas mitocndrias, levando alterao da sobrevivncia para a morte celular.
Doena resultante paralisia peridica hipocalmica ataxia episdica corrente de Ca2+ em certos neurnios hipertermia maligna miopatia de Brody
A Hipertermia Maligna uma doena autossmica dominante com penetrncia incompleta, resultante duma mutao no cromossoma 19, no gene que codifica o RRy. caracterizada por um estado hipermetablico que pode ser despoletado por drogas neurolpticas, lcool, infeces, agentes neuromusculares despolarizantes (succinilcolina, por exemplo) e agentes anestsicos halogenados. Neste sndrome mioptico hipermetablico, graas mutao que ocorre nos RRys, h libertao do Ca2+ das reservas intracelulares mesmo na ausncia dum estmulo fisiolgico. H elevao
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do Ca2+ mioplasmtico e diminuio das suas reservas intracelulares, o que favorece a sua recaptao para as mesmas, processo este que consome ATP e liberta calor (termognese). Assim, a termognese decorrente da contraco muscular, aliada decorrente da recaptao do Ca2+ para o RS e mitocndrias pode facilmente levar ao aumento rpido e letal da temperatura corporal. A contraco muscular sustentada manifesta-se em rigidez e espasmos musculares que so mais proeminentes no msculo masseter (o espasmo massetrico um dos sinais mais precoces de hipertermia maligna) e resulta em sinais de hipermetabolismo, designadamente, acidoses metablica e respiratria, aumento do consumo de O2 e da produo de CO2 e de calor, hipercalcemia, hipercalemia e hiperfosfatemia e depleco de ATP. Os mecanismos compensatrios usados para contrariar a hipertermia, hipercapnia, hipxia, acidose e instabilidade hemodinmica incluem: -
mecanismos de perda do excesso de calor (sudao e vasodilatao cutnea) hiperventilao hiperactividade simptica, com aumento dos nveis de catecolaminas circulantes, tendo por
objectivo o aumento da RVP (de modo a assegurar a perfuso dos rgos nobres), a venoconstrio (para favorecer o retorno venoso ao corao) e a manuteno do dbito cardaco (atravs do aumento da contractilidade miocrdica e da frequncia cardaca). Um indivduo com hipertermia maligna apresentar, portanto, alm da rigidez muscular (que o sinal mais especfico de hipertermia maligna), temperatura corporal elevada (sendo esta um dos sinais mais tardios), cianose, taquipneia, taquicardia, arritmias ventriculares e hipertenso arterial. O tratamento da hipertermia maligna passa pelo arrefecimento fsico, uso de antagonistas do clcio (dantroleno, por exemplo), uso de bicarbonato de sdio, entre outras possveis alternativas. Outra particularidade do clcio (e, desta feita, no dos canais, mas dos prprios ies Ca2+) afectar a excitabilidade da membrana das clulas nervosas e musculares, por alterar o seu potencial de repouso. O Ca2+ extracelular parece ligar-se superfcie externa dos canais de Na+, aumentando o nvel de voltagem necessrio para abri-los. Assim, em situaes de hipercalcemia, as clulas tornam-se mais refractrias, pois o seu potencial de repouso est mais afastado do limiar de excitabilidade, sendo, portanto, necessrio um estmulo maior para gerar o potencial de aco. Pelo contrrio, em casos de hipocalcemia, as clulas ficam hiper-excitveis.
Concluso
Nos ltimos anos, tm sido feitos progressos substanciais no que respeita identificao e aquisio de conhecimentos sobre o modo de funcionamento e regulao dos diferentes canais e transportadores de clcio. Apesar de persistirem algumas incertezas (principalmente no que concerne regulao dos receptores reanodnicos), est-se a progredir cada vez mais em direco a um melhor conhecimento dos mecanismos que esto na base da cintica do clcio e, portanto, de muitas vias transdutoras de sinais.
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NDICE
Pgs.
Introduo .................................................................................................................... 01 A Famlia dos Canais de Ca2+ Dependentes da Voltagem (VOC) .................................... 01 A Famlia dos Canais de Ca2+ Dependentes de Receptores de Membrana (RIR-CaC) ...... 03 Tipos de Canais de Clcio 1. Canais de Ca2+ dependentes da voltagem ........................................................ 03 2. Canais de Ca2+ dependentes de ligandos .......................................................... 05 3. Outros transportadores de Ca2+ ........................................................................ 06 Receptores Rianodnicos ............................................................................................. 07 O receptor extracelular sensvel ao clcio ................................................................... 08 Clcio e morte celular programada ............................................................................. 09 Fisiopatologia dos canais de clcio .............................................................................. 10 Concluso .................................................................................................................... 11 Anexos ........................................................................................................................... I Bibliografia .................................................................................................................. III
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