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UNIVERSIDADE DE SO PAULO FACULDADE DE MEDICINA DE RIBEIRO PRETO DEPARTAMENTO DE FISIOLOGIA

RCG - 0213 FISIOLOGIA DE MEMBRANAS

Coordenao: Prof. Dr. Wamberto A. Varanda Departamento de Fisiologia

2012

1 FISIOLOGIA DE MEMBRANAS - 2011 1- Objetivos: Este curso tem como objetivo central fornecer ao estudante os aspectos bsicos do funcionamento da membrana celular, enquanto responsvel por trocas entre intra e extracelular, pelo fenmeno da excitabilidade eltrica e como unidade receptora de hormnios, transmissores ou frmacos. 2- Enfoque de Ensino: Embora procurar-se- enfocar os vrios tpicos a partir de exemplos macroscpicos, o curso dar nfase a aspectos fsico-qumicos e moleculares. Por isto mesmo, pode-se classificar o enfoque como mecanicista. 3- Pr-requisitos: Os seguintes pontos devero ter sido abordados em outras unidades: 1) Lipdios e sua estruturao numa bicamada. Tipos; cargas; fluidez; etc.. 2) Viso morfolgica da membrana celular: freeze fracture: modelos, etc.. 3) Protenas: estruturao; mudanas conformacionais, etc.. 4- Divises: Este curso est divido em trs partes: 4.1 Biofsica e Eletrofisiologia de Clulas onde sero abordados aspectos relativos a gnese e transmisso de informaes eltricas entre as clulas. Com carter essencialmente fsico-qumico, analisar-se- desde aspectos termodinmicos do transporte de substncias atravs de membrana at suas conseqncias em termos eltricos. Responsvel: Prof. Dr. Wamberto A. Varanda Depto. de Fisiologia 4.2 Bioqumica de Sistemas Transportadores aqui a viso dever centrar-se nos aspectos moleculares e bioqumicos dos vrios sistemas de transporte, presentes nas clulas, que permitem seu funcionamento como um sistema termodinamicamente aberto. Responsvel: Prof. Dr. Roberto do Nascimento Silva Depto. de Bioqumica 4.3 Sinalizao Bioqumica esta parte enfocar aspectos relativos aos mecanismos bioqumicos desenvolvidos pelas clulas que lhes permitem responder a estmulos gerados desde a membrana celular. Alm disso, sero enfocados conceitos bsicos de farmacologia visando ao entendimento do conceito de receptor e de agonistas e antagonistas. Responsvel: Prof. Dr. Fernando Morgan de Aguiar Correa Depto. Farmacologia Os dois primeiros tpicos tero um desenvolvimento simultneo, enquanto que o ltimo dever finalizar o curso.

2 PARTE I BIOFSICA E ELETROFISIOLOGIA DE CLULAS PROGRAMA TERICO O programa que segue refere-se somente a parte 4.1, as demais devero ser publicadas pelos respectivos docentes. Os tpicos listados abaixo tm o propsito de ressaltar ao estudante os pontos essenciais que sero abordados durante o curso e que dele sero exigidos. 1- Introduo ao curso: estruturao; justificao; pensamento filosfico. 2- Transporte de substncias em meio homogneo 2.1. Bases Fsico-Qumicas Movimentao de partculas em soluo Foras e fluxos Fora fenomenolgica (qumica) e de campo Interconverso de energia: gradiente-qumico/eltrico Conceito de energia livre: equilbrio e estado estacionrio. Potencial qumico e eletroqumico. Difuso: mobilidade e coeficiente de difuso. 3- Fluxos atravs de membranas 3.1. Conceito de fluxo: unidirecional e resultante 3.2. Equao de Nernst-Planck 3.3. Coeficiente de partio 3.4. Casos particulares da Equao de Nernst-Planck Difuso: Lei de Fick, Permeabilidade Migrao Inica - eletroforese 3.5. Vias de permeao atravs de Membranas Biolgicas: Canais, Carregadores e Bombas 3.6. Patologias associadas a canais inicos 4- Transporte de gua 4.1. Osmose e presso osmtica 4.2. Osmolaridade 4.3. Coeficiente de reflexo 5 -ons e Potencial de Membrana 5.1. Mecanismo bsico: Separao e reunificao de cargas (mobilidade inica). 5.2. Lei de Ohm central: definio de corrente eltrica, potencial eltrico e condutncia (resistncia). 5.3. Introduzindo o nmero de Faraday: ons em soluo carregam corrente. 5.4. Gradientes inicos e diferena de potencial eltrico (interconverso de energia) Potenciais eltricos de juno - papel da mobilidade inica. 5.5. Eletroneutralidade de solues inicas: o nmero de ctions igual ao nmero de anions. 5.6. Diferena de Potencial eltrico atravs de uma membrana. a) situao de equilbrio: A equao de Nernst. b) situao de fluxo: A equao de Goldman, Hodgkin e Katz.

3 Metodologia Eletrofisiolgica Introduo a circuitos equivalentes: foras eletromotrizes, D.P. de membrana e condutncia. Curvas I-V: Potencial de reverso e seletividade. 6. Origem e manuteno do potencial de repouso em clulas (clula muscular esqueltica como exemplo) a) Observaes Experimentais: propriedades eltricas passivas da membrana: resistncia e capacitncia. - Passando corrente atravs da membrana celular: polarizao; despolarizao; hiperpolarizao; repolarizao- circuitos equivalentes. b) Atividades inicas intra e extracelular - anlise das diferenas de composio entre os dois meios, quantificao das concentraes, manuteno dos gradientes inicos, manuteno do volume celular. c) O meio interno e a importncia de sua manuteno para a sobrevida celular d) ons equilibrados e desequilibrados - A ATPase Na/K e) Diferenas de permeabilidade como condio para existncia da DP de repouso. 6.1. Equilbrio de Donnan - uma situao terminal para as clulas. 6.2. Vias de permeao inica nas membranas celulares: canais inicos e sua evidenciao eletrofisiolgica. 7. Propriedades Eltricas Passivas da Membrana Celular 7.1. observaes bsicas condutncia e capacitncia da membrana 7.2. o axnio como cabo propriedades dependentes de tempo e espao. 7.3. transmisso passiva da informao eltrica. 8. Bases Inicas do Potencial de Ao 8.1. Potenciais de nervo (extracelulares) 8.2. Potencial de ao numa clula medida intracelular (micro-eletrodos) 8.3. Excitabilidade dependente de voltagem 8.4. Limiar de disparo e tudo ou nada. 8.5. Perodos refratrios 8.6. Correntes inicas envolvidas no potencial de ao disseco farmacolgica 8.7. Condutncias dependentes de voltagem- a tcnica de voltage clamp. 8.8. Canais inicos dependentes de voltagem ativao e inativao 8.9. Conduo do impulso nervoso axnios mielinizados e amielnicos. 8.10. Tipos de potenciais de ao 9. Comunicao entre Clulas 9.1. Transmisso Sinptica a juno neuromuscular como exemplo 9.2. Eventos eltricos no processo de transmisso PIPS e PEPS 9.3. Correntes de Placa Motora tipos 9.4. Ativao Sinptica 9.5. Somao. 5.7. 5.8.

4 9.6. Transmisso clula a clula gap junctons . evidenciao . tipos e ocorrncia . caractersticas eltricas bsicas . conexinas 10. Acoplamento Excitao-Contrao 10.1. Aspectos estruturais bsicos 10.2. Tbulos T e potencial de membrana 10.3. A trade transmisso do impulso eltrico ao retculo sarcoplasmtico 10.4. O receptor de rianodina 10.5. A liberao de clcio do retculo sarcoplasmtico 11 - Bibliografia Bsica Os livros aqui citados possuem captulos de interesse para essa parte do curso Fisiologia ed. Berne and Levy Elsevier Editora LTDA 2004 Texto bsico traduzido de edio americana. Fisiologia ed. Mello Aires, M. - 3a edio Guanabara Koogan 2008 Livro de autores nacionais compreendendo toda fisiologia. Parte referente a esta disciplina est bem tratada aqui.

12 - Sites que contm material relacionado ao curso: Os stios aqui relacionados podem ser utilizados para estudo. Se voce quizer achar outros, faa uma procura na internet e utilize como palavras chave o seguinte: electrophysiology; membrane potential; action potential; patch clamp; cell excitability; etc. http://hyperphysics.phy-astr.gsu.edu/hbase/biology/mempot.html http://nerve.bsd.uchicago.edu/ http://www.unm.edu/~toolson/435cap.html http://www.unm.edu/~toolson/435tet.html http://www.unm.edu/~toolson/435lt.html

13 Algumas constantes que podero ser utilizadas para resoluo de problemas: - constante dos gases (R) 8,31 j.oK-1.mole-1 - Nmero de Avogadro (N) 6,02 x 1023 - Constante de Faraday (F) 96500 coulomb/equivalente

5 -1 J = 1Coul.Volt - Capacitncia especfica da membrana 1F/cm2

6 Questes para o seminrio sobre Transporte e Bioeletrognese 1) As concentraes de cloreto dentro e fora de uma clula muscular esqueltica so 3,5 e 110 mM, respectivamente. a) Calcule qual deve ser a energia necessria para transportar 1 mol desse ion de dentro para fora da clula e de fora para dentro. Comente seus clculos. b) Assuma, agora, que exista atravs da membrana celular uma diferena de potencial eltrico poten igual a -88 mV, lado interno negativo. Recalcule a energia envolvida no transporte desse on de dentro para fora e de fora para dentro da clula. Comente seus achados. Utilize temperatura igual a 22 oC em ambos os casos. 2) Na figura abaixo tem-se a permeabilidade da membrana de hemcias a uma srie de amidas se em funo do coeficiente de partio ter/gua. Foram analisadas hemcias de co (quadrados ( pretos) e hemcias humanas (crculos vermelhos). crculos

P=propionamida; B=butiramida; V=valeramida; IB=isobutiramida; IV=isovaleramida a) Tome a srie PBV tanto para hemcias de co como para hemcias humanas: por que a permeabilidade aumenta com o coeficiente de partio? b) Observe que para a srie PBV, hemcias de co tm permeabilidades maiores que as huma humanas. Faa suposies generalizadas que possam explicar a relao entre permeabilidade e composio da bicamada lipdica. 3) Suponha um experimento onde glbulos vermelhos foram colocados nas seguintes solues: ) 3.1 -300 mM de sacarose e permaneceram com o volume intacto.

7 3.2. -300 mM de sacarose e aps algum tempo (indicado na figura) adicionou-se 200 mM de uria. O resultado foi o mostrado abaixo:

3.3. - 400 mM de uria e estouraram. Discuta: a) Classifique essas solues quanto osmolaridade e tonicidade. b) Por que no item 3.2 o volume das hemcias retornou ao valor inicial? O que isto indica? c) Qual a osmolaridade plasmtica? Que substncia a principal responsvel por ela? d) Qual o (coeficiente de reflexo) da sacarose? E da uria?

4) A tabela abaixo mostra valores de concentrao de ctions e anions difusveis e de protenas no plasma e no lquido intersticial. Calcule quais devero ser as concentraes de ctions e anions difusveis no interstcio. Comente seus clculos e os resultados encontrados. Nota: ax2 + bx + c = 0; x =

b b 2 4ac 2a Plasma (mM) 17,0 161,0 144,0 Interstcio (mM) 4,0 ? ?

Proteinato Ctons difusveis Anons difusveis

5) O eletrodo de vidro, comumente usado para determinao de pH, pode ser visto simplesmente como uma membrana altamente seletiva a ons H+. Monte um esquema onde essa membrana estaria separando dois compartimentos com solues de atividade

hidrogeninica distintas. Correlacione seu esquema com um eletrodo. Para uma dada tintas. diferena de atividade de ons hidrognio entre os lados (1) e (2) da membrana desenvolve-se uma DP atravs da mesma. Qual a relao entre esta DP e as atividades de se H+? Explique. baixo Trata 6) A figura abaixo foi retirada de um trabalho de Hodgkin e Horowicz (1959). Trata-se da investigao, por tcnicas eletrofisiolgicas, da origem do potencial de repouso e das , permeabilidades inicas da membrana celular de msculo semitendinoso de r.

Em soluo de Ringer (soluo idntica ao plasma na composio em eletrlitos) o potencial de repouso de -98 mV. Nestas condies o potencial de membrana (Vm) igual ao potencial de 98 equilbrio para o cloreto (Ecl). Quando a soluo de Ringer instantaneamente trocada por outra com menor concentrao de Cl (30 mM) e idntica quanto aos demais ons, observa-se uma rpida despolarizao da membrana, seguida de repolarizao. Ao se retornar soluo de Ringer tem-se um traado que praticamente uma imagem especular do anterior. Discuta: a) As variaes do potencial de repouso que se observam nas mudanas sbitas de concentrao do Cl no meio extracelular. Pode-se concluir que a membrana Pode se permevel ao cloreto? Por qu? Explique a repolarizao que se observa ao se manter a fibra muscular na soluo de baixa concentrao de Cl. b) Para um dado valor estvel do potencial de repouso, se voc pretendesse calcular o potencial de repouso pela equao de Hodgkin Katz e Goldman, s Hodgkin-Katz sabendo as concentraes dos ons e suas permeabilidades, voc consideraria o cloreto na equao? E nos transientes?

c) Se inibssemos a bomba de Na/K com ouabana, o que deveria ocorrer com o potencial de repouso? Por qu? d) 7) A figura abaixo mostra registros temporais da corrente inica que passa por um nico canal de potssio ativado por clcio, observado em clulas de Leydig, a um potencial de + 60 mV (lado intracelular do canal positivo) e com concentraes de K+ iguais em ambos os lados.

Deflexes para cima (nveis indicados pelas setas) significam corrente passando pelo canal. a) Estime a condutncia do canal. b) Analise as oscilaes de corrente. Explique-as. Qual o significado dessas oscilaes para a condutncia da membrana celular, que contm milhares desses canais por micrmetro quadrado? c) c) Que argumentos voc usaria a favor do canal e contra a difuso facilitada neste caso? 8) Os dados abaixo foram extrados do trabalho de Hodgkin e Horowics (1959) onde foram medidas as diferenas de potencial eltrico, atravs da membrana celular do msculo semi-tendinoso da r, em vrias condies de composio inica da soluo externa. KO (mM) 0,5 1,0 2,5 5,0 5,0 10,0 30,0 80,0 D.P. da Membrana (mV) -117,0 -109,0 -94,0 -80,0 -80,0 -65,0 -38,0 -14,0

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onde: KO = concentrao de K+ na soluo banhante; D.P. = diferena de potencial eltrico atravs da membrana, sinal refere se ao intracelular. A fim de manter a eletroneutralidade das refere-se solues as mesmas continham outros ons que no interessam ao problema. Sacarose foi usada para se manter a osmolaridade. Com base nos dados analise as seguintes questes: a) Coloque em grfico o valor da DP medida contra o log da concentrao externa de K+. Que concluso voc pode tirar deste achado? Explique. b) Que tipo de equao descreve os dados em sua totalidade? c) Trace, sobre os pontos, a linha esperada considerando- que a funo fosse considerando-se descrita pela equao de Nernst. Por que os pontos iniciais fogem dessa linha? Explique. 9) Os resultados mostrados nos grficos que seguem, foram obtidos em neurnios d de moluscos com a finalidade de se entender os fatores determinantes do potencial de repouso. Foram feitas determinaes do mesmo, com micro-eletrdios, em funo da micro eletrdios, concentrao externa de K+ em diversas temperaturas. Leia com ateno a legenda das figuras.

Potencial de repouso dependente de [K]o em neurnios de moluscos. A, os potenciais de repouso medidos a 11oC se afastam do potencial de equilbrio do potssio (EK) exceto para [K]o elevados. As linhas 1 e 2, dadas pela equao do campo constante, para dois valores de PNa/Pk, tambm se afastam dos pontos experimentais. B, A 4o C, mas no a 17 oC, a linha

11 dada pela equao do campo constante se ajusta aos pontos assumindo-se PNa/Pk = 0.033: [K]i =235mM. PNa = permeabilidade a sdio e PK=permeabilidade a potssio.

Discuta: a) Que tipo de concluses se podem tirar desses dados com respeito a bomba de Na/K ? Explique. 10) O esquema abaixo representa uma clula com as concentraes intra e extracelulares dos principais ons indicadas em mEq/l. Na+ = 144,0 K = 4,0 Ca = 2,3 Cl = 110,0 HCO3 = 25,0 Proteinato = 2,0
2+ +

Na+ = 10,0 K+ = 160,0 Ca2+ = 10-7 Cl- = 3,5 HCO3 = 8,0 Proteinato = 17,0

+ 87 mV

Discuta os seguintes tpicos: a) Considerando-se que as concentraes de protena dentro e fora da clula so diferentes e, que as mesmas no permeiam a membrana celular, seria de se esperar um movimento resultante de gua para o interior celular (inchamento), o que poderia levar a um rompimento da membrana. Qual o mecanismo desenvolvido pela clula que lhe permite regular seu volume e, portanto, no estourar? b) Considerando-se as concentraes inicas acima e a Diferena de Potencial atravs da membrana, medida com um micro-eletrdio de vidro, quais as hipteses mais plausveis que explicariam a origem dessa D.P.? Explique. c) Considere a razo entre as permeabilidades ao sdio e potssio. Como essa razo pode determinar o nvel de potencial atravs de uma membrana. Que equao relaciona Vm permeabilidade?

12 RCG-0213 - Fisiologia de Membranas Questes para o seminrio sobre Excitabilidade Celular

1 Suponha um experimento onde um axnio gigante de lula impalado com um microeletrodo para injeo de corrente (estim) e com uma srie de outros para registro de voltagem (reg) em pontos distintos, como mostrado na figura abaixo.
estim reg0 1 reg1 2 reg2 3 reg3 4 reg4

1 mm

Assuma que o potencial de repouso deste axnio seja de 60 mV e que s estejamos analisando as propriedades passivas do mesmo, isto , nossos estmulos no geram potenciais de ao. a) Aps aplicarmos um estmulo no ponto marcado pelo eletrodo de estimulao, observou-se que a voltagem em reg0 foi V; em reg1 foi 0,606V; em reg2 foi 0,36V; em reg3 foi 0,21V e em reg4 foi 0,13V. Calcule a constante de espao deste axnio. (resolva o problema graficamente). b) Monte um circuito eltrico equivalente desse axnio e explique o porque da queda na voltagem a medida que nos distanciamos de reg1. Que parmetros voc alteraria no seu circuito para que a Voltagem caia mais acentuadamente com a distncia e menos acentuadamente? Correlacione seus parmetros eltricos com o existente numa clula. c) Compare a conduo neste axnio amielnico com aquela observada em axnios mielinizados. Qual a vantagem da mielinizao? Por qu? d) Quais as alteraes de conduo que voc esperaria ocorrer em axnios de pacientes sofrendo de um processo de desmielinizao? Explique. 2 Num experimento com uma clula excitvel qualquer se procedeu a aplicao de um pulso de corrente com amplitude de 2 nA e durao de 100 ms, obtendo-se a resposta de potencial mostrada na figura abaixo. a) Defina constante de tempo e calcule-a para esta clula. b) Que propriedades da membrana definem esta varivel? Explique. c) Associe a constante de tempo de uma dada clula com sua capacidade de gerar uma atividade rtmica de disparo do potencial de ao. Discuta a condio para se ter uma freqncia alta e uma mais baixa de disparos.

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3 O potencial de ao sempre seguido de um perodo onde a excitabilidade da clula est reduzida, e que pode ser dividido em duas partes: refratrio absoluto e refratrio relativo. Descreva esses perodos e analise os mecanismos operantes na membrana celular responsveis erodos pelos mesmos. 4 - Tetrodotoxina (TTX) uma toxina que apresenta alta afinidade pelo canal para sdio de tecidos excitveis. Realizaram-se dois experimentos de ligao dessa toxina utilizando-se axnios Realizaram se mielinizados e amielinizados. A toxina era marcada de forma a poder localiz em seus stios poder-se localiz-la de ligao. Discuta a distribuio da mesma nesses dois tipos de axnios ressaltando as diferenas entre eles. 5 A despolarizao que ocorre durante um potencial de ao propaga ue propaga-se passivamente para ambas as direes, a partir do ponto onde est sendo gerado o potencial de ao. No entanto, o potencial de ao caminha somente em uma direo. Explique. 6 Os registros abaixo se refer referem a correntes inicas atravs de um nico canal para sdio em condies normais (Wild Type) e em clulas que possuem canais para sdio com uma mutao no aminocido 1592, que passou de uma Metionina para uma Valina (HyperPP M1592V)). O experimento foi realizado partindo se de um potencial hiperpolarizado ( lizado partindo-se (-120 mV) para um despolarizado (-40 mV) pelo tempo indicado acima dos registros. 40 a) Compare os dois traados e descreva-os qualitativamente, ressaltando as diferenas. descreva os b) Faa inferncias sobre o que dever acontecer com o potencial de ao e de repouso num acontecer indivduo acometido por essa mutao, em comparao com o normal.

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7 Hodgkin e Katz foram dos primeiros a investigar os mecanismos de gnese e propagao de potenciais de ao. Os registros abaixo foram retirados de um de seus trabalhos publicado em 1949, onde os autores mediram potenciais de ao em axnios gigantes de lula em funo da concentrao de Na+ no lquido que banhava o axnio. Em A a concentrao de sdio foi reduzida para 33 %, em B para 50 % e em C para 70 % do par normal. Em cada grfico o nmero 1 indica o controle (100% de sdio); 2 indica a situao de sdio alterado e 3 indica o retorno a situao controle.

33%

50%

70%

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a) Descreva as observaes qualitativamente enfatizando o papel do sdio no processo. b) Que tratamento voc daria aos dados no sentido de comprovar a participao do on sdio no processo? Comente. c) O potencial de repouso dessas clulas encontra-se ao redor de 50 mV. Note que apesar de reduzirmos a concentrao de sdio no meio externo este potencial no se altera. O que isso indica? Por qu? 8 Hodgkin e Huxley notabilizaram-se pelos estudos que fizeram a respeito dos mecanismos de gnese e propagao do impulso nervoso. Por seus trabalhos ganharam o Prmio Nobel de Fisiologia e Medicina em 1963. Uma de suas descobertas mais marcantes relaciona-se s correntes inicas envolvidas durante um potencial de ao, descritas com a tcnica de voltage clamp. Neste tipo de experimento, impe-se uma voltagem atravs da membrana, que permanece fixa durante certo tempo, e medem-se as respostas de corrente em funo do tempo. Nos registros mostrados abaixo uma clula qualquer foi mantida a 80 mV e no tempo indicado o pulso de voltagem foi alterado em passos de 15 mV entre 60 e +60 mV (portanto: -60, -45, 30, -15, 0, +15, +30, +45 e +60 mV; conforme indicado pelos nmeros ao lado dos traados de corrente e pela figura com linhas retas abaixo dos traados de corrente) obtendo-se para cada voltagem as respostas de correntes mostradas. As concentraes extra e intracelulares do Na e K nesse experimento foram: Na: 145 e 10 mM; K: 4 e 140 mM, respectivamente.

+60 mV

-60 mV

-45 mv -30 mV

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a) Analise a figura qualitativamente e descreva o decurso temporal das correntes obtidas em cada voltagem aplicada. b) Mea as amplitudes dos picos de correntes observados logo no incio do pulso e coloque em grfico contra a voltagem. Faa o mesmo para a corrente estacionria (ao redor de 7 ms). Conclua a respeito das espcies inicas responsveis por carregarem essas correntes atravs da membrana celular. Explique. c) Mostre em esquema como ficariam essas correntes se fossem medidas na presena de Tetrodotoxina (TTX) e de Tetraetilamonio (TEA). Por qu? 9 Esquematize os potenciais de ao observados numa clula muscular cardaca e numa fibra muscular esqueltica. Quais as diferenas mais marcantes? Correlacione estas diferenas com aspectos funcionais particulares desses dois tipos de clulas. Explique. 10 A exemplo do que ocorre com registros eletrocardiogrficos, os potencias de ao tambm podem ser registrados extracelularmente, particularmente em nervos (um conjunto de axnios). O experimento consiste em colocar-se um eletrodo estimulador num ponto qualquer e eletrodos de registro na superfcie do nervo, a distncias variveis do primeiro. Perceba que conhecendo-se a distncia entre os eletrodos e anotando-se o tempo entre o estmulo e a resposta observada no eletrodo de registro pode-se calcular a velocidade de conduo do potencial de ao. Note ainda, que as fibras que compem um nervo possuem dimetros distintos. Erlanger e Gasser (1937) foram dos primeiros a realizar essas medidas em nervos sensoriais. Um dos seus achados encontra-se mostrado abaixo: a) Observe a figura e descreva-a qualitativamente. b) Calcule a velocidade de conduo para os componentes e do potencial de ao. Que parmetros estruturais dos neurnios podem estar determinando as diferenas nas velocidades de conduo? Explique. c) Compare, explicitando as diferenas, o potencial de ao composto, medido extracelularmente num nervo, com aquele medido intracelularmente.

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-Estes potenciais de ao compostos foram obtidos como descrito acima. A escala a esquerda indica a distncia a partir do eletrodo de estimulao at o ponto de medida do potencial de ao. A letra S em cada traado indica o momento em que o estmulo foi aplicado. Note a marcao do tempo em ms no traado indicado como msec.

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10 O experimento, cujos resultados so mostrados na figura abaixo, foi realizado medindo a medindo-se condutncia a sdio (gNa) numa clula nervosa, quando a mesma era despolarizada de 60 mV (potencial de repouso) para 0 mV, em voltage clamp. Perceba que os pulsos despolarizantes foram aplicados em dupla, sendo que o intervalo entre eles foi aumentando gradativamente nos trs registros mostrados

a) Analise o que acontece com a condutncia em cada caso. b) Como explicar que a condutncia varie com o intervalo de tempo entre os estmulos?

19 RCG-0213 - Fisiologia de Membranas RCG Questes para Seminrio sobre Transmisso Sinptica e Gap Junctons ons

1 Quais as caractersticas que distinguem uma sinapse qumica de uma sinapse eltrica? Discuta a transmisso do sinal eltrico entre as clulas do miocrdio. 2 O que so mini-potenciais de placa motora? O que representam? potenciais 3- Considere o PEPS e o PIPS. Quais as bases inicas desses fenmenos? Detalhe sua anlise. exten 4 No esquema abaixo mostrado um arco reflexo simples composto pelos msculos extensor e flexor de um membro e as vias nervosas responsveis pelo reflexo. Apenas uma ala do reflexo penas est sendo mostrada. Pergunta-se:

(1)

a) Se hiperpolarizarmos o interneurnio inibidor (1) (por exemplo, levando-se o seu potencial levando de repouso para 120 mV) o que acontecer com o sistema se o msculo flexor contrair-se? 120 sinapses, sendo uma 5 Na figura abaixo so mostrados um motoneurnio e duas de suas sin excitatria e outra inibitria.

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Supondo-se que tanto o neurnio inibidor como o excitador descarreguem potenciais de ao, qual ser a condio para que: a) seja gerado um potencial de ao no motoneurnio b) no seja gerado um potencial de ao no motoneurnio. Tente visualizar o fenmeno supondo agora a existncia de um grande nmero de sinpses tanto inibitrias como excitatrias impingindo sobre uma mesma clula ps sinptica. 6 Na questo 5 voc teve um exemplo do fenmeno de somao. Defina somao temporal e espacial. Mostre graficamente como os potenciais se somam (considere somente duas sinpses para facilitar). 7 O que aconteceria com a contrao de um msculo esqueltico qualquer se a quantidade de ACh presente em cada vescula pr-sinptica achar-se bastante reduzida em relao ao estado normal? Nestas condies qual a modificao esperada nos mini-potenciais e nos potenciais de placa? 8 Takeuchi e Takeuchi (1960) foram os primeiros a analisar a juno neuromuscular com um sistema de voltage clamp que permitia fixar o potencial na placa motora num nvel qualquer, ao mesmo tempo em se estimulava o axnio pr-sinptico e mediam-se as correntes de placa no terminal ps-sinptico. A tabela abaixo mostra os valores de pico das correntes ps sinpticas obtidas em resposta a estimulao do terminal pr-sinptico, em funo da voltagem aplicada.

Voltagem (mV) +75 +55 +40 +20 -20 -50 -90 -120

Corrente de Pico ( A) 0,8 0,65 0,40 0,25 -0,20 -0,50 -0,80 -1,00

As concentraes intra (i) e extracelulares (e) dos principais ons envolvidos no processo so as seguintes: [Na+]e =115 mM; [Na+]i= 7 mM; [K+]e = 4 mM; [K+]i = 140 mM e [Cl-]e = 110 mM e [Cl-]i = 10.0 mM. Considere o potencial de repouso igual a 60 mV. a) Faa um grfico I-V (corrente contra voltagem) utilizando-se dos dados acima. Que concluses se podem tirar quanto a seletividade do canal colinrgico? Utilize dados numricos e explicite seu raciocnio.

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9 Curare, uma substncia utilizada pelos ndios para caar e como coadjuvante em anestesias, reconhecidamente um bloqueador da transmisso sinptica, atuando nos canais colinrgicos da placa motora. Seu efeito o de bloquear a conduo de ons atravs desses canais. Tome o grfico que voc construiu no exerccio anterior como controle e trace sobre o mesmo a reta esperada na presena de uma concentrao no mxima de curare. O que mudou? Por que? Qual seria a vantagem da utilizao dessa droga num processo cirrgico? 10 Mutaes no domnio M2 do receptor colinrgico tm sido associadas sndrome do canal lento (SCS slow channel syndrome) e acontecem por uma troca de Treonina (T) por Prolina (P) no amincido nmero 264. Os resultados mostrados abaixo so registros da atividade do canal colinrgico, obtidos em bipsias de um indivduo normal (Control) e de um indivduo com a sndrome do canal lento (Patient). a) Analise os dois registros e descreva as principais diferenas no funcionamento desses dois canais colinrgicos. b) Faa hipteses sobre como deve responder o msculo do paciente, quando um potencial de ao chega placa motora atravs de um motoneurnio qualquer, em comparao com normal. c) Compare sua resposta anterior com uma nova situao onde voc bloquearia a ao da acetilcolinesterase (enzima que quebra a ACh aps sua ligao ao receptor colinrgico) com fisostigmina. Como ficariam os PEPS nessa situao? E a contratilidade do msculo? Por qu?

11 Miastenia gravis uma doena associada perda de receptores colinrgicos nicotnicos na regio ps-sinaptica da placa motora. Isto foi demonstrado atravs de uma diminuio

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significativa na ligao de -bungarotoxina (uma toxina do veneno de cobra que se liga com grande afinidade ao receptor colinrgico) ao msculo de pacientes com a doena. Analise comparativamente os PEPS num indivduo portador da doena em relao a um indivduo normal. Como deve ficar a transmisso neuromuscular numa situao como essa?