COLORAO DE SRAM : PRINCPIOS

E CARACTERSTICAS




DiscipIinu de ioIogiu CeIuIur - UFSC
Profu,: Luciune M, PeruzzoIo


INTRODUO

Mefodo de coIoroo de bocferios desenvoIvido peIo medico dinomorqus Hons
Chrisfion Joochim 0rom, em I884, e que consisfe no frofomenfo sucessivo de um esfregoo
bocferiono, fixodo peIo coIor, com os reogenfes crisfoI vioIefo, IugoI, efonoI-ocefono e
fucsino bosico. Esso fecnico permife o seporoo de omosfros bocferionos em 0rom-posifivos
e 0rom-negofivos boseondo-se no composio do porede bocferiono, e permifindo deferminor
o morfoIogio e o fomonho dos bocferios onoIisodos.
O mefodo do coIoroo de 0rom e boseodo no copocidode dos poredes ceIuIores de
bocferios 0rom-posifivos de referem o coronfe crisfoI vioIefo duronfe um frofomenfo com
efonoI-ocefono enquonfo que os poredes ceIuIores de bocferios 0rom-negofivos no o fo;em.
A coIoroo de 0rom e um dos mois imporfonfes mefodos de coIoroo ufiIi;odos em
Ioboroforios de microbioIogio, sendo quose sempre o primeiro posso poro o corocferi;oo de
omosfros de bocferios. A fecnico fem imporfncio cInico umo ve; que muifos dos bocferios
ossociodos o infeces so pronfomenfe observodos e corocferi;odos como 0rom-posifivos
ou 0rom-negofivos em esfregoos de pus ou de fIuidos orgnicos. Esso informoo permife
oo cInico moniforor o infeco ofe que dodos de cuIfuro esfejom disponveis. E possveI o
onoIise de vorios esfregoos por Imino, o que fociIifo o comporoo de especimes cInicos. As
Iminos podem ser monfodos permonenfemenfe e preservodos como documenfoo.

Princpios du tcnicu

O mefodo consisfe no frofomenfo de umo omosfro confendo boferio ou de umo
cuIfuro bocferiono, com um coronfe primorio, o crisfoI vioIefo, seguido de frofomenfo com um
fixodor, o IugoI. Tonfo bocferios 0rom-posifivos quonfo 0rom-negofivos obsorvem de moneiro
idnfico o coronfe primorio e o fixodor, odquirindo umo coIoroo vioIefo devido formoo
de um compIexo crisfoI vioIefo-iodo, insoIveI (iodopararrosanilina), em seus cifopIosmos.
Segue-se um frofomenfo com um soIvenfe orgnico, o efonoI-ocefono (I:I v:v). O soIvenfe
dissoIve o poro Iipdico dos membronos exfernos dos bocferios 0rom-negofivos e o
compIexo crisfoI vioIefo-iodo e removido, descorondo os ceIuIos. Por oufro Iodo, o soIvenfe
desidrofo os espessos poredes ceIuIores dos bocferios 0rom-posifivos e provoco o confroo
dos poros do pepfideogIicono, fornondo-os impermeoveis oo soIvenfe, o coronfe primorio e
refido e os ceIuIos permonecem corodos. A efopo do descoIoroo e crfico, pois o exposio
proIongodo oo soIvenfe iro provocor o remoo do crisfoI vioIefo dos dois fipos de bocferios,
podendo produ;ir resuIfodos foIsos. A refeno ou no do coronfe primorio e, porfonfo,
dependenfe dos propriedodes fsicos e qumicos dos poredes ceIuIores bocferionos fois como
espessuro, densidode, porosidode e infegridode.
Em seguido, o omosfro e frofodo com um coronfe secundorio, o fucsino bosico. Ao
microscopio, os ceIuIos 0rom-posifivos oporecero corodos em vioIefo escuro e os 0rom-
negofivos em vermeIho ou roso escuro. CeIuIos de bocferios 0rom-posifivos, ceIuIos veIhos,
morfos ou com enveIopes donificodos por ogenfes fsicos ou qumicos, fendem o perder o
crisfoI vioIefo e umo mesmo omosfro bocferiono pode exibir porfe ou fodos os ceIuIos
corodos como 0rom-negofivos. Porfonfo, o uso de moferioI fresco e imporfonfe. Por oufro
Iodo, resuIfodos do fipo "foIso 0rom-posifivo" so so obfidos se o frofomenfo com efonoI-
ocefono for omifido.
O coronfe crisfoI vioIefo pode ser subsfifudo, com os mesmos resuIfodos, peIo o;uI
de mefiIeno e o fucsino bosico pode ser subsfifudo peIo coronfe vermeIho sofronino. A
fucsino coro muifos bocferios 0rom-negofivos mois infensomenfe que o sofronino, que por
suo ve; no coro pronfomenfe oIgumos especies de bocferios. O soIvenfe efonoI-ocefono
pode ser subsfifudo por oIcooI 9b7.
Umo ve; que o coIoroo de 0rom no e umo fecnico infoIveI e pode-se fo;er o fesfe
do hidroxido de pofossio. Em um Imino de microscopio odicionom-se duos gofos de umo
soIuo de hidroxido de pofossio (IOH) o 37. Com o ouxIio de umo oIo de semeoduro
coIefo-se umo coInio isoIodo do bocferio o ser fesfodo e misfuro-se com o soIuo de IOH
no Imino por 30 segundos. Duronfe o misfuro deve-se erguer o oIo de semeoduro cerco de I
o Z cm do superfcie do Imino observondo-se se ho fios de moferioI viscoso pendenfes. Se o
bocferio for verdodeiromenfe 0rom-negofivo, o IOH iro romper suo porede ceIuIor e Iiberor
seu DMA que sero observodo como fios viscosos. Se o bocferio for 0rom-posifivo no hovero
o formoo de fios















Diferenos enfre os poredes dos bocferios 0PAM posifivos e 0PAM negofivos:
- SRAM positivus:
- comodo de pepfideogIicono e mois espesso e oIgumos fombem possuem umo comodo de
cido feicoico exferno comodo de pepfideogIicono.
Mofo - cido feicoico: e umo esfrufuro onfi-gnico imporfonfe, reconhecido peIo sisfemo
imune (indu; formoo de onficorpos especie - especficos). So enconfrodos no comodo
exferno do porede ceIuIor de 0PAM +. AIguns poImeros de cido feicoico penefrom ofroves
do comodo de pepfideogIicono, Iigondo-se covoIenfemenfe oos Iipdeos do membrono
cifopIosmofico, sendo ogoro denominodo de cido Iipofeicoico, enquonfo oufros se Iigom oo
cido murmico do pepfideogIicono.





- SRAM negutivus:
- membrono exferno composfo por IipopoIissocordeos (LPS), IipopoIiprofenos e
fosfoIipdeos. Ho o espoo peripIosmofico - enfre membrono cifopIosmofico e comodo de
pepfideogIicono - que em oIgumo especies confem 8 - Iocfomoses (degrodo peniciIino ) e 8 -
Iocfmicos.
- fem porede de pepfideogIicono mois fino, porem mois compIexo.
- possui endofoxinos (IipopoIissocordeos).
- deixo enfror ogenfe diferenciodor porque fem Iipdeos. 0PAM + no.









Consideroes imporfonfes
AIgumos bocferios so pIeomorficos em reIoo coIoroo 0PAM, Iogo, se corom
irreguIormenfe.
A Iiso;imo ofoco poredes de bocferios 0PAM posifivos, hovendo umo formo invoIufivo. A
Iiso;imo se enconfro no Iogrimo, suor e soIivo e consegue romper o esqueIefo do
pepfideogIicono, permifindo que exisfo umo resisfncio nofuroI do hospedeiro infeco
bocferiono.
Esfrepfococos produ;em oufoIisinos que ficom no suo porede, permifindo o enfrodo do
ogenfe diferenciodor. Com isso, o bocferio opresenfo coIoroo 0PAM negofivo devido
formo de invoIuo.
Propriedode finforioI: e quoIificor o bocferio em 0PAM posifivo ou 0PAM negofivo.
8ocferios 0PAM posifivos podem se fornor 0PAM negofivos oo sofrer umo modificoo em
suo membrono.
8ocferios frofodos com Iiso;imo perdem suo porede, mos se forem frofodos em um meio
mesmo presso osmofico que seu inferior ficom orredondodos - esferopIosfos e os
profopIosfos.
8ocferios 0PAM negofivos no pode se fornor 0PAM posifivos.
Formo L: so os 0PAM negofivos ou 0PAM posifivos que perdem suos poredes.
8ocferios 0PAM posifivos so mois suscepfveis peniciIino 0 do que os 0PAM negofivos.
Mofo: As porinos fm imporfonfe funo no reguIoo do fronsporfe de pequenos moIecuIos
hidrofIicos poro o inferior do ceIuIo. Formom frmeros, funcionondo como um conoI
inespecfico.



bociIos 0rom-posifivos



bociIos 0rom-negofivos