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Recombinao gentica

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(Redirecionado de Recombinao) Ir para: navegao, pesquisa Recombinao a troca aleatria de material gentico durante a meiose[1]. Na primeira diviso meitica (prfase I, mais precisamente no paquteno) ocorre o crossing-over, que o sobrecruzamento das cromtides homlogas, no-irms que se encontram lado a lado. A relao existente entre meiose e variabilidade gentica principalmente devida ocorrncia de crossing-over. Para alm da separao aleatria dos cromossomas homlogos, um outro fenmeno gentico, designado por crossing-over, leva formaao de clulas-filhas com constituiao gentica diferente da clula-me. Quando os cromossomas homlogos se cruzam podem unir-se em certos pontos ou quiasma, podendo ocorrer intercmbio de segmentos cromossmicos com certos blocos de genes, entre os membros homlogos dos pares.

[editar] Consequncias da recombinao


Em organismos assexuados, genes so herdados juntos, ou ligados, j que eles no podem se misturar com genes de outros organismos durante a reproduo. Por outro lado, a prole de organismos sexuados contm uma mistura aleatria dos cromossomos de seus pais, que produzida a partir da segregao cromossmica. No processo relacionado de recombinao gnica, organismos sexuados podem trocar DNA entre cromossomos homlogos. Esses processos de embaralhamento podem permitir que mesmo alelos prximos numa cadeia de DNA segreguem independentemente. No entanto, como ocorre cerca de um evento de recombinao para cada milho de pares de bases (em humanos), genes prximos num cromossomo geralmente no so separados, e tendem a ser herdados juntos.[2] Essa tendncia medida encontrando-se com qual frequncia dois alelos ocorrem juntos, medida chamada de desequilbrio de ligao. Um conjunto de alelos que geralmente herdado em grupo chamado de hapltipo, e essa co-herana pode indicar que o locus est sob seleo positiva.[3]

Recombinao homloga um tipo de recombinao gentica, um processo de rearranjo fsico que ocorre entre duas cadeias de ADN. A recombinao homloga envolve o alinhamento de sequncias similares, formao de uma juno de Holliday e quebra e reparo, conhecido como resoluo, do ADN para produzir uma troca de material entre cadeias. O processo de recombinao homloga ocorre naturalmente em organismos e tambm utilizada como uma tcnica de biologia molecular para introduo de mudanas genticas num organismo.

13 Aula: Mutao e Recombinao


Mutaes: Modificaes no DNA Mutante: Se alguma das caractersticas do fentipo de um organismo difere do fentipo "selvagem", o organismo dito mutante para esta caracterstica. (cuidado, esta uma afirmao geral, mas existem casos onde um fentipo distinto no corresponde a uma alterao gentica). Tipos de Mutao: Mutao pontual ou extensa. As mutaes pontuais podem ser: substituies de bases, inseres de bases ou delees de bases. As modificaes extensas incluem delees, duplicaes, inseres e rearranjos. Denominamos de transies as substituies de bases nas quais uma purina substitui outra purina ou uma pirimidina substitui outra pirimidina. Por outro lado as transverses so mutaes nas quais um tipo de base substitui o tipo oposto de base, p. ex. uma purina substituindo uma pirimidina. As substituies de bases podem ser silenciosas ou no. Silenciosas nos casos em que a substituio de base no afeta o aminocido que vai ser incorporado nesta posio. No basta fazer uma substituio de base em um feixe de DNA para que tenhamos a mutao. A clula tem tambm mecanismos de reparo, e temos sempre uma competio entre a formao de mutantes e o reparo. No entanto aps a duplicao deste DNA que tem um par nao complementar (mismatch) (porque uma das bases foi alterada), teremos um DNA do tipo selvagem e um DNA mutante (agora a modificao foi passada tambm para o outro feixe, por complementariedade). Dizemos que agora a mutao foi fixada, e os mecanismos de reparo no reconhecem mais o DNA mutante como estando "errado" no seu pareamento. As mutaes podem ser espontneas ou induzidas. Boa parte das mutaes espontneas ocorre durante a prpria replicao do DNA. Algumas bases apresentam formas alternativas (tautmeros), por exemplo forma ceto se apresentando temporariamente como forma enol, ou forma amina se apresentando temporariamente como forma imina. Se a forquilha de replicao passar neste mesmo momento por esta base, a DNA polimerase vai incorporar um outro nucleotdeo em relao ao que deveria incorporar. Isto porque os pareamentos destas formas alternativas das bases so diferentes dos pareamentos usuais. Este mecanismo leva a transies. Na prpria duplicao de DNA podemos ter tambm a formao de inseres ou delees. Isto ocorre principalmente em regies onde temos repeties de uma srie de nucleotdeos iguais ou uma pequena sequncia repetida. Pode-se formar uma pequena ala no DNA novo em formao ou no DNA molde, dando origem a inseres ou delees, respectivamente. As mutaes, espontneas ou induzidas, no esto distribuidas em nmero igual ao longo dos cromossomas. Existem regies de "hot spots" ou seja, regies preferenciais onde ocorrem muitas mutaes no mesmo ponto. Induo de mutaes por agentes qumicos. Tipos de agentes mutagnicos: Anlogos de bases, por exemplo o BrdU (5-bromouracil) incorporado em substituio a T. Agentes intercalantes tais como a proflavina, que causam inseres ou delees. Agentes que modificam bases, tais como o cido nitroso, que leva deaminao de

algumas bases. Por exemplo ele faz a deaminao de citosina levando a uracil, que muitas vezes reparado, mas quando no da origem a transies CG --> TA. (Obs: a deaminao de C e metil-C tambm acontece espontneamente, em menor frequncia). Agentes alquilantes, tais como o EMS (etil-metano sulfonato). Reage principalmente com G, resultando numa transio GC -->AT. Por outro lado a purina alquilada hidrolizada mais facilmente, saindo do esqueleto aucar-fosfato, e deixando um local sem uma base. Isto pode ser reparado pela clula, mas se antes disso a forquilha de replicao chegar a, qualquer base pode ser inserida neste ponto. Com isso podemos ter transies ou transverses neste ponto. Vamos definir como recombinao eventos onde novas ligaes entre feixes de DNA so formadas. Assim, temos que distinguir a recombinao tratada aqui, de outros eventos tais como a simples mistura de cromossomas paternos e maternos, que na literatura tambm denominada de recombinao. Principais tipos de recombinao existentes: Recombinao homloga, recombinao stio-especfica e ilegtima. Vamos tratar aqui apenas da recombinao homloga. Recombinao homloga em Escherichia coli mediada por proteina RecA. Ela vai fazer o pareamento entre as duas regies de homologia facilitando a troca de feixes. Os alelos que esto em processo de recombinao so homlogos, mas no idnticos (se fossem idnticos no formaramos um novo variante de DNA). No entanto eles no podem ser muito diferentes, pois seno a RecA no os reconhece como homlogos. Um limite de 10% de diferena considerado ainda razovel para se ter recombinao homloga entre dois trechos de DNA. Existe ainda um limite mnimo de tamanho para que dois trechos de DNA possam fazer recombinao homloga. Um tamanho mnimo de 100bp necessrio para que ela acontea, mas o que mais comum ocorrer recombinao homloga entre trechos de DNA com regies de homologia bem maiores.

Mapeamento feito medindo a frequncia de recombinao. Verificou-se que o DNA de fagos podem se recombinar durante a infeco. Assim, foram feitos cruzamentos entre fagos T2 com mutaes em gens distintos. Por exemplo um fago com o genoma h+r- foi utilizado numa infeco conjunta com um fago h-r+. Quatro tipos de fagos aparecem na prognie: h+r-, h-r+, h+r+ e h-r-. O fentipo da placa de lise correspondente a cada um destes gentipos diferente quando plaqueados sobre uma mistura de bactrias selvagens e resistentes a T2. Lembrar que o mutante h- um mutante de espectro de hospedeira, infectando bactrias selvagens e resistentes a T2. O mutante r- por sua vez apresenta placas de lise maiores que o normal. Questo de delees: A recombinao s pode ocorrer entre regies que estejam presentes nos dois alelos que esto se recombinando. Desta forma, se houver uma deleo (ausncia) de um determinado trecho de um alelo, no poder ocorrer recombinao neste trecho. Se tivermos um alelo a- (deficiente na produo do produto A), e este alelo for se

recombinar com outro que tenha uma deleo do gen a, no poderemos obter um recombinante que seja selvagem para o gen a, produzindo o produto A. Do mesmo modo, no se pode obter recombinantes do tipo selvagem entre mutantes idnticos, ou seja mutantes com modificao no mesmo nucleotdeo.

A recombinao gnica (ou gentica) refere-se troca de genes entre duas molculas de cido nuclico, para formar novas combinaes de genes em um cromossomo. Se dois cromossomos de rompem e se unem novamente, alguns genes transportados por esses cromossomos so trocados, processo esse denominado crossing over. Os cromossomos originais se recombinam, de modo que cada um agora transporta uma parte dos genes do outro. Em eucariotos, a recombinao gentica um processo ordenado, que normalmente ocorre como parte do ciclo sexual do organismo. A recombinao geralmente acontece durante a formao das clulas reprodutivas, de modo que essas clulas contenham DNA recombinante. J em bactrias, a oportunidade para a recombinao gentica pode surgir de vrias maneiras diferentes, mas em todos os casos, duas molculas de DNA so unidas. Um dos processos que podem ocorrer para uma recombinao a chamada conjugao, em que uma bactria transfere DNA em um sentido para outra bactria por contato clula-clula. O DNA transferido pode ser parte ou todo o genoma bacteriano ou pode ser um elemento de DNA extragenmico denominado plasmdio. No processo de conjugao, uma bactria atua como doadora e outra como receptora, em que a primeira transfere parte do seu material gentico para a outra, e a segunda apenas o recebe e incorpora ao seu genoma. O fato de uma bactria ser doadora e outra receptora de deve presena do fator fertilidade (F), as linhagens que carregam tal fator so designadas F+ e podem doar DNA, as que no possuem, no doam e so denominadas F-. Uma clula bacteriana tambm pode obter um pedao de DNA do ambiente e incorporar esse DNA a seu prprio cromossomo, processo chamado transformao. Esse DNA pode ser proveniente de clulas da mesma espcie ou de outras espcies que morreram, mas ainda se encontram dispersas pelo ambiente, ou, mesmo, secretado por bactrias ainda vivas. Esses pedaos isolados de DNA so captados pelas clulas bacterianas atravs da parede celular e da membrana plasmtica. A transformao muito til no ramo da Engenharia Gentica, processo de manipulao de genes de modo a inserir novas caractersticas, determinando, novas funes bactria transformada. Exemplo disso o uso de bactrias na produo de insulina, em que tais microrganismos tm seu genoma modificado atravs da introduo de genes humanos que ordenam a fabricao desse hormnio, passando, assim, a produzi-lo. Em outros casos, ainda, alguns vrus que parasitam clulas bacterianas (chamados bacterifagos, ou simplesmente fagos) podem captar um pedao de DNA de uma

bactria e injet-lo em outra, podendo ser incorporado ao cromossomo, num procedimento conhecido como transduo. Os prprios fagos podem sofrer recombinao quando dois gentipos diferentes infectam a mesma bactria (recombinao de fagos). Os fagos que participam do processo de transduo podem ser distinguidos pelo seu ciclo, alguns so virulentos, que lisam (lise = quebra) imediatamente a clula hospedeira, ciclo denominado ltico, outros so temperados, ou seja, podem permanecer dentro do hospedeiro por um determinado perodo sem destru-lo, o ciclo lisognico. Apenas os fagos temperados podem ser transduzidos. Assim como a mutao, a recombinao gnica contribui para a diversidade gentica de uma populao, que a base do processo evolutivo. Referncias bibliogrficas: CASE, Christine, FUNKE, Berdell, TORTORA, Gerard. Microbiologia. Porto Alegre: Artmed, 2005.

Recombinao homloga Recombinao de DNA: qualquer reao que leve a troca da fragmentos de DNA entre dois DNAs. Envolve a troca fsica de feixes, e no somente a troca de informao. Consideraes sobre evoluo e recombinao: Evoluo depende da gerao de diversidade. O primeiro passo na criao desta variao so as mutaes. Em organismos diplides um dos mecanismos de formar novas combinaes de gens a segregao durante a meiose, na formao de gametas. Um outro mecanismo para formar novas combinaes de gens o de recombinao, presente tanto nos eucariotos quanto em procariotos. Histrico do estudo da recombinao: 1910. Comeo de experincias de Morgan e Sturtevant, com cruzamentos de Drosophila. Por exemplo cruzamentos entre o duplo mutante a-b- e o selvagem a+b+. Confirmadas as leis de Mendel. Mas, quando duas mutaes estavam presentes no mesmo cromossoma, surgiam gametas a-b+ por exemplo, novas ligaes de DNA. Estudos com fungos filamentosos.

Bem mais tarde, em torno dos anos 50, estudos com fungos, por exemplo, Neurospora crassa, onde ocorre a meiose e a seguir mais uma mitose, produzindo 8 esporos ordenados por ascus. Os esporos podem ser separados por micromanipulao e ser estudados separadamente. Vantagens deste organismo para o estudo de recombinao: - Produtos de um nico evento de recombinao podem ser analisados, ao invs de uma populao de indivduos, na qual s as propores mdias podem ser obtidas. - A reciprocidade ou no das trocas pode ser observada em eventos individuais. A outra base do estudo de recombinao so os trabalhos com fagos, principalmente o fago T4. Cruzamentos entre fagos T4, por exemplo nas experincias de Hershey, utilizando duas caractersticas fenotpicas, a morfologia de placas e o tipo de hospedeira utilizada. Existem diferentes tipos de recombinao que sero vistos no curso:

Recombinao homloga ou geral Recombinao stio-especfica Transposio Recombinao ilegtima

A recombinao homloga requer a proteina RecA ou homlogos funcionais em outras espcies diferentes de E. coli. Requer ainda regies homlogas, ou seja muito semelhantes, nos dois DNAs que vo se recombinar. Geralmente dado um valor de 10% de diferenas como o mximo ainda aceitvel para que dois DNAs se reconheam ainda como homlogos. O tamanho mnimo para os fragmentos que vo se recombinar pode ser pensado como 1kb (1000bp). Apesar de que existem exemplos na literatura de recombinao homloga com fragmentos menores, isto no muito comum. Postulados bsicos no estudo de recombinao homloga:

Quebra e juno de DNAs. Recombinao envolve quebra dos DNAs parentais e juno do material existente em nova organizao. Obs: no necessrio que todo o material dos recombinantes venha dos parentais, pode ter reparo de partes. Utilizao de enzimas de recombinao. Formao de heteroduplexes na regio de troca. Correo de mismatch ou mau pareamento.

Muitos modelos moleculares foram propostos para a recombinao, mas uma idia central tem permanecido nestes, o do "Intermedirio de Holliday". Proposta de recombinao de Holliday (1964): quebra de um feixe simples em cada DNA feixe duplo, em feixes de mesma polaridade e em posies equivalentes. Ligao dos novos feixes, seguida de migrao da juno.

Este modelo totalmente recproco. O intermedirio de Holliday a molcula produzida pela ligao dos DNAs feixe duplo, e que tem uma estrutura simtrica, podendo ser visualizada tanto numa forma em que os feixes aparecem cruzados, quanto numa forma em que a regio do cruzamento aparece aberta. A seguir ocorre a resoluo do intermedirio em dois novos DNAs feixe duplo. Os cortes podem produzir novamente a configurao parental, ou a configurao recombinante. Podem haver trechos em heteroduplex nos DNAs. Este modelo foi proposto em termos de fungos, mas os intermedirios de Holliday foram visualizados inicialmente em E. coli (recombinao entre plasmdios, sugerindo um modelo nico). Este modelo passou por diversas adaptaes, entre elas o modelo de Radding (no descrito aqui), e que durante vrios anos foi utilizado como o modelo mais adequado maior parte das situaes encontradas. O modelo molecular de recombinao homloga em uso atualmente o modelo de Szostak, que prope a "invaso" de um DNA feixe duplo por um feixe simples gerado a partir de uma quebra dupla de DNA. Incio de recombinao: quebra dupla de DNA. Um dos feixes parcialmente degradado, deixando expostas pontas 3'. Uma destas pontas 3' vai invadir o DNA feixe duplo homlogo, formando uma ala D. O feixe simples que invadiu o duplo pode agora continuar uma polimerizao na ponta 3'. O feixe deslocado, formando a ala D vai servir de molde para sntese do DNA que est quebrado. Posteriormente ocorre a ligao dos feixes respectivos, dando dois DNAs feixe duplo, com heteroduplexes de tamahos diferentes. Base molecular para a recombinao em E. coli. Numerosas proteinas envolvidas na recombinao. Algum papel atribuido a vrias, mas estamos longe de conhecer uma figura mais completa. Primeira etapa da recombinao feita pela pela nuclease RecBCD. Esta tem diversos papis:

helicase exonuclease 3'para 5' endonuclease

Vai haver uma interao entre a RecBCD e stios do DNA com uma sequncia especfica, a sequncia denominada stio chi, que corresponde a 5'GCTGGTGG3'. Notese que esta sequncia no palindrmica, e sua orientao faz diferena para a interao com chi. A RecBCD comea sua atuao entrando por um DNA feixe duplo, formando no processo um ala de DNA feixe simples, porque a abertura do DNA se d mais rpido do que a saida do feixe simples da enzima. A ponta 3' de feixe simples liberada vai sendo degradada. Ao interagir com a sequncia chi na orientao adequada, ocorre um corte na ala em feixe simples na regio de chi. Alm disso a atividade de exonuclease de RecBCD inibida, permitindo a manuteno da ponta 3' que termina em chi. Esta ponta vai invadir um outro DNA feixe duplo. Sinapse: A ponta de DNA que vai invadir outro DNA recoberta pela proteina RecA. Ela tem que competir com molculas de ssb (single strand binding protein) que tambm se ligam ao DNA feixe simples. A ligao do DNA RecA leva a uma extenso considervel do feixe. Este filamento agora procura homologia no outro DNA por tentativas sucessivas, formando uma hlice tripla, onde este filamento com RecA contata a estria maior do DNA feixe duplo. A migrao da juno e o corte do intermedirio de Holliday.

O intermedirio de Holliday admite migrao da juno. Em E. coli isto feito pelas proteinas RuvA, RuvB e RuvC. A RuvA se liga no centro da juno, e a RuvB se liga a RuvA. A proteina RuvC corta feixes opostos da juno.