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U.C.S
FACULTAD DE BIOANALISIS
REGION XALAPA
LABORATORIO DE INMUNOHEMATOLOGIA
WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ
PRACTICA
OBJETIVO
E l alumno identificará cual es el propósito de realizar a cabo un buen
control de calidad de los aparatos y equipo en el banco de sangre.
Fundamento:
GENERALIDADES:
Las centrífugas son instrumentos que permiten someter a las muestras a intensas fuerzas que producen
la sedimentación en poco tiempo de las partículas que tienen una densida mayor que la del medio que
las rodea.
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En general se diferencian en función de los márgenes de aceleración a que someten a las muestras en :
centrífugas (de pocas g a aprox. 3000 xg), super-centrífugas (o centrífugas de alta velocidad, rango de
2000 xg a 20000 xg) y ultracentrífugas (de 15000 xg a 600000xg). En las centrífugas se suele controlar
la temperatura de la cámara para evitar sobrecalentamiento de las muestras debido a la fricción.
En las ultracentrífugas, la velocidad extrema (más de 100000 rpm), hace que sea neceario hacer un
intenso vacio en la cámara de la centrífuga para evitar el calentamiento de rotor y muestra.
En una centrífuga el elemento determinante es el rotor, dispositivo que gira y en el que se colocan los
tubos.
* Rotor basculante. Los tubos se colocan en un dispositivos (cestilla) que, al girar el rotor, se coloca
en dispocisión perpendicular al eje de giro. Así pues los tubos siempre giran situados
perpendicularmente al eje de giro.
*Rotor de ángulo fijo. Los tubos se insertan en orificios en el interior de rotores macizos. El caso
extremo es el de los rotores verticales en los que el tubo se sitúa paralelo al eje de giro. Este tipo de
rotores es típico de ultracentrífugas y se emplea en separaciones de moléculas en gradientes de
densidad autogenerados (por ej. de cloruro de cesio).
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Los parámetros a tener presentes en cualquier centrifugación, que determinarán las condiciones son :
En general cuanto mayor sea esa diferencia antes (menor tiempo y menor fuerza de aceleración)
sedimentará. Cuando el diferencial es muy pequeño se pueden aplicar centrifugaciones de cientos de
miles de g durante horas.
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Las centrífugas de los laboratorios clínicos es diseñada para proporcionar una fuerza centrífuga en los
fluidos y componentes celulares, teniendo tres funciones principales:
CALIBRACIÓN FUNCIONAL
PREPARACIÓN DE REACTIVOS
a) Use antisueros puros Anti-A, Anti-D o suero coombs, para la calibración de las diferentes fases
( medios)
b) Prepare soluciones al 5% de eritrocitos de prueba y de los eritrocitos control –
CALIBRACIÓN DE LA FASE SALINA
1. Marcar 6 tubos como 1 P hasta 6 P para las células de prueba. Marcar 6 tubos con IC hasta 6c
para las células de control -
2. agregar 1 gota de anti-A diluido de tal forma que de una reacción de 1 a 2+ acada tubo
3. Agregar a cada 1 gota de eritrocitos a prueba al 5% a todos los tubos marcados con la letra T
4. agregar 1 gota de suspensión de células control – al 5% a todos los tubos marcados con la letra C.
5. centrifugar los tubos 1T 1C por el tiempo indicado, resuspender las células y anotar
cuidadosamente el grado de aglutinación y observaciones
6. centrifugar los tubos restantes incrementando el tiempo según la tabla
FASE ALBUMINOSA
1. marcar 6 tubos como 1P hasta 6P para las células a prueba. Marcar 6 tubos 1C hasta 6C para
las células control -.
2. agregar una gota de antisuero anti-D diluido a cada tubo
3. agregar 1 gota de suspensión de células al 5% a todos los tubos marcados con la letra P
4. agregar 1 gota de suspensión de células control - al 5% a todos los tubos marcados con la letra C.
5. centrifugar los tubos 1P y 1C por el tiempo indicado , resuspender las células y anotar
cuidadosamente el grado de aglutinación y observaciones
6. centrifugar los tubos restantes incrementando el tiempo según la tabla
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FASE DE LAVADO
VELOCIDAD DE ROTACIÓN
RESULTADOS
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40 Si Si No No Si Si +++ No
45 Si Si No No Si Si +++ No
FASE ALBUMINOSA
++
40 Si Si No No Si Si ++ No
45 Si Si No No Si Si ++ No
FASE LAVADO
Sobrenadante Botón bien Segundos
claro delineado
Prob Contr Prob Contr 1:00 min
Si Si No No 1:30 min
Si Si N N 2:00 min
Si Si No No 2:00 min
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Si Si No No 2:30 min
Si Si No No 3:00 min
Si Si No No 3:00 min
VELOCIDAD ROTACIÓN
1ª lectura 80 seg
2ª lectura 90 seg
3ª lectura 90 seg
Total 260 seg
Media:
8 6.6
1. Reactivo anti A
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REFERENCIAS:
1. Kaplan ,L.A, Química clínica, Técnicas de laboratorio, Editorial médica panamericana, buenos
aires argentina , 1998.
2. Radillo, G.A, Medicina Transfusional, Editorial prado,1999,México, pagina 329
3. http://www.ub.es/biocel/wbc/tecnicas/fraccionamiento.htm