Julin Guariniello

Herramientas de Seleccin de Tolerancia a la Salinidad. En la actualidad el planeta se encuentra bajo un cambio climtico global ocasionado por el efecto invernadero, el debilitamiento de la capa de ozono, la deforestacin y la contaminacin. Todos estos procesos de origen antrpico son los causantes del rpido aumento de la temperatura, el descongelamiento de los polos glaciares, la magnificacin de los procesos erosivos, la desertificacin y la prdida de biodiversidad. Bajo esta perspectiva, donde los recursos naturales del planeta, principalmente agua y suelo, se tornan escasos, los sistemas de produccin de alimentos debern afrontar el desafo de incrementar la oferta que cubra con la demanda de una poblacin que crece a ritmo exponencial. En la Argentina, dos tercios del territorio corresponden a climas ridos y semiridos, y aproximadamente 34 millones de hectreas de los ambientes hmedos y zonas irrigadas se encuentran bajo condiciones de exceso hdrico y salinidad (Reinoso et al., 2004). La salinidad del suelo fue definida por Maas y Nieman (1978) simplemente como la presencia de una excesiva concentracin de sales solubles en el suelo, que limitan el crecimiento de las plantas. Actualmente, se sabe que las especies vegetales cultivadas sobre suelos salinos y salino-sodicos experimentan condiciones de estrs que afectan los procesos bioqumicos y fisiolgicos bsicos produciendo modificaciones en la morfologa y el desarrollo, lo que se traduce en una menor produccin de biomasa y rendimiento (Reinoso et al., 2004). Por otra parte, tambin se conoce que durante el proceso evolutivo muchos genotipos desarrollaron ciertos mecanismos de carcter adaptativo que les otorgaron tolerancia a la salinidad. Por un lado, podemos nombrar a las estrategias orientadas a mantener un gradiente de potencial agua favorable por medio del aumento de volumen (suculencia) o mediante la acumulacin de solutos compatibles orgnicos (ajuste osmtico). Por otro lado, existen estrategias orientadas a mantener bajas las concentraciones citoslicas de Na y disminuir su toxicidad, ya sea mediante el secuestro en vacuola, la exclusin inica a nivel radicular, la compartimentalizacin en los tejidos y rganos, o la secrecin de iones por glndulas y vesculas foliares (Gonzlez et al., 2002). El mejoramiento gentico vegetal y la bsqueda de especies nativas que se adapten a las nuevas condiciones edafoclimticas permitira incorporarlas a los sistemas productivos y expandir la frontera agropecuaria sobre ambientes llamados marginales o restrictivos, anteriormente poco utilizados. Pero para desarrollar un correcto programa de mejoramiento es primordial contar con herramientas y criterios claros, tanto para generar variabilidad como para seleccionar a los nuevos individuos. En un principio, al hablar de generacin de variabilidad debemos hacer una distincin entre el mejoramiento gentico clsico o convencional, y el mejoramiento gentico moderno. El primero est basado en la generacin de variabilidad mediante cruzamientos intraespecficos y en la posterior seleccin de individuos superiores para un determinado carcter. Por el contrario, el segundo, utiliza nuevas tecnologas (cultivo de tejidos, mutagnesis, transgnesis, marcadores moleculares, etc.) para generar y detectar nueva variabilidad no preexistente. En cuanto a la seleccin de nuevos individuos es necesario desarrollar un sistema de evaluacin (fenotipificacin) confiable, relativamente rpido y de bajo costo, que permita correlacionar los resultados obtenidos con el comportamiento superior esperado a campo. Para comenzar debemos recordar que la tolerancia es una propiedad genticamente establecida y que slo se evidencia cuando actan sobre la planta los factores adversos del medio. Por consiguiente, todo sistema de seleccin implicar someter a los individuos a concentraciones crecientes de salinidad, para luego evaluar la tolerancia en funcin de indicadores o marcadores.

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Dentro del mejoramiento clsico, una correcta seleccin del material requiere de la repeticin de ensayos a campo en diferentes aos y sitios para poder estimar los componentes de la variabilidad gentica (genotipo, ambiente, interaccin GxA). Sin embargo, en las primeras etapas del mejoramiento sera costoso y tcnicamente impracticable llevarlo a cabo. De igual manera, si quisiramos comenzar los ensayos de seleccin sobre un ambiente de suelo salino nos encontraramos con la dificultad que, por lo general, la distribucin natural de la salinidad en los campos es altamente heterognea (campos overos) y, por lo tanto, las respuestas seran altamente variables. Por estas razones, actualmente la mayora de los programas de mejoramiento y estudios cientficos se desarrollan bajo ambientes semicontrolados de mayor practicidad y menor costo, especialmente bajo sistemas hidropnicos. Los ambientes semicontrolados permiten simplificar los sistemas de evaluacin y el anlisis de las variables respuesta al fijar los factores ambientales (luz, temperatura, fertilidad) y nos independiza de las interacciones que pudieran suceder entre los factores y los niveles de salinidad evaluados. El cultivo en sistemas hidropnicos confiere muchas ventajas tales como, poder suministrar a una gran cantidad de individuos los nutrientes necesarios y las concentraciones salinas exactas para cada tratamiento. Del mismo modo, permite realizar con facilidad la evaluacin de caracteres morfolgicos vinculados con el sistema radical (largo, peso, nmero de races primarias y secundarias, etc.), y con la parte area. Adems, son muy tiles para estudios de germinacin y en estadios de plntula (Reinoso et al., 2004). Un sistema de cultivo intermedio es realizar los ensayos en maceta con suelo salino o suministrar la salinidad con el riego. Este sistema presenta la ventaja de contar con la dinmica de las sales en el suelo reguladas por la capacidad de intercambio catinico (CIC), sin embargo, se tiene un desconocimiento certero de las concentraciones salinas que producen respuesta al igual que se presenta el problema de la acumulacin de sales. Otro factor que interviene en la evaluacin de la tolerancia a la salinidad, es la forma, tipo, duracin o intensidad con que se suministran los tratamientos. Para obtener ptimos resultados, los mismos deben aplicarse en pulsos de salinidad creciente. De este modo, se evaluaran resultados sobre rganos y procesos (hormonales, fisiolgicos) de individuos desarrollados bajo condiciones de salinidad, y no sobre individuos sometidos a un shock salino que detiene su crecimiento. Continuando con el tema, la mayora de los ensayos publicados sobre tolerancia o susceptibilidad a la salinidad han usado soluciones monosalinas de NaCl bajo sistemas hidropnicos. Sin embargo, es bien sabido que en los suelos salinos y salino-sdicos se encuentran combinaciones de sales formadas por diversos cationes y aniones, por lo que la extrapolacin de resultados a condiciones de campo sera limitada (Llanes et al., 2005). De igual forma, el desarrollo de ensayos utilizando soluciones monosalinas a base de otras sales tales como KCl, Na2SO4, etc. demuestran que el efecto de la salinidad sobre la germinacin no slo es causado por un componente osmtico, sino que existe un efecto inico de toxicidad que depende del tipo de sal involucrada. Y ms an, se tienen evidencias que la interaccin de iones en la formulacin de soluciones bisalinas anionicas o cationicas puede modificar o amortiguar el efecto inhibidor de la germinacin. En conclusin, la utilizacin de soluciones bisalinas para la seleccin de materiales tolerantes podra mejorar los resultados (Sosa et al., 2005) Por otro lado, la metodologa de seleccin tambin va a depender tanto del sistema reproductivo de la especie como del programa de mejoramiento utilizado. Por ejemplo, si la especie a mejorar presenta una escasa variabilidad y/o su modo de reproduccin es apomctica, es claro que la imposibilidad de realizar cruzamientos determinar el desarrollo de tcnicas de mejoramiento no convencional. Es as que, utilizando la tcnica de cultivo in vitro, se genera variabilidad por medio de variacin somaclonal, fusin de protoplastos, cultivo de anteras, mutagnesis in vitro o transgnesis. En todos estos sistemas,

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incorporar y modificar la concentracin salina de los medios de cultivo posibilita de forma prctica la seleccin temprana de nuevos genotipos tolerantes (Pongtongkam et al., 2005). Otro factor a tener en cuenta en la evaluacin es que, para comparar a los individuos sometidos a los tratamientos ensayados, estos deben encontrarse en las mismas etapas ontognicas. Asimismo, la toma de datos de las variables respuesta debe realizarse sobre individuos que se encuentren en igual etapa de estrs salino. Por lo general, es preferible evaluar la tolerancia en individuos durante la fase osmtica. De igual forma, muchos trabajos caen en el error de evaluar el xito de la germinacin, entendida como la aparicin de radcula visible, siendo que la sensibilidad a la salinidad vara con la ontogenia de los cultivos. Por el contrario, otros trabajos tratan de separar ambas etapas y sus efectos estudiando, por ejemplo, la respuesta al crecimiento de plntulas bajo salinidad a partir de semillas pregerminadas en condiciones no salinas. Si bien los resultados son de inters y validez cientfica, la respuesta en una etapa no necesariamente tiene valor predictivo para las otras por lo que no seran de utilidad para un correcto programa de mejoramiento, donde se busca la obtencin de individuos tolerantes en todas las etapas de crecimiento, comenzando por las ms sensibles: germinacin y emergencia (Llanes et al., 2005). Para los sistemas de seleccin podemos encontrar diferentes indicadores o marcadores clasificados segn: Marcadores morfolgicos: Los primeros marcadores utilizados para la seleccin de individuos tolerantes a la salinidad son los de carcter agronmico que estiman directa o indirectamente al rendimiento o rendimiento relativo al potencial. Por lo general son de fcil medicin, y expresan los efectos finales del estrs por salinidad. Dentro de ellos podemos mencionar a la germinacin, supervivencia, altura de planta, tamao de hoja, rea foliar, tasa de crecimiento, biomasa total (materia seca), tamao de la espiga, etc. (De Luca et al., 2001). Marcadores fisiolgicos, hormonales y/o bioqumicos: El uso de marcadores fisiolgicos, hormonales y/o bioqumicos para la seleccin de individuos tolerantes a la salinidad genera un inters creciente. Evaluar el aumento de la temperatura foliar con cmaras de infrarrojo es un buen indicador del cierre estomtico modulado por la liberacin de ABA en la ruta de respuesta al estrs por salinidad. Los individuos ms tolerantes presentarn menor respuesta. Del mismo modo, se podran evaluar los niveles hormonales de, por ejemplo, jasmonatos y OPDA (Abdala et al., 2003). Dentro de los basados en el estrs oxidativo podemos mencionar a la medicin de la acumulacin de malondialdehido (MDA) y peroxido, y a la medicin de la actividad enzimtica de CAT, SOD, GR, GPx, y APx como indicador de la peroxidacin lipdica y el dao de membranas (Miller et al., 2010). Por otro lado, cuantificar el contenido de cationes (Na, K, Ca) y estimar el balance inico intracelular Na/K como indicador de la presencia de sistemas de exclusin y compartimentalizacin de Na eficaces (actividad de transportadores) es altamente reconocido como mtodo de seleccin (De Luca et al., 2001). Por ltimo, la medicin de los niveles de compuestos osmocompatibles implicados en los procesos de regulacin osmtica tales como la prolina y la glicinabetaina, son de gran utilidad y requieren de tcnicas de laboratorio relativamente sencillas (Ashraf y Harris, 2004). Marcadores Moleculares: El uso de marcadores moleculares (RAPDs, SSR, AFLP, etc.) es una herramienta fundamental para las investigaciones cientficas y para incrementar la eficiencia de los mtodos de mejoramiento

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permitiendo desarrollar vas de mejora no convencional. Esta tecnologa interviene en el desarrollo de mapas genticos saturados; el aislamiento, clonacin y secuenciacin de genes; el marcado o etiquetado de genes cualitativos y cuantitativos; la identificacin de rutas bioqumicas completas, la seleccin dirigida por marcadores y la transferencia de genes. Las investigaciones ms recientes certifican que las respuestas del crecimiento de las plantas a la salinidad estn sujetas a herencia polignica de carcter cuantitativa, y que el anlisis de QTLs para caracteres fisiolgicos complejos ofrece una buena perspectiva para la mejora gentica (Gonzlez et al., 2002). Para finalizar, cabe recordar que otros factores controlados y excluidos en los ensayos de seleccin, tales como la fertilidad del suelo, la aireacin, la disponibilidad de agua y las condiciones climticas (luz y temperatura) interaccionan afectando las respuestas (Maas y Hoffman, 1977). Y que, por lo tanto, en condiciones a campo es difcil separar a la salinidad de otros estreses a los que pueden estar sometidos los individuos. Como conclusin podemos decir que, si bien no hay indicadores generales bien definidos disponibles para asistir a los mejoradores en la obtencin de cultivos tolerantes a la salinidad (Ashraf y Harris, 2004), existen mltiples mtodos de seleccin que ofrecen diferente grado de exactitud y precisin. Y que, por lo tanto, en una primera etapa de seleccin sera conveniente utilizar 3 o 4 mtodos combinados, que posean gran simplicidad tcnica como para evaluar la mayor cantidad posible de individuos, y posteriormente, dentro de los individuos de mejor comportamiento agronmico, evaluar otros mtodos ms complejos. Finalmente, como todo programa de mejoramiento, ser necesario desarrollar una red de ensayos comparativos en condiciones naturales. Bibliografa Abdala G, Miersch O, Kramell R, Vigliocco A, Agostini E, Forchetti G y Alemano S (2003) Jasmonate and octadecanoid occurrence in tomato hairy roots. Endogenous level changes in response to NaCl. Plant Growth egulation 40:21-27. Ashraf M y Harris PJC (2004) Review: Potencial biochemical indicators of salinity tolerance in plants. Plant Science 166: 316 De Luca M, Garcia Seffino L, GrunSalgado M, Crdoba A, Luna C, Ortega L, Rodriguez A, Castagnaro A y Taleisnik E (2001) Physiological causes for decreased productivity under high salinity in Boma, a tetraploid Chloris gayana cultivar. Aust. J. Agric. Res. 52:903-910. Gonzalez LM, Gonzalez MC y Ramirez R (2002) Aspectos generales sobre la tolerancia a la salinidad en las plantas cultivadas. Cultivos Tropicales 23(2):27-37 Llanes A, Reinoso H y Luna V (2005) Germination and Early Growth of Prosopis strombulifera Seedlings in Different Saline Solutions. World Journal of Agricultural Sciences 1(2):120-128 Maas EV, Hoffman GJ (1977) Journal of Irrigation and Drainage Division. ASCE 102:115-134 Miller G, Suzuki N, Ciftci-Yilmaz S y Mittler R (2010) Reactive oxygen species homeostasis and signaling during drought and salinity stresses. Pongtongkam P, Nilratnisakorn S, Piyachoknakul S, Thongpan A, Aranananth J, Kowitwanich K y Tadsri S (2005) Inducing Salt Tolerance in Purple Guinea Grass (Panicum maximum TD58) via Gamma Irradiation and Tissue Culture. Kasetsart J. (Nat. Sci.) 39: 681-688. Reinoso H, Sosa L, Ramrez L y Luna V (2004) Salt-induced changes in the vegetative anatomy of Prosopis strombulifera (Leguminosae) Can. J. Bot. 82: 618-628.

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Sosa L, Llanes A, Reinoso H, Reginato M y Luna V. (2005) Osmotic and Specific Ion Effects on Germination of Prosopis strombulifera. Annals of Botany 96: 261-267