Você está na página 1de 22

Agar Gula tiga Besi Gula agar besi triple (TSI) adalah medium diferensial yang mengandung laktosa,

sukrosa, sejumlah kecil glukosa (dekstrosa), sulfat besi, dan pH indikator merah fenol. Hal ini digunakan untuk membedakan enterics berdasarkan kemampuan untuk mengurangi karbohidrat sulfur dan fermentasi. Seperti dengan kaldu fermentasi fenol merah, jika organisme dapat memfermentasi salah satu dari tiga gula hadir dalam medium, medium akan berubah kuning. Jika suatu organisme hanya dapat memfermentasi dekstrosa, jumlah kecil dekstrosa dalam medium yang digunakan oleh organisme dalam sepuluh jam pertama inkubasi. Setelah itu, reaksi yang menghasilkan asam beralih di bidang aerobik miring, dan menengah di daerah tersebut berubah warna menjadi merah, menunjukkan kondisi basa. Daerah anaerobik miring, seperti pantat, tidak akan kembali ke keadaan alkali, dan mereka akan tetap kuning. Hal ini terjadi dengan Salmonella dan Shigella. CATATAN: SIM menengah harus dibaca setelah inkubasi hanya 24 jam karena waktu inkubasi yang lebih lama dapat menyebabkan negatif palsu. Fermentor kuat seperti Escherichia coli dan E ntrobacter cloacae akan memfermentasi semua gula yang tersedia dan kemudian mulai menggunakan asam amino. Ini akan menghasilkan kelompok amina dan menyebabkan medium untuk mengubah alkali. Jika organisme dapat mengurangi belerang, gas hidrogen sulfida yang dihasilkan akan bereaksi dengan besi untuk membentuk besi sulfida, yang muncul sebagai endapan hitam. Jika endapan terbentuk, dapat masker setiap asam / alkali hasil. Pengurangan sulfur memerlukan lingkungan yang asam, sehingga jika endapan hitam hadir, fermentasi beberapa terjadi. Jika gagang miring ini dikaburkan oleh endapan, lihat di bagian atas miring untuk menentukan apakah organisme fermentasi dekstrosa bisa saja (merah), atau jika dapat memfermentasi laktosa baik dan / atau sukrosa (kuning). Jika fermentasi menghasilkan gas, Anda mungkin melihat celah dalam medium, atau seluruh kemiringan dapat dinaikkan di atas bagian bawah tabung tes.

Salmonella typhimurium Enterobacter cloacae pameran Staphylococcus aureus pameran fermentasi glukosa & mengurangi fermenation glukosa dan produksi fermentasi asam. belerang. gas tetapi tidak ada pengurangan belerang. Ini akan dibaca K / A, G. Ini akan membaca A / A. Akan dibaca K / A, H2S.

Micrococcus luteus menggunakan Bacillus megaterium fermentasi Enterobacter aerogenes fermentasi asam amino dan tidak tumbuh di gula, tetapi tidak tumbuh di gula tetapi beralih ke asam amino. gagang miring tersebut. daerah anaerobik butt. Ini akan dibaca K / NC. Ini akan membaca A / NC. Simbol K/A A/A K/K ada K / NC Interpretasi Fermentasi glukosa saja; Peptone catabolized Glukosa dan laktosa dan / atau sukrosa fermentasi Tidak fermentasi; catabolized Peptone Hal ini akan dibaca sebagai K / A.

Hasil (miring / pantat) Merah / kuning Kuning / kuning Merah / merah Merah / tidak perubahan warna

Tidak fermentasi; Peptone digunakan aerobik Glukosa dan laktosa dan / atau fermentasi sukrosa; Gas yang diproduksi Fermentasi glukosa saja; Gas yang diproduksi

Kuning / kuning dengan A / A, G gelembung Merah / kuning dengan K / A, G gelembung

Merah / kuning dengan Fermentasi glukosa saja; Gas yang gelembung dan endapan K / A, G, H2S diproduksi; H2S yang dihasilkan hitam Merah / kuning dengan K / A, H2S endapan hitam Kuning / kuning dengan A / A, H2S endapan hitam Tidak ada perubahan / NC / NC tidak ada perubahan Fermentasi glukosa saja; H2S yang dihasilkan Glukosa dan laktosa dan / atau fermentasi sukrosa; H2S yang dihasilkan Tidak fermentasi

Sebuah produksi asam =; K = reaksi alkali; G = produksi gas; H2S

Sejarah Pada tahun 1911, Russell menggambarkan penggunaan media agar dengan dua gula untuk membantu dalam identifikasi usus basil gram negatif. Karena kemampuan bakteri untuk menghasilkan hidrogen sulfida diakui sebagai karakteristik yang berharga, timah atau besi garam yang ditambahkan ke media Gula ganda Russell oleh peneliti lain. Kliger menambahkan asetat memimpin dan garam besi untuk mendeteksi hidrogen sulfida dan merah produksi fenol digunakan sebagai indikator pH memproduksi Agar Besi Kigler itu.

Pada tahun 1917, Double Gula Krunweide dan Kohn dimodifikasi Russell agar dengan menambahkan sepertiga gula sukrosa. Penambahan sukrosa mengijinkan deteksi dini bakteri coliform yang memfermentasi sukrosa lebih cepat dari laktosa. Menambahkan sukrosa juga dibantu identifikasi tertentu bakteri gram negatif yang dapat memfermentasi sukrosa namun tidak laktosa. Pada tahun 1940, Difco Laboratories, Sulkin dan Willet, dan Hajna menggambarkan gula media serupa besi sulfat tripel untuk identifikasi basil enterik. Perumusan saat ini medium besi gula triple dasarnya sama dengan Sulkin dan Willett kecuali bahwa merah fenol digunakan sebagai indikator pH bukan Brom timol biru, Tryptone telah digantikan oleh kombinasi Bacto Peptone dan Proteose Peptone, dan ekstrak ragi telah telah ditambahkan. Tujuan Tiga gula besi (TSI) agar-agar adalah tabung diferensial media yang digunakan dalam menentukan produksi fermentasi karbohidrat dan H 2 S. Gas dari metabolisme karbohidrat juga dapat dideteksi. Bakteri dapat memetabolisme karbohidrat aerobik (dengan oksigen) atau fementatively (tanpa oksigen). TSI membedakan bakteri berdasarkan fermentasi mereka laktosa, glukosa dan sukrosa dan produksi sulfida hidrogen. TSI ini paling sering digunakan dalam identifikasi Enterobacteriaceae, meskipun berguna untuk lainnya bakteri gram negatif. Teori TSI berisi tiga karbohidrat: glukosa (0,1%), sukrosa (1%), dan laktosa (1%). TSI mirip dengan agar-agar besi Kligler, kecuali agar besi yang Kligler berisi hanya dua karbohidrat: glukosa (0,1%) dan laktosa (1%). Selain karbohidrat disebutkan, media ini juga mengandung ekstrak daging, ekstrak ragi, dan peptones yang merupakan sumber nitrogen, vitamin dan mineral. Fenol merah adalah indikator pH, dan agar-agar digunakan untuk memperkuat medium. Selama persiapan, tabung yang berisi agar-agar cair yang miring. Kemiringan medium aerobik, sedangkan dalam (atau pantat) yang anaerob. Ketika salah satu karbohidrat difermentasi, penurunan pH akan menyebabkan media untuk perubahan dari oranye kemerahan (warna asli) menjadi kuning. Sebuah warna merah tua menunjukkan alkalisasi dari peptones. Natrium tiosulfat dalam medium berkurang oleh beberapa bakteri untuk hidrogen sulfida (H 2 S), gas tidak berwarna. Hidrogen sulfida akan bereaksi dengan ion besi dalam medium untuk menghasilkan sulfida besi, endapan larut hitam. Berdasarkan pemanfaatan karbohidrat dan produksi hidrogen sulfida, kemiringan TSI dapat diartikan dalam beberapa cara: Glukosa fermentor. Reaksi tabung lebih dari asam basa (K / A) menandakan bahwa glukosa hanya dimetabolisme. Bakteri cepat glukosa dimetabolisme, awalnya memproduksi miring asam dan gagang asam (asam lebih asam; A / A) dalam beberapa jam. Jalur Emben-Meyerhof-Parnas digunakan baik aerobik (di

kemiringan) dan anerobically (di pantat) untuk menghasilkan ATP dan piruvat. Pada miring tersebut, piruvat itu selanjutnya dimetabolisme menjadi CO 2, H 2 O, dan energi. Setelah inkubasi lebih lanjut (18 jam) glukosa yang dikonsumsi, dan karena bakteri tidak bisa menggunakan laktosa atau sukrosa, yang peptones (asam amino) yang dimanfaatkan sebagai sumber energi aerobik, pada kemiringan tersebut. Pemanfaatan peptones menyebabkan pelepasan amonia (NH 3) meningkatkan pH mengakibatkan indikator pH, merah fenol, berubah dari kuning ke merah. Dalam pantat anerobic, bakteri menggunakan jalur Embden-Meyerhof-Parnas untuk memetabolisme glukosa memproduksi ATP dan piruvat, yang diubah menjadi asam endproducts stabil, sehingga pantat tetap asam. Hasilnya akan dicatat sebagai basa lebih asam (K / A). Bakteri menghasilkan K / A reaksi dengan atau tanpa gas yang meliputi: Citrobacter freundii *, Citrobacter koseri *, dan Morganella morganii *. * = Variabel reaksi Glukosa, Laktosa dan / atau fermentor Sukrosa. Reaksi tabung adalah asam lebih asam (A / A) menunjukkan bahwa glukosa, laktosa dan / atau sukrosa telah dimetabolisme. Bakteri cepat dimetabolisme glukosa, menghasilkan asam dan miring gagang asam dalam beberapa jam. Jalur Emben-Meyerhof-Parnas digunakan baik aerobik (di kemiringan) dan anerobically (di pantat) untuk menghasilkan ATP dan piruvat. Pada miring tersebut, piruvat ini selanjutnya dimetabolisme menjadi CO 2, H 2 O, dan energi. Setelah inkubasi lebih lanjut (18 jam) glukosa yang dikonsumsi, dan kemudian dimanfaatkan laktosa bakteri dan / atau sukrosa, menjaga kemiringan asam. Hasilnya dicatat sebagai asam lebih asam (A / A). Jika medium diinkubasi lagi, lebih dari 48 jam, laktosa dan sukrosa akan habis, dan kemiringan akan kembali ke pH alkalin karena metabolisme peptones. Dalam pantat anerobic, bakteri mengkonversi asam piruvat menjadi endproducts stabil, sehingga pantat tetap asam. Bakteri biasanya menghasilkan A / A reaksi dengan atau tanpa gas yang meliputi: Enterobacter aerogenes, E. cloacae, Escherichia coli, Klebsiella oxytoca, dan K. pneumoniae. Glukosa, Laktosa dan Sukrosa Nonfermenters. Reaksi tabung lebih baik basa basa (K / K) atau alkali selama tidak ada perubahan (K / NC) menunjukkan bahwa ketiga gula belum dimetabolisme. Perbedaan antara K / K dan K / NC) yang halus. Beberapa bakteri nonenteric, seperti pseudomonad, tidak mampu memfermentasi glukosa, laktosa, atau sukrosa. Bakteri ini memperoleh energi dari peptones aerobik atau anaerobik baik. Pemanfaatan peptones menyebabkan pelepasan amonia (NH 3) menghasilkan indikator pH, merah fenol, berbalik dari merah muda menjadi merah. Fermentor Nonglucose dapat menghasilkan dua reaksi yang mungkin. Jika bakteri dapat memetabolisme peptones aerobik dan anaerobik baik, kemiringan dan pantat akan merah (alkali lebih dari basa; K / K). Jika peptones hanya dapat dimetabolisme aerobik, kemiringan akan merah dan pantat akan menunjukkan tidak ada perubahan (K / NC). Bakteri memproduksi K / K atau K / NC meliputi: Acinetobacter spp. dan Pseudomonas spp. Produksi Gas produksi gas (CO 2 dan O 2). Dideteksi oleh pemecahan agar-agar. Dalam beberapa kasus, gas sehingga banyak dihasilkan yang agar didorong ke bagian atas tabung. Bakteri yang biasa memproduksi A / reaksi dengan gas meliputi: Enterobacter aerogenes, E. cloacae, Escherichia coli, Klebsiella oxytoca,

dan

K.

pneumoniae.

Namun,

beberapa

strain

tidak

menghasilkan

gas.

Glukosa fermentor dan Produksi Hidrogen Sulfida. Reaksi tabung lebih dari asam basa (K / A) dengan endapan hitam. Bakteri cepat glukosa dimetabolisme, awalnya memproduksi miring asam dan gagang asam (asam lebih asam; A / A) dalam beberapa jam. Jalur Emben-Meyerhof-Parnas digunakan baik aerobik (di kemiringan) dan anerobically (di pantat) untuk menghasilkan ATP dan piruvat. Pada miring tersebut, piruvat ini selanjutnya dimetabolisme menjadi CO 2, H 2 O, dan energi. Setelah inkubasi lebih lanjut (18 jam) glukosa yang dikonsumsi, dan karena bakteri tidak bisa menggunakan laktosa atau sukrosa, yang peptones (asam amino) yang dimanfaatkan sebagai sumber energi aerobik, pada kemiringan tersebut. Pemanfaatan peptones menyebabkan pelepasan amonia (NH 3) menghasilkan indikator pH, merah fenol, berubah dari kuning ke merah. Dalam pantat anerobic, bakteri menggunakan jalur Embden-Meyerhof-Parnas untuk dimetabolisme glukosa menghasilkan ATP dan piruvat, yang diubah menjadi asam endproducts stabil, sehingga pantat tetap asam. Endapan hitam menunjukkan bahwa bakteri mampu memproduksi hidrogen sulfida (H 2 S) dari natrium tiosulfat. Karena H 2 S tidak berwarna, amonium sitrat besi digunakan sebagai indikator menghasilkan pembentukan sulfida besi larut. Pembentukan H 2 S membutuhkan lingkungan asam, bahkan meskipun pantat kuning tidak dapat dilihat karena endapan hitam, pantat bersifat asam. Hasilnya akan dicatat sebagai basa lebih asam (K / A), positif H 2 S. Bakteri menghasilkan K / A dengan H 2 S meliputi: Citrobacter freundii *, Edwardsiella tarda, Proteus mirabilis *, dan Salmonella spp *. Bakteri yang biasa memproduksi A / A dengan H 2 S meliputi: Citrobacter freundii *, Proteus mirabilis *, dan P. * vulgaris. * = Variabel reaksi Glukosa, Laktosa dan / atau Sukrosa fermentor dan Produser Hidrogen Sulfida. Reaksi tabung adalah asam lebih asam (A / A) dengan endapan hitam. Bakteri cepat dimetabolisme glukosa, menghasilkan asam dan miring gagang asam (asam lebih asam; A / A) dalam beberapa jam. Jalur Emben-Meyerhof-Parnas digunakan baik aerobik (di kemiringan) dan anerobically (di pantat) untuk menghasilkan ATP dan piruvat. Pada miring tersebut, piruvat ini selanjutnya dimetabolisme menjadi CO 2, H 2 O, dan energi. Setelah inkubasi lebih lanjut (18 jam) glukosa yang dikonsumsi, dan kemudian dimanfaatkan laktosa bakteri dan / atau sukrosa, menjaga kemiringan asam. Hasilnya dicatat sebagai asam lebih asam (A / A). Jika medium diinkubasi lagi, lebih dari 48 jam, laktosa dan sukrosa akan habis, dan kemiringan akan kembali ke pH alkalin karena metabolisme peptones. Dalam pantat anerobic, bakteri mengkonversi asam piruvat menjadi endproducts stabil, sehingga pantat tetap asam. Endapan hitam menunjukkan bahwa bakteri mampu memproduksi hidrogen sulfida (H 2 S) dari natrium tiosulfat. Karena H 2 S tidak berwarna, amonium sitrat besi digunakan sebagai indikator menghasilkan pembentukan sulfida besi larut. Pembentukan H 2 S membutuhkan lingkungan asam, bahkan meskipun pantat kuning tidak dapat dilihat karena endapan hitam, pantat bersifat asam. Hasilnya akan dicatat sebagai asam lebih asam (A / A), positif H 2 S. Bakteri yang biasa

memproduksi A / A dengan H *, dan * =

S meliputi: Citrobacter freundii *, Proteus mirabilis P. vulgaris *. Variabel reaksi

Glukosa Nonfermenter Hidrogen Sulfida Produser. Tabung muncul sebagai alkali selama tidak ada perubahan (K / NC) dengan endapan hitam (H 2 S). Pengurangan tiosulfat dalam KIA dan TSIA membutuhkan H +. Nonfermenters tidak dapat menghasilkan lingkungan asam dari fermenation dari karbohidrat. Sistein dan mungkin lainnya molekul organik sulfat dimetabolisme menjadi asam piruvat, amonia, dan H 2 S. Reaksi positif Nonfermentative H 2 S adalah sangat sugestif dari anggota genus Shewenella. Resep Pankreas mencerna kasein 10,0 g USP (lihat Catatan) Peptikum mencerna jaringan 10,0 g hewan USP (lihat Catatan) Glukosa 1,0 g Laktosa 10,0 g Sukrosa 10,0 g Ferrous sulfat atau fero 0,2 g amonium sulfat NaCl 5,0 g Natrium tiosulfat 0,3 g Fenol merah 0,024 g Agar 13,0 g 1.000 Air suling mL Catatan: Kombinasi bahan-bahan berikut dapat menggantikan dua komponen pertama tercantum: daging sapi ekstrak, 3,0 g; ekstrak ragi, 3,0 g, dan pepton, 20,0 g. Campurkan bahan, dan menyesuaikan pH menjadi 7,3. Rebus agar-agar untuk membubarkan, dan mengeluarkan ke tabung. Sterilkan dengan autoklaf pada 121 C selama 15 menit. Keren dalam posisi miring untuk memberikan popor 2,5-cm dan kemiringan 3,8 cm. TSI agar-agar juga tersedia secara komersial.

PROTOKOL Gunakan jarum inokulasi langsung ke pickup sebuah koloni terisolasi.

Menyuntik kemiringan TSI dengan terlebih dahulu menusuk pantat ke bawah, menarik jarum, dan kemudian beruntun permukaan miring tersebut. Gunakan penutupan longgar pas untuk memungkinkan akses udara.

Baca hasil setelah inkubasi pada 37 C selama 18 sampai 24 jam Tiga jenis data dapat diperoleh dari reaksi. Gula fermentasi Asam pantat, kemiringan alkalin (pantat kuning, miring merah): glukosa sudah difermentasi tapi tidak sukrosa atau laktosa. Asam pantat, asam miring (pantat kuning, miring kuning): laktosa dan / atau sukrosa telah difermentasi. Pantat Alkaline, miring basa (merah pantat, miring merah): baik glukosa, laktosa, sukrosa atau telah difermentasi. Produksi gas

Ditunjukkan oleh gelembung di pantat. Dengan jumlah besar gas, agar-agar mungkin rusak atau didorong ke atas. Produksi hidrogen sulfida

Hidrogen sulfida produksi dari tiosulfat ditunjukkan oleh menghitam pantat sebagai

akibat dari reaksi H sulfida

S dengan ammonium sulfat besi untuk membentuk besi hitam.

Endapan hitam menunjukkan bahwa bakteri mampu memproduksi hidrogen sulfida (H 2 S) dari natrium tiosulfat. Karena H 2 S tidak berwarna, amonium sitrat besi digunakan sebagai indikator menghasilkan pembentukan sulfida besi larut. Pembentukan H 2 S membutuhkan lingkungan asam, bahkan meskipun pantat kuning tidak dapat dilihat karena endapan hitam, pantat bersifat asam. Hasilnya akan dicatat sebagai asam lebih asam (A / A), positif H 2 S. KESELAMATAN ASM pendukung bahwa siswa harus berhasil menunjukkan kemampuan untuk menjelaskan dan praktek teknik laboratorium yang aman. Untuk informasi lebih lanjut, kunjungi Kurikulum ASM Rekomendasi: Kursus Pengenalan dalam Mikrobiologi dan membaca bagian tentang keamanan laboratorium. Tiga artikel tambahan memberikan informasi penting:

Biosafety Level-Apa Kita Perlu Tahu Tentang Mereka di Labs Pengajaran oleh Christina Thompson (2004) Update Penunjukan Tingkat Biosafety oleh Erica Suchman (2004)

Keselamatan Rekomendasi dari Sesi serentak tentang Keselamatan di Laboratorium Mikrobiologi Pengajaran pada Konferensi Pendidikan Sarjana Mikrobiologi 2003 oleh Jackie Laxon (2003) KOMENTAR DAN TIPS

Bagian ini adalah untuk berkembang sebagai umpan balik pada protokol dibahas di ASMCUE. Silakan hubungi manajer proyek untuk informasi lebih lanjut.

BBL TSI Agar miring L007520 Wahyu 07 Februari 2007 PROSEDUR PENGENDALIAN KUALITAS Saya PENDAHULUAN Agar TSI (Gula Agar Besi Triple) adalah medium diferensial untuk organisme gram negatif enterik berdasarkan kemampuan mereka untuk memfermentasi dekstrosa, laktosa dan sukrosa dan menghasilkan sulfida. II UJI KINERJA PROSEDUR

1. Menyuntik sampel yang representatif dengan budaya tercantum di bawah ini. a. Menggunakan 18 - untuk 24-jam budaya Trypticase Kedelai Agar miring, menyuntik tabung dengan jarum inokulasi dengan menusuk pantat dan melesat kembali dan balik sepanjang permukaan miring tersebut. b. Inkubasi tabung dengan topi longgar pada 35 2 C dalam suasana aerobik. 2. Periksa tabung setelah 18-24 jam untuk pertumbuhan dan reaksi. 3. Hasil yang Diharapkan Organisme ATCC Miring Pantat Gas H 2 S * Escherichia coli 25922 Asam Asam + * Salmonella choleraesuis 14028 Bersifat alkali Asam +/+ subsp. choleraesuis serotipe typhimurium * Shigella flexneri 12022 Bersifat alkali Asam * Pseudomonas aeruginosa 27853 Bersifat alkali Bersifat alkali * Direkomendasikan organisme regangan untuk User Control Kualitas. CATATAN: Media ini dibebaskan dari pengujian Pengguna QC menurut CLSI M22-A3. III TAMBAHAN PENGENDALIAN MUTU 1. Periksa tabung seperti yang dijelaskan di bawah "Penurunan Produk." 2. Visual memeriksa tabung representatif untuk memastikan bahwa setiap cacat fisik yang ada tidak akan mengganggu penggunaan. 3. Tentukan pH potentiometrically pada suhu kamar selama kepatuhan terhadap spesifikasi 7,3 0,2.

4. Inkubasi tabung perwakilan uninoculated pada 20-25 C dan 30-35 C dan memeriksa setelah 7 hari untuk kontaminasi mikroba. PRODUK INFORMASI IV PENGGUNAAN YANG DIMAKSUDKAN TSI Agar digunakan untuk diferensiasi basil gram negatif enterik berdasarkan fermentasi karbohidrat dan produksi sulfida hidrogen. V RINGKASAN DAN PENJELASAN TSI Agar digunakan untuk penentuan fermentasi karbohidrat dan produksi hidrogen sulfida dalam identifikasi basil gram negatif. 1,2 Hajna mengembangkan formulasi untuk Agar TSI dengan menambahkan sukrosa ke gula ganda (dekstrosa dan laktosa) perumusan Agar Kligler Besi. 3 Penambahan sukrosa meningkatkan sensitivitas medium dengan memfasilitasi deteksi sukrosabasil fermentasi, serta laktosa dan / atau dekstrosa fermentor. Fermentasi karbohidrat terdeteksi oleh kehadiran gas dan perubahan warna yang terlihat (dari merah ke kuning) dari pH indikator, merah fenol. Produksi hidrogen sulfida ditunjukkan oleh adanya endapan yang menghitamkan yang menengah di gagang tabung. VI PRINSIP PROSEDUR Agar TSI berisi tiga gula (dekstrosa, laktosa dan sukrosa), merah fenol untuk mendeteksi fermentasi karbohidrat, dan besi sulfat untuk deteksi produksi hidrogen sulfida (ditunjukkan oleh menghitam di gagang tabung). Fermentasi karbohidrat ditandai oleh produksi gas dan perubahan warna dari indikator pH dari merah ke kuning. Untuk memfasilitasi deteksi organisme yang hanya memfermentasi dekstrosa, konsentrasi dekstrosa adalah satu-kesepuluh konsentrasi laktosa atau sukrosa. Jumlah yang kecil dari asam yang diproduksi di kemiringan tabung selama fermentasi dekstrosa mengoksidasi dengan cepat, menyebabkan media untuk tetap merah atau kembali ke pH basa. Sebaliknya, reaksi asam (kuning) dipelihara dalam gagang tabung karena berada di bawah tekanan oksigen rendah. Setelah penipisan dekstrosa terbatas, organisme mampu melakukannya akan mulai memanfaatkan laktosa atau sukrosa. 4 Untuk meningkatkan kondisi alkali miring, pertukaran bebas dari udara harus diizinkan dengan menutup tutup tabung longgar. Jika tabung tertutup rapat, reaksi asam (semata-mata disebabkan oleh fermentasi dekstrosa) juga akan melibatkan miring tersebut. VII Reagen Agar TSI Formula Perkiraan * Per Liter Air dimurnikan Intisari dari pankreas Kasein ............................................ 10,0 g Dekstrosa ................................................. ......................... 1,0 g Intisari dari Jaringan peptikum Hewan ........................................ 10,0 g Amonium Ferrous Sulfat ............................................ 0,2 g

Natrium Klorida ................................................ ................ 5,0 g Natrium tiosulfat ................................................ .......... 0,2 g Laktosa ................................................. ............................. 10,0 g Fenol Merah ................................................ ...................... 0,025 g Sukrosa ................................................. ............................. 10,0 g Agar ................................................. ............................... 13,0 g * Disesuaikan dan / atau ditambah seperti yang diperlukan untuk memenuhi kriteria kinerja

TSI miring
Dari Wikipedia, ensiklopedia bebas

Hasil TSI agar miring: (dari kiri) preinoculated (sebagai kontrol), P. aeruginosa , E. coli , Salmonella typhimurium , Shigella flexneri Besi Gula Double atau tes TSI adalah tes mikrobiologi sekitar dinamai karena kemampuannya untuk menguji kemampuan mikroorganisme untuk memfermentasi gula dan menghasilkan sulfida hidrogen . [1] Hal ini sering digunakan dalam identifikasi selektif bakteri enterik termasuk tetapi tidak terbatas pada Salmonella dan Shigella .

Isi
[hide]

1 Komposisi 2 Interpretasi hasil 3 Lihat juga 4 Referensi

[ sunting ] Komposisi

Kemiringan TSI adalah tabung reaksi yang berisi agar-agar , pH-sensitif pewarna ( merah fenol ), 1% laktosa , 1% sukrosa , 0,1% glukosa , [2] serta natrium tiosulfat dan besi sulfat atau fero amonium sulfat . Semua bahan-bahan ini dicampur bersama-sama dan diizinkan untuk memantapkan dalam tabung tes pada sudut miring. Bentuk miring dari media ini memberikan sebuah array dari permukaan yang baik terkena udara mengandung oksigen dalam berbagai derajat (lingkungan aerobik) atau tidak terkena udara (lingkungan anaerobik). Media agar TSI dikembangkan berdasarkan besi agar Kligler itu , yang telah digunakan untuk penentuan bakteri fermentasi laktosa, dengan penambahan sukrosa untuk dapat mendeteksi bakteri fermentasi sukrosa juga.

[ sunting ] Interpretasi hasil


Bakteri yang memfermentasi salah satu dari tiga gula dalam medium akan menghasilkan produk sampingan. [3] Ini biasanya produk sampingan asam, yang akan mengubah warna dari pewarna pHsensitif merah (merah fenol) untuk warna kuning. Posisi perubahan warna yang membedakan produksi asam terkait dengan fermentasi glukosa dari produk sampingan asam laktosa atau fermentasi sukrosa. Banyak bakteri yang dapat memfermentasi gula dalam gagang tabung anaerobik adalah enterobacteria. Beberapa bakteri menggunakan anion tiosulfat sebagai akseptor elektron terminal, mengurangi ke sulfida. Jika ini terjadi, yang baru terbentuk hidrogen sulfida (H 2 S) bereaksi dengan besi sulfat dalam medium untuk membentuk besi sulfida , yang terlihat sebagai endapan hitam. Contoh bakteri penghasil sulfida termasuk Salmonella , Proteus , Citrobacter dan Edwardsiella spesies. Para menghitam medium hampir selalu diamati di pantat (bawah) dari medium. Semua hasil fermentor laktosa dalam kuning miring / pantat kuning (asam / asam reaksi), sedangkan non-laktosa fermentor dapat mengakibatkan merah muda / kuning atau kuning / kuning (jika sukrosa difermentasi). Menghitam gagang karena produksi H 2 S dapat menutupi reaksi asam (kuning) di pantat. Salmonella enterica serovar Typhi dapat mengakibatkan menghitam media pada antarmuka pantat dan miring.

Berbagai reaksi terlihat pada agar-agar TSI

Dalam kondisi anaerobik (seperti terjadi ke bagian bawah tabung) beberapa bakteri menggunakan H + sebagai akseptor elektron dan mengurangi ke gas hidrogen. Hal ini sangat tidak larut dan dapat terakumulasi sebagai gelembung sepanjang jalur inokulasi, antara agar dan kaca, atau dalam cairan yang menumpuk di bagian bawah miring tersebut. produksi Hidrogen dapat mengangkat agar-agar dari gagang tabung atau fraktur agar-agar. Karbon dioksida, jika diproduksi, mungkin tidak menunjukkan sebagai gelembung karena jauh lebih mudah larut dalam medium.
http://en.wikipedia.org/wiki/TSI_slant http://www.austincc.edu/microbugz/triple_sugar_iron_agar.php http://www.microbelibrary.org/component/resource/laboratory-test/2842-triple-sugariron-agar-protocols http://www.bd.com/leaving/?/europe/regulatory/Assets/IFU/US/L007520(07)(0207).pdf

Metode Mohr
Kata Kunci: Metode Mohr, titrasi argentometri Ditulis oleh Adam Wiryawan pada 19-01-2011 Salah satu jenis titrasi pengendapan adalah titrasi Argentometri. Argentometri merupakan titrasi yang melibatkan reaksi antara ion halida (Cl-, Br-, I-) atau anion lainnya (CN-, CNS-) dengan ion Ag+ (Argentum) dari perak nitrat (AgNO3) dan membentuk endapan perak halida (AgX).

Konstanta kesetimbangan reaksi pengendapan untuk reaksi tersebut adalah ; Ksp AgX = [Ag+] [X-]

Gambar 7.1. Kurva titrasi Argentometri METODE MOHR : Prinsip : AgNO3 akan bereaksi dengan NaCl membentuk endapan AgCl yang berwarna putih. Bila semua Cl- sudah habis bereaksi dengan Ag+ dari AgNO3,, maka kelebihan sedikit Ag+ akan bereaksi dengan CrO42- dari indikator K2CrO4 yang ditambahkan, ini berarti titik akhir titrasi telah dicapai, yaitu bila terbentuk warna merah bata dari endapan Ag2CrO4. Reaksinya:

Tingkat keasaman (pH) larutan yang mengandung NaCl berpengaruh pada titrasi. Titrasi dengan metode Mohr dilakukan pada pH 8. Jika pH terlalu asam (pH < 6), sebagian indikator K2CrO4 akan berbentuk HCrO4-, sehingga larutan AgNO3 lebih banyak yang dibutuhkan untuk membentuk endapan Ag2CrO4. Pada pH basa (pH > 8), sebagian Ag+ akan diendapkan menjadi perak karbonat atau perak hidroksida, sehingga larutan AgNO3 sebagai penitrasi lebih banyak yang dibutuhkan.

STANDARDISASI LARUTAN AgNO3 DENGAN LARUTAN STANDARD NaCl (MENGGUNAKAN METODE MOHR).

Cara Kerja :

Siapkan larutan NaCl 0,1000 N sebanyak 1000 mL dengan cara melarutkan 5,80 gram NaCl p.a (telah dikeringkan dalam oven 110oC selama 1 jam) dengan aquades di dalam labu ukur 1000 ml. Siapkan larutan AgNO3 0,1000 N sebanyak 500 mL dengan cara melarutkan 9,00 gram AgNO3 dengan aquades di labu ukur 500 mL. Ambil 25,00 mL NaCl dengan pipet volume, tuangkan ke dalam erlenmeyer 250 ml, tambah 1,0 mL larutan K2CrO4 2% sebagai indikator. Titrasi dengan larutan AgNO3 yang telah disiapkan sampai pertama kali terbentuk warna merah bata. Percobaan diulang 3 kali Hitung normalitas AgNO3 dengan persamaan :

PENENTUAN KADAR NaCl DALAM GARAM DAPUR

Tujuan : Menetapkan kadar NaCl dalam garam dapur dengan cara menstandardisasi larutan garam dapur dengan larutan standar AgNO3 menggunakan metode Mohr (Garam dapur telah dikeringkan didalam oven selama 1 jam dengan suhu 1100C) Cara Kerja :

Larutkan 1,00 gram garam dapur dengan aquades di dalam labu ukur 250 mL. Ambil 25,00 mL larutan garam dapur tersebut, tuangkan ke dalam erlenmeyer 250 mL, tambahkan 1,0 mL larutan K2CrO4 2% sebagai indikator. Titrasi dengan larutan standar AgNO3 sampai terbentuk warna merah bata. Percobaan diulang 3 kali Hitung kadar NaCl dalam garam dapur.

FP = faktor pengenceran, dalam prosedur ini 250/25

PENENTUAN KADAR KLORIDA DALAM AIR LAUT

Tujuan : Menentukan kadar ion klorida dalam air laut dengan cara menstandardisasi larutan air laut dengan larutan standar AgNO3. Cara Kerja :

Larutkan 5,00 mL sampel air laut dengan aquades 25 mL didalam erlenmeyer 250 mL Tambahkan 1,0 mL larutan K2CrO4 2% sebagai indikator Titrasi dengan larutan standar AgNO3 sampai pertama kali terbentuk warna merah bata. Percobaan diulang 3 kali Hitung molaritas (M) ion khlorida dalam air laut.

PERCOBAAN IV

ARGENTOMETRI
I. Tujuan 1. Dapat melakukan standarisasi AgNO3 dengan NaCl 2. Dapat melakukan standarisasi NH4CNS dengan AgNO3 3. Dapat menentukan klorida dalam garam dapur kasar dengan meode argentometri 4. Dapat menentukan bromida dengan cara volhard II. Dasar Teori Salah satu cara untuk menentukan kadar asam-basa dalam suatu larutan adalah dengan volumetri (titrasi). Volumetri (titrasi) merupakan cara penentuan kadar suatu zat dalam larutannya didasarkan pada pengukuran volumenya. Berdasarkan pada jenis reaksinya, volumetri dibedakan atas :

1. Asidimetri dan alkalimetri Volumetri jenis ini berdasar atas reaksi netralisasi asam-basa. 2. Oksidimetri Volumetri jenis ini berdasar atas reaksi oksidasi-reduksi. 3. Argentometri Volumetri jenis ini berdasar atas reaksi kresipilasi (pengendapan dari ion Ag+). Istilah Argentometri diturunkan dari bahasa latin Argentum, yang berarti perak. Jadi, Argentometri merupakan salah satu cara untuk menentukan kadar zat dalam suatu larutan yang dilakukan dengan titrasi berdasar pembentukan endapan dengan ion Ag+. Pada titrasi argentometri, zat pemeriksaan yang telah dibubuhi indikator dicampur dengan larutan standar garam perak nitrat (AgNO3). Dengan mengukur volume larutan standar yang digunakan sehingga seluruh ion Ag+ dapat tepat diendapkan, kadar garam dalam larutan pemeriksaan dapat ditentukan. (Al.Underwood,1992) 3 Ada tiga tipe titik akhir yang digunakan untuk titrasi dengan AgNO3 yaitu : 1. Indikator 2. Amperometri 3. Indikator kimia Titik akhir potensiometri didasarkan pada potensial elektrode perak yang dicelupkan kedalam larutan analit. Titik akhir amperometri melibatkan penentuan arus yang diteruskan antara sepasang mikroelektrode perak dalam larutan analit. Sedangkan titik akhir yang dihasilkan indikator kimia, biasanya terdiri dari perubahan warna/muncul tidaknya kekeruhan dalam larutan yang dititrasi. Syarat indikator untuk titrasi pengendapan analog dengan indikator titrasi netralisasi, yaitu : 1. Perubahan warna harus terjadi terbatas dalam range pada p-function dari reagen /analit. 2. Perubahan Warna harus terjadi dalam bagian dari kurva titrasi untuk analit. (skogg,1965)

Berdasarkan pada indikator yang digunakan, argentometri dapat dibedakan atas : 1. Metode Mohr (pembentukan endapan berwarna) Metode Mohr dapat digunakan untuk menetapkan kadar klorida dan bromida dalam suasana netral dengan larutan standar AgNO3 dan penambahan K2CHO4 sebagai indikator. Titrasi dengan cara ini harus dilakukan dalam suasana netral atau dengan sedikit alkalis, pH 6,5 9,0. Dalam suasana asam, perak kromat larut karena terbentuk dikromat dan dalam suasana basa akan terbentuk endapan perak hidroksida. Reaksi yang terjadi adalah : Asam : 2CrO42- + 2H- CrO7
2- +

H2O

Basa : 2 Ag+ + 2 OH- 2 AgOH 2AgOH Ag2O + H2O Sesama larutan dapat diukur dengan natrium bikorbonat atau kalsium karbonat. Larutan alkalis diasamkan dulu dengan asam asetat atau asam borat sebelum dinetralkan dengan kalsium karbonat. Meskipun menurut hasil kali kelarutan iodida dan tiosianat mungkin untuk ditetapkan kadarnya dengan cara ini. Namun oleh karena perak lodida maupun tiosanat sangat 4 kuat menyerang kromat, maka hasilnya tidak memuaskan. Perak juga tidak dapat ditetapkan dengan titrasi menggunakan NaCl sebagai titran karena endapan perak kromat yang mula-mula terbentuk sukar bereaksi pada titik akhir. Larutan klorida atau bromida dalam suasana netral atau agak katalis dititrasi dengan larutan titer perak nitrat menggunakan indikator kromat. Apabila ion klorida atau bromida telah habis diendapkan oleh ion perak, maka ion kromat akan bereaksi membentuk endapan perak kromat yang berwarna coklat/merah bata sebagai titik akhir titrasi. Sebagai indikator digunakan larutan kromat K2CrO4 0,003M atau 0,005M yang dengan ion perak akan membentuk endapan coklat merah dalam suasana netral atau agak alkalis. Kelebihan indikator yang berwarna kuning akan menganggu warna, ini dapat diatasi dengan melarutkan blanko

indikator suatu titrasi tanpa zat uji dengan penambaan kalsium karbonat sebagai pengganti endapan AgCl. 2. Model Valhard (Penentu zat warna yang mudah larut). Metode ini digunakan dalam penentuan ion Cl+, Br -, dan I- dengan penambahan larutan standar AgNO3. Indikator yang dipakai adalah Fe3+ dengan titran NH4CNS, untuk menentralkan kadar garam perak dengan titrasi kembali setelah ditambah larutan standar berlebih. Kelebihan AgNO3 dititrasi dengan larutan standar KCNS, sedangkan indikator yang digunakan adalah ion Fe3+ dimana kelebihan larutan KCNS akan diikat oleh ion Fe3+ membentuk warna merah darah dari FeSCN. 3. Motode Fajans (Indikator Absorbsi) Titrasi argenometri dengan cara fajans adalah sama seperti pada cara Mohr, hanya terdapat perbedaan pada jenis indikator yang digunakan. Indikator yang digunakan dalam cara ini adalah indikator absorbsi seperti cosine atau fluonescein menurut macam anion yang diendapkan oleh Ag+. Titrannya adalah AgNO3 hingga suspensi violet menjadi merah. pH tergantung pada macam anion dan indikator yang dipakai. Indikator absorbsi adalah zat yang dapat diserap oleh permukaan endapan dan menyebabkan timbulnya warna. Pengendapan ini dapat diatur agar terjadi pada titik ekuivalen antara lain dengan memilih macam indikator yang dipakai dan pH. Sebelum titik ekuivalen tercapai, ion Cl- berada dalam lapisan primer dan setelah tercapai ekuivalen maka kelebihan sedikit AgNO3 5 menyebabkan ion Cl- akan digantikan oleh Ag+ sehingga ion Cl- akan berada pada lapisan sekunder. (Khopkhar, SM.1990) Pembentukan Endapan Berwarna Seperti sistem asam, basa dapat digunakan sebagai suatu indikator untuk titrasi asam-basa. Pembentukan suatu endapan lain dapat digunakan untuk menyatakan lengkapnya suatu titrasi pengendapan. Dalam hal ini terjadi pula pada titrasi Mohr, dari klorida dengan ion perak dalam mana digunakan ion kromat sebagai indikator. Pemunculan yang permanen dan

dini dari endapan perak kromat yang kemerahan itu diambil sebagai titik akhir (TE). Titrasi Mohr terbatas untuk larutan dengan perak dengan pH antara 6,0 10,0. Dalam larutan asam konsentrasi ion kromat akan sangat dikurangi karena HCrO4
- hanya

terionisasi sedikit sekali. Lagi pula dengan

hidrogen kromat berada dalam kesetimbangan dengan dikromat terjadi reaksi : 2H+ + 2CrO4
- 2- +

2HCrO4 Cr2O7 2H2O

Mengecilnya konsentrasi ion kromat akan menyebabkan perlunya menambah ion perak dengan sangat berlebih untuk mengendapkan ion kromat dan karenanya menimbulkan galat yang besar. Pada umumnya garam dikromat cukup dapat larut. Proses argentometri termasuk dalam titrasi yang menghasilkan endapan dan pembentukan ion kompleks. Proses argentometri menggunakan AgNO3 sebagai larutan standar. Proses ini biasanya digunakan untuk menentukan garam-garam dari halogen dan sianida. Karena kedua jenis garam ini dapat membentuk endapan atau senyawa kompleks dengan ion Ag+ sesuai dengan persamaan reaksi sebagai berikut : NaCL + Ag+ AgCl + Na+ KCN + Ag+ AgCl + K+ KCN + AgCN K [Ag(CN)2 ] Karena AgNO3 mempunyai kemurnian yang tinggi maka garam tersebut dapat digunakan sebagai larutan standar primer. Dalam titrasi argentometri terhadap ion CN- tercapai untuk garam kompleks K [Ag(CN)2 ] 6 karena proper tersebut dikemukakan pertama kali oleh Lieberg, cara ini tidak dapat dilakukan dalam suasana amoniatial karena garam kompleks dalam larutan akan larut menjadi ion komplek diamilum. (Harizul, Rivai. 1995)

http://imamsamodra.files.wordpress.com/2008/02/microsoft-word-argentometri.pdf