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Polimorfismo de comprimento de fragmentos amplificados (AFLP

)

ou seja. . • Os marcadores de AFLP são dominantes. não apresentam a distinção entre homozigotos e heterozigotos.• Combina: especificidade da digestão com enzimas de restrição com a velocidade e praticidade de detecção dos polimorfismos via PCR.

.• Como surgem os polimorfismos de fragmentos de AFLP?  mutações de ponto  inversões e deleções  inserções • Como são detectados?  Perda ou ganho de um sítio de restrição  Alteração das sequências reconhecidas pelos primers arbitrários.

corte frequente (4 pares de bases) TTAA AATT .• A base genética da detecção de marcadores moleculares AFLP consiste em 4 etapas: 1) Clivagem com enzimas de restrição EcoRI .corte raro (6 a 8 pares de bases) GAATTC CTTAAG MseI .

enzima de corte frequente.  fragmentos pequenos .Resultado dessas clivagens são gerados 3 classes de fragmentos:  fragmentos grandes . .  fragmentos de tamanhos intermediários combinação das duas enzimas.enzima de corte raro.

3) Seleção de amplificados fragmentos a serem Ocorre em 2 etapas: .2) Ligação de adaptadores específicos Adaptadores com terminais complementares as extremidades resultantes da clivagem pela enzima de restrição.

• Pré seletivo Primers utilizados contém apenas um nucleotídeo arbitrário adicional • Seletivo Primers utilizados possui outros nucleotídeos arbitrários adicionais 2 .

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Bandas em comum entre genótipos representam similaridades genéticas. enquanto que bandas não comuns representam diferenças genética.Como os dados analisados? são visualizados e Os fragmentos são separados em um gel de poliacrilaminada e visualizados após coloração com nitrato de prata e fotografados. .

combinação de primers EcoRI CAG e MseI CAT .

• Vantagens dos marcadores de AFLP  Grande número de fragmentos gerados e resolvidos em um único gel. .  Grande poder de variabilidade genética. detecção de  Maior robustez quando comparado ao RAPD.

grande quantidade de reagentes e equipamentos.  O DNA deve ser altamente puro. .• Limitações do AFLP  Baixo conteúdo de informação genética por loco.  Um grande número de etapas.