CI1CML1kIA DL ILUkC

n|str|a
C esLado acLual da clLomeLrla de fluxo (Cl), resulLou: 1) da evoluo Lecnolglca que se
segulu a prlmelra descrlo felLa por CoulLer em 1936 dum aparelho que conLava e
medla o Lamanho de celulas que passavam em correnLe aLraves dum felxe de luz, 2) da
produo e marcao de anLlcorpos monoclonals com fluorocromos, que comeou na
decada de 70, e 3) dos progressos felLos na compuLadorlzao, os quals permlLem a
anllse e manlpulao de Loda a lnformao elecLrnlca que o meLodo fornece.
r|nc|p|o
A amosLra que val ser observada em Cl e consLlLulda por uma suspenso de celulas ou
de parLlculas, as quals, lncluldas na correnLe em fluxo lamlnar dum llquldo conduLor,
sero foradas a passar uma a uma aLraves da cmara de fluxo. LsLa cmara e
aLravessada por um felxe de ralos laser com comprlmenLo de onda pre-
esLabelecldo. Sempre que o ralo laser choca com uma celula, a radlao val sofrer
desvlos que depols de converLldos pelo clLmeLro em slnals elecLrnlcos, vo ser
reconhecldos pelos sensores.
um dos sensores e deslgnado por lorward Angle LlghL ScaLLer (lS), porque se
enconLra colocado no senLldo da dlreco do felxe lumlnoso. CuLro, slLua-se
senslvelmenLe a 90 dessa dlreco, deslgnando-se por lsso CrLogonal ou Slde ScaLLer
(SS). SlmpllflcadamenLe, poder dlzer-se que o sensor lS d lnformao sobre o
Lamanho da celula, baseado na dlfraco e refraco da luz, enquanLo que o sensor SS,
que mede a luz dlspersada, avalla a granulosldade lnLra-celular, consLlLulda pelo
nucleo, cromossomas, mlLocndlas e ouLros organelos ou parLlculas.
Cs clLmeLros de fluxo possuem alnda um numero varlvel de sensores especlallzados
em medlr fluorescncla, nomeadamenLe a que provem de fluorocromos como o ll1C,
o L e ouLros que vo ser acoplados a anLlcorpos monoclonals. lllLros pLlcos
colocados prevlamenLe a esses sensores, permlLem separar os dlversos componenLes
do especLro de emlsso (llg. 1).






Com as lnformaes provenlenLes dos varlados sensores, a parLe lnformLlca do
clLmeLro, de acordo com as caracLerlsLlcas das prprlas celulas, agrupa-as em
hlsLogramas vlrLuals semelhanLes ao represenLado na llg. 2.




llg.1 - 8epresenLao esquemLlca dum clLmeLro de fluxo





llg.2 - PlsLograma de celulas normals do sangue perlferlco,
obLldo em funo da poslLlvldade Cu
43
llda no scaLLer SS

Clrcunscrevendo-se no hlsLograma uma deLermlnada populao celular (gaLlng)
poder proceder-se a sua lmunofenoLlpagem.
A clLomeLrla de fluxo e um meLodo mulLlparameLrlco uLlllzado na fenoLlpagem de
celulas provenlenLes de varladlsslmos Lecldos, lncluso de Lumores slldos. ConLudo, o
seu grande campo de apllcao em cllnlca e o sangue perlferlco, cu[as celulas
apresenLam na membrana exLerlor anLlgenlos especlflcos hablLualmenLe classlflcados
com um numero correspondenLe ao seu ClusLer of ulfferenLlaLlon (Cu).


Lxemp|os de a|gumas ap||caes da C|tometr|a de I|uxo C||n|ca
Imunodef|c|nc|a adqu|r|da (SIDA)
C vlrus causador da lmunodeflclncla humana (Plv), uma vez enLrado na clrculao
mosLra especlal predlleco para lnfecLar as celulas que exprlmem na sua membrana
uma gllcoproLelna que funclona como anLlgenlo Cu
4
. Lmbora esLe anLlgenlo se
enconLre em celulas de varlados Lecldos hemaLopoleLlcos ou no, exlsLe
fundamenLalmenLe na membrana dos llnfclLos 1. LsLes consLlLuem, por lsso, o
prlnclpal alvo do Plv e o seu local prevlleglado de repllcao (llg. 3).




llg. 3 - Aps fuso com o recepLor Cu
4
da membrana, o Plv enLra no llnfclLo 1 onde, por aco duma
LranscrlpLase reversa, o seu 8nA e converLldo em unA, que val lnLegrar-se no unA nuclear. LsLa celula
flcar lnfecLada duranLe o seu perlodo de vlda e ser a fornecedora da energla gasLa com a reproduo
do Plv. C unA vlral passa de novo a parLlculas de 8nA, que se agrupam para orlglnar novos vlrus. LsLes
vo reenLrar em clrculao apLos a lnfesLar mals llnfclLos 1, e a celula donde salram ou morreu ou
morrer mals Larde ou mals cedo.
Ienot|pagem da popu|ao ||nfoc|tr|a por c|tometr|a de f|uxo
AnLes de proceder a essa fenoLlpagem, e preclso separar a populao llnfoclLrla dos
resLanLes leucclLos do sangue clrculanLe.
Como Lodos os leucclLos apresenLam nas suas membranas o anLlgenlo Cu
43
, comea
por se lncubar o sangue LoLal com um anLlcorpo marcado especlflco para esse
anLlgenlo, que duma manelra geral exlsLe em malor quanLldade nas membranas dos
llnfclLos. Aps passagem do sangue pelo clLmeLro, os varlados Llpos de leucclLos
vo ser agrupados vlrLualmenLe num hlsLograma semelhanLe ao represenLado na llg. 2
(gaLlng elecLrnlco).
Cs llnfclLos asslm agrupados (gaLed) vo ser agora separados nas suas varladas
subpopulaes, aps lncubao com um palnel adequado de anLlcorpos marcados.
Lmbora para o esLadlamenLo da lnfeco por Plv, como veremos, Lenha lnLeresse
quanLlflcar sobreLudo os llnfclLos 1 Cu
4+
e Cu
8+
, e prLlca frequenLe em mulLos
LaboraLrlos uLlllzar Lambem anLlcorpos conLra os anLlgenlos Cu
3
, Cu
3
, Cu
14
, Cu
16
, Cu
19

e Cu
36
.
Com esLa prLlca, alem de se exclulrem monclLos que porvenLura se enconLrem enLre
as celulas esLudadas, podem separar-se e quanLlflcar especlalmenLe os llnfclLos 1, os
llnfclLos 8 e as celulas naLural klller (nk). Se a soma 1+8+nk (no seu con[unLo
deslgnada por lmunossoma) for aproxlmadamenLe lgual a 93, Lemos a garanLla de
que no se perderam duranLe a separao quanLldades slgnlflcaLlvas de celulas
llnfoclLrlas.
Mon|tor|zao Laborator|a| da Infeco por nIV
AnLlgenlo p24 (llg. 4 A) - oucos dlas aps o conLglo, deLecLa-se no sangue clrculanLe,
por exemplo por qulmllumlnlscncla, o anLlgenlo p24 especlflco do Plv. LsLe marcador
vlrulglco, que [ pode ser poslLlvo uma semana anLes da resposLa sorolglca, aLlnge
um plco por volLa dos 20 dlas e cosLuma negaLlvar ao flm de um ms. um subsequenLe
aumenLo dos seus nlvels serlcos e slnal de mau prognsLlco.
8esposLa Sorolglca (llg. 4 A) - ConslsLe na produo pelo organlsmo lnfecLado de
lmunogloblnas M e C especlflcas para o Plv. A lgM desaparece da clrculao a breve
Lrecho, enquanLo que a lgC sobe progresslvamenLe e manLem-se com nlvels serlcos
elevados aLe mulLo Larde na progresso da doena.
CuanLlflcao das populaes llnfoclLrlas (llg. 4 8) - Aps a seroconverso, os
llnfclLos 1 Cu
8+
aumenLam quanLlLaLlvamenLe para, [unLamenLe com os Cu
3+

dlmlnulrem numa fase Lardla da doena.












elo conLrrlo, o numero de llnfclLos 1 Cu
4+
, fundamenLals na reaco lmunolglca
conLra agenLes lnfecclosos, desce progresslvamenLe, por razes aLrs referldas, aps a
enLrada do Plv no organlsmo. Cuando aLlnge as 400-300 celulas por L ou menos, o
doenLe, que se manLeve duranLe meses ou anos asslnLomLlco, Lem malor
probabllldade de adqulrlr uma ou mals doenas oporLunlsLas que deflnem a SluA (llg.
4 C).




llg. 4A




llg. 48




llg. 4C
llg. 4 - ComporLamenLo laboraLorlal da lnfeco pelo Plv

Leucem|as e L|nfomas
A lmunofenoLlpagem por Cl e s uma das Lecnlcas laboraLorlals uLlllzadas para
dlagnsLlco de leucemlas e llnfomas, uma vez que o exame morfolglco, as coloraes
clLoqulmlcas, a clLogeneLlca e a blologla molecular do lgualmenLe lmporLanLes
conLrlbuLos para esse dlagnsLlco.
A Cl permlLe reconhecer anLlgenlos especlflcos que se enconLram a superflcle e no
lnLerlor das celulas normals e neoplslcas em varlados esLdlos da sua evoluo.
Celulas provenlenLes do sangue perlferlco so mals frequenLemenLe uLlllzadas no
esLudo das leucemlas e llnfomas embora ouLros maLerlals blolglcos possam conLrlbulr
para esse esLudo, Lals como asplrados de medula ssea, suspenses de gngllos
llnfLlcos ou de massas exLra-gangllonares, o lavado bronco-alveolar e llquldos
corporals.
nesLe breve noLa s ser exempllflcada a colaborao da Cl no esLudo das leucemlas
agudas, que, de acordo com o crlLerlo lA8 (lrench-Amerlcan-8rlLlsh) so dlvldldas
em llnfldes e no llnfldes, esLas ulLlmas conslderadas frequenLemenLe como
slnnlmo de mlelldes (Cuadro l).
A classlflcao lA8, de grande uLllldade Lambem para o esLabeleclmenLo de proLocolos
LerapuLlcos, e baseada lnlclalmenLe nas caracLerlsLlcas morfolglcas e clLoqulmlcas
das celulas anormals. ConLudo, a fenoLlpagem por Cl dos blasLos e douLras celulas
lmaLuras Lornou-se de uso correnLe, uLlllzando-se para lsso um palnel de anLlcorpos
semelhanLe aos apresenLados no Cuadro ll. A LlLulo de exemplo, se uma celula
exprlme na sua membrana o anLlgenlo Cu
33
ser conslderada como perLencendo a
serle mlellde.









A seleco dos anLlcorpos para fenoLlpagem das leucemlas pode varlar de LaboraLrlo
para LaboraLrlo, mas deve sempre lnclulr anLlcorpos especlflcos para anLlgenlos
mlelldes e llnfldes que caracLerlzem os varlados Llpos de celulas maduras e lmaLuras
em presena.
Cuadro l - Classlflcao lA8 das leucemlas
agudas
Leucemlas agudas llnfldes (ALL)

L
1
, L
2
, L
3

Leucemlas agudas no llnfldes

M
0
leucemla lndlferenclada

M
1

leucemla aguda mlellde sem
maLurao

M
2

leucemla aguda mlellde com
maLurao

M
3
leucemla aguda promleloclLlca

M
4
leucemla aguda mlelomonoclLlca

M
3
leucemla aguda monoclLlca

M
6
leucemla aguda erlLrlde

M
7
leucemla aguda megacarloclLlca





Cuadro ll - AnLlcorpos usados no dlagnsLlco
de leucemla aguda

Cu
1
Cu
13


Cu
2
Cu
19


Cu
3
Cu
20


Cu
4
Cu
22


Cu
3
Cu
33


Cu
7
Cu
34


Cu
8
Cu
41


Cu
10
Cu
43


Cu
13
Cu
61


Cu
14


Lspond||oartropat|as
ueslgna-se generlcamenLe por espondlloarLropaLlas um grupo de doenas reumLlcas
Lals como a espondlllLe ancllosanLe, a arLrlLe reacLlva, algumas formas de reumaLlsmo
psorlslco e, enLre ouLras, as arLrlLes que acompanham as doenas lnflamaLrlas
lnLesLlnals.
1odas apresenLam manlfesLaes cllnlcas, radlolglcas, predlsposlo geneLlca e
resposLa LerapuLlca mulLo semelhanLes.
A presena do anLlgenlo PLA - 8
27
na membrana dos leucclLos e Lambem uma das
caracLerlsLlcas comuns a esLas afeces. Ao permlLlr deLecLar ou no a presena desse
anLlgenlo nos leucclLos do sangue perlferlco, a clLomeLrla de fluxo e uma Lecnlca de
grande uLllldade para o dlagnsLlco das espondlloarLropaLlas.