Você está na página 1de 85

Microbiologia e Biologia dos Fungos (MBF) 2010/2011

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

MICROBIOLOGIA E MICRORGANISMOS
Microbiologia Microbiologia estudo dos microrganismos, ou seja, dos organismos microscpicos. Microrganismo / Micrbio organismos vivos mais pequenos. So um grupo grande e diversificado de seres microscpicos que existem como clulas isoladas ou em grupos de clulas onde tambm esto includos os vrus (microscpicos mas acelulares). Acelulares vrus (bola, gripe, bacterifago T4, vrus do feijo-frade), pries; Procariotas bactrias (Staphylococcus, Frankia, Spirochaeta zuelzerae, Haloquadratum walsbyi) e arqueas / arquebactrias (Methanopyrus kandleri, Methanococcus janaschii, Archaeoglobus); Eucariotas algas (Dinophysis, Euglena, Protoperidinium, Corethron (diatomcia e desmdia), volvox), fungos (Aspergillus Nger, Penicillium, Leveduras) e protistas / protozorios (Giardia lamblia, Paramecium, Naegleria fowleri (amiba), Tetrahymena thermophila). A microbiologia uma cincia biolgica aplicada, pois exerce funes fundamentais na vida humana e em actividades naturais na Terra. Assim, os microrganismos so usados e controlados em benefcio do homem, para a resoluo de problemas prticos em reas de agricultura, medicina, indstria e no ambiente. Microrganismos Os microrganismos so as ferramentas mais acessveis para investigar a natureza dos processos biolgicos devido: sua simplicidade anatmica; ao seu crescimento rpido em condies controladas; capacidade de obteno de uma grande densidade celular homognea; a propriedades bioqumicas que so semelhantes s dos organismos multicelulares; facilidade de uso em estudos genticos (seleco de mutantes e recombinantes genticos raros). Ao longo da histria da Humanidade, os microrganismos influenciaram guerras (soldados transportadores de doenas infecciosas) e cidades (disseminao de agentes infecciosos por falta de condies). Sendo os microrganismos os principais precursores das grandes pandemias mundiais, como a peste bubnica, a varola, a sfilis, a pneumonia, a tifo e a clera. As civilizaes primitivas fomentaram suspeitas da existncia de criaturas no visveis a olho nu (micrbios), no entanto, as primeiras observaes de microrganismos s foram possveis no sculo XVII. No sculo XIX reconhecida a enorme diversidade e importncia destes seres, pois a evoluo da microbiologia esteve sempre dependente do desenvolvimento do microscpio. Antony van Leuwenhoek primeira observao de microrganismos atravs de microscpio solar. Fase descritiva Fase experimental.
Louis Pasteur - Fermentaes responsveis por microrganismos - Fim da teoria da gerao espontnea - Vacina contra o carbnculo - Vacina contra a raiva - Imunologia como cincia - Conceitos: Fermentao e anaerobiose John Tyndall, Ferdinand Cohn - Bactrias e calor - Tindalizao (esterilizao descontnua) Robert Koch (Prmio obel da Medicina) - Bactrias a causa da doena - Obteno de culturas puras - Postulados de Koch

Aristteles - Gerao espontnea

Richard Petri - Placas de Petri

Christian Gram - Tcnicas Gram

Alexander Fleming (Prmio Nobel) - Penicilina

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Postulados de Koch identificao do agente etiolgico da doena em plantas e animais: 1. Um microrganismo especfico deve estar sempre associado a cada caso de doena; 2. O microrganismo suspeito deve ser isolado e capaz de crescer em cultura pura; 3. A inoculao da cultura deve ser capaz de produzir a mesma doena num animal susceptvel; 4. O mesmo organismo dever ser isolado a partir do animal doente. Os postulados nem sempre so cumpridos, principalmente quando os microrganismos no so cultivveis em laboratrio, quando so patognicos para o homem e no para animais de laboratrio ou quando a doena causada por patognicos oportunistas. Origem e Distribuio dos Microrganismos Foi o aparecimento dos primeiros organismos do planeta que, provavelmente, criaram a sua atmosfera. Estes organismos vivem em todo lado onde a vida possvel e possuem uma fascinante diversidade. A biosfera depende das suas actividades, pois so organismos que conseguem influenciar as populaes, incluindo a sociedade humana, de variadssimas formas. Registos fsseis: Cianobactrias; Estromatlitos fossilizados (frica do Sul). Estromatlitos rochas estratificadas, formadas por incorporao de carbonatos de clcio, sulfatos de clcio e outros minerais em massas filamentosas de cianobactrias e outros microrganismos em meio aqutico. Desde a sua origem os microrganismos sofreram anos de evoluo, adaptao e expanso. Actualmente, surgem em todo o lado, nos locais mais inconcebveis: solo, gua, ar e em associao com outros organismos (ubquos). So resistentes a enormes diferenas de temperatura, de pH e salinidade, podendo viver no interior de rochas (Antrctida), em associao com plantas, Homem e outros animais (simbioses). Vias bioqumicas: heterotrficas, autotrficas, quimiotrficas, fototrficas, recirculao de nutrientes, fixao de azoto (desnitrificao), mineralizao, decomposio, doenas, endotoxinas, parasitismo, simbiose, comensalismo, mutualismo, produo e consumo (aerbios e anaerbios) de oxignio. Para alm de estarem em todo o lado, eles manipulam o meio ambiente no qual vivem, de tal forma que levam ao desenvolvimento e formao de muitos ecossistemas, permitindo, assim, a evoluo de organismos mais complexos. So a forma de vida dominante e mais abundante no Planeta Terra.

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

CLASSIFICAO DOS MICRORGANISMOS


Sistemas de Classificao
2 Reinos (Animalia, Plantae) Terceiro Reino (Protista) 5 Reinos (Animalia, Plantae, Protista, Fungi, Monera) 6 Reinos (Eubacteria, Archaebacteria diviso de Monera)

Procariota ausncia de ncleo. Eucariota Presena de ncleo. ANIMALIA ingesto. FUNGI absoro. MONERA procariotas. PROTISTA eucariotas unicelulares. PLANTAE fotossntese. rvore filogentica universal 3 linhagens celulares / domnios evolutivamente distintos, sendo 2 linhagens procariticas e 1 eucaritica: Bacteria, Archaea, Eukarya. Estas relaes evolutivas so determinada com base nos genes do RNA ribossmico. Origem da Clula Eucaritica Considera-se que existiu um ancestral comum, do qual surgiram os restantes seres, sendo o ltimo ancestral comum, das Bactria e Arquea, um ser hipertermfilo e mesfilo. No estudo da origem das clulas eucariticas surgem 2 teorias: endossimbitica e a da invaginao da membrana citoplasmtica. A teoria endossimbitica a hiptese mais aceite, na qual se considera a formao do ncleo como o primeiro evento. O ancestral comum dos eucariontes seria uma clula resultante da fuso de uma bactria e uma arquea, primitivas. Posteriormente fuso de organismos, surgiram as mitocndrias (Proteobacteria com respirao aerbica) e os cloroplastos (Prochloron vive dentro de invertebrados marinhos). Hiptese da fuso dos genomas:
Associao simbitica entre 2 espcies procariticas (bacteria e archaea). Fuso originando uma nica clula Genes archae envolvidos no metabolismo e biossntese de lpidos e genes bacteriais envolvidos na transcrio e traduo, soperdidos Endossimbiose de uma bactria resulta na formao da mitocndria. O sistema endomembranar cria o ncleo e outros organelos (ER e Golgi)

Segunda endossimbiose de uma cianobactria resulta em cloroplastos

Clulas eucariticas vegetais e animais

Clula archeae engloba uma clula bacteriana mais pequena e estabiliza uma relao endossimbitica

Genes do endossimbionte so transferidos para a clula hospedeira

Ter-se-o originado, assim, as mitocndrias ou foram acrescentadas por uma segunda endossimbiose. Sistema endomembranar origina o ncleo e outros organelos (ER e Golgi)

Endossimbiose subsequente de uma cianobactria resulta num cloroplasto

Clulas eucariticas vegetais e animais

Bacteria Tipo de clula Parede celular Lpidos na membrana citoplasmtica RNA polimerase tRNA iniciador Procaritica Com peptidoglicanos Ligaes ster (cabeas polares caudas de cidos gordos) Uma (4 subunidades) Formilmetionina

Archaea Procaritica Com pseudo-peptidoglicanos Ligaes ter Vrias (8-12 subunidades cada) Metionina

Eukarya Eucaritica Quando presente, no tem peptidoglicanos Ligaes ster Trs (12-14 subunidades cada) Metionina

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

ORGANIZAO E ULTRAESTRUTURA DOS MICRORGANISMOS PROCARITICOS


Clula Bacteriana A simplicidade estrutural, a ausncia de compartimentos intracelulares e funes metablico-fisiolgicas associadas membrana citoplasmtica, so caractersticas das clulas bacterianas. So organismos com dimenses muito reduzidas apesar de existirem alguns com dimenses grandes (bactrias gigantes descobertas na ltima dcada). O tamanho considerado como Padro a do Escherichia coli. Na generalidade, a diferena de tamanho entre uma clula procaritica e uma eucaritica significativa. Como a taxa de metabolismo aumenta com a razo superfcie/volume, as bactrias com uma rea superficial proporcionalmente aumentada, conseguem efectuar trocas rpidas de nutrientes e de outros materiais, com o meio envolvente. Estas clulas apresentam, essencialmente, 3 formas bsicas principais: esfrica (cocos), bastonetes (bacilos) e espiral (espirilos e espiroquetas), mas tambm possuem formas como quadrada e triangular (raras). Estas formas bsicas podem sofrer alteraes e originar formas de clulas como: oval, estrelada e periforme. Cocos clulas esfricas. Quando se dividem e permanecem juntos do origem a diplococos (2 cocos), estreptococos (cocos disposto linearmente), ttrada (divide-se segundo 2 planos), arranjo cubide e vbrios (dividem-se segundo 3 planos e possuem uma hlice incompleta); Estafilococos clulas que formam uma roseta; Bacilos clulas com forma de bastonete. Quando se dividem e permanecem juntos do origem a diplobacilos (2 bacilos) e estreptobacilos (bacilos dispostos linearmente); Cocobacilo clulas com uma forma intermdia entre cocos e bacilos; Espirilos clula rgidas com espirais /helicoidais pequenas; Espiroquetas clulas flexveis com espirais / helicoidais. Cadeias pluricelulares longos filamentos de clulas, com forma cilndrica e com funes metablicas especializadas, como os heterocistos. Archaea Estas clulas possuem uma ampla variedade morfolgica (variam por formas esfrias, cilndricas, espiraladas, lobadas, pleomrficas, filamentosas), com forma irregular e podem aparecer em agregados. Mais recentemente descoberta, a forma rara que podem adoptar, quadrada. Parede Celular Parede celular estrutura exterior membrana citoplasmtica, que confere forma clula, bem como proteco fsica e osmtica. A rigidez desta camada deve-se presena de peptidoglicanos, que so os constituintes essenciais da parede celular e os nicos constituintes capazes de se juntarem a uma membrana exterior. Muitos procariotas crescem em ambientes hipotnicos (meios de cultura, organismos infectados, guas de rios, lagos,). Estes seres vo deixar entrar gua, no seu interior, na tentativa de igualar as concentraes, que continuamente resultaria na lise da clula. A parede celular mecanicamente resistente, impedindo a lise celular e, consequentemente, o choque osmtico. Esta estrutura faz parte da morfologia bacteriana e o seu principal suporte mecnico, dando estabilidade e sendo uma barreira contra agentes potencialmente nocivos. O Mycoplasma, fitoplasma e algumas arqueas no possuem parede celular. 4

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Gram Positivo e Gram Negativo A parede celular das bactrias no igual em todas as espcies, pois apresenta diferenas a nvel de constituio e composio qumica. Dentro dessas diferenas existe um diferente comportamento face colorao de Gram. Mtodo de colorao diferencial permite distinguir dois grupos principais de bactrias, por microscopia ptica: Bactrias de Gram-negativo cor vermelha devido colorao por fucsina bsica; Bactrias de Gram-positivo cor roxa devido colorao por violeta de cristal. Gram-positivos possuem parede celular espessa, homognea e, geralmente, no estratificada. Assim, apenas possuem peptidoglicanos, numa camada grossa, formando a parede celular. Gram-negativos possuem parede celular complexa e estratificada que aparece como uma camada rgida e que possui uma membrana exterior. Assim, possuem uma fina camada de peptidoglicanos e uma membrana exterior a formar a parede celular.
Gram-Positivo
Fixao com calor Violeta de Cristal

Fica roxo

Permanece roxo
Etanol

Permanece roxo

Permanece roxo

Soluo de Iodina

Contrastante de Safranin

Gram-negativo

Fica roxo

Permanece roxo

Torna-se transparente

Fica vermelho

Exterior

Cadeia de Peptidoglicanos Na base das diferenas entre gram-positivo e gram-negativo esto os peptidoglicanos / mucopeptdio / murena. Peptidoglicano heteropolmero rgido que impede o choque osmtico, confere forma e d resistncia s clulas. Macromolcula em forma de saco com estrutura tipo rede que apresenta porosidade para a passagem de molculas e est presente na maioria das bactrias. Monmero de peptidoglicano cadeias lineares de 2 amino-acares: molcula de cido N-acetilmurmico (NAM) e a molcula N-acetilglucosamina (NAG) juntam-se segundo ligaes glicosdicas (1 4). Esta ligao uniforme para todas as bactrias e est susceptvel aco hidroltica da lisozima. A cada molcula de cido N-acetilmurmico do monmero ligam-se cadeias peptdicas curtas, geralmente com 4 aminocidos. As cadeias peptdicas estabelecem pontes interpeptdicas, com cadeias vizinhas (cross-linking), conferindo rigidez parede celular. Todas as sequncias tetrapeptdicas incluem: L-alanina, cido D-glutmico, L-lisina (gram + ) / cido diaminopimlico (gram - ) e D-alanina. O cido D-glutmico, cido diaminopimlico e D-alanina no existem nas protenas. A presena de D-aminocidos serve de proteco contra as peptidases. A composio qualitativa das cadeias peptdicas e tipo de ligao que estabelecem entre si variam conforme a espcie bacteriana. Bactrias de Gram-negativo possuem uma ponte interpeptdica, geralmente com ligao directa entre o grupo amino do ADP (3), de uma cadeia peptdica, com o grupo carboxilo da D-alanina (4) terminal, de uma cadeia peptdica adjacente. Bactrias de Gram-positivo possuem uma ponte interpeptdica, geralmente com uma cadeia de aminocidos entre a L-lisina (3), de uma cadeia peptdica, e a D-alanina (4) terminal, de uma cadeia peptdica adjacente.
Camada peptidoglicanos (espessa) Membrana Citoplasmtica

Interior

GRAM + GRAM -

Membrana externa

Camada peptidoglicanos (fina)

Membrana Citoplasmtica

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Gram-Positivo (+) Os peptidoglicanos contituem a maior parte do peso da parede celular. Possui cidos teicicos (s se ligam s protenas), covalentemente ligados ao NAM, e cidos lipoteicicos (ligam-se parte lipdica da membrana citoplasmtica), ligados covalentemente membrana citoplasmtica. cidos teicicos polmeros aninicos (carregados negativamente, logo possuem anies) hidrossolveis. No presentes nas bactrias Gram-negativo. Possuem como radical: D-alanina, glucose, galactose, N-acetilglucosamina, N-acetilgalactosamina (fosfato de glicerol e fosfato de ribitol). Este tipo de cidos contribuem para a carga negativa da parede, sendo poderosos agentes quelantes (removem ies), com capacidade de captar caties divalentes. So os principais antignios superficiais e que podem funcionar como receptores fgicos, participando no fenmeno da competncia (transformao bacteriana) e controlando a ligao de algumas enzimas autolticas, parede celular. Staphylococcus e muitas Gram + possuem uma camada de protenas superfcie, ligadas covalentemente, ou no, ao peptidoglicano e a cidos teicicos. So estas as protenas que se envolvem, nas interaces da parede celular com o meio ambiente e com as protenas enzimticas (autolisinas), que tm um papel importante na morfognese da parede celular. Quando a parede est em crescimento, as autolisinas endgenas dos Gram + hidrolisam ligaes especficas do peptidoglicano, inserindo novas unidades dissacardicas no local e tempo prprio. A sua actividade regulado por inibidores das autolisinas, pois a clula bacteriana incapaz de as controlar (levando degradao do peptidoglicano que est a proteger osmoticamente a clula, dando-se a sua lise celular, autlise). Principais autolisinas amidases (hidrolisam ligaes entre cadeias glicosdicas e peptdicas), muramidases (ligaes NAM e NAG), glucosaminidases (ligaes NAM e NAG) e peptidases (ligaes peptdicas, cadeias e pontes). A parede celular dos Gram + no contm lpidos com excepo de Mycobacterium, Nocardia e algumas estirpes de Corynebacterium, que apresentam lpidos complexos, de elevado peso molecular, organizados numa estrutura compacta. Micobactrias presena de cidos miclicos na parede celular, fazendo com que esta no seja corada pela tcnica de Gram, mas antes pela tcnica de Ziehl-Neelsen. A sua parede celular do tipo Gram + mas mais complexa, sendo constituda por 3 macromolculas insolveis (peptidoglicano, arabinogalactano, cidos miclicos). Tcnica de Ziehl-neelsen colorao pela fucsina Ziehl (fucsina bsica + fenal e calor), sendo resistente descolorao pelo soluto de Ebner (lcool cido clordrio) originando bactrias resistentes ao lcool-cido. Gram-Negativo (-) Parede celular das bactrias gram-negativo estrutura diferenciada e complexa, estratificada e no homognea (Escherichia coli, Salmonella, Pseudomonas). Camada: mais interna camada pouco espessa (1 ou 2 camadas) constituda por peptidoglicanos; mais externa membrana exterior com espao periplasmtico (periplasma). Gram-Negativo (-) Membrana Exterior A membrana externa da parede celular das bactrias Gram-negativo espessa, com um perfil acentuadamente assimtrico, cujo folheto externo mais denso e espesso. , essencialmente, constituda por lipopolissacardios (LPS), fosfolpidos e protenas. Esta membrana contribui para a estabilidade mecnica do invlucro e impede a perda de constituintes, como enzimas periplsticas. Para alm disso, constitui uma barreira adicional permeabilidade (detergentes, antibiticos hidrofbicos, corantes hidrofbicos e sais biliares), constituindo uma barreira mais permevel que a membrana citoplasmtica. 6

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

O folheto externo possui exclusivamente lipopolissacardos, enquanto no interno predominam fosfolpidos e protenas. esta caracterstica que confere uma assimetria qumica e morfolgica absoluta. Lipopolissacardios (LPS) molculas invulgares e mais caractersticas dos Gramnegativo. So os principais antignios somticos, endotoxinas e receptores para fagos. Apresentam 3 regies: Regio I: Antignio O galactose, abequose, ramnose, manose; Parte polissacardica Regiao II: Parte central (core) polissacardio composto por acares nicos (projecta-se para o exterior) como o cido 2-ceto-3-desoxioctanico (KDO); Parte lipdica (inserida no folheto Regiao III: Lpido A dissacardio de glucosamina bifosforilado e esterificado externo da membrana exterior) com cidos gordos. Os caties divalentes efectuam interaces no covalentes entre lipopolissacardios adjacentes, de forma a estabilizarem os seus grupos aninicos. Antignio O varia em composio entre estirpes bacterianas diferentes. Faz com que o reconhecimento seja fcil, por parte dos anticorpos do hospedeiro, mas mudam facilmente a natureza das cadeias laterais, para evitar a sua deteco. O LPS importante pois evita a defesa do hospedeiro e contribui para a carga negativa da superfcie. Para alm disso, estabiliza a estrutura da membrana externa (lpido A no folheto externo) e provoca toxicidade (lpido A) por infeces. Os fosfolpidos da membrana externa das bactrias gram-negativo so semelhantes aos da membrana citoplasmtica, no entanto a relao fosfolpido / protena inferior. A membrana exterior, das gram-negativo, possui um elevado teor em protenas, cujas principais classes so: porinas, protena OmpA e lipoprotenas. Porinas possuem receptores fgicos. Permite a difuso passiva de pequenas molculas hidroflicas, atravs de poros na membrana exterior, no entanto as molculas maiores so transportadas por transportadores especficos. Protenas OmpA esto em grande quantidade na membrana e possuem um papel importante no processo de conjugao bacteriana. Protenas de elevado peso molecular transportadores de molculas especficos. Lipoprotenas mais abundantes na membrana externa. A principal funo manter a integridade e estabilidade da parede celular, unindo a membrana externa e o peptidoglicano. Lipoprotenas de Braun (descrita em E. coli) lipoprotena pequena, mais abundante em bactrias, que est embebida na membrana externa (folheto interno), pela extremidade hidrofbica, e ligada covalentemente ao peptidoglicano. Espao periplasmtico / Periplasma possui muitas protenas / enzimas que intervm na aquisio de nutrientes, sntese de peptidoglicanos e modificao de compostos txicos. Evidncias recentes indicam que pode conter uma rede frouxa de peptidoglicano (possivelmente um gel). Gram-Positivo e Gram-Negativo Parede celular Gram (+) possui peptidoglicanos, cidos teicicos, cidos lipoteicicos e protenas (autolisinas). Parede celular Gram (-) possui peptidoglicanos e periplasma. A membrana exterior possui ainda lipopolissacardios (antigneo O, core e lpido A), fosfolpidos, protenas (porinas, lipoprotenas (Braun), protena OmpA).
Caracterstica Nmero de camadas principais Membrana externa Composio qumica Espessura Gram + 1 No Peptidoglicano cido teicico cido lipoteicico Espessa Gram 2 Sim Lipopolissacardio Lipoprotena Peptidoglicanos Menos espessa Caracterstica Espao periplasmtico Porinas Permeabilidade a molculas Gram + Pequeno No Mais permevel Gram Grande Sim Menos permevel

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Remoo da Parede Celular em Bactrias Gram + e Gram Em bactrias Gram + tratadas com lisozima, h a remoo completa da parede celular. As bactrias apresentam-se, ento, com uma forma esfrica, formando protoplastos. Em bactrias Gram tratadas com EDTA-lisozima-Tris, h a remoo dos peptidoglicanos da membrana exterior, formando esferoplastos. Quando as bactrias so, ento, expostas a um meio hipotnico (que so quase todos nas quais ela habita) d-se a lise celular / heterlise. Parede Celular de Planctomycetes As Planctomycetes so os nicos microrganismos conhecidos sem peptidoglicanos na parede celular. Estas bactrias apresentam resistncia lisozima e aos antibiticos lactmicos, como a penicilina. A sua parede celular de natureza protica, por isso aproximam-se das Arqueas. Possuem reminiscncias (precursores) de grupos de genes necessrios para a sntese de peptidoglicanos, do lpido A, de flagelos e dos anis L e P, dos corpos basais flagelares. Estas caractersticas so semelhantes com o tipo de parede celular das bactrias Gram -. Pirellula e Planctomyces possuem cidos gordos de cadeia longa, sugerindo a presena de LPS. Em Rhodopirellula baltica foram observados os genes para a sntese do lpido A, mas os genes das enzimas que sintetizam o antignio O no esto presentes. Parede Celular das Arqueas As arqueas coram de prpura as Gram + e de vermelho as Gram -. Possuem uma estrutura e composio qumica distinta das bactrias. Arqueas Gram-positivo camada espessa e homognea. Arqueas Gram-negativo camada superficial espessa ou mesmo duas camadas. Estes microorganismos no possuem cido-acetilmurmico nem D-aminocidos. Como as Planctomycetes, a sua parede no possui peptidoglicanos, pelo que apresentam resistncia lisozima e aos antibiticos -lactmicos, como a penicilina. Arqueas de Gram-positivo possuem uma variedade de polmeros complexos: Methanobacterium e outras metangenas pseudopeptidoglicanos ou pseudomurena. So formadas por N-acetilglucosamina (ou Nacetilgalactosamina) e N-acetiltalosaminurnico (NAT) segundo ligaes glicosdicas (13). Cadeias peptdicas esto ligadas a NAT e a L-aminocidos Methanosarcina e Halococcus apenas possuem polissacardios complexos, semelhantes ao sulfato de condroitina existente no tecido conjuntivo animal. Outras espcies de Arqueas possuem ainda outros heteropolissacardios. Arqueas de Gram-negativo possuem uma camada de protenas ou glicoprotenas, a rodear o protoplasto. Podem ser de natureza: Protica: metangenos (Methanococcus, Methanogenium e Methanomicrobium) e termfilos extremos (Desulfurococcus); Glicoprotica: metangenos (Methanolobus), termfilos extremos (Pyrodictium, Sulfolobus) e halfila extrema (Halobacterium). Existem, tambm, arqueas sem parede celular, que pertencem classe Thermoplasmata (Thermoplasma, Picrophilus e Ferroplasma). Estruturas Externas da Clula Bacteriana Glicoclice cobertura de macromolculas que protege a clula e ajuda na ligao destas ao meio ambiente. Network de polissacardios, que se estende da superfcie de uma bactria de outras clulas (pode conter a cpsula e a camada limosa). Esta estrutura importante na ligao das bactrias a superfcies ou objectos slidos, em ambientes aquticos, e a superfcies de tecidos, em plantas e animais hospedeiros. 8

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Cpsula Cpsula estrutura bem organizada e rgida, firmemente ligada parede celular. Microscpio ptico colorao negativa (nigrosina / tinta da china) ou especficas. Klebsiella pneumonia invasor secundrio que CPSULA causa pneumonia nosocomial, meningite, CAMADA S PEPTIDOGLICANOS bacteriemia e infeces em feridas; MEMBRANA CITOPLASMTICA Streptococcus pneumoniae pneumonia; Haemophillus influenza meningite; Bacillus anthracis. A cpsula possui uma espessura varivel, que est dependente do meio e das condies de cultura. Tem uma composio varivel e consistncia tipo goma, que confere carcter mucoso s colnias, em meio slido. Os principais constituintes desta estrutura so polissacardios (homopolissacardica (glucose) e heteropolissacardica), complexos glicoproticos e polipeptdicos (cido D-glutmico). Vantagens da cpsula: Factor determinante de patogenicidade resistncia fagocitose (clulas so facilmente fagocitadas quando no tm cpsula); Proteco contra dessecao possuem muita gua; Excluso de vrus possuem receptores para os vrus; Excluso de substncias hidrofbicas txicas detergentes. Camadas Limosas Camada limosa camada lubrificante que permite, ao microrganismo, deslizar ao longo do substrato (necessria para a mobilidade deslizante). uma zona de material menos organizado e de fcil remoo, que protege, a clula, contra dessecao e perda de nutrientes. Possui uma natureza polissacardica (pode formar um biofilme, que est envolvido na origem das cries dentrias). A natureza do deslizamento pode ser variada: paralelo ao eixo longitudinal (Myxococcus e Flexibacter), em espiral (Saprospira), perpendicular ao eixo principal (Simonsiella) e rotacional ao longo do eixo principal (Beggiatoa). Neste tipo de mobilidade, o ser pode dobrar-se e trocer-se enquanto desliza, logo a camada limosa necessria pois liga a bactria ao substrato e lubrifica as superfcies, para que o movimento seja mais eficiente. Camada S e Plos Camada S camada bem organizada de natureza proteica ou glicoproteica que confere rigidez ao invlucro e adeso a superfcies, mas tambm responsvel pela manuteno da forma das bactrias. Aparece em muitas bactrias Gram + e Gram e nas arqueas (onde podem ser a nica camada externa). Constitui uma proteco contra o stress osmtico, flutuaes inicas e de pH, enzimas e fagocitose. Fmbrias / Plos apndices superficiais e rgidos, curtos e finos (mais finos que os flagelos). So numerosos por clula e tm tendncia a colarem-se uns aos outros e s superfcies. Possuem natureza proteica (pilina) e vrias funes diferentes, consoante o tipo de fmbrias: Adeso (adesinas) a superfcies slidas (formao de biofilmes), a tecidos do hospedeiro (factor determinante de patogenicidade); Receptores especficos de certos fagos. Existe, ainda, uma fmbria especial, a Pili (plo sexual), que uma fmbria mais longa, tubular e rgida, formada por protenas, hidratos de carbono e fosfato. O plo sexual necessrio no processo de conjugao, pois liga a clula F+ (clula dadora contendo o plasmdeo F) clula F-. 9

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Membrana Citoplasmtica Possui um papel fundamental na aquisio de nutrientes, eliminao de substncias txicas, manuteno das condies internas normais estveis e do estado altamente organizado, em face de alteraes ambientais externas, e responsvel por muitas das relaes com o mundo exterior. Membrana citoplasmtica constituda por protenas e lpidos em proporo varivel. Possui protenas integrais, que esto englobadas na bicamada fosfolipdica, e protenas perifricas, que se encontram apenas numa dessas camadas. Os lpidos que a constituem so, maioritariamente, fosfolpidos que possuem uma extremidade polar (hidroflica que interage com a gua) e uma extremidade apolar (hidrofbica que insolvel em gua), sendo, assim, uma molcula anfiptica. Os fosfolpidos mais abundantes so o fosfatidilglicerol e a fosfatidiletanolamina. Como as bactrias no possuem esteris (colesterol tpico dos eucariotas), na membrana citoplasmtica (excepto Mycoplasma), podem possuir molculas tipo esteris pentacclicos (hopanides) que substituem o colesterol e, provavelmente, estabilizam a membrana citoplasmtica. As protenas insolveis, em solues aquosas, esto fortemente ligadas membrana, logo dificilmente conseguem ser removidas (integrais). No entanto, as protenas solveis, em solues aquosas, esto frouxamente ligadas membrana, sendo facilmente perdidas (perifricas). As protenas perifricas conseguem realizar fenmenos de flip-flop, no entanto, as protenas integrais so anfipticas e no fazem flip-flop ou rotao na camada lipdica. Frequentemente, hidratos de carbono podem ligar-se superfcie das protenas, da membrana citoplasmtica, e parecem desempenhar funes importantes. Apesar do padro bsico, as estruturas e a qumica desta membrana so muito variveis e possuem caractersticas que podem ser usadas na identificao bacteriana. Assim, esta membrana constitui uma barreira selectiva devido permeabilidade, sendo essencial na conteno do citoplasma, transporte de substncias, deteco e resposta a substncias externas, devido a molculas receptoras especiais, e, tambm, possui funes metablicas cruciais. Membrana Celular das Arqueas A natureza das membranas citoplasmticas a caracterstica mais distinta das Arqueas, por ser bastante invulgar. Enquanto nas bactrias e eucaria, a membrana citoplasmtica possui cidos gordos com ligaes ster, nas Arqueas essa membrana constituda por hidrocarbonetos de cadeia ramificada, com ligaes ter (hidrocarboneto derivado do isopreno). As cadeias de cidos gordos, dos fosfolpidos bacterianos e eucariotas, so substitudos, nas Arquea, por 2 cadeias de fitanol, numa bicamada, ou formados por 2 cadeias muito longas de bi-fitanol, ligadas a 2 gliceris por ligaes ter, constituindo tetra-teres de diglicerol (numa monocamada). O comprimento das cadeias tetra-ter pode ser ajustado pela formao de anis pentacclicos e as cadeias bifitanlicas podem conter 1 a 4 anis. Assim, a membrana citoplasmtica das Arquea podem possuir membranas de 2 folhetos (bicamada) de di-ter C20, ou membranas com um folheto apenas, constituindo tetrater C40 (mais rgida). Tambm podem existir lpidos polares, a constituir as camadas, como fosfolpidos, sulfolpidos e glicolpidos. Thermoplasma e Sulfolobus (termfilos extremos) possuem monocamadas de apenas tetra-ters (praticamente).

10

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Matriz Citoplasmtica Matriz citoplasmtica substncia entre a membrana citoplasmtica e o nucleide que constitui a maior parte do protoplasto. Possui, essencialmente, gua e est, normalmente, cheia de ribossomas (em grande quantidade por clula), e altamente organizada. Na generalidade, no existem organelos rodeados por membranas (apenas os ribossomas). Possui protenas especficas, posicionadas em locais particulares, como nos plos e onde a clula se divide, formando um sistema de protenas tipo cito-esqueleto. Ribossomas Ribossomas estruturas abundantes na matriz citoplasmtica dos procariotas, que podem estar frouxamente ligados membrana citoplasmtica. So constitudos por RNA (3 membranas diferentes de RNA ribossmico) e protenas (55 molculas diferentes de protinas) Ribossomas na matriz sintetizam as protenas que ficam no interior da clula; Ribossomas na membrana citoplasmtica sintetizam protenas que so transportadas para o exterior. So o local da sntese proteica (traduo). Os ribossomas procariotas so mais pequenos que os eucariotas, sendo, assim, ribossomas 70S (unidade Svedberg coeficiente de sedimentao). Ribonucleoprotenas (RNP): Subunidade 30S RNA ribossmico 16S; Subunidade 50S RNA ribossmico 5S e 23S. O ribossoma procaritico est bem estudado pelo que, o nmero de protenas que possui bem conhecido. Ribossomas das Arquea Os ribossomas destes microrganismos diferem na sua composio e forma. Estes, tambm, podem ser diferir bastante dos ribossomas das bactrias e dos eucariotas, no entanto, so ribossomas 70S como os das bactrias. A sensibilidade anisomicina, insensibilidade ao cloranfenicol e canamicina e a presena de um factor de alongamento que reage com a toxina da difteria, constituem as principais semelhanas com os eucariotas. Nucleide Em bactrias e Arqueas, o nucleide o organelo que contm a maior parte da informao gentica, sendo, quimicamente, composto por DNA, RNA e protenas. O cromossoma aparece como uma regio com forma irregular, geralmente como uma nica macromolcula circular de DNA. A Escherichia coli possui umaa molcula de DNA, eficientemente, compactada. Espcies como Streptomyces e Borrelia possuem uma nica molcula linear de DNA. Rhodobacter sphaeroides e Vibrio cholerae possuem 2 cromossomas. ICM (intracytoplasmic membrane) presente nas Planctomycetes. Constitui uma membrana simples com 2 folhetos,presentes no citoplasma da clula e que separa uma regio perifrica, o parifoplasma, das regies internas, que contm partculas tipo ribossomas. Pirellulossoma regio do citoplasma rodeado pelo IMC, que contm partculas tipo ribossomas, o nucleide fibrilar e todo o DNA da clula. Corpo nuclear organelo que contm todo o DNA celular, sempre condensado. rodeado por um invlucro com duas membranas finamente justapostas (Gemmata obscuriglobus possui ncleo com 2 membranas). O DNA apresenta-se num estado altamente condensado. A natureza das foras intervenientes neste fenmeno no esto completamente compreendidas, mas, provavelmente, ser devido ajuda do RNA e protenas do nucleide. 11

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

As cargas negativas so neutralizadas por caties divalentes de modo a evitar a repulso electrosttica das cadeias de DNA. As protenas esto envolvidas na replicao do DNA, transcrio e regulao gentica. Em estudos recentes, foi observado que algumas bactrias e arqueas possuem protenas com caractersticas bioqumicas semelhantes s histonas eucariticas (protenas tipo histonas). Em algumas bactrias e arqueas existe uma, ou mais, molculas circulares e pequenas de DNA (plamdeos). Este DNA plasmdico representa uma pequena percentagem do DNA total Os plasmdeos possuem a capacidade de replicao autnoma e poucos genes, entre os quais existem alguns que no so essenciais para o crescimento e diviso. Conferem uma vantagem selectiva na resistncia a antibiticos e metais pesados, na capacidade de formar novas vias metablicas, na produo de toxinas (tornam a bactria txica) e na origem de factores de virulncia. So, ento, capazes de existir num estado autnomo ou integrados no cromossoma (epissoma). Incluses Citoplasmticas Incluses citoplasmticas material orgnico ou inorgnico, muitas vezes visveis por microscopia ptica. Possui funes de armazenamento (carbono, substncias inorgnicas, energia, outros macronutrientes) e de reduo da presso osmtica. Estas incluses podem existir livres, no citoplasma, ou rodeados por uma membrana, que pode ser proteica ou lipdica. Aparecem em quantidade varivel, que depende do estado nutricional da clula. Incluses orgnicas incluses de glicognio. Unidades de glucose em cadeias longas, unidas por ligaes glicosdicas (1 4) e, entre cadeias, por ligaes glicosdicas (1 6). Normalmente, apenas surge um tipo de reserva por organismo, no entanto as bactrias prpura fotossintticas possuem os 2 tipos. A espcie Wautersia eutropha limitada na fonte de azoto, podendo as PHB (poli-hidroxibutirato) atingir uma grande percentagem do peso seco da clula. Nas cianobactrias, as incluses orgnicas so de 2 tipos: Grnulos de cianoficina polipeptdios de arginina, cido asprtico que funcionam como reserva de azoto; Carboxissomas incluses polidricas, rodeadas por uma camada proteica, que possuem ribulose difosfato carboxlase (rubisco). Local de fixao do dixido de carbono e de reservas de enzimas. Aparecem nas bactrias fotossintticas (cianobactrias e bactrias prpura) e bactrias nitrificantes. Certas espcies como B. medusa e B. thuringiensis produzem cristais com forma bipiramidal, adjacentes ao endsporo e de natureza glicoproteica. A espcie B. thuringiensis pode, tambm, produzir cristais parasporais, que so bioinsecticidas utilizados na agricultura, por serem txicos para as larvas dos insectos. Incluses inorgnicas: Grnulos de Polifosfato gros volutina e granulaes metacromticas. So reservatrios de fosfato / fsforo que intervm na sntese de fosfolpidos e cidos nuclicos e, tambm, produzem fontes de energia (Spirillum volutans, Corynebacterium diphtheriae); Grnulos de enxofre presentes nas bactrias prpura sulfurosas, que usam o cido sulfrico como dador de electres para a fotossntese, acumulando o enxofre libertado. Thiomargarita namibiensis vive em sedimentos ricos em sulfureto de hidrognio, na ausncia de oxignio. Possui numerosos grnulos de enxofre, na estreita faixa de citoplasma. Tem um enorme vacolo que ocupa, praticamente, a totalidade da clula e que est repleto de nitrato, acumulado durante o perodo breve das tempestades. O nitrato o aceitador de electres, na oxidao do sulfureto de hidrognio, com a produo de energia. 12

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Magnetossomas Magnetossomas cadeias intracelulares de partculas de magnetite, greigite e pirite, cuja funo a orientao da bactria, no campo magntico da Terra, devido ao facto de cada partcula de ferro ser um pequeno magnete. Tambm existem magnetossomas na cabea de pssaros, atum, golfinho, tartarugas verdes e outros animais. Estruturas Membranares Intracitoplasmticas Algumas bactrias apresentam estruturas membranares internas extremamente simples, sob a forma de invaginaes da membrana citoplasmtica. Estas estruturas aparecem em bactrias nitrificantes, fixadoras de azoto e fotossintticas, ou seja, bactrias que possuem uma elevada actividade metablica. Nas bactrias fotossintticas existe um tipo de estruturas membranares intraplasmticas especiais, os tilacides, que formam um sistema membranoso com os pigmentos fotossintticos e os componentes da cadeia transportadora de electres. Diferem das outras por serem as nicas a realizarem fotossntese oxignica. As bactrias prpura possuem vesculas / cromatforos, que so complexos membranares esfricos ou lamelares, contnuos com a membrana citoplasmtica. As bactrias verdes possuem clorossomas / vescula Chlorobium, que esto ligadas membrana citoplasmtica, mas no na sua continuidade. Contm as bacterioclorofilas acessrias (c,d,e), cujo centro de reaco est ligado membrana citoplasmtica. Vacolos Gasosos Vacolos gasosos vesculas gasosas formadas por um grande nmero de estruturas cilndricas, pequenas e ocas. Aparecem em bactrias de habitats aquticos, como Halobacterium (arquea), Thiothrix (bactria filamentosa), e bactrias fotossintticas (verdes, prpura e cianobactrias). A parede das vesculas composta apenas por um tipo de protena, cujas subunidades se unem, formando um cilindro rgido e oco. Esta estrutura impermevel gua, mas permevel aos gases atmosfricos, dando flutuabilidade s clulas e o posicionamente das bactrias, em habitat aqutico. Mesossomas Mesossomas invaginaes da membrana citoplasmtica. Aparecem em bactrias Gram + e algumas espcies Gram (Chromobacterium violaceum, Bacillus subtilis). Possuem uma organizao variada: vesicular, tubular ou lamelar. A sua funo poder estar na formao da parede celular ou na replicao do cromossoma. Actualmente, admite-se que so artefactos da fixao, na preparao do material. Endsporos Certas bactrias so capazes de produzir, no seu interior, estruturas resistentes e dormentes. Estas estruturas podem resistir a condies de stress externo como: calor, dessecao, congelamento, radiaes UV, radiaes gama, solventes orgnicos, antibiticos e desinfectantes qumicos. Bactrias Gram + (firmicutes; baixo contedo em guaninas + citocinas): bastonetes (Bacillus, Clostridium, Sporolactobacillus), cocos (Sporosarcina) e Thermoactinomyces; Bactrias que se comportam como Gram - : Desulfotomaculum (mas possui parede de Gram +), alguns Heliobacterium (parede de Gram +). Em condies ambientais adversas, estas estruturas podem sobreviver viveis e num estado de dormncia, por vrios milhes de anos. 13

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Devido resistncia e patogenicidade de muitas espcies, os endsporos so de grande importncia prtica, em microbiologia: mdica (Bacillus anthracis, Clostridium tetani, Clostridium perfringens, Clostridium botulinum), alimentar (Clostridium botulinum, Bacillus cereus) e industrial (Clostridium botulinum). Epulopiscium sobrevivem a vrias horas de fervura em autoclave. So visveis em microscopia ptica mesmo sem colorao (estruturas resfringentes), mas, tambm, com colorao simples ou especial. Thermoactinomyces forma esporos no miclio areo e no substrato. Actinomycetes formam condios. A localizao do endsporo (central, terminal, subterminal) pode ser um prametro usado na identificao. So estruturas complexas, que possuem um invlucro com vrias camadas. Exosprio invlucro fino e delicado. Constitudo por protenas, fosfolpidos e polissacardos. Tnicas vrias camadas de protenas. Possuem um elevado teor de aminocidos com grupos sulfidrilo (cistina). So estas estruturas as responsveis pela resistncia aos qumicos: Interna estrutura lamelar; Externa electrodensa, muito hidrofbia e impermevel a solventes orgnicos. Crtex camada espessa, com baixa densidade de electres. Possuem um tipo invulgar de pepidoglicano, com uma quantidade reduzida de pontes interpeptdicas. Pode ocupar metade do volume do endsporo, protegendo o organismo contra radiaes e calor. Parede celular constituda por peptidoglicanos. Protoplasto / core parte central do endsporo que est metabolicamente inactiva. Apresenta uma grande quantidade de dipicolinato de clcio. O cido dipicolnico estabilizado por ies de clcio. Os endsporos resistem ao calor e outros agentes letais devido: Acumulao de dipicolinato de clcio, no protoplasto estabilizam os cidos nuclicos; Estado de desidratao do endsporo importante na resistncia ao calor e radiao; Presena de protenas, solveis em cido estabilizantes do DNA (proteco ao calor, radiaes, dessecao e qumicos); Presena de tnicas enzimas e qumicos, como o perxido de hidrognio; Capacidade de reparao do DNA, aquando da germinao. Esporulao Esporulao /esporognese normalmente, inicia-se quando o crescimento pra por falta de nutrientes.
Clula vegetativa Fim da fase exponencial Crescimento Clula esporognica Autlise da clula vegetativa Esporo

Este fenmeno trata-se de um processo complexo de diferenciao celular e bioqumica, sob controlo gentico, com a produo de novas enzimas, estruturas e metabolitos. Dividem-se em sete fases. Fases da esporulao: Formao do filamento axial alongamento do material nuclear;
Clula vegetativa DNA torna-se mais denso

Formao do septo diviso celular atpica. O septo possui 2 membranas;


Membrana citoplasmtica invagina, formando um septo

14

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011) Formao do pr-esporo;


Septo do esporo cresce volta do protoplasto Formao do pr-esporo

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Exospro aparece. Crtex primordial formado entre as 2 membranas

Formao do crtex e parede celular no espao entre as 2 membranas. Acumulao de cido dipicolnico e clcio;
Desidratao

Formao de tnicas interna e externa;


Tnica externa formada Tnica interna formada Maturao - desenvolvimento da resistncia ao calor e a qumicos

Formao do endsporo maduro difcil visualizao dos ribossomas;


Lise da clula e libertao do esporo Esporo livre com exsporo e core

Libertao do endsporo aco de enzimas lticas. Os esporos podem permanecer durante longos perodos, num estado de latncia (dormncia). A sua germinao a passagem da fase de dormncia fase vegetativa activa.
Germinao do esporo Crescimento Clula vegetativa

Um esporo no germina com sucesso, mesmo num meio rico em nutrientes, se no passar por uma fase de activao. A quebra da dormncia surge pela presena de gua e de um estmulo qumico (qualquer molcula como aminocido ou sal inorgnico) ou ambiental. Induo condies agressivas, como tratamento pelo calor, em meios cidos ou compostos com grupos sulfidrilo livres. Com a germinao, h entrada de gua (tumefao), formao de enzimas hidrolticas (digestivas), ruptura ou absoro das tnicas, perda da resistncia ao calor e a outros factores de stress, perda de refractilidade, libertao dos componentes do esporo e aumento da actividade metablica. Aps a activao, so os metabolitos normais ou os nutrientes (aminocidos ou acares), que desencadeiam a germinao. Extruso o protoplasto do esporo produz novos componentes, emerge do que resta das tnicas e desenvolve-se numa bactria activa. o perodo de sntese de DNA, RNA, protenas e onde ocorre a diviso celular. Durante a germinao do esporo existe autossuficincia metablica, com a produo de ATP e a sntese proteica, mas necessria energia e substratos (fosfoglicerato). Flagelos Flagelo apndice tipo chicote, que se estende para o exterior da clula. So estruturas finas, longas e rgidas com forma helicoidal. Os flagelos aparecem em todos os espirilos, em metade dos bacilos e num pequeno nmero de cocos. Muitas bactrias, que no so observveis por microscopia ptica, movimentam-se por flagelos. O padro de distribuio dos flagelos determina-se segundo o seu nmero e arranjo, a caracterstica da espcie bacteriana onde aparecem e segundo a sua taxonomia. Flagelao pertrica flagelos dispostos por toda a superfcie da clula (Escherichia coli, Proteus vulgaris).

15

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Flagelao polar: Montrica um flagelo, num dos plos da clula; Anftrica um flagelo, em cada um dos 2 plos da clula (Spirillum volutans, Magnetospirillum magnetotactium); Loftrica um tufo de flagelos, num dos plos da clula (Pseudomonas, Helicobacter pylori). Estrutura do Flagelo O flagelo como uma nanomquima pois constitudo por cerca de 25 protenas diferentes. Possui 3 partes: Filamento fino, longo e helicoidal; Gancho segmento curto, flexvel e mais espesso que o filamento; Corpo basal embebido na clula. Filamento cilindro rgido e oco, constitudo por subunidades da protena flagelina (Fli C). Este filamento termina com uma capa proteica e est envolto por uma banha, que em Bdellovibrio uma estrutura membranar e em Vibrio cholerae uma bainha lipopolissacardica. Gancho bastante diferente do filamento. constitudo por vrias subunidades de protena (no a flagelina). Axonema tem um arranjo 9 + 2, ou seja, constitudo por 9 dupletos e 2 microtbulos individuais no centro. Corpo basal possui um arranjo 9 + 0, ou seja, constitudo por 9 tripletos apenas. a parte mais complexa do flagelo. Possui um sistema de anis e um eixo central. constitudo por protenas diferentes de flagelina e ocupa uma pequena poro da massa total do flagelo. Os flagelos formam-se a partir dos corpos basais (centro organizador de microtbulos). Maioria das Gram-negativo constitudo por 4 anis (2 pares) ligados a um eixo central. Os anis externo (L e P) esto associados com as camadas de lipopolissacardios e de peptidoglicanos, enquanto os anis internos (M e S) esto em contacto com a membrana citoplasmtica; Gram-positivo constitudo por 2 anis ligados a um eixo central. O anel externo (S) est, provavelmente, associado ao peptidoglicano, enquanto o anel interno (M) est ligado membrana citoplasmtica. Existem, ainda, nos flagelos, uma srie de outras protenas capazes de manter os microtbulos com determinado arranjo e ligados uns aos outros. Sem estas protenas um dos microtbulos subiria em relao ao outro, devido hidrlise do ATP e sua polaridade. Sntese do Flagelo A sntese de um flagelo constitui um processo complexo, estando envolvidos neste fenmeno cerca de 20-30 genes: genes de sntese da flagelina, das protenas do gancho e corpo basal, responsveis pela construo e funcionamento. Apesar desta complexidade toda, no se sabe como a clula regula e determina a localizao dos flagelos.
Protenas flagelares sintetizadas no interior da clula Transporte para o exterior, atravs do corpo basal Molculas de flagelina saem pelo interior oco do flagelo Adicionadas extremidade Alongamento do flagelo

Esta sntese trata-se de uma self-assembly (auto-associao, sem enzimas ou outros factores), da informao contida na estrutura da flagelina.

16

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Mecanismo do Movimento Uma clula procaritica move-se, quando o filamento (hlice rgida) roda. Quando determinada clula possui uma mutao ao nvel dos genes dos flagelos, estes vo aparecer rijos e mais longos (poligancho), no tendo qualquer efeito na mobilidade. Se a bactria fica presa num lmina com anticorpos para o filamento ou para o gancho, existe rotao da clula volta do flagelo preso, j as esferas de latx realizam uma rotao, volta do eixo do flagelo. A energia necessria para a rotao flagelar, nos procariotas, deve-se existncia de um gradiente de protes ou sdio, atravs da membrana citoplasmtica. No entanto, nos eucariotas, essa energia provm directamente do ATP. A velocidade a que as bactrias se deslocam muito grande, comparativamente, ao seu tamanho, ou seja, a bactria, por segundo, pode fazer vrias vezes o seu comprimento. Bactrias com flagelao polar possuem um movimento mais rpido e com mudanas sbitas de direco. Se o flagelo roda SCPR, d-se um movimento para a frente em corrida. Se o flagelo roda SPR, d-se a paragem da clula, atravs de um tombo ao acaso.
Alterao do sentido de rotao do flagelo Paragem seguida de tombo Mudana na direco

Bactrias com flagelao pertrica possuem um movimento mais lento, mas semelhante ao da flagelao polar. Os flagelos dobram-se pelos ganchos, formando um feixe de flagelos. Se todos os flagelos rodam SCPR, realizam um movimento para a frente em corrida. Se os flagelos rodam SPR, d-se uma paregem, com um tombo ao acaso. Para o movimento da clula necessrio a rotao do flagelo rgido, um motor interno e uma haste / eixo de transmisso do gancho ao anel M. Anel S ligado parede celular, nas Gram + , mas no roda (esttico); Anel M roda livremente na membrana citoplasmtica (rotor); Anis P e L nas Gram -, so os apoios / rolamentos do eixo. Apesar destes conhecimentos, o mecanismos exacto que faz rodar o corpo basal, no 100% conhecido. Rotor eixo, anel M e anel C, ligado ao M (pelo lado citoplasmtico), do corpo basal. Os anis M e C so consitudos por vrias protenas: Fli G, Fli M, Fli N, Fli F. Fli G particularmente importante na induo da rotao do flagelo. O corpo basal parece ser uma estrutura passiva, que roda num complexo proteico, embebido na membrana citoplasmtica, como um rotor que roda no centro de um anel de electromagnetes stator. As protenas mais importantes, na parte fixa do motor, so a Mot A e a Mot B que formam um canal de protes, atravs da membrana citoplasmtica. A protina Mot B liga as protenas Mot ao peptidoglicano. A translocao de protes, que ocorre atravs do canal (Mot A e Mot B), vai mover ou mudar a forma da protena Mot A. Seguidamente, Mot A vai exercer uma fora sobre a Fli G. destas 2 foras iguais, mas de sinal contrrio, que surge a rotao do flagelo. Flagelos das Arqueas Os flagelos das arqueas,superficialmente, so semelhantes aos flagelos das bactrias, no entanto apresentam algumas diferenas acentuadas.
Caracterstica do flagelo Rotao Alongamento Movimento Espessura Arqueas ATP Adio de subunidades na base Flagelo composto por um feixe de muitos filamentos que rodam como um s Menor Bactria Gradiente de protes / ies sdio Adio de subunidades na extremidade Cada flagelo roda independentemente Maior

17

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Endoflagelos Estruturas que do mobilidade em meios viscosos, como mucos e lamas. Para se movimentar em dobram e rodam sobre si mesmos. Aparece em espiroquetdeos ou espiroquetas e em bactrias helicoidais e flexveis. Filamento axial constitudo por 2 a mais de 100 flagelos periplasmticos (endoflagelos), que esto localizados nos plos e enrolados volta da clula, imediatamente abaixo da membrana exterior. Presume-se que os endoflagelos rodem como os flagelos externos. Respostas Bacterianas a Estmulos Quimiotaxia resposta a estmulos qumicos. Atraentes nutrientes como acar e aminocidos; Repelentes substncias txicas e dejectos bacterianos. A ausncia de estmulos qumicos leva a um movimento desordenado (aleatrio), formado por corridas e tombos. A presena de estmulos qumicos, leva a um movimento orientado, formado por corridas mais longas e menos tombos. H um gradiente de periodicidade destas duas ocorrncias, medida que se aproxima do atraente ou se afasta do repelente. Quando o gradiente qumico de glucose no capilar intruduzido na suspenso de E.coli, esta responde positivamente galactose, serina e cido asprtico; Experincias semelhantes podem ser realizadas em meio agarizado. A resposta existe a baixos nveis da substncia. Aumenta com o aumento da concentrao. Quanto mais atraente, mais repelente , pelo que a resposta ao qumico com a concentrao mais eficaz. Fototaxia movimento das bactrias em direco luz. Termotaxia movimento das bactrias em resposta temperatura. Aerotaxia movimento das bactrias em resposta a gradientes de oxignio. Osmotaxia movimento das bactrias em funo da presso osmtica. Magnetotaxia movimento das bactrias em resposta a campos magnticos (magnetossomas).

18

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

TAXONOMIA E FILOGENIA: MTODOS CLSSICOS E MOLECULARES


Taxonomia e Filogenia Tcnicas Clssicas Na determinao da taxonomia e filogenia dos grupos de bactrias necessrio recorrer a tcnicas. A quimiotaxonomia aborda a composio lipdica. Morfologia forma da clula, tamanho da clula, morfologia colonial, ultraestrutura, comportamento, clios e flagelos, mecanismos de mobilidade, forma e localizao do endsporo, morfologia e localizao do esporo, incluses celulares, cor colonial. Fisiologia e metabolismo natureza da actividade de enzimas e protenas de transporte: anlise indirecta de genomas. Recursos de carbono e azoto, constituntes da parede celular, recursos energticos, produtos de fermentao, tipo de nutrio, temperatura, luminescncia, converso de energia, tolerncia osmtica, relao de oxignio, pH, pigmentos fotossintticos, tolerncia ao sal, metabolitos secundrios, sensibilidade a antibiticos e inibidores, incluses de armazenamento. Ecologia padres de ciclo de vida, natureza das relaes simbiticas, capacidade de causar doena em hospedeiros, preferncia de habitats. Gentica troca de genes cromossmicos (transformao, conjugao e plasmdeos). Taxonomia e Filogenia Tcnicas Moleculares Tcnicas moleculares importantes em estudos evolutivos. Praticamente no h registos fsseis de microrganimos. Composio em bases do DNA contedo em guaninas + citocinas . O conjunto guanina e citocina constante numa espcie, no entanto o facto de serem semelhantes no implica, necessariamente, que sejam da mesma espcie (diferenas de mais de 10% correspondem a microrganismos no relacionados). Hibridao de cidos nucleicos semelhana entre genomas.
DNA de 2 organismos Aquecimento Separao em cadeia nica Arrefecer a 25 C Reassociao de cadeias complementares Cadeias no complementares ficam separadas

Hibridao DNA-DNA membros de uma espcie possuem 70% de homologia, na hibridao, e menos de 5% de diferena, na temperatura de fuso;
Filtros de nilon com ssDNA radioactivo Incubao Hibridao Lavagem para a remoo de ssDNA no hibridados Medio da radioactividade

Hibridao DNA-RNA utilizado para organismos mais afastados. Sequncias dos cidos nucleicos genes do 16S e 18S do RNA ribossmico so as molculas de eleio para inferir a filogenia de organismos. So utilizadas sequncias de oligonucleotdios marcadores (signature), que so sequncias pequenas e conservadas. As small subunits RNA (SSU rRNA) so quase ideais pois: desempenham o mesmo papel em todos os organismos; no passam por grandes mutaes (alteraes lentas); no ocorre transferncia horizontal de genes; tm regies muito conservadas (comparao de organismos distintos); e tm regies variveis (comparao entre organismos prximos).
Anlise comparativa das sequncias Proximidade Coeficiente de associao (Sab) Sab elevados - proximidade e afinidade Sab = 1,0 - organismos idnticos

Fingerprinting genmico no h sequncia de nucleotdios. Na anlise do padro, aps a electroforese, averigua-se a existncia de sequncias de DNA repetitivo, altamente conservado (intergnicas). Ribotipagem (restriction fragment length polymorphism, RFLPs). Sequncia de aminocidos as protenas no so apropriadas, mas sim as sequncias dos seus aminocidos. Sequncias de citocromos, outros transportadores de electres, histonas, protenas de choque trmico, protenas de transcrio e translao, enzimas metablicas. 19

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

PRINCIPAIS GRUPOS DE EUBACTRIAS E DE ARQUEOBACTRIAS


. Crenarchaeota
Thermotogae DeinococcusThermus

Classificao
Aquificae

Euryarchaeota

Archaea
Chloroflexi Bactria Grampositivo (baixo G+C) Bactria Grampositivo (alto G+C) Proteobacteria Spirochaetes Planctomycetes e Chlamydiae

Cyanobacteria

Chlorobi

Bacteroidetes

Fontes de Carbono, Energia e Electres Carbono: Autotrficos utilizam o dixido de carbono; Heterotrficos utilizam molculas orgnicas, reduzidas e pr-formadas. Energia: Fototrficos utilizam luz; Quimiotrficos utilizam a oxidao de compostos orgnicos ou inorgnicos. Electres: Litotrficos alimentam-se de matria do solo; Organotrficos alimentam-se de matria orgnica. Principais Tipos Nutricionais Fotolitoautotrficos Fotoorganoheterotrficos Quimiolitoautotrficos Quimioorganoheterotrficos Aquificae e Thermotogae Microrganismos termfilos. Aquificae ramo mais antigo das bactrias. Grupo constitudo por 1 classe, 1 ordem, 8 gneros. Temperatura ptima 85 C (mx 95 C). Quimiolitoautotrfico: energia atravs do hidrognio ou tiossulfato (aceptores finais) (Aquifex pyrophilus, Aquifex aeolicus). Thermotogae segundo ramo mais antigo das bactrias. Grupo constitudo por 1 classe, 1 ordem e 6 gneros. Temperatura ptima 80 C (mx 90 C). Genoma com a percentagem mais elevada de genes semelhantes aos das arqueia. Possuem um invlucro externo tipo banha. Habitam em reas geotermais activas (chamins hidrotermais no fundo do mar e em sulfataras). Thermotoga (quimioheterotrfico). Deinococcus Thermus Grupo constitudo por 1 classe, 2 ordens, 3 gneros. Vivem em habitat desconhecido (D. Radiodurans). Formado por seres esfricos (pares ou ttradas) ou bastonetes no mveis. Produzem cidos de mais de um acar. Possuem uma grande capacidade de reparao do genoma, quando seriamente danificado. Tm um cromossoma circular, um megaplasmdeo e um plasmdeo pequeno. Coram Gram + , mas possuem uma parede tipo gram -. So organismos muito resistentes dessecao e radiao.

20

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Planctomycetes Grupo constitudo por 1 classe, 1 ordem, 9 gneros. Realizam heterotrofia e quimiolitrofia. Vivem em habitats diversos. Formado por seres esfricos a ovides, periformes, unicelulares, filamentosos e agregados (formam rosetas). Possuem uma compartimentao celular, parede celular sem peptidoglicanos e com reproduo por gemulao. Tm, tambm, parifoplasma, membrana intracitoplasmtica, pirelulossoma ou riboplasma e nucleide, em Gemmata obscuriglobus, e anammoxossoma, nos Anammox. Chlamydiae Grupo constitudo por 1 classe, 1 ordem, 4 famlias, 6 gneros. Formado por parasitas intracelulares obrigatrios. Alguns causam doenas e outros vivem em protistas e clulas animais, sem causarem problemas. Podem provocar pneumonia clamideal, conjuntivite de incluso, linfogranoloma venreo, uretrite no gonoccica, tracoma. Chlamydiae no mveis, cocide, com parede semelhante dos Gram - mas sem o cido murmico, nem peptidoglicanos. So metabolicamente limitadas e esto dependentes do hospedeiro. Diviso fuso binria, sem a protena de diviso celular FtsZ.
Corpo elementar Corpo reticulado Fisso binria Clula hospedeira morre Diferenciao do corpo reticulado Formao de novos corpos elementares at lise celular Libertao das clamdias

Spirochaetes Grupo constitudo por 1 classe, 1 ordem, 3 famlias, 13 gneros. Formado por bactrias gram -, quimioheterotrficos, estrutura e mecanismo de mobilidade prprios, com forma de eixo alongado, helicoidal e flexvel. Possuem uma mobilidade atravs de solues viscosas ou meios slidos. Fontes de carbono e energia carbohidratos, aminocidos, cidos e lcoois gordos de cadeia longa. Filamento axial dois a mais de cem flagelos envoltos num banha externa (Leptospira). Seres de vida livre capazes de viver em ambientes anxicos ricos em sulfureto e em associao simbitica, com organismos. Alguns so importantes patognicos humanos: sfilis venrea (Treponema pallidum) e borreliose, transmitida por carrascas (Borrelia sp.). Bacteroidetes Grupo constitudo por 3 classes, 12 famlias, 63 gneros. Os bacterides so seres anaerbicos, no esporulantes, quimioheterotrficos que produzem uma mistura de cidos por fermentao. Podem habitar na cavidade oral, tracto intestinal de vertebrados e rmen de ruminantes (beneficiam o hospedeiro). So capazes de degradar celulose, pectina e outros. Tambm podem causar doenas (Bacteroides fragilis). Sphingobacteria possui esfingolpidos na parede (Cytophaga, Sporocytophaga que forma clulas de resistncia redondas, Flexibacter so colnias amarelo a laranja devido ao pigmento carotenide). Habitam no solo ou no mar, com vida livre ou patognica em vertebrados. Possuem uma mobilidade deslizante e so capazes de degradar polissacardios complexos.

21

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Bactrias Fotossintticas Constitudo por 3 grupos de bactrias Gram-negativo: Prpura, Verdes e Cianobactrias. Com 7 grandes grupos: Chloroflexi bactrias verdes no sulfurosas; Chlorobi bactrias verdes sulfurosas; Cyanobacteria; Gamma Proteobacteria bactrias prpura sulfurosas; Alpha Proteobacteria bactrias prpura no sulfurosas; Beta Proteobacteria bactrias prpura no sulfurosas; Firmicutes Heliobacteria.
Bactrias fotossintticas anaerbias Verdes no-sulfricas Prpuras sulfricas Bacterioclorofilas a ou Bacterioclorofilas a e c b Sistema fotossinttico contido num complexo Clorossomas presentes, membranar esfrico ou quando as bactrias crescem lamelar, contnuo com anaerobicamente a membrana citoplasmtica Dadores fotoheterotrficos (variedade de acares, aminocidos e cidos H2, H2S, S0 orgnicos). Dadores fotoautotrficos (H2S, H2) Bactrias fotossintticas aerbias Cianobactrias Clorofila a com ficobiliprotenas

Caracterstica Pigmentos fotossintticos Morfologia das membranas fotossintticas

Verdes sulfricas Batecterioclorofila a mais c, d ou e Sistema fotossinttico em clorossomas, que so independentes da membrana citoplasmtica

Prpura no-sulfrica Bacterioclorofilas a ou b Sistema fotossinttico contido num complexo membranar esfrico ou lamelar, contnuo com a membrana citoplasmtica Normalmente, molculas orgnicas: por vezes redutores de compostos sulfricos ou H2 Fora da clula (alguns casos) Anaerbia Anaerbios fotoorganoheterotrficos Alguns so fotolitoautotrficos facultativos Movimento com flagelo polar ou sem movimento. Alguns possuem vescula gasosa

Membranas dos tilacides com ficobilissomas

Dadores de electres fotossintticos Deposio de enxofre Natureza da fotossntese Tipo Metablico principal

H2, H2S, S0

H2O

Fora da clula Anaerbia Anaerbios obrigatrios fotolitoautotrficos Sem movimento. Alguns com vesculas gasosas Anaerbia

Dentro da clula Anaerbia Anaerbios obrigatrios fotolitoautotrficos

Aerbia (alguns so anaerbios facultativos)

Fotoheterotrficos. Por vezes fotoautotrficos ou quimioheterotrficos

Fotolitoautotrficos aerbios

Mobilidade

Deslizamento

Movimento com flagelo polar

Sem movimento, com movimento natatrio sem flagelo ou deslizamento. Alguns tm vesculas gasosas

Cyanobacteria Seres que possuem uma forma e aparncia muito varivel. Podem ser unicelulares, coloniais ou filamentos (tricomas). Realizam fototaxia devido presena de vacolos gasosos. Possuem uma mobilidade deslizante. Grupo constitudo por 5 subseces e 56 gneros, formando o maior e mais diversificado grupo de bactrias fotossintticas. Pigmentos acessrios ficobiliprotenas (ficocianina e ficoeritrina), como nas algas vermelhas. Os pigmentos fotossintticos e a cadeia transportadora de electres possuem partculas especiais, ficobilissomas, associadas aos tilacides. O dixido de carbono assimilado no ciclo de Calvin e as enzimas esto localizadas nos carboxissomas. Estes seres possuem grnulos de cianoficina e no possuem a enzima desidrogenase do -cetoglutarato, o ciclo dos ATC no funciona completamente, tendo a via das pentosefosfato, um papel fundamental. Reproduo fisso binria, gemulao, fragmentao, fisso mltipla, hormognios (pequenos filamentos mveis aps fragmentao), acinetos (clulas dormentes de parede espessada onde se fixam heterocistos com azoto, nas cianobactrias filamentosas).

22

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Proclorfitos nicos que possuem clorofila a e clorofila b, sendo os melhores candidatos a precursores dos cloroplastos (Prochloron, Prochlorococcus e Prochlorotrix). Habitam numa grande variedade de ambientes, realizando simbioses em lquenes, plantas, fungos e protozorios. Podem produzir toxinas sendo, por isso, indicadores de poluio da gua (Oscillatoria). Proteobacteria Grupo constitudo por 500 gneros, constituindo o maior e mais diversificado grupo, de bactrias. Seres gram-negativo, sem padro geral morfolgico, metablico ou reprodutor. Morfologia cocos, bastonetes simples, gneros prostecados, gmulas e corpos frutferos. Fisiologia fotoautotrofia, quimiolitotrofia e quimioheterotrofia. Atravs da anlise do 16S do DNA ribossmico, distinguem-se a 5 linhagens: Alpha, Beta, Gamma, Delta, Epsilon. AlphaProteobacteria Grupo constitudo por 7 ordens e 20 famlias, que contm a maioria das bactrias oligotrficas. Apresentam mecanismos raros, como metilotrofia (Methylobacterium), quimiolitotrofia (Nitrobacter) e fixao do azoto (Rhizobium). Podem ser patognicos (Rickettsia e Brucella) e a sua morfologia diversa, como prostecados. Bactrias prpura no sulfurosas morfologia varivel. Habitam em meios aquticos e no iodo (Rhodospirillium e Azospirillium): Fotossntese anoxignia; Clorofila a ou b. Membranas fotossintticas contnuas com a membrana citoplasmtica; Quando mveis, possuem flagelao polar; Normalmente, fotoorganoheterotrficos anaerbios; Na ausncia de luz, realizam quimiorganoheterotrofia, em aerobiose, e fermentao, em anaerobiose. Rickettsia muito pequenas: Parasitas eritrcitos, macrfagos e endotlio vascular de vertebrados; Mutualistas artrpodes; No possuem via glicoltica. Utilizam o glutamato oxidado e intermedirios do ciclo dos cidos tricarboclicos; Genoma semelhante ao das mitocndrias; Podem originar doenas. Tifos epidrmico e endmico, Ehrlichiose, febre Q. Caulobacteriaceae e Hyphomicrobiaceae possuem apndices, ciclos de vida caractersticos e seres gemulantes. Prosteca pednculo que constitui uma extenso celular; Hyphomicrobium metilotrofo facultativo; Caulobacter possui um pednculo e um p de fixao. Rhizobiales Rhizobium, Agrobacterium (patognico de plantas), Brucella (patognico humano e de animais). Bactrias nitrificantes frequentemente com membranas intracelulares, captam energia da oxidao do amnio ou do azoto, constituindo seres quimilitotrficos aerbios (Nitrobacter). BetaProteobacteria Grupo constitudo por 7 ordens e 12 famlias, possuindo seres que utilizam substncias difundidas de decomposio orgnica, em ambientes anxicos.

23

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Possuem uma grande diversidade metablica: quimioheterotrficos, fotolitotrficos, metilotrficos, quimiolitotrficos. Constituem importantes patognicos humanos Neisseria (meningite meningoccica e gnorreia), Burkholderia cepacia (agente nosocomial) e Bordetella pertussis (tosse convulsa). Existem, tambm, outros gneros importantes: Nitrisomonas e Nitrosospira (bactrias nitrificantes) e Thiobacillus (bactria sulfurosa incolor e quimiolitotrfica). GammaProteobacteria Grupo constitudo por 14 ordens e 28 famlias, sendo o maior grupo das Proteobacteria e possuindo uma extraordionria variedade de tipos fisiolgicos. Diversidade metablica: quimioorganotrficos anaerbios facultativos, quimioorganotrficos aerbios, fotolitotrficos, quimiolitotrficos, metilotrficos. Formado por vrios grupos: bactrias prpura sulfurosas, parasitas intracelulares (Legionella e Coxiella), superfamlia I (Vibrionaceae, Enterobacteriaceae, Pasteurellaceae), superfamlia II (Pseudomonas, Azotobacter, Maraxella, Acinetobacter). Bactrias prpura sulfurosas anaerbios estritos, geralmente fotolitotrficos que oxidam cido sulfrico e enxofre (Thiospirillium, Chromatium). Thiotricales oxidam enxofre (Beggiatoa) e possuem uma mobilidade deslizante (Beggiatoa e Leucothrix). Methylococales (Methylococcus e Methylomonas) metilotrficos, pois oxidam metano, metanol e outros compostos com 1 carbono, em anaerobiose. Vibrionales maioria aquticos. Existem seres fluorescentes (Vibrio fisheri e V. harveyi) e patognicos em peixes e humanos (gastroentrite, colera). Pseudomonadales seres com mobilidade (Pseudomonas) e quimioheterotrficos (geralmente com respirao aerbica). Realizam mineralizao (grande variedade de molculas orgnicas), degradao de alimentos (P. fluorescens, a 4 C) e fixao do azoto (Azotobacter). Podem ser modelos biolgicos experimentais (P. aeruginosa) e patognicos em animais e plantas (P. aeruginosa e P. syringae). Enterobacteriales possuem uma das maiores famlias de bactrias (Enterobacteriaceae). Seres patognicos de plantas (Erwinia) e patognicos humanos (Yersinia pestis, Salmonella, Shigella, Escherichia coli). Escherichia coli bactria bem estudada, sendo o principal organismo de investigao. Habita no clon de humanos e outros animais. Pasteurellales patognicos em humanos e animais: Pasteurella (clera das aves, pneumonia em gado) e Haemophilus influenzae (sinusite, pneumonia, bronquite, meningite). DeltaProteobacteria Grupo constitudo por 8 ordens e 20 famlias, constituindo um grupo, no muito numrico, mas bastante diverso. So predadores (bdellovibrios e myxobacterias) ou quimioorganotrficos e anaerbios, que formam sulfureto a partir de sulfato e enxofre, quando se oxidam nutrientes orgnicos. Desulfovibrionales, Desulfobacterales e Desulfomonadales bactrias redutoras de sulfato e enxofre, anaerbias e importantes no ciclo do enxofre (Desulfovibrio). Bdellovibrionales Bdellovibrio. Myxococcales seres de mobilidade deslizante e com um ciclo de vida complexo (produzindo corpos frutferos). EpsilonProteobacteria Grupo constitudo por 1 ordem e 3 famlias, que consituem o grupo mais pequeno das Proteobacteria. So seres com forma de bastonetes finos, lineares, curvos ou helicoidais. Possui 2 gneros patognicos (Campylobacter e Helicobacter). 24

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Firmicutes Grupo grande e complexo, constitudo por 3 classes (Mollicutes (Mycoplasma), Clostridia, Bacilli), 10 ordens e 34 famlias de bactrias gram-positivo e com baixo contedo em guaninas-citocinas. Mollicutes / Mycoplasma bactrias pequenas, que evoluram de ancestrais com parede Gram-positivo, mas que a perderam, no sintetizando peptidoglicanos. Seres deslizantes, que esto envoltos por membrana citoplasmtica (pleomorfismo) e que tm genomas pequenos. Necessitam de esteris, cidos gordos, vitaminas, aminocidos, purinas e pirimidinas. Na sua maioria, so anaerbios facultativos e anaerbios obrigatrio, que habitam em ambientes diverdificados (animais, plantas, solo, pilhas de compostagem). Patologias respiratrias (pneumonia atpica) e urogenitais, pleuropneumonia bovina, doena repsiratria crnica em galinhas, pneumonia suna Clostridia bactrias de Gram-positivo, mas que coram como Gram-negativo. Heliobacterium e Heliophilum fotossntese anoxignica (BClg), com fotossistema I e sem membranas intracelulares; Veillonella biota da boca, tubo gastrointestinal e urogenital do Homem; Clostridium anaerbio, que produz esporos resistentes ao calor, podendo ser patognicos (biotulismo, ttano e gangrena gasosa). Reaco de Stickland (fermentao de aminocidos), produo de butanol. Bacilli bactrias com a forma de bastonetes e cocos com ou sem endsporos. Possuem enorme importncia na produo de antibiticos (bacitracina, gramicidina, polimixina), envenenamento alimentar (B. cereus); insecticidas (B. Thuringiensis e B. sphaericus, toxinas), antrax e carbnculo (B. anthracis, animais e homens). Actinomycetes constitudo por 1 classe, 5 sub-classes, 6 ordens, 14 sub-ordens e 44 famlias. Bactrias de gram-positivo e elevado contedo em guaninas e citocinas. So aerbios e produtores de esporos assexuais, criando um grupo diverso e complexo. Possui um ciclo de vida complexo (miclios, com metabolismo secundrio), com hifas areas, filamentosas e septadas (esporos de parede fina), com exsporos devido falta de nutrientes. So habitantes do solo, que decompem uma grande variedade de compostos orgnicos, sendo poucos os patognicos no homem, animais ou plantas. So a fonte da maioria dos antibiticos, anticancergenos, antihelmnticos e imunossupressores. Bactrias com composio varivel da parede celular, morfologia, cor do miclio, esporos e fosfolpidos das membranas celulares (constituindo caractersticas taxonmicas). Actinomyces, Micrococcus, Arthrobacter, Corynebacterium (diphteria causa difteria), Mycobacterium (bovis, tuberculosis que causa tuberculose, leprae que causa lepra), Nocardia e Rhodococcus (degradao de hidrocarbonetos, PCBs, detergentes e borracha), Propionibacterium (fermentao de acares e queijo, acnes causa o acne), Streptomyces (importncia ecolgica e mdica), Franquia (cresce em ndulos radiculares de plantas no leguminosas e fixadoras de azoto), Bifidobacterium (fermentativa com produo de cidos actico e lctico, sendo o colonizador inicial do tracto intestinal). Firmicutes Bacillales / Bacilli Bacillus bastonetes quimioheterotrficos, com endsporos, geralmente, mveis (flagelao pertrica).Aerbios com catalase positiva(Bacillus subtilis, gram + melhor estudado). Staphylococcaceae / Staphylococcus cocos que se dividem em mais do que um plano, formando agrupamentos irregulares. Existem estafilococos patognicos (cocos invasivos que levam produo de pus), habitantes normais de tracto respiratrio superior, pele, intestino e vagina, espcies patognicas, relativamente no patognicas e mucosas. Constituem doenas em pessoas com poucas defesas (normalmente). S. aureus possui eficcia de patogenicidade, devido a factores extracelulares, toxinas e propriedades invasivas. 25

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Listeriaceae / Listeria monocytogenes importante agente causal de doena (listeriose). Est presente no solo, vegetao e animais, em grvidas e imunossuprimidos. A transmisso feita atravs de alimentos contaminados, podendo originar meningite, sepsia e nado morto. Lactobacillales produzem cido lctico como nico ou principal produto da fermentao (bactrias do cido lctico). Bactrias fastidiosas (vitaminas, aminocidos, purinas e piramidinas), no esporulantes, sem citocromos, obtendo energia por fosforilao a nvel do substrato (Streptococcus, Enterococcus, Lactocossus, Lactobacillus, Leuconostoc). Lactobacillus parte da microbiota humana e indespensvel na indstria alimentar. Realiza fermentaes lcteas (po, lcteos, vegetais, fermentados), sendo probiticos; Leuconostoc fermentao heterolctica para a produo de vinho, vegetais fermentados, manteiga, queijos e dextrano. um problema nas refinarias de acar. Enterococcus faecalis residente do tracto intestinal, patognico oportunista no tracto urinrio e endocardite. S. pyogenes patognico, impetigo, erisipela, faringite estreptoccica, pneumonia estreptoccia, doenas ps-estreptoccicas (glomeronefrite e febre reumtica). Archeae Grupo com grande diversidade morfolgica (esfrica, bastonete, espiral, lobada, cubide, triangular, forma de placa, irregular ou pleomrfica) e fisiolgica (aerobiose, anaerobiose facultativa e estrita) e que podem estar isoladas, em filamentos ou agregados. Bactrias gram-negativo ou positivo tm uma parede celular diferente das bactrias, com uma multiplicao por fisso binria, gemulao, fragmentao ou outros mecanismos. Nutricionalmente, so quimiolitoautotrficos ou organotrficos com estirpes psicrfilos, mesfilos e hipertermfilos, mas no patognicas. Forma 2 grupos filogenticos (Euryarchaeota e Crenarchaeota) e 5 grupos morfofisiolgicos, principais de Archaea: Metanognicas anaerbios estritos. O metano o principal produto final do metabolismo. Enxofre livre poder ser reduzido a H2S, sem interveno de energia produzida. Possui coenzima M, factores 420 / 430 e metanopptido; Redutoras de sulfato clulas cocides gram-negativas. H2S formado a partir do tiosulfato e sulfato. Crescimento autotrfico com tiosulfato e H2. Pode crescer heterotroficamente. Pores de metano so, tambm, formadas. Termoflicos extremos e anaerbios estritos. Possuem o factor 420 e metanopeptina, mas no a coenzima M nem o factor 430; Haloflicas extremas gram-negativo ou gram-positivo, mas, como todas as archaeas, sem peptidoglicanos nas suas paredes celulares. Primariamente quimioorganoheterotrficos. A maioria produz colnias vermelhas, mas algumas so despigmentadas. Neutroflicas a alcalinoflicas. Normalmente mesoflicas. Possui bacteriordopsina ou halordopsina e que pode usar energia luminosa, para produzir ATP; Sem parede celular clulas pleomrficas, sem parede celular. Termoacidoflicas e quimioorganotrficas. Anaerbias facultativas. Membrana citoplasmtica contm glicoprotenas e lipoglicanos ricos em manose. Termoflicos extremos clulas gram-negativo. Termoflicos obrigatrios. Normalmente, anaerbios estritos mas tambm podem ser aerbios ou facultativos. Acidoflicos ou neutroflicos. Autotrficos ou heterotrficos. A maioria metaboliza o enxofre.

26

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Crenarchaeota Constitudo por 1 classe, 4 ordens e 6 famlias. So termfilos (geralmente hipertermfilos), muitos deles dependentes do enxofre, como dador de electres por litotrficos ou como aceitador de electres na respirao anaerbia. Caracterizados por terem um lpido especfico (crenoarqueol). So abundantes em habitats marinhos, arrozais, solos e sedimentos de lagos, em reas envolventes de locais submarinos de actividade vulcnica e sulfataras. Pyrodictiaceae anaerbios estritos; Sulfolobus termoacidfilo, quimiolitoheterotrfico. Oxidam S0 em SO4, sendo aceitadores de electres. Euryarchaeota Muito diverso com 5 principais grupos fisiolgicos: Metangenos anaerbios estritos que formam metano ou metano com dixido de carbono. Maior grupo de arqueias cultivadas, que habitam em ambientes anxicos (rmen e intestino de animais, sedimentos, pntanos e digestores anaerbios). So metangenos activos (Methanosarcina, Methanobacterium); Halobacteria halfitas extremas, maioritariamente, aerbias quimiorganotrficos, com uma variedade de formas (cocos, bastonetes, cbicas, piramidais). Habitam em salinas marinhas e lagos salgados (Halobacterium salinarium); Thermoplasmas termoacidfilos, sem parede celular, mas com membrana citoplasmtica reforada por tetrateres de diglicerol, glicolpidos e glicoprotenas (Thermoplasma); Termfilos extremos redutores de S0 bactrias mveis, anaerbios estritos que reduzem enxofre em H2S (Thermococcus, Pyrococcus); Redutores de sulfato (Archaeglobus) cocos irregulares, gram-negativo, com parede celular glicoproteica, que reduz sulfato, sulfito ou tiossulfito, a sulfureto. termfila extrema, isolada de chamins vulcnicas marinhas.

27

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

NUTRIO E CRESCIMENTO DE MICRORGANISMOS


Ubiquidade, Diversidade e Adaptabilidade Ubiquidade capacidade de colonizar todo e qualquer stio do planeta. Estima-se que existem cerca de 1012 bactrias na pele, 1010 na boca e 1014 no tracto gastrointestinal. A diversidade que se verifica num organimo traduz-se, tambm, no seu genoma. Se forem considerados todos os genomas diferentes das bactrias do tracto intestinal, chega-se a um genoma superior ao humano. Assim, os humanos so superorganismos cujo metabolismo representa uma amalgamao de atributos humanos e microbianos. Adaptabilidade adaptao dos microrganismos a todos e quaisquer habitats. Metabolismo Microbiano O metabolismo microbiano constitudo por processos catablicos e anablicos.
Nutrientes para Biossntese Qumicos, Luz (fonte de energia) ANABOLISMO Macromolculas e outros componentes celulares Energia Produtos de excreo (produtos da fermentao, cidos, lcool, dixido de carbono, electres aceptores reduzidos)

Energia CATABOLISMO

Composio Qumica de uma Clula de Escherichia coli Percentagens de peso seco, dos diferentes compostos celulares: Macromolculas totais (96%) protenas (55%), polissacardios (5%), lpidos (9,1%), DNA (3,1) e RNA (20,5%); Mnomeros totais (3%) aminocidos e precursores (0,5%), acares e precursores (2%), nucletidos e precursores (0,5%); Ies inorgnicos (1%). Para saber a nutrio de uma bactria, necessrio o conhecimento dos nutrientes que necessita e de como constituda. Assim, para a clula crescer essencial uma noo dos seus dados moleculares. A molcula mais importante do peso seco de uma bactria o carbono.
Elemento Carbono Oxignio Azoto Hidrognio Fsforo Enxofre Potssio Magnsio Clcio Ferro % de peso seco 50 20 14 8 3 1 1 0,5 0,5 0,2 Fonte Compostos orgnicos ou CO2 H2O, compostos orgnicos, CO2 e O2 NH3, NO3, compostos orgnicos, N2 H2O, compostos orgnicos, H2 Fosfato inorgnico (PO4) SO4, H2S, S0, compostos de exofre orgnicos Sais de potssio Sais de magnsio Sais de clcio Sais de ferro Funo Principal constituinte do material celular Constituinte do material e gua celular. O2 o aceptor de electres, na respirao aerbica Constituinte de aminocidos, nucleotdios de cidos nucleicos e coenzimas Principal constituinte de compostos orgnicos e da gua celular Constituinte de cidos nucleicos, nucleotdios, fosfolpidos, LPS e cidos teicicos Constituinte da cistena, metionina, glutionina e vrias coenzimas Principal catio celular inorgnico e cofactor para certas enzimas Catio celular inorgnico, cofactor para algumas reaces enzimticas Catio celular inorgnico, cofactor para algumas enzimas. Componente do endsporo Componente de citocromos e algumas protenas de ferro (sem ser o heme). Cofactor de algumas reaces enzimticas

Categorias Nutricionais de Microrganismos Categorias nutricionais de organismos, numa classificao que combina a natureza das fontes de carbono e a sua energia:
Categorias nutricionais Fotoautotrfico Fotoheterotrfico Quimiolitoautotrfico Quimiolitoheterotrfico Quimiorganoautotrfico Quimiorganoheterotrfico Fonte de carbono CO2 Composto orgnico CO2 Composto orgnico CO2 Composto orgnico Fonte de energia Luz Luz Inorgnica Inorgnica Orgnica Orgnica Organismos (exemplos) Algas, bactrias fotossintticas Bactrias fotossintticas, arqueobactrias halfilas Eubactrias nitrificantes e oxidantes do enxofre Algumas arqueobactrias metanognicas Eubactrias metilotrficas autotrficas Fungos, protozorios, a maior parte das eubactrias

Quando a fonte de carbono o dixido de carbono, ento os seres so autotrficos, se a fonte for um composto orgnico, os seres so, ento, heterotrficos. 28

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Requisitos Nutricionais de Microrganismos Qualquer elemento tem de ser fornecido na quantidade certa, pois se for em excesso pode provocar um efeito txico na cultura de determinado microrganismo. Os nutrientes podem ser: Macronutrientes:
Elemento Carbono Hidrognio Oxignio Azoto Fsforo Enxofre Potssio Magnsio Sdio Clcio Ferro Fonte Compostos orgnicos ou CO2 H2O, compostos orgnicos H2O, compostos orgnicos, O2 NH3, NO3, compostos orgnicos PO43SO42-, H2S, S0, compostos de exofre orgnicos K+ em soluo ou sais de potssio Mg2+ em soluo ou sais de magnsio Na+ em soluo ou NaCl e outros sais Ca2+ em soluo, CaSO4 ou outros sais de clcio Fe2+ ou Fe3+ em soluo ou FeS, Fe(OH)3 ou outros sais de ferro Forma qumica fornecida no meio d cultura Glucose, malato, acetato, piruvato, outros compostos ou misturas complexas H2O, compostos orgnicos H2O, O2, compostos orgnicos Inorgnico: NH4Cl, (NH4)2, SO4, KNO3, N2 Orgnico: aminocidos, bases de azoto de nucleotdios, outros compostos orgnicos contendo azoto KH2PO4, Na2HPO4 Na2SO4, Na2S2O2, Na2S, cistina e outros compostos orgnicos KCl, KH2PO4 MgCl2, MgSO4 NaCl CaCl2 FeCl2, FeSO4, vrios ferros em soluo

Micronutrientes:
Elemento Crmio Cobalto Cobre Mangans Molibdnio Niqul Selnio Tungsten Vanadio Zinco Ferro Funo celular Necessrio para mamferos no metabolismo da glucose Vitamina B12. Transcarboxilase (cido propinico em protenas) Certas protenas, envolvidas na respirao (citocromo c oxidase) ou na fotossntese (plastocianina). Algumas dismutases superxidas Activa muitas enzimas. Presente em algumas dismutases superxidas e em enzimas do fotossistema II na fototrofia oxignica Presente em vrias enzimas. Na nitrogenase molibdnio, nitrato redutase, enxofre oxidase, DMSO-TMAO redutases, algumas desidrogenases, oxotransferases Maioria hidrogenases. Coenzimas entanognicas. Monxido de carbono desidrogenase. Ureia Forma desidrogenase. Algumas hidrogenases. Aminocidos selenocistina Formas de desidrogenase. Oxotransferases de hipertermfilos Vanadio nitrogenase. Bromoperoxidase Presente na enzima carbnica anidrase, lcol desidrogenase, RNA e DNA polimerases e muitas protenas de ligao de DNA Citocromos, catalases, peroxidases, ferro-enzofre protenas, oxigenases

Cofactores e coenzimas molculas no proteicas que se ligam a protenas, conferindo-lhes propriedades funcionais, que os aminocidos no conseguem. Podem ser molculas orgnicas de dimenses considerveis, metais ou uma combinao de ambas. Algumas ligam-se s protenas covalentemente, contudo a maioria estabelece ligaes fracas. Factores de Crescimento Factores de crescimento compostos orgnicos tais como aminocidos, purinas, pirimidinas e vitaminas, que a clula necessita para crescer, mas que no consegue sintetizar. Para o crescimento de determinados microrganismos necessrio a juno de alguns factores de crescimento, pois estes seres no so capazes de os sintetizar, por si s, logo tm de ser adicionados ao meio de cultura. Estes factores so compostos pois tm uma fonte de carbono, sendo apenas usados como blocos, para serem englobados em processos biolgicos. Estirpes fastidiosas organismos que possuem necessidades nutricionais complexas e necessitam de vrios factores de crescimento. Estirpes auxotrficas estirpes mutantes de bactrias que necessitam de alguns factores de crescimento, os quais a estirpe selvagem no necessita. Algumas bactrias no necessitam de factores de crescimento pois so capazes de sintetizar todos os compostos essenciais, atravs de uma fonte de carbono e como parte do seu metabolismo intermdio. A Escherichia coli cresce em quase todos os locais e capaz de sintetizar os elementos que necessita, mas certas estirpes, as auxotrficas, necessitam de englobar esses factores de crescimento, a partir do ambiente. 29

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011) Vitaminas:


Vitamina cido p-Aminobenzico (PABA) cido flico Biotina cido lipico cido mercaptoetano-sulfnico cido nicotnico cido pantotnico Piridoxina (B6) Riboflavina (B2) Tiamina (B1) Vitamina B12 Vitamina K Tetrahidrofolato Biotina Lipoamido Coenzima M NAD (nicotinamida adenina dinucleotdeo) e NADP Coenzima A e a protena transportadora Acil (ACP) Fosfato piridoxal FMN (flavina mononucleotdeo) e FAD (flavina adenina dinucleotdio) Tiamina pirofosfato (TPP) Cobalamina junto ao nucleosdio de adenina Quinonas e naftoquinonas Forma de coenzima

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Funo Precursos da biossntese do cido flico Transferncia de uma unidade, de um carbono. Necessrio para a sntese de timina, bases purinas, serina, metionina e pantotenato Reaces de biossntese que necessitam da fixao de CO2 Transferncia de grupos acil na oxidao de cido cetona Produo de CH4 por metanognicos Transportador de electres em reces de desidrogenase Oxidao de cidos cetona e transportadores de grupos acil no metabolismo Transaminao, desaminao, descarboxilao Reaces de oxirreduo Descarboxilao de cidos cetina e reaces transaminase Transferncia de grupos metil Processamento do transporte de electres

Meios de Cultura Meio de cultura meio nutrional onde os microrganismos so capazes de colonizar. Meio de cultura definido sinttico (sacarose + gua + K2HPO4 + (NH4)2HPO4 + MgSO4 + FeSO4 + MnSO4). Meio de cultura mnimo nmero mnimo de compostos, necessrios para o crescimento de determinado microrganismo. Atravs da observao dos elementos que constituem o meio, consegue-se saber os elementos, que o ser necessita, para o seu crescimento. Meio de cultura mais simples. Meio de cultura complexo / no-definido os compostos que constituem o meio de cultura no possuem frmulas, so apenas extractos. No se consegue determinar as substncias que as bactrias necessitam para crescer, apenas pela observao da sua composio (extracto de carne + peptona + glucose + agar + gua). Meios de cultura selectivos meios onde so adicionados determinados compostos, que favorecem o crescimento de determinado microrganismo. Pode ser selectivo, pelo no fornecimeno de determinado composto, permitindo o isolamento de bactrias que se desenvolvem nessas condies de falta do composto, como seria pretendido (cidos casamino + extracto de carne + KCl + FeCl2 + NaCl + gua). Os meios de cultura selectivos podem ser enriquecidos com uma fonte de azoto gasoso (exemplo) ou com compostos inibidores. Meios de cultura selectivos e diferenciais para alm de seleccionarem determinado tipo de bactrias (seleco) conseguem distinguir tipos de metabolismos das mesmas. Agar de manitol e sal meio de cultura que apresenta uma cor vermelha rosada. A degradao do manitol leva produo de cido. Este cido muda a cor do meio de rosado a amarelo. Agar de MacConkey s permite o crescimento de bactrias gram-negativas, pois possui como inibidores o violeta de cristal o que faz com que as bactrias gram-positivas no consigam crescer.
Estado fsico Composio qumica Objectivos funcionais Lquido / Slido / Semi-slido Quimicamente definidos / Quimicamente complexos Simples / Selectivos / Diferenciais / Enriquecidos

Boletins tcnicos dos meios de cultura (DIFCO): Violet Red Bile Glucose (VRBG) Agar usado para a deteco e enumerao de Enterobacteriaceae, em alimentos e produtos dirios. Como um meio sem lactose (apenas glicose), permite seleccionar organismos que no a utilizem.

30

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Tcnicas para Isolamento de Microrganismos Tcnica do riscado com uma ansa, contendo o inculo, riscar superficialmente o meio de cultura slido. Esterilizar a ansa, sempre que se muda de dureco, a fim de diluir o inculo. Aparecimento de colnias individualizadas aps incubao. Tcnica por espalhamento pipetar a amostra diluda sobre a superfcie do meio de cultura slido e espalhar com a ajuda de uma vareta de vidro estril dobrada em L (espalhador). Incubar a placa em posio invertida. Aparecimento de colnias individualizadas na superfcie do agar, aps incubao. Tcnica por incorporao pipetar a amostra diluda numa placa de petri estril. Adicionar meio de cultura com agar, previamente liquefeito, e misturar cuidadosamente. Deixar solidificar. Incubar a placa em posio invertida. Aparecimento de colnias isolada superfcie e/ou no interior do agar aps incubao. Tambm podem ser utilizados meios selectivos e diferenciais para se isolarem, determinados microrganismos, em certas condies. Factores Fsicos / Ambientais que Condicionam o Crescimento Bacteriano O estado fsico de um meio depende da percentagem de gelificante que possui. Os factores fsicos que condicionam o crescimento bacteriano so o oxignio, a temperatura, o pH e a osmolaridade. Os procariotas existem na natureza, sob uma enorme variedade de condies fsicas, tais como a concentrao de oxignio e do io hidrognio (pH), e a temperatura. Os limites de excluso da vida no planeta, com parmetros ambientais, so sempre determinados por alguns microrganismos, a maioria procariotas e frequentemente Archaeon. Oxignio e Crescimento Bacteriano Oxignio e crescimento bacteriano permite inferir que tipo de metabolismo possuem as bactrias, para a obteno de energia. Faz-se uma picada profunda, ao longo do meio de cultura, e observam-se resultados, aps incubao. Aerbios obrigatrios crescem apenas na zona em contacto com o oxignio. Anaerbios obrigatrios crescem apenas no fundo do tubo. Teria de ser realizado em condies de vcuo, para excluir qualquer tipo de oxignio existente. Anaerbios facultativos desenvolvem-se na superfcie e ao longo do meio de cultura. No correcto afirmar que estes seres so aerbios facultativos. Microaeroflicos no crescem na superfcie, mas crescem muito perto dela. Aerotolerantes crescem dispersos por todo o meio de cultura.
Grupo Aerbio obrigatrio Microaerfilo Anaerbio obrigatrio Anaerbio facultativo Anaerbio aerotolerante Aerbio Crescimento Crescimento, se o nvel no for muito elevado Sem crescimento Crescimento Crescimento Anaerbio Sem crescimento Sem crescimento Crescimento txico Crescimento Crescimento Efeito do oxignio Necessrio (utilizada para a respirao aerbia) Necessrio, mas a nveis inferiores a 0,2 atm No necessrio para o crescimento, mas utilizado quando disponvel No necessrio nem utilizado

Defesas antioxidantes enzimticas enzimas que constituem defesas contra o oxignio, em organismos anaerbios: Catalases: ; Peroxidases: ; Catalase-peroxidases; Superoxide dismutases: ; 31

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)


Cat + + + +/Sod + + + +

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Aerbios obrigatrios Anaerbios obrigatrios Anaerbios facultativos Microaeroflicos Anaerbios aerotolerantes

Cmaras e incubadoras de anaerobiose realiza meios de cultura para seres anaerbios obrigatrios (tioglicolato ou cistena, agentes redutores). H a remoo de oxignio, por fervura ou bomba de vcuo e adio de azoto. Palladium permite retirar a totalidade do oxignio, da atmosfera. Temperatura e Crescimento Bacteriano Cada organismo est delineado para crescer sob determinadas condies de temperatura, que podem ser muito diferentes, para seres vivos diferente. Devido pode-se dividir os seres, quanto temperatura em: Psicrfilos sobrevivem a temperaturas compreendidas entre -10C e 20C, cuja temperatura ptima de crescimento 13C (Flavobacterium species); Mesfilos sobrevivem a temperaturas compreendidas entre 10C e 50C, cuja temperatura ptima de crescimento 39C (Escherichia coli); Termfilos sobrevivem a temperaturas compreendidas entre 40C e 70C, cuja temperatura ptima de crescimento 60C (Bacillus stearothermophilus); Hipertermfilos sobrevivem a temperaturas compreendidas entre 65C e 100C, cuja temperatura ptima de crescimento 89C (Thermococcus celer); Hipertermfilos extremos sobrevivem a temperaturas compreendidas entre 80C e 110C, cuja temperatura ptima de crescimento 105C (Pyrodictium). Existem 2 tipos fundamentais diferentes de termfilos: os ancestrais (desenvolvidos em ambientes termoflicos desde o incio) e os recentes (desenvolvidos a partir de organismos mesfilos com adaptaes recentes). As adaptaes que os seres termfilos recentes desenvolveram, para resistir a temperaturas elevadas, so: Membrana citoplasmtica (Bacteria e Eukarya com bicamada fosfolipidca modificada) aumento de cidos gordos saturados, com cadeias de hidrocarbonetos que variam no tamanho (12-24 carbonos); Membrana citoplasmtica (Archaea mais estvel no seu conjunto) ligaes ter entre glicerol e cadeias hidrofbicas (cidos gordos). Estas pontes de ter so mais estveis que as de ster (C40 constitudo por cadeias de 5 carbonos composto de isoprenos). Estrutura compreendida numa bicamada; Protenas (enzimas) substituies crticas de aminocidos, numa ou mais localizaes. Perrmitindo s protenas serem mais densas, e mais estveis. Aumento do nmero de pontes de dissulfito, logo aumentam a estabilidade e restncia. Chaperones so tambm sintetizados (protenas que ajudam outras, a duplicar e, tambm, a reduplicar protenas desnaturadas); Estrutura do RNA RNA termoflico, rico em pares de bases Guaninascitocinas. RNA anormalmente pequeno, sem sequncias extra e com menor possibilidade de duplicaes no-funcionais. pH e Crescimento Bacteriano De acordo com o pH ptimo, de actuao de cada organismo, surgem vrias classes: Acidfilos pH ptimo o cido (1 4,5); Neutrfilos pH ptimo o neutro (5,5 8,5); Alcalfilos pH ptimo o bsico (7,5 11,5). 32

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Osmolaridade e Crescimento Bacteriano Halfilos grupos que se dividem, consoante a percentagem de sal que suportam para permanecerem vivos. No-halfilos Escherichia coli ; Fracos / Halotolerantes suportam 1% 6 % de NaCl (Staphylococcus aureus); Moderados / Halfilos suportam 6% 15 % de NaCl (Vibrio fischeri); Extremos / Halfilos extremos suportam 15% 30 % de NaCl (Halobacterium salanarium). Osmfilos organismos que crescem em ambientes com uma alta presso osmtica. Osmotolerantes organismos que no necessitam de ambientes com uma alta presso osmticas, para se desenvolverem, mas que os conseguem tolerar. Solutos compatveis solutos diferentes que as bactrias utilizam, para conseguir contrariar a osmose de certas substncias vitais, pelo aumento desses solutos. Bactria no fototrfica glicina, prolina (maioria gram-positivo), glutamate (maioria gram-negativo); Cianobactria de gua doce sacarose, trehalose; Cianobactria marinha -glucosilglicerol; Alga marinha manitol, vrios glicosdios, proline, dimetilsulfonio propionate; Cianobacteria de lagos salgados glicina; Bactria fototrfica haloflicas anoxignicas glicina, ectoina, trehalose; Archaea haloflicas extremas KCl; Alga verde haloflica glicerol; Xeroflica glicerol; Fungos filamentosos xeroflicos glicerol. Coleces de Microrganismos Os microrganismos que so trabalhados, em laboratrio, encontram-se em catlogos de coleces de microrganismos, que esto disponveis em todo o mundo e para toda a gente. Bactrias de risco, no so disponibilizados a qualquer pessoa, apenas sob a apresentao de um documento autorizado, feito por uma autoridade governamental. Mesmo assim, os laboratrios, para trabalharem com bactrias de risco muito elevado (patognicos humanos para os quais no existe tratamento), necessitam de ser construdos com segurana de nvel 4 e necessitam ainda de ter autorizaes especiais. Manuteno e Conservao de Microrganismos Refrigerao (4 C) reduo das temperaturas, de modo que os organismos fiquem com um metabolismo muito reduzido. Congelao: Crioproteco (-70 C a -80 C) utilizao de um soluto (5 30 % glicerol) que no seja metabolizado pela bactria; Azoto lquido (-180 C). Liofilizao baixas temperaturas, vcuo e baixa quantidade de gua.

33

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

CINTICA DO CRESCIMENTO BACTERIANO


Crescimento Bacteriano Uma clula jovem, de uma fase jovenil do ciclo de vida, possui 1 cromossoma (replico) e ribossomas espalhados no citoplasma. A clula prepara-se para a diviso, enlongando a sua parede celular, membrana citoplasmtica e volume total. Entretanto no seu interior, a parede desenvolve entalhes que iro, eventualmente, formar o septo transversal. S ento, o cromossoma duplicado torna-se fixo a locais especiais da membrana citoplasmtica. Os 2 replices diferentes, vo-se fixar na membrana citoplasmtica, em lados opostos da clula, enquanto se forma o septo, ficando os cromossomas divididos, fisicamente. O septo da parede cresce para o interior e os cormossomas so puchados para topos opostos da clula, h medida que esta alarga. Outros componentes citoplasmticos so distribudos (aleatoriamente), nas 2 clulas em desenvolvimento. Neste ponto, as 2 clulas-filhas so divididas. Algumas espcies vo separar-se completamente, enquanto outras vo permanecer juntas, formando cadeias ou duplos (por exemplo). Curva de crescimento:

Determinao do nmero de clulas viveis (mtodo da diluio em placa) cada colnia originada, corresponde a uma clula. Correctamente, corresponde a uma unidade, do nmero total de clulas formadas.
60 min 0,1 ml 120 min 180 min 240 min 300 min 360 min 420 min 480 min 540 min 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml 0,1 ml Amostra diluda em meio de agar lquido e espalhada na superfcie do meio slido Placas incubadas, colnias contadas 1 5000 3 15000 7 35000 13 65000 23 115000 45 225000 80 400000 135 675000 600 min 0,1 ml

Nmero de colnias por 0,1 ml Total estimado de populao celular

<1 < 5000

230 1150000

Cintica do Crescimento Bacteriano (nmero de clulas no tempo inicial), (nmero de clulas a determinado tempo), n (nmero de geraes). Esta frmula apenas corresponde fase exponencial, do crescimento de uma bactria. Se uma clula se reproduzir atravs de uma diviso binria, ento a populao duplica com cada nova diviso celular ou regenerao. Este processo pode ser representado por logaritmos ou nmeros.

34

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Graficamente, a produo celular linearizada corresponde a uma linha de crescimento exponencial, enquanto arimeticamente forma uma curva. normal linearizar os grficos, de modo a minimizar a escala do crescimento. Parmetros de Crescimento de uma Populao Bacteriana em Sistema Fechado Tempo de duplicao:
(onde Ni nmero de clulas no tempo inicial ; N1 nmero de clulas no tempo final ; n nmero de geraes)

sendo duplicao, Determinao grfica do tempo de duplicao:

em que

representa o tempo de

Parmetros de crescimento em sistema fechado:

Parmetros de crescimento de uma populao bacteriana, em sistema descontnuo ou fechado: isto como ln2/g constante ser , como o declive de uma recta como ento . e representado por e designado por taxa especfica de crescimento.

Determinao do Nmero de Clulas Para a determinao do nmero de clulas viveis e no viveis utiliza-se: Cmara de contagem de Petroff-Hausser uma pequena amostra colocada numa rede, de baixo de uma cobertura de vidro. As clulas individuais, vivas ou mortas, so contadas. Este nmero pode ser usado para calcular a quantidade total de microrganismos, numa amostra; Contador de partculas Coulter Counter coloca-se a amostra numa sonda imersa e, atravs da sua ligao a uma corrente elctrica, possvel o clculo das clulas, da amostra. Para a determinao e anlise do nmero de clulas, utiliza-se: Citmero de fluxo sonda com um canal, por onde s passa uma clula de cada vez. Existe um emissor e um receptor, que emite um certo comprimento de onda; Fluorescence activated cell sorter (FACS) faz a contagem das clulas e permite separar as populaes, de clulas diferentes, para tubos diferentes. No fim, cada tipo de clulas, est marcada por um fluorocromo diferente.

35

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

No vivel fazer estudos no FACS com microrganismos de crescimento colonial, pois estas no se separam. Logo, necessrio procurar alternativas para essa quantificao. Em alternativa quantificao do nmero de clulas, pode-se determinar a massa celular, por mtodos directos (peso seco) ou por mtodos indirectos (turbidimetria). Determinao da massa celular por turbidimetria espectrofotmetro e fotmetro Klett-Summerson. No espectrofotmetro, d para correr todo o espectro e seleccionar apenas aqele com maior absorvncia, para se fazerem os clculos necessrios. O fotmetro mais arcaico, sendo necessrio um filtro para ser possvel quantificar as clulas, com crescimento planctnico (individualizado), em soluo.
Fonte luminosa Filtro / Prisma Amostra contendo as clulas (onde incide luz) Fotoclula (medida de luz) Gravador (unidades) Espectofotmetro / Fotmetro

Crescimento Colonial e Pleomrfico Pleomrfico com diferenciao. A quantificao de indivduos coloniais atravs de uma amostra proteica, graficamente constitui uma curva muito diferente da exponencial, pois estes seres, em colnia, no se dividem binariamente, apenas vo crescendo, gradualmente. Cultura em Sistema Contnuo ou Aberto Sistema fechado vai ocorrendo a depleco de nutrientes e o aumento de produtos txicos concentrados, o que compromete a cintico normal do crescimento colonial. Sistema contnuo cultura que impede o aumento de produtos txicos, atravs da remoo desse meio e adio de meio fresco. Numa cultura fechada verificam-se, nas vrias clulas, todo o ciclo celular, enquanto numa cultura aberta, as clulas estacionam na fase exponencial. Quimistato controlam o meio de cultura, mantendo as clulas sempre na fase exponencial, pois gere a adio de um nutriente limitativo, no meio de cultura (h meio txico a sair e meio fresco, com quantidade limitante de nutriente essencial, a entrar). A razo de crescimento determinada pela razo de fluxo do meio, atravs do vaso.
Frasco (com meio fresco) Vlvula de controlo Fonte de ar Filtro de ar Vaso de cultura Receptculo

Turbidostato controlo da densidade da cultura, por turbidometria. O princpio diferente do anterior, mas o resultado exactamente o mesmo (pe a cultura em fase exponencial). Culturas Sincronizadas Culturas sincronizadas todas as clulas da cultura esto na mesma fase de crescimento (exponencial). Atravs de repicagens sucessivas, chega-se a uma fase onde todas as clulas se esto a dividir e todas so genetica e metabolicamente idnticas. As repicagens tm de ser sempre entre meios idnticos, ou seja, o meio fresco tem de ser igual ao meio onde as bactrias se encontravam.

36

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

CONTROLO DO CRESCIMENTO BACTERIANO


Mtodos de Controlo do Crescimento Microbiano
Incinerao Seco Dry oven Calor Hmido Agentes fsicos Ionizao Radiao No-ionizante Esterilizao Gases Mtodos de Controlo Microbiano Agentes qumicos Em objectos animados Lquidos Em objectos inanimados Esterilizao Mtodos de renovao mecnica Ar Filtraco Lquido Esterilizao Desinfeco Anti-sepsia Desinfeco Desinfeco UV Desinfeco Sob presso gua em ebulio, gua quente e pasteurizao Raios X, catodos, gama Esterilizao Esterilizao Desinfeco Esterilizao

Esterilizao

Desinfeco destruio ou remoo de patognicos vegetativos, mas no esporos bacteriais, normalmente usado apenas em objectos inanimados, ou seja, a remoo de clulas vegetativas (e no esporos) de superfcies inanimadas. Esterilizao remoo ou destruio completa de todos os microrganismos viveis num objecto inanimado, ou seja, a remoo de todas as clulas (vegetativas e esporos) em objectos inanimados. Anti-sepsia qumicos aplicados a superfcies corporais para destruir ou inibir patognicos vegetativos, ou seja, a remoo de clulas vegetativas (e no esporos), de objectos animados. Mtodos Fsicos para Controlo do Crescimento Microbiano Autoclave esterilizao por calor hmido, atravs do aumento da presso e vapor de gua. Estufa de esterilizao e secagem esterilizao por calor seco. No ocorre aumento de presso nem de vapor de gua. Esta esterilizao por calor nunca pode ultrapassar os tempos de morte trmica, pois tal levaria morte da cultura. Radiaes ionizantes raios gama que podem penetrar numa barreira slida, bombardear a clula, entrar nela e desalojar electres das molculas, o que causa uma quebra na molcula de DNA, ou seja, so capazes de ultrapassar barreiras slidas (esteriliza produtos, que esto dentro de uma embalagem fechada).

37

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Radiaes no-ionizantes radiao ultra violeta, de baixa frequncia, que entra na clula e excita as molculas. Tem um efeito mutacional no DNA, pois forma ligaes anormais. No capaz de penetrar barreiras slidas, ou seja, utilizada apenas para esterilizar superfcies. O efeito das radiaes , essencialmente, ao nvel dos nucleotdios e do metabolismo, pois so induzidas mutaes (devido prolongada exposio radiao) que vo impedir a diviso celular (bacterioestaticismo). No provocam a sua morte imediada, apenas, a longo prazo, quando impedem a sua diviso (bacteriocdio). Sob a aco da radiao ultra-violeta, formam-se dmeros de pirimidinas. Filtrao mtodo mecnico de controlo do crescimento microbiano. Muitas marcas de cerveja no utilizam a pasteurizao, optam antes pela filtrao, para uma melhor conservao do aroma e do sabor da bebida. Mtodos Qumicos do Controlo do Crescimento Microbiano Germicidas (microbicidas) inclui a morte de todos os microrganismos. Desinfectante hipoclorito de sdio, detergentes. Anti-spticos previnem situaes de sepsia (etanol, H2O2, tintura de iodo). Bacteriosttico fungisttico, algisttico. Bactericida os microrganismos morrem mas no entram em lise (desagregao da clula). Fungicidas, algicidas. Bacterioltico os microrganismos podem, ou no, entram em lise celular (bactericida). Os mtodos qumicos de controlo do crescimento esto sob a aco de: Fenis desnaturao proteica; Halognios fortes oxidantes (tintura de iodo, lixvia e betadine); lcoois desnaturao proteica e solubilizao de lpidos; Aldedos inactivao proteica; Surfactantes reduzem a tenso superficial (detergentes, sabes); Metais pesados desnaturao proteica (mercrio); H2O2 oxidao de biomolculas (gua oxigenada). Modos de aco afectando protenas funcionais o estado nativo (funcional) mantido por ligaes, que criam locais activos para encaixar no substrato. Alguns agentes desnaturam as protenas, por quebra de todas ou algumas ligaes secundrias / tercirias.
Calor + Mudana de pH Calor + Mudana de pH Desnaturao completa Forma diferente Local activo deixa de aceitar o substrato, logo a enzima permanece activa

Estado nativo (Substrato + Enzima)

Metais pesados

Bloqueia os locais activos (competidor)

lcois (desinfectantes e anti-spticos) um lcool mais diludo mais eficiente que um mais concentrado, pois a gua permite que entre mais rapidamente o lcool, na clula, de modo a destruir as membranas e organelos da clula (lcol a 100% apenas desidrata a clula, podendo no matar nem inviabilizar). Assim, a aco do mecanismo do lcool depende, em parte, da sua concentrao. Concentraes iguais ou superiores a 50%, so capazes de dissolver as membranas lipdicas, corrompem a tenso supeficial da clula e comprometem a integridade da membrana.

38

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

O lcool , ento, uma excepo regra, pois tem uma grande actividade microbiana a uma concentrao de 70% (30% de gua). Essa actividade maior que num lcool que tenha uma concentrao de 100% (0% de gua), pois apenas desidrata a clula e inibe o seu crescimento, no inibindo, geralmente, a protena coagulante. Aldedos (desinfectantes) glutaraldedo e formaldedo.
Glutaraldedo Polimerizao Poliglutaraldedo Ligao cruzada com a protena microbiana Grupos amino em peptidoglicanos

Surfactantes (desinfectante e anti-spticos) inserem-se na membrana citoplasmtica e destroem a clula (actuam como detergentes). Assim, estes surfactantes inserem-se na bicamada lipdica, interrompendo-a e criando canais anormais que alteram a permeabilidade e causam a fuga de elementos da clula. Metais pesados (desinfectantes) actuam por competio dos locais activos de cofactores, pois ocupam esses lugares quando se ligam enzima. Possuem uma funo oligodinmica (efeitos antimicrobiais em quantidades pequenas). Infelizmente, o uso de metais no controlo microbial possui vrias desvantagens: Toxicidade para humanos e microrganismos se ingeridos, inalados ou absorvidos atravs da pele, mesmo em pequenas quantidades; Causam, normalmente, reaces alrgicas; Grande quantidade de fludos biolgicos que neutralizam as suas aces; Micrbios podem desenvolver resistncia a metais. Devido a este factor, no aconselhvel como desinfectante e anti-sptico, pois para alm do referido pode, tambm, causar bioacumulao nas cadeias alimentares. Perxido de hidrognio (desinfectante) efeitos germicidas devem-se aco, directa ou indirecta, do oxignio. Este oxignio forma radicais livres de hidrxido (OH), que so muito txicos e reactivos, para as clulas. Este composto bactericdia, viricdia, fungicdia e, em grandes concentraes, esporicdias. Mtodos Qumicos de Controlo do Crescimento (Agentes) Agentes antimicrobianos com capacidade teraputica tm de ter uma grande capacidade selectiva, para conseguirem actuar apenas em clulas bacterianas e no prejudicarem o Homem: Antibiticos produzidos por microrganismos; Agentes antimicrobianos sintticos (molcula modificada) e semi-sintticos (molcula orgnica e molcula modificada); Antimetabolitos anlogos dos factores de crescimento. Sulfamidas anlogos dos factores de crescimento. Molcula (sulfanilamida) semelhante a uma vitamina (cido p-aminobenzico) que necessria ao metabolismo bacteriano. Assim, compete com o factor de crescimento (cido flico), pela sua ligao. Antagonismo competitivo (anlogos de factores de crescimento) em vez de adicionarem factores de crescimento, adicionam-se factores de competio, que vo ocupar os lugares de determinadas substncias e acumular-se, comprometendo o crescimento bacteriano. Ou seja, a clula reconhece o anlogo como um factor de crescimento, sem o ser, compromentendo o seu prprio crescimento.

39

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Antibiticos Mecanismos de aco de antibiticos actuam, especificamente, em bactrias. Comprometem a parede celular das clulas, nomeadamente, a sntese de peptidoglicanos, actuando em vrios nveis. Leva destruio da clula.

Espectro de aco de agentes antimicrobianos:

Muitas vezes (principalmente em ambiente hospitalar, sptico), surgem microrganismos resistentes a alguns antibiticos, ou ento multiresistntes. Diferentes mecanismos de resistncia a antibiticos: Inactivao de uma droga, como a penicilina, pela penicilinase (enzima que quebra uma poro de molcula, levando sua inactivao); O receptor que transporta a droga alterada para que, assim, a droga no possa entrar na clula; Membrana proteica, especializada, activada e bombeia, continuamente, a droga para fora da clula; Zona de ligao no ribossoma alterada, para que a droga no tenha efeito; A droga bloqueia a via metablica, no entanto o micrbio origina o mesmo produto, usando uma via alternativa. Metagenmica
DNA genmico heterlogo + Vector de restrio Anlise da funo dada Transformao Anlise da sequncia dada Preparao do DNA clonado Anlise da Sequncia genmica Expresso do gene heterlogo mRNA Transcrio Protena Secreo

Extraco de DNA genmico

Ligao

Vector DNA (E.Coli)

40

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

METABOLISMO BACTERIANO
Metabolismo Metabolismo conjunto total de reaces qumicas, que ocorrem na clula. Catabolismo quebra, de molculas maiores e mais complexas, em molculas mais simples e pequenas. Energia libertada e alguma armazenada e disponibilizada para as necessidades do organismo. Anabolismo sntese de molculas complexas, a partir de molculas mais simples, com o gasto / consumo de energia. Fontes de Energia:
Fototrofia Clorofila ou bacterioclorofila Composto orgnico reduzido Composto inorgnico reduzido Composto orgnico oxidado Composto inorgnico oxidado Energia qumica Trabalho

Quimiorganotrofia

Quimiolitrofia

A maioria dos microrganismos possui uma, de trs fontes de energia: Fototrfico armazenam energia radiante do sol, usando pigmentos, como a bacterioclorofila e clorofilas; Quimiotrfico oxidam redues de nutrientes, orgnicos e inorgnicos, para libertar e armazenar energia; Autotrfico desenvolvem a capacidade de produzir compostos orgnicos, a partir de substncias minerais, utilizando uma fonte de energia externa. Mecanismos para a Obteno de Energia
Respirao aerbica Respirao Anaerbica Fermentao Fotossntese ADP + Pi ATP Trabalho qumico Trabalho de transporte Trabalho mecnico

A energia biolgica armazenada, no organismo, sob a forma de ATP. O ATP formado a partir de energia disponibilizada, durante a respirao aerbia, anaerbia, fermentao e fotossntese. A sua reduo a ADP e fosfato faz com que sejam possveis os transportes e trabalhos mecnicos
Mecanismo Respirao aerbia Metabolismo anaerbio / fermentao Respirao Vias envolvidas Gliclise, Ciclo TCA, transporte de electres Gliclise Gliclise, Ciclo TCA, Transporte de electres Aceptor final de electres Oxignio Molculas orgnicas Vrios ies inorgnicos Produtos ATP, CO2, H2O ATP, CO2, etanol, cido lctico CO2, ATP, cidos orgnicos, H2S, CH4, N2 Tipo de micrbios Aerbios, anaerbios facultativos Anaerbios facultativos, aerotolerantes, anaerbios obrigatrios Anaerbios e alguns anaerbios facultativos

Gliclise Ciclo de Krebs Cadeia respiratria de electres (CTE) Energia de activao para iniciar a degradao da glicose Rendimento energtico Aceptor final de electres Subprodutos do processo

Respirao aerbia 4 2 32 / 34 2 36 /38 Oxignio CO2 e H2O

Fermentao 4 0 0 2 2 cido pirvico cido lctico / Etanol e CO2

41

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011) Respirao Aerbica

Ana Cristina Ribeiro Gomes

A glucose degradada atravs de um processo gradual, que se inicia com o dixido de carbono e a gua, enquanto simultaneamente se extra energia, sob a forma de ATP e NADH.
Via envolvida Gliclise ocorre no citoplasma de todas as clulas Sumrio das substncias que entram Descrio

2 ATP 2 NADH 2 cido pirvico

Gliclise divide a glicose em 2 fragmentos de 3 carbonos (cido pirvico) e produz uma pequena quantidade de ATP. No necessita de oxignio.

cido Tricarboxlico (TCA) ocorre no citoplasma de procariotas e nas mitocndrias dos eucariotas 6CO2 2 ATP 2 FADH2 8NADH

O ciclo dos cidos tricarboxlicos recebe os 3 carbonos (fragmentos de cido pirvico) e processa-os atravs de reaces redox, que extraem os electres de hidrognio. So recebidos via NAD e FAD do transporte de electres para serem usados na sntese de ATP. O CO2 um produto importante do ciclo TCA. (Todas as recaes devem ser multiplicadas por 2, pois a glucose gera 2 cidos pirvicos)

Transportador de electres ocorre na membrana celular de procariotas e nas mitocndrias de eucariotas 34 ATP 6 H2O

O transporte de electres gera uma grande quantidade de ATP. No metabolismo aerbio, o oxignio o aceptor final de electres, combinando-se com os ies de hidrognio para formar gua. No metabolismo anaerbio, o nitrato, o carbonato ou o sulfacto podero actuar como aceptores finais de electres.

Gliclise reaces de decomposio at formao de piruvato. Este processo ocorre no citoplasma e engloba: Fase de activao: a glicose fosforilada por 2 ATP, formando-se frutosedifosfato. A frutose-difosfato desdobra-se em 2 molculas de aldedo fosfoglicrico (PGAL); Fase de rendimento: o PGAL oxidado, perdendo 2 hidrognios, os quais so utilizados para reduzir a molcula de NAD+, formando-se NADH + H. Formamse 4 molculas de ATP. Aps estas reaces, forma-se cido pirvico uma molcula que contm uma elevada quantidade de energia qumica, e que migra para as mitocndrias. No final restam: 2 molculas de NADH, 2 molculas de cido pirvico e 2 molculas de ATP. O piruvato oxidado com a perda do grupo carbonilo, formando-se acetil coenzima A (acetil CoA). A enzima acetil CoA entra num ciclo de reaces, o ciclo do cido ctrico (ciclo dos cidos tricarboxlicos / ciclo de Krebs), que ocorre na matriz mitocondrial. Ciclo de Krebs conjunto de reaces metablicas que conduz oxidao completa da glicose. Ocorre na matriz mitocondrial. Inicia-se com a combinao do grupo acetil da acetilcoezima A com o cido oxaloactico. Seguem-se: 4 reaces de oxidao-reduo. So removidos 8 hidrognios: 6 vo reduzir 3 molculas de NAD+, formando-se 3 NADH; e 2 so utilizadas para reduzir o FAD, originando FADH; 2 descarboxilaes, que conduzem libertao de 2 molculas de CO2; 1 fosforilao, que conduz formao de 1 molcula de ATP. A reaco de acetil CoA com oxaloacetato inicia o ciclo, produzindo cido ctrico. Em cada volta do ciclo so produzidas 2 molculas de CO2, 3 molculas de NADH, 1 molcula de GTP (1 ATP) e 1 molcula de FADH2.

42

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)


Reaco 1 molcula de glucose a 2 molculas de piruvato 2 molculas de piruvato a 2 molculas de acetil CoA 2 molculas de acetil CoA a 4 molculas de CO2 Molculas de CO2 produzidas Molculas de ATP produzidas

Ana Cristina Ribeiro Gomes


Molculas de NAD+ reduzidas a NADH Molculas de FAD reduzidas a FADH2

0 2 4 6

2 ATP 0 2 GTP 4 ATP

2 2 6 10

0 0 2 2

Total

Ocorre cedncia dos electres do NADH e do FADH, a uma cadeia transportadora de electres, ordenados de acordo com os seus potenciais redox; produo de ATP, por fosforilao oxidativa; e formao de H2O, por aceitao dos electres e dos protes, pelo oxignio (aceptor). NAD dinucleotdio de nicotinamida e adenina. Este transportador aceita apenas 1 par de electres, no entanto a reduo a NADH envolve a transferncia de 2 electres simultaneamente, pelo que, na presena de 2 protes (H+), h formao de NADH e de um proto H+, que segue em soluo. NADP tem uma estrutura idntica ao NAD, excepto na presena de um grupo fosfato adicional (2 grupos fosfato). FAD dinucleotdio de flavina e adenina. Este transportador aceita os 2 protes de hidrognio, formando FADH2 ao ser reduzido. Existem vrios transportadores de electres: Citocromos protenas com grupo prosttico heme. Estes transportadores aceitam electres devido presena de ferro no seu interior. Protenas de Fe-S transportadores que transferem, apenas, 1 electro de cada vez. Apesar de conterem mltiplos tomos de ferro, cada centro ferroenxofre apenas pode transportar 1 electro, de cada vez. Ubiquinona / Coenzima Q transportador de electres que, facilmente, se movimenta na membrana citoplasmtica, devido presena de uma cauda hidrofbica de ligao. Capta 1 proto por cada electro, que transporta. Cadeia transportadora de electres sntese de ATP por fosforilao oxidativa. Os protes gerem energia por fora protomotriz.:
Complexo I Complexo II Ubiquinona / Coenzima Q Complexo III Citocromo c Complexo IV O2 (aceitador final de electres com produo de H2O)

Complexo I NADH desidrogenase (NADH-CoQ oxidoreductase). o maior complexo enzimtico respiratrio, que aceita electres do NADH (directamente da matriz) e transfere-os atravs de uma flavina e vrios centros ferro-enxofre para a ubiquinona. Bombeia 4 H+. Complexo II succinato desidrogenase (succinato-CoQ reductase). Complexo respiratrio mais pequeno, que aceita electres do succinato (presente no FADH2) e transfereos atravs do FAD (3 centros ferro-enxofre) para a ubiquinona / coenzima Q. Complexo III citocromo b-c1 (citocromo-c reductase). Dmero com polipeptdios diferentes, onde cada monmero contm 3 hemes e 1 centro ferro-enxofre. Este recebe electres da ubiquinona e passa-os ao citocromo c. Juntamente com a ubiquinona transporta 4 H+ atravs da membrana, por cada 2 electres transportados. Complexo IV citocromo oxidase. Dmero com polipeptdios diferentes. Cada monmero contm 2 hemes tipo A e 2 centros de cobre. Recebe electres do citocromo c e passa 4 electres, de uma vez, ao O2 , produzindo gua. Bombeia 2H+. Respirao Aerbica Vias de Converso de Glucose a Piruvato Todas as vias de converso, de glucose a piruvato, levam produo de piruvato, mas podem, tambm, formar outros produtos, que serviro de precursores a outros processos metablicos. 43

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Via Embden-Meyerhof sntese de ATP ao nvel do substrato. o mais comum e designado de gliclise.

Via das pentoses-fosfato no h sntese de ATP ao nvel do substrato, apenas de molculas redutoras. No produz energia, pois o importante nesta via so os produtos intermedirios formados, uma vez que so constitudos por nmeros variveis de tomos de carbono: Transcetolases; Transaldolases.

Via Entner-Doudoroff exclusivo de alguns grupos de bactrias gram-negativo, que existem no solo (excepo gram-positivo a Enterococcus). Possui 2 vias de reaco (via das pentoses fosfato e via glicoltica). Forma-se ATP, mas o seu balano energtico inferior que na via Embden-Meyerhof.

44

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Ciclo de Krebs / Ciclo dos cidos Tricarboxlicos esqueletos de carbono.


Sucinil coenzima A convertida em cido sucnico e forma coenzima A, esta transformao liberta energia, que capturada sob a forma do ATP Um NADH adicional formado quando o cido mlico convertido em cido ocaloactico, cujo produto final, que entra no ciclo novamente, reage com a acetil coenzima A

2C (molculas de acetil coenzima A) combinam-se com cido oxaloactico, formando citrato (6C)

Citrato muda o arranjo dos tomos, para formar cido isoctrico

cido isoctrico convertido em cido Cetoglutrico (5C), que se liga ao NADH e ao CO2

cido cetoglutrico perde o segundo CO2 e forma outro NADH+ + Sucinil coenzima A

cido sucnico perde 2H+ e 2e-. transformando -se em cido fumrico e formando FADH2

cido fumrico reage com a gua para formar cido mlico

Respirao Aerbica Vias Anfiblicas Vias anfiblicas do ciclo de Krebs vias metablicas que podem actuar numa reaco catablica ou anablica, ou seja, so reaces que utilizam como precursor vrios intermdios do ciclo de Krebs, ou seja, certas substncias que se formam no ciclo de Krebs, servem de iniciadores a outras reaces metablicas da clula. A clula no pode gastar todas essas substncias nas vias anfiblicas, pois necessita de assegurar a continuidade e sucesso da cadeia respiratria, logo existem processos que repem esses diferentes intermedirios. Reaces anaplerticas reaces que repem as substncias intermdias do ciclo de Krebs, que so utilizados em vias anfiblias.

Vias anfiblicas de metabolismo (exemplo):


Cromossomas cidos nuclicos Protenas Amido / Celulose Nucletidios Aminocidos Desaminao Acetil coenzima A NH3 H2O Ciclo TCA CO2

Membranas enzimticas Armazenamento na parede celular

Carbohidratos

Glucose

Gliclise

cido Pirvico

Armazenamento nas membranas

Lpidos / Gordura

cidos Gordos

Oxidao beta

Respirao Aerbica Biossntese de Aminocidos Vias para a metionina, treonina, isoleucina e lisina. Muitas destas converses requerem a participao de vrias enzimas.
Metionina Oxaloacetato Aspartato Aspartato semialdedo Homoserina Treonina Lisina Isoleucina

45

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Sntese de aminocidos aromticos fenilalanina, tirosina e triptofano, que possuem mais que uma reaco enzimtica.
Fenilalanina Prefenato Fosfoenolpiruvato + Eritrose-4-fosfato Siquimato Corismato Antranilato Tirosina triptofano

Reaces de aminao adio de molculas de amnio (grupo amina), onde um carbohidrato pode ser convertido em aminocido.
cido pirvico + NH4NADH -alanina + H2O

Reaces de transaminao transferncia de um grupo amina, de um aminocido para um fragmento de hidrato de carbono, fazendo com que intermedirios metablicos possam ser convertidos em aminocidos, de baixa necessidade.
cido asprtico + cido cetoglutrico (5C) cido Glutmico + cido oxaloactico (4C)

Reaco de desaminao remoo de um grupo amina, onde um aminocido pode ser convertido num intermedirio til ao catabolismo de hidratos de carbono. a forma que as protenas so usadas para derivar energia. Amnia um produto de excreo.
cido glutmico NAD + H2O cido -cetoglutrico + NH4-

Fermentao Fermentao oxidao incompleta da glucose ou outro hidrato de carbono na ausncia de oxignio, ou seja, a degradao anaerbica da glucose. Alcolica o cido pirvico, resultante da gliclise, descarboxilado, originando aldedo actico. Este composto reduzido pelo NADH, formandose etanol. Assim, a degradao da glucose origina etanol; Lctea o cido pirvico, resultante da gliclise, reduzido pelo NADH, originando cido lctico. Assim, a degradao da glucose origina cido lctico. Fermentao do piruvato d origem a uma grande variedade de substncias. Processos quimiotrficos:
Dador orgnico de eDador inorgnico de eAceptor de elctres orgnico e endgeno O2 (respirao aerbica) NO3-, SO42-, CO2, fumarato (respirao anaerbica)

O2, So42-, NO3- (quimiolitotrfico)

Piruvato

Etanol

cido frmico

cido lctico

Acetil coenzima A

Acetilmetilcarbinol

cido oxaloactico

cido acetoactico

cido Actico

CO2 + H2

cido actico

2,3 butanediol

cido sucnico

cido butrico

cido propinico

46

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Fermentao cido mista produz uma combinao de cido actico, lctico, sucnico e frmicos, tendo um pH de mdio a 4,0. Fermentao alcolica e acdica extremamente varivel. Em ambos os casos, o aceptor final de electres um composto orgnico. Ambos os sistemas regeneram NAD, como feedback na gliclise e outros ciclos: cido pirvico descarboxilado a acetaldedo e o NADH reduz acetaldedo a col etlico; Lctica cido pirvico reduzido pelo NADH a cido lctico. Fermentao acdica: Fermentao homolctica o nico composto que se forma o cido lctico; Fermentao heterolctica fermentao mista, que vai para alm do cido lctico como nico produto principal. A colonizao de ambientes anaerbios (rumen) deve-se, ento, fermentao e sua eficincia energtica. Reaco de Stickland o primeiro aminocido oxidado e o segundo actua como aceptor de electres. favorvel ao crescimento de bactrias, em meios ricos em protenas.

Respirao Anaerbia O aceptor final de electres so o NO3-, o SO42- e outros electres aceptores orgnicos. Respirao aerbica:
Composto orgnico CO2 Biossntese (fluxo de carbono) O2 (fluxo de electres) ATP (fora de protes)

Respirao anaerbica:
Composto orgnico CO2 Biossntese (fluxo de carbono) Aceptor de electres orgnicos (fluxo de electres) SO42- (fluxo de electres)

NO3- (fluxo de electres) ATP (fora de protes)

Reduo Desassimilatria do Nitrato Nutrio e NO3- algumas bactrias usam o nitrato como aceptor de electres, no fim da sua cadeia transportadora, e ainda produz ATP. Este processo designa-se por reduo desassimilatria do nitrato. Nitrato pode ser reduzido a nitrito pela nitrato reductase, que substitui o citocromo oxidase: . Toxicidade do NO2 o nitrito formado , tambm, txico. O nitrato reduzido a gs azoto, pelo processo de desnitrificao. Cada nitrato aceitar 5 electres.

47

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Desnitrificao processo com vrias etapas e com a participao de 4 enzimas: nitrato redutase, nitrito reductase, xido ntrico reductase e xido nitroso reductase ). Assim, o nitrato reduzido a nitrito (composto txico que tem de ser removido da clula), logo h uma desnitrificao, do nitrato at azoto atmosfrico. Tal no benfico, e por isso apenas acontece quando o nitrato o aceptor final de electres, na ausncia de oxignio (condies anaerbias). Via assimilatria do nitrato plantas, fungos, bactria:
Nitrato (NO3-) Nitrato redutase assimilativa Repressor NH3Nitrito (NO2-) Nitrato redutase assimilativa Repressor NH3Hidroxilamina (NH2OH) Amnia (NH3) Azoto orgnico (RNH2)

Via desassimilatria do nitrato apenas bactrias:


Nitrato (NO3-) Nitrato redutase dissimilativa Derrepressor anxia Nitrito (NO2-) Amnia (NH3) Reduo dissimilativa da amnia Nitrato redutase dissimilativa Derrepressor anxia Nitrato redutase dissimilativa Derrepressor anxia Inibidores acetilenos ...

...

xido ntrico (para a atmosfera)

Nitrato redutase dissimilativa Derrepressor anxia

xido nitroso (N2O) (para a atmosfera)

Nitrognio (N2) (para a atmosfera)

Respirao de nitrato bactrias desnitrificantes, consideradas anaerbios facultativos, como alternativa respirao aerbia. Este processo, num solo anaerbio, resulta na perda do azoto, do solo, e na sua fertilidade. Respirao de carbonato bactrias metanognicas, que usam o dixido de carbono e o carbonato como aceptor de electres terminal, pois reduzem o dixido de carbono a metano Respirao de sulfato (Desulfovibrio) sulfato actua como aceptor final, nesta bactria. H a reduo a sulfito e 8 electres so aceites: . Obteno de Energia Classificao de organismos, em termos de energia:
Quimiolitotrficos (usa qumicos inorgnicos) Quimioorganotrficos (usa qumicos orgnicos)

Quimiotrficos (usa compostos qumicos como fonte primria de energia) Todos os organismos Fototrfico (usa luz como fonte primria de energia)

Obteno de energia: Respirao aerbia: Respirao anaerbia: Metabolismo quimiolitotrfico:


Compostos inorgnicos CO2 O2 (fluxo de electres) Biossntese (fluxo de carbono) ATP (fora de protes)

Metabolismo fototrfico:
CO2 Biossntese (fluxo de carbono)

Luz

Fluxo de electres

Fora do proto

ATP

48

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011) Metabolismo Quimiolitotrfico Bactrias representativas metabolismo quimiolitotrfico:
Bactria Alcaligenes, Hydrogenophaga e Pseudomonas sp. Nitrobacter Nitrosomonas Thiobacillus denitrificans Thiobacillus ferroxidans Dador de electres H2 NO2 + NH4 0 S , H2S 2+ 0 Fe , S , H2S

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Aceptor de electres O2 O2 O2 NO3 O2 ;

Produtos H2O NO3 , H2O NO2 , H2O 2SO4 , N2 3+ Fe , H2O, H2SO4 ;

Balanos energticos:
; ; ;

Thiobacillus ferrooxidans bactria quimiolitotrfica, cuja energia deriva da oxidao do io ferro, a io frrico, e do io sulfito, a io sulfato. A combinao destas 2 fontes de energia importante, devido s propriedades de solubilidade do ferro ( ). Sistemas Fotossintticos Diversidade de organismos fotossintticos: Organismos eucariotas plantas superiores, algas multicelulares verdes, castanhas e vermelhas e algas unicelulares; Organismos procariotas cianobactrias, bactrias verdes sulfricas, bactrias verdes no-sulfricas, bactrias prpuras sulfricas e no-sulfricas. Propriedades dos sistemas fotossintticos microbianos:
Propriedade Pigmentos fotossintticos Fotossistema II Dador de electres fotossintticos Produo de O2 Energia de produtos primrios Fonte de carbono Eucariotas Clorofila a Presente H2O Oxignica ATP + NADPH CO2 Cianobactria Clorofila a Presente H2O Oxignico ATP + NADPH CO2 Bactrias verdes e prpuras Bacterioclorofila Ausente H2, H2S, S, matria orgnica Anoxignico ATP Orgnico / CO2

Estrutura das clorofilas apenas um grupo laterado para produzir clorofila b. necessrio existirem, na clorofila, duas modificaes no sistema em anel, para formar bacterioclorofila a. Equao geral: . Bactrias fotossintticas: . Na equao no aparecem as molculas de NADPH e ATP, que tambm so produtos, pois estes esto constantemente a ser sintetizados e degradados. As cianobactrias tm um processo fotossinttico muito semelhante ao das plantas superiores, ou seja, o dador de electres a gua e o produto final oxignio.
Luz Reaces de Luz Reaces de Assimilao de carbono
Hidrato de Carbono

Reaces de luz custa de fotes de luz, a gua degradada, libertando-se oxignio. Passam por uma srie de reaces, que originam NADPH e ATP. Ocorre ao nvel dos tilacides, e constitui a fase dependente da luz (plastoquinona, ferrodoxina); Reaces de assimilao do carbono o CO2 utilizado para a produo de hidratos de carbono. 49

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Reaco de Hill: . O trabalho de Hill foi completado por Ochoa, que verificou o O2 como sendo um produto: . Os pigmentos fotossintticos (clorofila, ficobilinas, carotenos, lutena) esto organizados em fotossistemas, localizados nas membranas dos tilacides, nos cloroplastos. Fotossistema centro de reaco constitudo por um complexo de antenas, onde se encontram pigmentos fotossintticos que absorvem a luz e a transmitem a um par especial de clorofilas (centro de reaco do fotossistema). Cada fotossistema constitudo por um conjunto de pigmentos antena e um centro de reaco (par de molculas clorofila a). Complexo antena colector de energia luminosa, na forma de electres excitados. Esta energia transmitida para um par especial de molculas de clorofila II (PSI, P700, e PSII, P680), no centro de reaco fotoqumico. produzido um electro de alta energia que pode ser passado, rapidamente, para a cadeia transportadora de electres, na membrana tilacoidal. Quando um foto atinge um tomo, um dos electres salta para um nvel de energia superior, ficando num estado excitado. Os electres excitados podem regressar ao nvel energtico inicial (estado fundamental), libertando a energia sob a forma de calor ou de luz. Os pigmentos passam entre si a energia do foto at chegar ao par do centro, levando a que um dos fotes da clorofila seja excitado e ejectado para fora deste fotossistema. Os electres excitados podem ser cedidos a outras molculas vizinhas (aceptores), conduzindo a uma reaco fotoqumica na qual a molcula que perde os electres fica oxidada e a aceptora fica reduzida (reaco oxidao-reduo). Aps a excitao do foto o centro fica, momentaneamente, com carga positiva, de forma a ter capacidade para aceitar outro electro (carga negativa). Sistemas Fotossintticos Fluxo Linear (No Cclico) de Electres, na Cadeia Fotossinttica Inicia-se no fotossistema II (P680). H perda de electres, logo sero repostos para que se consiga manter a fotossntese. Ora, perto dos tilacides existe um complexo, que envolve a produo de O2, pois promove a fotlise / degradao da gua. Liberta-se oxignio, protes e electres, que sero cedidos ao P680, fazendo com que o ciclo se mantenha. A energia luminosa captada pelos pigmentos fotossintticos, sendo transferida para a clorofila a, dos centros de reaco. Os electres so transferidos para uma molcula aceptora, ficando a clorofila a oxidada e a molcula aceptora reduzida. Os electres captados so transferidos ao longo de uma cadeia transportadora de electres, at serem captados pelo NADP+, provocando a sua reduo a NADPH. Os electres captados vo percorrer uma cadeia transportadora de electres, ao longo da qual o nvel de energia vai diminuindo, sendo captados pela clorofila a do fotossistema I, que readquire os electres perdidos, devido excitao pela luz. Ao longo da cadeia transportadora de electres, verificam-se reaces de oxidaoreduo, que conduzem libertao de energia, utilizada para a fosforilao do ADP, formando-se ATP: . Clorofila a do fotossistema II, que ficou oxidada, readquire os seus electres atravs da fotlise da gua: .
Fosforilao da gua (e-) Excitao pela luz no P680 e- no estado excitado Plastoquinona Complexo (criao de um gradiente de protes) NADP+ oxidorreductase Plastocianina ...

...

P700 (excitao pela luz)

e- no estado excitado

Filoquinona

NADP+

NADPH

Fotofosforilao presena de ATP sintase para a fosforilao. Esta ATPase idntica das mitocndrias, no entanto o processo de fosforilao do ADP (ADP + P i = ATP) feito na presena de luz (Fotofosforilao) e no recorre a O2. 50

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Sistemas Fotossintticos Fluxo Cclico de Electres, na Cadeia Fotossinttica Forma glicose, rapidamente, pois produz mais ATP, por unidade de segundo. Os pigmentos do fotossistema I captam a energia luminosa, que transferida para a clorofila a, do centro de reaco. Quando excitada, transfere os seus electres para um aceptor. Os electres percorrem uma cadeia transportadora, ocorrendo um conjunto de reaces de oxidao-reduo, que conduzem libertao de energia, para formar ATP. No final da cadeia, os electres voltam ao centro de reaco do fotossistema I, sendo assim um fluxo cclico de electres. Sistemas Fotossintticos Ciclo Fotossinttico de Fixao do Carbono / Ciclo de Calvin O Ciclo de Calvin apresenta 3 fases: fixao do CO2; produo de compostos orgnicos; regenerao da ribulose difosfato. uma fase que no depende da luz. 3 molculas de CO2 vo combinar com 3 molculas de ribulose 1,5-difosfato, originando 6 molculas de 3-fosfoglicerato + 3 carbonos (para ser mais estvel). Este fosfoglicerado vai ser fosforilado, ou seja, usam-se 6 molculas de ATP, que cedem 1 fosfato ao fosfoglicerato, originando 6 molculas de ADP e 6 molculas de 1,3 difosfoglicerato + 3 carbonos. Com o uso de NADPH, a 1,3 difosfoglicerato, ser desfosforilada (NADPH NADP+ + + H ) formando-se 6 molculas de glicerato 3-fosfato + 3 carbono. Esta triose seguir 2 trajectos. A enzima que origina o ciclo de Calvin designa-se rubisco (ribulose 1,5 difosfato carboxilase / oxigenase). A reaco, na qual o dixido de carbono convertido num carbono orgnico, catalisada no estroma devido abundncia da enzima rubisco. Primeiro trajecto da triose ir para o citosol, de modo a produzir sacarose. Esta passagem da triose implica a presena, ao nvel do citoplasma, de um fosfato inorgnico e de uma protena de antiporte, na membrana do cloroplasto. O que determina a separao entre a sntese de amido e de sacarose a concentrao deste fosfato inorgnico: Concentrao elevada passa para o citoplasma e produz-se sacarose; Concentrao baixa mantm-se no estroma e produz-se amido. Segundo trajecto da triose continua o ciclo de Calvin, de modo a ser mantido, formando-se, de novo, 3 molculas de ribulose 1,5 difosfato (rubisco).

51

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

CICLOS BIOGEOQUMICOS
Ciclos Biogeoqumicos Ciclo biogeoqumico fluxo cclo de elementos, ou compostos qumicos, catalizados por agentes biticos e abiticos da biosfera. Principais formas qumicas do carbono, azoto, enxofre e ferro:
Ciclo C N S Fe Componente gasoso significante Sim Sim Sim No Formas maioritrias Formas de estados oxidativos intermdios Monxido de carbono (CO) Gs azoto (N2) Elemento de enxofre (S )
0

Formas reduzidas Metano (CH4) Amnia (NH4+, N orgnico) Sulfido de hidrognio (H2S, grupos SH, matria orgnica) 2+ Io ferroso (Fe )

Formas oxidizadas CO2


(NO2 )

xido nitroso (N2O) Tiosulfato (S2O3 )


2-

Nitrito

Nitrato (NO3 ) Sulfato (SO4 ) Io frrico (Fe )


3+ 2-

Sulfito (SO3 )

Importantes substratos orgnicos na biosfera:


Substrato Amido Celulose Hemicelulose Lignin Chitin Protena Hidrocarbono Lpidos Biomassa microbiana cidos nuclicos Unidade bsica Glucose Glucose Monossacardios C6 e C5 Fenilpropeno N-acetilglucosamina Aminocidos Aliftico, cclico, aromtica Glicerol, cidos gordos, alguns tm fosfato e azoto Bases purinas e pirimdicas, acares, fosfato Ligaes (se crtico) (14), (16) (14) (14), (13), (16) Ligaes C-C, C-O (14) Ligaes peptdicas steres, teres Variedade Ligaes fosfodisteres e N-glicosdicas Elementos presentes C H O N P + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Degradao Com O2 Sem O2 + + + + + + + + + + + + +/+ + + + + +

Ciclo Biogeoqumico do Oxignio Fotossntese: Respirao: O2 CO2 H2O


Plantas, algas e algumas bactrias Acares e outras molculas orgnicas

. . CO2
Maioria dos organismos vivos

O2 H2O

Energia da luz solar

Ligaes qumicas energticas teis

Ciclo Biogeoqumico do Azoto Os eucariontes e fungos necessitam do azoto orgnico, no entanto as plantas necessitam de nitrato. O azoto o constituinte das protenas, DNA, RNA e clorofilas. O azoto atmosfrico constitui cerca de 80% da atmosfera terrestre. O NH4+ (amnia) e NO3 (nitrato) so as formas absorvidas pelas plantas.

52

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Nitrificao Fixao do azoto

Nitrito Azoto molecular

Nitrato xido nitroso NO NO2NO3-

Amnia

Amonificao

Azoto orgnico

Reduo assimilatria do azoto

Nitrificao reduo do nitrito a nitrato. Nitrogenase ocorre apenas em procariontes. Processo capaz de converter o azoto (N2 molcula com 3 ligaes altamente estvel) em amnia. Necessita de grandes quantidades de energia para ocorrer, mas favorvel / compensa, por ser uma molcula muito importante. um processo inibido pelo oxignio, por isso s actua em condies de anaerobiose (sem oxignio): . Reaco anammox (Anaerobic Ammonium Oxidation) ciclo do azoto simplificado. Fluxo que ocorre, predominantemente, sob condies xidas e anxidas.

Fixadores de azoto atmosfrico (N2): free-living : aerbios ; anaerbios Simbiticos : o Rizbios (Frankia) ndulos (estruturas anlogas s razes) radiculares. o Cianobactria, razes coralides. Ciclo Biogeoqumico do Carbono O ciclo do carbono costitudo por 2 processos essenciais: respirao e fermentao. A fixao de carbono pode ocorrer atravs da actividade fotoautotrfica e quimioautotrfica. Metano pode ser produzido atravs de substratos inorgnicos ou a partir de matria orgnica. Monxido de carbono regressa ao ciclo, atravs da oxidao bacteriana.

Ciclo Biogeoqumico do Fsforo O fsforo entra no solo e gua atravs das rochas, fertilizantes com fsforo e resduos da superfcie de degradao das plantas.

53

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Plantas e micrbios convertem, rapidamente, fsforo inorgnico sua forma orgnica, causando imobilizao. No entanto, muito do fsforo no solo pode atingir vrias distncias ou formar complexos com caties para constituir compostos, relativamente, insolveis. O fsforo o constituinte de protenas, DNA, RNA e ATP. O fosfato (PO 4) constitui a sua forma solvel.

Ciclo Biogeoqumico do Enxofre Microrganismos fotossintticos e quimiossintticos contribuem para o ciclo ambiental do enxofre. Redues do sulfato e sulfito so processos dessimilatrios. Reduo do sulfato tambm pode ocorrer em reaces assimilatrias, resultando em formas de enxofre orgnico. Oxidaes do enxofre podem ser feitas por uma variedade de quimiotrficos aerbios e fototrficos aerbios e anaerbios. O enxofre um componente de protenas (incorporado em aminocidos como a cistena). O H2S e o vapor de gua formam H2SO4 , que origina a chuva cida.

Ciclo Biogeoqumico do Ferro Diferentes grupos microbianos realizam a oxidao do io ferroso, dependendo das condies ambientais em que habitam. A oxidao do io frrico, e a reduo do io ferroso, importante para este ciclo, que necessita da presena do complexo nitrogenase redutase.

54

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

MECANISMOS DE VARIAO GENTICA


Tipos de Mutaes A variao, da constituio dos cromossomas, essencial para a evoluo, variabilidade dos organismos e capacidade para encontrar solues para certas desvantagens. Microleses mutaes pontuais. Macroleses mutaes num nmero considervel de pares de bases ou em cromossomas inteiros: inseres, deleces, inverses, duplicaes, translocaes. Mutaes espontneas ocorrem durante a replicao: Hiptese das mutaes adaptativas / direccionadas quando uma cultura, que no cresce num composto, inserida numa outra cultura, formada pelo conjunto desse mesmo composto e outro, do qual a bactria necessita para crescer. Com o passar do tempo, existem bactrias que o passam a englobar; Hiptese da hipermutao quando encontram condies desfavorveis, os genes mutagnicos vo promover uma maior taxa de mutao. Revertendo ao fentipo selvagem (num curto espao de tempo ocorrem muitas mutaes). Mutaes induzidas ocorrem na presena de um agente mutagnico (fsico ou qumico), que induz a mutao. Agentes mutagnicos qumicos: anlogos de bases, modificaes qumicas, agentes intercalares (3,6-dimetilaminoacridina); Agentes mutagnicos fsicos utilizados como estratgia para controlar o crescimento bacteriano. A sua exposio prolongada pode ter consequncias graves na cultura. Mutaes reversivas quando ocorrem, anulam uma mutao ocorrida anteriormente, ou seja, a regresso estirpe selvagem. Mutaes supressoras ocorrem em locais diferentes, ou seja, a segunda mutao ocorre num local diferente da primeira mutao, mas consegue suprimir a mutao anterior: Intragnicas ocorrem em locais diferentes, mas no mesmo gene; Extragnicas ocorrem em locais e genes diferentes. Mutaes morfolgicas e bioqumicas mutantes auxotrficos. Mutaes letais induzem a morte da clula: Mutaes condicionais dependentes das condies que regulam a expresso da regio mutada, ou seja, a mutao est dependente das condies que regulam a expresso da regio em causa. Se estas forem desfavorveis, o gene letal, mas se forem favorveis, o gene incuo. Mutaes silenciosas ocorrem numa regio que no codifica uma protena. Pode ser numa zona que controla a expresso proteica, de outro local. Mutaes sinnimas ocorrem mas no tm implicaes na protena formada, ou seja, a mutao codifica o mesmo aminocido (numa zona codificante). Mutaes neutras aminocido diferente, mas quimicamente semelhante, ou seja, mutao que leva alterao de um determinado aminocido por outro, quimicamente, semelhante (apolar ou hidrofbico, nos dois casos, por exemplo). Assim, h alterao no perfil (aminocido diferentes), mas, quimicamente, so semelhante, logo no tm implicaes. Mutaes no sinnimas levam formao de aminocidos quimicamente diferentes o que altera a totalidade da expresso proteica (forma uma protena diferente ou inactiva). Mutaes sem sentido mutaes que levam interrupo da transcrio (formam codes STOP, UAG, UGA, UAA ou sem sentido). Podem no ter significados a nvel funcional, mas faz com que a transcrio acabe antes do que era previsto,o que pode no ser grave. Mutaes por mudana da matriz (indels) o segundo nucleotdio passa a primeiro. Isto altera toda a sequncia, quando os nucleotdios afectados so em nmero diferente de 3, ou seu mltiplo. 55

DIMENSO

GNESE

REGRESSO

FENTIPO

TIPOS FUNCIONAIS

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Teste de Ames Utilizado em microrganismos que possuem membranas citoplasmticas muito permeveis, logo no constituem uma barreira fsica que impea a entrada desses agentes, no seu interior. Permitindo, ento, identificar muitos dos agentes mutagnicos existentes. Existem determinados compostos que s possuem actividade mutagnica / toxicidade, aps a sua passagem pelo fgado, assim de forma a ser averiguado se esses agentes so desse tipo, para alm do teste normal, faz-se um onde se adiciona extrato de fgado.
Cultura em placas - meio mnimo + pequena quantidade de histidina Revertentes espontneos

Cultura de Salmonella histidina auxotrficos (maior permeabilidade da parede celular e deficientes para a reparao do DNA)

Cultura em placas - meio mnimo com teste mutagnio e uma pequena quantidade de histidina

Revertentes induzidos pelo mutagneo

Teste com extracto de fgado / aflatoxinas

Transferncia de Genes Transferncia vertical de genes (VGT) a mutao ocorre numa clula onde no tem efeito. Na sua passagem descendncia, adquire consequncias podendo ser letal. Transferncia horizontal / lateral de genes (HGT) conjugao, transformao e transduco originam um elemento exgeno, que englobado / incorporado na clula (merozigoto clula que encorporou um elemento extracromossomal). Ao entrar na clula podem ocorrer 4 fenmenos: Integrao do elemento extracromossomal no prprio genoma da bactria; Clone diplide parcial os 2 genomas esto, parcialmente, funcionais no clone Clula diplide parcialos 2 genomas esto, parcialmente, funcionais na clula Restrio do hospedeiro o genoma exgeno fica fragmentado, na clula hospedeira.
Exogentipo integrado Clone diplide parcial Merozigoto Clula diplide parcial Restrio do hospedeiro

Exogentipo + Endogentipo

Conjugao Transformao Transduco

Transferncia lateral de genes:


Modo Conjugao Factores envolvidos Clula dadora com pilus Plasmdeo de fertilidade, no dador Dador e recipiente vivos Forma-se uma ponte entre as clulas, para se transferir o DNA DNA dador livre (fragmento) Clula recipiente, competente, viva Dador uma clula bacterial em lise Bacterifago defectivo carrega o DNA, do dador Clula recipiente da mesma espcie que o dador Directo / Indirecto Directo (dador e recipiente esto em contacto, durante a troca) Indirecto (dador e recipiente no esto em contacto, durante a troca) Indirecto (dador e recipiente no esto em contacto, durante a troca) Exemplos de genes transferidos Resistncia a frmacos e metais, produo de toxinas, enzimas, molculas aderentes, degradao de substncia txicas, absoro de ferro Cpsula de polissacardios, diversos exemplos consoante a tcnica de clonagem Toxinas, enzimas para a fermentao do acar, resistncia a frmacos

Transformao Transduco

Recombinao Recombinao homloga a integrao s processada quando o elemento extracromossomal tem homologia / similaridade com certas regies, da clula hospedeira. Recombinao no recproca a homologia ocorre apenas entre uma cadeia de DNA. 56

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Associao de segmentos homlogos

Separao de cadeias e formao de pares

Endonuclease liga-se cadeia do dador

Endonuclease liga-se cadeia hospedeira

Lacunas, na cadeia, so preenchidas e ligadas

Recombinao stio-especfica mediada por bacterifagos. Reconhece zonas especficas do cromossoma, onde vai ser integrado. Transposio nico mecanismo de integrao do elemento extracromossomal onde no necessrio existir homologia entre esse elemento e os elementos cromossomais. Transposio Transposes (Tn) elementos genticos mveis. So mveis e podem saltarentre zonas do mesmo cromossoma, entre plasmdeos e cromossoma ou vice-versa, deixando, ou no, uma cpia para trs.
Transposo inserido no cromossoma Transposo + Plasmdeo recebido de outra clula Transposo insere-se nas cadeias do cromossoma, da clula hospedeira Transposo move-se de local para local, no cromossoma Transposo cromossomal regular salta para diferentes locais do cromossoma ou para plasmdeos Transposo removido e inserido num plasmdeo Plasmdeo com o transposo transferido para outra clula

Replicao do transposo

Insero em outros locais do cromossoma ou em plasmdeos que vo infectar outras clulas

Sequncias de insero (IS) transposes mais simples. Caracterizados por terem apenas 1 gene, que codifica uma enzima (transposase) capaz de abrir a cadeia de DNA e englobar a nova sequncia. Cada sequncia de insero tem o inverted repeat especfico (motivos repetitivos directos que pertencem ao cromossoma, e no ao transposo). O que varia, nestas sequncias, so os motivos de repetio directa (sequncias iguais mas orientadas para locais opostos). Os transposes possuem mais pares de bases que as sequncias de insero.

Quando os transposes saltam, existem genes que ficam aprisionados entre as 2 sequncias que delimitam o transposo (transposo composto). Quando voltam a saltar, esses genesa prisionados, tambm acompanham esse movimento. Este fenmeno corta e passa as sequncias, podendo deixar, no seu local anterior, uma cpia. Transposio simples:
TE (de algumas centenas a vrios milhares de pares de base) Transposase reconhece as repeties invertidas e quebra, em ambas as extremidades do elemento transposvel, libertando-o do local original Transposase carrega a TE para o novo local, quebrando a cadeia de DNA respectiva DNA de reparao sintetiza a sua reparao Cadeia de DNA com o elemento transposvel, entre repeties directas

Transposio replicativa inclui o gene resolvase:


Plasmdeo, com o elemento transposvel, e o DNA alvo, com a sequncia alvo Transposase quebra ,nas extremidades da sequncia alvo, e as cadeias so mudadas e ligadas, formando um cointegrado Os intervalos so preenchidos com DNA polimerase e ligados atravs da DNA ligase Resolvase cataliza recombinaes entre os dois elementos, o que faz com que se formem 2 estruturas separadas, cada um com uma cpia do elemento transposvel

57

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Conjugao Conjugao transferncia horizontal de genes, mediada por plasmdeos conjugais. Est dependente do tipo de plasmdeos. Conjugao fsica:
O pilus da clula dadora fixa-se no receptor na clula recipiente e retrai para que as duas clulas permaneam juntas Uma abertura ou poro entre as duas paredes celulares, cria uma ponte (de conjugao) para transmitir o material gentico

Epissomas plasmdeos com capacidade para serem englobados, no cromossoma. F plasmide (fertiliti plasmide) tranferncia do factor F:
Forma-se uma ponte de conjugao entre a clula F+ (dadora, tendo o plasmdeo o factor F) e a clula F- (recipiente) Factor F copiado passa atravs da ponte de conjugao, para a clula FTranferncia apenas do factor F ou do plasmdeo conjugativo Clula F-, por ter recebido o factor F, torna-se numa clula F+

Factor F da clula F+ copiado

HFR (high frequence recombination) passagem de todo o cromossoma (com o factor F). Por vezes, no existe tempo suficiente de contacto para que, todos os genes, consigam ser transferidos, pois a ponte entre as 2 clulas parte-se, ficando a clula F- com a mesma constituio inicial (s apenas com alguns genes HFR, mas que no so suficientes para se converter numa dessas clulas):
Clula dadora (clula Hfr) possui o factor F integrado no cromossoma A clula Hfr liga-se clula recipiente atravs do pilus Donao de genes incompleta e interrompida Clula recipiente com parte do cromossoma da clula dadora (que pode englobar o gene Hfr, o factor F ou ambos)

Cpia parcial do cromossoma dador

Ponte quebrada

Tranferncia de alta frequncia (Hfr) envolve a transmisso dos genes cromossomais, de uma clula dadora para uma clula recipiente. O cromossoma dador duplicado e transmitido, em parte, para a clula recipiente, onde integrado no seu cromossoma. Sistema de secreo Tipo IV ocorre em bactrias gram-negativas. Experincias de Frederick Griffith existia alguma coisa que era tranferida, das clulas mortas para as vivas, fazendo com que estas resistissem aos macrfagos. Essencialmente, esta experincia provou que a libertao de DNA, de uma clula morta, pode ser requerida por uma clula viva. A clula que recebe este novo DNA geneticamente transformada, neste caso, de uma estirpe no virulenta para uma virulenta. Colnia de bactrias lisas, devido presena de cpsula (presena da cadeia S) injeco num rato rato morre; Colnia de bactrias rugosas, devido ausncia de cpsula (presena da cadeia R) injeco num rato rato sobrevive; Colnia de bactrias com cadeia S, mortas por aco do calor injeco no rato Rato sobrevive; Colnia de bactrias com cadeia S, mortas por aco do calor + Colnia de bactrias com cadeia R injeco no rato Rato morre (rato possui Bactrias de cadeia S e R).

58

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Transformao Transformao aquisio de DNA que pode ser, ou no, atravs de um plasmdeo. Tranformao com fragmentos de DNA:
Integrao por recombinao no-recoproca Fragmentos de DNA livres + Cromossoma bacterial Absoro dos fragmentos de DNA pela clula bacterial Degradao Transformao sem sucesso Transformao estvel

Transformao com um plasmdeo:


Plasmdeo de DNA livre + Cromossoma bacterial Absoro do plasmdeo pela bactria Transformao estvel

Estado de competncia induzido quando uma clula levada a sintetizar protenas necessrias, para englobar fragmentos lineares ou circulares. Ou seja, uma clula capaz de englobar uma molcula de DNA e ser transformada. Estas protenas especficas podem ser incluidas na ligao de protenas no DNA e provocar a autlise da parede celular. Electroporao Electroporao transferncia por meios fsicos. Pequenos poros so produzidos nas membranas citoplasmticas, das clulas expostas a campos de pulsos elctricos. Quando a molculas de DNA est presente fora da clula, durante o pulso elctrico, elas podem entrar atravs desses poros. Electroporao requer um poder sufisticado porque o pulso tem de ser, cuidadosamente, controlado e durar apenas milisegundos. Esta tcnica foi usada para transportar DNA, num grande nmero de diferentes espcies de procariotas, archaea e bacteria. Para alm disso, a electroporao permite a transferncia de plasmdeos, directamente de uma clula para outra, se as duas estiverem presentes aquando a electroporao, assim, permite que pequenas molculas de DNA saiam das clulas e sejam capazes de entrar. Este tipo de transformao elimina os passos necessrios para isolar o plasmdeo da primeira cadeia, antes de ser introduzido na segunda. Transduo Transduo transferncia lateral, mediada por vrus. Necessitam de hospedeiros para se reproduzirem. Ciclo ltico (fagos virulentos) o fago entra na clula e utiliza o seu metabolismo para produzir outros fagos que, quando so libertados, vo infectar outras clulas.
Fago DNA + Clula bacterial Fago injecta o seu DNA no citoplasma da bactria Fago de DNA direcciona a sntese de vrios fagos novos Clula entra em lise e liberta todos os novos fagos Os novos fagos podem ligar-se a outras clulas bacteriais.

Ciclo lisognico (fagos temperados) o fago englobado no DNA celular, ficando em estado de latncia (profago), quando possui condies favorveis entra num ciclo ltico.
Fago de DNA integra-se no cromossoma hospedeiro, formando um profago Profago de DNA copiado quando a clula se divide Exposio ao stress biolgico (luz UV), desencadeia a exciso do cromossoma hospedeiro Libertao dos novos fagos, pela lise celular, que vo infectar outras bactrias

Fago DNA + Clula bacterial

Fago injecta o seu DNA no citoplasma da bactria

Profago em estado de latncia

Induo da sntese de novos fagos

59

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

FUNGOS E SUAS CARACTERSTICAS


Fungos Eucariticos dintiguem-se das bactrias procariticas. No fotossintticos distinguem-se das algas e plantas fotossintticas. Ciclo assexual esporos formados por mitose (mitsporos). Ciclo sexual esporos formados por meiose (meisporos). Existem em todos os habitats podem viver no interior ou superfcie de plantas e no interior de insectos ou do solo. Sere heterotrficos para o carbono. Realizam propagao e disperso por meio de esporos. A maioria possui uma parede celular rgida e um miclio. Existem fungos macroscpicos e microscpicos (leveduras unicelulares) e as espcies podem ser isolveis em meios de cultura, ou s isolveis por meios moleculares. Podem ser permanentes e ocasionais. E existem espcies saprofticas, parasitas e simbiticas (facultativos e obrigatrios).

Fungos e Sua Classificao Pseudomicetos agrupamento artificial com vrias divises e proveniente de vrias linhas evolutivas. No so verdadeiros fungos, mas o seu ciclo de vida muito semelhante ao deste grupo. Divises principais: Myxomycota (Acrasiomycetes; Dictyosteliomycetes; Myxomycetes); Plasmodiophoromycota; Hyphochytriomycota; Oomycota. Eumicetos (Reino Fungi ou Eumycota) agrupamento natural que constitui um grupo monofiltico, com vrias divises. Derivam de um ancetral comum, que est possivelmente relacionado com protozorios. Divises principais: Chytridiomycota grupo polifiltico mais primitivo; Zygomycota grupo polifiltico; (Deuteromycota); Ascomycota grupo monofiltico mais evoludo; Basidiomycota grupo monofiltico mais evoludo ( um categoria irm da anterior, que se dividiram a partir de um antepassado comum j extinto. Apesar de se terem desenvolvido paralelamente e de terem, praticamente, o mesmo tempo, possuem diferenas importantes nos seus ciclos de vida). A nomenclatura dos fungos semelhante nomenclatura botnica (regras), mas por vezes possui terminaes diferentes (nas categorias superiores).

60

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

COMPRIMENTO RELATIVO

Tipos de Flagelos (Pseudomicetos e Eumicetos) Heterocnticos comprimento desigual. Isocnticos comprimento semelhante. MORFOLOGIA Acronemticos lisos, sem mastigonemas (plos), tipo chicote. EXTERNA Pantonemticos ornamentados, com mastigonemas (plos), tipo plumado. LOCAL DE Acrocnticos parte anterior da clula. INSERO Opipstocnticos parte posterior da clula. Exemplos representativos de tipos de clulas flageladas em fungos: Plasmodiophoromycota 2 flagelos acronemticos; Hyphochytriomycota 1 flagelo pantonemtico acrocntico; Oomycota 1 flagelo pantonemtico e 1 flagelo acronemtico; Chytridiomycota 1 flagelo acronemtico opistocntrico. Com a passagem para o meio terrestre, as clulas vo perdendo os flagelos, pois no tm funo neste ambiente. Desta forma, os Eumycotas no possuem flagelos, com excepo dos seres aquticos. Diferenas entre Pseudomicetos e Eumicetos Pseudomicetos presena de celulose na parede, sntese da lisina pela via DAP (cido diamnopimlico), ausncia de poliis, rRNA 25s, flagelos acronemticos ou pantonemticos, flagelos acrocnticos ou inseridos lateralmente. Eumicetos presena de quitina na parede, sntese da lisina pela via AAA (cido aminoadpico), presena de poliis, rRNA 25s, flagelo acronemtico opistocntico. Para alm destas caractersticas existem, tambm, as principais deste grupo: organizao tipicamente miceliana, nutrio osmotrfica, glicognio como substncia de reserva, interpolao de uma dicariofase entre a haplofase e a diplofase. Parede Celular dos Fungos A parede celular dos fungos possui uma forma universal (excepto em somas plasmodiais e clulas flageladas), no entanto mais rgida (mas permevel) o que confere resistncia s clulas e permeabilidade passiva. A sua matriz celular possui protenas, -glucanas e mananas. Esta estrutura formada por fibrilhas de celulose, intercaladas e embebidas numa matriz (camada interna). Fibrilhas constituidas por quitina / quitosano (em Eumicetos), por -glucanas (em Eumicetos) e por celulose (em Pseudomicetos). Quitina polmero N-acetil-D-glucosamina, com ligaes -(1,4), cujas cadeias possuem um nmero elevado de unidades e as fibrilhas so formadas por feixes de cadeias. Constitui uma vantagem evolutiva; Quitosano polmero de N-acetilglucosamina, parcialmente, desacetilado; -glucanas polmeros de glucose, com ligaes -(1,3) e -(1,4). Nos Ascomicetos e Basidiomicetos as fibrilhas de quitina so inter-ligadas por glucanas. Nos Zigomicetos, as fibrilhas de quitosano so inter-ligadas por polissacardios, contendo cido glucurnico e acares neutros. A constituio qumica da parede celular constitui um marcador taxonmico, pois possui celulose nos Pseudomicetos e quitina nos Eumicetos (excepo dos Hyphochytriomycetes que possuem celulose e quitina e os Zygomycetes que possuem quitosano). As leveduras possuem quitina residual, apenas no septo, e, tambm, mananas.

61

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Fungos Septos Hifais O facto de determinado fungo possuir septos traduz uma vantagem evolutiva pois aumenta a sua resitncia e impede que todo o organismo morra, quando uma parte sua for afectada ou atacada por outro microrgansmo / fungo que, por exemplo, fure a hifa. Septos imperfurados tabique transversal (barreira completa), que aparece em Pseudomicetos e Eumicetos. Estes septos servem para delimitar zonas mortas, para separar estruturas reprodutoras (vegetativas) e para a segmentao de hifas (artculos e esporos). Septos perfurados simples tabique transversal com orifcio central, que aparece em Deuteromycota e Ascomycota, sendo hifas regulares (septao regular). Constituem assim reforos mecnicos. No interior do poro / orifcio podem formar rolhas (sistemas de membranas / grnulos electronodensos) e na sua periferia podem formar os corpos de Woronin (revestimento membranar com contedo proteico cristalino e de forma varivel. H fecho dos poros em situaes de emergncia que parecem controlar a passagem de organitos). Septos perfurados dolipricos tabique transversal, com um orifcio central, que aparece em Eumicetos (maioria Basidiomycota). Formam espessamentos na parede celular (orifcio) e, na sua periferia, um sistema de membranas (parentossoma). So regulares em hifas (septao regular) onde constituem um reforo mecnico, podendo o parentessoma desagregar e deixar passar organitos (como o ncleo). Pensa-se que as rolhas formadas possam tapar e destapar, consoante as suas necessidades, de modo a comunicar com outras hifas. Quando uma regio da hifa fura, os septos vo fechar, impedindo a perda de citoplasma, para o exterior. A clula viva, de modo a tapar o orifcio, produz as rolhas, corpos Woronin (bastonetes) ou ambos. Paredessoma membrana derivada do retculo endoplasmtico, que permite a abertura de septos dolipricos. Estes organismos constituem estruturas dinmicas, cujo ncleo se deforma para conseguir passar atravs dos septos. Nesta passagem o poro abre e o paredessoma desagregase, para permitir a passagem do organelo. Aps a sua passagem, o paredessoma volta a agregar-se e o poro fecha. Sistemas de Classificao dos Fungos
Dictionary (1983) - separao dos plasmodiais, Deuteromycetes separados, mas Oomycetes ainda dentro dos Eumycota Dictionary (1995) - consolida-se Eumycota sem plasmodiais e Oomycetes, supresso Deuteromycetes Webster & Weber (2007) - semelhante do Dictionary (1995)

Evoluo nos Fungos Os fungos constituem um ramo simultneo com os restantes seres (animais e plantas), mas devem ser analisados como um ramo independente. Assim, os fungos superiores so um ramo ao nvel das plantas superiores (com flor) e ao nvel dos animais superiores (vertebrados). A evoluo do seu RNA muito lenta.

62

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

PRINCIPAIS GRUPOS DE FUNGOS


Divises de Pseudomicetos Pseudofungos plasmodiais: Dictyosteliomycetes, Acrasiomycetes, Myxomycetes, Plasmodiophoromycetes. Seres que, provavelmente, evoluram dos protozorios, mas que ao contrrio destes, formam corpos frutferos. Myxomycetes Grupo constitudo por cerca de 57 gneros e 700 espcies, que tm origem, provavelmente, em protozorios flagelados. Caractersticas principais: presena de esporforo e plasmdio (estrutura que vai crescendo, podendo atingir metros) e de vrios ncleos diplides. Este crescimento feito enquanto as condies ambientais o permitem. Ciclo de vida Phisarum Esporo germina originando uma mixamiba / clulas flageladas; A fuso de mixamibas / clulas flageladas origina o zigoto (plasmdio); Num meio com escassez de nutrientes produzem o esporforo; Os esporngios possuem os esporos; Clulas flageladas com flagelos acronemticos acrocnticos. Os esporforos de Myxomycetes possuem uma grande diversidade morfolgica, mas a sua estrutura sempre semelhante. Eumycetes: Chytrydiomycota Caractersticas principais: quitina na parede, flagelo liso e esporngios. Tem um ciclo de vida que apesar de muito simples, assemelhase ao dos fungos. Neste ciclo, h a formao de esporngios que, muitas vezes, tambm actuam como gametngios, sendo ento uma estrutura indiferenciada que intervm no ciclo sexual e assexual. Ciclo assexual zosporo (com flagelo acronemtico opistocntico). Ciclo sexual fuso de gmetas flagelados (espcies menos evoludas) e fertilizao de oosfera e anterozide (espcies mais evoludas). Soma holocrpico (Olpidium rotiferum parasita de rotferos). Soma eucrpico : miceliano (Monoblepharis). Assexual miclio (esporngio terminal), zosporo (miclio). Sexual miclio (gametngios) masculino (anterdio com anterozides flagelados) e feminino (oognio com oosferas). A fertilizao feita entre a oosfera e o anterozide, formando um osporo, cuja germinao forma, de novo, o miclio. Mecanismos de libertao de esporngios nos zosporos (clulas sexuais flageladas): Inoperculao (esporngios inoperculados) h desintegrao de reas dos esporngios e dissoluo das papilas gelatinosas (Chytridiomicetos);

63

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Operculao (esporngios operculados) h deiscncia do oprculo, dando-se a sua abertura. O oprculo, em alguns casos, permanece agarrado ao esporngio (Gneros: Karlingia, Karlingiomyces, Chytridium, Chytriomyces, Nowakowskiella, Allochytridium). Inoperculao no vesiculares (Rhizophidium) ocorre a dissoluo das papilas gelatinosas (rolhas gelatinosas), para serem libertados os zosporos. Operculao vesicular (Karlingiomyces) ocorre a deiscncia do oprculo, ficando uma vescula. Ou seja, os esporngios esto rodeados por uma cpsula (oprculo) que os fecha. Quando o oprculo sai (pode permanecer agarrado, durante algum tempo), fica uma vescula a englobar os zosporos. Quando esta vescula se dissolve, estes zosporos so libertados. Operculao no-vesiculares (Chytridium) ocorre deiscncia do oprculo, no ficando vescula. Eumycetes: Zygomycota Caractersticas principais: quitina na parede, ausncia de clulas flageladas, reproduo assexual com esporngios e reproduo sexual com zigosporngios. Eumicetos que aparecem em diversos substratos como solo, estrume, produtos armazenados, Possuem diversos modos nutricionais: Mucorales saprbios. Alimentos, solo e estrume; (Glomeromycota /Glomales micorrizas simbiontes); Entomophthorales parasitas de insectos. Ciclo sexual com esporngios, que tm esporangisporos. H fuso de gametngios / clulas somticas, formando zigosporngio com zigsporo (clula dormente, resistente de parede espessada). Evolutivamente, so seres intermdios entre Chitridiomicetos e os ascomicetos / basidiomicetos. Grupo monofiltico (excepto Glomales) cuja formao definiu um salto evolutivo (segundo passo evolutivo), que levou perda das clulas flageladas. Grupo constitudo por cerca de 122 gneros (com ciclos de vida, praticamente, idnticos). Dado que a fase sexual no vulgar, a sua classificao baseia-se em estruturas reprodutoras assexuais. A partir deste grupo de organismos, as estruturas sexuais so completamente distinguveis da assexual. O ciclo de vida sexual de um zigomiceto (Mucorales), ocorre em meios de escassez de nutrientes, pois enquanto h abundncia de nutrientes, o ciclo assexual est sempre a ocorrer. Quando os nutrientes comeam a escassear, realiza-se, pelo menos uma vez, o ciclo sexual (antes do esgotamento total dos nutrientes), de modo a formar-se um esporo geneticamente mais rico e extremamente resistente a ambientes adversos, que fica num estado de latncia e s germina quando as condies ambientais melhoram. Este ciclo no possui feminino nem masculino pois os gametngios so, praticamente, iguais podendo variar apenas, ligeiramente, no tamanho, mesmo assim no sendo significativo o suficiente para se diferenciar, a este nvel.

64

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Eumycetes: Zygomycota: Mucorales Os esporngios so grandes e cheios de esporos, logo a dessiminao muito eficaz (h excepes). Geralmente, contm uma columela interior (prolongamento do esporangiforo). Ciclo assexual com esporngios que possuem esporangisporos. O esporngio pode conter um nmero de esporangisporos elevado (esporngio multiesprico), reduzido (esporangolo multiesprico) ou unitrio (esporangolo uniesprico). Merosporngio esporangolo multiesprico, cilndrico e sem columela. Phycomyces reproduo sexual onde ocorre diferenciao de zigforos. Possuem 2 clulas suspensoras, com os gametngios nessas extremidades.
Fuso de gametngios Diferenciao de apndices nas clulas suspensoras Formao de Prozigosporngios e, consequentemente, de zigosporngios Diferenciao de zigsporos no interior dos zigosporngios

Espcies homotlicas espcies que pertencem mesma cultura e que, entre elas, so capazes de formar todo o ciclo. Espcies heterotlicas cruzamento entre espcies de uma cultura (designada +) com espcies de outra cultura diferente (designada -). Estas culturas, apesar de diferentes, so muito semelhantes. A designao + e so utilizadas, em vez de masculino e feminino. A aproximao entre as culturas (+) e (-) determinada por mecanismos hormonais, caracterstico da reproduo sexual. Esta aproximao deve-se a um sistema no especfico de espcies diferentes, onde intervm cidos trispricos (hormonas) que actuam em concentraes reduzidas. Quando h produo de cido trisprico, induz-se o cruzamento, mas no em culturas isoladas. Se for adicionado cido trisprico a uma cultura (+) ou (-), desencadeia-se o processo de formao de zigforos. Estes cidos trispricos sintetizam-se a partir do -caroteno. Inicialmente, as culturas (+) e (-) seguem vias diferentes. Mas a determinado momento, a cultura (+) utiliza o precursor da cultura (-) e, consequentemente, a cultura (-) utiliza um precursor da cultura (+). No fim, ambas sintetizam cidos trispricos. Eumycetes: Deuteromycota Caractersticas principais: quitina na parede, ausncia de clulas flageladas, reproduo assexual atravs de condios e sem reproduo sexual. Como no tem flagelos e so organismos aquticos, o seu movimento feito ao sabor da corrente do curso aqutico, no qual esto inseridos. Grupo formado por 2600 gneros e 15000 espcies. Os seres que o constituem so eumicetos ubiquistas, sobretudo, no solo, atmosfera e plantas, sendo a maioria saprbios (diversos infectam as plantas, animais e o Homem). Gneros fitopatognicos: Alternaria, Cladosporium, Fusarium e Verticillium. Estes seres podem ser patognicos para o Homem, como a espcie Candida albicans, que causa as candidases. Podem, tambm, produzir micotoxinas como Aspergillus, Fusarium e Penicillium. Certas espcies, quando dominantes em algumas atmosferas, causam alergias. A sua reproduo assexual muito semelhante dos ascomicetos e basidiomicetos, portanto, os deuteromicetos, muito provavelmente, so formas conidiais de ascomicetos e basidiomicetos que perderam a capacidade de reproduo sexual, ou to rara que nunca foi observada, com formas anamrficas. Quanto evoluo so fungos desenvolvidos de formas conidiais de ascomicetos ou basidiomicetos, constituindo um salto evolutivo em relao aos zigomicetos, pois possuem um miclio septado. Apesar de no apresentarem um ciclo sexual, possuem um ciclo para-sexual onde ocorre recombinao gentica. 65

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Condio clula especializada, no-mvel (logo no flagelada), cuja germinao origina o novo organismo. Forma-se pela extruso da clula e possuem septao para realizarem a fragmentao das hifas. Clula conidiognica clula me dos condio, no interior da qual, ou a partir da qual se formam condio. Pode ser uma clula diferenciada ou indiferenciada. Conidiforo estrutura que suporta os condios, e por vezes, tambm as clulas conidiognicas. Esta estrutura pode ser, morfologicamente, indistinta, pouco distinta ou bem diferenciada. Os conidiforos podem aparecer livres e isolados ou agrupados em estruturas organizadas, especializadas, geralmente macroscpicas e complexas. Tipos principais: Esporodquio estruturas com estroma prosenquimatoso, com forma de almofada, que suporta conidiforos curtos ou agregados; Sinema conidiforos agregados, com forma em feixe, que suportam condios Picndio estrutura com forma globosa ou de garrafa, aberta desde o incio do ostolo, que possui um revestimento de tecido pseudoparenquimatoso. Os conidiforos esto dispostos lado a lado, forrando o interior desta estrutura; Acrvulo estrutura achatada e alongada, que serve de revestimento a uma planta hospedeira. Possui conidiforos curtos, que esto dispostos lado a lado, sobre o tecido fngico. Grupos (tradicionais): Hifomicetos conidiforos livres ou agrupados, com esporodquio ou sinema; Coelomicetos conidiforos agrupados, sob a forma de picndios ou acrvulos; Blastomicetos soma unicelular, predominantemente, sob a forma de leveduras (deuteromicticas); Mycelia sterilia ausncia de estruturas reprodutoras; Agonomycetes clulas especializadas, com ausncia de condios, e com uma multiplicao por fragmentao das hifas. Eumycetes: Deuteromycota: Hifomicetos Sistemas de Classificao Saccardo sistema baseado em conidiforos livres ou agrupados, na forma e septao dos condios e na cor dos conidiforos e condios (claros ou escuros). Vantagens utilizao prtica, acessvel e expedita; Limitaes a cor subjectiva. Artificialidade na proliferao e fragmentao de gneros (espcies semelhantes so colocadas em gneros ou famlias distintas), cor, forma e septao (condios); Principais tipos de condios: Amersporos; Didimsporos; Fragmsporos; Ataursporos; Helicsporos; Dictisporos; Scolescsporos. Ps-Saccardo ontogenia conidial. Baseado no tipo de conidiforo, modo de formao e condios (segundo microscopia ptica). Baseado no modo blstico, tlico, holoblstico e enteroblstico (segundo microscopia electrnica). Ontogenia holoblstica solitria determinada, ontogenia holoblstica acropetal, ontogenia holoblstica botritiosa, ontogenia holoblstica simpodial, ontogenia holoblstica porognica, ontogenia holoblstica basuxica, ontogenia blstica retrogressiva, ontogenia enteroblstica aneldica, ontogenia enteroblstica fialdica, ontogenia holotlica, ontogenia articulada. Ontogenia conidial, modo blstico o condio forma-se por extruso, da clula conidiognica: Holoblstico existe continuidade entre todas as camadas da parede da clula conidiognica e as camadas da parede do condio (Nigrospora, Alternaria).

66

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Enteroblastico a camada externa da parede da clula conidiognica no tem continuidade com a parede do condio, mas pode existir continuidade entre a camada interna da parede da clula conidiognica e a parede do condio. o Fialdico (endoblstico) modelo enteroblstico no qual no existe qualquer continuidade entre a camada interna da parede da clula conidiognica e a parede do condio. Ontogenia conidial, modo tlico o condio forma-se por converso e desarticulao de um elemento hifal, indiferenciado, pr-existente. Vantagens da ontogenia conidial sistema orgnico, coerente e que agrupa fungos semelhantes. Limitaes da ontogenia conidial exige observaes pormenorizadas, para se conseguir identificar o tipo de conidiognese. Os sistemas em uso so ento a conidiognese, tipos e condios de Saccardo, mas de salientar a importncia dos tipos de ramificao de conidiforos e da morfognese dos condios. Assim, num sistema de classificao dos deuteromicetos (holomicolgico), deve-se incorporar a anlise comparativa de RNAs, morfologia e ecologia das observaes de campo. Eumycetes: Ascomycota Principais caracterstica quitina na parede, ausncia de clulas flageladas, presena de fase dicaritica, reproduo assexual atravs de condios e reproduo sexual atravs de asco, com ascsporos. Ciclo assexual atravs de leveduras, que formam gmulas (condios holoblsticos), ou atravs de hifas filamentosas, que formam condios (anamorfos). Ciclo sexual fuso de clulas indiferenciadas ou diferenciadas (asco), que se formam por meiose no interior dos ascsporos. um grupo constitudo por 46 ordens, 264 famlias, 3266 gneros e 32367 espcies, no entanto cerca de metade destas espcies so liquenizadas. So fungos evoludos, provenientes de um grande ramo evolutivo, que divergiram cedo dos basidiomicetos, mas que tiveram um aparecimento tardio, em termos de evoluo. No reino dos eumicetos, a diviso mais numerosa, com maior nmero de espcies, maior diversidade de ciclos, modalidades e reproduo sexual, sendo o grupo com a sistemtica e taxonomia mais complexas. Principais determinantes biolgicas: asco, ascocarpo, modalidade reproduo sexual. Estas determinantes esto correlacionadas com a sua sistemtica e taxonomia. Eumycetes: Ascomycota (Asco) Prototunicados a parede do asco fina e frgil, no existindo estruturas especializadas no seu pex. Os ascsporos libertam-se atravs da desagregao da parede do asco, dando-se a libertao passiva de ascsporos (Archiascomycetes, Plectomycetes (maioria) e Hemiascomycetes). Unitunicados a parede do asco possui duas camadas, a exotunica (exoasco) e a endotunica (endoasco). Pode existir um aparelho apical, no pex do asco. Possui as camadas, fortemente, aderentes entre si. Os ascsporos libertam-se atravs do poro (fenda), na regio apical ou sub-apical (inoperculados), cuja libertao dos ascsporos passiva ou activa (Pyrenomycetes e Discomycetes), ou atravs de um poro tapado com uma tampa (oprculo operculados), cuja libertao dos ascsporos activa (Discomycetes). Bitunicados a parede do asco possui duas camadas (exotunica e endotunica). Antes da libertao, as camadas deslizam e a exotunica rompe-se. A endotunica expande-se no comprimento, destacando a exotunica. Assim, os ascsporos libertam-se atravs de um poro na endotunica, libertao essa que activa (Loculoascomycetes, Erysiphales, discomicetos liquenizados).
Inoperculado Unitunicado Operculado Bitunicado (endoasco + exoasco)

67

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Eumycetes: Ascomycota (Ascocarpo) Localizao dos Ascos Isolados ascos ns (Archiasmycetes, Hemiascomycetes). Agrupados ascocarpos (Plectomycetes, Pyrenomycetes, Discomycetes, Erysiphales): Cleistotcio ascocarpo globoso, totalmente fechado, delimitado pelo perdio. Os ascos esto dispersos no interior e no existe himnio (Plectomycetes); Peritcio ascocarpo com forma de garrafa ou pescoo, aberto num ostolo e delimitado no perdio. Os peritcios esto isolados ou embebidos num estroma, formando corpos frutferos. Os ascos podem estar dispersos no interior ou organizados no himnio, que possui ascos e parfises (estreis). A libertao pode ser activa ou passiva (Pyromycetes); Apotcio ascocarpo com forma extremamente diversa (tipicamente em taa). Este ascocarpo est sempre aberto na maturao, com os seus ascos organizados num himnio (exposto), que contm parfises estreis (Discomycetes). Cleistocarpo ascocarpo globoloso, muito pequeno, revestido de apndices, mas totalmente fechado e delimitado por um perdio. Os ascos esto organizados em himnios pequenos e internos (Erysiphales). Embebidos no estroma ascostroma (Loculoascomycetes). Ascos em pequenas cavidades (lculos) que esto embebidas em tecido no estroma. Os lculos podem conter estruturas estreis (pseudoparfises). Os ascostromas uniloculares so muito semelhantes ao peritcio. Eumycetes: Ascomycota Principais Determinantes Fisiolgicas (Modalidades de Reproduo Sexual) Somatogamia ocorre fuso de clulas somticas compatveis, que actuam como clulas sexuais (Archiascomycetes e Hemiascomycetes). Fuso de gametngios indiferenciados fuso de clulas pouco diferenciadas entre si e, tambm, diferentes das vegetativas (Archiascomycetes e Hemiascomycetes).

Gametangiogamia (gametngios diferenciados) fuso de clulas bem diferenciadas entre si e das vegetativas, constituindo gametngios. Existe um gametngio masculino (anterdio) e um feminino (ascogonio) (Plectomycetes e Pyrenomycetes).
Aproximao do gametngio masculino (anterdio), extremidade (tricogino) do gametngio feminino (ascognio) Fuso de dois gametngios plasmogamia Passagem dos ncleos do gametngio masculino para o gametngio feminino Incio da proliferao das hifas ascognicas

Espermatizao fuso entre uma clula masculina (hifa vegetativa, condio, espermcio (microcondio), ascsporo) e uma feminina (ascognio pluricelular, espiralado, pode apresentar hifas receptoras no tricogino e pode estar no protoperotcio) (Pyrenomycetes e Discomycetes).

68

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

O ascognio est contido num protoperitcio. o ascognio apresenta hifas receptoras que emergem do proptoperitcio

Contacto entre um condio e uma hifa receptora do ascognio. o condio desempenha a funo de uma clula sexual masculina

Fuso entre condios e as hifas receptoras, e entre uma hifa vegetativa e uma hifa receptora. a hifa vegetativa tambm desempenha a funo de uma clula sexual masculina

A espermatizao a diviso de fungos com maior diversidade, ao nvel das modalidades de reproduo sexual. A somatogamia e fuso de gametngios indiferenciados so modalidades pouco evoludas, no entanto, a gametangiogamia e a espermatizao so modalidades evoludas e complexas. Eumycetes: Ascomycota Sistemtica Os sistemas tradicionais de ascomicetos so baseados na estrutura do asco, no tipo de ascocarpo e no tipo de reproduo sexual. No entanto, a anlise comparativa dos RNA ribossmicos veio questionar estes sistemas, levando criao de um frum de discusso. Archiascomycetes presena residual de quitina na parede e ausncia de corpos de Woronin junto dos septos e de ascocarpos. A soma unicelular ou miceliano e os ascos so prototunicados ou unitunicados. Reproduo ocorre por somatogamia ou fuso de gametngios indiferenciados (Taphrina, Shizosaccharomyces). Hemiascomycetes presena de quitina, exclusivamente, no septo da gmula. Possui ascos prototunicados e uma soma tipicamente unicelular. Ausncia de ascocarpos. A reproduo feita por somatogamia ou fuso de gametngios indiferenciados. Plectomycetes soma miceliano, ascos prototunicados, presena tpica de cleistotcios. A reproduo tpica por gametangiogamia. Pyrenomycetes soma miceliano, ascos Archiascomycetes unitunicados inoperculados, presena tpica de Hemiascomycetes peritcios. Reproduo tpica por espermatizao. Plectomycetes Discomycetes soma miceliano, ascos Pyrenomycetes Pezizales (discomicetos operculados) unitunicados inoperculados ou operculados, Hymenoascomycetes Heliotales (discomicetos inorpeculados) presena tpica de apotcios. Com reproduo tpica Lecanorales (ascomicetos liquenizados) por espermatizao.
Outras ordens Loculoascomycetes

Eumycetes: Basidiomycota Principais caractersticas quitina na parede, ausncia de clulas flageladas, fase dicaritica. Reproduo assexual atravs de condios e reproduo sexual atravs de basdios, com basidisporos. Os basidiomycota possuem hifas com septos perfurados dolipricos. Ciclo assexual: Leveduras gmulas (condios enteroblsticos); Filamentosos odios (anamorfos). 69

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Ciclo sexual fuso de clulas indiferenciadas, por um miclio dicaritico, constituindo o basdio que, por meiose, no seu interior forma os basidisporos. um grupos constitudo por 41 ordens, 165 famlias, 1428 gneros e 22244 espcies. So fungos evoludos, que consituem um grande ramo evolutivo. Desde cedo, divergiu do ramo evolutivo dos ascomicetos, mas que em termos de evoluo, teve um aparecimento tardio. Este grupo abalou a sistemtica e taxonomia tradicional, pela anlise comparativa de RNA ribossmico, no entanto, ainda no existe um esquema global alternativo. Eumycetes: Basidiomycota Ciclo de Vida O ciclo de vida deste grupo muito menos complexo que o ciclo de vida dos ascomicetos: Fuso de miclios haplides (n) compatveis e de miclios dicariticos (n + n) estveis e indefinidos; Formao de basidiocarpo e basdio; Basdio, por meiose, forma basidisporos, Basidisporos constituem miclios haplides.

Fuso de miclios haplides (n) compatveis, formando-se um miclio dicaritico (n+n): Aproximao e reconhecimento miclios compatveis; Formao de um canal de ligao entre as duas hifas; Passagem de um ncleo ou troca recproca, tendo como consequncia imediata a plasmogamia, formando-se um compartimento, binucleado (dicaritico) n + n. Este compartimento binucleado explicado por vrias possveis evolues: 1. Ncleo estranho que sofreu mitoses sucessivas, at atingir o compartimento apical. 2. Ncleo estranho que, ao tingir o compartimento apical, levou sua formao directa, atravs de mitoses conjugadas, com ansas de anastomose. Eumycetes: Basidiomycota Principais Determinantes Biolgicas (Basidisporos)
Hymenomycetes Assimtrica Violenta Assimtrica Entre o esporo e o esterigma Gasteromycetes Simetria radial Passiva Simtrica No esterigma

Forma Libertao Posio do esterigma Local de abciso

Hymenomycetes possuem uma trajectria esporbola. A sua disseminao feita atravs de uma projeco violenta.

70

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Eumycetes: Basidiomycota Principais Determinantes Biolgicas (Tipos de Basdios) Holobasdios asseptados, unicelulares que podem possuir septos secundrios; Globoso, ovide ou clavado Agaricales, Aphyllophorales, Gasteromycetes. Com esterigmas conspcuos Ceratobasidiales, Tulasnellales; Forma de forquilha Dacrymycetales. Heterobasdios septados, pluricelulares, com formao de septos primrios. Fragmobasdios: o Septos primrios transversais Auriculariales; o Septos primrios longitudinais Tremallales; Promiclio: Germinao do telisporo de septos transversais Uredinales e Ustilaginales. Eumycetes: Basidiomycota Principais Determinantes Biolgicas (Basidiocarpo) Isolados ausncia de basidiocarpos bem definidos (Uredinomycetes e Ustilaginomycetes). Agrupados basidiocarpos bem definidos (Hymenomycetes com himnio e Gateromycetes sem himnio). Gimnocrpico himnio nunca coberto (est sempre exposto), que se forma aps o chapu (Hymenomycetes Aphyllophorales). Pseudoangiocrpico himnio forma-se aps o chapu, que est temporariamente coberto, mas posteriormente descoberto (Hymenomycetes Agaricales). Hemiangiocrpico himnio inicialmente coberto por uma membrana / teia. A expanso do seu chapu provoca o rompimento dessa mesma membrana / teia (Hymenomycetes): Uma membrana- vu interno (Agaricus); Duas membranas vu interno e vu universal (Amanita); Uma teia (Cortinarius). Angiocrpico basdios encerrados, e nunca so expostos. Possui basidisporos no interior dos basidiocarpos, que se libertam por rompimento do perdio. Este basidiocarpo, na maturo, constitui uma massa desorganizada, na qual se encontram os basidisporos (Gasteromycetes). Os basdios formam basidisporos, que se vo encher de cmaras. Quando se d o colapso dos basdios e da trama, ocorre a maturao dos basidiocarpos. Os tipos de desenvolvimento dos basidiocarpos possuem correlao com a sistemtica e taxonomia deste grupo, logo, estas determinantes biolgicas esto correlacionadas com a sistemtica e taxonomia deste grupo. Eumycetes: Basidiomycota Sistemtica Tradicional (Grupos Tradicionais) Agaricales basidiocarpos deliquescentes, moles ou carnudos, sendo a maioria com forma de chapu de chuva, pelo que so estipitados pileados. Himeniforo, na maioria, lamelar. Holobasdios ovides e com balistsporos (projectados violentamente mas no batem na lmina contgua). Aphyllophorales basidiocarpos coriceos ou rgidos como madeira. Possuem uma forma muito varivel (ressupinados, prateleira, chapu-de-chuva, clavados, coralides). Holobasdios ovides com balistsporos. Himeniforo varivel (liso, lamelar, tubuloso). Dacrymycetales holobasdios forquilha. Basidiocarpos gelatinosos, cerosos ou mucides. Balistsporos e himnio bem definido. Ceratobasidiales holobasdios esterigmas. Basidiocarpos gelatinosos, cerosos ou mucides. Balistsporos e himnio bem definido.

LOCALIZAO DE BASDIOS

TIPOS DE DESENVOLVIMENTO

71

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Tulasnellales holobasdios esterigmas. Basidiocarpos gelatinosos, cerosos ou mucides. Balistsporos e himnio bem definido. Auriculariales fragmobasdios. Basidiocarpos gelatinosos, cerosos ou mucides. Balistsporos e himnio bem definido. Tremellales fragmobasdios. Basidiocarpos gelatinosos, cerosos ou mucides e coloridos. Balistsporos e himnio bem definido. Gasteromycetes ausncia de himnio na maturao, tendo um desenvolvimento angiocrpico. Possui holobasdios e estatismsporos. um grupo polifiltico constitudo por 14 ordens, 56 famlias, 164 gneros e 1169 espcies, que derivam de Agaricales, Boletales, Bondarzewiales, Cortinariales, Russulales e Stereales. Tm um perdio como revestimento, gleba (massa de basidisporos) e capilcio (hifas estreis que no derivam da trama). Morfologia: globolosa, estrelada, estipitado, pseudoestipitada, clatrada, acopada, piriforme. Lycoperdales perdio com vrias camadas. Gleba pulverulenta com basidisporos ornamentados, capilcio bem desenvolvido, himnio rudimentar nas fases iniciais, basidiocarpo sssil; Tulostomatales; Sclerodermatales perdio rgido com uma camada, gleba escura com basidisporos ornamentados, capilcio ausente e basidiocarpo sssil; Phallales perdio gelatinoso, gleba mucilaginosa com basidisporos lisos, capilcio ausente, basidiocarpo com receptculo conspcuo; Nidulariales; Hymenogastrales; Uredinomycetes e Ustaginomycetes ausncia de septos dolipricos e de basidiocarpo. Com telisporo promiclio; Eumycetes: Basidiomycota Sistemtica dos Basidiomicetos (Sistema B) Homobasidiomycetes holobasdios, himenomicetos e gasteromicetos (grupo poliporide, euagaricide, boletide, teleforide, russulide, himenochaetide, cantharelpide, gomofide-falide). Heterobasidiomycetes holobasdios particulares (Darymycetales, Ceratobasidiales, Tulasnellales) e fragmobasdios (Auricularialles e Tremellales).
Ustilaginomycetes Uredinomycetes Lycoperdaceae (gasteromicetos) Outras famlias Grupo poliporide Sclerodermataceae (gasteromicetos) Grupo boletide Outras famlias Grupo teleforide Grupo russulide Grupo himenochaetide / Grupo cantaleride Phallaceae (gasteromicetos) Grupo gonfide-falide Outras famlias Ceratobasidiales Tulasnellales Dacrymycetales Auriculariales Tremellales Grupo agaricide

Homobasidiomycetes (holobasdios)

Heterobasidiomycetes (heterobasdios e holobasdios especiais)

72

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

LEVEDURAS MICROBIOLOGIA DA CERVEJA E DO PO


Leveduras Leveduras so Eumicetos com soma, predominantemente, unicelular (transitoriamente pseudomiceliano e / ou miceliano). A reproduo assexual , tpicamente, atravs de gmulas. No existem corpos frutferos, nem ascocarpos ou basidiocarpos. Os ascos so ns e os basdios isolados. Estes seres no possuem qualquer significado taxonmico: Leveduras deuteromicticas Deuteromycota; Leveduras ascomicticas Ascomycota; Leveduras basidiomicticas Basidiomycota. Os investigadores que estudam as leveduras, designam-se de zimologistas, e esta constitui uma rea parte da micologia, que possui mtodos de cultura e estudos especficos, sendo diferentes dos restantes fungos. Leveduras seres anaerbios facultativo, fazendo respirao celular, quando em condies aerbia, ou fermentao, quando em condies anaerbias. As leveduras so utilizadas em fermentaes industriais: microbiologia da cerveja (Saccharomyces carlsbergensis e Saccharomyces pastorianus leveduras com fermentaes baixas) e microbiologia do po. A vinificao e a indstria da cerveja baseiam-se na enorme capacidade fermentativa das leveduras, convertendo os hidratos de carbono em etanol e dixido de carbono, o qual pode originar bolhas. O vinho deixado em contacto com o ar produz vinagre, pois bactrias aerbias oxidam o etanol, que se transforma em cido actico. No fermento de padeiro, as leveduras produzem enzimas, que lhes permitem decompor o amido da farinha em hidratos de carbono simples, produzindo lcool (que se evapora) e dixido de carbono (que fica retido no interior da massa, em bolhas, que fazem a massa aumentar de volume). As temperaturas elevadas da cozedura matam as leveduras e expandem o dixido de carbono. Microbiologia da Cerveja Elementos fundamentais dos processos tecnolgicos: cevada (malte), gua, lpulo e leveduras. Maltagem da cevada feita com diversos tipos de cevado, no entanto podem ser utiilizados outros cereais. Germinao leva degradao do amido, o que indespensvel pois as leveduras no degradam o amido; Torragem a temperatura determinante: temperaturas baixas (malte amarelo cervejas claras e louras) e temperaturas altas (malte castanho, escure e preto cervejas escuras e pretas); gua de malte malte dissolvido em gua. O seu aquecimento feito por aco de: o Enzimas endgenas proteases (degradao das protenas em aminocidos); amilases (degradao do amido em maltose e glucose que indespensvel, pois as leveduras no degradam o amido). Actua no gro de cevada; o Flora microbiana acidificao (pH atinge o valor 5,2). Actua na superfcie do gro de cevada. Qualidade de gua importantssimo e determinante. As caractersticas da gua, influenciam caractersticas da cerveja.

73

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Amido Cevada Germinao

Sacardeos

Temperatura

Plntula

Secagem

Torragem

Moagem

Extracto de Malte

Lpulo flores femininas, com substncias resinosas, a lupulina. Possui diversas variedades com diferentes caractersticas. A fervura da gua de malte com lpulo, extrai a lupulina, elimina parte da flora microbiana (desinfeco) e coagula as protenas. Funes: responsvel pelo gosto amargo, aromas e clarificao e possui substncias anti-microbianas para a desinfeco da gua de malte (a flora microbiana poderia deteriorar a fermentao). Aditivos ptalas de milho, especiarias, plantas aromticas, extractos de frutos. As cervejas lager necessitam de fermentaes baixas, enquanto as cervejas ale e stout necessitam de fermentaes altas.
CEVADA Germinao Secagem Torragem Moagem

Amidlise

Protelise (enzimas endgenas e flora microbiana)

Acidificao

GUA DE MALTE

EXTRACTO DE MALTE

Aquecimento (75 C)

Filtragem

Fervura (lpulo + adjuvantes)

Arrefecimento (16 C)

MOSTO DE MALTE (+ leveduras selecionadas)

Carbonatao

Maturao

Sedimentao

Fermentao (liberta diversas substncias)

Respirao (liberta CO2)

Engarrafamento

Fermentao do mosto as leveduras utilizam mono e alguns di e trissacardios. O mosto de malte (maltose) o acar mais abundante, pois no utilizam dextrinas nem amido. As leveduras possuem uma fase inicial aerbia, com consumo de oxignio, e uma fase fermentativa, com produo de dixido de carbono e etanole de diversas substncias caractersticas organolpticas. Microbiologia do Po A superfcie das sementes dos cereais possuem bactrias e leveduras, estando muitas delas presentes na farinha. Levedar da massa a flora autctone das sementes dos cereais e a flora de leveduras e bactrias (espcies cosmopolitas e especficas, de dada regio ou massa). Massas correntes leveduras; Massas azedas leveduras e bactrias lcticas (broa de Avintes); Levedar espontneo da massa resultados irregulares;

74

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Levedar com inoculao adio de estirpes seleccionadas ou repicagem de massas, j levedadas, com resultados constantes e controlados.
Frmula inicial (farinha + gua + sal) Fermentao a 30 C (previamente analisada) Actualizada todas as 24 horas (massa + farinha + gua + sal)

Amassar manualmente

Levedar da massa o amido o carbohidrato maioritrio, pois as leveduras no produzem amilases. As sementes contm amilases endgenas mas o processo lento. Para acelerar o processo necessrio a adio de amilases (a mais utilizada Aspergillus oryzae). Assim, o levedar da massa deve-se aco das amilases, ocorrendo formao de mono- e dissacardios assimilveis pelas leveduras.
Leveduras / Bactrias lcticas Consumo (sacardios + aminocidos) Acidificao (liberta CO2 que deforma a massa)

Os aromas da massa devem-se a cidos, como o lctico e actico, alcois, aldedos, cetonas. Levedar das massas azedas geralmente farinha de trigo, centeio e milho. Espcies dos gneros: leveduras (Candida, Hansenula, Pichia, Rhodotorula, Saccharomyces, Torulaspora, Trichosporon, Zygosaccharomyces) e bactrias lcticas (Lactobacillus, Leuconostoc, Pediococcus, Streptococcus). Cada massa tem a sua populao microbiana. A flora microbiana evolui durante o levedar da massa devido produo de etanol, o que faz com que algumas espcies no sobrevivam. Com este processo h uma produo substancial de cidos orgnicos (cido actico e lctico, de pH que varia entre 3,7 e 3,9) e de etanol. H, ento, a produo de uma grande diversidade de substncias, que possuem um sabor caracterstico. A produo dos cidos faz com que a acidificao seja significativa. O glten importante na elasticidade da massa, suportando-a aps a deformao causada pelo dixido de carbono.
Glten Alterao na estrutura molecular Elasticidade da massa

75

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

COGUMELOS VENENOSOS E ALUCINOGNICOS


Sndromas Principais Sndromas de desenvolvimento lento os sintomas surgem horas ou dias, depois da ingesto do cogumelo. Possui uma mortalidade elevada. Sndroma faloidiana (8-12 horas); Sndroma da orelanina (2-17 dias); Sndroma da giromitrina (6-12 horas). Sndromas de desenvolvimento rpido os sintomas surgem minutos, depois da ingesto do cogumelo. Possui uma mortalidade baixa. Sndroma panternica (embriaguez) (30-120 minutos); Sndroma alucinognica (10-30 minutos); Sndroma da muscarina (10-30 minutos); Sndroma dos coprinus (5-10 minutos); Sndroma gastrointestinal (15-20 minutos). Sndromas Principais Sndroma faloidiana Envolvido na grande maioria dos envenenamentos fatais na europa, atravs da ingesto de Amanita phalloides. Principais espcies responsveis na Europa: Amanita phalloides, Amanita virosa, Amanita verna, Galerina autumnalis, Galerina marginata, Lepiota helveola, Lepiota castanae, Lepiota josserandii, Lepiota pseudohelveola. Toxinas envolvidas: Amatoxinas peptdios cclicos, constitudos por 8 resduos de aminocidos (amanitina, -amanatina, -amanatina, -amanatina, amanina, amaninamida, amanulina, cido amanulnico, proamanulina). Inibem a sntese do mRNA nas clulas eucariticas, por ligao enzima RNA polimerase II, causando um bloqueio da sntese proteica; Falotoxinas peptdios cclicos, constitudos por 7 resduos de aminocidos (faloidina, falona, profalona, falicina, falacina, falicina, falacidina, falisacina). Ligam-se s protenas da membrana citoplasmtica, causando a desintegrao da sua estrutura. As falotoxinas e as virotoxinas ligam-se aos filamentos de actina-F, impedindo a sua despolimerizao; Virotoxinas peptdios cclicos, constitudos por 7 resduos de aminocidos (viroidina, aloviroidina, desoxoviroidina, [Ala]1-viroidina, [Ala]1desoxoviroidina, viroisina, desoxoviroisina). Sinais e sintomas (Sndroma trifsica): Fase gastrointestinal clicas abdominais muito fortes, vmitos, diarreia lquida abundante e com sangue. Os sintomas podem ser confundidos com os de uma gastroenterite vrica ou bacteriana; Fase de aparente melhoria os sintomas anteriores desaparecem; Fase terminal reaparecimento das clicas abdominais e da diarreia lquida, juntando-se a ictercia, a insuficincia renal, encefalopatia heptica, confuso mental, delrio, convulses e coma. Prognstico a mortalidade tem vindo a diminuir, nas ltimas dcadas, pela utilizao do transplante de fgado.

76

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Sndromas Principais Sndroma da Orelanina Muitas das espcies responsveis por este sndroma foram consideradas, durante muito tempo, como comestveis. Principais espcies responsveis na Europa: Cortinarius orellanus, Cortinarius speciosissimus. Sndromas Principais Sndroma Panternica (Embriaguez) Sndroma semelhante ao causado pela embriaguez alcolica. O basidiocarpo de Amanita muscaria apresenta actividade insecticida (da deriva o seu nome), pela presena de 1,3-diolena. Sndroma semelhante ao da ingesto de plantas com atropina (Datura stramonium, Atropa bellanona). Principais espcies responsveis na Europa: Amanita pantherina, Amanita muscaria. Sndromas Principais Sndroma Alucinognica Acidental em alguns casos, mas geralmente deliberada, pela ingesto de cogumelos com propriedades alucinognicas. Na maioria dos pases, a posse ou venda de qualquer cogumelo ou preparao, contendo psilobicina ou psilocina, ilegal. Na Europa e nos EUA, o consumo de cogumelos alucinognicos marginal comparado com o das drogas sintticas. Principais espcies responsveis na Europa: Psilocybe cyanescens, Psilocybe semilanceata, Panaeolus ater, Panaeolus fimicola, Panaeolus foenisecii, Panaeolus papilionaceus, Panaeolus sphinctrinus, Panaeolus subalteatus, Panaeolus aeruginascens, Panaeolus coelestium, Panaeolus corydalina, Panaeolus haemacta, Gymnopilus spectabilis, Pluteus salicinus.

77

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

COGUMELOS COMESTVEIS E MEDICINAIS


Cogumelos Comestveis Cogumelos que podem ser selvagens ou cultivados, industrialmente. Cogumelos cultivados (industrialmente) possuem importncia econmica: Agaricus bisporus, Agaricus bitorquis, Lentinula edodes, Pleurotus sp., e tambm, Auricularia polytricha, Auricularia auricula, Volvariella volvacea, Flammulina velutipes, Tremella fuciformis, Pholiota nameko. Cultura industrial de Agaricus: Preparao do composto palhas, estrume, azoto inorgnico at 1,5-2,0% ; Compostagem ao ar livre ou em estufa, atravs de uma fermentao espontnea, que induz a degradao de carbohidratos microbianos; Pasteurizao do composto desinfeco do composto (eliminao da flora microbiana); Preparao do inculo seleccionadas espcies Agaricus. As variedades diferem na forma e cor do basidiocarpo, afectando a productividade, a resistncia a doenas e a qualidade para a sua conservao. As culturas puras, possuem, nos meios, sementes de cereais estreis; Inoculao do composto e incubao junta-se o com o fungo inoculado. Colonizao do substracto, pelo fungo; Cobertura indispensvel para abafar o composto. colocada uma camada de terra (constituda por turfa, argila, areia, carbonato de clcio) de cobertura, em determinado pH, que foi previamente desinfectada; Ps-cobertura existe rega abundante e ventilao da estufa. A temperatura desce e h colonizao da camada de cobertura, ao fim de alguns dias; Induo da frutificao indispensvel que haja arrefecimento e arejamento. A temperatura deve descer e o CO2 tem de ser controlado. As primeiras frutificaes aparecem, alguns dias aps o arrefecimento; Colheita durante algumas semanas, mas o calibre vai diminuindo. Esta tcnica permite a realizao de 3 / 4 culturas por ano.

Cogumelos Medicinais Este tipo de cogumelos utilizado h muito tempo no oriente, nomeadamente as espcies Flammulina velutipes, Ganoderma lucidum, Grifola frondosa, Lentinula edodes, Schizophyllum commune, Trametes versicolor, que so utilizadas em produtos comerciais. Efeitos teraputicos principais: anti-carcinognico; anti-inflamatrio; anti-microbiano; e anti-hiperlipidemia. Efeito anti-carcinognico principais substncias com actividade anti-tumoral: -D-glucanas Lentinano (Lentinula edodes) a mais importante e, tambm, schizophilano (Schizophyllum commune), glucana (Auricularia auricula-judae) e grifolano (Grifola fondosa); Heteropolissacardios; Glicoprotenas; Protenas; 78

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

MICOTOXINAS E MICOTOXICOSES
Micotoxinas Micotoxinas compostos ou metabolitos, produzidos por fungos. So substncias txicas ou que possuem outros efeitos, igualmente adversos. So metabolitos secundrios cujas funes, na clula fngica, se desconhecem. As substncias txicas dos cogumelos venenosos no se englobam no grupo das micotoxinas. As micotoxinas so, em geral, menos potentes que as toxinas bacterianas. No entanto, enquanto as toxinas bacterianas actuam por toxicidade aguda, as micotoxinas actuam por toxicidade crnica. O seu efeito de toxicidade muito varivel em animais de laboratrio A mesma espcie de fungo pode produzir diferentes micotoxinas e, tambm, uma dada micotoxina pode ser produzida por vrias espcies de fungos. A produo de micotoxinas por uma dada espcie depende das condies de crescimento, como o substrato, o meio de cultura (in vitro), a temperatura e a humidade. Principais fungos produtores: Aflatoxinas: Aspergillus flavus, Aspergillus nomus, Apergillus parasiticus; Zearalenonas, Tricotecenos, Moniliforminas, Fumonisinas: diversas espcies de fusrios (Fusarium culmorum, Fusarium equiseti, Fusarium moniliforme, Fusarium oxysporum, Fusarium proliferatum, Fusarium sporotrichioides); Ocratoxinas, cido peniclico, Patulina, Citrinina: diversas espcies de aspergilos e peniclios (Apergillus ochraceus, Aspergillus terreus, Penicillium citrinum, Penicillium cyclopium, Penicillium expansum, Penicillium verrucosum, Penicillium viridicatum). A produo de micotoxinas, por aspergilus e peniclios, ocorre tipicamente em produtos armazenados, mesmo a temperaturas baixas e humidade relativa reduzida. Mas estas micotoxinas no esto envolvidas na fitopatogenicidade, das espcies produtoras. Pelo contrrio, a produo de micotoxinas por fusrios, ocorre tipicamente no campo. Os fusrios so vulgares e disseminados na natureza como saprfitos e parasitas de plantas selvagens e cultivadas, no sendo ento considerados fungos de produtos armazenados. Em termos gerais, a temperatura ptima para o crescimento e produo de micotoxinas segue a seguinte ordem: Aspergillus (tropical) > Penicillium (temperado) > Fusarium (temperado frio). Parmetros de toxicidade das micotoxinas: Mutagenicidade capacidade para induzir mutaes (Salmonella typhimurium) Teratogenicidade capacidade para induzir malformaes no feto (pintanho). Carcinogenicidade capacidade para induzir carcinomas (ratinho).
Mutagenicidade + + ? + + + Teratogenicidade + + ? + + Carcinogenicidade + + ? + + + + +

Aflatoxinas Zearalenona Tricotecenos Moniliforminas Fumonisinas Ocratoxinas cido peniclico Patulina Citrinina

Micotoxicose Micotoxicose doena aguda causada pela ingesto de micotoxinas que se encontram, principalmente, em alimentos deteriorados pelo crescimento de fungos toxignicos.

79

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Nos alimentos contaminados, normalmente, coexistem diversas micotoxinas. As micotoxicoses so, portanto, causadas simultaneamente por vrias micotoxinas. Caractersticas gerais e procedimentos de investigao: A patologia no transmissvel; A terapia medicamentosa no cura, mas pode aliviar os sintomas; Deve ser identificado o alimento responsvel (detectada a causa); No alimento responsvel, devem ser detectadas as micotoxinas envolvidas e isolados os fungos produtores. No entanto, os fungos responsveis podem no ser isolveis naquele momento, devido proliferao de outros fungos ou ao colapso dos fungos produtores. A presena de fungos toxignicos num alimento, no significa, necessariamente, a presena de micotoxinas, bem como a ausncia de fungos toxignicos num alimento, no significa necessariamete a ausncia de micotoxinas, dado que estas podem persistir por muito tempo depois do desaparecimento dos fungos produtores. Doena X dos pers observou-se, primeiramente, em pers sem se conhecer a causa. Posteriormente, a mesma patologia observou-se em animais domsticos, galinhas, patos e porcos. Da investigao destes casos, concluiu-se que todos os animais afectados tinham ingerido uma determinada rao de amendoim, proveniente do Brasil. Nesses amendoins foi detectado Aspergillus flavus e aflatoxinas. Guerra microbiolgica (Chuva Amarela) utilizao de tricotecenos em guerras no sudoeste asitico, contra populaes no Laos e Camboja. Estas substncias era pulverizadas por avies, e caiam sob a forma de partculas amarelas, viscosas e semi-slidas, afectando uma parte da populao. Os sintomas tpicos de intoxicao por tricotecenos (vmitos, fiarreia, hemorragias internas) persistem horas e at dias. Nos sobreviventes surgiram infeces secundrias na pele, vulgarmente, o parecimento de fungos. Para comprovar a causa, foi necessrio a pesquisa de tricotecenos, atravs da anlise de amostras recolhidas nas regies. As amostras foram submetidas a uma cromatografia gasosa e a uma espectrometria de massa: Amostra 1 (folha e caule de plantas, das zonas de ataques) detectado T-2, desoxinivalenol, nivalenol, Amostra 2 (gua recolhida, do local da amostra 1) detectado desoxinivalenol; Amostra 3 (raspagem de rochas, aps ataques) detectado T-2 e diacetoxiscirpenol; Amostra 4 (sangue, soro e urina das vtimas dos ataques); Amostras controlo (locais no pulverizados) resultados negativos. Efeitos comprovados das micotoxinas: Aflatoxinas cancro do fgado (animais / Homem); Zearalenonas hiperestrogenismo / esterilidade (animais); Tricotecenos vmitos, diarreia, hemorragias internas (animais / Homem); Moniliforminas leses no aparelho circulatrio (animais); Fumonisinas leucoencefalomalacia dos equdeos, Edema pulmonar do porco, Leses nos rins das ovelhas, Cancro do fgado do ratinho (animais); Ocratoxinas nefropatia / disfuno renal (animais); cido peniclico leses no fgado, rins e tiride (animais); Patulina leses nos rins, fgado, pulmes, crebro e bao (animais); Citrinina nefropatia / disfuno renal (animais).

80

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

LQUENES
Lquenes Lquenes associao estvel e permanente entre um micobionte e um fotobionte. Esta associao antiga, pois ambos os seres evoluram em conjunto, constituindo um grupo polifiltico, com associao por vrias vezes, formando-se pouco tempo aps a criao da linha evolutiva dos ascomicetos. Os dois organismos so inter-dependentes, mas a sua associao no estritamente obrigatria, no entanto o micobionte no vive livre na Natureza. A sua nomenclatura, sistemtica e taxonomia so definidas pelo micobionte (segundo o cdigo internacional de nomenclatura botnica). O talo definido pelo micobionte. No entanto, sem a presena do fotobionte, o talo no se estabelece. A grande maioria das espcies possui apenas 1 microbionte e 1 fotobionte. Mas algumas espcies possuem 1 micobionte e vrios fotobiontes, sendo o segundo fotobionte um cefaldio (gneros Lobaria, Placopsis, Psoroma, Stereocaulon). Re-Sntese Liqunica Etapas: Separar o organismo micobionte, do fotobionte; Cultivar separadamente, os organismos, in vitro; Juntar ambos os organismos e obtm-se o talo liqunico.
Composio do Talo Induo da separao do micobionte e do fotobionte Componente fngica Componente algal Proliferao em cultura Proliferao em cultura Juno dos dois organismos Reconstituio do talo

A ltima etapa deve ser realizada em meios de cultura muito pobres, pois em meios de cultura ricos, o micobionte prolifera e destri o fotobionte. , tambm, necessrio a existncia de uma alternncia entre luz e escurido e entre humidade e secura, de modo que as condies da Natureza, sejam simulados. Micobiontes que Ocorrem nos Lquenes 98% dos lquenes tm ascomicetos. 46% dos ascomicetos so lquenes. 0,4% dos lquenos tm basidiomicetos. 1,6% dos lquenes tm deuteromicetos. Nos ascomicetos, das 46 ordens existentes, 16 delas contm lquenes, e inclusiv 4 delas tm exclusivamente lquenes. 90% dos lquenes tm clorfitas (25 gneros). 10% dos lquenes tm cianobactrias (15 gneros). Clorfitas mais vulgares so a Trebouxia (unicelulares com cloroplasto central estrelado, mas que no ocorre livremente na Natureza), Trentepholia (filamentosa com glbulos carotenides), Myremecia, Coccomyxa, Cephaleuros. Cianobactrias mais vulgares (Nostoc, Calothrix, Gloeocapsa, Scytonema, Stigonema). Tipos Morfolgicos Crustceo talo com crosta aplanada, que est intimamente aderente ou mesmo imerso no substrato (solo ou rochas), atravs de ritidomas. Fruticuloso semelhante a um pequeno arbusto, erecto ou pendente, na sua maioria com organizao radial. Foliceo laminar, achatado, membranoso, parcialmente aderentre ao substrato, atravs de rizinas ou umbigo central, possuindo, na sua maioria, uma organizao dorsiventral. Existe, tambm, o tipo morfolgico Pulverulento. 81

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Tecidos Fngicos Na maioria dos lquenes o micobionte possui tecidos bem organizados. O tipo de tecido, depende da ramificao e anastomose de hifas, para alm da gelatinizao e fuso das paredes. Tecido araquenide hifas entrecruzadas num arranjo frouxo. Tecido fastigiado hifas paralelas, num arranjo compacto, com direco perpendicular, superfcie. Tecido fibroso hifas paralelas com uma parede, extensivamente, soldada. Tecido pseudoparenquimatoso clulas curtas e isodiamtricas, com paredes soldadas Tecido prosoplectnquimatoso paredes muito gelatinizadas, que esto, extensivamente, soldadas. Camadas Estruturais Crtex camada superficial, com tecido pseudoparenquimatoso ou prosoplectenquimatoso. Funes: proteco mecnica, defesa contra predadores e proteco do fotobionte a radiao excessiva. Externamente, pode possuir: Epicrtex substncias excretadas pelo crtex; Camada epinecrgena clulas mortas; Pruna depsito de carbonato de clcio. Camada algal geralmente, encontra-se subjacente ao crtex, estando as hifas do micobionte em contacto ntimo com as clulas do fotobionte. Possui: Haustrio intracelular perfurao da parede celular, com uma invaginao na membrana citoplasmtica. Mais frequentes, em lquenes crustceos; Haustrio intraparietal invaginao na parede celular (pseudohaustrio). Mais frequentes, em lquenes crustceos; Apressrio regio em contacto directo com a camada algal. Mais frequentes, em lquenes foliceos e fruticulosos. Medula camada interna, com tecido araquenide e um reservatrio de gua. Substncias liqunicas, sob a forma de incrustaes nas paredes celulares. Eixo interno camada interna constituda por tecido fibroso e com elevada rigidez no talo. Organizao Interna Desorganizados sem camadas (Homoimero) (Collema e Placvnthium). Organizados em camadas (Hetermero): Radial talos fruticulosos (Usnea sp., Ramalina sp.); Dorsiventral talos foliceos e crustceos. Estruturas Vegetativas Rizinas rgos de fixao ao substrato. Constitudo por tecido prosoplectnquima e com uma morfologia muito diversa. Em diversos gneros uma estrutura importante na sua identificao, logo taxonomicamente relevante. Cifelas e pseudocifelas depresses no crtex. Cifelas abertura organizada, com o crtex (Sticta); Pseudocifelas abertura que expe a medula (Punctellia e Pseudocyphellaria). Sorlios massa de sordios (corpsculo do micobiote e fotobionte, sem crtex). Constitui o principal agente dispersante dos lquenes. Pode ser laminar, marginal, terminal, eruptivo ou escavado. Isdios proturberncias cilndricas que constituem prolongamentos do talo, revestidos pelo crtex. Aps o seu destacamento, d origem a propgulos vegetativos.

82

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Trocas Micobionte Fotobionte Fotobionte autotrfico e fotossinttico. Micobionte heterotrfico. Transferncia de carbono do fotobionte, para o micobionte (em Trebouxia (clorfita) sob a forma de ribitol, em Trentepohlia (clorfita) sob a forma de eritritol e em Nostoc (cianobactrias) sob a forma de glucose). Esta transferncia s ocorre na simbiose, pois se separados, o fotobionte no liberta carbono. Dada a proporo de massa entre o fotobionte/micobionte, a maioria do produto fotossinttico consumido ou armazenado, pelo micobionte (argumento do parasitismo). Assim, o micobionte vai converter Ribitol / Eritritol / Glucose em Arabitol / Manitol. Estes produtos so, minoritariamente, consumidos, mas maioritariamente, armazenados. Desta forma, os micobiontes possuem elevadas concentraes de arabitol e manitol (em peso seco), cujas vantagens se traduzem na resistncia desidratao e a temperaturas extremas, onde so um elemento decisivo para a sobrevivncia, de ambos os organismos. Estruturas Reprodutoras Sexuais Maioria dos lquenes ascomicetos e discomicetos, formam apotcios, mas podem tambm formar, num estroma, um nmero restrito de peritcios. Apotcios: Lecanorinos o crtex superior possui continuidade com a camada algal; Lecedno o crtex no tem continuidade com a camada algal. Peritcios ascostromas. Picndios agrupamentos de conidiforos. Simbiose versus Parasitismo Simbiose ambos beneficiam. Parasitismo um dos organismos explora o outro. Argumentos a favor da interpretao simbitica: Benefcios para o micobionte fonte de carbono grtis; Benefcios para o fotobionte proteco da radiao solar (o fotobionte nunca superficial) e contra a dissecao (a medula armazena grande quantidade de gua), reciclagem do CO2 uma vez que o crtex pouco permevel (concentrao de CO2 no interior do talo elevada, o que leva a uma maior taxa fotossinttica). Substncias Liqunicas Metabolitos secundrios sintetizados pelo micobionte. Estas substncias so insolveis em gua, mas solveis, em solventes orgnicos. Formam depsitos superfcie das hifas. A maioria sintetizado pela medula, mas uma minoria tambm sintetizada pelo crtex.
Camada externa de proteco contm polissacardios, com gua absorvida e nutrientes dissolvidos. Filtros de luz protegem a camada algal, do excesso de luz solar Alga verde fotossinttica. Camada mais externa da alga, em contacto com protenas fngicas permitem que permanea seca Hifas do fungo rodeadas por substncias liqunicas e protenas que repelem a gua, se o lquene ficar muito molhado no consegue realizar fotossntese, eficientemente. No entanto necessrio que os gases sejam capazes de entrar e sair do lquene Pigmentos castanhos, tipo melanina, esto tambm presentes, possuindo no seu interior, gua e nutrientes dissolvidos

Oxalato de clcio depositado pelo lquene para sobreviver a condies hostis

Acar produzido pela alga e passa para o fungo onde armazenado sob a forma de manitol

Foram identificados centenas de compostos diferentes, que tambm so sintetizados pelos micobiontes, isoladamente. Identificao Atravs da morfologia dos cristais, de testes coloridos, de cromatografias e de outros mtodos de anlise. 83

Microbiologia e Biologia dos Fungos (2010-2011)

Ana Cristina Ribeiro Gomes

Funes Quelatao metais modulao e absoro de metais fisiolgicos (Na, K, Mg, Ca) e sequestrao de metais txicos (Pb, Hg, Zn, Cu). Impermeabilizao do crtex e medula so hidrofbicas, logo diminuem a perda de gua, pelas hifas. Regulao metablica algumas enzimas, de substncias liqunicas, podem regular / controlar o fotobionte. Defesa de predadores e parasitas substncias liqunicas actuam, devido sua actividade antimicrobiana, aleloptica e antiherbvora: evitam o parasitismo de bactrias gram-positivo e fungos, mas no totalmente (frequente em fungos parasitas de lquenes); capturam pequenos animais; proteco da germinao de esporos e sementes. Regulao da absoro da radiao proteco de diversas formas, inclusiv a absoro de raios ultra-violeta. Tambm regulam a atranorina, que absorve a radiao ultravioleta, e emite-a com o comprimento de onda, de 425 nm. Lquenes como Corantes Corantes extrados, com gua fervente dpsidos e depsidona (-orcinol). Apresenta uma cor amarelo / castanho / ferrugem. Fervura de roupa / fibras + lquenes (algumas horas). Corantes de fermentao dpsidos e depsidonas (orcinol). Produzem uma cor prpura / vermelha. Realiza-se com fibras + lquenes + amonaco (temperatura ambiente). Tcnicas de Datao de Lquenes / Subtratos Observao / medies directas atravs da fotografia area e satlite. Documentos antigos Atravs de descries, pinturas e gravuras, mas necessrio uma anlise crtica dos textos. Muitas vezes pode ser subjectivo ou baseado em lendas. Dendrocronologia serve para verificar o tempo e colonizao. Datao de rvores mais velhas nas moreias terminais, onde atravs do nmero dos seus anis, permite o clculo da idade mnima. No entanto, como existe um certo tempo entre o solo descoberto e o estabelecimento das rvores, apenas possvel ser determinado o tempo de colonizao por substratos conhecidos. Liquenometria datao de lquenes mais velhos em moreias terminais. Permite assumir a colonizao, aps as rochas serem descobertas pela neve. Isto deve-se ao facto de os substratos, geralmente, serem colonizados alguns anos aps a sua exposio. O tempo entre a exposio e a colonizao dado pelo clima, substrato e lquene. Os lquenes crustceos so os mais utilizados (aparecem em substratos ptreos), por serem espcies com crescimento muito lento. Rhizocarpon sp. dos lquenes mais utilizados. A datao de lquenes em monumentos, serve para confirmar datas de registos histricos. Nos glaciares aparecem Moreias, que tm vindo a sofrer um recuo, na maioria dos glaciares de todo o mundo, sendo a principal causa do aquecimento da atmosfera. Na realidade, existe um desfasamento, de alguns anos, entre o aquecimento e o recuo dos glaciares, mas a extenso do recuo reflecte o aquecimento atmosfrico. As moreias terminaris so muito importantes na datao, pois so proxys da temperatura atmosfrica. Calibrao substratos semelhantes ao que se pretendem datar, que constituam dados de idade inquestionveis (em substratos de idade j conhecida, como campas de cemitrio). necessrio seleccionar talos de contornos regulares e medir o dimetro de todos os talos, das espcies seleccionadas. Posteriormente, para cada espcie, elabora-se um grfico dimetro vs tempo. Para cada tempo, escolhe-se o maior (ou a sua mdia). Traar a curva de crescimento pelos maiores talos, ou seja, pelo lquene mais antigo, de cada espcie. Medio de lquenes em novas superfcies em superfcies para datao so medidos todos os talos das espcies seleccionadas.

MTODOS ABSOLUTOS

MTODOS QUASE ABSOLUTO

Interpolao (determinao da idade do lquene no substrato) utilizando as curvas de crescimento faz-se uma interpolao (e no extrapolao, pois a taxa de crescimento varia entre os anos, devido ao clima) de forma a ser calculada a idade dos talos. 84 Da interpolao resulta a determinao da idade do lquene e do substracto, atravs do lquene mais velho, pois o que ter uma idade mais semelhante e aproximada ao da exposio, assumindo que a superfcie foi colonizada, logo aps a sua exposio.