Laboratorio de Evaluacin de Frmacos y Medicamentos I

Estudio del Perfil de Absorcin de la Sulfacetamida Sdica en Conejo.

Urbina Soto Jonathan, Laboratorio de Farmacologa L 202, Facultad de Estudios Superiores Zaragoza, UNAM. Av. Guelatao 66, Ejrcito de Oriente, 09230, Mxico D.F.
Resumen Cuando se administra un frmaco a un organismo varios procesos como la absorcin, distribucin, biotransformacin y eliminacin influirn en la biodisponibilidad del frmaco. Estos procesos tienen lugar durante un perodo determinado y por esto pueden medirse y expresarse como velocidades. Con el propsito de estudiar la farmacocintica que es la rama que mide las velocidades antes mencionadas. Se trabajo con un conejo en el cual a travs de su peso se calculo la dosis de sulfacetamida sdica. En el procedimiento se inyecto la heparina por va intravenosa para evitar la coagulacin, se administro el frmaco y se extrajo la sangre por va intravenosa cada cierto tiempo, esto tambin se considero cuando se extrajo por va intramuscular. A las muestras obtenidas en cada rango se les hizo una determinacin colorimtrica de sulfonamidas en sangre total por el mtodo de Bratton-Marshall, las absorbancias obtenidas se interpolaron en una curva patrn para determinar la concentracin de la sulfacetamida en cada una de las muestras. Se obtuvieron los resultados de una concentracin mxima, as como la constante de absorcin, un tiempo de concentracin mxima, un volumen aparente de distribucin, tiempo de vida media biolgica as como una biodisponibilidad tanto relativa como absoluta. Abstract. When a drug is administered to an organism several steps take place such as the absorption, distribution, biotransformation, and elimination will influence in the biodisponibility of the drug. These steps take place during a certain period and by this they can be moderate and be expressed like a phenomenon named speed. In order to study the pharmacokinetics that is the branch that measures the mentioned speeds, we worked with a rabbit in which through its weight we calculated the sodic sulphacetamide dosage. In the procedure we injected heparine by intravenous route to avoid the coagulation process, we administer the drug and every certain time a blood sample was extracted by intravenous route, as well considered when it was extracted by intramuscular route. To the samples obtained in each rank a colorimetric determination was done to them of sulfonamides in total blood by the method of Bratton-Marshall, the obtained absorptions were interpolated in a curved pattern to determine the concentration of the sulphacetamide on in each one of the samples. The results of a top concentration, as well as the constant of absorption, a time of top concentration, an apparent volume of distribution were obtained, time of biological average life as well as a relative and absolute biodisponibility.

Introduccin
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El presente trabajo nos muestra el estudio que se hizo sobre el perfil de absorcin de la sulfacetamida sdica en el conejo, tomando como variable principal la va de administracin (intravenosa vs. intramuscular). En el tratamiento de enfermedades la eleccin del medicamento depende en gran medida de la va de administracin y el tiempo de accin; en el tratamiento a nivel hospitalario donde la accin debe ser inmediata en el caso de emergencias los tiempos son el factor principal entre la vida la muerte, es por ello que la absorcin es de vital importancia.

Marco Terico
Todos los medicamentos tienen que pasar por el proceso conocido como LADME (Liberacin, Absorcin, Distribucin, Metabolismo y Eliminacin). El proceso de absorcin comprende la penetracin de los frmacos en el organismo a partir del sitio inicial de administracin, los mecanismos de transporte, las caractersticas de cada va de administracin, los factores que condicionan la absorcin por cada va y las circunstancias que pueden alterar esta absorcin. En la prctica va a ser imposible medir la concentracin del frmaco en el lugar de accin, ya que es un espacio virtual, por lo que se mide la concentracin plasmtica. Algunos conceptos fundamentales son: Biodisponibilidad: cantidad de frmaco que llega en forma activa a la circulacin. Fraccin de absorcin: nmero que relaciona las concentraciones plasmticas de la administracin extravascular y la intravascular. Velocidad de absorcin: cantidad de frmaco que se absorbe por unidad de tiempo. Vida media de absorcin: tiempo que tarda en reducirse a la mitad, la cantidad de frmaco disponible para absorberse.

Objetivo
Se realizo un estudio farmacocintica de la sulfacetamida sdica en conejo ensayando diferentes vas (intravenosa e intramuscular) para determinar cul de ellas es mejor. 2

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Hiptesis
Al administrar va intravenosa la sulfacetamida sdica en conejo, no se observar un comportamiento de absorcin, sino slo de eliminacin; siguiendo el modelo de un compartimiento por lo que la biodisponibilidad de la sulfacetamida ser del 100%.

Metodologa
a) Material Biolgico: Un conejo de 2.0 a 2.5 Kg con 12 horas de ayuno. c) d) Cristalera y Equipo: 10 tubos de ensaye de 13X100 mm 10 tubos de ensaye de 15x150 mm 1 gradilla 2 jeringas de 1 ml 2 jeringas de 3 ml 1 rastrillo 1 balanza de dos platillos 1 balanza con canastilla 1 centrifuga 1cepo para conejo Papel parafilm Algodn Reactivos: Sulfacetamida sdica (disolucin al 10%) Heparina (disolucin 5000 Ul/ml) N-naftiletilendiamina al 0.05% cido tricloroactico al 25% Nitrito de sodio al 0.5% Xilol Procedimiento:

b)

La primera parte es la realizacin de la curva estndar pero fue proporcionada por los profesores de laboratorio, descripcin del procedimiento de cmo se debe realizar la curva patrn de sulfacetamida sdica. Pesar 0.2 g. de sulfacetamida sdica, disolver con agua destilada y aforar en un matraz volumtrico de 100 ml. De esta disolucin pasar a matraces volumtricos de 100 ml 0.1, 0.2, 0.4, 0.8, 1 y 2 ml y llevar al aforo. Se obtendrn concentraciones de 2, 4, 8, 16, 20 y 40 g/ml.

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Se van a medir 2 ml de cada disolucin, para determina la absorbancia, construyendo as una grfica.

Preparacin del material biolgico. Se peso al conejo y se rasuro las dos orejas, con un rastrillo que no presentara lubricante.

Se administro una dosis de heparina por va intravenosa. Transcurrieron 12 min y se toma la muestra de 0.2 ml de sangre (muestra blanco t=0) Se calculo la dosis y el volumen de la sulfacetamida sdica de acuerdo a su peso. (100 mg/ml) Para la va intravenosa se utilizo la vena marginal de la oreja (sitio deferente a la administracin de la heparina). Tomar el tiempo.

Para la va intramuscular utilice el msculo de la pata trasera. Se tomo la muestra de 0.2 ml de sangre de la vena marginal de la oreja donde se administro la heparina los siguientes tiempos: 12, 31, 45, 64, 90 y 120. Despus se procedi a realizar una determinacin colorimtrica de sulfonamidas en sangre total. La determinacin se llevo a cabo midiendo 0.2 ml de sangre y aadiendo 1.8 ml de agua destilada, se dejo reposar por 5 min, posteriormente se agrega 0.6 ml de cido tricloroactico agitando y se dejo reposar por 5 min. Centrifugo a 3000 rpm durante 5 minutos. Algunas partes del tubo todava presentaban turbidez as que se centrifugo por 2 min. Se midieron 2 ml de sobrenadante y se le adicionaron dos gotas de nitrito de sodio al 0.5%, agitando y se dejo reposar por 2 min. Antes de leer en el espectro se agregaron 2 ml de Nnaftiletilendiamina al 0.05%, para el desarrollo del color. 4

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Se obtiene una coloracin lila y se lee a 540 nm la absorbancia. Se interpolo las absorbancias con la curva patrn para determinar la concentracin de la sulfacetamida.

Resultados
Despus de llevar a cabo el mtodo sealado anteriormente se obtuvieron los siguientes resultados: Resultados para la curva estndar Aplicando el mtodo de Bratton Marshall (figura 1.6) se obtuvo: Concentracin (g/mL) 8 16 20 40 Absorbancia 0.12 0.28 0.52 0.75

Tabla 1.1. Absorbancias correspondientes a la curva estndar.

C u rva estndar para la sulfacetam ida

0.8 0.7 Absorbancia 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 8 16 Conce tra cin (g/m L) 20 40

Grfica 1.1. Curva estndar

Como con estos datos de absorbancia no se obtuvo una lnea recta, se corrigieron por medio de la regresin lineal obteniendo: Concentracin (g/mL) 8 16 20 40 Absorbancia 0.1618 0.3183 0.3966 0.7880

Tabla 1.2. Valores de absorbancia obtenidos por regresin lineal.

La ecuacin de la recta obtenida fue la siguiente: y = mx + b 5

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y = 0.01957x + 5.2465 x 10-3 Resultados para las muestras obtenidas Una vez trazada la curva estndar, se aplic nuevamente la tcnica de Bratton Marshall para las muestras de sangre obtenidas del conejo previamente tratadas como se seal en el mtodo. Se obtuvieron los valores de absorbancia, y estos se interpolaron en la grfica linealizada, obteniendo las concentraciones de sulfacetamida. Cabe sealar que las muestras para los tiempos de 12 y 31 minutos, se tuvieron que diluir ya que presentaban un color muy intenso y por consiguiente los datos de absorbancia se salan de lo permitido (valor de 1), para ello se tom 1mL de cada una de las muestras y se afor a un volumen total de 5mL, de modo que el valor de concentracin obtenido de la interpolacin se multiplic por el factor de dilucin cuyo valor se obtuvo de la siguiente frmula: Factor de dilucin = Factor de dilucin = Vtotal Valcuota 5mL = 5 1mL

Por consiguiente los valores de concentracin indicados en la tabla 1.3 para los tiempos 12 y 31 se obtuvieron considerando la dilucin. Tiempo (min) 12 (t =0) 31 45 64 90 120 Absorbancia 0.12 0.13 0.60 0.45 0.27 0.19 Concentracin (g/mL) 28.2 31 30.42 22.67 13.38 8.22

Tabla 1.3. Concentraciones obtenidas para las muestras problema.

Como puede observarse, el dato de concentracin obtenido para el minuto 12 difiere de los dems, es decir, no concuerda con el modelo esperado (de un compartimento); por lo que para fines prcticos y en base a la grfica obtenida, el valor de la concentracin para el minuto 12 ser de 32 (g/mL), por consiguiente los datos para trazar las curvas 1.2 y 1.3 sern los siguientes: Tiempo (min) 12 (t =0) 31 45 64 90 120 Concentracin (g/mL) 32 31 30.42 22.67 13.38 8.22 log C 1.50 1.49 1.48 1.35 1.12 0.91 6

Laboratorio de Evaluacin de Frmacos y Medicamentos I Tabla 1.4. Datos para las concentraciones y logaritmos de stas (log C).
Concentracin de la sulfacetamida en funcin del tiempo
40 35 Concentracin (g/mL) 30 25 20 15 10 5 0 12 (t =0) 31 45 64 90 120 Concentracin (g/mL) Logartmica (Concentracin (g/mL))

Tie m po (min)

Grfica 1.2. Concentracin de la sulfacetamida en funcin del tiempo y tendencia logartmica.

Constante de eliminacin (kel) Una vez obtenidos estos datos, se sometieron a regresin lineal para obtener el valor de la pendiente y en base a sta el valor de la constante de eliminacin (kel). La grfica 1.3, muestra la regresin lineal para el logaritmo de la concentracin en funcin del tiempo.
Grfica de Log C en funcin del tiempo as como su regresin lineal
1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0 12 (t =0)

Log C

log de C Lineal (log de C)

31

45

64

90

120

Tiempo (min)

Grfica 1.3. Regresin lineal para el log C de acuerdo con el tiempo.

A partir de la regresin lineal de los datos, se obtuvo la ecuacin de la recta para obtener el valor de la pendiente (m) y determinar la kel correspondiente a: y = mx + b y = -5.88 x 10-3 + 1.66 Ahora aplicando la frmula: m = - kel 2.3 kel = - (m) (2.3) Sustituyendo: kel = - (-5.88 x 10-3) (2.3) 7

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kel = 0.0135 min -1 Clculo de la Cp de sulfacetamida En base a estos datos, se obtuvo el valor de la concentracin plasmtica (Cp) de la sulfacetamida para cada uno de los tiempos aplicando la siguiente frmula: Cp = Cp0 e ke.t Donde: Cp = Concentracin plasmtica de la sulfacetamida a determinado tiempo (g/mL). Cp0 = Concentracin plasmtica de la sulfacetamida en el tiempo cero. Como en este caso la va de administracin fue intravenosa, el valor de Co corresponde a la concentracin determinada a los 12 minutos por lo tanto, Co = 32g/mL. kel = Constante de eliminacin. t = Tiempo (minutos). Para los 31 minutos Cp = (32) e-(0.0135)(31) Cp = 21.05 g /mL Para los 45 minutos Cp = (32) e-(0.0135)(45) Cp = 17.43 g /mL

Para los 64 minutos Para los 90 minutos Cp = (32) e-(0.0135) (64) Cp = 13.48 g /mL Para los 120 minutos Cp = (32) e(0.0135) (120) Cp = 6.33 g /mL La tabla 1.3 resume los valores de Cp con respecto al tiempo. Tiempo (min) 12 t = 0 31 Valor de Cp (g/mL) 32 48.63 8 Cp = (32) e-(0.0135) (90) Cp = 9.49 g /mL

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45 64 90 120

58.75 75.92 107.85 161.70

Tabla 1.3. Valores de Cp encontrados para los diferentes tiempos.

Tiempo de vida media Posteriormente se procedi a determinar el valor del tiempo de vida media de la sulfacetamida sdica aplicando la siguiente frmula: t1/2 = ln 2 kel t1/2 = ln 2 0.0135 min-1

t1/2 = 51.34 minutos Biodisponibilidad (F) En el caso del clculo de la biodisponibilidad, por definicin para la va intravenosa corresponde al 100%. Biodisponibilidad (F) va I.V. = 100% Volumen de distribucin aparente (Vd) Se calcula a partir de la siguiente frmula: Vd = dosis Cp0 32 g 1mL 0.032mg 1mL X 1000mL X = 32mg/L Vd = 197.175 mg 32mg /L Vd = 6.16 17 L Volumen de distribucin especfico (Vde) Vde = Vd Vde = 6. 1617 L 9

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Peso rata

2.629 kg Vde = 2.34 L

Discusin de Resultados En la administracin intravenosa no se presenta el fenmeno de absorcin, pero en nuestros resultados entre la primera y segunda muestra hay un pequeo aumento en la concentracin (debido a que no se llevo a cabo la completa desproteinizacin pues presentaba un grado importante de turbidez an despus de la segunda centrifugacin) pero por fines prcticos no se tom en cuenta para realizar los clculos. A final de cuentas logramos obtener la constante de eliminacin (pendiente de la curva logartmica). Los tiempos de toma de muestra fueron diferentes a los indicados en el manual debido a la dificultad para obtener las muestras, pero los intervalos de tiempo fueron respetados. Se empleo Xileno para poder visualizar claramente las venas en las orejas de conejo debido a su funcin como vasodilatador. Se tuvo que diluir la muestra del tubo 12 y 31 debido a que se encontraban concentradas por lo que el espectrofotmetro no poda medir su absorbancia (la curva estndar toma como lectura mxima 1 y antes de diluir las muestras la absorbancia era superior).

Conclusiones
La inyeccin intravenosa de frmacos evita los factores relevantes que intervienen en la absorcin (inmediatamente se dan los procesos de distribucin, biotransformacin y eliminacin), porque en la sangre venosa la biodisponibilidad es completa y rpida. Cuando se inyecta un medicamento por sta va, es importante vigilar la respuesta del paciente porque una vez administrado el frmaco ya no hay marcha atrs.

Referencias
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4. Drill V. A. Farmacologa Mdica. 27 ed. Mxico: La Prensa Mdica

Mexicana; 2004. pp. 50-80

5. Velasco M., Fernndez L., Molina J., Trelles F. Velsquez. Farmacologa. 16a edicin. Madrid: Interamericana Mac Graw Hill, 1993: 38 52. 6. Levine R. Farmacologa. Acciones y reacciones medicamentosas. Barcelona: Salvat editores, 1982: 90 95.

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