Escolar Documentos
Profissional Documentos
Cultura Documentos
Objectivos educacionais
No fim deste captulo, voc dever ser capaz de:
Listar os alimentos ricos em cidos nuclicos Descrever como as bases nitrogenadas e os cidos nuclicos da dieta so digeridos Escrever a estrutura qumica de pelo menos uma purina e pelo menos uma pirimidina Reconhecer e identificar a estrutura de uma purina Reconhecer e identificar a estrutura de uma pirimidina Mencionar a nomenclatura, a composio e a ocorrncia dos nucletidos derivados de cidos nuclicos Identificar as diferenas funcionais e estruturais entre as purinas e as pirimidinas
Objectivos educacionais
Explicar as funes dos nucletidos, usando as suas prprias palavras Descrever como composto um cido nuclico em termos de estrutura primria, secundria e terciria, usando o DNA e o tRNA como exemplos Identificar, usando terminologia apropriada, os diversos compostos relacionados com nucletidos Enunciar que nucletidos so encontrados em cidos nuclicos Caracterizar as ligaes qumicas existentes num nuclesido: entre glcidos e bases nitrogenadas, entre glcidos e fosfatos, e entre fosfatos Explicar como os nucletidos se associam para formar cidos nuclicos
Objectivos educacionais
Indicar os tipos de acares que ocorrem em nucletidos Explicar a diferena entre nuclesidos e nucletidos Descrever a estrutura do DNA e explicar a sua disposio espacial Apresentar 2 diferenas entre A-DNA, B-DNA e Z-DNA Definir Tm e justificar como diversos factores que actuam sobre ela Fazer clculos relacionando a Tm e a composio dos cidos nuclicos Indicar as principais classes de cido ribonuclico Caracterizar cada uma das classes de cido ribonuclico em relao sua funo celular, abundncia, diversidade e propriedades estruturais
Aplicaes
Que interesse tem para o estudante de medicina o estudo da estrutura e funes destes compostos? Termos como clonagem, terapia gentica (diabetes tipo I, fibrose qustica), animais transgnicos, quimeras, anticorpos monoclonais e organismos geneticamente modificados (OGM) esto no centro de discusses triviais e cientficas. O conhecimento da estrutura tem aplicaes em esferas como PCR (diagnstico de estirpes, diagnstico forense, etc), fingerprinting, etc. H pelo menos 28 doenas hereditrias ligadas ao metabolismo das bases nitrogenadas, tendo em comum: anemia, baixa imunidade, surdez, gota, automutilao. Uma das doenas mais enigmticas, o sndrome de Lesch Nyhan, causado por um defeito no metabolismo de purinas.
Histria
1866: Gregor Johann Mendel descobre a hereditariedade de alguns factores em ervilhas. 1868: Johann Friedrich Miescher isola substncias no protecas contendo fsforo (nuclena) em ncleos de clulas de pus, a partir de pensos descartados de um hospital prximo de sua casa. 1889: Richard Altmann sugere o nome de cido nuclico para a nuclena de Miescher.
Histria
At 1944, ie, 60 anos atrs, nada se sabia sobre a base qumica da vida, o DNA. 1944: Oswald Avery, Colin MacLeod e Maclyn McCarty: o DNA a unidade fundamental do princpio que transforma o Pneumococcus de tipo III. A percentagem de C, H, N, O, P no tal princpio estava de acordo com os valores tericos para o DNA. 1950: Erwin Chargaff publica a primeira das regras de Chargaff ao descobrir que deoxiadenina/ timina e guanina/citosina era ~ 1.0 em todas as espcies estudadas. (as regras de Chargaff fariam sentido anos mais tarde)
1952: Alfred Hershey e Martha Chase apontam para um papel gentico para o DNA em estudos com o bacterifago T2.
Histria
1952: Rosalind Franklin produz uma fotografia em raios X do DNA provando que ele possui uma estrutura em dupla hlice.
1953: James Watson e Francis Crick descrevem a estrutura do DNA, uma dupla hlice (dplex).
1957: Arthur Kornberg produz DNA num tubo de ensaio. 1961: Sydney Brenner, Franois Jacob e Mathew Meseleson descobrem o mRNA e fazem demonstrao de que os ribosomas so o stio da sntese protica e no so transportadores intermedirios de informao. 1961: Benjamin Hall e Sol Speigleman demonstram que o DNA pode formar hbridos com o RNA.
Histria
1966: o cdigo gentico descoberto (Marshall Niremberg e Heinrich Matthaei). 1972: Paul Berg produz a primeira molcula de DNA recombinante. 1979: Alexander Rich descobre macromolculas de DNA enroladas esquerda e com conformao em zigzag, o Z-DNA. 1983: Barbara McClintock descobre genes capazes de mudar de posio nos cromossomas (prmio Nobel).
Histria
1990: os primeiros ensaios de terapia gentica tm lugar no Mundo (terapia de genes: insero de um gene normal no genoma de um indivduo para tratar uma doena resultante de um gene no funcionante ou ausente) 1993: Kary Mullis inventa o mtodo PCR (prmio Nobel). 1994: o primeiro alimento geneticamente modificado (tomate FlavrSavr) aprovado para consumo nos Estados Unidos. Meados dos anos 90: as primeiras culturas em larga escala de plantas geneticamente modificadas 2010: os primeiros mosquitos resistentes ao plasmdio da malria so criados em laboratrio.
Exemplos de alimentos ricos em purinas: espinafres, couve-flor, ervilhas, carne de vsceras (fgado, rim, corao), cerveja, leveduras, certos peixes (maquerel, truta, sardinha, anchovas) e mariscos (camaro, lagosta).
Alguns sais de nucletidos (ex, inosinato disdico, guanilato disdico) encontram-se em muitos alimentos sob forma de temperos.
Na dieta humana
Por vezes, cidos e nucletidos so comercializados sob o nome de imunonutrientes, sob o pretexto de que eles so nutrientes importantes em condies de crescimento rpido, acesso limitado a alimentos e stress metablico.
No organismo humano
BASES NITROGENADAS
Estrutura Os cidos nuclicos e os nucletidos so compostos por bases nitrogenadas ou nucleobases. As bases so quimicamente fracas. Podem ser purinas ou pirimidinas. A principal diferena est no nmero de anis que possuem. Uma pirimidina um composto heterocclico com quatro carbonos e dois nitrognios. A purina um composto bicclico formado por uma pirimidina associada a um anel imidazol.
Anel de pirimidina
Anis de purina
Timina
Citosina Uracilo
Adenina (6-aminopurina)
Uracilo (2,4-dioxipirimidina)
NUCLESIDOS
Nuclesido: quando a base nitrogenada est covalentemente ligada por uma ligao N-glicosdica ao carbono 1 de uma pentose. A pentose, ribose ou desoxiribose, apresenta-se sempre como ismero D.
A ligao entre o acar e base faz-se em N-9 nas purinas e em N-1 nas pirimidinas.
As posies 3 ou 5' de um nuclesido comportam um grupo OH
ACARES
-D-ribose
-D-desoxiribose
Nuclesido
Nomenclatura de nuclesidos
Os nuclesidos so identificados com o uso da terminao ina. Exemplos: para as purinas adenosina, guanosina para as pirimidinas - timidina, citidina, uridina.
Se o acar for uma desoxiribose anexa-se o prefixo desoxi aos nomes acima Exemplo: desoxi-adenosina Excepo: timidina (s ocorre com desoxiribose).
NUCLETIDOS
Estrutura
Os nucletidos possuem 3 componentes tpicos: uma base nitrogenada um acar da classe das pentoses um grupo fosfato.
Nucletidos: formados por trs diferentes tipos de molculas: um acar (pentose): desoxirribose no DNA e ribose no RNA. um grupo fosfato. uma base nitrogenada.
Nucleotdeo de DNA
Nucleotdeo de RNA
Nucletido
Nomenclatura de nucletidos
Por conveno usa-se: uma letra maiscula (A, G, U, C, etc) para representar o nuclesido um p para representar o grupo fosfato. NMP, dNMP: abreviaturas utilizadas para casos em que no est indicada a base nitrogenada.
cido
cido 2adenlico cido 3adenlico cido 5adenlico cido 3guanlico cido 3citidlico cido 3uridlico
Fosfato
Adenosina-2monofosfato Adenosina-3monofosfato Adenosina-5monofosfato Guanosina-2monofosfato Citidina-2-monofosfato Uridina-2-monofosfato
Abreviao
2-AMP 3-AMP AMP 3-GMP 3-CMP 3-UMP
cido
cido desoxiadenlico cido desoxiguanlico cido desoxicitidlico
Fosfato
Adenosina 5monofosfato Desoxiguanosina 5monofosfato Desoxicitidina 5monofosfato
Abreviao
dAMP dGMP dCMP
cido timidlico
Timidina 5-monofosfato
dTMP
Formao de percursores: GTP intervm na formao do xido ntrico (NO) e no metabolismo dos aminocidos aromticos.
Componentes das coenzimas: NAD+, NADP+, FAD - todas estas coenzimas contm AMP. Efectores alostricos: ATP, ADP, etc
Activadores de produtos intermedirios no metabolismo celular: UDP-glicose, na sntese do glicognio GDP-manose, GDP-fucose, UDP-galactose e CMP-cido silico, na sntese das glicoprotenas CDP-etanolamina, CDP-colina, CDPdiacilglicerol, na sntese dos fosfolpidos.
O que se pode dizer em relao a quatro nucletidos trifosfato (ATP, UTP, CTP e GTP)?
Eles esto energeticamente saturados em ligaes de alta energia. Eles proporcionam a mesma quantidade de energia, ie, so energeticamente equivalentes.
O ATP a moeda universal de energia, intervm na maioria dos processos biossintticos que requerem energia e em processos como a contraco muscular, as bombas inicas, o transporte de membrana, etc. A UTP est especializada na activaes ligadas ao metabolismo de glcidos. A CTP est envolvida na sntese lipdica (por exemplo, como CDP-etanolamina).
As poucas bases e nuclesidos que no so processados pelos entercitos entram para a circulao porta e so degradados pelo fgado. O fosfato e os acares resultantes da digesto de cidos nuclicos podem ser reutilizados no organismo, bem como alguma adenina. A maior parte das bases excretada. O organismo animal pode sintetizar de novo todos os mononucletidos que precisa.
3,5-AMP cclico
Adenosina Trifosfato
CIDOS NUCLICOS
Estrutura
Polmeros de nucletidos (polinucletidos) ligados entre si por ligaes fosfodister entre o grupo hidroxilo 5 de uma pentose e o grupo hidroxilo 3 da pentose vizinha. A unidade bsica repetitiva de um cido nuclico o nucletido. Os cidos nuclicos possuem nveis de organizao estrutural semelhantes s protenas: Estruturas primrias, secundrias e tercirias (quaternrias).
CIDOS NUCLICOS
Estrutura primria: Determinada pela sequncia de bases ordenadas como polinucletidos.
Esta ordem aquilo que transmitido de gerao em gerao nas clulas vivas e nos vrus. Um polinucletido formado pela ligao (fosfodister) de um fosfato na posio 5 de um nucletido ao grupo OH na posio 3 de outro nucletido.
CIDOS NUCLICOS
Representao esquemtica
Representao molecular
AS REGRAS DE CHARGAFF
So quatro postulados respeitantes estrutura primria do DNA, apresentadas pelo cientista Erwin Chargaff.
AS REGRAS DE CHARGAFF
AS REGRAS DE CHARGAFF
3. A segunda regra de paridade (1968)
Se os filamentos individuais de um dplex de DNA forem isolados e a sua composio de bases for determinada encontrar-se- que: %A = %T e %C = %G, ou expresso de outro modo: Ac Tc , Gc Cc e Am Tm , Gm Cm Esta regra invarivel de espcie para espcie.
4. A regra GC (1979)
A razo entre a soma das concentraes de C e G e o total das bases (A+C+G+T) tende a ser constante numa espcie, mas varia de espcie para espcie. Esta regra dependente da espcie.
Estrutura secundria Consiste no modelo de dupla hlice postulado por Watson e Crick: dois filamentos de DNA ficam unidos por pontes de hidrognio entre nucleobases. Os pares de bases so sempre constitudos por uma purina e uma pirimidina os filamentos ficam equidistantes cerca de 11 .
Estrutura secundria Os pares assumem uma disposio helicoidal na parte central da molcula uma vez que rodam 36 em relao ao par adjacente. Na dupla hlice de rotao direita: Cada espira helicoidal tem 10 pares de nucletidos.
Repulso electrosttica (entre grupos fosfato) Interaces hidrofbicas (entre bases nitrogenadas) Pontes de hidrognio (entre bases nitrogenadas): 2 pontes hidrognio entre A e T 3 pontes hidrognio entre C e G Efeitos de empilhamento (entre bases nitrogenadas): consistem essencialmente em foras de van der Waals.
Os filamentos de DNA das clulas eucariticas designam-se por antiparalelos. Cada filamento tem uma extremidade 5e outra 3, mas a disposio simtrica lado a lado resulta numa terminao 3 livre e numa terminao 5 livre em cada extremo. Que tipos de terminaes possui o DNA bacteriano?
S assim possvel ter-se a conformao de dupla hlice! O alongamento do polinucletido s vivel pela extremidade 3.
No existe nenhuma enzima capaz de adicionar nucletidos extremidade 5!
Os nucleosomas esto separados por um filamento de DNA com 20-100 pares de bases.
O aspecto geral semelhante a um colar de prolas, que se designa por (fibra de) cromatina. A disposio caracterstica apenas da interfase. A cromatina possui cerca de 50% de cido nuclico e cerca de 50% de protena.
Estrutura quaternria
Discutvel O colar de nucleosomas pode enrolar-se ainda mais, com cada 6 nucleosomas constituindo estruturas em bobina em torno da histona H1. O superenrolamento dos nveis tercirio e quaternrio de organizao necessrio: o DNA vrias vezes mais longo que o dimetro do ncleo de uma clula eucaritica!
Regies do DNA ricas em genes: contm elevado teor de GC Regies pobres em genes: contm elevado teor do par AT;
As diferenas de contedo de bases so visveis no microscpio electrnico como bandas escuras e claras nos cromossomas, respectivamente.
OCORRNCIA DO DNA
O DNA encontrado em duas partes da clula dos animais ncleo: DNA genmico mitocndrias: DNA mitocondrial O DNA genmico ou nuclear principal constituinte dos cromossomas. herdado dos parentes, em partes iguais (da a sua utilidade nos testes de paternidade) irmos recebem combinaes diferentes deste DNA cada cromossoma contm apenas um filamento de DNA em dupla hlice.
OCORRNCIA DO DNA
a quantidade de DNA genmico num organismo aproximadamente proporcional complexidade do organismo. apenas 2% do DNA constitudo por genes, ie, contm informao til para a clula. DNA mitocondrial herdado da linha materna e idntico entre irmos pode ser usado para determinar se indivduos possuem laos familiares entre si
4.600 185.000
1,6 m 63 m
3,4 x 106
6 x 107
1,2 mm
2,1 cm
2,3 x 109
43 x 109
6,8 x 106
1,2 x 108
3,2 x 109
1,02 m
2 x 1012
6 x 109
Conformaes do DNA
O DNA pode assumir diversas conformaes estruturais, designadas por formas A, B e Z.
Forma A uma forma transitria de DNA a forma da maioria do RNA dplex e de dplexes hbridos de RNA-DNA uma hlice mais compacta (mais curta e mais larga) do que a forma B, com cerca de 11 bases por espira a conformao favorecida por ambientes desidratados
Forma B Tambm conhecida por dsDNA ou -DNA Conformao mais comum do DNA in vivo uma hlice mais estreita e mais alongada que a forma A, com cerca de 10 bases por espira a conformao favorita em ambientes muito hidratados pois facilitada pela hidratao da fenda menor do DNA
Forma Z A hlice formada esquerda, ao contrrio das formas A e B, com cerca de 12 bases por espira mais longa e mais estreita que A e B, com aspecto de zig-zag Pode formar-se in vivo A sua formao favorecida por altas concentraes de sal e pela existncia de sequncias repetitivas de purina-pirimidina A sua funo desconhecida
O RNA
As clulas possuem 10 vezes mais RNA do que DNA. O RNA apresenta-se quase sempre como filamento nico. Pode formar pareamentos internos de bases, criando hlices duplas similares ao A-DNA. Os nucletidos constituintes do RNA so: AMP, GMP, CMP e UMP Bases invulgares so frequentemente encontradas, pe, hipoxantina (sob forma do nuclesido inosina)
As classes de RNA
Existem trs classes principais de RNA:
Constitui os moldes para a ordem em que os aminocidos so incorporados num certo pptido em formao (ou traduo)
Reconhece as sequncias codificadas do mRNA por forma a conseguir a incorporao correcta de aminocidos no polipptido em formao.
Estabilidade qumica
Hidrlise por cidos e bases Hidrlise por enzimas Capacidade mutagnica das bases
Estabilidade fsica
Composio de bases Concentrao salina pH
Estabilidade qumica
Hidrlise por cidos e bases O DNA muito estvel e resistente ao ataque de cidos e bases. No pH 4: as ligaes -glicosdicas das bases purnicas so hidrolizadas N7 (guanina) ou N3 (adenina) so protonados O acar depurinado pode ento isomerizar facilmente formando cadeia aberta o DNA (depurinado ou apurnico) pode ento ser clivado por ies hidroxilo.
Estabilidade qumica
RNA: muito instvel em solues alcalinas devido hidrlise da ponte fosfodister:
o grupo 2OH nos ribonucletidos torna a molcula de RNA susceptvel a clivagem produz uma mistura equimolar de 2- e 3-nuclesidos monofosfato (h um fosfato de um nucletido transferido para o nucletido adjacente)
A tautomerizao de bases a transio entre duas formas qumicas Ocorre com adenina e citosina (amino imino) e com timina e guanina (ceto/lactam enol/lactim) A forma imino de citosina rara mas pode emparelhar-se com adenina A forma imino de adenina emparelha com a citosina A rara forma enol de timina pode emparelhar-se com guanina.
A estabilidade fsica do DNA depende de uma srie de factores: composio de bases concentrao salina pH
Composio de bases
O rompimento das 3 pontes de hidrognio entre G e C requer muito mais energia do que as duas pontes entre A e T. A desnaturao trmica de DNA com contedos diferentes de GC pode ser acompanhada com um espectrofotmetro. As bases nitrogenadas absorvem luz ultravioleta (UV) num comprimento de onda de ~260 nm. Na dupla hlice de DNA esta absoro contudo reduzida devido ao empilhamento das bases.
Ao se desnaturar o DNA estas interaces entre bases so rompidas e por isso a absoro de UV aumenta. Esta variao na absoro recebe o nome de efeito hipercrmico. Este efeito pode ser monitorizado em funo da temperatura da amostra de DNA. Temperatura de fuso ou desnaturao (abreviado Tm): temperatura na qual 50% das molculas de DNA esto desnaturadas.
pH
O DNA no quimicamente susceptvel a bases fortes mas ainda assim elas podem desnaturar a dupla hlice.