Bioqumica

Estructural y Metablica
TEMA 5. Enzimologa

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TEMA 5. Enzimologa

TEMA 5. Enzimas. Clasicacin. Principios de la catlisis enzim6ca. Energa de ac6vacin. Velocidad de reaccin y equilibrio de reaccin. Cin6ca enzim6ca: ecuacin de Michaelis-Menten. Ecuacin de los dobles recprocos. Inhibicin enzim6ca. Tipos de inhibicin. Mecanismos de regulacin de la ac6vidad enzim6ca: alosterismo, modicacin covalente, proenzimas. Isoenzimas.

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ENZIMAS
Catalizadores de las reacciones biolgicas. La mayora son protenas aunque hay molculas de RNA con ac6vidad catal6ca (ribozimas). Gran poder catal6co. Alto grado de especicidad. Actan en soluciones acuosas a 37C y pH neutro. Su ac6vidad puede regularse. El 25% de los genes humanos codican enzimas que catalizan reacciones metablicas.

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IMPORTANCIA DE LOS ENZIMAS

Cada paso de una va metablica est catalizado por un enzima. La medida de la acKvidad enzimKca en uidos biolgicos o tejidos es importante para el diagnsKco de muchas enfermedades. Muchas frmacos son inhibidores de la ac6vidad enzim6ca. Importancia en la industria de alimentacin y agricultura.

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ENZIMAS: DEFINICIONES
Cofactor: necesario para la ac6vidad enzim6ca. Pueden ser iones metlicos o una molcula orgnica, denominada coenzima. Si el cofactor est unido fuertemente al enzima se denomina grupo prost6co. Apoenzima: parte proteica del enzima (no ac6va). Holoenzima: apoenzima + cofactor.

NOMENCLATURA DE LOS ENZIMAS

SUSTRATO + TIPO DE REACCIN + ASA
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UN TERCIO DE LOS ENZIMAS REQUIEREN ALGN IN METLICO

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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MUCHAS VITAMINAS SON COFACTORES O PRECURSORES DE COFACTORES DE ENZIMAS

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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CLASES DE ENZIMAS

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LOS ENZIMAS ACELERAN LAS REACCIONES DISMINUYENDO LA ENERGA DE ACTIVACIN

E + S = ES = E + P
Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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LOS ENZIMAS SON ESTEREOESPECFICAS PORQUE FORMAN VARIAS INTERACCIONES ENTRE AMINOCIDOS DEL CENTRO ACTIVO Y LOS DISTINTOS GRUPOS DEL SUSTRATO

Mathews & Van Holde. Bioqumica. McGraw-Hill, 1998. Jess Navas Mndez

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EL CENTRO ACTIVO DE LOS ENZIMAS ES COMPLEMENTARIO AL ESTADO DE TRANSICIN DE LA REACCIN CATALIZADA

Progreso de la reaccin
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Encaje inducido

Cambio conformacional inducido por glucosa en la hexoquinasa (Hexoquinasa = ATP: glucosa fosfotransferasa = 2.7.1.1 ).

D-Glucosa
Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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LA Vmax SE ALCANZA CUANDO TODOS LOS CENTROS ACTIVOS ESTN OCUPADOS CON SUSTRATO
Velocidad inicial

1/2 Vmax

Km

Concentracin de sustrato [S]

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Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999.

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RELACIN ENTRE Vo y [E]

Vo

[E]

La velocidad inicial es funcin lineal de la concentracin de enzima, siempre que la concentracin de sustrato sea alta.
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ECUACIN DE MICHAELIS-MENTEN
Vmax (S) Vo = Km + (S)
E + S

K1
K1

ES

K2

K2 + K1 Km = K1
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LA Vmax SE ALCANZA CUANDO TODOS LOS CENTROS ACTIVOS ESTN OCUPADOS CON SUSTRATO

1/2 Vmax

Velocidad inicial

Km

Concentracin de sustrato [S]

Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999. Jess Navas Mndez

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CALCULO DE Km Y Vmax POR LA REPRESENTACIN DE LINEWEAVER-BURK

Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999. Jess Navas Mndez

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PARMETROS ENZIMTICOS
1. Km (constante para cada enzima) = concentracin de S a la que la Vo es 1/2 Vmax. Es una medida de la anidad del enzima por S. Cuanto menor es Km, mayor es la anidad del enzima por S. 2. Kcat (constante para cada enzima) = nmero de recambio = nmero de molculas de sustrato conver6das en producto por molcula de enzima y unidad de 6empo, en condiciones de saturacin de sustrato. 3. Vmax = velocidad mxima terica = la velocidad cuando todos los centros ac6vos estn ocupados con sustrato (nunca alcanzada en la realidad). 4. Unidad de enzima = can6dad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por min = una forma comn de expresar la velocidad. 5. AcKvidad especca = unidades por mg de protena total de la preparacin enzim6ca. En el caso de enzimas en suero: unidades/L.
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Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Los enzimas poseen grupos qumicos ionizables (carbo- xilos -COOH; amino -NH2; 6ol -SH; imidazol, etc.) en las cadenas laterales de sus aminocidos. Segn el pH del medio, estos grupos pueden tener carga elctrica posi- 6va, nega6va o neutra. Como la conformacin de las pro- tenas depende, en parte, de sus cargas elctricas, habr un pH en el cual la conformacin ser la ms adecuada para la ac6vidad catal6ca. Este es el llamado pH p6mo.

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EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

La mayora de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de pocas dcimas por encima o por debajo del pH p6mo pueden afectar drs6camente su ac6vidad. As, la pepsina gstrica 6ene un pH p6mo de 2, y la tripsina lo 6ene a pH 6. Ligeros cambios del pH pueden provocar la desnaturali- zacin de la protena, los seres vivos han desarrollado siste- mas ms o menos complejos para mantener estable el pH intracelular: los amor6guadores siolgicos.

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EFECTO DEL pH SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

(Garret & Grisham)

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EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA

Los aumentos de temperatura por lo general aceleran las reacciones qumicas. Las reacciones catalizadas por enzi- mas siguen esta ley, solo que al ser protenas a par6r de cierta temperatura se empiezan a desnaturalizar. Esa temperatura se llama temperatura p6ma y es aquella en la que la velocidad enzim6ca es mxima.

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VARIACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA EN FUNCIN DE LA TEMPERATURA

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INHIBICIN ENZIMTICA
Inhibicin irreversible (uniones covalentes entre inhibidor y enzima. Ejemplo: frmacos). Inhibicin reversible. COMPETITIVA. NO COMPETITIVA.

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INHIBICIN COMPETITIVA
+ Inhibidor

Unin del Inhibidor al centro ac6vo, compi6endo con S: Aumenta Km. No cambia Vmax.
Inhibidor compe66vo

Sustrato

Adaptado de: Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.

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INHIBICIN NO COMPETITIVA
+ Inhibidor

Unin del Inhibidor a un si6o del enzima dis6nto del centro ac6vo: no compite con S: No cambia Km. Disminuye Vmax.
Sustrato Inhibidor no compe66vo Sustrato

Adaptado de: Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000.

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INHIBICION COMPETITIVA

INHIBICION NO COMPETITIVA

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Sustrato

Inhibidor compe66vo

Sustrato Inhibidor no compe66vo

Sustrato

Inhibidor acompe66vo

Berg, Tymoczko and Stryer. Biochemistry. 5 ed. Freeman and Co, 2002. Jess Navas Mndez

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Regulacin de la canKdad de enzima presente en las clulas. Inhibicin reversible por productos. Interaccin con moduladores (protenas u otros): - AcKvacion/inhibicin alostrica: El modulador alostrico se une a un si6o dis6nto del centro ac6vo. La unin del modulador es reversible e implica cambio conformacional. Suelen ser enzimas mul6mricas. Tienen cin6ca sigmoidea. - Modicacin covalente: Fosforilacin. ADP-ribosilacin. Me6lacin. AcKvacin proteolKca de pro-enzimas.
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ENZIMAS ALOSTRICOS

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LOS ENZIMAS ALOSTRICOS NO PRESENTAN CINTICA MICHAELIANA

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+ Modulador alostrico posi6vo.

El sustrato es modulador posi6vo.

+ Modulador alostrico nega6vo.

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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ACTIVACIN/INACTIVACIN DE ENZIMAS POR FOSFORILACIN EJEMPLO: GLUCGENO FOSFORILASA

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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UNA ENZIMA PUEDE TENER VARIOS MECANISMOS DE REGULACIN

Garreh, R.H. and Grisham, C.M. Biochemistry. 2 ed. Saunders College Publishing. 1999. Jess Navas Mndez

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ACTIVACIN DE PROENZIMAS POR PROTELISIS

Auto-ac6vacin de quimotripsina

Nelson, DL and Cox, M.M. Lehninger Principles of Biochemistry. 3 ed. Worth Publishers, 2000. Jess Navas Mndez

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1% 3%

18%

45% 33%

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BIBLIOGRAFA
Lehninger Principles of Biochemistry. 5 ed. Freeman, 2009. Cap 6. Marks Basic Medical Biochemistry. A clinical approach. 3 ed. LWW., 2008. Cap 8. Devlin. Textbook of Biochemistry with Clinical correla>ons. 7 ed. Wiley, 2010. Cap 10. Feduchi y cols. Bioqumica: conceptos esenciales. Panamericana, 2011. Cap 8. Berg, Tymoczko and Stryer. Biochemistry. 7 ed. WH. Freeman, 2011. Caps 8, 9. Voet and Voet. Biochemistry. 4 ed. Wiley, 2011. Caps 13, 14, 15. Baynes and Dominiczak. Bioqumica Mdica. 3 ed. Elsevier, 2011. Cap 6. Garreh and Grisham. Biochemistry. 4 ed. 2009. Caps 13, 14, 15.

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