La Gota Gruesa es una forma de extendido usado en las coloraciones para determinar malaria.

Lo ideal es tomar una gota de sangre directamente del dedo del paciente ojal en estado febril y colocarla directamente sobre uno de los extremos del portaobjeto (nuevo y desengrasado) hacia el centro. Despus con el borde de otro porta objeto se extiende (angulo 45)desde el centro de la gota hacia arriba,luego al centro pasa hacia abajo y nuevamente al centro sin levanter y de forma rpida; quedando un frotis grueso en forma de franja. Despus se deja secar y se realiza coloracin para hemoparsitos(p.e.j: Coloracin de Field, )

DIAGNSTICO DE MALARIA Gota gruesa y extensin de sangre teido por Giemsa: es el ms conocido y el ms utilizado y no ha podido ser igualado. En estos mtodos se utilizan 100 l de sangre lisada y se hace una preparacin que se tie con Giemsa. Tincin fluorescente DNA-RNA en estos casos se utiliza la naranja de Acridina y uno de estos mtodos es el QBC. De los mtodos moleculares el PCR es muy sensible. La deteccin de pigmento malrico se realiza a travs de la microscopia de campo oscuro. La deteccin de antgeno que se usan mtodos de Parasight y el mtodo de pLDH OptiMAL. DIAGNSTICO PARASITOLOGICO Se realiza a travs de la gota gruesa y extendido Se toma una muestra por puncin capilar y eso se tie por Giemsa. Esto es lo que se hace tanto en la capital como en las zonas rurales y en las zonas endmicas. El extendido: se hace un extendido de la muestra de sangre y es una sola capa de clulas rojas. Vamos a ver una sola capa de glbulos rojos y se pueden ver tanto los eritrocitos parasitados como los no parasitados de tal forma que si la persona no es experta se puede hacer una diferencia. La gota gruesa consiste en hacer una preparacin con varias gotas de sangre del tamao de una moneda de 10 centavos se hacen varias capas y despus que se seca se procede a que gotas de agua le caigan despacio para que se deshemoglobinice el glbulo rojo con el objetivo de que los glbulos rojos desaparezcan y solamente queden los parsitos, una vez que se ha realizado eso se deja secar y se tie con Giemsa. Como hay varias capas de eritrocitos y se rompen vamos a tener un mayor nmero de parsitos, si los hay, solamente se van a ver los parsitos, los glbulos blancos y las plaquetas. En el caso de falciparum podemos ver la infeccin mltiple que consiste en varios parsitos por eritrocito. Vamos a ver gametocitos, ya les explique porque no vamos a ver trofozoitos maduros ni esquizontes jvenes ni esquizontes maduros en un extendido de sangre. Por lo tanto cuando el laboratorio hace reporte de malaria por P. falciparum solo esta reportando los trofozoitos inmaduros en sangre perifrica, no hay reporte de los parsitos que estn secuestrados en eritrocitos en los

capilares de los rganos internos. En el caso del P. vivax el esquizonte maduro es el estadio diagnstico, en l pueden observarse de 12 a 24 merozoitos, Trofozoitos jvenes, gametocitos y trofozoitos maduros ameboides. Todos estos estadios se ven en sangre perifrica. En el caso de Malariae los estadios en sangre perifrica son trofozoito maduro que adquiere la forma de banda el citoplasma del parsito y el esquizonte maduro que tiene de 6 a 12 merozoitos. El otro reporte (adems del de Genero y especie por gota gruesa y extendido) que debe ir obligatoriamente con un reporte de infeccin por malaria es la determinacin de la parasitemia. Esto es sumamente importante porque es la gua para el mdico de cmo empez o como est la infeccin al momento que se hizo el diagnstico. Porque cuando se va a administrar el tratamiento es necesario conocer la parasitemia para saber si el tratamiento est siendo efectivo o hay que cambiarlo antes de las 24 horas. La determinacin de parasitemia en gota gruesa se hace contando 200 glbulos blancos y cuantos parsitos hay por campo donde se contaron los gb. Entonces uno asume que hay 8000 glbulos blancos en cada microlitro de sangre y se multiplica el nmero total de parsitos por 40 y eso nos va a dar el nmero de parsitos por microlitro.Si se hace el diagnostico a travs de un extendido s tenemos eritrocitos, en ese caso se van a contar cuantos eritrocitos hay parasitados por campo hasta que se cuentan 100 eritrocitos. Entonces ah el reporte se da en porcentaje. Esto tiene una razn de ser: * En primer lugar que el mdico tiene que conocer la parasitemia cuando va a administrar el tratamiento para saber si el tratamiento que est dando le esta funcionando al paciente Segundo porque el mdico puede evaluar la situacin del paciente: Parasitemia de 0.0001 a 0.0004% 5-20 p/ul es la mnima cantidad de parsitos para que la gota gruesa sea positiva, por debajo de este nmero de parsitos no se va a detectar en sangre perifrica. Parasitemia de 0.002% o de 100 p/ul es el nivel en que los pacientes pueden ser sintomticos, aunq pueden estar sintomticos por debajo de este nivel. Parasitemia esta en 0.2% o 10000 p/ ul en este nivel los pacientes que ya han tenido una exposicin previa a malaria van a presentar sntomas. Parasitemia de 2% 100000 p/ul es la parasitemia mxima que vamos a ver con vivax por lo tanto si tenemos ms de este numero hay una fuerte sospecha de que sea P. falciparum. Parasitemia de 2-5% o de 100000 a 250000 p/ul es considerado una hiperparasitemia, hay malaria severa y la mortalidad es aumentada. Parasitemia de 10% o de 500000 p/ul hay que considerar una exanguinotransfusion o la aplicacin de una bolsa con glbulos rojos empacados con el objeto de disminuir la parasitemia y en esos casos hay alta mortalidad. O sea que el mdico podra tener unas mejores opciones si la parasitemia llega hasta un 2% porque eso indica que es P. vivax. Pero cuando la parasitemia es mucho mas elevada hay que tener mucho cuidado. Y en el momento en que se empieza la administracin de la terapia el medico tiene

que especificar que este paciente tiene que ser evaluado por lo menos 8 a 10 horas o 12 horas despus de haberse iniciado el tratamiento. No puede permanecer sin evaluacin porque puede presentar resistencia a la droga y los parsitos se siguen multiplicando lo que a veces termina con la muerte del paciente. Las personas en panam que son infectadas por P. falciparum proveniente de Colombia tienen gran posibilidad de que este sea resistente a Cloroquina. La prueba de QBC en una prueba muy buena que hace una medicin del ADN nuclear. Sin embargo sale muy costosa xq requiere un microscopio de fluorescencia, un adaptador de fluorescencia y una microcentrifuga, si uno va al campo a evaluar pacientes esta centrifuga puede ser porttil y todo puede funcionar con una batera. Lo que hace es que tiene unos tubos capilares que tienen naranja de acridina que es un colorante de ADN, recuerden que los eritrocitos humanos no tienen ncleo y x eso no tienen ADN y por ende en la tincin con naranja de acridina el ADN que se va a teir es el ADN del parsito. Y eso es lo que vamos a ver con la fluorescencia. Con la microcentrifuga se hacen varias capas: de glbulos blancos, de plaquetas y en la capa de glbulos rojos se ve. Tambin se usa QBC para Tripanosoma cuzi. El ParaSightF es una prueba especifica y exclusiva para P. falciparum porque utiliza un anticuerpo monoclonal hacia Ag esta especie. La protena que se utiliza es la protena de los knobs la Protena de falciparum rica en histidina II (PfHRII) y los resultados son visibles en 11 minutos en una tirita que no necesita refrigeracin, se puede llevar al campo y su sensibilidad estimada es que deben haber por lo menos 10 p/ul. Se requieren 50 ul de sangre. El resultado de la prueba negativa es una raya fraccionada. La deteccin de especies por PCR es muy especfica ya que cada plasmodium tiene una banda especfica y se utiliza ms que nada para fines de investigacin. Es una tcnica un poco elaborada y no se utiliza para diagnostico rutinario xq saldra muy caro y tomara mucho tiempo.

3. PALUDISMO POR P.malariae Fiebre cuartana Sintomatologia mas benigna, mas cronica. Recrudescencias despues de muchos aos. P. De incubacion mas prolongado. Malaria cronica.

24. DIAGNOSTICO Se basa en la observacin e identificacin de parsitos plasmodium en muestras de sangre. Puede confundirse con otras enfermedades febriles: fiebre amarilla, tifoide, paratifoidea, acceso hepatico, hepatitis, fiebre recurrente, pielonefritis, brucelosis, tuberculosis, dengue, leishmaniasis visceral y procesos septicos. Confirmacion: hallazgo de los parsitos .

25. METODOS UTILIZADOS Gota gruesa Extendido de sangre perifrica Pruebas de DX rapido PCR RX inmunologicas Examenes complementarios 26. INDICACIONES DE LA TOMA DE MUESTRA A todo paciente febril sospechoso por demanda de atencin. A todo paciente remitido para confirmacin del DX. A todo paciente con recaida.

27. TOMA DE MUESTRA Toma de datos completos del paciente Tomar muestra. Marcar 3 laminas, dos para gota gruesa y una para el extendido para sangre perifrica.

28. GOTA GRUESA Con el borde de un cubreobjetos se extiende la gota de sangre con movimientos en N, para formar un cuadrado de 1 x 1 cm. Luego se coloca otra gota de sangre a una distancia de 0.5-1 cm de la otra. Se repite el procedimiento en otra lamina. Dejar secar a temp ambiente .

29. Importante : Se realiza gota gruesa seriada a todo paciente con fuerte evidencia epidemiologica de padecer malaria y con gota gruesa negativa inicial. A todo paciente que se ha automedicado. En casos complicados o con parasitemias altas (<50000 parasitos/uL), se realiza control de parasitemia cada 8 a 12 horas.

30. COLORACIN precoloracin coloracin Preservar clulas sanguneas. inicio de deshemoglobinizacin Diferenciar estructuras parasitarias completacin de la deshemoglobinizacin

31. Valoracion de la coloracin de gota gruesa Macroscpica Se observa como un cuadrado continuo de color azul claro. Microscpica deshemoglobinizacin completa Plaquetas: rosadas Leucocitos: intensamente coloreados Granulaciones de schuffner y maurer Citoplasma y cromatina del parasito: intensamente coloreados.

32. 33. RECUENTO PARASITARIO Recuento parasitario en gota gruesa: # de parsitos x 8000 leucocitos / ul = 100 leucocitos Parasitemias altas: 500 parsitos x 8000 leucocitos / ul = # de leucocitos contados # de parasitos/ul de sangre # de parasitos/ul de sangre

34. EXTENDIDO DE SANGRE PERIFERICA Con el borde de un cubreobjetos se extiende la gota de sangre con movimientos en N, para formar un cuadrado de 1 x 1 cm. Dejar secar a temp ambiente. Coloracin.

35. Valoracion de la coloracin de un extendido de sangre perifrica Macroscpica pelicula fina y uniforme. No debe llegar a los bordes. Disminucion progresiva y tenue Microscpica Eritrocitos: neutra o violeta. Leucocitos: ncleo azul oscuro o violeta. Citoplasma: azul claro (linfocitos), gris (monocitos), rosado tenue (neutrofilos). Granulaciones: azul o rosado (neutrofilos), naranja (eosinofilos). Plaquetas: rosadas a violeta. Parasitos: citoplasma azul, cromatina roja intensa o violeta, granulaciones rosado o rojo.

36. Forma: Trofozoitos Forma: Schizonte Forma: Gametocito Plasmodium falciparum 37. Forma: Trofozoitos Forma: Schizonte Forma: Gametocito Plasmodium vivax 38. Forma: Trofozoitos Forma: Gametocito Forma: Schizonte Plasmodium ovale 39. Forma: Trofozoitos Forma: Schizonte Forma: Gametocito Plasmodium malariae 40. Recuento parsitario en extendido de sangre periferica. sangre # de parasitos x # de eritrocitos/uL de = 10000 eritrocitos # de parsitos x hematocrito x 100000 = 10000 eritrocitos # de parasitos/ul de sangre # de parasitos/ul de sangre

41. Clculo de la parasitemia en porcentaje 10000 glbulos rojos 20 trofozoitos 100 glbulos rojos X Recuento semicuantitativo Informar especie de plasmodium que ocasiona la infeccin. Informar el numero aprox. de formas parasitarias encontrados en la gota gruesa. Rango de parsitos encontrados Equivalencia en cruces 1 10 en 100 campos microscpicos .....................................+ 11 100 en 100 campos microscpicos..................................++ 1 10 por campo microscpico...............................................+++ > 10 por campo microscpico................................................++++

42. PRUEBAS DE DX RAPIDO Inmunocromatografia 43. RX INMUNOLGICAS IFD ELISA FAST-ELISA HEMAGLUTINACIN INDIRECTA. EXAMENES COMPLEMENTARIOS HB ANEMIA HTO

44. COMPARACIN DE LOS MTODOS DE DIAGNSTICO MTO-DOS

TIPOS DE

TCNICA VENTAJAS INCONVENIEN-TES Extensin Fina Tincin de Giemsa Fcil realizacin Bajo coste Diferencia especies Cuantitativa No detecta parasitemias bajas Gota Gruesa Tincin de Giemsa Fcil realizacin Bajo costo Solo indica (+) Detecta parasitemias bajas No puede detectar la especie Kit Reaccin antigenoanticuerpo Fcil realizacin Rpida Alto costo No detecta la especie

45. INFORME DE RESULTADO Especie presente. Recuento parasitario. asexuadas P. falciparum recuento sexuadas En infecciones mixtas: Recuento de cada especie de manera independiente. Reportar especie predominante en 1 lugar y subordinada en 2 lugar Gota gruesa: termino hemoprasito o gota gruesa. Extendido: solo termino hemoprasito.

46. PREVENCION Y CONTROL Tratamiento y aislamiento del enfermo. Uso de mosquitero. Construccin, modificacin y proteccin de las viviendas. Ordenamiento del medio ambiente. Control quimico. Control biolgico. Cambio en el comportamiento humano .

47. TRATAMIENTO 1. ESQUIZONTICIDAS ERITROCITICOS: 4-aminoquinoleinas Hidroximetilquinoleinas Diaminopirimidinas Sulfonamidas 2. ESQUIZONTICIDAS TISULARES: 8-aminoquinoleinas

48. GRACIAS!!! 49. Nombre del paciente. Numero consecutivo. Fecha. Periodo epidemiolgico. Identificacin. En casos complicados o con parasitemias altas (<50000 parsitos/uL). Coger la hora de la toma de la muestra.

50. Se limpia el dedo ndice o el del medio del paciente. Tomar la muestra de un rea limpia . En nios se puede tomar del taln del lbulo de la oreja Secar la zona Se punciona con una lanceta estril desechable, en el borde lateral del dedo entre la yema y la ua.

51. Se limpia la 1 gota de sangre, se presiona el dedo y se coloca la siguiente gota a 1 cm de la

1. EXAMEN DE EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFRICA

2. Obtencin de la muestra y preparacin del extendido de sangre perifrica Casi todas las muestras para hematologa se recolectan en tubos de tapa lila que contienen EDTA ( que anticoagula la sangre por quelacin de calcio) Los extendidos deben realizarse dentro de 2 a 3 horas de la toma de muestra El EDTA impide la aglutinacin de las plaquetas en el portaobjetos.

3. PREPARACIN DEL EXTENDIDO DE SANGRE PERIFRICA La sangre de ciertos pacientes sufre satelitosis plaquetaria cuando se aglutina con EDTA ( las plaquetas rodean al neutrfilo). Debe tomarse la muestra en tubos con citrato de sodio al 3,8% Los leucocitos y plaquetas se multiplican por 1.1 para obtener resultados exactos. Puncin taln, dedo extendidos inmediatos.

4. TIPOS DE EXTENDIDOS Manual con dos portaobjetos en ngulo 2 portaobjetos de vidrio de 75 x 25 mm limpios, bordes biselados y esquinas romas Tambin puede hacerse con un cubreobjetos de hemocitmetro

5. TCNICA DE EXTENDIDOS Se coloca una gota de sangre de 2 a 3 mm de dimetro en el extremo del portaobjeto. El tamao de la gota es importante. Demasiado grueso ,extendido muy largo o muy grueso. Demasiado pequea extendido corto o delgado.

6. TCNICAS DE EXTENDIDO El portaobjeto extensor se sostiene con firmeza con la mano dominante a un ngulo de 30 a 45 grados , se lleva hacia atrs hasta tocar la gota de sangre, dejando que se esparza en todo lo ancho del portaobjetos. Entonces se empuja con rapidez y suavidad hacia delante, hasta el final del portaobjetos

7. TCNICAS DE EXTENDIDO Toda la gota debe incluirse en el extendido . Movimiento lento produce mala distribucin de los leucocitos, porque desplza las cl ms grandes hacia el final y los lados del extendido. En Hto altos ngulo de 25 grados. En Hto bajos aumentar el ngulo

8. CARACTERSTICAS DE UN EXTENDIDO BIEN PEPARADO Debe cubrir de dos tercios a tres cuartas partes de la longitud del extendido. Tiene forma de dedo, ligeramente redondeado en el borde ms fino Los bordes laterales deben ser visibles. Extendido parejo, sin agujeros ni estras. Toda la gota debe ser includa y extendida Al colocar contra la luz la porcin delgada debe tener aspecto en arco iris

9. PREPARACIN Y TINCIN AUTOMATIZADA DE EXTENDIDOS Despus que el equipo analiz una muestra, el portador desplaza el tubo y lee el cdigo de barras. De acuerdo con el Hto el sistema ajusta el tamao de la gota a usar, y el ngulo y la velocidad del portaobjetos extensor Luego de preparar el extendido , el portaobjetos extensor se limpia en forma automtica

10. TINCIN AUTOMTICA DE EXTENDIDOS El nombre, nmero y fecha de la muestra se imprime en el portaobjetos Luego se seca , se carga un cassette y se va al sitio de tincin, cuando la tincin est terminada, el portaobjetos se desplaza a un sitio de secado, luego a una zona de almacenamiento, para ser leido. Deben secarse tan rpido como sea posible.

11. TINCIN DE LOS EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFRICA Wright o Wright Giemsa (Romanowsky) Estas coloraciones son policromticas pues tienen eosina y azul de metileno . El metanol fija las clulas al portaobjetos El azul de metileno oxidado y la eosina, tie los componentes neutros. El buffer que se agrega a la tincin debe ser fosfato de sodio 0,05 o agua destilada

12. TINCIN DE LOS EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFRICA El azul de metileno tie los componentes clulares cidos ( Basfilos) como el RNA. La eosina libre es cida y tie y tie los componentes bsicos ( eosinfilos) la Hb, los grnulos eosinfilos Los neutrofilos se denominan as porque tienen grnulos citoplasmticos con pH neutro y toman algunas caractersticas de tincin de ambas coloraciones. Los portaobjetos deben secarse antes de teirlos.

13. MTODOS DE COLORACIN DE WRIGHT Se realiza sobre un soporte para coloraciones Puede filtrarse antes de usarlo en forma directa desde la botella Es importante cubrir el portaobjetos por completo. El colorante debe permanecer sobre el portaobjetos de 1 a 3 minutos

14. MTODO DE COLORACIN DE WRIGHT Luego se pone una cantidad igual de buffer al portaobjetos. Si la mezcla es correcta debe aparecer en el portaobjetos un brillo metlico. Cuando termina la coloracin , se lava el portaobjetos con un chorro de agua continuo, pero suave. La parte de atrs se limpia para eliminar residuo del colorante. El portaobjetos se deja secar al aire en posicin vertical.

15. TINCIN DE WRIGHT Se realiza con balanza de precisin bien calibrada y en gramos. Para 500 ml: 1.6 gr Wright 16 ml glicerina 485 milmetros de metanol En el mortero se coloca el glicerol ms el Wright, se diluye y lava con el metileno; se filtra por 24 horas.

16. DISPOSITIVOS DE TINCIN AUTOMATIZADOS Utiles en laboratorios con alto volumen de muestras. Se necesita 5 a 10 min. Para teir un lote de portaobjetos. Los portaobjetos se sumergen automticamente en el colorante ,luego en el buffer y en una serie de lavados.

17. DISPOSITIVOS DE TINCIN AUTOMTIZADOS Una vez que el proceso de tincin inicio no pueden agregarse portaobjetos al lote. Las soluciones de tincin son estables de 3 a 6 horas.

18. CARACTERSTICAS DE UN EXTENDIDO BIEN TEIDO Debe ser de color rosa o prpura. Los eritrocitos deben tener un color anaranjado a rosa salmn. Los ncleos de los leucocitos color prpura a azules. El citoplasma de los neutrfilos de color rosa a bronceado, con grnulos de color anaranjado brillante. Los mejores resultados se obtienen de una extensin bien realizada

19. EXAMEN DE LOS EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFRICA EXAMEN MACROSCPICO Coloracin ms azul - proteinas sanguneas Vacuolas dispersas - aumento de los lpidos Aspecto grumoso - aglutinaciones de eritrocitos

20. EXTENDIDOS DE SANGRE PERIFRICA EXAMEN MICROSCOPICO El microscopio debe calibrase La luz debe centrarse de manera adecuada El condensador debe estar elevado casi por completo Calibrar correctamente el aumento Diafragma abrir una cantidad de luz cmoda para el ojo. Uso de filtro.

21. EXAMEN CON EL OBJETIVO DE 10x Puede evaluarse la calidad del extendido, el color y la distribucin de las clulas. Cantidad desproporcionada de monocitos en el borde indica mala extensin. Presencia de filamentos de fibrina, distribucin de los eritrocitos, formacin de rodillos o aglutinacin.

22. EXAMEN CON EL OBJETIVO DE 40x Luego usar el objetivo seco fuerte 40x El nmero de leucocitos por campo se multiplica por 2000 para obtener una aproximacin adecuada del recuento de leucocitos.

23. EXAMEN CON LENTE DE 100x Se utiliza aceite de inmersin Se cuenta 100 leucocitos y se informa con porcentaje de leucocitos. Un rea demasiado delgada, no es aceptable. Un rea demasiado espesa distorsiona los eritrocitos al amontonarlos uno encima de otro. Portaobjetos al revs. Debe quitarse el aceite.

24. REALIZACIN DE FRMULA LEUCOCITARIA Debe leerse en serpentina hacia delante y hacia atrs, para disminuir los errores de distribucin. Se cuenta 100 leucocitos y se clasifican con contadores o pianos ( 200) Los resultados se informan como porcentajes 100% Es importante incluir los bordes laterales por los monocitos, linfocitos inmaduros y clulas reactivas

25. RECUENTO DE PLAQUETAS Se hace con el objetivo de aceite de 100x En una zona del extendido, donde los eritrocitos apenas se topen entre s se cuenta el # de plaquetas en 10 CIA. El # aproximado de plaquetas X C. X 20.000 es aproximadamente el recuento de plaquetas.

26. RECUENTO DE PLAQUETAS Una estimacin grosera es si hay de 3 a 25 plaquetas por C. el recuento es adecuado siempre y cuando haya unos 200 leucocitos por C. Cuando el pcte, est anmico o tiene eritrocitosis las proporciones plaqueta- eritrocitos se altera, puede usarse la siguiente frmula. # promedio de plaquetas x recuento de eritrocitos 200

(En el contexto nacional no se acepta la utilizacion del recuento semicuantitativo). 2.8 Extendido de sangre perifrica Para un correcto diagnostico de especie de plasmodium de malaria es necesario realizar, ademas de la gota gruesa, el extendido de sangre perifrica en casos en los cuales existan dudas sobre la especie del plasmodium, como tambien en los casos de parasitemias altas, cuando la cuantificacion exacta en gota gruesa se hace dificil. Al igual que la gota gruesa, el examen del frotis es sencillo, rapido, confiable y economico. 2.8.1 Procedimiento Marcar la lamina de la misma manera descrita para gota gruesa

 Despues de tomar la gota gruesa, presionar el dedo del paciente y colocar una nueva gota de sangre en el extremo de una lamina portaobjetos. Poner en contacto la lmina con la gota, de manera delicada, evitando que la lamina toque el dedo del paciente, guardando el espacio designado para la marca de la lamina Para realizar el extendido se debe ayudar de otro portaobjetos: colocar en contacto uno de los extremos de este segundo portaobjetos con la gota de sangre que se acaba de tomar; dejar extender por capilaridad la sangre a lo largo del borde del portaobjetos, y con una inclinacion de 30 a 40 grados realizar el frotis a lo largo de la lamina Presionar nuevamente y tomar un microhematocrito. En los casos de confirmacion de especie no es necesario Limpiar el dedo del paciente Dejar secar la muestra de sangre a la temperatura ambiente, sobre una superficie plana y libre de polvo Limpiar bien la lamina que utilizo para realizar el extendido, para evitar la transferencia de parasitos de una muestra a otra. Fijar con metanol Colorear con Field, Giemsa o Wright, teniendo en cuenta que el procedimiento para la coloracion es igual que para la gota gruesa, solo que el tiempo de coloracion es aproximadamente el doble (segun estandarizacin de cada laboratorio o puesto de microscopia) Observar al microscopio con objetivo de 10X y 40X; buscar los campos donde los globulos rojos se encuentren separados. Proceder a observar con objetivo de 100 x las formas parasitarias caracteristicas de plasmodium.

PRIN CIPIO S

GEN ERAL ES

GOTA GRUESA : es la extensin

de una gota de sangreen forma cuadrang

ular de un dimetro aproxima do de1 a

1.5 cm. Con la gota gruesa se puede

detectar lapresen cia de plasmodi um.

EL PROT IS SANG UINEO: Es

la extensi n de una gota de sangre d

e tal maner a que se puede observar

almicrosc opio tanto los eritrocitos como0

los parsitos en un solo plano. Y

con el protissan guineose puededif erenciar

claramen te la especie de plasm odium.