EQUIPE: Prof. Wagner Felippe Pacheco. Profa. Andrea Almeida Mello. Profa. Elaine Rocha da Luz.

Criado em 03/2005.

SUMRIO

1. INTRODUO 2. PROPRIEDADES ONDULATRIAS E CORPUSCULARES DA LUZ 3. A INTERAO DA LUZ COM A MATRIA 4. COMO E PARA QUE MEDIR A ABSORO DE LUZ 5. A LEI DE LAMBERT-BEER 6. A CURVA DE CALIBRAO EM ESPECTROFOTOMETRIA 7. O MTODO DA ADIO-PADRO EM ESPECTROFOTOMETRIA 8. ANLISE DE MISTURA DE CROMFOROS 9. DESVIOS DA LEI DE BEER 10.BIBLIOGRAFIA

1. INTRODUO
Os mtodos ticos so os mtodos que empregam a luz, ou melhor, as propriedades da interao da luz com a matria, para fazer a anlise qualitativa e quantitativa das substncias. Nos tpicos que se seguem, sero examinados basicamente os fenmenos de absoro da energia luminosa. Comear-se- por um breve resumo das propriedades da luz, de acordo com a Fsica atual, a seguir as diferentes formas de interao que provocaro diferentes fenmenos na estrutura molecular e, por fim, a definio das tcnicas e equaes matemticas que possibilitam a realizao de anlises quantitativas. Essa ltima parte (a anlise quantitativa) a principal nfase do curso. Os tpicos iniciais so para dar o suporte terico para o entendimento de porque e como a matria absorve luz.

Natureza da luz No sculo XVII, acreditava-se que a luz era constituda de corpsculos emitidos pelas fontes luminosas, tais como as estrelas ou a chama de uma lamparina. Estes corpsculos obedeciam a uma trajetria retilnea, seriam refletidos pelos corpos opacos e atravessariam os corpos transparentes. A incidncia desses corpsculos no olho causaria danos visuais. Em 1670, Christian Huigens mostrou que a refrao da luz podia ser explicada por uma teoria ondulatria, pois se argumentava na poca, que se a luz fosse um fenmeno ondulatrio, poderia contornar os corpos j que as ondas do mar contornam os obstculos que encontram. Atualmente, sabemos que as ondas luminosas realmente se encurvam ao redor da borda dos obstculos (difrao), embora essa curvatura seja to pequena que normalmente passa despercebida. Em 1873 Maxwell mostrou que um circuito eltrico oscilante pode irradiar ondas eletromagnticas e que a velocidade de propagao dessas ondas era cerca de 3x10
8

m/s, praticamente igual velocidade de propagao da luz. Heinrich Hertz conseguiu produzir micro ondas em 1888, e mostrar que as mesmas podiam ser refletidas, refratadas, enfocadas com uma lente, tal quais as ondas luminosas. Estes fatos evidenciariam a natureza eletromagntica da luz.
2

1.1 Ondas eletromagnticas Quando aproximamos duas esferas eletrizadas, notamos que, de acordo com os sinais das cargas, existe uma fora de atrao ou repulso antes mesmo que as esferas entrem em contato. Isto significa que as cargas existentes em uma das esferas so capazes de interagir com as cargas da outra esfera, independentemente do contato fsico entre elas, ou seja, gerado ao redor das cargas eltricas um campo que denominamos campo eltrico. De modo anlogo, quando tentamos aproximar dois ims notamos a presena de uma fora de atrao ou repulso (dependendo de quais plos queremos aproximar). Para uma carga eltrica que sofre uma acelerao, ambos os fenmenos esto presentes, de modo que o campo gerado possui duas componentes: uma eltrica devido carga eltrica propriamente dita e outra, magntica, devido ao movimento da carga. Uma corrente eltrica alternada, onde as cargas esto sujeitas a uma acelerao, produz os campos eltricos e magnticos. A perturbao produzida pelos campos eltricos e magnticos propaga-se pelo espao, originando-se da a expresso radiao eletromagntica. Em linhas gerais, os campos eltrico e magntico so campos perpendiculares entre si e que os valores de propagao onde ocorrem os mximos e os mnimos dos campos so sempre coincidentes, ou seja, os campos esto em fase. Como veremos posteriormente para a energia luminosa. Assim podemos dizer que a radiao eletromagntica um tipo de energia que se propagada atravs do espao a altas velocidades. E ocorrem na natureza sob vrias formas, sendo que as mais facilmente reconhecidas so: a energia luminosa e radiao de calor.

1.2 Espectro eletromagntico As radiaes Ultravioleta e visvel constituem uma parte relativamente pequena do espectro eletromagntico no qual esto includas outras formas de radiao eletromagnticas como as ondas de radio, radar, infravermelho, raio-x, raios csmicos. O limite destas regies determinado pelos limites prticos de mtodos experimentais de produo e deteco das radiaes.

A diferenciao das regies espectrais tem significado adicional para o qumico no sentido de que as interaes fsicas seguem diferentes mecanismos e fornecem diferentes tipos de informaes. As mais importantes transies atmicas ou moleculares pertinentes a regies sucessivas so. Raio-x Ultravioleta afastado Ultravioleta prximo e visvel Infravermelho afastado Microondas eltrons das camadas k e L. eltrons das camadas intermediarias eltrons de Valncia rotaes moleculares e vibraes fracas rotaes moleculares
4

Infravermelho prximo e mdio vibraes moleculares

O olho humano sensvel a apenas uma pequena parte do total do espectro eletromagntico na regio entre 380 a 780 nm e sensvel a cor do violeta ao vermelho. A seguir apresentamos as varias regies do espectro visvel e sua correspondente cor tal como o observador a percebe:

Intervalo aproximado de (nm) 400-465 465-482 482-487 487-493 493-498 498-530 530-559 559-571 571-576 576-580 580-587 587-597 597-617 617-780

Cor violeta azul azul esverdeado turquesa verde azulado verde verde amarelado amarelo verde amarelo esverdeado amarelo laranja amarelado alaranjado laranja avermelhado vermelho

Por conveno de referncia das varias regies espectrais segundo o Joint Commite on Nomenclature in Applied Spectroscopy:

Regio Ultravioleta afastado Ultravioleta prximo Visvel Infravermelho prximo Infravermelho mdio Infravermelho afastado Microondas

Comprimento de onda (nm) 10 - 200 200 - 380 380 - 780 780 - 3.000 3.000 - 30.000 30.000 - 300.000 300.000 - 1.000.000.000

2. PROPRIEDADES ONDULATRIAS E CORPUSCULARES DA LUZ.

Atualmente matria e energia no so consideradas entidades distintas e se interconvertem uma na outra, de acordo com a equao de Einstein: E = mC . Mas mais do que isso. como se matria e energia fossem duas faces da mesma moeda. Medem-se o comprimento de onda e a freqncia (propriedades ondulatrias) de partculas como eltron, prton ou nutron. Do mesmo modo, a luz um conjunto de partculas se deslocando no espao (ftons) com comprimento de onda e freqncia. O que caracteriza a energia luminosa a energia dos ftons, determinada pelo comprimento de onda (-lmbda) e freqncia (-ni), pois a velocidade (outro parmetro de energia) dos diversos ftons a mesma e constante em cada meio. A luz dita onda eletromagntica porque na Fsica clssica ela foi descrita como uma oscilao de um campo eltrico e de um campo magntico se propagando no espao.
2

2.1 Teoria dualstica. Assim a radiao eletromagntica e conseqentemente a luz mais facilmente descrita, atravs de teoria que se baseia em dois modelos, o que significa que a radiao denominada como possuidora de propriedades dualsticas. Reflexo, refrao e difrao, por exemplo, so melhores explicados com base na radiao como um campo eltrico oscilante, com um campo magntico associado. Efeitos fotoeltricos sugerem que a radiao composta por partculas quantizadas de energia denominadas de ftons.
6

2.2 Propriedades da onda Na figura abaixo podemos verificar que enquanto a onda se propaga para a direita com velocidade v, um ponto qualquer fixo sobre o eixo x, passa a ter sucessivamente picos e vales da onda. Definimos, ento, o comprimento de onda como sendo a distncia percorrida pela onda para que os dois mximos sucessivos, atinjam o ponto fixo de observao. O comprimento de onda usualmente expresso em nanmetros (nm) 10-9 m.

maior comprimento de onda = baixa freqncia

menor comprimento de onda = alta freqncia

Da equao do movimento retilneo uniforme (e = v.t), podemos dizer que o tempo decorrido para que dois mximos sucessivos atinjam o ponto fixo :

=VxT

ou

T = /V

equao 1

onde T = tempo (perodo) V = velocidade de propagao

= comprimento de onda
Portanto o perodo o tempo gasto pela onda para percorrer uma distncia igual ao seu comprimento de onda (). No tempo equivalente a um perodo, a onda completa um ciclo retornando a uma situao idntica ao de partida.
7

A freqncia o nmero de ondas que passam por um ponto em um perodo de tempo. Se a onda leva um tempo T para completar um ciclo, a freqncia pode ser calculada por:

=1/T

equao 2

Tomando-se o segundo como unidade de tempo, obteremos a freqncia em ciclo/seg ou Hertz. Substituindo a equao 1 e 2 teremos a relao entre a velocidade, o comprimento de onda e a freqncia.

=V/

equao 3

Embora seja usual descrever uma radiao por seu comprimento de onda, a freqncia um parmetro mais significativo por duas razes: - A freqncia diretamente proporcional a energia da radiao, como veremos adiante. A freqncia depende apenas da fonte da radiao, no do meio na qual ela viaja, ao passo que o comprimento de onda depende do meio que a radiao atravessa. Quando definimos uma radiao por seu comprimento de onda, entende-se que valor de no vcuo, pois to logo a radiao eletromagntica penetre em outro meio, h mudana no seu comprimento de onda. A velocidade de propagao diminui e o comprimento de onda diminui na proporo expressa pela equao 3, uma vez que a freqncia no depende do meio. Geralmente, a freqncia uma grandeza incmoda por ser um nmero muito grande. Na prtica comum expressar a freqncia em termos de nmeros de onda () que o nmero de ondas existentes em 1 cm, para a radiao atravessando o vcuo. O nmero de ondas pode ser calculado por:

=1/
A unidade de cm-1 ou Kaiser.
8

equao 4

2.3

Consideraes sobre a energia Observaes empricas tm ilustrado que algumas formas de radiao so mais

energticas que outras. Por exemplo, a luz visvel fria (no provoca queimadura), enquanto os raios ultravioleta causam queimaduras, raio-x pode causar graves queimaduras. A exposio aos Raios esto associados a mutaes genticas e a carcinomas, j os raios csmicos podem ser detectados no interior de minas, aps sua penetrao no solo e nas rochas. A obteno destas informaes torna mais conclusivo que radiaes com baixo comprimento de onda ou alta freqncia so mais energticos do que radiaes com alto comprimento de onda ou baixa freqncia. A energia cintica associada expressa pela equao: E=h. equao 5 com o fton da radiao eletromagntica

Onde h = constante de Planks (6.62 x 10-27 erg sc) = freqncia (ciclos/seg) e substituindo-se a frmula da freqncia: E=h.c/ Onde c = velocidade da luz (3 x 1010 cm/seg)

= comprimento de onda (nm)

O importante notar que a energia est diretamente relacionada com a freqncia e inversamente relacionada com o comprimento de onda.

3. A INTERAO DA LUZ COM A MATRIA

A teoria quntica, modelo atual da estrutura qumica, informa que os nveis de energia dos eltrons em tomos neutros so quantizados, isto , os eltrons assumem estados discretos de energia e s passam de um nvel de energia para outro se receberem uma quantidade exata. Essa energia pode ser muito alta, e fazer com que o eltron saia da estrutura atmica e o tomo neutro se torne um on. A partir desse limite, que a energia de ionizao, o tomo neutro passa a poder receber qualquer quantidade de energia e no mais "pacotes discretos". Cada elemento qumico tem estrutura eletrnica e nveis de energia diferenciados, tem uma energia de ionizao caracterstica e absorve uma srie diferente de "pacotes discretos" :
2 1

fton de luz (h)

n=4 n=3 n=2

+

n=1 n=2 n=3

n=1
absoro emisso

1Discreto, 2

nesse caso, quer dizer uma energia fixa ou quantizada e definida em cada nvel. A unidade de absoro no espectro, absorbncia, ser explicada mais adiante. 10

Assim quando colocamos um tomo frente a uma fonte luminosa, as energias correspondentes as possveis transies eletrnicas so absorvidas, dando origem a raias nos respectivos comprimentos de onda destas energias. Por exemplo, quando vapor de sdio exposto a uma fonte luminosa, seus tomos absorvem energia em comprimentos de onda especficos e caractersticos do destes tomos.
Espectro de Absoro do Vapor de Sdio Absorbncia 200 300 400 500 600 Comprimento de Onda () em nm

Como todos os tomos possuem uma distribuio eletrnica prpria e distinta de todos os outros, suas absores tambm sero caractersticas e nica para cada elemento. Como ser nas molculas, em que os eltrons estabelecem ligaes qumicas? Uma molcula tem movimento rotacional e vibracional (a ligao qumica vibra em torno do comprimento mdio e gira no eixo da ligao). Esse movimento quantizado e ela no gira nem vibra em qualquer velocidade. Os nveis de energia rotacionais e vibracionais tambm dependem da estrutura molecular.

11

O potencial energtico total de uma molcula, excluindo a energia do ncleo, pode ser considerado como sendo a soma das energias eletrnica, vibracional e rotacional. As energias eletrnicas esto associadas com transies de eltrons no interior do tomo ou molcula. Esta somatria de energias est representada na figura como uma troca eletrnica de orbitais. As energias vibracional e rotacional esto associadas com vibraes e rotaes moleculares. As diferenas de energia entre as estados de energia rotacional so relativamente pequenas, muito menores do que as diferenas entre os estados de energia eletrnica e estados de energia vibracional, conseqentemente: Absores associadas a transies entre nveis de energia rotacional so geralmente encontrados na parte de baixa energia ou alto comprimento de onda do espectro eletromagntico, ou seja, regio do infravermelho afastado. Absores associadas a transies entre nveis de energia eletrnica so encontrados na parte de alta energia , baixo comprimento de onda do espectro eletromagntico, ou seja, regio do ultravioleta-visvel. Absores associadas a transies entre nveis de energia vibracional so encontradas entre os dois anteriores, na regio do infra-vermelho.

Figura Regies do espectro relacionadas a energias.

12

Os vrios tipos de transies de energia no so independentes, mas esto inter-relacionados. Estados de energia rotacional sobre-posicionada nos estados vibracionais e ambos esto sobre-posicionada nos estados eletrnicos. Os ftons de uma determinada freqncia podem ser absorvidos, se eles estiverem "sintonizados" na freqncia que fornece a energia necessria para a transio de um estado rotacional para outro, ou de um estado vibracional para outro, ou de um estado eletrnico para outro, numa determinada molcula. Outras possibilidades so: A transio de um estado eletrnico para outro estado eletrnico, acompanhada tambm de uma modificao no estado vibracional original. A transio de um estado vibracional para outro, acompanhada tambm de uma modificao no estado rotacional original. A transio de um estado eletrnico para outro acompanhada de modificaes no estado vibracional e tambm no rotacional.

S2 S1

Nveis energticos eletrnicos Nveis energticos vibracionais

S0

Nveis energticos rotacionais

Figura Vrios tipos de transio ocorrendo simultaneamente e formando uma faixa continua de absoro

13

As possibilidades de absoro de energia numa molcula so bem maiores que num tomo.
3 ,4

Assim temos a formao de uma faixa contnua de absoro, dando

origem a um espectro em forma de bandas de absoro, como no exemplo do espectro de infravermelho do n-butanal a seguir:
Espectro de Absoro no Infravermelho do n-butanal
100 80 % Transmitncia 60 40 20 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 Comprimento de Onda (m)

Mesmo na regio do contnuo (a regio aps a ionizao em que se absorve qualquer pacote de energia), h possibilidades de absoro discreta, isto , um eltron de camada mais interna (fora da camada de valncia) pode ser colocado num nvel de energia externo camada de valncia. Nesse nvel, ele pode ainda estar ligado ao tomo ou molcula. Esse fenmeno necessita de uma quantidade de energia maior do que a energia de ionizao. bvio, tambm, que isso desarranja toda a estrutura atmica e esse estado instvel, mas a probabilidade de ocorrer uma absoro de energia nessa faixa maior, pois a molcula tem mais uma maneira de absorver o mesmo fton. Quando um fton se aproxima ocorrem trs eventos: ele passa direto, ou refletido, ou absorvido (se possui a freqncia necessria). O fenmeno da absoro ocorre nas freqncias quantizadas do tomo ou molcula, ou se a energia mais alta que a energia de ionizao. Mesmo quando a freqncia do fton a correta, existe uma probabilidade da absoro no ocorrer, pois o fton pode ser refletido ou passar direto. Mas isto no
3Fica

a sugesto de calcular quantas mais possibilidades de estados de energia uma molcula tem do que um tomo. 4Este espectro numa regio onde s ocorrem excitaes rotacionais e vibracionais e mesmo assim o nmero de bandas maior que no espectro atmico. A unidade de intensidade, % Transmitncia, ser explicada mais adiante. 14

igual para cada freqncia passvel de ser absorvida. Ao longo do espectro de freqncias existem probabilidades maiores ou menores de ocorrer absoro. Essa probabilidade, de um modo geral, cai conforme aumenta a freqncia da radiao eletromagntica. Ftons de alta energia, de modo geral, tm menor probabilidade de serem absorvidos que os de energia mais baixa, embora hajam inverses.

O espectro de freqncias, ou espectro eletromagntico, arbitrariamente dividido em: Viso humana: 380 a 780 nm Viso humana = 1 cm =====> espectro de radiao = 25 km

300

Visvel

800

Raios csmicos

Raios gama

Raios X

UV

IR

Microondas

Ondas de rdio

10-6

10-5

10-4

10-3

10-2

10-1

10

102

103

104

105

106

107

108

109

1010 1011 1012

Freqncia Energia Comprimento de onda

As ondas de rdio tm baixa energia e no costumam ser estudadas em Qumica. As microondas j tm energia suficiente para provocar mudanas no estado rotacional das molculas. Isso tem aplicaes analticas e tecnolgicas5. O infravermelho pode alterar o estado vibracional das ligaes qumicas. Como cada tipo de ligao tem o seu prprio espectro de freqncias de absoro, o infravermelho valioso para decifrar estruturas moleculares. A luz visvel provoca alteraes no nvel de energia dos eltrons da camada de valncia. capaz de romper ligaes qumicas mais instveis. muito utilizada na anlise quantitativa de vrias substncias que, para o olho humano, so coloridas.

5O

forno de microondas uma fonte de microondas sintonizada numa freqncia em que molculas de gua absorvem. O aumento do movimento rotacional da gua faz com que, por coliso, as molculas da comida aumentem o seu estado de movimento e a comida se aquece. O prato no esquenta por quase no conter molculas de gua na sua estrutura. 15

 A partir do ultravioleta, as radiaes so ionizantes e efetivamente rompem ligaes6. Podem provocar profundas alteraes na estrutura molecular e iniciarem vrias reaes qumicas. Os raios-X podem alterar a energia de eltrons de camadas internas (K e L). Quanto mais interno o efeito, maior o desarranjo na molcula quando ocorre absoro7. Essas alteraes em eltrons no-ligados fazem o raio-X excelente para descobrir a composio atmica de uma substncia. Os raios- tambm excitam as camada K e L. Podem afetar o ncleo atmico e provocar reaes nucleares, mas a probabilidade de absoro bem menor.

3.3 Efeitos dos solventes As anlises espectrofotomtricas na regio do UV so realizadas geralmente em solues. Normalmente trabalha-se com baixas concentraes do analito de interesse, e os solventes usados precisam de alto grau de pureza, j que as impurezas podero provocar distores no resultado. Alm disso, os solventes devem possuir alto grau de estabilidade tica, portanto no recomendvel o uso de solventes comerciais. A figura ilustra o efeito do iso-octano e etanol no espectro do fenol.

Figura Espectro do fenol em iso-octano e etanol

6Por

ser de freqncia mais baixa que as outras radiaes ionizantes, o ultravioleta tem maior probabilidade de absoro. Ele , na prtica, absorvido totalmente na pele e no consegue chegar nas clulas mais internas. A sua maior incidncia nos dias atuais, pela destruio da camada de oznio, aumenta o nmero de casos de cncer de pele. 7O raio-X mais "penetrante" que o ultravioleta, pela sua probabilidade de absoro ser menor. A matria tem que ser mais compacta (densa) para que haja razovel absoro ou reflexo. Por isso ele usado para fotografar o os ossos. 16

Os solventes mais usados na espectrofotometria de UV, que devem ser elaborados para este fim, so os carboidratos saturados como, por exemplo, n-hexano, cujas absores eletrnicas provocadas pelas transies dos eltrons para *, se do fora da faixa a ser analisada. Tambm so usados solventes com heterotomos, como por exemplo, CH3OH, que devido s transies eletrnicas s apresentam fracas bandas de absoro.

EXERCCIOS 1)Qual a principal diferena entre um espectro atmico e um espectro molecular? 2)Se o tomo ou molcula absorve, ele tambm pode liberar a energia absorvida sob a forma de ftons. Como isso acontece? Pesquise. 3)Defina transio eletrnica, transio vibracional, transio rotacional, energia de ionizao, regio do contnuo. 4)Quais os fenmenos bsicos que podem ocorrer quando um fton vai ao encontro de um tomo ou molcula? 5)Por que razo a regio do visvel a mais utilizada em anlise qumica? 6)Qual a diferena entre espectrofotometria de emisso e espectrofotometria de absoro?

17

4. COMO E PARA QUE MEDIR A ABSORO DE LUZ 4.1 Transmisso e absorbncia Quando uma radiao incidida em uma substncia semitransparente, a radiao somente parcialmente transmitida. A radiao restante refletida ou absorvida, dependendo da substncia e do comprimento de onda da radiao. O tipo e a quantidade de radiao, que absorvida a que possui maior importncia analtica. Infelizmente, no h um mtodo direto para determinar a radiao absorvida, entretanto ns podemos obter a informao indiretamente pela medida da radiao transmitida.

Figura Radiao absorvida, transmitida e refletida. Se a intensidade de uma luz transmitida plotada em funo do comprimento de onda, um espectro de absoro da substncia pode ser obtido. Esta a absoro seletiva da radiao a qual fornece a base para anlise qualitativa e quantitativa por espectrofotometria de absoro. Como visto anteriormente, cada faixa de comprimento de onda (freqncias) origina um tipo de informao diferente. A intensidade de absoro nos diferentes comprimentos de onda na faixa das microondas e no infravermelho d informaes sobre a estrutura molecular (quem est ligado com quem e com que tipo de ligao qumica). O visvel no to rico em informaes estruturais, mas pode dar valiosas informaes quantitativas. Do ultravioleta em diante, podemos obter informaes sobre

18

a composio elementar (pois so as camadas internas do tomo, no-ligadas, que absorvem). Vamos nos deter sobre a anlise da absoro no visvel. Num raciocnio intuitivo, a concentrao de uma substncia colorida, dissolvida num solvente incolor (como a gua), proporcional intensidade de cor da soluo. Desse modo, a intensidade de cor uma medida da concentrao da soluo. Como medir quantitativamente a intensidade da cor de uma soluo? Como a relao exata disso com a concentrao? Analisemos por que certas substncias so coloridas e tambm por que as substncias podem ter cores diferentes: As substncias so coloridas porque absorvem luz visvel. Desse modo, a luz que emerge de uma substncia s vai ter os comprimentos de onda (freqncias) que ela no absorveu. A retina ver, ento, mais fortemente as cores que deixaram de ser absorvidas. O preto existir quando a substncia (ou mistura de) absorve todas as cores da luz visvel.

Cada substncia, pela sua estrutura molecular, absorve um padro de cores especfico. Desse modo, o padro de cores refletido e absorvido determinar a cor final da substncia. Pode-se concluir que a cor da substncia a luz que ela no absorveu. A luz que interage e que tem relao com a estrutura eletrnica a cor que no se v. Por exemplo, uma substncia que amarela aos olhos humanos tem como cor mais fortemente absorvida o azul. Uma substncia azul tem como cor complementar o amarelo, que a cor mais fortemente absorvida.

19

RELAO APROXIMADA ENTRE ABSORO DE LUZ E COR

(nm)
800 700 650780 595650 560500560 490500 435490 38 0-

COR ABSORVIDA

COR COMPLEMENTAR

vermelho laranja amarelo-verde verde verde azulado azul violeta

azul-verde azul-esverdeado roxo vermelho prpura vermelho laranja amarelo-verde

600

500

400

Para medir a concentrao mede-se a luz absorvida e no a refletida. Melhor ainda, incide-se sobre a amostra apenas a luz que interessa (aquela que absorvida) e excluem-se os outros comprimentos de onda. O que se mede diretamente no a quantidade de luz absorvida. S se poderia fazer isto se houvesse um detector junto a cada molcula, para ver se ela absorveu ou no o fton. O que se faz normalmente medir a luz que consegue passar, e no a luz que absorvida. Se incidir um feixe de luz com intensidade Po, aps passar pela amostra ele ter uma nova intensidade P, menor do que Po, pois uma parte da luz foi absorvida. A nova intensidade detectada.

A intensidade de P depende da intensidade de Po, da concentrao do analito (C), do dimetro do tubo8 (caminho tico-b), do que incide e, claro, de que espcie a amostra.
8Quanto

maior o dimetro do tubo, maior a distncia que os ftons percorrem e maior a chance de colidir com as molculas capazes de absorver. 20

Amostra de concentrao C

Para medir concentrao, os outros fatores no podem variar e deve-se manter: o mesmo comprimento de onda para o mesmo tipo de amostra. a mesma espessura de cubeta. a mesma intensidade de Po. Como P depende de Po, h que se garantir que Po sempre igual nas diferentes medies. Para escapar desse problema, mede-se a razo P/Po, e no P sozinho. Essa razo chamada de transmitncia (T), definida como:

T =

P Po

Essa razo independe da intensidade isolada de P ou de Po. Utiliza-se tambm a porcentagem de transmitncia (%T), onde %T = 100 T. Os valores de T vo de 0 a 1, e a porcentagem9 de T vai de 0 a 100. A medida de Po feita com a cubeta contendo s solvente, por exemplo. Dessa forma, o decrscimo de transmitncia ser devido nica e exclusivamente ao da substncia absorvente. Pode-se tentar imaginar um aparelho que fosse concebido para medir a transmitncia. Haveria uma fonte de luz. Aps essa fonte de luz, haveria um monocromador, um dispositivo que selecionasse o comprimento de onda que incide sobre a amostra. Depois do monocromador, existiria a amostra propriamente dita. Aps a cubeta com a amostra, existiria um detector que gerasse um sinal eltrico proporcional intensidade de luz percebida. Esse sinal eltrico seria repassado a um registrador qualquer (voltmetro, ampermetro, etc.), dependendo do tipo de sinal eltrico gerado.

9Se

a amostra nada absorve, P = Po e T = 1. Se a amostra tudo absorve, P = 0 e T = 0. 21

Fenda de sada

Detector Amostra

Dispositivo dispersor Fenda de entrada

Fonte

Os aparelhos mais simples que medem a transmitncia, utilizam como fonte de luz uma lmpada de tungstnio similar quela utilizada na iluminao residencial. O monocromador mais simples o filtro, isto , uma pelcula que s deixa passar certa faixa de comprimento de onda e aparelhos com essa construo so chamados de fotocolormetros. Os monocromadores mais sofisticados so aqueles que contm prisma ou rede de difrao como elementos de disperso. Um monocromador com prisma teria o seguinte esquema:

Para intensificar e obter um feixe de luz branca pode-se utilizar um conjunto de fendas e lentes entre a lmpada e o prisma. Desse modo pode-se separar uma faixa de comprimento de onda com maior seletividade que usando um filtro. Para selecionar uma outra faixa de comprimento de onda, basta que o prisma esteja montado em uma base giratria. Ao girar o prisma, outros comprimentos de onda vo incidir sobre a fenda seletora. O mesmo efeito obtido ao se girar a fenda ou mudar-se o ngulo de incidncia do feixe de luz branca. Todo o conjunto fonte/monocromador/amostra tem que estar fechado para evitar a interferncia da luz ambiente.
22

EXERCCIOS 1) De que cor nos pareceria um objeto amarelo puro: a) Em um estdio de fotografia iluminado por luz azul? b) Se usssemos culos com lentes azuis num dia de sol? c) Se usssemos culos de lentes amarelas num local sem nenhuma iluminao? 2) A figura abaixo representa as principais partes de um fotocolormetro, o aparelho mais simples para medir absoro de luz:

Complete o esquema com outros apetrechos e adaptaes visando: a) Minimizar a perda do poder radiante. b) Ajustar o 100 % de transmitncia. c) Analisar uma soluo com colorao verde. 3) Uma soluo de [FeCl4]- apresenta-se amarela, logo:

( ) no absorve luz visvel. ( ) absorve muito a luz azul. ( ) no interage com a luz branca. ( ) tem um mximo de absoro na regio amarela do espectro. ( ) iluminada por luz azul.

4) Uma vantagem do espectrofotmetro sobre o fotocolormetro :

( ) Dispensar o uso de fenda para selecionar radiao. ( ) Menor custo na compra do equipamento. ( ) Maior simplicidade. ( ) Permitir a leitura de transmitncia s em funo de P. ( ) Maior seletividade no comprimento de onda.

23

5) Uma luz branca proveniente de uma fonte de radiao foi dispersa em seus comprimentos de onda e ento todo o feixe foi dirigido para um frasco transparente contendo soluo de sulfato de cobre amoniacal diludo (cor azul). As radiaes que saem da soluo foram dirigida para um anteparo branco. Observe o desenho e assinale a alternativa correta para aquilo que se observou no anteparo.

) ausncia de luz.

( ) luz branca. ( ) uma faixa de luz amarela. ( ) uma faixa de luz azul. ( ) todas as cores do arco ris.

6)Por que se mede a intensidade do feixe com a amostra e sem a amostra? Qual a vantagem? Por que o feixe sem a amostra medido com a cubeta s com o solvente?

24

5. A LEI DE LAMBERT-BEER Suponha-se um aparelho que capaz de medir a transmitncia de uma amostra e que se encontram disposio vrias solues-padro da mesma substncia. Como seria o grfico experimental da transmitncia dessas solues versus a concentrao de cada uma? Como a transmitncia deve diminuir quando aumenta a concentrao, o grfico obtido ser da forma:

1 T

0 0 Concentrao

A relao experimental entre transmitncia e concentrao tem a forma de uma exponencial inversa. Para se ter o grfico de uma reta, basta aplicar o logaritmo. Como os valores so menores que 1, para no ter nmeros negativos, aplica-se o logaritmo do inverso (log 1/T). Ento:

log (1/T)

Concentrao

Essa nova grandeza (log 1/T) diretamente proporcional concentrao e denominada absorbncia (simbolizada por A). Como se comporta a absorbncia, se a concentrao mantida constante e o caminho tico (dimetro da cubeta) b varia? Experimentalmente se obtm o grfico:

25

A = log (1/T)

Logo, a absorbncia depende da concentrao e do caminho tico. Pode-se definir uma equao para a absorbncia levando em conta essa dependncia e o fato de que, quando o caminho tico zero (ou a concentrao zero), a absorbncia tambm zero. Essa equao da forma: A = bC Essa a Lei de Lambert-Beer10, onde (psilon) a constante de proporcionalidade. Para saber o significado dessa constante, constri-se o grfico A (comprimento de onda), mantendo todas as outras variveis (b, C, tipo de amostra) constantes. Tomando uma substncia prpura, como o permanganato de potssio, sua intensidade mxima de absoro no verde. O grfico da forma:
Espectro de Absoro do KMnO4

1 2 3
A

400

450

500 (nm)

550

600

Esse o grfico de varredura da amostra (pois "varre-se" todos os ). Repetindo o grfico A C para os comprimentos de onda 1, 2 e 3, nas mesmas condies de anlise, e colocando-se as 3 retas no mesmo par de eixos, v-

26

se que 1 ter sempre uma absorbncia maior que 2, que ter absorbncia maior que 3 (apesar de termos 1<2<3 em nanmetros). O grfico resultante ser:

1 2 3

Concentrao

Qual a melhor reta para anlise quantitativa? a que fornece a melhor sensibilidade. Ou seja, a que melhor distingue entre duas concentraes muito prximas e que d maior sinal para amostras diludas. Claramente v-se que 1 atende a esses requisitos. Duas concentraes prximas tero em 1 a maior diferena em absorbncia. 1 o comprimento de onda de absoro mxima para a substncia, simbolizada como max. Agora pode-se definir claramente qual o significado da constante . Se b e C so os mesmos para cada reta, tem que ser diferente, para que o valor de A se modifique. uma constante que s depende da amostra, do solvente e do comprimento de onda. No depende do caminho tico ou da concentrao, uma propriedade daquela substncia em relao ao meio em que est dissolvida e ao comprimento de onda usado. chamada de absortividade molar, quando a concentrao expressa em mol/L (seria a absorbncia por mol e por centmetro). A unidade de L/mol.cm. Quando a concentrao expressa em g/L, o smbolo se modifica, passa a ser a, chamada de absortividade especfica (absorbncia por grama e por centmetro). A lei de Lambert-Beer nesse caso ser escrita como: A = abC Onde a concentrao est expressa em g/L. A unidade de a L/g.cm.

10Os

pesquisadores Lambert e Beer fizeram formulaes independentes dessa lei. 27

EXERCCIOS 1) Para uma concentrao C de um cromforo, trabalhando-se com uma cubeta de 1,00 cm de dimetro interno, leu-se um valor A de absorbncia. Considerando experimentos isolados, responda, matematicamente, o que aconteceria com: a) A absorbncia se reduzssemos a concentrao tera parte?____________ b) A transmitncia, se a concentrao dobrar?___________ c) A absorbncia, se dobrarmos o caminho tico?____________ 2) Correlacione a coluna da esquerda com a coluna da direita: 1- lmpada de tungstnio 2- prisma 3- cubeta 4- filtro 5- lente de focalizao 6- registrador 7- detector ( fotoclula) 8- lente de colimao 3)Os valores da tabela abaixo so pertinentes a um determinado cromforo. Complete as lacunas em branco, admitindo que o sistema segue a lei de Lambert-Beer. Se for impossvel calcular, assinale o quadro correspondente com um X. (nm) 640 500 (L.mol-1cm1 ) 4000 2000 20,0 168 a (L.g-1cm1 ) 40,0 massa molar (g.mol-1) C (g/L) C (mol/L) 1,5 x 10-5 2,5 x 10-5 2,0 1,5 0,60 b (cm) A %T ( ( ( ( ( ( ) ) ) ) ) ) Seleciona a luz branca em seus vrios (nm) Transforma sinal luminoso em sinal eltrico Concentra o feixe de radiao em um ponto Atua como fonte de radiao Suporte para a soluo a ser analisada Transforma o sinal luminoso em sinal eltrico

50

4) Uma soluo colorida possui transmitncia T sob determinadas condies. Se dobrarmos a sua concentrao a nova transmitncia nas mesmas condies ser (deduzir a expresso): a-( ) Log 2T b-( ) 2T c-( ) 1/2 T d-( ) T2 e-( ) T1/2

28

5) Sabe-se que uma amostra absorve do poder radiante incidente num determinado comprimento de onda. Calcule a sua absorbncia. 6) Sabe-se que o espectro de absoro do derivado nitrogenado B dissolvido em etanol tem max = 420 nm. Indique qual a cor da soluo alcolica de B e qual a cor do filtro ideal para sua determinao quantitativa.
CH 3 CH 3 N CH(CH ) 32 N N NO 2

a) B violeta e o filtro amarelo. b) B violeta e o filtro azul. c) B violeta e o filtro branco. d) B amarelo e o filtro amarelo. e) B amarelo e o filtro azul. 7) A sensibilidade na espectrofotometria diretamente relacionada com a escolha do comprimento de onda, portanto, a sensibilidade maior quando: a) As determinaes da absorbncia dos padres e da amostra forem feitas no max. b) O grfico for feito no max com a transmitncia contra a concentrao. c) O analista visualizar algum indcio de colorao na soluo no max. d) Valores da absorbncia dos padres forem maiores que 0,2 no max. e) A determinao da absorbncia dos padres e da amostra feita no de transmitncia mxima. 8) O monocromador, parte fundamental do espectrofotmetro, tem a funo de: a) Transformar o poder radiante em sinal eltrico. b) Converter o sinal eltrico em um sinal grfico. c) Dividir o poder radiante proveniente da fonte em dois feixes luminosos, sendo que um deles ir de encontro amostra e o outro de encontro referncia. d) Separar e selecionar a radiao policromtica que vem da fonte luminosa no comprimento de onda desejado. e) Calibrar o 100% de transmitncia na escala do registrador.

29

9)Analisando

comportamento

espectrofotomtrico

de

duas

solues

de

permanganato de potssio, verificou-se que na primeira soluo o valor de P foi trs vezes menor que Po e a segunda soluo teve um poder radiante emergente duas vezes menor que o da primeira soluo, no mesmo aparelho. a) Qual valor da transmitncia e absorbncia das duas solues? b) Qual das duas tem maior concentrao e quantas vezes mais? 10) Em espectrofotometria na regio do visvel deve-se operar com filtro cuja cor seja:

( ) igual a da soluo colorida a ser analisada. ( ) complementar a da soluo colorida a ser analisada. ( ) a que gere o menor valor para a absortividade do cromforo. ( ) proporcional intensidade luminosa da fonte. ( ) proporcional concentrao do cromforo e ao caminho tico.

11) A 452 nm, uma soluo com 1,68 10-3 g/L de clorofila B em etanol, apresentou transmitncia igual a 49,7%. Sabendo que sua absortividade molar nesse comprimento de onda de 1,63 105L/mol.cm, calcule o peso molecular da clorofila B, considerando b = 1,00 cm. 12) 50,00 mL de gua de caldeira reagiram com molibdato de amnio (reduo a azul de molibdnio) e foram avolumados a 250,00 mL. Preparou-se uma soluo padro cuja concentrao em fosfato era igual a 0,150 g/L. No sistema indicado ao lado (colormetro Dubosq) adicionou-se o padro num tubo, a amostra no outro tubo e se observou tonalidades iguais quando a altura da amostra foi trs vezes a altura do padro. Calcule a quantidade de fosfato na amostra original. 13) 0,200g de cobre metlico puro foram dissolvidos em cido ntrico, um excesso de amnia foi adicionado para formar o cromforo Cu(NH4)4+2 e a soluo resultante diluda a um litro em b.v. Uma alquota foi para um copo do colormetro Dubosq at encher 10,0 mm. Uma amostra de 0,500 g foi tratada com cido ntrico, excesso de amnia e diluda a 500,00 mL. Essa soluo foi colocada no outro copo do colormetro Dubosq e,
30

para obter igualdade de colorao, a profundidade foi ajustada para 16,0 mm. Calcule o teor de cobre na amostra. 14) Uma soluo padro de ferro foi preparada com 350 mg de Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O e dissolvidos em 500,00 mL (sol. A). Uma alquota de 2,00 mL de A foi misturada com 5 mL de cloridrato de hidroxilamina a 5%, 5 mL de o-fenantrolina a 5 %, o pH foi ajustado at 2 e a soluo resultante foi avolumada a 100,00 mL (sol. B). A absorbncia de B a 510 nm foi 0,361 numa clula de 1,00 cm. 100,00 mL de uma gua de poo foram evaporados a 80C at restar 5 mL, em seguida acrescentou-se 5 mL de cloridrato de hidroxilamina a 5%, 5 mL de ofenantrolina a 5 %, o pH foi ajustado at 2 e a soluo resultante foi avolumada a 50,00 mL (sol C). A absorbncia de C a 510 nm foi 0,248 numa clula de 1,00 cm. Calcule a concentrao de Fe em ppm na gua do poo e a absortividade molar do complexo Feo-fenantrolina.

31

6. A CURVA DE CALIBRAO EM ESPECTROFOTOMETRIA Procedimento para calibrar aparelhos para anlise em espectrofotometria: Primeiramente ajustar o 100 %T do aparelho com a cubeta contendo somente o solvente utilizado (normalmente gua). Ajustar o 0 (zero) %T com o feixe de luz totalmente obstrudo. Fazer a varredura da soluo da substncia em questo11. Com o comprimento de onda escolhido, fazem-se as medidas de transmitncia de uma srie de padres da substncia. Calculando as absorbncias, constri-se o grfico de A C, que servir de base para a anlise da amostra desconhecida:

Curva de Calibrao A x Conc (ppm Mn)

0,8 0,7 0,6 0,5 0,4 A 0,3 0,2 0,1 0 0 -0,1 Conc (ppm Mn) 5 10 15 20 25 30 35 40

= 525 nm b = 10 mm

A = 0,0219 C (ppm Mn) - 0,0037 R = 0,9995

2

De posse do grfico (ou da equao da reta calculada a partir dos pontos experimentais) pode-se fazer, por interpolao, a leitura da amostra, ou calcular pela equao. A absorbncia da amostra desconhecida permitir a obteno da concentrao desejada.
11

Esse ltimo procedimento permite escolher o max, que o melhor comprimento de onda para proceder a anlise. Essa varredura consiste em ler a transmitncia a cada comprimento de onda selecionado. Nos aparelhos de feixe simples mais antigos, o ajuste do 0 e do 100% tem que ser feito a cada comprimento de onda, pois a fonte de luz no bem estabilizada. 32

Nem sempre possvel a leitura direta da amostra, por vrias razes: a amostra pode conter mais de um cromforo (substncia que absorve luz). as condies de pH, agentes complexantes, solventes, etc., podem no ser reprodutveis nos padres, e esses fatores podem afetar a absortividade da substncia. a amostra pode estar diluda demais e fora da faixa tima de leitura. Contornar esses e outros fatores exige o emprego de tcnicas que sero estudadas adiante. O uso de vrios padres para se fazer uma curva de calibrao diminui a possibilidade de erros grosseiros que poderiam acontecer com o uso de um s padro. A curva de calibrao permite tambm o clculo de ou a para o comprimento de onda utilizado, pois b (ou ab) coeficiente angular da reta de calibrao. Para calcular ou a, basta dividir o coeficiente angular pelo valor de b. Para diminuir o erro, muitas vezes o branco da amostra no simplesmente o solvente. Em vrias anlises, o composto que se quer analisar no colorido, isto , no absorve no visvel. Como existem muitos mtodos sensveis e especficos para desenvolver cor em vrios tipos de analitos, a cor desenvolvida na amostra para o analito que se quer medir. O branco, no caso, pode ser a prpria amostra com todas as etapas do tratamento, menos aquela que d cor ao analito. Com isso, qualquer outro componente da amostra que possa ter alguma absorbncia descontado no branco. O composto que absorve luz chamado de cromforo, e importante distinguir que muitas vezes o cromforo no o analito, e sim um composto derivado dele. O espectro de varredura importante, pois, como j foi dito, muitas vezes a amostra tem algum componente colorido que interfere na anlise. Nesse caso, pelo espectro de varredura, pode-se escolher um outro comprimento de onda que tenha boa sensibilidade (alto valor de ) mas que no sofra a interferncia do componente colorido. Outras tcnicas para driblar esse problema sero mostradas adiante.

33

EXERCCIOS 1)Determinou-se a absorbncia de uma srie de padres de permanganato de potssio, em espectrofotmetro a 525 nm, fornecendo os seguintes resultados na tabela ao lado: C (ppm de Mn) Absorbncia
1,0 2,0 5,0 10,0 20,0 25,0 35,0 0,014 0,032 0,108 0,216 0,444 0,544 0,754

Uma amostra de 2,53 g de ao foi dissolvida em 20 mL de HNO3 1:3, tratada com agente oxidante para que o mangans fosse permanganato e diluda 50,00 mL com gua destilada. 2,00 mL dessa soluo foram avolumados a 50,00 mL com gua destilada. A transmitncia lida nas mesmas condies dos padres, foi de 55,2%. Faa o grfico da curva de calibrao do mangans e determine a absortividade do permanganato e o teor de mangans no ao. 2)Um analista analisou algumas amostras de uma substncia que absorve na luz visvel. Fez uma srie de medidas que lhe permitiram obter o max daquela substncia, preparou uma srie de padres e, utilizando o max, obteve os resultados ao lado: C (mol/L)
1,00 10-5 1,50 10 2,50 10 3,00 10
-5

%T
62,6 50,6 40,0 31,3 25,3

2,00 10-5
-5 -5

Sabe-se que para cada amostra ele tomou alquotas de 10,00 mL, utilizou reagentes que desenvolviam cor e avolumou em b.v. de 100,00 mL. Quando terminou, avaliou que as amostras estavam mais escuras que os padres, tomou alquotas de 25,00 mL de cada b.v. e avolumou novamente a 100,00 mL. As leituras das amostras foram de 45,0 %T, 28,5 %T e 52,4%T. a)Construa o grfico e ache as concentraes das amostras nas solues de origem. b)O aparelho usado para medir o max foi um espectrofotmetro ou um fotocolormetro? Explique. c)O que aconteceria com a transmitncia, se o analista medisse fora do max? Por qu? d)Qual o da substncia em questo, sabendo que b = 1,00 cm (calcule pelo grfico)?

34

3)Para analisar o contedo de nitrito, uma massa de 20,048 g de uma amostra de presunto foi cortada, moda, tratada e filtrada quantitativamente para que o nitrito fosse extrado, reagisse e formasse o composto colorido. O filtrado foi avolumado a 100,00 mL, mas a soluo apresentou transmitncia pequena. Sendo assim, pipetou-se 25,00 mL da soluo e diluiu-se a 50,00 mL. Novamente a transmitncia apresentou-se pequena. Fez-se nova diluio, pipetando 10,00 mL dessa ltima soluo e diluindo-se a 50,00 mL. Leu-se, ento uma transmitncia de 65,8%. De uma soluo estoque de NaNO2 a 0,450 g/L, foram feitos padres retirando-se alquotas com uma bureta, acrescentando-se 10 mL do reagente colorimtrico e avolumando com gua em b.v. de 500,00 mL. Os dados esto na tabela ao lado. a) Qual o teor de nitrito na amostra original? b) Qual seria o melhor branco para a leitura da amostra? c) Se a anlise fosse efetuada em um fotmetro de filtro, qual o filtro escolhido? 4)Um de analista Fez em testou a leitura dois das ppm de Mn
5,00 10,0 15,0 20,0 25,0

V (mL) de NaNO2
1,00 5,00 8,00 10,00 14,00

T (%)
88,2 51,4 36,0 28,8 16,0

A (aparelho 1)
0,105 0,207 0,310 0,425 0,530

A (aparelho 2)
0,080 0,165 0,235 0,315 0,405

fotocolormetros KMnO4. absorbncias

preparando padres cada aparelho,

utilizando cubetas com o mesmo b. Os resultados esto na tabela ao lado:

a) Faa um grfico que contenha as duas curvas de calibrao. b) Calcule as absortividades molar e especfica de cada aparelho (b = 1,50 cm). c) Qual o aparelho com maior sensibilidade para essa anlise? Justifique. d) Sabendo que a absorbncia de uma amostra foi de 0,380, no aparelho de maior sensibilidade, calcule a sua concentrao em mol/L e a leitura de transmitncia que essa soluo apresentaria no aparelho de menor sensibilidade. e) Explique por que as absortividades foram diferentes em cada aparelho.

35

5)O grfico e a tabela abaixo correspondem s varreduras de solues 4,0 10-4 mol/L, realizadas num espectrofotmetro, de um indicador submetido a diversos valores de pH.
Espectro do Indicador a Diferentes pH's

0,800

0,600 Absorbncia

0,400 7,0 0,200 3,0 460 520 (nm ) 1,0 640 700 5,0 pH

0,000 400

580

(nm) 400 420 440 460 480 500 520 540 560 580 600 620 640 660 680 700

pH = 1,0 0,004 0,002 0,004 0,006 0,004 0,002 0,004 0,010 0,028 0,080 0,194 0,330 0,332 0,122 0,030 0,010

pH = 2,0 0,006 0,002 0,004 0,006 0,008 0,008 0,010 0,010 0,030 0,076 0,204 0,332 0,332 0,146 0,050 0,018

pH = 3,0 0,180 0,300 0,536 0,542 0,288 0,120 0,060 0,010 0,012 0,040 0,100 0,182 0,190 0,080 0,030 0,010

pH = 4,0 0,300 0,380 0,728 0,720 0,440 0,200 0,100 0,022 0,006 0,004 0,006 0 0 0 0 0

pH = 5,0 0,280 0,480 0,722 0,726 0,550 0,222 0,120 0,030 0,008 0,008 0,004 0,006 0 0 0 0

pH = 6,0 0,360 0,454 0,726 0,724 0,472 0,198 0,070 0,020 0,004 0,006 0 0 0 0 0 0

pH = 7,0 0,368 0,492 0,728 0,726 0,502 0,228 0,104 0,030 0,008 0,004 0,004 0 0 0 0 0

a) Determine o valor do mximo de absoro em cada curva. b) Calcule o max de cada uma das formas do indicador, sabendo que b = 1,00 cm. c) Qual a zona de viragem do indicador? Qual a cor provvel de cada uma das formas? d) Explique por que no possvel realizar esse experimento num fotocolormetro.

36

7. O MTODO DE ADIO-PADRO EM ABSORCIOMETRIA O mtodo de adio-padro consiste na adio de uma determinada quantidade de padro amostra. Deve-se medir a absorbncia da amostra antes e aps a adio do padro, nas mesmas condies espectrofotomtricas. Desse modo, pode-se minimizar a ao de interferentes contidos na amostra. O efeito dos interferentes praticamente o mesmo nas solues de amostra e de amostra mais padres. Um constituinte indesejvel pode interferir, quer devido s suas prprias propriedades ticas, quer por sofrer interaes com o cromforo a ser analisado, ou com os vrios reagentes empregados na determinao. Manifestaes dessa natureza podem acarretar o desaparecimento da cor, a no obteno da absorbncia terica, etc. O reconhecimento e a eliminao de interferentes numa anlise so grandemente facilitados, quando se tem conhecimento da natureza dos componentes presentes na soluo em anlise, o que nem sempre possvel quando a amostra muito complexa. H uma variedade de tcnicas para eliminar, ou minimizar, os efeitos dos constituintes no desejados. As separaes do tipo lquido-lquido (extrao por solventes, absoro em coluna, etc.) so ainda muito utilizadas, por representarem processos simples e rpidos de anlise. No entanto, podem ocorrer perdas no processo. A separao fsica do constituinte desejado daqueles que interfere nem sempre to satisfatria na prtica como na teoria, devido s fontes de erros e desperdcios de tempo nos processos. A converso qumica do interferente numa espcie oticamente inerte um mtodo geralmente preferido separao fsica, pois pode ser feito in loco. Reaes de oxirreduo e complexao so comumente efetuadas para sistemas inorgnicos, ao passo que reaes de oxirreduo e condensao so freqentemente aplicadas a sistemas orgnicos. A tcnica de adio-padro uma tcnica instrumental muito utilizada pela rapidez e simplicidade de anlise e por dispensar toda essa srie de procedimentos de eliminao de interferentes que seriam dispendiosos em tempo e dinheiro. Para fazer a adio padro, toma-se uma alquota conhecida (Vx) de amostra e faz-se uma diluio a certo volume final (VT) e mede-se a absorbncia. Em seguida, toma-se outra alquota de amostra de mesmo volume (Vx), adiciona-se certo volume de
37

padro (Vp), dilui-se ao mesmo volume final (VT) e mede-se a absorbncia. Com essa tcnica, a absorbncia lida aps a adio do padro ser, necessariamente, maior do que a absorbncia antes da adio. A absorbncia da soluo de amostra diluda expressa pela relao A o = b

C x Vx . Onde Cx a concentrao da amostra VT

e CxVx/VT a nova concentrao aps a diluio. A absorbncia da soluo tambm com a adio do padro
C x Vx + C p Vp expressa por A = b . Onde Cp a concentrao VT

do padro e (CxVx + CpVp)/VT a nova concentrao da soluo.

Essa ltima equao pode ser desdobrada em dois termos:

A = b

Cp C x Vx Vp + b VT VT

O primeiro termo da equao o termo que aparece na equao da absorbncia antes da adio do padro e uma constante para qualquer Vp, desde que , b, Vx e VT sejam sempre os mesmos. No segundo termo, a expresso que multiplica Vp tambm uma constante. Se medirmos vrias solues, com diferentes adies de padro, e
Cp fizermos um grfico de A Vp, teremos uma reta em que o coeficiente angular b VT
C V permite o clculo de b, j que Cp e VT so conhecidos. O coeficiente linear b x x VT

contm a concentrao procurada (Cx) e os outros termos so conhecidos. A seguir temos um exemplo de uma curva de adio-padro para a anlise de Fe (II) em gua, por meio do desenvolvimento de cor com o tiocianato:

38

Anlise de Fe (II) por Adio-Padro em Espectrofotometria 1,200 1,000 0,800 A 0,600 0,400 0,200 0,000 0,00

Vp (mL) 0,00 5,00 10,00 15,00 20,00

A 0,240 0,437 0,621 0,809 1,009

5,00

10,00 Vp (mL)

15,00

20,00

Vx = 10,00 mL Cp = 10,0 ppm VT = 50,00 mL b = (coef.ang. Vt)/Cp = 0,191 Cx(ppm) = (coef.linearVt)/(bVx) = 1,00

A = 0,0382 Vp + 0,241

Uma outra maneira de fazer esse mesmo clculo dividir o coeficiente linear pelo coeficiente angular, que, calculando pelas expresses anteriores, equivale a CxVx/Cp. Substituindo-se os valores de Vx e Cp, pode-se achar o valor de Cx. Esse problema tambm pode ser resolvido de maneira grfica, prolongando-se a reta e achando o Vp negativo em que a absorbncia cairia a zero (tcnica da extrapolao). O clculo utilizando esse modo de resoluo deixado como exerccio.12 Esse mtodo se torna mais preciso quanto maior o nmero de solues utilizadas para anlise. Quando no se quer tanta preciso, pode-se utilizar uma adio nica de padro e fazer o clculo com os valores obtidos antes e aps a adio. Tambm se pode fazer a adio sem respeitar o volume constante, o que operacionalmente mais simples. Um nmero menor de solues preparadas com a amostra pode ser desejvel, quando a quantidade de amostra pequena. Deixamos tambm a deduo matemtica desses dois casos para o estudante13. Esses dois mtodos (adio mltipla e adio nica) se prestam principalmente a anlises de apenas um cromforo em soluo.

12 13

Nos exerccios aps este tpico existem casos que podem ser resolvidos desta maneira. Os exerccios 7 e 8 obrigatoriamente tm que ser resolvidos desta ltima forma. 39

EXERCCIOS 1)Para determinar a concentrao de ferro em sistemas aquticos, um analista tomou cinco alquotas de 10,00 mL de gua de um lago e adicionou a cada uma delas, respectivamente, exatamente 0, 5,00, 10,00, 15,00 e 20,00 mL de uma soluo-padro contendo 10,0 ppm de Fe+3, completando a seguir os volumes a 50,00 mL com gua deionizada e excesso de SCN-, de modo a formar o complexo [FeSCN]+2 (vermelho). Em um determinado comprimento de onda, as absorbncias medidas para as cinco solues foram, respectivamente, 0,240; 0,437; 0,621; 0,809; 1,009. Pede-se: a) A equao da curva de adio padro e a concentrao de ferro na amostra original. b) Sabendo-se que b = 1,00 cm, a absortividade molar do complexo no comprimento de onda. 2)Como parte da investigao de chumbo em ecossistemas biolgicos, algumas sementes foram colhidas ao longo de estradas onde ficaram expostas aos gases emitidos por motores movidos gasolina, a qual continha chumbo. Uma amostra representativa de sementes, pesando 6,250g, foi incinerada para destruir a matria orgnica, e o resduo inorgnico foi tratado convenientemente. A amostra foi ento diluda a 100,00 mL. Uma alquota da soluo foi lida a 283 nm, e a absorbncia foi 0,125. Aps isto, 0,100 mL de soluo padro contendo 55,00 mg/mL de Pb foi adicionada a 50,00 mL da soluo de amostra. A absorbncia encontrada para essa nova soluo foi de 0,180. Calcule o teor de Pb no material em mg/g (ppm). Observe que no houve diluio a um volume final, mas o volume de adio desprezvel comparado ao volume de amostra. 3)2,00 mL de urina so analisados para obter o teor de fosfato, adicionando-se reagentes que desenvolvem cor, diluindo a 100,00 mL, medindo sua absorbncia a 700 nm e obtendo um valor de 0,375. A uma segunda alquota de 2,00 mL so adicionados 5,00 mL de uma soluo padro de fosfato contendo 45,0 mg/L de fosfato. Depois do desenvolvimento de cor e diluio a 100,00 mL, a absorbncia foi de 0,506 a 700 nm. Calcular a concentrao de fosfato na amostra em mg/L.

40

4)Para a determinao de glicose no sangue, foram adequadamente tratados 5,00 mL de amostra. Adicionou-se, ento, soluo de o-toluidina a 10%, diluiu-se a 25,00 mL com gua destilada, obtendo-se o complexo de colorao verde, segundo a reao:
NH 2 CH C H O 6 12 6 + 3 CH O H(C HO H) C H 2 4 N + H O 2

CH

2,00 mL dessa ltima soluo foram tomados e avolumados a 100,00 mL. A absorbncia lida para a soluo diluda foi 0,470. Foram retirados mais 2,00 mL dos 25,00 mL iniciais, aos quais se adicionou 4,00 mL de uma soluo-padro do complexo com concentrao de 15,0 ppm de glicose e tambm diluiu-se a 100,00 mL. A absorbncia para essa soluo foi 0,610. a) Qual o melhor filtro para medir a absorbncia dessa amostra em fotocolormetro? b) Qual a concentrao em mg% de glicose na amostra de sangue? 5)2,00 mL de uma soluo 2,00 x 10-4 mol/L de um corante foram transferidos para uma clula de absoro com 2,00 cm de dimetro interno e capacidade at 5 mL. A absorbncia da soluo no max foi 0,500. Em seguida 2,00 mL de uma soluo 3,00 x 10-4 mol/L do corante foram misturados com a soluo que estava na cubeta e homogeneizou-se a soluo resultante. Qual a absorbncia lida? 6)Para a anlise de nitrito no salame, 10,08 g da amostra de salame foram tratados convenientemente e diludos at 250,00 mL. Cinco alquotas de 10,00 mL foram transferidas, cada uma para bales volumtricos de 100,00 mL. Ao primeiro balo volumtrico, adicionou-se 5,00 mL de um reagente colorimtrico adequado a fim de formar o cromforo e completou-se com gua destilada, enquanto nos demais, alm dos 10,00 mL da soluo amostra e do regente colorimtrico, foram adicionados respectivamente, 1,00; 3,00, 5,00 e 8,00 mL de uma soluo padro de nitrito a 2,00 ppm e s ento o volume final foi ajustado a 100,00 mL. Aps o preparo das solues, procedeuse a determinao a 435 nm, obtendo-se os resultados ao lado:
41

T (%) 61,8 53,6 39,0 29,8 18,6

V (mL) 0 1,00 3,00 5,00 8,00

a) Construa a curva de calibrao A x Vp e determine o teor de nitrito no salame a partir do grfico extrapolando at o Vp em que a absorbncia zero. Expresse em ppm ponderal. b) Calcule a transmitncia, se na alquota de 10,00 mL da amostra fossem adicionados 20,00 mL da soluo padro a 2,00 ppm, seguido de diluio a 50,00 mL. 7)Considere no exerccio 3 que 5,00 mL de padro foram adicionados diretamente nos 100,00 mL contendo outra amostra e obtiveram-se as mesmas leituras de absorbncia. Calcule a concentrao de fosfato. Nesse caso a variao de volume no desprezvel. 8)No exerccio 4, considere que os 4,00 mL de padro foram acrescentados a 50,00 mL da soluo de outra amostra e foram obtidas as mesmas leituras. Calcule a concentrao de glicose. Novamente a variao de volume no desprezvel.

42

8. ANLISE DE MISTURA DE CROMFOROS Esse mtodo aplicado quando se quer analisar dois ou mais cromforos em soluo simultaneamente e, o que a situao mais comum, os espectros possuem regies de superposio. Se na soluo de amostra existe mais de um cromforo, os espectros de absoro desses cromforos podem se sobrepor numa dada extenso de comprimento de onda. Ento, a anlise dessa amostra em apenas um comprimento de onda, quando se escolhe um max, dever corresponder a um dos cromforos e o(s) outro(s) provavelmente no estar(o) na regio de absorbncia mxima. Mas isso gera uma impreciso na medida, pois a absorbncia nesse corresponde no s ao cromforo em questo, mas tambm a absorbncia do(s) outro(s) em soluo. A seguir apresenta-se os espectros de dois cromforos denominados x e y, misturados numa dada concentrao Cx e Cy.
Grfico de uma Mistura de Cromforos

cromforo X

cromforo Y absorbncia total

(nm)

Como podemos ver, no max de x existe uma contribuio de y e no max de y existe uma contribuio de x. Nesse caso, em cada : Atotal = Ax + Ay Escolhe-se os max de cada um dos compostos, onde cada um deles tem a maior sensibilidade. x ser o max do composto x, e y o do max do composto y. Pela lei de Lambert-Beer, a contribuio de cada um deles para a absorbncia total em cada comprimento de onda ser:
y A total ( x ) = x bC x + x bC y x y A total ( y ) = x bC x + y bC y y

x e y so as absortividades de x e y no x, e x e y so as absortividades de x e y y y x x
no y.
43

Se os so conhecidos em cada (podem ser obtidos medindo-se padres de cada cromforo) e o b tambm, as nicas incgnitas das equaes so Cx e Cy. Temse ento um sistema de equaes do primeiro grau de fcil resoluo, onde se pode calcular as duas concentraes. Fica como exerccio para o estudante o desenvolvimento de um sistema para trs cromforos14.

EXERCCIOS 1)Os complexos de cobalto e nquel com 2,3-quinoxalineditiol tm as absortividades tabeladas: Ni 510 nm Co 3,64 104 L/molcm
5,52 103 L/molcm

656nm
1,24 103 L/molcm 1,75 104 L/molcm

250,00 mg de amostra de um solo perto de uma indstria de processamento de metal so dissolvidos, agentes mascarantes adicionados para evitar interferncias de outros complexos, a cor desenvolvida com adio de 2,3-quinoxalineditiol e o volume final levado a 100,00 mL. A absorbncia 0,517 a 510 nm e 0,405 a 656 nm em cubeta de 1,00 cm. Calcule a porcentagem em peso do Co e do Ni no solo. 2)A salicilaldoxima forma em clorofrmio complexos com Ni+2 e Co+2. Os de cada um deles nos max so: Ni
10

500 nm
L/mol cm

400 nm
5,00 103 L/mol cm 5,00 103 L/mol cm

Co 1000 L/mol cm

Se uma soluo numa cubeta de 1,00 cm apresenta absorbncias de 0,091 a 500 nm e 0,615 a 400 nm, calcule as concentraes de Ni+2 e Co+2. 3) ons de terras raras tm picos de absoro finos e baixos . Para Dy Eu
+3 +3

Dy (L/mol.cm)
394 nm 908 nm 0,50 2,46

Eu (L/mol.cm)
306 0,00

temos os nos max:

Se uma soluo contendo esses ons tem uma absorbncia de 0,206 a 394 nm e 0,201 a 908 nm numa cubeta de 5,00 cm, calcule as concentraes desses ons.

14Esse tipo de anlise tem limitaes: a amostra tem que ter todos os cromforos determinados, com o conhecido em cada necessrio e a incerteza na determinao de um cromforo aumenta com o aumento do nmero de cromforos. 44

4)A tabela ao lado fornece as absortividades molares em mol/L.cm para o Cr2O7-2 e Cr2O7-2 MnO4MnO4- em dois comprimentos de onda:

440 nm 369 95

545 nm 11 2350

1,000 g de uma amostra de ao dissolvido numa mistura de H2SO4, HNO3 e H3PO4, e tratado com persulfato e periodato para oxidar o Mn a MnO4- e o Cr a Cr2O72

. A soluo final diluda a 100,00 mL e a absorbncia 0,108 a 440 nm e 1,296 a

545 nm em cubeta de 1,00 cm. Calcule as porcentagens de Cr e Mn no ao.

45

9. DESVIOS DA LEI DE LAMBERT-BEER A lei de Lambert-Beer nem sempre vlida. Os desvios encontrados so classificados em desvios por limitao da lei, desvios qumicos e desvios causados pela instrumentao:

Os desvios por limitao da lei so aqueles em que as interaes do analito com o

solvente e demais solutos variam com o aumento da concentrao. O , por exemplo, funo do ndice de refrao. O ndice de refrao sofre grandes variaes em solues muito concentradas, alterando o . Em solues concentradas do analito ou outros solutos, as interaes soluto-soluto alteram a estrutura do analito e tambm modificam sua absortividade. Esses efeitos geralmente ocorrem em concentraes maiores que 0,01mol/L das espcies presentes na amostra. Os desvios so positivos ou negativos conforme as alteraes aumentem ou diminuam a absortividade.

Os desvios qumicos ocorrem por reaes no-completas (K, constante de equilbrio,

baixa) em que a espcie absorvente o reagente ou o produto em reaes de complexao, equilbrio cido-base e formao de dmeros. Alm da concentrao analtica, a concentrao real da espcie absorvente tambm ser ditada por K. Se K favorece o cromforo nas concentraes analticas mais altas, o desvio positivo. Ao contrrio, se K favorece o cromforo nas concentraes mais baixas, o desvio negativo.

Nos desvios causados pela instrumentao, h que se lembrar que a lei de Beer
aplicvel para luz monocromtica. Filtros, por abrangerem faixas largas de comprimento de onda, apresentam desvios negativos facilmente, pela mistura de comprimentos de onda que absorvem menos que o max. Esse efeito maior se medirmos fora do max, onde a diferena de absortividade entre os vrios maior. Outro fator de desvio de instrumentao a luz espalhada internamente no aparelho por qualquer superfcie refletora. Como parte dessa luz ter diferente do max, o desvio sempre negativo. Cubetas sujas e no uniformes tambm afetam os resultados. Ao ocorrer um desvio da lei de Beer, ainda pode-se trabalhar com a curva de calibrao, embora ela no seja uma reta. O comportamento da curva pode ser mostrado no grfico a seguir:
46

Desvios da Lei de Beer

Absorbncia

Desvio Positivo Desvio Negativo

Concentrao

Como desvios da lei de Beer normalmente ocorrem em concentraes mais altas, uma das solues mais comuns diluir mais a amostra, para que a anlise ocorra na faixa linear da curva, desde que o valor de (que d a sensibilidade do cromforo naquele comprimento de onda) e a sensibilidade do aparelho que mede a absoro permitam. A faixa de trabalho normal dos mtodos espectrofotomtricos vai de 10-2 mol/L a 10-7 mol/L, com vrias excees. muito importante conhecer em que faixa de concentrao ocorre um desvio significativo da lei de Beer. Essa mais uma das razes por que nunca se deve extrapolar os resultados de uma curva de calibrao para calcular a concentrao de uma amostra, cujo valor de absorbncia caiu fora dos limites dos valores de absorbncia dos padres. Outro fator da instrumentao que pode causar desvios aparentes da lei de Beer a mudana de sensibilidade do detector com o tempo.

47

EXERCCIOS 1)Para cada uma das seguintes situaes, preveja em qual a Lei de Beer mostrar um desvio aparente negativo, um desvio positivo ou praticamente nenhum. a) A substncia absorvente a forma no-dissociada de um cido fraco. b) A entidade absorvente o ction em equilbrio com a base fraca. c) Um metal est sendo determinado atravs de um reagente que desenvolve cor, medido em um colormetro fotoeltrico com o filtro apropriado. No mesmo sistema adicionada uma quantidade igual e insuficiente do reagente para reagir completamente com trs padres mais concentrados, entre os dez examinados. 2)Preparou-se uma soluo de um complexo que apresenta o seguinte equilbrio: M
+n

+ L

(ML)+n

Sendo o complexo ML o cromforo do sistema. Que tipo de Desvio da Lei de Beer deve ocorrer, se, no preparo das solues padres, para maiores concentraes do M+n a quantidade de ligante L adicionada no suficiente ? Esboce o grfico e justifique. 3)Em uma anlise espectrofotomtrica na regio do ultravioleta de uma amostra gasosa, verificou-se um desvio da Lei de Beer. A anlise media a concentrao de NO2 em uma amostra de ar. Essa substncia encontra-se no seguinte equilbrio: 2 NO2 N2O4 A absorbncia no varia linearmente com a concentrao analtica do NO2. Com o incremento da concentrao, a absorbncia no aumenta proporcionalmente. Justifique por que ocorre esse desvio e mostre graficamente como se observa o mesmo.

48

BIBLIOGRAFIA 1. Christian, G.D., Analytical Chemistry, John Wiley & Sons, Inc., 5a edio, 1994. 2. Skoog, D.A., West, D.M., Holler, F.J., Fundamentals of Analytical Chemistry, Saunders College Publishing, 7a edio, 1995. 3. Gonalves, Ma de L., Mtodos Instrumentais para Anlise de Solues, Fundao Calouste Gulbenkian, Lisboa, 1983. 4. Willard, H. , Merrit Jr., L., Dean, J., Anlise Instrumental, Fundao Calouste Gulbenkian, 2a edio, Lisboa, 1979. 5. Kennedy, J.H., Analytical Chemistry-Principles, Harcout Brace Jovanovitch, Flrida, 1984. 6. Pecsok, R.L. & Shields, L.D., Modern Methods of Chemical Analysis, John Wiley & Sons, Inc., Nova Iorque, 1968. 7. Ohlweiler, O.A., Fundamentos da Anlise Instrumental, L.T.C., Rio de Janeiro, 2a edio, 1972. 8. Jeffrey, G.H. et alii, Vogel - Anlise Qumica Quantitativa, traduo de Horcio Macedo, 5a edio, Guanabara Koogan, Rio de Janeiro, (c.1992). 9. Zaidel, A.N., Ostrovskaya, G.V., Ostrovski, Yu.I., Tcnica y Prctica de Espectroscopia, traduo de Rodriguez, L.G., Editorial Mir, Moscou, 1979. 10.Meehan, E.J., Seitz, W.R., Optical Methods of Analysis. 11.French, A.P., Vibraciones y Ondas, traduo de Peris, J.A. & Pacheco, J. de la R., Editorial Revert, Barcelona, 1982.

49