2 1 TÍTULO Método Biureto para determinação de proteínas.

2 OBJETIVO Determinar quantidade de proteínas de uma amostra utilizando o Método Biureto.

3 RESUMO

Transferiu-se a amostra para um erlenmeyer contendo NaOH 0,5N. Aqueceu-se em banho-maria até solubilização total das proteínas. Resfriou-se, diluiu-se e retirou-se uma alíquota, transferindo para um tubo de centrífuga. Adicionou-se éter etílico anidro. Deixou-se em repouso para separar as fases, retirou-se a fase aquosa inferior. Retirou-se duas alíquotas e transferiu-as para tubos de ensaio. Adicionou-se água destilada em um terceiro tubo, identificando-o como “branco do reagente”. Adicionou-se Reagente de Biureto em cada tubo e deixando reagir por 30 min à Tamb. Utilizou-se as diluições feitas a partir da solução de caseína concentrada, identificando-as por P1, P2, P3 e P4. Utilizou-se o espectrofotômetro para fazer as leituras das soluções padrão.

4 INTRODUÇÃO

4.1 O método de Biureto Princípio O método se baseia na reação do reativo do biureto, que é constituído de uma mistura de cobre e hidróxido de sódio com um complexante que estabiliza o cobre

Aplicações O método de biureto tem sido aplicado para determinar concentração de proteínas totais em diversos meios. Apesar da banda na região de 270 nm aumentar em seis vezes a sensibilidade do método do biureto14.1 Materiais Utilizados • • Espectrofotômetro. em meio alcalino. reage com proteínas formando um complexo quadrado planar com a ligação peptídica. O cobre. normalmente presentes na maioria dos meios analisados. assim como em alguns métodos cinéticos. Mesmo assim. O produto de reação apresenta duas bandas de absorção.3 em solução. quando comparado com outros métodos. Cubetas e suporte. Apesar de ser rápido. sendo eles: soro ou plasma sangüíneo. este método não é muito sensível. utilizar reagentes de baixo custo e não apresentar grande variação da absortividade específica para diferentes proteínas. sendo o tartarato de sódio. substituído por métodos mais sensíveis. em relação a outras metodologias. colocando-o em grande desvantagem. 5 MATERIAIS E MÉTODOS 5. O método de biureto tem sido. como foi destacado por diversos autores. a banda na região de 540 nm é a mais utilizada para fins analíticos. porque diversas substâncias. e por isto tem sido. bem como para a determinação de proteínas totais em saliva e leite. líquido cérebro espinhal. ao longo dos anos. saliva. urina. uma em 270 nm e outra em 540 nm. alimentos. também. absorvem na região de 270 nm causando muita interferência no método. . utilizado em análise por injeção em fluxo. o método de biureto continua sendo recomendado para a determinação da concentração de proteínas totais em plasma sangüíneo pela Associação Americana de Análises Clínicas e por diversos autores. fibrinogênio e tecido animal.

Tubos de ensaio. Erlenmeyer de 50 mL. Balão volumétrico de 50 mL. Banho-maria. Pipetas graduadas de 5 e 1 mL. Piceta.2 Reagentes Utilizados • • • • NaOH 0. 5.3 Esquema da aparelhagem Figura 1 – Espectrofotômetro . Funil. Centrífuga.5N Éter Sulfúrico anidro Reagente de Biureto Soluções padrão de caseína 5.4 • • • • • • • • • Balança analítica.

5 Figura 2 – Cubetas e suporte Figura 3 – Balança analítica Figura 4 – Banho-maria Figura 5 – Pisseta .

6 Figura 6 – Erlenmeyer Figura 7 – Pipeta Figura 8 – Balão volumétrico Figura 9 – Tubos de ensaio .

Dispersaram-se bem os sólidos e aqueceu-se em banho-maria fervente durante 5 minutos.5N.7 Figura 10 . em seguida retirou-se uma alíquota de 6 mL e transferiu-a para um tubo de centrífuga de 40 mL. Preparação da solução para análise .Funil Figura 11 – Centrífuga 5. Resfriou-se em água corrente e diluiu-se para 100 mL. Deixou-o em repouso por alguns instantes. em balão volumétrico. Adicionou-se 6 mL de éter etílico anidro. tampou-o e agitou-o.4 Procedimento Experimental Preparação da amostra Pesou-se aproximadamente 1.0g de amostra. evitando vazamentos. Transferiu-se quantitativamente para um erlenmeyer de 50 mL contendo 20 mL de NaOH 0.

6 RESULTADOS E DISCUSSÃO 6. e identificou-o como o “branco do reagente”. Adicionou-se 4.8 Retirou-se duas alíquotas de 1. misturou-se e deixou-o reagir por 30 minutos à temperatura ambiente.0 mL do reagente de Biureto em cada tubo.1 Resultados Peso da amostra = 1.0032g Tabela 1 – Tabela nutricional do leite me pó Molico . utilizando as diluições feitas a partir da solução de albumina concentrada. Medida da absorbância Mediu-se com o auxílio de um espectrofotômetro (com uma onda de comprimento de 540 nm) a “taxa” de absorbância da amostra em questão. Em um terceiro tubo colocou-se 1. Identificando os tubos conforme sua concentração.0 mL de água destilada.0 mL da amostra e transferiu-a para tubos de ensaio identificados como X1 e X2. Preparação das soluções padrões Procedeu-se conforme o item 2.

141 nm Xmédia = 0.0 5. X1 = 0.141 nm .5 0.5 1.1 0.0 H20 destil.Medida da Absorbância.0 3. (mL) 10 9.0 5.142 nm X2 = 0.0 8. Solução padrão de albumina (mL) 0 0.102 0.9 Tabela 2 .0 Concentração da proteína 0 0.7 Absorbância (nm) 0 0.199 0.045 0.0 2.077 0.268 Absorbância da amostra X1 e X2.0 3.0 7.2 0.3 0.

.0032 .03/1.03 g % proteína = 0.10 Gráfico 1 – Curva padrão Cálculos Para x = 0.2 Discussão Os resultados obtidos foram satisfatórios quando comparados ao valor teórico.0032g. 100 % proteína = 3 % 6. sendo para uma porção de 20g 9% de proteína e o valor obtido experimentalmente foi de 3% para 1.3 0.3 mg – 1 mL x – 100 mL x = 30 mg de proteína = 0.

.pdf> Acesso 01 junho 2011.scielo.0032g. A.11 7 CONCLUSÃO Conclui-se então que o teor de proteínas do leite em pó é em torno de 3% para a amostra de 1. Disponível em: <http://www.br/pdf/qn/v21n6/2914.M. 8 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ZAIA.D. Determinação de proteínas totais via espectrofometria: vantagens e desvantagens dos métodos existentes.

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