2 1 TÍTULO Método Biureto para determinação de proteínas.

2 OBJETIVO Determinar quantidade de proteínas de uma amostra utilizando o Método Biureto.

3 RESUMO

Transferiu-se a amostra para um erlenmeyer contendo NaOH 0,5N. Aqueceu-se em banho-maria até solubilização total das proteínas. Resfriou-se, diluiu-se e retirou-se uma alíquota, transferindo para um tubo de centrífuga. Adicionou-se éter etílico anidro. Deixou-se em repouso para separar as fases, retirou-se a fase aquosa inferior. Retirou-se duas alíquotas e transferiu-as para tubos de ensaio. Adicionou-se água destilada em um terceiro tubo, identificando-o como “branco do reagente”. Adicionou-se Reagente de Biureto em cada tubo e deixando reagir por 30 min à Tamb. Utilizou-se as diluições feitas a partir da solução de caseína concentrada, identificando-as por P1, P2, P3 e P4. Utilizou-se o espectrofotômetro para fazer as leituras das soluções padrão.

4 INTRODUÇÃO

4.1 O método de Biureto Princípio O método se baseia na reação do reativo do biureto, que é constituído de uma mistura de cobre e hidróxido de sódio com um complexante que estabiliza o cobre

o método de biureto continua sendo recomendado para a determinação da concentração de proteínas totais em plasma sangüíneo pela Associação Americana de Análises Clínicas e por diversos autores. Aplicações O método de biureto tem sido aplicado para determinar concentração de proteínas totais em diversos meios. Apesar da banda na região de 270 nm aumentar em seis vezes a sensibilidade do método do biureto14. alimentos. normalmente presentes na maioria dos meios analisados. ao longo dos anos. líquido cérebro espinhal. também. colocando-o em grande desvantagem. Mesmo assim. sendo eles: soro ou plasma sangüíneo. bem como para a determinação de proteínas totais em saliva e leite.1 Materiais Utilizados • • Espectrofotômetro. O cobre. uma em 270 nm e outra em 540 nm. . em relação a outras metodologias. absorvem na região de 270 nm causando muita interferência no método. O produto de reação apresenta duas bandas de absorção. 5 MATERIAIS E MÉTODOS 5. reage com proteínas formando um complexo quadrado planar com a ligação peptídica. fibrinogênio e tecido animal. substituído por métodos mais sensíveis. utilizar reagentes de baixo custo e não apresentar grande variação da absortividade específica para diferentes proteínas. Apesar de ser rápido. em meio alcalino. urina. Cubetas e suporte. O método de biureto tem sido. este método não é muito sensível. e por isto tem sido. utilizado em análise por injeção em fluxo. sendo o tartarato de sódio. saliva. porque diversas substâncias. a banda na região de 540 nm é a mais utilizada para fins analíticos. assim como em alguns métodos cinéticos. como foi destacado por diversos autores. quando comparado com outros métodos.3 em solução.

Centrífuga. 5.5N Éter Sulfúrico anidro Reagente de Biureto Soluções padrão de caseína 5. Banho-maria. Tubos de ensaio. Funil.3 Esquema da aparelhagem Figura 1 – Espectrofotômetro .4 • • • • • • • • • Balança analítica. Pipetas graduadas de 5 e 1 mL. Balão volumétrico de 50 mL.2 Reagentes Utilizados • • • • NaOH 0. Piceta. Erlenmeyer de 50 mL.

5 Figura 2 – Cubetas e suporte Figura 3 – Balança analítica Figura 4 – Banho-maria Figura 5 – Pisseta .

6 Figura 6 – Erlenmeyer Figura 7 – Pipeta Figura 8 – Balão volumétrico Figura 9 – Tubos de ensaio .

em balão volumétrico.0g de amostra.4 Procedimento Experimental Preparação da amostra Pesou-se aproximadamente 1. em seguida retirou-se uma alíquota de 6 mL e transferiu-a para um tubo de centrífuga de 40 mL. Resfriou-se em água corrente e diluiu-se para 100 mL.Funil Figura 11 – Centrífuga 5.7 Figura 10 . Preparação da solução para análise . Deixou-o em repouso por alguns instantes. evitando vazamentos. Transferiu-se quantitativamente para um erlenmeyer de 50 mL contendo 20 mL de NaOH 0. Adicionou-se 6 mL de éter etílico anidro. tampou-o e agitou-o.5N. Dispersaram-se bem os sólidos e aqueceu-se em banho-maria fervente durante 5 minutos.

utilizando as diluições feitas a partir da solução de albumina concentrada. Em um terceiro tubo colocou-se 1. Preparação das soluções padrões Procedeu-se conforme o item 2. misturou-se e deixou-o reagir por 30 minutos à temperatura ambiente. Medida da absorbância Mediu-se com o auxílio de um espectrofotômetro (com uma onda de comprimento de 540 nm) a “taxa” de absorbância da amostra em questão.0032g Tabela 1 – Tabela nutricional do leite me pó Molico . 6 RESULTADOS E DISCUSSÃO 6. e identificou-o como o “branco do reagente”.0 mL do reagente de Biureto em cada tubo.1 Resultados Peso da amostra = 1. Identificando os tubos conforme sua concentração.0 mL da amostra e transferiu-a para tubos de ensaio identificados como X1 e X2. Adicionou-se 4.0 mL de água destilada.8 Retirou-se duas alíquotas de 1.

0 7.0 Concentração da proteína 0 0.141 nm Xmédia = 0.7 Absorbância (nm) 0 0.0 3.0 8. (mL) 10 9. X1 = 0.077 0.141 nm .Medida da Absorbância.0 5.142 nm X2 = 0.9 Tabela 2 .0 2.3 0.0 3.045 0.268 Absorbância da amostra X1 e X2.1 0.2 0.0 H20 destil.199 0.0 5.5 0.5 1.102 0. Solução padrão de albumina (mL) 0 0.

10 Gráfico 1 – Curva padrão Cálculos Para x = 0.3 0. 100 % proteína = 3 % 6. sendo para uma porção de 20g 9% de proteína e o valor obtido experimentalmente foi de 3% para 1.2 Discussão Os resultados obtidos foram satisfatórios quando comparados ao valor teórico.0032g.0032 .03/1. .3 mg – 1 mL x – 100 mL x = 30 mg de proteína = 0.03 g % proteína = 0.

br/pdf/qn/v21n6/2914.scielo.11 7 CONCLUSÃO Conclui-se então que o teor de proteínas do leite em pó é em torno de 3% para a amostra de 1. A.0032g. Determinação de proteínas totais via espectrofometria: vantagens e desvantagens dos métodos existentes. Disponível em: <http://www.M.pdf> Acesso 01 junho 2011.D. . 8 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ZAIA.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful