2 1 TÍTULO Método Biureto para determinação de proteínas.

2 OBJETIVO Determinar quantidade de proteínas de uma amostra utilizando o Método Biureto.

3 RESUMO

Transferiu-se a amostra para um erlenmeyer contendo NaOH 0,5N. Aqueceu-se em banho-maria até solubilização total das proteínas. Resfriou-se, diluiu-se e retirou-se uma alíquota, transferindo para um tubo de centrífuga. Adicionou-se éter etílico anidro. Deixou-se em repouso para separar as fases, retirou-se a fase aquosa inferior. Retirou-se duas alíquotas e transferiu-as para tubos de ensaio. Adicionou-se água destilada em um terceiro tubo, identificando-o como “branco do reagente”. Adicionou-se Reagente de Biureto em cada tubo e deixando reagir por 30 min à Tamb. Utilizou-se as diluições feitas a partir da solução de caseína concentrada, identificando-as por P1, P2, P3 e P4. Utilizou-se o espectrofotômetro para fazer as leituras das soluções padrão.

4 INTRODUÇÃO

4.1 O método de Biureto Princípio O método se baseia na reação do reativo do biureto, que é constituído de uma mistura de cobre e hidróxido de sódio com um complexante que estabiliza o cobre

também. e por isto tem sido. alimentos. Aplicações O método de biureto tem sido aplicado para determinar concentração de proteínas totais em diversos meios. uma em 270 nm e outra em 540 nm. sendo o tartarato de sódio. saliva. colocando-o em grande desvantagem. Cubetas e suporte. este método não é muito sensível. assim como em alguns métodos cinéticos. fibrinogênio e tecido animal. urina. O cobre. utilizar reagentes de baixo custo e não apresentar grande variação da absortividade específica para diferentes proteínas. o método de biureto continua sendo recomendado para a determinação da concentração de proteínas totais em plasma sangüíneo pela Associação Americana de Análises Clínicas e por diversos autores. . normalmente presentes na maioria dos meios analisados. Mesmo assim. Apesar de ser rápido. como foi destacado por diversos autores. utilizado em análise por injeção em fluxo. sendo eles: soro ou plasma sangüíneo. substituído por métodos mais sensíveis. em meio alcalino. Apesar da banda na região de 270 nm aumentar em seis vezes a sensibilidade do método do biureto14. ao longo dos anos. O método de biureto tem sido. 5 MATERIAIS E MÉTODOS 5. reage com proteínas formando um complexo quadrado planar com a ligação peptídica. líquido cérebro espinhal. a banda na região de 540 nm é a mais utilizada para fins analíticos. absorvem na região de 270 nm causando muita interferência no método. O produto de reação apresenta duas bandas de absorção. porque diversas substâncias.1 Materiais Utilizados • • Espectrofotômetro. bem como para a determinação de proteínas totais em saliva e leite. em relação a outras metodologias.3 em solução. quando comparado com outros métodos.

3 Esquema da aparelhagem Figura 1 – Espectrofotômetro . 5.2 Reagentes Utilizados • • • • NaOH 0. Erlenmeyer de 50 mL. Tubos de ensaio. Balão volumétrico de 50 mL. Pipetas graduadas de 5 e 1 mL. Piceta. Banho-maria. Centrífuga. Funil.5N Éter Sulfúrico anidro Reagente de Biureto Soluções padrão de caseína 5.4 • • • • • • • • • Balança analítica.

5 Figura 2 – Cubetas e suporte Figura 3 – Balança analítica Figura 4 – Banho-maria Figura 5 – Pisseta .

6 Figura 6 – Erlenmeyer Figura 7 – Pipeta Figura 8 – Balão volumétrico Figura 9 – Tubos de ensaio .

4 Procedimento Experimental Preparação da amostra Pesou-se aproximadamente 1. em balão volumétrico.5N. Resfriou-se em água corrente e diluiu-se para 100 mL.0g de amostra. Deixou-o em repouso por alguns instantes.Funil Figura 11 – Centrífuga 5. Preparação da solução para análise . Adicionou-se 6 mL de éter etílico anidro. evitando vazamentos.7 Figura 10 . em seguida retirou-se uma alíquota de 6 mL e transferiu-a para um tubo de centrífuga de 40 mL. Transferiu-se quantitativamente para um erlenmeyer de 50 mL contendo 20 mL de NaOH 0. tampou-o e agitou-o. Dispersaram-se bem os sólidos e aqueceu-se em banho-maria fervente durante 5 minutos.

0 mL da amostra e transferiu-a para tubos de ensaio identificados como X1 e X2. misturou-se e deixou-o reagir por 30 minutos à temperatura ambiente. Adicionou-se 4. e identificou-o como o “branco do reagente”. Em um terceiro tubo colocou-se 1.0032g Tabela 1 – Tabela nutricional do leite me pó Molico . Medida da absorbância Mediu-se com o auxílio de um espectrofotômetro (com uma onda de comprimento de 540 nm) a “taxa” de absorbância da amostra em questão.0 mL de água destilada. Preparação das soluções padrões Procedeu-se conforme o item 2. Identificando os tubos conforme sua concentração.0 mL do reagente de Biureto em cada tubo.8 Retirou-se duas alíquotas de 1. 6 RESULTADOS E DISCUSSÃO 6. utilizando as diluições feitas a partir da solução de albumina concentrada.1 Resultados Peso da amostra = 1.

0 3.0 7.199 0.3 0.Medida da Absorbância.141 nm Xmédia = 0.077 0. Solução padrão de albumina (mL) 0 0.9 Tabela 2 .7 Absorbância (nm) 0 0.0 3. (mL) 10 9.0 8.102 0.0 5.5 0.268 Absorbância da amostra X1 e X2.0 H20 destil.141 nm .0 Concentração da proteína 0 0.142 nm X2 = 0.0 5. X1 = 0.0 2.045 0.5 1.2 0.1 0.

10 Gráfico 1 – Curva padrão Cálculos Para x = 0.2 Discussão Os resultados obtidos foram satisfatórios quando comparados ao valor teórico.3 mg – 1 mL x – 100 mL x = 30 mg de proteína = 0. 100 % proteína = 3 % 6.03/1. sendo para uma porção de 20g 9% de proteína e o valor obtido experimentalmente foi de 3% para 1.0032 .0032g.03 g % proteína = 0.3 0. .

D.scielo. Disponível em: <http://www.0032g. Determinação de proteínas totais via espectrofometria: vantagens e desvantagens dos métodos existentes. 8 REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS ZAIA.br/pdf/qn/v21n6/2914.pdf> Acesso 01 junho 2011. .M. A.11 7 CONCLUSÃO Conclui-se então que o teor de proteínas do leite em pó é em torno de 3% para a amostra de 1.

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