INSTITUTO TECNOLOGICO DEL VALLE DE OAXACA

BIOLOGIA CELULAR

4.4 METODOS CITOQUIMICOS

LICENCIATURA EN BIOLOGIA

CUARTO SEMESTRE GRUPO: A

ELABORO: AMAYA MARTINEZ PARLA DOLORES

4.4 METODOS CITOQUIMICOS

El objetivo de estos mtodos es la localizacin e identificacin de las sustancias qumicas constituyentes de las clulas, para lo cual hay dos lneas de investigacin.

1.-obtencin de fracciones subcelulares y su posterir anlisis bioqumico,

2.-determinacin de diferentes compuestos qumicos en el interior de la clula.

Que es la citoquimica
La citoqumica estudia la composicin qumica de la clula y permite detectar la localizacin topogrfica de algunos principios inmediatos, enzimas, metales pesados y otras sustancias. Se considera como un nexo de unin entre la morfologa y la bioqumica.

En una reaccin bioqumica hay tres pasos fundamentales:

1.- Fijacin: para preservar las estructuras y reactividad funcional celulares evitando fenmenos nocivos para las mismas e impidiendo tambin la difusin de componentes bioqumicos entre los diferentes compartimentos celulares as como al medio extracelular. Existen diversos fijadores: metanol, etanol, acetona, glutaraldehdo, formaldehdo, etc. 2.- Incubacin en el medio de reaccin: como consecuencia se liberar unos productos que bien por si mismos, o al combinarse con otra sustancia presente, dan lugar a un precipitado visible en el lugar de la reaccin. 3.- Contraste: para resaltar en lo posible el producto de reaccin y permitir una ptima visualizacin del ncleo y del citoplasma. Las reacciones deben tener 3 caractersticas: sensibilidad, especificidad y reproductibilidad.

Las muestras a estudiar son extensiones de sangre perifrica y de mdula sea, improntas de tejidos y clulas impactadas mediante citocentrifugacin procedentes de diversos lquidos biolgicos. Las muestras deben ser recientes y a poder ser sin anticoagulantes. Para la correcta valoracin citoqumica hay que intercalar controles positivos y negativos.

LA CROMATOGRAFIA

permite la separacin de biomolculas basndose en la diferente velocidad de desplazamiento de los componentes de una mezcla a travs de un medio determinado. La velocidad de desplazamiento depender de las caractersticas de las biomolculas. Dentro de esta tcnica existen distintas modalidades.

CROMATOGARFIA EN PAPEL

se aplica una mezcla de biomolculas sobre una hoja de papel adsorbente. Uno de los extremos se impregna con un disolvente que avanzar por capilaridad a travs del papel. Aquellas molculas que sean solubles en el disolvente sern arrastradas y avanzarn ms rpido que las que no lo sean obtenindose as una separacin en funcin de la solubilidad.

CROMATOGRAFIA DE INTERCAMBIO IONICO

la muestra se pasa por una columna con una resina cargada (positiva o negativamente) de forma que las molculas de la muestra interaccionarn con la resina en mayor o menor grado en funcin de su carga y, por tanto, avanzarn a distinta velocidad. Al final podrn recogerse las distintas fracciones separadas en funcin de su carga.

CROMATOGRAFIA DE FILTRACION

se pasa la muestra por una columna de resina porosa sin cargas. Las molculas pequeas avanzarn ms despacio pues tienden a entrar en los poros de la resina, mientras las grandes irn ms rpido. La separacin se hace, por tanto, en

funcin del tamao molecular.

ELECTROFORESIS

es una tcnica derivada de la cromatografa que lo que hace es aplicar un campo elctrico a una muestra colocada en la base de una lmina del gel agarosa. La electricidad forzar el desplazamiento de las molculas en funcin de su carga, es decir, se movern al polo positivo o al negativo segn cual sea su carga neta y lo harn a una velocidad que depender de su masa y del nmero de cargas elctricas.

METODOS DE FRACCIONAMIENTO CELULAR

En los mtodos de fraccionamiento celular lo que se hace es destruir la clula por procedimientos mecnicos o qumicos ( trituracin, vibracin ultrasnica, choque osmtico...) y luego se separan los distintos componentes que constituyen la clula.
El mtodo ms usado es la ultracentrifugacin diferencial, proceso durante el cual se somete a las clulas destruidas a una serie de centrifugaciones, con fuerzas centrfugas progresivamente mayores, de forma que las partculas se van separando en funcin de su tamao; en cada fase se obtiene un precipitado que se recoge y un sobrenadante que se vuelve a centrifugar. Por este mtodo separamos los distintos componentes celulares que podemos estudiar de forma aislada . La ltima fraccin que se obtiene corresponder a una fase soluble en la que tendremos todo tipo de molculas. Para estudiar esta fase soluble, es decir, para separar distintas biomolculas podemos recurrir a otras tcnicas como la cromatografa y la electroforesis.

FUENTES DE INFORMACIN

http://web.educastur.princast.es/cpr/nalon_caudal/downloads /losmetodosdeestudiodelacelulacuaderno1.doc