Trabajo prctico N 2 Fisiologa de la contraccin muscular

Contenidos
Tipos musculares: liso y estriado (esqueltico y cardaco). Composicin y funciones generales de cada uno de los mismos. Protenas regulatorias y contrctiles. Automatismo. Placa motora. Potenciales de accin de los distintos tipos musculares. Definicin de umbral, adicin latente, ttanos, contraccin isomtrica, isotnica y mixta.

Objetivos
El alumno deber ser capaz de: Comprender las diferencias que existen entre los distintos tipos musculares. Describir la estructura y funcin de los distintos tipos de msculo. Diferenciar, en tiempo y en espacio, el acoplamiento excitocontrctil de cada tipo muscular. Identificar el potencial de accin que corresponde a cada tipo muscular.

Gua de estudio
1- Describa la composicin estructural de cada tipo muscular. Analice las funciones de las protenas reguladoras de la contraccin de cada tipo muscular. 2- Todos los tipos musculares comparten un nico potencial de accin? Comente las diferencias encontradas entre los distintos msculos describiendo los canales involucrados en cada etapa y los perodos refractarios absoluto y relativo. 3- Realice un anlisis secuencial del acoplamiento excitocontrctil para el msculo liso y estriado. 4- Analice el origen del calcio que participa en el proceso de contraccin muscular en el msculo liso, esqueltico y cardaco. 5- Explique cmo se regula la concentracin de calcio citoplasmtico durante la contraccin y relajacin para el msculo liso y estriado. 6- Explique los siguientes conceptos: umbral de estimulacin, adicin latente, ttanos, fatiga, contraccin isomtrica e isotnica. 7- Grafique y analice las siguientes curvas: velocidad vs fuerza, potencia vs fuerza. Cul es el significado de cada uno de los trminos empleados?

Bibliografa
Cingolani-Houssay y colaboradores, Fisiologa humana 7 edicin. Ed. El Ateneo 2000. Gannong, Fisiologa Mdica 16 edicin. Editorial Manual Moderno Guyton, Fisiologa Mdica 11 edicin. Elsevier Espaa Berne-Levy, Fisiologa Editorial Mdica Panamericana 1999 Tresguerres, Fisiologa Humana. 3 edicin. Editorial Interamericana 2005

Actividades para el seminario

1- Indique la secuencia de eventos que se ponen en juego en un proceso de contraccin muscular para el msculo estriado (esqueltico y cardaco) y liso. Cmo se inicia la contraccin en cada tipo de msculo? Cul es el estmulo? a) El complejo Ca2+-calmodulina activa a la cinasa de la cadena liviana de la miosina (MLC20 protena reguladora). b) La despolarizacin debida a los canales de Na+ activa a los canales de Ca2+ c) Generacin del potencial de placa terminal. d) Generacin del potencial de accin. e) Deslizamiento de los filamentos delgados sobre los gruesos, utilizando la energa proveniente de la hidrlisis del ATP. f) Diseminacin de la despolarizacin a travs de los tbulos T. g) Unin del Ca2+ a la calmodulina. h) Ingreso de Ca2+ del medio extracelular. i) Aumento de la con concentracin de Ca2+ intracelular. j) Unin del Ca2+ a la troponina C. k) Cambio conformacional del complejo troponina - tropomiosina. l) Interaccin actina - miosina. ll) El ingreso de Ca2+ extracelular genera la liberacin de Ca2+ del retculo sarcoplsmico m) Liberacin del Ca2+ del retculo sarcoplsmico. 2- El grfico que figura a continuacin corresponde a la fuerza desarrollada por el msculo cardaco frente a distintas concentraciones de Ca2+ extracelular. Cmo se modificara la fuerza desarrollada por el msculo esqueltico si se lo expone a las mismas variaciones de concentracin de calcio del medio extracelular?

3- Realice y analice los grficos de fuerza/tensin en funcin de la longitud del msculo. Defina tensin activa y pasiva analizando los parmetros de los que depende cada una de ellas. 4- Analice la curva velocidad de acortamiento del msculo esqueltico versus carga. Qu informacin se obtiene a partir de: a) la interseccin de la curva en el eje Y? b) la interseccin de la curva en el eje X?

5- Analice los distintos tipos de contracciones y explique cmo se modifican la fuerza y la longitud del msculo en cada una de ellas. Cite ejemplos de cada una.

Actividades para el trabajo prctico

1- Msculo extrado en glicerina Se utiliza el psoas de conejo, donde se separan con gran facilidad fibras delgadas de varios centmetros de longitud. Estas fibras se colocan en glicerina al 50% a temperaturas inferiores a 0 C. Explique por qu se utiliza sta combinacin de medio y temperatura. Los alumnos trabajarn con un segmento de fibras glicerinadas de aproximadamente 2 cm, el cual se colocar durante 30 minutos en un vidrio de reloj conteniendo glicerina al 25%. Seguidamente se lavar el preparado varias veces con medio salino (Ringer sapo) y se separarn las fibras en dos haces delgados (grosor de un pelo). Uno de ellos se dejar 30 minutos en un vidrio de reloj con medio normal (A) y el otro con un medio que contenga una sal de mercurio (Salyrgan 5mM) (B). Luego, sobre ambos preparados, se agregar una gota de solucin de ATP 0.25 %. Qu efectos observa en A y en B? Explique el mecanismo responsable de los efectos observados.

2- Miografa de msculo esqueltico aislado: Consistir en la inscripcin de la actividad contrctil sobre un quimgrafo. Este es esencialmente un tambor giratorio movido por un mecanismo de relojera y cubierto por un papel donde se realiza la inscripcin del trabajo muscular. Un msculo adecuado es el gastrocnemio de sapo, que se obtiene descubriendo el tren posterior de la piel. Luego se separa el extremo inferior del msculo cortando el tendn nacarado que lo une al taln, y separando su extremo distal con sus inserciones, tomndolo con la mitad posterior del fmur. El msculo aislado se coloca en un migrafo de Harvard, aparato consistente en un trpode que posee una mordaza ajustable donde se sujeta el segmento del fmur, y una palanca inscriptora con un gancho para unirla al tendn. Estos elementos de sujecin actan adems como electrodos de estimulacin. Durante la realizacin del experimento el msculo se acortar al ser estimulado, desarrollando para eso una tensin igual al peso de la palanca inscriptora. Qu tipo de contraccin observa? El peso de la palanca se regula agregndole o quitndole pesas. En cada uno de los puntos a desarrollar analice y complete el siguiente grfico en funcin del tiempo:
Intensidad del estmulo (mAmp) Potencial de membrana (mV) Fuerza de contraccin o grado de acortamiento

a) Una vez montado el preparado se comienza a estimular con impulsos de intensidad creciente, hasta determinar el mnimo potencial capaz de obtener una respuesta o umbral de estimulacin. Luego si se contina estimulando con estmulos progresivamente mayores (supraliminales) se podr correlacionar intensidad con respuesta. Cmo se denomina el fenmeno observado? b) Una vez determinado el umbral se observar el efecto de aplicar estmulos subliminales (inferiores al umbral de estimulacin) separados por un intervalo muy breve. Cmo se denomina el fenmeno observado? c) Agregue pesas progresivamente, hasta observar que el msculo, a pesar de ser estimulado, no es capaz de levantar el peso que se le ofrece. Cuando aumenta el peso que debe movilizar el msculo, manteniendo constante la longitud inicial, disminuyen correlativamente la velocidad y la longitud del acortamiento. Qu tipo de contraccin observa? En este caso, la tensin desarrollada ser mxima, hecho que surge claramente del anlisis de las curvas de fuerza-velocidad. d) Estimule al msculo con estmulos supraliminales de frecuencia suficientemente alta, se obtiene una contraccin sostenida y de magnitud superior a la de una contraccin aislada. Cmo se denomina el fenmeno observado? Cmo explica dicho fenmeno? e) Durante el transcurso de un ttanos o durante la estimulacin prolongada con frecuencias ms bajas, se observar una progresiva disminucin de la contraccin, menores velocidades de contraccin y de relajacin y aumento de la tensin en la relajacin (contractura). Explique a qu se debe y cmo se denomina el fenmeno observado.

3- Cardiograma de suspensin: Se realiza con un sapo desmedulado y descerebrado. Para ello se introduce una varilla afilada por la articulacin occipitoatloidea y una vez alcanzado el canal medular, se coloca el estilete en forma horizontal y se lo introduce en direccin caudal y luego ceflica. As se destruye totalmente el sistema nervioso, quedando el animal insensible y paralizado. Para descubrir el corazn se abre el trax en su lnea media, se secciona la cintura escapular y se corta con precaucin el pericardio. Para el registro en el quimgrafo, se toma por su pex con una pinza especial (serrefine) que se conecta a la palanca inscriptora. a) Con una velocidad rpida se registrar la contraccin de las distintas partes del corazn, el seno venoso, las aurculas y el ventrculo que laten en esa secuencia. Aplicando sobre las clulas marcapaso calor o fro, adrenalina y acetilcolina se apreciarn cambios de la actividad cronotrpica e inotrpica del corazn. Explique los mecanismos involucrados en los efectos observados. b) Se aplican estmulos elctricos durante la distole. Explique que tipo de contracciones observa comparndolas con las del marcapaso. Qu respuesta observa si el estmulo se aplica durante la sstole? Explique a qu debe lo observado. c) Luego se colocar una ligadura entre el seno venoso y las aurculas, provocndose una detencin en distole de las aurculas y del ventrculo, causada por haberse interrumpido la

conduccin del impulso (primera ligadura de Stannius). En estas condiciones el ventrculo slo se contraer bajo la aplicacin de estmulos elctricos. De manera similar a la practicada con el msculo esqueltico se determinar el umbral. d) Luego se aplicarn estmulos supraliminales de amplitud creciente. Explique a qu se debe la respuesta observada. Es posible tetanizar el msculo cardaco? Demustrelo experimentalmente.

4- Aurcula aislada de rata: Este preparado se utilizar para analizar la influencia de los electrolitos sobre la funcin muscular. El tejido se suspende en un medio salino mantenido a pH 7.4 con buffer de CO3H-/CO2, burbujeado permanente con O2 95 % y CO2 5 %, conteniendo glucosa como sustrato exgeno. Se registra la tensin isomtrica con un transductor fotoelctrico y un polgrafo. Despus que el preparado se ha estabilizado en medio salino normal, se observarn los efectos de incrementar la concentracin de Ca2+, de colocar al tejido en medio sin Ca2+, o en un medio pobre en Na+. Explique en cada caso los cambios observados en el registro de la actividad auricular.

5- Estudio del corazn aislado de rata: Se anestesia una rata por va inhalatoria en una campana saturada con ter y luego se procede a la apertura de la caja torcica. Se descubre el corazn y rpidamente se coloca en un medio fro conteniendo buffer Krebs pH 7.4, gaseado con una mezcla de O2 95 % y CO2 5 %, conteniendo glucosa como sustrato exgeno en una concentracin 10 mM. Se cnula el mismo por la arteria aorta y se perfunde en un aparato Hugo Sacks mediante un sistema de perfusin retrgrada (perfusin Langendorff), con una presin de 70 mmHg. Teniendo el corazn preparado para la perfusin se analizarn los siguientes parmetros funcionales: presin desarrollada, frecuencia cardaca, velocidad de contraccin y de relajacin. Para tal efecto se introducir en el ventrculo izquierdo un baln, que al deformarse transmite dicha informacin a un transductor de presin. De esta manera se contar con los valores y registros de referencia, para posteriormente evaluar los cambios que se generan en el mismo por el agregado de diferentes drogas (noradrenalina, acetilcolina, fenilefrina, etc.). Describa y explique los cambios observados en los diferentes parmetros estudiados luego de cada tratamiento.