TESTE DE SENSIBILIDADE A TEMPERATURA

1. Crescer as leveduras desejadas em 10mL de meio apropriado at atingir a concentrao de 1 a 2x10 cel/mL (A6000,6 a 0,9)
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2. Centrifugar (2500rpm por 7min.) e ressuspender as culturas numa concentrao de 2,5x10 clulas/mL 3. Transferir 100L da suspenso de clulas para o primeiro poo da microplaca 4. Colocar 90L de glicerol 50% nos 5 poos seguintes 5. Fazer 5 diluies: pipetar 10L da cultura do primeiro poo, colocar no segundo poo, homogeneizar bem e repetir o procedimento para os prximos poos. 6. Com um micropipetador multicanal, aplicar 4L de cada diluio nos meios a serem testados e incubar por 1 a 3 dias na(s) temperatura(s) adequada(s).
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25 C 100L cultura 90L glicerol

10L 36 C desprezar 10L

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Protocolos Sandro R. Valentini