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UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA DEPARTAMENTO DE Eng. Qumica e Eng.

de Alimentos EQA5316 Engenharia Bioqumica PROFESSOR: Agenor Furigo Junior

Departamento de Engenharia Qumica e Engenharia de Alimentos

Biorremediao de Solos

Graduandos: Eduardo Augusto de Campos Vaz Eduardo Luiz Tavares Gonalves Fabio Rafael Gauer Gustavo Campos Tombesi

FLORIANPOLIS, OUTUBRO DE 2008.

SUMRIO

1. Introduo................................................................................... 2. Tratamentos ............................................................................... 3. Biorremediao........................................................................... 4. Hidrocarbonetos como fonte de contaminao da subsuperfcie:

3 4 5 6 7 12 14 15 18 21 24

Origens e conseqncias....................................
5. Dinmica dos hidrocarbonetos em subsolo............................... 6. Tcnicas de remediao aplicadas a reas contaminadas....... 7. Ao dos microrganismos........................................................... 8. Processos de biorremediao in situ...................................... 9. Microrganismos degradadores de hidrocarbonetos................. 10.Estudo de Caso............................................................................. 11.Referncias..................................................................................

1- Introduo
A forte industrializao e o desenvolvimento econmico experimentados pelo Brasil principalmente a partir da dcada de 70 exigiram grande estruturao de toda a cadeia produtiva dos derivados do petrleo, desde novas descobertas de campos de petrleo passando pela formao de vrios plos petroqumicos e o aumento das redes de distribuio. Diante de toda essa estrutura logstica da produo e comercializao do petrleo e de seus derivados, as preocupaes relacionadas ao potencial de contaminao de solos e guas subterrneas, principalmente por vazamentos de tanques de armazenamento subterrneos em postos de combustveis, vm crescendo. Devido ao crescente nmero de descobertas de casos de vazamentos em postos de combustveis, as contaminaes de solos por hidrocarbonetos derivados de petrleo tm sido alvo de inmeras pesquisas. Assim constituem um desafio para os profissionais que atuam no saneamento ambiental, em funo da complexidade dos fenmenos geoqumicos e bioqumicos que so catalisados a partir de sua insero no subsolo. Alm disso, tem sido motivo de preocupao e repercusso na sociedade, pois essas contaminaes com substncias txicas podem atingir as guas subterrneas, que esto sendo ou sero usadas como fonte de abastecimento para consumo humano. Quando o combustvel atinge o solo, seus componentes separam-se em trs fases: dissolvida, lquida e gasosa. Portanto, uma vez estabelecida a contaminao, esta poder atuar em trs nveis diferentes: solo, gua subterrnea e atmosfera. Percebe-se ento que a tarefa de avaliao da extenso, dinmica, concentrao das contaminaes, anlise de riscos e possveis estratgias de remediao tornam-se complexa. No caso de combustveis como a gasolina e o leo diesel, os hidrocarbonetos monoaromticos benzeno, tolueno, etilbenzeno e xilenos, chamados coletivamente como compostos BTEX, so os constituintes que tm maior solubilidade em gua e, portanto, so os contaminantes com maior potencial de poluir o lenol fretico. A interao dos hidrocarbonetos com o fluxo fretico, com os argilominerais e com a matria orgnica presentes no solo complexa do ponto de

vista fsico e qumico. Mais ainda, sendo produtos orgnicos de possvel converso, as aes biolgicas que se deflagram no terreno a partir da sua presena so significativas e alteram o comportamento dos contaminantes ao longo do tempo. Aos profissionais que se apresentam para investigar uma contaminao por hidrocarbonetos com essas caractersticas e a partir dessas anlises proporem e executarem uma estratgia de remediao eficaz impe-se um desafio que transcende a especialidade do geotcnico ou do gelogo. O problema, tratado na sua escala devida, tipicamente multidisciplinar e exige o domnio dos processos qumicos e biolgicos que esto inerentemente associados. Vrios mtodos podem ser empregados para remover hidrocarbonetos do solo e gua subterrnea tais como extrao de vapor do solo, bombeamento e biorremediao. No h uma regra geral que determine o melhor tratamento de uma rea contaminada especfica. Cada caso deve ser analisado individualmente, avaliando suas particularidades.

2- Tratamentos a) Fsicos
Tratamentos fsicos separam os contaminantes do solo sem destru-los ou modificlos quimicamente, mas apresentam muitas limitaes, destacando-se o custo alto. Quando os hidrocarbonetos percolam o solo, grande quantidade permanece sorvida na matriz (aproximadamente 50%) com isso diminuindo a eficincia de remoo.

b)

Biolgicos
O benefcio desses processos a mineralizao do poluente, isto , a

transformao em gs carbnico, gua e biomassa. Recentemente, o interesse em utilizar a estratgia da atenuao natural monitorada (que inclui alm da biodegradao outros processos como adveco, diluio, disperso, soro e volatilizao) como tcnica de tratamento de guas subterrneas contaminadas com hidrocarbonetos crescente em oposio a tcnicas ativas de engenharia como a tecnologia de bombeamento e tratamento (pump-and-treat).

3- Biorremediao
Biorremediao pode ser considerada como uma nova tecnologia para tratar locais contaminados utilizando agentes biolgicos capazes de modificar ou decompor poluentes alvos. Estratgias de biorremediao incluem: a utilizao de microrganismos autctones, ou seja, do prprio local, sem qualquer interferncia de tecnologias ativas (biorremediao intrnseca ou natural); a adio de agentes estimulantes como nutrientes, oxignio e biossurfactantes (bioestimulao); e a inoculao de consrcios microbianos enriquecidos (bioaumento). A biorremediao natural mostra-se interessante devido principalmente aos baixos custos, por ser uma tcnica com mnima interveno. A verificao da ocorrncia da biorremediao natural exige a caracterizao da geologia, hidrologia e ecologia microbiana locais, e tambm o conhecimento de processos biogeoqumicos. Para a biodegradao dos hidrocarbonetos essencial uma reao redox, em que o hidrocarboneto oxidado (doador de eltron) e um aceptor de eltron reduzido. Existem diferentes compostos que podem agir como aceptores de eltrons, entre eles o oxignio (O2), o nitrato (NO3-), os xidos de Fe (III), o sulfato (SO4-2). Alm dos aceptores de eltrons, outras variveis podem ser relacionadas a processos biolgicos, como o pH e o potencial redox. Como limitaes da biorremediao natural so apontadas principalmente o longo tempo necessrio e o risco da pluma de contaminao

no ser atenuada antes de atingir pontos de captao para abastecimento de gua. A eficincia da biorremediao est associada a uma populao microbiana adaptada ao consumo dos contaminantes e como esta pode ser enriquecida e mantida no ambiente. a inoculao de bactrias com habilidade em biodegradar hidrocarbonetos pode reduzir o tempo de tratamento, contudo muitos estudos mostram que esta tcnica ineficiente.

4- Hidrocarbonetos

como

fonte

de

contaminao

da

subsuperfcie: Origens e conseqncias


As preocupaes relacionadas ao potencial de contaminao de solos e guas por vazamento/derramamento de combustveis vm crescendo, sendo diversas as origens: acidentes envolvendo o transporte de combustveis por navios, caminhes ou dutos e principalmente devido a vazamentos provenientes de tanques de armazenamento subterrneos, os quais esto sujeitos a fortes processos corrosivos As principais causas de vazamentos relacionados aos sistemas de armazenamento subterrneos de combustveis (SASC) encontrados nos postos de combustveis: - Os tanques so freqentemente instalados sem nenhum cuidado, podendo provocar algum tipo de dano nas paredes; - Os tanques normalmente no sofrem nenhum tipo de manuteno, permitindo, assim, que a corroso se instale e comprometa a integridade do material. Tanques que ficam em contato direto com o solo tambm iro corroer mais rapidamente por causa da umidade e precipitao; - Quando os tanques ficam vazios ou parcialmente vazios, o lado de dentro do tanque pode corroer rapidamente; - Os SASC so freqentemente instalados sem a proteo catdica, e detectores de vazamentos; - Os tanques so normalmente construdos de parede simples, sem revestimento com material anti-corrosivo;

- Quando os tanques so instalados em solos pedregosos e so cobertos com enchimentos reiterados ou com entulhos de construo, permitem rachaduras por pedras, que se expandem dentro de poucos anos; - Oscilaes do nvel fretico provocam condies mais favorveis para a corroso dos tanques e suas conexes quando so instalados na altura ou abaixo do nvel fretico. gua subterrnea com pH cido pode acelerar a corroso do tanque

5- Dinmica dos hidrocarbonetos em subsolo


Os hidrocarbonetos ao serem liberados para o ambiente atravs de vazamentos em tanques subterrneos migram verticalmente pela zona no saturada sob a influncia das foras gravitacional e capilar. Alguma expanso horizontal tambm ocorrer devido atrao das foras capilares. O termo foras capilares refere-se s foras que influenciam o movimento dos hidrocarbonetos em fase lquida pelos interstcios do solo ou poros. Essas foras dependem de: a) caso o solo esteja molhado com gua ou com hidrocarbonetos em fase lquida; b) as propriedades fsicas e qumicas dos hidrocarbonetos em fase lquida; c) as caractersticas do solo (GUIGUER, 2000). O escoamento dos hidrocarbonetos em meio saturado sempre bifsico por serem compostos orgnicos que apresentam baixa miscibilidade em gua. A fase composta pelos hidrocarbonetos recebe a denominao de NAPL (nonaqueous phase liquid) ou fase lquida no aquosa. De acordo com a densidade do hidrocarboneto existem dois tipos de NAPLs: - LNAPL (light non-aqueous phase liquid ou fase lquida no aquosa leve) caracterizada por possuir densidade menor que a gua. Os hidrocarbonetos com essa caracterstica esto comumente associados com a produo, refino e

distribuio de produtos do petrleo, por exemplo, a gasolina, o leo diesel e o querosene. - DNAPL (dense non-aqueous phase liquid ou fase lquida no aquosa densa) caracterizada por possuir densidade maior que a gua. Os hidrocarbonetos com essa caracterstica esto relacionados principalmente s atividades industriais, onde so utilizados, por exemplo, hidrocarbonetos clorados, PCBs (bifenilas poli-cloradas), antraceno, pireno e fenol. O transporte dos hidrocarbonetos no solo caracterizado pela formao de quatro fases distintas que regulam o processo de migrao do produto: fase lquida residual, fase lquida livre, fase dissolvida e fase vapor (Figura 1). A partio entre as fases determinada pelos fenmenos da dissoluo, volatilizao e adsoro. A fase lquida residual pode existir no solo como resduos lquidos relativamente imveis, adsorvidos ou retidos entre os slidos do solo. O lquido livre no residual que passa pelo solo chamado de fase lquida livre, que quando atinge o nvel dgua subterrneo passa a flutuar sobre a mesma. Hidrocarbonetos em fase dissolvida podem estar presentes na superfcie slida do solo formando pelculas, ou na gua do solo; quando atingem o nvel dgua subterrneo formam a chamada pluma de contaminao. Os hidrocarbonetos em fase de vapor podem existir como componentes do vapor do solo, podendo tambm se condensar e adsorver-se na superfcie slida ou dissolver-se na gua do solo.

O transporte da LNAPL atravs das zonas no saturadas e saturadas depende da quantidade de hidrocarbonetos liberados ao meio. Um pequeno volume de LNAPL flui pela zona no saturada at atingir o estado de saturao residual, em razo do desenvolvimento de um sistema de quatro fases como resultado da entrada de LNAPL nesta zona, com a seguinte ordem de grau de molhabilidade: gua > LNAPL > ar. A gua de infiltrao dissolve os componentes solveis presentes na LNAPL, tais como o benzeno, o tolueno e os xilenos, e os transporta at a zona saturada. Esses contaminantes formam uma pluma que se distribui por difuso e adveco. Muitas das substncias tendem a ser volteis, assim o gs sofre

partio de modo que uma parte fica retida no solo e outra migra para o ar, sendo transportados para outras partes do aqfero por difuso molecular. Esses processos so responsveis pelo transporte de contaminantes atravs de reas bastante extensas. Os grandes derrames geram um fornecimento contnuo de hidrocarbonetos para a zona no saturada, favorecendo uma condutividade hidrulica progressiva e contnua e formando uma depresso de interface zona saturada LNAPL, onde os hidrocarbonetos se acumulam. No caso de remoo ou esgotamento da fonte de contaminao, os hidrocarbonetos presentes na zona no saturada continuam a migrar para nveis mais profundos, estacionando quando a concentrao de hidrocarbonetos atinge o nvel de saturao residual e no pode mais avanar. Caso contrrio, continua a mover-se para baixo recarregando a depresso localizada sobre o nvel da gua subsuperficial, produzindo um espalhamento lateral maior sobre a franja capilar. A Figura 2 ilustra o caminho percorrido pelo combustvel liberado de um tanque subterrneo at atingir a franja capilar e a formao de uma pluma de contaminao.

6- Tcnicas de remediao aplicadas a reas contaminadas


Atualmente, existe uma preocupao e conscientizao da sociedade em relao qualidade ambiental. A populao vem tornando-se mais crtica e participativa, exigindo atuaes cada vez maiores das autoridades. Desta forma, em funo da crescente demanda em relao ao gerenciamento de reas contaminadas, avanos significativos ocorreram nas ltimas dcadas nos estudos que visavam recuperao ambiental. Muitas opes ou combinaes de opes esto disponveis para restaurar a qualidade do solo e da gua subterrnea. A seleo de tecnologias a serem utilizadas baseia-se fundamentalmente no conhecimento das caractersticas fsico-qumicas do contaminante, volume vazado, tempo de vazamento, caracterizao geolgica e hidrogeolgica do local, anlise do meio fsico superficial e subterrneo e extenso da pluma contaminante. Um plano tpico de remediao possui quatro fases principais: - conteno do produto livre e produto dissolvido; - remoo do produto livre; - remoo do produto dissolvido; - remoo do produto adsorvido. A conteno e a remoo do produto livre geralmente so realizadas atravs de sistemas de poos ou trincheiras de bombeamento e para a remoo do produto adsorvido ao solo na zona no saturada e dissolvido na gua subterrnea existem diferentes tcnicas. A remediao da zona no saturada tem por objetivo evitar a contaminao da zona saturada. A zona no saturada considerada uma fonte secundria de contaminao, onde os processos de infiltrao promoveriam a lixiviao e o transporte de poluentes para o aqfero. As tcnicas de remediao da zona no saturada e da saturada podem ser realizadas ex situ, ou seja, atravs da retirada do material contaminado para posterior tratamento ou in situ, quando o material no retirado.

Alguns exemplos de tcnicas de remediao da zona no saturada:

lavagem de solo (soil wash) Tratamentos ex situ: incinerao biorremediao: - reatores (slurry phase) - sistemas de tratamento de resduos no solo (p.e. landfarming, biopilhas) Tratamentos in situ: lavagem de solo (soil flushing) extrao de compostos orgnicos volteis (SVE, bioventing) biorremediao Alguns exemplos de tcnicas de remediao da zona saturada: carvo ativado Tratamentos ex situ: coluna de aerao (air stripping) biorremediao Tratamentos in situ: bombeamento e tratamento (pump and treat) tratamentos qumicos (injeo de oxidantes, barreiras reativas, etc.) extrao de compostos orgnicos volteis (air sparging, bioventing) biorremediao

7- Ao dos microrganismos
A tecnologia da biorremediao baseada em processos nos quais ocorrem reaes bioqumicas mediadas por microrganismos. Em geral, um composto orgnico quando oxidado perde eltrons para um aceptor final de eltrons, que reduzido (ganha eltrons). O oxignio comumente atua como aceptor final de eltrons quando presente e a oxidao de compostos orgnicos, com a reduo do oxignio molecular, chamada de respirao aerbia heterotrfica. No entanto, quando o oxignio no est presente, microrganismos podem usar compostos orgnicos ou ons inorgnicos como aceptores finais de eltrons alternativos, condies estas chamadas de anaerbias. A biodegradao anaerbia pode ocorrer pela desnitrificao, reduo do ferro, reduo do sulfato ou condies metanognicas Nas condies subsuperficiais encontram-se populaes de microrganismos, as quais geralmente so formadas por bactrias, fungos, algas e protozorios. As bactrias na zona saturada variam com as caractersticas especficas geoqumicas e hidrogeolgicas do aqfero, sendo que, de maneira geral, embora existam bactrias anaerbias, as que predominam so as bactrias aerbias. Os principais mecanismos de biotransformao de contaminantes orgnicos em gua subterrnea so efetuados nos biofilmes, que so bactrias e polmeros extracelulares aderidos subsuperfcie e que obtm energia e nutrientes durante o fluxo da gua subterrnea A estrutura qumica dos poluentes orgnicos tem uma profunda influncia na habilidade dos microrganismos metabolizarem estas molculas, especialmente com respeito s taxas e extenso da biodegradao. Alguns compostos orgnicos so rapidamente biodegradados enquanto outros so recalcitrantes (no biodegradveis). Hidrocarbonetos com baixo a mdio peso molecular e lcoois so exemplos de compostos facilmente biodegradveis. Compostos xenobiticos (compostos qumicos fabricados pelo homem), especialmente hidrocarbonetos

halogenados, tendem a ser resistentes biodegradao. Geralmente, compostos ramificados e polinucleados so mais difceis para degradar que molculas monoaromticas ou com cadeias simples, e aumentando o grau de halogenao da molcula, diminui-se a biodegradabilidade. A comunidade microbiana envolvida na degradao de compostos xenobiticos pode ser dividida em dois grupos: os microrganismos primrios e os secundrios. Os primrios so aqueles capazes de metabolizar o substrato principal fornecido ao sistema, enquanto os secundrios no utilizam o substrato principal, porm, os produtos liberados pelos microrganismos primrios. Este processo denominado cometabolismo.

8- Processos de biorremediao in situ


Biorremediao in situ realizada no prprio local, sem que haja remoo de material contaminado. Isto evita custos e distrbios ambientais associados com o movimento de solos e guas que esto contaminados para outros locais destinados ao tratamento. Os produtos finais de uma biorremediao efetiva so gua e gs carbnico, que no apresentam toxicidade e podem ser incorporados ao ambiente sem prejuzo aos organismos vivos. De acordo com parmetros como origem dos microrganismos, adio ou no de nutrientes, a biorremedio in situ pode ser realizada atravs de trs processos: biorremediao intrnseca, bioestimulao e bioaumento. a) Biorremediao intrnseca (natural) Uma nova abordagem para a descontaminao de solos e guas subterrneas, chamada de remediao natural vem, recentemente, ganhando aceitao, principalmente em locais contaminados por derramamentos de derivados de petrleo, como o que acontece em postos de combustveis. A remediao natural uma estratgia de gerenciamento que se baseia nos processos naturais de atenuao para remover ou conter os contaminantes dissolvidos na gua. A atenuao natural refere-se aos processos fsicos, qumicos e biolgicos que facilitam o processo de remediao de maneira

global. Dados obtidos em pesquisas de campo de vrios pesquisadores tm comprovado que a atenuao natural limita o deslocamento dos contaminantes e, portanto, diminui a contaminao ao meio ambiente. A remediao natural no uma alternativa de nenhuma ao de tratamento, mas uma forma de minimizar os riscos para a sade humana e para o meio ambiente, monitorando-se o deslocamento da pluma e assegurando-se de que os pontos receptores (poos de abastecimento de gua, rios, lagos) no sero contaminados . a1) Biodegradao aerbia Quase todos os hidrocarbonetos do petrleo so biodegradados sob condies aerbias. Oxignio um co-substrato para a enzima que pode inicializar o metabolismo do hidrocarboneto e por fim utilizado como aceptor final de eltrons para a gerao de energia. Em muitos casos, a maior limitao na biodegradao aerbia em subsuperfcie a baixa solubilidade do oxignio em gua. Por exemplo, a mineralizao aerbia do tolueno (C6H5-CH3) representada pela seguinte equao: C6H5-CH3 + 9 O2 7 CO2 + 4 H2O A gua saturada com ar contm de 6 a 12 ppm de oxignio dissolvido. Por exemplo, a completa converso do tolueno (e muitos outros hidrocarbonetos) para CO2 e H2O requer aproximadamente 3 g de O2 por grama de hidrocarboneto. Usando-se essa taxa, o O2 presente na gua pode resultar na biodegradao de 2 a 4 ppm de hidrocarboneto atravs de processo estritamente aerbio. Se a concentrao de hidrocarboneto for maior que essa, a biodegradao deve ser incompleta ou deve acontecer mais vagarosamente por processo anaerbio. A extenso da biodegradao aerbia controlada pela quantidade de contaminantes, a taxa de transferncia de oxignio para a subsuperfcie e o contedo original de oxignio no aqfero. Os tempos de meia vida, por exemplo, do tolueno, podem variar entre 1 e 20 dias, dependendo da concentrao microbiolgica ativa, chegando a valores fora dessa faixa se tambm ocorrerem limitaes de transferncia de massa.

a2) Biodegradao utilizando o nitrato Quando a quantidade de oxignio diminui e nitrato est presente (ou outras formas oxidadas de nitrognio), alguns microrganismos anaerbios facultativos utilizam nitrato (NO3-) ao invs de oxignio como aceptor final de eltrons. Para o tolueno, este processo pode ser aproximado pela seguinte equao: C6H5-CH3 + 7,2 H+ + 7,2 NO3- 7 CO2 + 7,6 H2O + 3,6 N2 Os tempos de meia vida para o tolueno sob condies desnitrificantes so maiores que em condies aerbias, tipicamente variando de 20 a 50 dias, mas podem ser mais curtos se a concentrao inicial de desnitrificantes exceder 1 mg/l. a3) Biodegradao utilizando o on frrico Uma vez que as quantidades de oxignio e nitrato reduzem, os microrganismos podem utilizar o on frrico (FeIII) como aceptor de eltrons. Grandes quantidades de ferro na forma frrica esto presentes em sedimentos de muitos aqferos e esta pode ser uma potencial fonte desse composto para a biodegradao. O ferro pode estar presente tanto em minerais cristalinos ou amorfos. As formas que so mais facilmente reduzidas so as formas amorfas e pouco cristalinas de hidrxidos, oxi-hidrxidos, e xidos de Fe (III). A reao hipottica da oxidao do tolueno com a reduo do Fe (III) na forma de hidrxido frrico (Fe (OH)3) pode ser representada pela seguinte equao: C6H5-CH3 + 36 Fe (OH)3 + 72 H+ 7 CO2 + 36 Fe+2 + 94 H2O b) Bioestimulao A bioestimulao de populaes de microrganismos autctones com o objetivo de aumentar as taxas de biodegradao freqentemente empregada em projetos de biorremediao. Para se utilizar o processo de bioestimulao, deve-se demonstrar que existe no local contaminado uma populao natural de microrganismos capazes de biodegradar os contaminantes presentes e que as condies ambientais so insuficientes para se obter altas taxas de atividade microbiolgica dessa populao. Medidas das propriedades fsicas e qumicas de amostras do local podem revelar as limitaes fsico-qumicas para a

atividade microbiolgica, a qual pode ento ser modelada para indicar os fatores crticos limitantes. c) Bioaumento A introduo de microrganismos no indgenos (alctones) pode ser considerada em locais, onde aps a contagem das bactrias heterotrficas totais e fungos, foi identificada uma insuficincia de microrganismos indgenos (autctones) para a biodegradao do resduo perigoso em questo, mesmo aps a tentativa da bioestimulao. O bioaumento um processo de biorremediao encontrados que utiliza microrganismos alctones muitas vezes em produtos

biotecnolgicos comercializados. Esse processo necessrio quando um local contaminado no possui ou possui em quantidades insuficientes os requisitos necessrios para que o processo de degradao ocorra. Assim, essa tcnica tem como objetivo acelerar ou estimular a biodegradao atravs da intensificao do crescimento microbiano tanto quanto tambm pela otimizao do ambiente em questo.

9- Microrganismos degradadores de hidrocarbonetos


Os microrganismos so os principais agentes responsveis pela ciclagem do carbono na natureza. Em muitos ecossistemas existe uma comunidade autctone de microrganismos capazes de degradar hidrocarbonetos (hidrocarbonoclsticos). Os primeiros estudos da utilizao de hidrocarbonetos por microrganismos foram realizados por Sohnger e Kaserer em 1906. Em 1913, Sohnger relatou que gasolina, querosene, parafina e leo de parafina poderiam ser oxidados a CO2, gua e traos de cidos orgnicos por microrganismos. Os microrganismos estudados pertenciam principalmente aos gneros Mycobacterium e Pseudomonas. Gray e Thornton (1928) isolaram vrios organismos capazes de decompor compostos aromticos como naftaleno, tolueno, cresol e fenol pertencentes aos seguintes gneros:Micrococcus, Mycobacterium, Bacterium, Bacillus e Spirillum.

A habilidade em degradar hidrocarbonetos no restrita a apenas alguns gneros de microrganismos, pois, vrios grupos de bactrias, fungos e actinomicetos tm mostrado possuir essa capacidade. Zobell (1946), em uma extensa reviso sobre a ao dos microrganismos nos hidrocarbonetos, descreveu que muitas espcies tm a habilidade de utilizar hidrocarbonetos como nica fonte de carbono e energia e que estes microrganismos esto amplamente distribudos na natureza. Observou o autor que mais de 100 espcies de 30 gneros microbianos foram capazes de utilizar hidrocarbonetos. Komagata et al. (1964) examinaram cerca de 500 espcies de leveduras quanto capacidade de utilizar hidrocarbonetos. Destas, 56 espcies possuam esta capacidade, sendo que a maioria delas pertencia ao gnero Candida. Ahearn. Ahearn et al. Sporobolomyces hidrocarbonetos. Gutnick e Rosenberg (1977) postularam 3 caractersticas essenciais para a utilizao de hidrocarbonetos pelos microrganismos: - um sistema eficiente de absoro de hidrocarbonetos com stios especiais de ligao e/ou produo de substncias emulsificantes para o transporte do hidrocarboneto ao interior da clula; - enzimas oxigenases especficas; - especificidade induzida resposta positiva do organismo ao hidrocarboneto. Deste modo, os vrios meios que os microrganismos tm desenvolvido a fim de solucionar estes trs problemas provavelmente contribuem para o fato de mais de 200 espcies diferentes terem sido descritas com capacidade de utilizao de hidrocarbonetos. Leahy e Colwell (1990) citam os seguintes gneros de bactrias como os mais importantes: Achromobacter, Acinetobacter, Alcaligenes, Arthobacter, Bacillus, Flavobacterium, Nocardia e Pseudomonas. Kadri et al. (1986), Shamshoom et al. (1990), Sorkhoh et al. (1990), Al-Hadhrami et al. (1995), e Trichosporom, todas capazes de (1971) isolaram espcies de Candida, Rhodosporidium, Rhodotorula, Sacharomyces, metabolizar

estudando a distribuio de bactrias que degradam hidrocarbonetos, identificaram: Acinetobacter sp., Aeromonas sp., Bacillus sp., Escherichia coli, Flavobacterium phenylpiruvica, sp., Klebsiella sp., cepacia, Micrococcus luteus, Moraxella Nocardia Ochrobactrum anthropi, Pseudomonas

aeruginosa, Pseudomonas sp., Proteus mirabilis, Vibrio sp., Rhodococcus sp., Streptomyces sp., Vibrio fisheri e Xanthomonas maltophilia. Em uma cultura mista, o produto metablico pode ser degradado por uma outra espcie e o ataque de outros microrganismos pode levar a uma completa degradao do produto, mesmo que dentro da comunidade no exista um microrganismo capaz de degrad-lo totalmente. Deste modo, estudos realizados com cultura mista possuem vantagens sobre estudos realizados com cultura pura. A habilidade e dos fungos em utilizar hidrocarbonetos espcies que ocorre principalmente em duas ordens: Mucorales e Moniliales. Os gneros Aspergillus Penicillium possuem muitas assimilam hidrocarbonetos, contudo, esta caracterstica uma propriedade individual da espcie e no necessariamente uma caracterstica particular do gnero. Ao contrrio das bactrias e leveduras que mostram decrscimo na capacidade de degradao de alcanos com o aumento da cadeia do composto, os fungos filamentosos parecem ser mais hbeis em degradar ou transformar hidrocarbonetos de estrutura complexa e de cadeia longa. Entretanto, o metabolismo dos fungos geralmente resulta numa degradao incompleta que necessita da associao de bactrias para alcanar a completa oxidao do composto.

10-

Estudo de Caso

Avaliao da biorremediao natural da gua subterrnea no posto de combustveis SB.

a) Descrio da rea
O posto de combustveis est localizado no municpio de Santa Brbara dOeste (22o 4515 S e 47o 24 58 W) 138 km da capital paulista. Geologicamente situa-se na Bacia Sedimentar do Paran em rea onde ocorrem o Sistema Aqfero Tubaro (ou Itarar) e os aqferos Diabsio e Cenozico, cada qual com diferentes caractersticas de circulao de gua subterrnea

b) Amostragem de gua subterrnea


Inicialmente em cada ponto de coleta (poos de monitoramento SB1, SB2 e SB3, realizou-se a medio da profundidade do nvel dgua (nvel esttico) e em seguida procedeu-se o esgotamento dos poos de monitoramento utilizando-se amostradores descartveis do tipo bailer. Aps a recuperao dos poos, realizaram-se medidas de temperatura e condutividade eltrica, ambas com a sonda YSI 3000 TLC e a coleta de gua subterrnea com os amostradores bailer. As amostras foram transferidas para diferentes frascos de coleta de acordo com a finalidade da anlise: hidrocarbonetos BTEX (vial com septo exposto faceado de teflon, 40 mL); hidrocarbonetos policclicos aromticos (HPA) (frasco de vidro mbar, 1 L); anlises fsico-qumicas (frascos plsticos, 2 L); anlises microbiolgicas (tubos de cultura com rosca, 10 mL, previamente autoclavados para assegurar a esterilidade).

c) Anlises fsico-qumicas
Em campo foram realizadas medidas de oxignio dissolvido.

Determinaes de pH e Eh foram realizadas em laboratrio no mesmo dia da coleta. O eletrodo de Ag/AgCl utilizado na leitura do potencial redox foi calibrado utilizando-se uma soluo contendo um par redox estvel e conhecido.

Em laboratrio, as concentraes dos ons nitrato, sulfato, fosfato, potssio, clcio, magnsio e ferroso foram determinadas utilizando-se espectrofotmetro. A determinao de cloreto foi conduzida utilizando-se o eletrodo on seletivo Orion modelo 9417B e o eletrodo de referncia Orion modelo 9002 acoplados ao analisador de ons Analion IA601. Para a calibrao foram utilizados padres de concentraes conhecidas e compatveis com o esperado para as amostras. As determinaes de sdio para as trs primeiras coletas foram efetuadas por espectrofotometria de absoro atmica. A alcalinidade total foi determinada por titulao usando uma soluo padro de cido sulfrico. A anlise dos slidos totais em suspenso consistiu em separar os slidos suspensos por filtrao de um determinado volume atravs de membrana Millipore de 47 mm de dimetro e 0,45 m de porosidade.

d) Anlises microbiolgicas
A contagem de bactrias heterotrficas totais nas amostras de gua subterrnea foi realizada com a tcnica pour plate em placas de Petri contendo o meio PCA (Acumedia, EUA), incubadas durante 48 h a 35 oC. As metodologias descritas foram utilizadas para averiguar a presena na gua subterrnea (ponto SB3, 1 coleta) de bactrias oxidantes de benzeno e tolueno e bactrias do gnero Pseudomonas capazes de degradar naftaleno.

e) Respirometria
A verificao do desempenho de diferentes tcnicas de biorremediao aplicadas aos solos contaminados foi realizada com os respirmetros de Bartha e Pramer (BARTHA e PRAMER, 1965), os quais foram utilizados para medir a produo microbiana de CO2. Estudos de mineralizao envolvendo medidas de produo de CO2 podem prover excelentes informaes sobre o potencial de biodegradabilidade de hidrocarbonetos.

f) Preparo do inculo
O inoculo microbiano constituiu-se de trs espcies de bactrias hidrocarbonoclsticas (Ochrobactrum anthropi, Stenotrophomonas maltophilia e Bacillus cereus) que foram previamente isoladas e identificadas por Kataoka (2001) de um sistema de landfarming da refinaria de petrleo Replan (Petrobras) em Paulnia/SP. As bactrias foram enriquecidas separadamente em meio PCA lquido (10 mL) por 48 h a 35 oC. As clulas foram recuperadas por centrifugao (8.000 rpm durante 10 min) e o meio sobrenadante descartado. As clulas foram ressuspensas em 5,5 mL de soluo salina estril (0,85%) e o mesmo procedimento de centrifugao foi repetido. As clulas das trs espcies foram agrupadas e a suspenso final foi preparada com a adio de 5,5 mL de soluo salina.

g) CONCLUSES
A partir de ensaios laboratoriais e do monitoramento da gua subterrnea, ainda que atravs de um nmero pequeno de poos de monitoramento, foi possvel identificar fatores que corroboram a eficincia da tcnica de biorremediao natural para o tratamento da gua subterrnea contaminada em decorrncia do vazamento de leo diesel no posto de combustveis SB. A presena de microrganismos capazes de biodegradar hidrocarbonetos, a disponibilidade de oxignio dissolvido e a diminuio da concentrao de hidrocarbonetos ao longo do sentido do fluxo da gua subterrnea so indicativos de que est ocorrendo a biodegradao. Contudo, a presena de hidrocarbonetos retidos no solo representam uma fonte contnua de contaminao, e por isso o monitoramento em longo prazo faz-se necessrio.

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Referncias

MARIANO, A. P. Avaliao do potencial de biorremediao de solos e de guas subterrneas contaminados com leo diesel. 147 f. Tese (Doutorado em Geocincias e Meio Ambiente) - Programa de Ps-Graduao em Geocincias e Meio Ambiente, Universidade Estadual Paulista, Rio Claro, 2006. NETO, P. F. da S. Estudo da aplicao de material estruturante na biorremediao de solos contaminados por petrleo em biorreator. XIII Jornada de Iniciao Cientfica-CETEM. Mimeografado.