Manual de Hematologia

Manual de Practicas de Qumica Clnica
I.
INTRODUCCIN.
En la actualidad, la realizacin de los anlisis clnicos, es una tarea que demanda de un muy alto grado de los conocimientos bsicos y de los estndares internacionales para la realizacin de estos, con la mayor exactitud, lo cual se va a ver reflejado en la confianza que el laboratorio, dara a sus pacientes. Con el cumplimiento de estas fases, por parte del laboratorio son el resultado de la capacidad de los analistas, que mediante su formacin acadmica y experiencia en el laboratorio, puedan crear un propio criterio una mayor confianza en mismos y as recibir un buen trato el paciente, cuando este acude a nuestro laboratorio. Las pruebas que describe este manual, son de especificas del area de bioqumica clnica, todas las pruebas que se realizan en un laboratorio, deben seguir una metodologa para llegar a un buen resultado, este manual se realizo con la finalidad de proporcionar al estudiante una herramienta para realizar las pruebas del rea de bioqumica clnica y adquiera una mayor destreza en la realizacin de estas pruebas. En la actualidad la tecnologa simplifica, la realizacin de estos estudios, pero es importante saber cuales son los fundamentos o los principios en los que se basan los equipos autimatizados, para la realizacin de el anlisis de los pacientes, y asi no solo poder interpretar los resultados obtenidos, y ejercer nuestro propio criterio como profesionistas en el area.
Jos Manuel Prez Snchez 1
II.
OBJETIVO.
Proporcionar al estudiante del rea de anlisis clnicos, las metodologas para la realizacin de los estudios que se efectan en un laboratorio, en el rea de Qumica Clnica.
III.
PRACTICA No.1
2
Jos Manuel Prez Snchez
3.1 DETERMINACION DE GLUCOSA SANGUINEA. 3.1.1 INTRODUCCION

La glucosa es el azcar de la sangre y su presencia en ella mas all de los valores normales nos indica un proceso patolgico conocido como Diabetes. En la diabetes hay una insuficiencia de insulina que es la hormona que controla la utilizacin de la glucosa por el organismo lo que conduce a una acumulacin de la glucosa en la sangre y su aparicin en la orina. Normalmente la glucosa es almacenada en el hgado en forma de glucgeno que consiste en muchas moleculas de glucosa unidas entre si y que puede transformarse de nuevo rpidamente en glucosa cuando el organismo tiene necedidad de ella. Dada su importancia, la glucosa es cuantificada en los laboratorios desde mucho tiempo atrs, razn por la cual existen muchos mtodos para su determinacin, algunos que no dan gran exactitud y otros que si lo dan. Existen metodos como el de folin wu, mtodo que no detecta glucosa verdadera ya que la tcnica es para detectar azucares reductores y siendo la glucosa el principal en cuanto a cantidad se refiere, el mtodo nos da una exactitud relativa bastante buena ya que se compensa con los parmetros marcados para los valores normales. Existen otros mtodos como el de la ortotoluidina que si detecta glucosa verdadera pero el reactivo es toxico y cancergeno, sin embargo este mtodo es de amplia utilizacin.
Manual de Practicas de Qumica Clnica Actualmente para la determinacin de glucosa los mtodos mas ampliamente utilizacios se banan en la utilizacin de la enzima glucooxidasa, razn por la cual el mtodo tiene los mximos valores de especificidad aparte de gran exactitud y reproducibilidad.
3.1.2 FUNDAMENTO.
Metodo Enzimatico Colorimetrico. La gluscosa presente en la muestra pasa a acido glucnico y perxido de hidrogeno por medio de la accin de la glucooxidasa y elperoxido de hidrogeno formando por el fenol y amino-4 antipirina, por accin de la enzima peroxidasa se transforma en quinoneimina que es un compuesto coloreado donde la intensidad del color ser directamente proporcioanl a la cantidad de glucosa original.
3.1.3 MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS.

3 Celdas apareadas para espectrofotmetro Tubos de ensaye Pipetas de 1000 l, 10 l Pipeta pasteur para separar el suero Equipo de puncion venosa completo Kit completo de Glucosa-Oxidasa Espectrofotometro Centrifuga Termoblock o bao maria a 37 C
3.1.4. TECNICA
1. Realizar una correcta puncin venosa evitando la hemolisis. Jos Manuel Prez Snchez 4
Manual de Practicas de Qumica Clnica 2. Despus de retirar la aguja de la jeringa, depositar la sangre en un tubo de ensaye perfectamente limpio, seco y sin anticoagulante. 3. Dejar que se forme el coagulo durante aproximadamente 5 minutos. 4. Con un aplicador, separar el coagulo de las paredes del tubo y centrifugar a 1500 rpm, durante 3 minutos. 5. Separar el suero del coagulo, depositndolo en otro tubo limpio y seco. 6. Reconstituir el contenido del frasco del reactivo 2 con el contenido del frasco de reactivo 1 y mezclar por inversin hasta homogeneidad, conservando el reactivo reconstituido en el frasco No. 1. 7. Colocar 2 ml de reactivo reconstituido en cada unas de las 3 celdas rotulando como blanco, estndar y muestra, y despus agregar 20l de suero medidas con pipeta automtica a la celda rotulada como muestra y 20l de estndar de 100 mgs.a la celda rotulada como estndar, dejando la celda rotulada como blanco solo con los 2ml de la solucin reactivo. 8. Mezclar con cuidado y dejar incubando a 37C durante un minimo de 10 minutos y mximo de 2 horas. 9. Leer absorbancia del estndar y de la muestra contra el blanco efectuando los clculos.
3.1.5. OBSERVAVIONES 3.1.6 CALCULOS Y RESULTADOS

Absorbancia problema/Absorbancia estndar X 100 = mg Glucosa/100ml de suero Valores de referencia: Adultos: de 74 a 110 mg/100ml
Manual de Practicas de Qumica Clnica 3.1.7 CONCLUSIONES 3.1.8 EVALUACION 1. Qu es ela glucosa?
2. Por qu este mtodo es exacto y especifico?
3. Qu desventajas ves en este mtodo?
4. Por qu el suelo no debe estar hemolizado?
IV.
PRACTICA No.2
4.1 DETERMINACION DE LA CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA

4.1.1 INTRODUCCION
La realizacin del estudio curva de tolerancia a la glucosa se practica en pacientes que en forma ocasional presentan valores ligeramente elevados sobre las cifras normales sin existir ninguna aparente causa y en algunas ocasiones es posible establecer el diagnostico de diabetes o colocar a ese paciente como una persona prediabtica, es decir que esta propenso a adquirir la enfermedad.
El estudio consiste en realizar la prueba en ayunas y si el valor encontrado es inferior a 15, debe administrarle por va oral 100 mg de glucosa disueltos en agua y continuar evaluando los niveles de glucosa sangunea a la media hora de la toma, despus a los 60 minutos, a los 120 minutos y a los 180 minutos.
Cuando el paciente es una persona normal en la evaluacin de los 30 minutos presenta una fuerte elevacin que llega a su nivel ms alto a los 60 minutos, pero que a los 120 minutos tiene valores normales. Si la persona es diabtica o prediabtica los valores encontrados a los 120 minutos y a los 180 minutos aun se encuentran sobe los niveles normales y requiere atencin y tratamiento mdico.
4.1.2 FUNDAMENTO.
Mtodo Enzimatico Colorimetrico
Manual de Practicas de Qumica Clnica Se basa en que la glucosa es oxidada enzimticamente por la glucosa oxidasa a cido glucnico y agua oxigenada. C6H12O6 + O2 + H2O -----cido Glucnico + H2O2
Esta, en presencia de una peroxidasa produce la copulacin oxidativa del fenol con la 4-amino fenazona, dando lugar a la formacin de un cromgeno rojo cereza que es proporcional a la cantidad de glucosa presente. H2O2 + cido Parahidroxibenzoico -----Cromgeno rojo cereza + H2O
A este proceso se le denomina sistemas de relacin acopladas.
4.1.3 MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS.

1. Equipo completo de Glucosa-Oxidasa 2. 3 celdas para espectrofotmetro 3. Tubos de ensaye 4. Pipetas automticas de 1000l y 20l 5. Equipo de puncin venosa completo 6. Pipeta Pasteur para separacin de suero 7. Centrifuga 8. Espectrofotmetro 9. Pipeta volumtrica de 2 ml 10.Termoblock o bao maria a 37C Jos Manuel Prez Snchez 8
4.1.4. TECNICA
1. Realizar una correcta puncin venosa evitando la hemolisis. 2. Despus de retirar la aguja de la jeringa, depositar la sangre en un tubo de ensaye perfectamente limpio, seco y sin anticoagulante. 3. Dejar que se forme el coagulo durante aproximadamente 5 minutos. 4. Con un aplicador, separar el coagulo de las paredes del tubo y centrifugar a 1500 rpm, durante 3 minutos. 5. Separar el suero del coagulo, depositndolo en otro tubo limpio y seco. 6. Reconstituir el contenido del frasco del reactivo 2 con el contenido del frasco de reactivo 1 y mezclar por inversin hasta homogeneidad, conservando el reactivo reconstituido en el frasco No. 1. 7. Colocar 2 ml de reactivo reconstituido en cada unas de las 3 celdas rotulando como blanco, estndar y muestra, y despus agregar 20l de suero medidas con pipeta automtica a la celda rotulada como muestra y 20l de estndar de 100 mgs.a la celda rotulada como estndar, dejando la celda rotulada como blanco solo con los 2ml de la solucin reactivo. 8. Mezclar con cuidado y dejar incubando a 37C durante un minimo de 10 minutos y mximo de 2 horas. 9. Leer absorbancia del estndar y de la muestra contra el blanco efectuando los clculos. 10.Si el valor encontrado es menor a 150 mg/100 ml. 11.Repetir los pasos 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 y 9 a los 30 minutos de la toma, a los 60 minutos, a los 120 minutos y a los 180 minutos. 12.Desarrollar la curva en papel milimtrico. Concentracion contra Tiempo.
4.1.5 OBSERVACIONES
4.1.6 RESULTADOS
Anexar hoja de papel milimtrico para interpretar resultados en base ala grafica.
4.1.7 CONCLUSIONES
4.1.8 EVALUACION
1. Qu es una curva de tolerancia a la glucosa?
2. Por qu no debe drsele la solucin glucosada a personas que en el examen original dan valores superiores a 150 mg/100ml?
3. En qu pacientes est indicado el estudio de curva de tolerancia a la glucosa?
4. Cmo se llama la substancia que se produce en las Clulas Betapancreaticas?
V.
PRACTICA No.3
5.1 DETERMINACION DE UREA SANGUINEA 5.1.1 INTRODUCCION

La urea constituye la fraccin de nitrgeno no proteica, mas importante en la mayora de los liquidos biolgicos, es el producto final de la destruccin de la protena y de los aminocidos, en el hombre se produce en el hgado. Es la forma bajo la cual el nitrgeno proteico se elimina por la orina, atraves de los riones. En caso de enfermedad renal si no se elimina la causa que la ha provocado, la concentracin de urea, aumenta en la sangre y determina una disfuncin renal , que es una forma grave de intoxicacin (coma renal) que en caso de no corregirse, es fatal, porque puede causar la muerte. Por lo tanto uremia es el estado de intoxicacin debido a la acumulacin de residuos nitrogenados ene l organismo, adquiridos en la dieta diaria y del metabolismo proteico. La urea normalmente debera ser eliminada por los riones en la orina, pero la insuficiencia renal puede provocar que esta sea insuficiente y despus de tiempo de evolucin del proceso patolgico, puede presentarse una crisis grave. Entre los sntomas de uremia encontramos: Transtornos digestivos, como nauseas y el vomito; Calambres musculares, inquietud, somnolencia, aliento con olor carecteristico del amoniaco y transtornos de la vista.
5.1.2 FUNDAMENTO

Mtodo Enzimtico Colorimtrico La urea es el principal producto de desecho del catabolismo de protenas. Es sintetizada en el hgado a partir del amonio, el cual es producido como resultado de la desaminacin de aminocidos. Normalmente, el nitrgeno de urea en la sangre comprende slo el 45% del nitrgeno no protico. La importancia de la determinacin del Nitrgeno de urea es su valor como buen indicador del funcionamiento heptico y renal. La disminucin de los niveles de Nitrgeno de urea (BUN) se ha visto en la nefritis, destruccin heptica aguda, amiloidosis y embarazo. Valores elevados de BUN se han visto en casos de nefritis aguda y crnica, obstruccin urinaria e intestinal, uremia, envenenamiento por metales, neumona, enfermedad de Addison, peritonitis, shock en ciruga y fallas cardiacas. La urea se convierte catalticamente a carbonato de amonio por accin de la ureasa. La velocidad de reaccin depende de la concentracin de deshidrogenasa glutmica. La velocidad de reaccin de esta segunda reaccines dependiente de la primera y puede medirse por la velocidad de conversin de NADH a NAD por el cambio de absorbancia a 340 nm. Basado en el siguiente esquema reaccionante: Urea + H2O -----ureasa------> 2 NH3 + CO2 NH3 + NADH + H+ + 2-oxoglutarato ---GlDH----> L-glutamato +NAD+ + H2O
5.1.4. TECNICA
1. Realizar una correcta puncin venosa evitando la hemolisis. 2. Despus de retirar la aguja de la jeringa, depositar la sangre en un tubo de ensaye perfectamente limpio, seco y sin anticoagulante. 3. Dejar que se forme el coagulo durante aproximadamente 5 minutos. Jos Manuel Prez Snchez 12
Manual de Practicas de Qumica Clnica 4. Con un aplicador, separar el coagulo de las paredes del tubo y centrifugar a 1500 rpm, durante 5 minutos. 5. Separar el suero del coagulo, depositndolo en otro tubo limpio y seco. 6. Reconstituir el contenido del frasco del reactivo 2 con el contenido del frasco de reactivo 1 y mezclar por inversin hasta homogeneidad, conservando el reactivo reconstituido en el frasco No. 1. 7. Reconstituir el reactivo No.4 con agua destilada en proporcin 1:4 8. Colocar 1 ml de reactivo reconstituido en cada unas de las 3 celdas rotulando como blanco, estndar y muestra, y despus agregar 10l de suero medidas con pipeta automtica a la celda rotulada como muestra y 10l de estndar de 100 mgs.a la celda rotulada como estndar, dejando la celda rotulada como blanco solo con los 1ml de la solucin reactivo. 9. Mezclar con cuidado y dejar incubando a 37C durante un minimo de 3 minutos. 10.Agregar 1 ml de reactivo No. 4 reconstituido con agua destilada a cada tubo. 11.Mezclar y dejar en reposo a bao maria (37C) durante un minimo 10 minutos. 12. Leer la absorbancia del estndar y la muestra contra el blanco efectuando los calculos.
5.1.4 MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS

1. Equipo completo de Glucosa-Oxidasa 2. 3 celdas para espectrofotmetro 3. Tubos de ensaye 4. Pipetas automticas de 1000l y 20l 5. Agua destilada 6. Aplicadores de madera Jos Manuel Prez Snchez 13
Manual de Practicas de Qumica Clnica 7. Equipo de puncin venosa completo 8. Pipeta Pasteur para separacin de suero 9. Centrifuga 10.Espectrofotmetro 11.Pipeta volumtrica de 2 ml 12.Termoblock o bao maria a 37C
5.1.5 OBSERVACIONES
5.1.6 RESULTADOS
Conc. De Urea (mg/dl) = Abs Muestra Abs Estandar conc. Estandar Rango normal: BUN 8 -23 mg/dL UREA 17-49 mg/dL UREA (mg/dL) = BUN (mmol/dL) x 2.14 UREA (mmol/L) = UREA (mg/dL) x 0.167
5.1.7 CONCLUSIONES
5.1.8 EVALUACION
Manual de Practicas de Qumica Clnica 1. Qu es la urea?
2. en que padecimientos se encuentran elevados los valores de urea?
3. Qu ventajas presenta este mtodo sobre el mtodo tradicional para urea?
4. Por qu es indispensable el control de la temperatura de reaccin en este

metodo?
5. Escribe la formula qumica de la urea?
VI.
PRACTICA No.4
6.1 DEPURACION DE UREA SANGUINEA 6.1.1 INTRODUCCION

Actualmente el intewres de esta prueba es sobre todo histrico, aunque elk resultado tiene cierto valor, presenta una serie de dificultades practicas y de consideraciones teoricas que tuvieron por resultado que la prueba fuese desplazada por otras mas precisas como la depueracion de creatitina. El prosposito de esta prueba es establecer la eficiacia de los riones poara elimnar lairea de la sangre. La cantidad de urea excretada depende del flujo urinario. Si es mayor de 2 ml por minuto, un 40% de la urea del filtrado glomerular es reabsorbido por los tubulos. Al disminuir el flujo de orina, la resorcin de urea aumenta y disminuye la excresion de esta substancia. La resorcin de la urea es mxima para volmenes urinarios de 0,4 ml, por minuto o menos, condiciones enlas cuales solamente se encuentra en la orina un 30% de la urea del filtrado glomerular.
6.1.2 FUNDAMENTO
Mtodo Enzimtico Colorimtrico Toma de muestra adecuada para obtencin de suero de una persona en ayunas. La urea solo es cuantitativamengte hidrolizada a amoniaco y dixido de carbono por medio de la ureasa. El amoniaco producido por esta reaccin con el 2-oxoglutaratoy NADH en presencia de glutamato deshidrogenasa para producir glutamato y NAD. La oxidacin del NADH causa una disminucin de la absorbancia que es proporcional a la concentracin de urea en la muestra. Basado en el siguiente esquema reaccionante:

Urea + H2O -----ureasa------> 2 NH3 + CO2 NH3 + NADH + H+ + 2-oxoglutarato ---GlDH----> L-glutamato +NAD+ + H2O
6.1.4. TECNICA
1. En la maana del da de la prueba, el paciente recibe un desayuno ligero evitando el t y el caf por sus efectos diurticos. 2. Se le cita entre el desayuno y la comida. 3. Considerando tiempo cero se le pide al paciente que vace la vejiga y se le da un vaso de agua. 4. . Pasada 1 hora, se le pide al paciente que vace de nuevo su vejiga en un recipiente limpio y seco asegurndose de obtener la totalidad de la muestra, se anota el tiempo exacto en minutos y la muestra se rotula como orina No. 1, se da otro vaso de agua. 5. Se toma una muestra de sangre para medicin de urea sangunea 6. Pasada 2 horas, el paciente orina de nuevo en un recipiente limpio y seco que se rotula con orina No.2, anotando de nuevo el tiempo exacto en minutos. NOTA: Es importante que el paciente vace completamente la vejiga cada vez y que la medicin del tiempo sea exacta entre miccin y miccin, para poder calcular con precisin el volumen de orina excretada por minuto.

1. Equipo completo de Urea 2. 3 celdas para espectrofotmetro 3. Espectrofotmetro Jos Manuel Prez Snchez 17
Manual de Practicas de Qumica Clnica 4. Pipeta automtica 1000l y 20l 5. Equipo de puncion venosa 6. Tubos de ensaye 7. Pipetas volumtricas 8. Pipeta pasteur 9. Termoblock
6.1.5 OBSERVACIONES
6.1.6 RESULTADOS
Conc. De Urea (mg/dl) = Abs Muestra Abs Estandar conc. Estandar Rango normal: BUN 8 -23 mg/dL UREA 17-49 mg/dL UREA (mg/dL) = BUN (mmol/dL) x 2.14 UREA (mmol/L) = UREA (mg/dL) x 0.167
6.1.7 CONCLUSIONES
6.1.8 EVALUACION
1. Qu es la depuracin de urea?
2. Por qu es importante que el paciente vacie la vejiga al incio de la toma de

muestra?
3. Nombre del Quimico que sintetizo por primera vez la urea?
4. Menciona el ciclo a travs del cual se forma la urea en el organismo:
5. El mtodo tradicional para la determinacin de urea se basa en el uso de la susbtancia llamada:
VII.
PRACTICA No.5
7.1 DETERMINACION DE CREATININA SANGUINEA 7.1.1 INTRODUCCION


La creatinina es un aminocido producto de la degradacin de la creatina, el cual es un compuesto sumamente difusivo, cuya eliminacin del organismo se efecta a travs del rion y casi exclusivamente por filtracin. La creatinina esta contenida sobre todo en el musculo en donde , se encuentra en forma de fosfocreatina, desarrolla una funcin fundamental, constituyendo la reserva de energa necesaria para contraccin muscular. El producto final del metabolismo de las protenas que la contienen es la creatinina. La excrecin diaria de creatinina en la orina es independiente de la cantidad de protenas tomadas con la dieta y por ello es un undice bastante seguro del metabolismo de los musculos. En la orina del adulto sano no hay creatinina y su presencia (creatinuria) puede ser sntoma de varios estados patolgicos que sealan destruccin de protenas, sobre todo de las musculares.
7.1.2 FUNDAMENTO
En medio alcalino la creatinina y otros compuestos presentes en el plasma reaccionan con el ion picrato dando un complejo de color amarillo rojizo (reaccin de Jaff) La desidad ptica de color rojo formado es proporcional a la cantidad de creatinina en el suero utilizado y por lo tanto al medir estos valores es posible calcular la cantidad de creatinina por unidad de volumen de muestra problema.

1. Equipo completo para la determinacin de creatinina 2. 3 celdas para espectrofotmetro 3. Espectrofotmetro Jos Manuel Prez Snchez 20
Manual de Practicas de Qumica Clnica 4. 2 Pipetas serolgicas de 5 ml 5. Pipetas serolgica de 0,1 ml 6. Equipo de puncin venosa 7. 4 Tubos de ensaye 8. Pipeta pasteur 9. Termoblock
7.1.5. TECNICA
1. Marcar 3 tubos de ensaye como: Blanco, Estandar y Muestra. 2. Agregar a cada tubo 1,5 ml de reactivo alcalino. 3. Agregar a cada tubo 1,5 ml de solucin de acido pcrico. 4. Agregar al tubo marcado como blanco 0,1 ml de agua destilada. 5. Agregar al tubo marcado como muestra 0,1 ml de suero problema. 6. Agregar al tubo marcado como estndar 0,1 ml de solucin estndar 7. Dejar en reposo a 37C durante 10 minutos. 8. Leer las extinciones de el estndar y de la muestra problema a 505 nm. 9. Los valores normales van de 1 a 2 mgs/100 ml de suero.
7.1.5 OBSERVACIONES
7.1.6 RESULTADOS

A(M) de la muestra Creatinina srica (mg/dL) = _________________ x 5 A(S) del estndar
7.1.7 CONCLUSIONES
7.1.8 EVALUACION
1. Define a la creatinina?
2. En que padecimientos se encuentran valores altos de creatinina?
3. Cules son los valores normales de creatinina serica?
4. Esquematice la formula qumica de la creatinina:
5. Cul es la estructura qumica bajo la cual se encuentra libre la creatinina?
VIII.
PRACTICA No.6
8.1 DEPURACION DE CREATININA 8.1.1 INTRODUCCION


Entendemos por depuracionn de creatinina; el gradoo nivel en el que el metabolismo humano la puede metabolizar, es decir el grado o nivel en que se puede establecer el equilibrio entre la produccin y el desecho de dicho metabolito. Es lgico que para poder establecer una relacin adecuada, es indispensable el conocer la masa corporal, el volumen miccional normal por unidad de tiempo (puede ser una hora o en su defecto 24 hrs.) y el nivel serico de creatinina. Es condiciones normales, la prueba de depuracin de creatinina se practica cuando existe un dao renal evidente y se desea cuantificarlo. Los estados tempranos de la enfermedad renal crnica son silenciosos, y solamente pueden ser detectados por los exmenes de laboratorio. La evaluacin de la enfermedad renal crnica depende del nivel actual de la funcin renal. La velocidad de filtracin glomerular es considerada la prueba standard de oro para identificar el nivel de funcin renal tanto en individuos sanos como afectados. Los estados de la enfermedad renal crnica de acuerdo a la velocidad de filtracin glomerular son: Estado 1: normal= velocidad de filtracin glomerular > o igual a 90 mL/min/1.73m2. Estado 2: dao renal leve = 60-89 mL/min/1,73m2. Estado 3: dao moderado = 30-59 mL/min/1,73m2 Estado 4: dao severo = 15-29 mL/min/1,73m2 Estado 5: falla renal= < 15 mL/min/1,73m2
La velocidad de filtracin glomerular es una medicin directa de la capacidad de filtracin glomerular; la VFG disminuye en los pacientes glomerulopaticos con aumento en la proteinuria y disminuye en los pacientes con proteinuria baja. La velocidad de filtracin declina alrededor del 10% por decada despus de los 50 aos de edad. Algunos pacientes con una significativa velocidad de filtracin tienen un ligero

aumento de la creatinina srica. La depuracin est calculada en base a la superficie de rea del paciente. El porcentaje de error estimado en la determinacin de la depuracin utilizando orina de 24 horas est entre el 10-15%. La depuracin de creatinina disminuye en: Alteraciones de la funcin renal, enfermedades renales intrnsecas, glomerulonefritis, pelonefritis, sndrome nefrtico, disfuncin tubular aguda, amiloidosis. Choque Hemorragia Insuficiencia cardiaca congestiva Insuficiencia heptica
8.1.2 FUNDAMENTO
En medio alcalino la creatinina y otros compuestos presentes en el plasma reaccionan con el ion picrato dando un complejo de color amarillo rojizo (reaccin de Jaff) La densidad ptica de color rojo formado es proporcional a la cantidad de creatinina en el suero utilizado y por lo tanto al medir estos valores es posible calcular la cantidad de creatinina por unidad de volumen de muestra problema.

1. Equipo completo de creatinina 2. 3 celdas para espectrofotmetro Jos Manuel Prez Snchez 24
Manual de Practicas de Qumica Clnica 3. Espectrofotmetro 4. 2 Pipetas volumtricas de 1 ml 5. Pipetas automtica de 100 l 6. Equipo de puncin venosa 7. Tubos de ensaye 8. Pipeta pasteur 9. Termoblock
8.1.5. TECNICA
En trminos generales se procede de la siguiente manera:
1. Recoger la orina en intervalos de tiempo determinados y bien medidos. 2. Antes de iniciar la recoleccin, el paciente debe orinar para vacias la vejigan y enseguida tomar 2 vasos de agua (250 ml). 3. Recoger la orina producida durante exactamente 2 horas. (24 horas si es posible y en este caso mezclar y refrigerar los productos de cada miccin con los anteriores). 4. Tomar una muestra de sangre al paciente para detemrinacion de creatinina. 5. Medir el total de orina en ml y dividir entre 120 si la recojida fue de 2 horas, para sacar la cantidad total de orina producida por minuto. Cuantificar la creatinina en la muestra de orina.
8.1.5 OBSERVACIONES
8.1.6 CALCULORESULTADOS
A(M) de la muestra

Conc. de Creatinina(mg/dL) = _________________ A(S) del estndar x Conc. Est.
8.1.7 CONCLUSIONES
8.1.8 EVALUACION
1. Qu es la creatinina?
2. Qu nos indica un resultado de depuracin de creatinina?
3. Cundo debe mandarse realizar al laboratorio la detemrinacion de depuracin de

creatinina?
IX.
PRACTICA No.7
9.1 DETERMINACION DE ACIDO URICO SANGUINEO

9.1.1 INTRODUCCION
Este analito es producido por accin de la xantina oxidasa sobre la xantina y la pipoxantina, las cuales son producto de la degradacin del acido nucleico. Es importante cuantificar el acido urico sanguneo sobre todo para diagnosticar la enfermedad denominada gota, aunque a veces tambin se encuentran en los padecimientos que involucran la destruccin celular, como en la leucemia, neumona, anemia perniciosa y en el dao renal severo debido a la disminucin en su excrecin. Los valores sanguneos bajos son d epoco valor clnico y pueden deberse a hemodilucin, produccin disminuida o eliminacin renal aumentada.
9.1.2 FUNDAMENTO
El mtodo qumico para la determinacin del acido urico es una modificacin de la tcnica de Fossati. El perxido de hidrogeno formado por la accin de la uricasa sobre el acido urico, reacciona con DHBS (3,5-dicloro-2-hicroxibencensulfonico) y 4-aminoantiripirinaen presencia de peroxidasa para formar un complejo de quinoneimina de color rojo. URICASA Acido urico + 2 H2O + O2 -------------- Alantoina + CO2 + H2O DHBS + 4 aminoantipirina + 2 H2O2 ------------- Quinoneimina + 4H2O La intensidad del color es directamente proporcional ala concentracin del acido urico en el suero y su linealidad va hasta 20 mg/dl. Los valores normales para este analito son: Hombres: 3,5 a 7,2 mg/dl

Mujeres: 2,6 a 6,0 mg/dl
La muestra de elecion es suero fresco no hemolizado. La concentracin del estndar puede variar entre 5 y 8 dependiendo de el fabricante del reactivo que se utiliza.

1. Espectrofotmetro 2. Termoblock o bao maria (37C) 3. Celdas para espectrofotmetro 4. Pipetas serolgicas de 2 ml 5. 3 Tubos de ensaye 6. Pipeta automtica de 50l 7. Reactivo de Acido rico 8. Estndar de Acido rico
9.1.4. TECNICA
1. Preparar la solucin de trabajo mezclando el liofilizado con 25 ml del buffer (esta cantidad puede cambiar segn la tcnica). 2. Mezclar sin agitar aproximadamente 1minuto para que todo el liofilizado se disuelva y la solucin adquiera homogeneidad. 3. Coloca la soucin de trabajo en un frasco ambar para protegerlo de la luz. 4. Rotula 3 tubos de ensaye como blanco, estndar y muestra. 5. Coloca en cada uno de los tubos 2 ml, de la solucin de trabajo reconstituida.
Manual de Practicas de Qumica Clnica 6. Al tubo marcado como muestra, agregale 50 l de suero de el paciente, al tubo marcado como estandar agregale 50 l de el estndar y al tubo marcado como blanco agregale la misma cantidad de agua destilada. 7. Mezcla con cuidado y coloca tus tubos en el bao maria a 37C durante un tiempo minimo de 10 minutos y mximo 30 minutos. 8. Ajusta el espectrofotmetro a 520 nm y lea el estndar y la muestra contra el blanco.
9.1.5 OBSERVACIONES
9.1.6 CALCULOS Y RESULTADOS

Abs. de la Muestra _________________ Abs. del Estandar
Conc. acido urico (mg/dL) =
x Conc. del Est.
9.1.7 CONCLUSIONES
9.1.8 EVALUACION
1. Qu es lo que se produce a partir de la degradacin de los acidos nuclecos?
Manual de Practicas de Qumica Clnica 2. Cul es la enfermedad en la cual es impredecible el conocer el valor del acido
urico para poder diagnosticarla?
3. Menciona algunas causas por las cuales puede haber hiperuricemia:
4. Menciona otros padecimientos en los cuales puede estar incrementado el acido urico:
5. Menciona las cifras normales de acido urico, tanto para el hombre como para la mujer:
X.
PRACTICA No.8
30
Jos Manuel Prez Snchez
10.1 DETERMINACION DE COLESTEROL SANGUINEO 10.1.1 INTRODUCCION

El Colesterol es una grasa que produce nuestro organismo y que es necesaria para el normal funcionamiento celular, lo necesitamos para obtener energa y para la formacin y composicin de estructuras celulares vitales. La fbrica de colesterol es el hgado que se encarga de producir la cantidad necesaria para el correcto funcionamiento de nuestras clulas. El Colesterol, a su vez, est formado por unas fracciones que en dependencia de la densidad que tienen se les da un nombre u otro. As HDL no es ms que la fraccin de colesterol de alta densidad, LDL es la fraccin de colesterol de baja densidad y VLDL es la fraccin de colesterol de muy baja densidad. No todas las fracciones de colesterol son perjudiciales para la salud, ms bien al contrario, la fraccin HDL se comporta como preventiva de la cardiopata isqumica por lo que es bueno tener cifras de esta fraccin ligeramente altas. No ocurre lo mismo con las otras dos fracciones, LDL y VLDL, que se ha demostrado sobradamente su relacin directa con la aparicin de enfermedad cardiovascular. Efectivamente, estas dos fracciones son altamente nocivas y su exceso comporta una elevacin del riesgo de sufrir un evento isqumico cardiaco. Est demostrado que cifras bajas de estas fracciones, LDL y VLDL, son asimismo protectoras de la aparicin de enfermedad. La determinacin de los niveles de colesterol es fundamental en el adulto sano para comprobar que no existe alteracin y por tanto, no existe factor de riesgo para desarrollar enfermedad cardiovascular. En los que ya tienen las cifras de colesterol altas hipercolesterolemia. Sirve para que el mdico controle peridicamente estas cifras a fin de valorar la necesidad de corregirlas con tratamiento farmacolgico o diettico y valorar la aparicin de enfermedad cardiovascular.
10.1.2 FUNDAMENTO
El mtodo enzimtico para colesterol fue introducido en 1973 por Flegg y Richmond utilizando colesterol oxidasa de origen bacteriano, seguida de saponificacin qumica de los steres del colesterol. Roeschlau modific esta tcnica y Allain y col publicaron los primeros ensayos enzimticos completos, combinando colesterol oxidasa y colesterol esterasa. Este mtodo se basa en el de Allain y utiliza estas enzimas en combinacin con el reactivo peroxidasa/fenol-4-antipirina, de Trinder. La colesterol esterasa (CE) hidroliza los steres para originar colesterol libre y cidos grasos. El colesterol libre as producido ms el colesterol preformado se oxidan en presencia de colesterol oxidasa (Cox) para dar colest-4-en-3-ona y perxido de hidrgeno. Un cromgeno quinonaimina, con absorcin mxima de 500 nm, se produce cuando el fenol se acopla oxidativamente con 4-aminofenazona, en presencia de peroxidasa (POD) con perxido de hidrgeno. La intensidad del color rojo final es proporcional a la concentracin total de colesterol. CE Esteres de colesterol ---------- Colesterol + Acidos Grasos COx Colesterol + O2 -----------POD H2O2 + 4-aminofenazona + pHBs ------------ 2H2O + o-quinoemina colorido Colest-4-en-3-ona + H2O2
El reactivo de precipitacin de Stanbio de lipoprotenas de alta densidad (HDL) debe adquirirse por separado.

1. Espectrofotmetro Jos Manuel Prez Snchez 32
Manual de Practicas de Qumica Clnica 2. Termoblock o bao maria (37C) 3. Celdas para espectrofotmetro 4. Pipetas serolgicas de 2 ml 5. 3 Tubos de ensaye 6. Pipeta automtica de 50l 7. Reactivo de colesterol 8. Estndar de colesterol
10.1.4. TECNICA
1. Rotula 3 tubos de ensaye como blanco, estndar y problema. 2. Coloca en cada tubo 2.5 ml de la solucin de trabajo. 3. Al tubo marcado como problema, agregale 20 l de suero de el paciente. 4. Al tubo marcado como estndar agregale 20 l del el estndar. Y al tubo marcado como blanco agregale la misma cantidad pero de agua destilada. 5. Mezcla con cuidado y coloca tus tubos 10 minutos en reposo a 37C. 6. Y lee inmediatamente despus. La absorbancia a 520 nm, contra el blanco.
10.1.5 OBSERVACIONES

Abs. de la Muestra _________________ Abs. del Estandar
Conc. de colesterol(mg/dL) =
x Conc. del Est.
10.1.7 CONCLUSIONES
10.1.8 EVALUACION
1. Por qu la determinacin de colesterol se lee a 520 nm?
2. Cules son los valores normales de este analito?
3. Cul es el motivo por el cual la lectura espectrofotomtrica debe ser exactamente a los 10 minutos?
4. Menciona dos causas por las cuales el colesterol puede ser incrementado:
5. Menciona la clasificacin del colesterol indicando cual es el malo:
XI.
PRACTICA No.9
11.1 DETERMINACION DE COLESTEROL DE ALTA DENSIDAD (HDL). 11.1.1 INTRODUCCION

Lipoprotenas de alta densidad (HDL) Conocido como el "colesterol bueno" o HDLcolesterol se forma por un mecanismo complejo. La HDL "naciente" producido inicialmente en el hgado y en el intestino est constituido por fosfolpidos, algo de colesterol y apolipoprotena A-I, por accin de una enzima se transforma una molcula esfrica en la cual el ster de colesterol forman el ncleo central. La HDL se encarga de transportar el colesterol desde los tejidos perifricos hacia el hgado, adems, mediante un proceso denominado transporte en reserva del colesterol, concentran el colesterol libre circulante producto de la rotura de las clulas y lo transporta hacia el hgado para su excrecin. Se piensa que el poder antiaterognica del HDL se debe a su capacidad de I extraer el colesterol de los tejidos segn recientes investigaciones induce al dao en el endotelio vascular y favorece en esta forma la formacin de placas ateroesclerticas.
11.1.2 FUNDAMENTO

El polivinil sulfato, provoca la precipitacin de las LDL. El valor del colesterol de baja densidad se calcula a partir de la diferencia entre los valores de colesterol total en el suero y el colesterol presente en el sobrenadante de la precipitacin CE Esteres de colesterol ---------- Colesterol + Acidos Grasos COx Colesterol + O2 -----------POD H2O2 + 4-aminofenazona + pHBs ------------ 2H2O + o-quinoemina colorido Colest-4-en-3-ona + H2O2
Valores normales:

1. Espectrofotmetro 2. Centrifuga 3. Celdas para espectrofotmetro 4. Pipetas serolgicas de 2 ml 5. 3 Tubos de ensaye 6. Pipeta automtica de 50l 7. Reactivo de precipitante. Jos Manuel Prez Snchez 36
11.1.4. TECNICA
1. Deposita en un tubo de centrifuga 0,2 ml de muestra problema y agregale 0,1 ml de reactivo precipitante. 2. Mezcla y deja en reposo 15minutos a temperatura ambiente. 3. Centrifuga 15 minutos a 1500 rpm. 4. Separa el sobrenadante. 5. Rotula dos tubos de ensaye como blanco y problema. 6. Coloca en cada uno de los tubos 2 ml de la solucin de trabajo. Al tubo de ensaye marcado como problema agregale 50 l de sobrenadante, y al tubo marcado como blanco agregale la misma cantidad de agua destilada. 7. Mezcla con cuidado y coloca tus tubos de 10 a 20 minutos en reposo y en un tiempo mximo de 60 minutos. 8. Ajusta el espectrofotmetro a 500 nm y lee el problema contra el blanco.
Extincion X 187.9 = mg/dl
11.1.7 CONCLUSIONES
11.1.8 EVALUACION
1. Define el colesterol?
2. Cul es la diferencia fundamental entre el colesterol de baja densidad y el de alta

densidad?
3. Explica que es la arteroesclerosis?
4. Diferencia entre arterosclerosis y arterioesclerosis?
5. Indica como actua el polivinil Sulfato:
XII.
PRACTICA No.10
12.1 DETERMINACION DE COLESTEROL DE BAJA DENSIDAD (LDL). 12.1.1 INTRODUCCION

El colesterol como compuesto qumico y como parte integral del complejo sistema se sustancias que el organismo utiliza. Es indispensable en mukltiples funciones, pero el colesterol puede asociarse como lipoprotenas de alta densidad, lipoprotenas de baja densidad y como lipoprotenas de muy baja densidad. Consecuentemente se forma un complejo que contiene la esencia de el colesterol pero con diferente estructura ya que la asociacin es diferente. La importancia del cuantificar estos 3 diferentes tipos de colesteroles, es ver los facotres de riesgo para el paciente potencialmente propenso a una embolia o a una trombosis ya que dependiendo de la relacin que de ellos exista pueden presentarse enfermedades como la arterosclerosis o la arterioesclrerosis. Las lipoprotenas de baja densidad (LDL) son macromolculas circulantes derivadas del procesamiento lipoltico de las VLDL por accin de diversas lipasas extracelulares, principalmente la lipasa lipoproteica. Actualmente no se tiene claro el rol funcional de las LDL, ya que, al contrario de lo que generalmente se piensa, stas no transportan colesterol desde el hgado hasta los tejidos perifricos, sino que son captadas por el hgado para su eliminacin final de la circulacin. Este hecho queda de manifiesto en pacientes portadores de mutaciones en el gen codificante para la proteina receptora de LDL, quienes desarrollan niveles increblemente elevados de colesterol plasmtico y, concomitantemente, acumulan un depsito de colesterol en diversos tejidos, dada la incapacidad de su hgado para captar y eliminar las LDL circulantes.
12.1.2 FUNDAMENTO

Este colesterol no se determina qumicamente ya que con los datos de colesterol total, triglicridos y HDL es posible calcularlo. Clculos matematicos

1. Este analito se determina por calculo y no qumicamente,para ella se requiere el conocer: 2. La concentracin del colesterol total 3. La concentracin de HDL 4. La concentracin de Trigliceridos. 5.
A = Trigliceridos / 5 B = Colesterol HDL C= Resta de A B Conc. LDL = Colesterol Total - C = Mg/dl
12.1.7 CONCLUSIONES
12.1.8 EVALUACION
1. Qu es una lipropotreina?
2. Por qu unas lipoprotenas son consideradas como buenas y otras como malas?
3. Por qu intervienen los triglicridos en el conteo de el colesterol de alta densidad?
XIII.
PRACTICA No.11
13.1 DETERMINACION DE TRIGLICERIDOS. 13.1.1 INTRODUCCION

Los triglicridos, son las grasas neutras de la sangre, son quilomicrones formados por lipoprotenas de baja y de muy baja dendidad. Tienen por funcin formar el tejido de reserva y proporcionar a la celula los requerimientos que los lpidos tengan. Los triglicridos son el principal tipo de grasa transportado por el organismo. Recibe el nombre de su estructura qumica. El organismo digiere las grasas de los alimentos y libera triglicridos a la sangre. Estos son transportados a todo el organismo para dar energa o para ser almacenados como grasa. El hgado tambin produce triglicridos y cambia algunos a colesterol. El hgado puede cambiar cualquier fuente de exceso de caloras en triglicridos. los triglicridos se combinan con una protena en su sangre para formar lo que se llama lipoprotenas de alta y baja densidad. Estas partculas de lipoprotenas contienen colesterol. Para formar triglicridos en el hgado el proceso es similar; el hgado toma los carbohidratos y protenas sobrantes de la comida y los cambia a grasa. Esta grasa entonces se combina con protena y colesterol para formar lipoprotenas de muy baja densidad, que son liberadas al torrente circulatorio.
13.1.2 FUNDAMENTO
La determinacin de triglicridos sericos por via enzimtica se basa en la accin de la lipasa sobre ellos para descomponerlos en glicerol, 3 fosfato y ADP, a su ves los productos obtenidos, ante la accin de la oxidasa produce quinoneimina que es un complejo coloreado en forma proporcional a la concentracin de triglicridos en el suero. La determinacin de los niveles de triglicridos, cuando se lleva a cabo en conjunto con otros ensayos de lpidos, proporciona una ayuda en el diagnstico de hiperlipoproteinemia

primaria y secundaria. Tambin es til para dar seguimiento a la diabetes mellitus, nefrosis, obstruccin biliar y varias anormalidades metablicas que resultan de disturbios endcrinos. El glicerol y los cidos grasos se forman en una primera etapa por la accin de la lipasa sobre los triglicridos. El glicerol se fosforila por el adenosin-5'-trifosfato (ATP) para producir glicerol-3 fosfato (G-3-P) y adenosin-5'-difosfato (ADP) en una reaccin catalizada por la glicerol-cinasa (GK). Glicerol + ATP ---GK--- G-3-P + ADP La G-3-P es oxidada por la glicerolfosfato oxidasa (GPO) produciendo dihidroxiacetona fosfato (DAP) y perxido de hidrgeno. G-3-P + O2 ---GPO--- DAP + H2O2 Los perxidos reaccionan con 4-aminoantipirina y 4-clorofenol bajo la influencia cataltica de la peroxidasa (POD) para formar una quinoneimina de color rojo. 2H2O2 + 4-aminoantipirina + 4-clorofenol---POD--- quinoneimina + HCl + 4H2O

1. Espectrofotmetro 2. Bao maria 37C 3. Centrifuga 4. Celdas para espectrofotmetro 5. Pipetas serolgicas de 2 ml 6. 3 Tubos de ensaye Jos Manuel Prez Snchez 43
Manual de Practicas de Qumica Clnica 7. Pipeta automtica de 20 l 8. Reactivo de trigliceridos 9. Estndar de trigliceridos
13.1.4. TECNICA
1. Rotula 3 tubos de ensaye como blanco, estndar y problema. 2. Coloca en cada uno de los tubos 2 ml de la solucin de trabajo. 3. Al tubo marcado como problema agregar 20 l de suero de el paciente, al tubo marcado como estndar agregar 20 l del estndar y al tubo marcado con blanco agregas 20 l de agua destilada. 4. Mezcla con cuidado y coloca tus tubos 5 minutos en reposo y a un mximo de 60 minutos. 5. Ajusta el espectrofotmetro a 505 nm y lee el estndar y el problema, contra el blanco.

Abs Problema ___________ X Conc. Est. Abs Estandar
Conc. de Tg (mg/dl) =
13.1.7 CONCLUSIONES
13.1.8 EVALUACION
6. Concepto de Trigliceridos?
7. Menciona los beneficios que aportan los triglicridos al funcionamiento general del ser humano:
8. En que porcentaje los triglicridos, integran el tejido adiposo?
9. Qu funcin tiene el glicerol en la determinacin de trigliceridos?
10. Qu manifestaciones patolgicas se hacen presentes con la baja en los valores de triglicridos?
XIV.
PRACTICA No.12
14.1 DETERMINACION DE BILIRRUBINAS SANGUINEAS. 14.1.1 INTRODUCCION

Las bilirrubinas son substancias qumicas utiles en los procesos digestivos, pero su utilizacin es restringida por el hgado (hepatocito), que es quien lo produce, sin embargo, tambin existe en el interior de los globulos rojos y por lo tanto en forma natural y completamente normal, en el suero humano dando a este ese color amarillo paja caracterstico. La determinacin de bilirrubinas es de gran importancia, dada su clasificacin y a la relacin de ellas presentes en el suero, se desprender posiblemente el diagnostico del medico. Las bilirrubinas se clasifican en directas, indirectas y totales. Obviamente las indirectas resultas de la resta de las directas sobre las totales. La elevacin de la bilirrubina se manifiesta como ictericia. El umbral para la deteccin clnica de ictericia est entre 2 y 3 mg/dL. Cuando la hiperbilirrubinemia es directa (conjugada), se produce eliminacin de la bilirrubina por orina, lo que produce un color oscuro caracterstico, llamado coluria. Durante el perodo de recuperacin de un episodio de ictericia prolongada puede desaparecer la coluria pero mantenerse la ictericia, lo que se explica por la bilirrubina delta. Si hay una obstruccin completa de la va biliar o una falla de la excrecin heptica muy marcada de la bilirrubina, sta no llega al intestino y no produce la pigmentacin color caf de las deposiciones normales. Esto explica la acolia, que describe la presencia de deposiciones blanquecinas.
14.1.2 FUNDAMENTO

La mayora de los procedimientos clnicos de rutina para la determinacin de bilirrubina srica, estn basados en la clsica reaccin Diazo de Ehrlich, la cual se aplic primero a la estimacin de estos pigmentos biliares en suero en 1913 por Van den Berg y Snapper. Winkelman y colaboradores proporcionaron una revisin excelente de muchas metodologas de bilirrubina. Cuando una solucin de cido sulfanlico en cido clorhdrico diluido es combinada con nitrito de sodio, se forma cido nitroso. Este cido inestable, el cualdebe ser preparado en el momento del ensayo, reacciona para formar cido sulfanlico diazotizado. Este ltimo (tambin llamado p-bencendiazoniosulfonato) se acopla con la bilirrubina para producir azobilirrubina, la intensidad de color de este es proporcional a la concentracin de bilirrubina. Ya que los estndares de bilirrubina sufren una gran degradacin por su inestabilidad, el mtodo presentado utiliza una solucin acuosa de N-1-naftiletilendiamina dihidroclorhdrico como calibrador, de acuerdo con Bilissis y Speer4. Esta amina aromtica estable pura se acopla con el cido sulfanlico diazotizado bajo las condiciones de prueba para dar un colorante azo con cualidades espectrales similares a la azobilirrubina. El calibrador proporcionado ha sido preparado para obtener, por la tcnica descrita, un color equivalente al nivel de bilirrubina a 540 nm.

1. Espectrofotmetro 2. Bao maria 37C 3. Centrifuga 4. Celdas para espectrofotmetro 5. Pipetas serolgicas de 2 ml
6. 4 Tubos de ensaye 7. Pipeta automtica de 200 l 8. Reactivo de Bilirrubina Total Jos Manuel Prez Snchez 47
14.1.4. TECNICA
Bilirrubina Total 1. Rotula 2 tubos de ensaye como blanco y problema. 2. Coloca en cada uno de los tubos 0,2 ml de la solucin de trabajo No.1.
3. Al tubo marcado como problema, agregar una gota de nitrato de sodio.

4. Agregar a cada tubo 1 ml del reactivo No.3 que es el acelerador. 5. Agregar a cada tubo 0,2 ml de suero del paciente. (no hemolizado) 6. Mezclar y dejar en reposo de 10 a 60 minutos. 7. Agregar 1 ml de licor de fehling a cada uno de los tubos. 8. Mezclar y medir las extinciones contra el blanco a 578 nm.
Bilirrubina Directa
1. Rotular 2 tubos de ensaye como blanco y problema. 2. Coloca en cada uno de los tubos 0,2 ml de la solucin de trabajo No.1. 3. Al tubo marcado como problema, agregar una gota de nitrito de sodio. 4. Agregar a cada tubo 2 ml de solucin salina fisiolgica. 5. Aade a cada tubo 0,2 ml de suero problema. 6. Mezcla inmediatamente y deja resposar exactamente 5 minutos antes de leer en el espectrfotometro a 546 nm.


Bilirrubina Total: Extincin X 10.5 = mg/100 ml Bilirrubina Directa: Extincin X 14 = mg/dl Bilirrubina Indirecta: Bilirrubina Total - Bilirrubina Directa
14.1.7 CONCLUSIONES
14.1.8 EVALUACION
11. Cules son los valores normales de la Bilirrubina Total?
12. Cul es la Bilirrubina que se encuentra en el eritrocito?
13. Por qu se llama Bilirrubina Directa a una de ellas?
14. Qu diferencia existe entre la Bilirrubina que produce el Hepatocito y la que se

encuentra en el Glbulo rojo?
15. Qu es la Hiperbilirrubinemia?
XV.
PRACTICA No.13
15.1 DETERMINACION DE PROTEINA SERICAS TOTALES. 15.1.1 INTRODUCCION

Las protenas son un constituyente muy importante de las clulas y los tejidos del cuerpo humano. Se componen de aminocidos. Hay diferentes tipos de protenas con diferentes funciones, son as protenas los enzimas, algunas hormonas, la hemoglobina, el LDL (transportadora de colesterol), el fibringeno, el colgeno, las inmunoglobulinas, etc . Las protenas totales del suero se pueden separar en dos grandes grupos la Albmina y las globulinas. La albmina es la protena de ms concentracin en la sangre. La albmina transporta muchas molculas pequeas (bilirrubina, progesterona, y medicamentos), y tiene tambin la funcin de mantener la presin sangunea ya que favorece la presin osmtica coloidal para mantener lquidos en el torrente sanguneo y que no pasen a los tejidos, manteniendo un equilibrio. Las globulinas se pueden dividir en alfa-1, alfa-2, beta y gamma globulinas. La albmina representa el 60% de las protenas que contiene el suero, el resto son las globulinas. La determinacin de protenas totales se realiza para evaluar la posible presencia de enfermedades protenas. Si el valor de las protenas totales est alterado se debe realizar un estudio pormenorizado de cada grupo, albmina y alfa-1, alfa-2, beta y gamma globulinas, para saber cul es el desequilibrio existente. En algunos casos la albmina est baja y el resto de protenas est normal, debido a que la albmina es ms pequea y al aumentar la capilaridad puede perderse del espacio nutricionales, estado nutricional tras intervenciones de ciruga, enfermedades del rin o del hgado, o bien que el cuerpo no absorba bien suficientes

sanguneo a los tejidos y no hacerlo as las globulinas. Por ejemplo ocurre as en las enfermedades reumticas o colagenosis. En las enfermedades del hgado puede encontrarse lo mismo (albmina baja con protenas totales normales), en este caso es porque las globulinas se sintetizan en el retculo endotelial y la albmina en el hgado. Por ello el cociente de albmina/globulina que debe de ser superior a 1 puede aportar ms informacin para el mdico para saber el origen del problema
15.1.2 FUNDAMENTO
Las molculas de Protenas contienen un gran nmero de pptidos unidos. Cuando se tratan con iones de cobre (Cu2+) en solucin alcalina, se forma un complejo coloreado entre el cobre y los grupos amino/carbonil de estos pptidos. Una reaccin igual ocurre con el Biuret (compuestos ms simples formados por el calentamiento de la urea). As fu adoptado el trmino de Reaccin de Biuret El mtodo descrito est basado en los reportes de Weischselbaum y Gornal et al. El color violeta desarrollado es directamente proporcional al nmero de enlaces peptdicos de las protenas e independiente de la concentracin relativa de albmina y globulina3 . Valores normales:

En adultos son entre 6 y 8,3 gr/dl. En prematuros son entre 4,2 y 7,6 gr/dl. En recin nacidos son entre 4,6 y 7,3 gr/dl. En lactantes son entre 6 y 6,7 gr/dl. En nios son entre 6,2 y 8 gr/dl.


6. 3 Tubos de ensaye 7. Pipeta automtica de 25 l 8. Reactivo de Proteinas Totales.
15.1.4. TECNICA
1. Rotula 3 tubos de ensaye como blanco, estndar y problema. 2. Coloca en cada uno de los tubos 2,5 ml de la solucin de Biuret.
3. Al tubo marcado como problema, agregar 25 l de suero de el paciente. 4. Al tubo marcado como estndar agregar 25 l del estndar.
5. Al tubo marcado como blanco, agregar la misma cantidad pero en este caso de agua destilada. 6. Mezcla con cuidado y coloca tus tubos 15 minutos en reposo y un mximo de 45 minutos.
7. Ajusta el espectrofotmetro a 540 nm y lee el estndar y el problema, contra el

blanco.
15.1.5 OBSERVACIONES 15.1.6 CALCULOS Y RESULTADOS

Abs. Problema ___________ X Conc. Est. Abs Estandar
Conc. PT (mg/dl) =
15.1.7 CONCLUSIONES
15.1.8 EVALUACION
1. Qu es un enlace peptdico?
2. Cul es la unidad funcional en la formacin de proteinas?
3. Por qu se dice que las protenas son el origen de la vida?
4. Por qu el sulfato de cobre se aloja en el enlace peptdico?
5. Menciona otras pruebas tiles para la determinacin de Protenas Totales:
XVI.
PRACTICA No.14
16.1 DETERMINACION DE ALBUMINA SERICA. 16.1.1 INTRODUCCION

La albumina tiene 2 funciones principales que son regular la presin osmtica colidal y erl trnasporte de acidos grasos de cadenas largas, bilirrubina, hormonas pobremente solubles, calcio, aniones, drogas y vitaminas. Sirven como fuente endgena de aminocidos. Valores bajos de albumina en el suero, pueden resultar de desnutricin o enfermedad del hgado, un incremento en la excresion de orina o heces, o un cambio de distribucin entre los compartimientos intramusculares y extravasculares. Los valores altos de este analito pueden deberse a una deshidratacin aguda.
16.1.2 FUNDAMENTO
En 1964, el verde de Bromocresol (BCG) fue reportado como til en la determinacin cuantitativa de albmina srica por Bartholomew y Delaney y por Rodkey. Esta tcnica de unin fue publicada nuevamente un ao ms tarde por Rodkey quien describi un procedimiento colorimtrico inverso de BCG especfico para la albmina a un pH de 7.05 y 615 nm. Al mismo tiempo Watson4 reporto que el BCG era ms sensible para la albmina que el anaranjado de metilo o el HABA (cido 2-(4'-hidroxiazo benceno) benzoico), dos compuestos tambin utilizados en la cuantificacin de albmina srica por unin coloreada (teida). Posteriormente Dow-Pinto y Miyada et al reportaron la linealidad del mtodo de BCG en 5 g/dl, con interferencias mnimas por lpidos, hemoglobina y bilirrubina, adems de evidencias de una gran especificidad y sensibilidad as como una excelente correlacin para los valores de albmina entre la tcnica de BCG y la de electroforesis. El mtodo presentado es esencialmente el de Dumas, Watson y Biggs, modificado por el uso de citrato en lugar del amortiguador de succinato, un amortiguador de baja concentracin y una lectura colorimtrica final a 550 nm en lugar de 630 nm.
Valores normales: 3.8 a 5.1 g/dl.

6. 3 Tubos de ensaye 7. Pipeta automtica de 20 l 8. Reactivo de Albumina.
16.1.4. TECNICA
1. Coloca la solucin de trabajo en un frasco ambar para protegerlo de laluz. 2. Rotula 3 tubos de ensaye como blanco, estndar y problema.
3. Coloca en cada uno de los tubos 5 ml de la solucin de trabajo para albumina. 4. Al tubo marcado como problema, agregar 20 l del suero de el paciente. 5. Al tubo marcado como estndar agregar 20 l del estndar. 6. Al tubo marcado como blanco, agregar la misma cantidad pero en este caso de
agua destilada.
7. Mezcla con cuidado y coloca tus tubos en el bao maria a 37Cdurante un minimo
de tiempo de 15 minutos y un mximo de 30 minutos.
8. Ajusta el espectrofotmetro a 630 nm y lee el estndar y el problema, contra el

blanco.

Abs. Problema ___________ X Conc. Est. Abs Estandar
Conc. Albumina (mg/dl) =
16.1.7 CONCLUSIONES 16.1.8 EVALUACION

1. Indica las causas por las cuales puede encontrarse valores bajos de albumina serica:
2. Indica elmotivo por el cual la albumina sirve como almacen de aminocidos:
3. Cules son las concentraciones normales de albumina en el suero humano?
4. Hasta qu linealidad el mtodo responde en forma confiable?
XVII.
PRACTICA No.15
17.1 DETERMINACION DE FOSFATASA ALCALINA. 17.1.1 INTRODUCCION


Las fosfatasas son enzimas de baja especifidad que catalizan la hidrlisis de los eteres de acido fosfrico. En funcin de su pH de activacin se consideran fosfatasas alcalinas o acidas. La fosfatasa alcalina tiene su mxima actividad a un pH de 9.8 pero este puede variar de acuerdo al sustrato que se utilice. Este analito se encuentra en casi todos los tejidos del cuerpo pero principalmente en el epitelio intestinal, en los tubulos renales, en el hueso (osteoblastos), leucocitos, hgado y plancenta. La fosfatasa alcalina aumenta normalmente en el embarazo, en el peridod de crecimiento y reparacin sea. La patologa la estudia por sus valores altos en desordenes hepotbiliares y seos.
17.1.2 FUNDAMENTO
Los niveles de Fosfatasa Alcalina srica son de inters en el diagnstico de desordenes hepatobiliares y oseos asociados con incremento en la actividad osteoblstica. Las elevaciones moderadas de Fosfatasa Alcalina se pueden observar en varias condiciones que no involucren al hgado o al hueso. Entre estos estn la enfermedad de Hodgkin, falla congestiva cardiaca, colitis ulcerativa, enteritis regional e infecciones bacterianas intraabdominales. Las elevaciones tambin se observan durante el 3er. trimestre del embarazo. El procedimiento est basado en el trabajo de Bowers y McComb, en el cual se utiliza pnitrofenilfosfato y en el de Schifren y Burnett el cual trata los efectos de los errores de la longitud de onda y el ancho de la banda del espectro.

La Fosfatasa Alcalina hidroliza el 4-nitrofenilfosfato para formar 4-nitrofenol y fosfatos. El 4-nitrofenol es amarillo a un pH de 10.4 con una absorbancia mxima a 405 nm. El rango en el cual se forma el p-nitrofenol es directamente proporcional a la actividad de la Fosfatasa Alcalina.

1. Espectrofotmetro
2. Bao mara 37C

3. Centrifuga 4. Celdas para espectrofotmetro
5. Pipetas serolgicas de 2.5 ml

6. 3 Tubos de ensaye
7. Pipeta automtica de 25 l 8. Reactivo de Fosfatasa Alcalina.
17.1.4. TECNICA
1. Rotula 1 tubo de ensaye como problema.
2. Coloca en el tubo 2,5 ml de la solucin de trabajo.
3. Agregar 25 l del suero del paciente.

4. Mezcla con cuidado y coloca el tubo en reposo durante 1 minuto. 5. Ajusta el espectrofotmetro a 405 nm y lee el problema, contra el agua destilada.
6. Durante los 3 o 4 minutos lee exactamente cada minuto y registra la absorbancia.

A/min X vol. De ensayo (ml ) X 100 ____________________________ 18.8 X 1 cm X Vol de la muestra
Conc. Fosf. Alcalina =

1. Cules son los valores normales de la fosfatasa alcalina?
2. Define que es la fosfatasa?
3. En que se basa el principio para la determinacin de la fosfatasa alcalina?
4. Por qu en esta determinacin no se requiere correr el blanco de reactivo o

cuando menos una solucin estandar?
XVIII. PRACTICA No.16 18.1 DETERMINACION DE FOSFATASA ACIDA Y SU
FRACCION PROSTATICA.
18.1.1 INTRODUCCION
La fosfatasa acida es el nombre dado a todas las fosfatasas que tienen una actividad optima debajo de pH 7. La presencia de la fosfatasa acida en el suero procede de varias fuentes como son el hgado, rion,bazo, eritrocitos, plaquetas y prstata. Cada uno de los rganos anteriores, aporta una isoenzima de la fosfatasa acida que es especifica para ese rgano en particular. La fosfatasa acida prosttica es la de mayor inters clnico, ua que niveles altos de esta isoenzima pueden ser encontrados en el suero de pacientes que tienen carcinoma prosttico, en metstasis. La fosfatasa acida prosttica puede ser diferenciada de las dems fosfatasas acidas por la adicion de L-tartrato. Los valores normales Para la fosfatasa acida total son: 2,4 a 5,0 U/L Para la fosfatasa acida prosttica son: 0,0 a 1,2 U/L
18.1.2 FUNDAMENTO
Ya que la fosfatasa tambin se produce en otros tejidos, la isoenzima prosttica se debe distinguir de la no-prosttica para un diagnstico seguro. Los niveles elevados de la fosfatasa cida no-prosttica se han observado en pacientes con enfermedad de Paget,

hiperparatiroidismo con complicaciones esquelticas y en cnceres en los cuales se encuentre invadido el hueso. En 1959, Babson et al3 propone el a-naftilfosfato como un sustrato especfico para la fosfatasa cida fraccin prosttica. Sin embargo, Amador et al4, demostr que este compuesto puede ser hidrolizado por enzimas derivadas de otros tejidos. Hillman5 propone un mtodo en 1971 que incluye al 2-amino-5-clorotolueno diazotizado (Fast Red TR) en donde se forma un color diazo que absorbe fuertemente a 405 nm. El L-tartrato fue usado como un inhibidor especfico de la fosfatasa cida fraccin prosttica para establecer diferencialmente la cantidad de isoenzima prosttica6. El mtodo cintico anterior es especfico, rpido, simple y puede ser fcilmente adaptado a un instrumento automatizado.
El a-naftilfosfato es hidrolizado por la fosfatasa cida srica a -naftol y fsforo inorgnico. El rango de hidrlisis es proporcional a la actividad de enzima presente. El a-naftol producido se acopla con el Fast Red TR para producir un complejo colorido el cual absorbe luz a 405 nm. La reaccin puede ser cuantificada fotomtricamente debido a que el acoplamiento de la reaccin es instantneo. El L-tartrato inhibe la fosfatasa cida prosttica debido a que no interfiere con el mecanismo de la reaccin. Por tanto, si la prueba se lleva a cabo en presencia y en ausencia del L-tartrato, la diferencia entre los resultados de los dos ensayos es el nivel de fosfatasa cida prosttica en el suero.

1. Espectrofotmetro 2. Bao mara 37C 3. Centrifuga

4. Celdas para espectrofotmetro
5. Pipetas serolgicas de 3 ml 6. 2 Tubos de ensaye 7. Pipeta automtica de 200 l 8. Reactivo de Fosfatasa Acida.
9. Reactivo inhibidor de tartrato.
18.1.4. TECNICA
1. Rotula 2 tubos de ensaye como problema con tartrato y problema total. 2. Coloca en cada uno de los tubos 3 ml de la solucin de trabajo. 3. Al tubo marcado como problema con tartrato, agregar 60 l de solucin de
tartrato. 4. Agregar a ambos tubos 200 l del suero del paciente.
5. Mezclar con cuidado y colocar los tubos 5 minutos a bao mara (37C)
6. Ajustar el espectrofotmetro a 405 nm y lee ambos tubos en contra del blanco de agua destilada. 7. Repite ambas lecturas durante los siguientes 3 o 4 minutos, registrndolas las absorbancias para cada tubo.

A/min X vol. De ensayo (ml ) X 1000 ____________________________ 12.9 X 1 cm X Vol de la muestra
Conc. Fosf. Acida =
Fosfatasa acida Total = DA x min x 1240 Fosfatasa acida Prosttica = DA x min x 1264 DA, es el cambio de la absorbancia por minuto

1. Cules son los valores normales para ambas Fosfatasas?
2. Cul es el principio en la determinacin de este tipo de compuestos?
3. Cules son los principales rganos productores de esta enzima?
4. Por qu se le denomina Fosfatasa Acida?
XIX.
PRACTICA No.17
19.1 DETERMINACION DE LA TRANSAMINASA GLUTAMICO OXALACETICA (TGO).

19.1.1 INTRODUCCION
La Aspartato Aminotransferasa (AST) es una de varias enzimas que catalizan el intercambio de grupos amino y oxo entre alfa-aminocidos y alfa-oxocidos. Est ampliamente distribuida en los tejidos corporales con una cantidad significativa en corazn e higado. En pequeas cantidades se encuentra en msculo esqueltico, riones, pncreas, bazo, pulmones y cerebro. El dao a estos tejidos da por resultado una liberacin de la enzima AST a la circulacin general. En el infarto del miocardio la AST srica puede empezar a incrementarse dentro de las 6-8 horas despus del ataque, con un pico a los 2 das y vuelve a la normalidad para el cuarto o quinto da despus del infarto. En enfermedades como hepatitis, necrosis heptica, cirrosis y metstasis en hgado, se ha encontrado tambin aumento en las concentraciones sricas de AST.3 Karmen4 es el primero en reportar un mtodo cintico para la medicin de la actividad de AST en suero. Subsecuentemente, el mtodo se ha ido modificando y optimizando por Bergmeyer et al5
19.1.2 FUNDAMENTO
Los procedimientos de ensayo para la medicin de AST es similar al mtodo recomendado por la Federacin Internacional de Qumica Clnica (IFCC). La secuencia de la reaccin enzimtica empleada en el presente ensayo es como sigue:
La AST cataliza la transferencia del grupo amino aspartato a 2-oxoglutarato para producir oxalacetato y glutamato. El oxalacetato formado en la primera reaccin va a reaccionar con el NADH en presencia de malato deshidrogenasa (MDH) para formar NAD. La actividad de AST se determina midiendo el valor total de oxidacin del NADH a 340 nm. La

lactato deshidrogenasa se incluye en el reactivo para convertir el piruvato endgeno de la muestra a lactato durante la fase lag anterior a la medicin.

1. Espectrofotmetro 2. Bao mara 37C 3. Centrifuga 4. Celdas para espectrofotmetro
5. Pipetas serolgicas de 2 ml 6. 3 Tubos de ensaye 7. Pipeta automtica de 20 l 8. Reactivo de color transaminasa oxal actica.
9. Hidrxido de sodio 0,4 N.
19.1.4. TECNICA
1. Rotula 3 tubos de ensaye como blanco, estndar y problema. 2. Coloca en cada uno de los tubos 2 ml de la solucin de trabajo. 3. Al tubo marcado como problema, agregar 20 l de suero del paciente.
4. Al tubo marcado como estndar, agregar 20 l de el estndar. 5. Al tubo marcado como blanco, agregar la misma cantidad pero en este caso de agua destilada.
6. Mezclar con cuidado y colocar los tubos 5 minutos en reposo y un mximo de 60

minutos.
7. Ajustar el espectrofotmetro a 570 nm y lee el estndar y el problema en contra

del blanco.

Abs. Problema ____________ X conc. Est. Abs. Estandar
Conc. de TGO =
19.1.7 CONCLUSIONES
19.1.8 EVALUACION
1. Qu significan las siglas ASAT?
2. Qu significan las siglas TGO?
3. define a la Transaminacion? Jos Manuel Prez Snchez 66
4. En qu patologas se encuentra elevada la ASAT?
XX.
PRACTICA No.18
20.1 DETERMINACION DE LA TRANSAMINASA GLUTAMICO PIRUVICA (TGP). 20.1.1 INTRODUCCION

Las elevaciones de los niveles sricos de estas enzima en los casos de infarto al miocardio, son muy ligeros o no existen pero cuando el problema es de tipo heptico, sus valores se disparan, tanto como sea el dao en el hgado.
20.1.2 FUNDAMENTO
Para el anlisis de esta enzima se han aplicado mtodos espectrofotomtricos y colorimtricos. El principio bsico de su metodologa es la cuantificacin de DPNH a un pH de 10.

1. Espectrofotmetro
2. Bao mara 37C 3. Centrifuga 4. Celdas para espectrofotmetro 5. Pipetas serolgicas de 2 ml 6. 3 Tubos de ensaye 7. Pipeta automtica de 20 l
8. Reactivo de color transaminasa pirvica.

9. Hidrxido de sodio 0,4 N.
20.1.4. TECNICA
1. Rotula 3 tubos de ensaye como blanco, estndar y problema.
2. Coloca en cada uno de los tubos 2 ml de la solucin de trabajo.
3. Al tubo marcado como problema, agregar 20 l de suero del paciente.

4. Al tubo marcado como estndar, agregar 20 l de el estndar.
5. Al tubo marcado como blanco, agregar la misma cantidad pero en este caso de
agua destilada. 6. Mezclar con cuidado y colocar los tubos 5 minutos en reposo y un mximo de 60 minutos.

7. Ajustar el espectrofotmetro a 570 nm y lee el estndar y el problema en contra del blanco.

Conc. de TGP =
20.1.7 CONCLUSIONES
20.1.8 EVALUACION
1. Qu significa ALAT?
2. Qu significa TGP?
3. Cmo sern los valores encontrados de ALAT en un proceso de ictericia

obstructiva?
4. Enfoque tipo de tejidos es abundante ALAT?
5. Qu diferencia existe entre ALAT y ASAT?
6. Cules son los valores normales de ALAT?
XXI.
PRACTICA No.19
21.1 DETERMINACION DE LA DESHIDROGENASA LACTICA. 21.1.1 INTRODUCCION 21.1.2 FUNDAMENTO 21.1.3 MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS
1. Espectrofotmetro 2. Bao mara 37C

3. Centrifuga 4. Celdas para espectrofotmetro 5. Pipetas serolgicas de 2 ml 6. 3 Tubos de ensaye
7. Pipeta automtica de 20 l
8. Reactivo de Deshidrogenasa lactica.
21.1.4. TECNICA
1. Rotula 3 tubos de ensaye como blanco, estndar y problema. 2. Coloca en cada uno de los tubos 2 ml de la solucin de trabajo.
3. Al tubo marcado como problema, agregar 20 l de suero del paciente. 4. Al tubo marcado como estndar, agregar 20 l de el estndar.
5. Al tubo marcado como blanco, agregar la misma cantidad pero en este caso de agua destilada. 6. Mezclar con cuidado y colocar los tubos 5 minutos en reposo y un mximo de 60 minutos.

del blanco.

Conc. de DHL =
21.1.7 CONCLUSIONES
21.1.8 EVALUACION
1. Nombre de la enzima que cataliza la reaccin del acido lctico a piruvato?
2. Cules son las isoenzimas de la deshidrogenasa lctica?
XXII.
PRACTICA No.20
22.1 DETERMINACION DE LA CREATIN FOSFOQUINASA. 22.1.1 INTRODUCCION 22.1.2 FUNDAMENTO 22.1.3 MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS
1. Espectrofotmetro 2. Bao mara 37C 3. Centrifuga

4. Celdas para espectrofotmetro 5. Pipetas serolgicas de 2 ml 6. 3 Tubos de ensaye 7. Pipeta automtica de 20 l 8. Reactivo de CPK.
22.1.4. TECNICA
1. Rotula 3 tubos de ensaye como blanco, estndar y problema.
2. Coloca en cada uno de los tubos 2 ml de la solucin de trabajo. 3. Al tubo marcado como problema, agregar 20 l de suero del paciente.
4. Al tubo marcado como estndar, agregar 20 l de el estndar.
5. Al tubo marcado como blanco, agregar la misma cantidad pero en este caso de
agua destilada. 6. Mezclar con cuidado y colocar los tubos 5 minutos en reposo y un mximo de 60 minutos. 7. Ajustar el espectrofotmetro a 570 nm y lee el estndar y el problema en contra del blanco.

Conc. de CPK =


1. Define a la enzima CPK?
2. Qu significan las siglas CPK?
3. En que procesos biolgicos se hace necesario la terminacin de CPK?
4. Qu es una isoenzima?
XXIII.
PRACTICA No.21
23.1 DETERMINACION DE LIPASA SERICA. 23.1.1 INTRODUCCION 23.1.2 FUNDAMENTO 23.1.3 MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS
1. Espectrofotmetro 2. Bao mara 37C 3. Centrifuga 4. Celdas para espectrofotmetro 5. Pipetas serolgicas de 2 ml

7. Pipeta automtica de 20 l 8. Reactivo de Lipasa.
23.1.4. TECNICA
1. Rotula 3 tubos de ensaye como blanco, estndar y problema. 2. Coloca en cada uno de los tubos 2 ml de la solucin de trabajo.
3. Al tubo marcado como problema, agregar 20 l de suero del paciente. 4. Al tubo marcado como estndar, agregar 20 l de el estndar.
5. Al tubo marcado como blanco, agregar la misma cantidad pero en este caso de agua destilada. 6. Mezclar con cuidado y colocar los tubos 5 minutos en reposo y un mximo de 60 minutos.

del blanco.

Conc. de LIPASA =

1. Qu rganos estn interferidos en la patalogia de la lipasa? Jos Manuel Prez Snchez 75
2. Por definicin cual es la funcin de la lipasa?
3. Qu otra enzima se estudia normalmente junto con la lipasa?
4. A que se debe la falta de especificidad de la lipasa?
XXIV.
PRACTICA No.22
24.1 DETERMINACION DE AMILASA SERICA. 24.1.1 INTRODUCCION

La a-amilasa es una enzima que se encuentra en bacterias y tejidos animales, cataliza la hidrlisis del almidn y el glucgeno. Las determinaciones de la actividad de amilasa srica son de inters clnico en el diagnstico de la funcin pancretica. La alfa amilasa es una enzima que cataliza la hidrlisis de los enlaces alfa 1,4 glucsidos del almidon, produciendo diferentes compuestos de degradacin y como productos finales maltosa y maltotriosa. Se filtra a traves del glomrulo y puede ser encontrada en la orina. En el ser humano, las principales fuentes de alfa-amilasa son las secreciones del pncreas y las glanduklas salivales e incluso el hgado y el musculo esqueltico.

Valores altos de amilasa serica, pueden ser encontrados en la pancreatitis aguda, ulcera pptica perforada, obstruccion intestinal, obstruccion del ducto pancretico, carncinoma o clculos, paperas, falla renal con oliguria y anuria. Los valores altos pueden encontrarse en las primeras 24 horas, regresando a la normalidad en 2 o 4 dias. Los valores normales de amilasa van de 12 a 104 U/L.
24.1.2 FUNDAMENTO
El procedimiento enzimtico presentado est basado en las modificaciones de Wallenfels, utilizando como substrato p-Nitrofenil-D-maltoheptasido (PNPG7) con la glucosa terminal bloqueada para reducir la degradacin espontnea del substrato por la glucosidasa y la glucoamilasa2. La prueba se lleva a cabo en forma cintica con una pequea fase Lag y ofrece mucho ms estabilidad que las metodologas previas. La amilasa hidroliza la p-Nitrofenil-maltotriosa (PNPG3) y maltotetraosa. La glucoamilasa hidroliza el PNPG3 a p- Nitrofenilglicsido (PNPG1) y glucosa. El PNPG1 es hidrolizado por la glucosidasa a glucosa y p-Nitrofenol, el cual produce un color amarillo. El rango de incremento en la absorbancia es medido a 405 nm y es proporcional a la actividad de amilasa en la muestra.

1. Espectrofotmetro 2. Bao mara 37C 3. Centrifuga 4. Celdas para espectrofotmetro
5. Pipetas serolgicas de 2 ml
7. Pipeta automtica de 50 l 8. Reactivo de Amilasa. Jos Manuel Prez Snchez 77
24.1.4. TECNICA
1. Prerparar la solucin de trabajo mezclando el liofilizado con 25 ml del buffer
(esta cantidad puede cambiar segn la tcnica).
2. Mezcla sin agitar aproximdamente 1 minuto para que todo el liofilizado se

disuelva y la solucin adquiera homogeneidad. 3. Coloca la solucin de trabajo en un frasco ambar para protegerlo de la luz. 4. Coloca en un tubo 2 ml de la solucin de trabajo reconstituida.
5. Al tubo marcadocomo problema, agregar 50 l de suero del paciente.

6. Mezcla con cuidado y coloca tus tubos minutos. 7. Ajusta el espectro a 405 nm y lee el estndar y el problema, contra el blanco. en el bao maria a 37C durante 5

Abs/min X Vol. de la prueba (ml) X 1000 ________________________________ 9,2 X 1 cm X Vol. de la muestra
Conc. de Amilasa U/L =
9,2, es el coeficiente de variacin del 4NPO a 405 nm

1. Menciona los disntintos lugares en el que el ser humano puede producir amilasa:
2. Menciona los disntos rganos que interfieren en la patologa de la amilasa:
XXV.
PRACTICA No.23
25.1 DETERMINACION DE CALCIO SERICO. 25.1.1 INTRODUCCION

La mayora del calcio prensente en el cuerpo se encuentra unido. El calcio libre esta presente en el suero y tune varias funciones., por ejemplo, los iones de calcio disminuyen sanguiena y activan algunas enzimas. La hipercalcemia puede resultar por hiperparatiroidismo, hipervitaminosis D y algunas enfermedades neoplasicas. La hipocalcemia puede resultar esteatorrea, nefrosis, nefritis y pancreatitis.
25.1.2 FUNDAMENTO

A excepcin del mtodo de electrodo de in-selectivo (calcio libre) y la espectrofotometra de absorcin atmica (calcio total) los cuales son sofisticados y costosos, el mtodo ms simple y econmico para la determinacin de calcio total est basado en la combinacin directa de algunos reactivos como la orto-cresolftalena complexona (OCPC), para formar una reaccin de color estable. Tal procedimiento elimina la precipitacin del calcio o protena, como se requera en un principio segn los reportes de Connerty y Briggs. El procedimiento presentado esta basado esencialmente en el micromtodo de Sarker y Chauhan, donde el calcio se disocia de las protenas en solucin cida, seguido por una reaccin directa con el OCPC. En un subsecuente medio alcalino el complejo Ca-OCPC forma un color prpura, el cual posteriormente es medido a 550 nm. La cantidad de calcio en la muestra es proporcional al color desarrollado en la reaccin. La interferencia de magnesio es bloqueada por la 8-hidroxiquinolena y otros metales pesados son controlados por el cianuro de potasio. Stern y Lewis y

1. Espectrofotmetro
2. Centrifuga
3. Celdas para espectrofotmetro 4. Pipetas serolgicas de 2 ml 5. 3 Tubos de ensaye
6. Pipeta automtica de 20 l 7. Reactivo de color de Calcio.

8. Solucion estndar de Calcio.
25.1.4. TECNICA
1. Rotula 3 tubos como blanco, estndar y problema.
Manual de Practicas de Qumica Clnica 2. Coloca en cada uno de los tubos 2 ml de la solucin de trabajo. 3. Al tubo marcado como problema, agregar 20 l de suero del paciente 4. Al tubo marcado como estndar, agregar 20 l de el estndar.
5. Y altubo marcado como blanco, agregar la misma cantidad pero de agua destilada.
6. Mezcla con cuidado y coloca tus tubos 5 minutos y un mximo de 60 minutos. 7. Ajusta el espectro a 570 nm y lee el estndar y el problema, contra el blanco.
251.5 OBSERVACIONES 25.1.6 CALCULOS Y RESULTADOS

Abs. Problema ____________ X Conc. Estandar Abs. Estandar
Conc. de Ca (mg/dl) =
9,2, es el coeficiente de variacin del 4NPO a 405 nm
XXVI.
PRACTICA No.24
26.1 DETERMINACION DE FOSFORO. 26.1.1 INTRODUCCION
26.1.2 FUNDAMENTO

1. Espectrofotmetro 2. Bao Maria 37C 3. Centrifuga 4. Celdas para espectrofotmetro 5. Pipetas serolgicas de 2 ml 6. 3 Tubos de ensaye 7. Pipeta automtica de 50 l

8. Reactivo de color de Fosforo. 9. Solucin estndar de Fosforo.
26.1.4. TECNICA
1. Rotula 3 tubos como blanco, estndar y problema.
2. Coloca en cada uno de los tubos 2 ml de la solucin de trabajo.
3. Al tubo marcado como problema, agregar 20 l de suero del paciente 4. Al tubo marcado como estndar, agregar 20 l de el estndar. 5. Y altubo marcado como blanco, agregar la misma cantidad pero de agua
destilada. 6. Mezcla con cuidado y coloca tus tubos 5 minutos y un mximo de 60 minutos. 7. Ajusta el espectro a 570 nm y lee el estndar y el problema, contra el blanco.

Conc. de Fosforo (mg/dl) =

1. Menciona tres procesos patolgicos en los cuales interviene el Fsforo:

2. Cul es el termino medico que se utiliza para designar una deficiencia de Fsforo?
3. Qu rganos intervienen en el metabolismo del Fsforo?
4. Qu funcin tiene el Fsforo en la formacin de los huesos?
XXVII. PRACTICA No.25 27.1 DETERMINACION DE CLORUROS SERICOS. 27.1.1 INTRODUCCION
27.1.2 FUNDAMENTO

1. Espectrofotmetro 2. Bao Maria 37C 3. Centrifuga 4. Celdas para espectrofotmetro 5. Pipetas serolgicas de 2 ml 6. 3 Tubos de ensaye
7. Pipeta automtica de 50 l Jos Manuel Prez Snchez 84

8. Reactivo de titulacin de Cloruros.
9. Solucin estndar de Cloruros.
27.1.4. TECNICA
1. Rotula 3 tubos como blanco, estndar y problema. 2. Coloca en cada uno de los tubos 2 ml de la solucin de trabajo.
3. Al tubo marcado como problema, agregar 20 l de suero del paciente 4. Al tubo marcado como estndar, agregar 20 l de el estndar. 5. Y al tubo marcado como blanco, agregar la misma cantidad pero de agua
destilada. 6. Mezcla con cuidado y coloca tus tubos 5 minutos y un mximo de 60 minutos.
7. Ajusta el espectro a 570 nm y lee el estndar y el problema, contra el blanco.

Abs. Problema Conc. de Cloruros (mg/dl) = ____________ X Conc. Estandar Abs. Estandar
XXVIII. PRACTICA No.26 28.1 DETERMINACION DE HIERRO SERICOS. 28.1.1 INTRODUCCION
28.1.2 FUNDAMENTO

7. Pipeta automtica de 50 l
8. Reactivo de cid Hierro. 9. Solucin estndar de Hierro.
28.1.4. TECNICA
3. Al tubo marcado como problema, agregar 20 l de suero del paciente 4. Al tubo marcado como estndar, agregar 20 l de el estndar.
5. Y al tubo marcado como blanco, agregar la misma cantidad pero de agua destilada. 6. Mezcla con cuidado y coloca tus tubos 5 minutos y un mximo de 60 minutos.

Conc. de Hierro (mg/dl) =

1. Define el termino Anemia?
2. Explica el Biometabolismo del Hierro?
3. Relacion que tiene el Hierro con la Hemoglobina?
4. Menciona tres procesos patolgicos en los cuales intervenga el Hierro:
XXIX.
PRACTICA No.27
29.1 DETERMINACION DE SODIO SERICO. 29.1.1 INTRODUCCION
29.1.2 FUNDAMENTO

1. Espectrofotmetro 2. Bao Maria 37C 3. Centrifuga 4. Celdas para espectrofotmetro 5. Pipetas serolgicas de 2 ml 6. 3 Tubos de ensaye 7. Pipeta automtica de 50 l 8. Reactivo de Sodio. 9. Solucin estndar de Sodio.
29.1.4. TECNICA
3. Al tubo marcado como problema, agregar 20 l de suero del paciente 4. Al tubo marcado como estndar, agregar 20 l de el estndar. 5. Y al tubo marcado como blanco, agregar la misma cantidad pero de agua
destilada. 6. Mezcla con cuidado y coloca tus tubos 5 minutos y un mximo de 60 minutos. 7. Ajusta el espectro a 570 nm y lee el estndar y el problema, contra el blanco.

Conc. de Sodio (mg/dl) =
1. Define Hiponatremia?
2. Define Hiperantremia?

3. Menciona tres procesos patolgicos en los cuales intervenga el sodio:
4. A que otro electrolitro esta ntimamente ligado el sodio?
XXX.
PRACTICA No.29
30.1 DETERMINACION DE POTASIO SERICO. 30.1.1 INTRODUCCION 30.1.2 FUNDAMENTO

7. Pipeta automtica de 50 l 8. Reactivo de Potasio.
30.1.4. TECNICA
3. Al tubo marcado como problema, agregar 20 l de suero del paciente Jos Manuel Prez Snchez 91
Manual de Practicas de Qumica Clnica 4. Al tubo marcado como estndar, agregar 20 l de el estndar.
5. Y al tubo marcado como blanco, agregar la misma cantidad pero de agua destilada. 6. Mezcla con cuidado y coloca tus tubos 5 minutos y un mximo de 60 minutos.

Conc. de Potasio (mg/dl) =

1. Diferencia entre hipotasemia e hipocalcemia?
2. Menicona cual es la principal metodologa para la determinacin de Potasio:
3. Menciona tres procesos patolgicos en los cuales intervenga el Potasio:
4. Menciona las principales fuentes vegetales de las que obtenemos Potasio:
XXXI.
CONCLUSIN .
La realizacin de los estudios aqu descritos no solo requieren del sentido comn del profesionista, sino debe guiarse mediante un mtodo que se ajuste a las necesidades del laboratorio y pueda satisfacer nuestras demandas.
En conlusion; es asi como podemos darnos cuenta de la importancia de las pruebas de qumica clnica, la realizacin de este manual cumplir sus objetivos cuando los alumnos tengan una opcin mas para guiarse en su formacin como nuevos profesionistas.
BIBLIOGRAFA
Balcells, A. 1999. La Clnica y el Laboratorio. Ed. Masson. Barcelona, Espaa. Florez, J. 1985. Manual de Diagnstico Clnico y de Laboratorio. Ed. Manual moderno, S.A. de C.V. Mxico, D.F.- Santaf Bogot. Henry, J. B. 1988. (Todd-Sanford-Davindshon). Diagnstico y Tratamientos Clnicos por el Laboratorio. Tomo I. Ed. Salvat. Barcelona, Espaa. Morn, V. L. 1993. Obtencin de Muestras Analticas Sanguneas de Calidad Analtica (mejora continua de la fase preanaltica). Ed. Mdica Panamericana. Mxico, D.F.

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Manual de Practicas de Qumica Clnica

Jos Manuel Prez Snchez 1

Manual de Practicas de Qumica Clnica

Jos Manuel Prez Snchez

Manual de Practicas de Qumica Clnica

3.1 DETERMINACION DE GLUCOSA SANGUINEA. 3.1.1 INTRODUCCION

Jos Manuel Prez Snchez 3

3.1.3 MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS.

3.1.5. OBSERVAVIONES 3.1.6 CALCULOS Y RESULTADOS

Jos Manuel Prez Snchez 5

2. Por qu este mtodo es exacto y especifico?

3. Qu desventajas ves en este mtodo?

4. Por qu el suelo no debe estar hemolizado?

4.1 DETERMINACION DE LA CURVA DE TOLERANCIA A LA GLUCOSA

Manual de Practicas de Qumica Clnica

Jos Manuel Prez Snchez 7

A este proceso se le denomina sistemas de relacin acopladas.

4.1.3 MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS.

Manual de Practicas de Qumica Clnica

Jos Manuel Prez Snchez 9

Manual de Practicas de Qumica Clnica

3. En qu pacientes est indicado el estudio de curva de tolerancia a la glucosa?

4. Cmo se llama la substancia que se produce en las Clulas Betapancreaticas?

Jos Manuel Prez Snchez 10

Manual de Practicas de Qumica Clnica

5.1 DETERMINACION DE UREA SANGUINEA 5.1.1 INTRODUCCION

Manual de Practicas de Qumica Clnica

5.1.4 MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS

Manual de Practicas de Qumica Clnica 1. Qu es la urea?

2. en que padecimientos se encuentran elevados los valores de urea?

3. Qu ventajas presenta este mtodo sobre el mtodo tradicional para urea?

4. Por qu es indispensable el control de la temperatura de reaccin en este

5. Escribe la formula qumica de la urea?

Jos Manuel Prez Snchez 15

Manual de Practicas de Qumica Clnica

6.1 DEPURACION DE UREA SANGUINEA 6.1.1 INTRODUCCION

Jos Manuel Prez Snchez 16

Manual de Practicas de Qumica Clnica

6.1.4 MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS

Jos Manuel Prez Snchez 18

Manual de Practicas de Qumica Clnica

2. Por qu es importante que el paciente vacie la vejiga al incio de la toma de

3. Nombre del Quimico que sintetizo por primera vez la urea?

4. Menciona el ciclo a travs del cual se forma la urea en el organismo:

5. El mtodo tradicional para la determinacin de urea se basa en el uso de la susbtancia llamada:

7.1 DETERMINACION DE CREATININA SANGUINEA 7.1.1 INTRODUCCION

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7.1.4 MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS

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2. En que padecimientos se encuentran valores altos de creatinina?

3. Cules son los valores normales de creatinina serica?

4. Esquematice la formula qumica de la creatinina:

5. Cul es la estructura qumica bajo la cual se encuentra libre la creatinina?

8.1 DEPURACION DE CREATININA 8.1.1 INTRODUCCION

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8.1.4 MATERIAL, EQUIPO Y REACTIVOS

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2. Qu nos indica un resultado de depuracin de creatinina?

3. Cundo debe mandarse realizar al laboratorio la detemrinacion de depuracin de

9.1 DETERMINACION DE ACIDO URICO SANGUINEO

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