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AVALIAO DO COMPORTAMENTO REOLGICO DOS DIFERENTES MEIOS DE PRODUO DE GOMA XANTANA A PARTIR DO CALDO DE CANA Talita Alexandrina de Arajo1, Sandra Faria1, Francisca Pessoa de Frana2 e Vicelma Luiz Cardoso1.
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Universidade Federal de Uberlndia - Faculdade de Engenharia Qumica Caixa Postal 593 - Cep: 38.400-902 - Uberlndia - MG e-mail: talitaeq@yahoo.com.br e vicelma@ufu.br 2 Universidade Federal do Rio de Janeiro - Escola de Qumica Caixa Postal 68502 - Cep: 21.945-970 - Rio de Janeiro - RJ

RESUMO O propsito desse estudo avaliar o potencial do caldo de cana como matria prima para obteno de meios fermentados com caractersticas reolgicas de fluido pseudoplstico. Goma Xantana um biopolmero produzido por fermentao, utilizando como fonte de carbono glicose ou sacarose, na presena de Xanthomonas campestris. Para tal utilizou-se duas variedades de cana, RB 835486 e SP 791011, e foram pesquisados diferentes meios de produo em processo fermentativo batelada. No estudo reolgico do meio fermentado em fase preliminar foram determinados estatisticamente valores para K (ndice de consistncia) e n (ndice de comportamento) visando selecionar a variedade de cana e o meio de produo. Com base na anlise dos resultados obtidos para testes preliminares, o melhor desempenho ocorreu quando a variedade de cana SP 791011 e o meio mineral suplementado com o menor nmero de substncias foram empregados, fornecendo K e n, respectivamente, iguais a 10,293 Kg.m-1.sn-2 e 0,224. A concentrao de goma e o fator de converso de substrato em produto YP/S assumiram valores correspondentes a 7,48 g/L e 0,32 g.g-1. Portanto, a biossntese da xantana a partir do caldo de cana merece peculiar ateno, constituindo assim, uma possibilidade promissora para sua produo em larga escala.

INTRODUO A goma xantana um biopolmero classificado como heteroexopolissacardeo ramificado, aninico, produzido por fermentao, empregando a bactria Xanthomonas campestris. Essas bactrias apresentam clulas em forma de bastonetes, Gram-negativas e ocorrem predominantemente isoladas. Dentre as gomas microbianas, a xantana ocupa lugar de destaque no mercado por apresentar propriedades reolgicas bastante distintas e incomuns, tais como alto grau de

pseudoplasticidade e elevada viscosidade, mesmo a baixas concentraes. O sucesso da goma funo de exibir diversas vantagens como espessante, estabilizante, gelificante, agente de suspenso e floculao nas indstrias alimentcia, cosmtica e petrolfera, dentre outras. Fluidos Newtoniano e No-Newtoniano Os fluidos podem ser classificados de acordo com a relao entre a tenso de cisalhamento aplicada e a taxa de deformao do fluido. Fluidos para os quais a tenso de cisalhamento

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diretamente proporcional taxa de deformao so denominados fluidos newtonianos. A maioria dos fluidos comuns, tais como a gua, ar e a gasolina, tem comportamento muito prximo ao newtoniano sob condies normais. O termo no-newtoniano usado para classificar todos os fluidos nos quais a tenso de cisalhamento no diretamente proporcional taxa de deformao. Dentre esses fluidos, existem os fluidos de Ostwald, que so classificados em fluido dilatante, cuja viscosidade aparente aumenta com o aumento da tenso cisalhante aplicada, e o fluido pseudoplstico, cuja viscosidade aparente diminui com o aumento da tenso cisalhante aplicada. H tambm os fluidos de Bingham, que se comportam como slidos quando uma tenso abaixo da tenso de cisalhamento crtica aplicada. Pastas de dente, asfalto e vidro so exemplos de fluido Binghamiano (Fox & McDonald, 1981). MATERIAIS E MTODOS Microrganismo Foi utilizada a bactria Xanthomonas campestris pv. campestris NRRL B-1459 fornecida pela Coleo de Cultura Tropical da Fundao Andr Tosello. Meios de Cultivo As linhagens da bactria Xanthomonas campestris pv. campestris foram mantidas em meio YMA (extrato de levedura malte gar) (Nakajima et al., 1990) com a seguinte composio em

g/L: glicose 10,0, extrato de levedura 3,0 extrato de malte 3,0, peptona 5,0, gar 15,0. O pH do meio foi ajustado para 6,0 e a esterilizao foi a 1100 C por 20 min. Matria-prima Os experimentos foram conduzidos empregando caldo de cana como fonte de sacarose proveniente de duas variedades de cana-de-acar: RB 835486 e SP 791011. Para a realizao dos testes preliminares utilizou-se caldo de cana diludo a 40 g/L oriundo de caldo bruto nas seguintes concentraes de sacarose: 166,6 g/L e 179,6 g/L correspondendo nesta ordem s variedades de cana RB 835486 e SP 791011. Em funo dos resultados obtidos nos testes preliminares, o ensaio subseqente foi efetuado apenas com a variedade SP 791011, para a qual assumiu concentrao de sacarose no caldo bruto igual a 270,0 g/L. Composio dos meios de produo Na fase preliminar dos ensaios considerou-se cinco situaes bastante distintas em termos de suprimento dos meios adotados e de concentrao de sacarose com vista biossntese da xantana. O meio de produo mais completo, com dez componentes (Meio B), mostrado na Tabela 1 foi extrado de Lima (1999). As demais composies dos Meios C e D foram investigadas por excluso de algumas substncias. Os Meios A e E pesquisados contemplaram as situaes utilizando caldo bruto e caldo de cana diludo a 40,0 g/L em sacarose, respectivamente.

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Tabela 1: Componentes dos meios de produo e suas respectivas concentraes em g/L.

Componentes dos meios de produo Caldo de cana diludo extrato de levedura cido ctrico NH4NO3 MgSO4.7H2O Na2HPO4 KH2PO4 Na2SO4 MnCl2 Ca(OH)2 FeSO4.7H2O gua destilada 10 componentes Meio B 40,0 g em sacarose 3,0 g 3,0 g 0,86 g 0,2 g 2,5 g 2,5 g 1,13 g 0,03 g 0,01 g 0,01 g 1000,0 mL 6 componentes Meio C 40,0 g em sacarose 3,0 g 3,0 g 0,86 g -2,5 g 2,5 g 1,13 g ---1000,0 mL 4 componentes Meio D 40,0 g em sacarose 3,0 g -0,86 g -2,5 g 2,5 g ----1000,0 mL

Produo de goma xantana em escala de bancada Os experimentos relativos a testes preliminares foram conduzidos em erlenmayers de 500 ml de capacidade til contendo 50 ml de meio de produo. As fermentaes foram realizadas em mesa de agitao a 120 rpm, na temperatura de 2810C por 48 horas. A concentrao celular mdia do inculo foi de 0,43 g/L. Determinao da Biomassa atravs de massa seca O mosto foi diludo 1:1 em soluo salina a 0,85% (Vuyst & Vermeire, 1994) e as clulas foram separadas por centrifugao a 12500 rpm por 40 minutos. Em seguida, as clulas foram lavadas em soluo salina 0,85% para completa eliminao dos componentes do meio e dos metablitos. A quantificao celular foi feita atravs de massa seca a 90o C 1o C, em estufa, at peso constante. Determinao quantitativa da sacarose A sacarose presente no caldo de cana e nas amostras retiradas do processo no tempo estipulado foi hidrolisada para obter glicose e frutose, cujas determinaes foram feitas por mtodo enzimtico utilizando o kit glicose-oxidase (GPO-PAP, cepa) (Shu & Yang, 1990). Aps a reao enzimtica,

a intensidade da cor da soluo era medida a 500 nm em espectrofotmetro. Condies de hidrlise da sacarose Para 1 mL de amostra, acrescentar 1 mL de cido clordrico 2 N. Aquecer entre 65o e 70o C por 10 minutos, resfriar em gua corrente e adicionar 3 mL de hidrxido de sdio 1 N. O clculo da concentrao de sacarose em g/L foi efetuado de acordo com a Equao 1. Csac. = fator de calibrao*mdia da leitura (absorbncia)*D*(1/100)*1,9

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Recuperao e purificao da goma O mosto fermentado diludo em gua na razo de 1:1 foi processado em centrfuga para retirada das clulas a 12500 rpm por 40 minutos. O sobrenadante foi filtrado a vcuo e tratado com soluo de KCl e o polmero recuperado por precipitao com etanol. Para 10 mL do mosto diludo centrifugado, adicionam-se 3 mL de soluo saturada de KCl e 20 mL de etanol absoluto, obtendo dessa forma, sob agitao, a goma (Ramirez & Fucikovsky, 1988). Alves (1991) sugere e assim procedeu-se lavagem do precipitado com solues de etanol em concentraes crescentes iguais a 70%, 80%, 90% e etanol absoluto, o qual permaneceu em contato por cerca de 10 minutos. A secagem do produto foi

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realizada em placas de Petri, em estufa temperatura de 300C. Avaliao do comportamento reolgico A reologia do mosto fermentado foi determinada com o auxlio do remetro Brookfield RVDVIII. Para tal, foram utilizados os dados de tenso cisalhante(), medidos a partir de taxas de deformao(), seguindo o modelo de Ostwald de Waele ou power-law (Chhabra & Richardson, 1999). Com os valores de e avaliados estatisticamente por uma estimativa no linear obtm-se K (ndice de consistncia) e n (ndice de comportamento) para os meios fermentados. Assim, a viscosidade absoluta para um fluido power-law foi determinada a partir da Equao 2.

a =

= K ( )n 1

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RESULTADOS E DISCUSSES Analisando os resultados obtidos para os testes preliminares nas Tabelas 2 e 3 e Figuras 1 e 2 verificou-se que, utilizando os meios de A a E, os valores de K e n encontrados so representativos de fluidos pseudoplsticos em ambas as variedades de cana. No entanto, avaliando outras variveis experimentais,

concluiu-se que a variedade SP791011 apresentou melhor desempenho em termos de valores para K e n, uma vez que estes parmetros se mostraram mais representativos de fluidos pseudoplsticos. Observou-se que as fermentaes conduzidas com a variedade SP791011 apresentaram maior consumo de substrato para todos os meios de produo empregados. Comparando as figuras 1 e 2 verificou-se tambm que a variedade SP791011 apresentou maior viscosidade absoluta do meio fermentado. A concentrao de goma e o fator de converso de substrato a produto iguais a 7,48 g/L e 0,32 g.g-1, respectivamente, obtidos nesse estudo precisam ser melhor investigados pois, Torrestiana et al. (1990) usando um meio com 24 g/L de sacarose e trabalhando com a mesma linhagem de microrganismos obtiveram uma concentrao de xantana de 7,8 g/L. Evidentemente, esperava-se um valor de concentrao de goma mais elevado, uma vez que as concentraes iniciais de sacarose foram to distintas. Tal fato pode ser explicado com base nas condies experimentais adotadas, sugerindo a realizao de ensaios utilizando outras condies relevantes para o processo.

Tabela 2: Resultados obtidos das fermentaes para a variedade RB 835486 em diferentes meios de produo.
Variveis experimentais sacarose residual (g/L) sacarose consumida (g/L) % utilizada de substrato pH final m [cP] a 1s-1 K (Kg.m-1.sn-2) n R2 Meio A 142,7 23,9 12,48 2,0 4,92 0,02 2960,5 2,960 0,309 0,998 Meio B 14,3 25,7 64,26 2,5 6,55 0,05 2222,0 2,222 0,380 0,998 Meio C 13,6 26,4 65,90 4,0 6,47 0,02 2230,3 2,230 0,365 0,998 Meio D 26,7 13,3 33,35 3,0 6,59 0,04 2686,4 2,686 0,288 0,997 Meio E 35,0 5,0 12,52 0,5 4,71 0,01 885,0 0,885 0,342 0,998

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Tabela 3: Resultados obtidos das fermentaes para a variedade SP 791011 em diferentes meios de produo.
Variveis experimentais sacarose residual (g/L) sacarose consumida (g/L) % utilizada de substrato pH final m [cP] a 1s-1 K (Kg.m-1.sn-2) n R2
10000

Meio A 144,8 34,9 19,41 2,0 5,61 0,02 3435,8 3,436 0,309 0,998

Meio B 10,6 29,4 73,43 1,0 7,44 0,01 3152,9 3,153 0,361 0,998

Meio C 11,5 28,5 71,30 3,5 7,39 0,01 4491,7 4,492 0,319 0,999

Meio D 14,0 26,0 64,99 2,0 6,19 0,02 5675,5 5,675 0,244 0,999

Meio E 31,9 8,1 20,30 1,5 5,22 0,04 1290,3 1,290 0,288 0,996
Variedade da cana: SP791011
caldo bruto

Variedade da cana: RB835486

caldo bruto dez componentes seis componentes

10000

dez componentes seis componentes

Viscosidade absoluta do mosto (cP)

Viscosidade absoluta do mosto (cP)

caldo diludo quatro componentes

caldo diludo quatro componentes

1000

1000

100 0 1 10 100

100 0 1 10 100

Taxa de deformao (1/s)

Taxa de deformao (1/s)

Figura 1: Viscosidade absoluta do mosto fermentado em funo da taxa de deformao para diferentes meios de produo quando se utiliza caldo de cana proveniente da variedade RB 835486.

Figura 2: Viscosidade absoluta do mosto fermentado em funo da taxa de deformao para diferentes meios de produo quando se utiliza caldo de cana proveniente da variedade SP 791011.

CONCLUSES Os meios de produo pesquisados a partir das variedades de cana RB 835486 e SP 791011 forneceram valores de K e n representativos de fluido pseudoplstico, entretanto a variedade de cana SP 791011 apresentou melhor desempenho em relao a valores de K e n, porcentagem de substrato utilizada e viscosidade. O caldo de cana constitui uma matria prima promissora para a produo de goma xantana.

O caldo de cana constitui uma matria prima promissora para a produo de goma xantana. NOMENCLATURA

K - ndice de consistncia (Kg.m-1.sn-2) n - ndice de comportamento YP/S - Fator de converso de substrato em produto (g.g-1) Csac.- Concentrao de sacarose (g/L) - Taxa de deformao (s-1) a - Viscosidade absoluta (cP) - Tenso cisalhante (N/m2) D - Diluio

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R2 - Coeficiente de correlao REFERNCIAS ALVES, R.S.A., Efeito de alguns nutrientes na formao de goma xantana por Xanthomonas campestris pv. Campestris LMI-3. Rio de Janeiro: UFRJ/Engenharia Qumica, 1991. 126p. Dissertao (Mestrado em Tecnologia dos Processos Qumicos e Bioqumicos) Escola de Qumica, Universidade Federal do Rio de Janeiro, 1991. CHHABRA, R.P. e RICHARDSON, J.F., Non-Newtonian Flow in the Process Industries Fundamentals and Engineering Applications, Butterworth Heinemann, Great Britain, 436 p. (1999). FOX, R.W.e McDONALD, A.T., Introduo mecnica dos fluidos., 2edio, p.25-27, 1981, Guanabara Dois, RJ. LIMA, M.A.G.A., Obteno e Caracterizao de Xantanas Produzidas por Diferentes Linhagens de Xanthomonas campestris pv. campestris. Tese de doutorado UFRJ. Escola de Qumica. Tecnologia de Processos Qumicos e Bioqumicos, 1999. NAKAJIMA, S., FUNAHASHI, H., YOSHIDA, T., Xanthan gum production in a fermentor with twin impellers. Journal of Fermentation and Bioengineering, v. 70, n. 6, p. 392 397, 1990. RAMREZ, M. E., FUCIKOVSKY, L., GARCA-JIMNEZ, F. et al. Xanthan gum production by altered pathogenicity variants of Xanthomonas campestris. Applied Microbiology and Biotechnology, v. 29, p. 5 10, 1988. SHU, C.-H.e YANG, S.-T. Effects of temperature on cell growth and xanthan production in batch cultures of Xanthomonas campestris.

Biotechnology and Bioengineering, v. 35, p. 454 468, 1990. TORRESTIANA, B., FUCIKOVSKY, L., GALINDO, E. Xanthan production by some Xanthomonas isolates. Letters in Applied Microbiology, v. 10, p. 81 83, 1990. De VUYST, L. e VERMEIRE, A. Use of industrial medium components for xanthan production by Xanthomonas campestris. Applied Microbiology Biotechnology, v.42, p.187 - 191, 1994. AGRADECIMENTOS Os autores so imensamente gratos pelo suporte financeiro concedido pelos rgos CNPq e CAPES.