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UNIOESTE UNIVERSIDADE ESTADUAL DO OESTE DO PARAN CAMPUS DE MARECHAL CNDIDO RONDON CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS CURSO DE AGRONOMIA

MAICO RODRIGO BREUNIG HOFFMANN

CONTROLE DO CRESTAMENTO BACTERIANO COMUM POR Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii E LEO ESSENCIAL DE LARANJA EM FEIJOEIRO SUSCETVEL E MODERADAMENTE RESISTENTE

MARECHAL CNDIDO RONDON MAIO/2012

MAICO RODRIGO BREUNIG HOFFMANN

CONTROLE DO CRESTAMENTO BACTERIANO COMUM POR Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii E LEO ESSENCIAL DE LARANJA EM FEIJOEIRO SUSCETVEL E MODERADAMENTE RESISTENTE

Monografia

apresentada

Universidade

Estadual do Oeste do Paran - UNIOESTE, como parte das exigncias do curso de Agronomia, para obteno do titulo de

Engenheiro Agrnomo. Orientador: Prof Dr. Odair J. Kuhn

MARECHAL CNDIDO RONDON MAIO/2012

meus pais, Ademir Luis Hoffmann (in memorian) e Lisete Marli Breunig pelo exemplo, incentivo e apoio durante mais essa etapa. Jair Luis Wastowski e meus irmos Frantielo e Luana pela amizade e carinho.

DEDICO

AGRADECIMENTOS

Universidade Estadual do Oeste de Paran pela oportunidade de realizao do Curso de Agronomia. Ao meu Orientador Prof. Dr. Odair Jos Kuhn pela orientao, confiana, e credibilidade em mim depositados. Ao Professor Dr. Jos Renato Stangarlin pelos conhecimentos de pesquisa transferidos. Ao Professor Dr. Affonso Celso Gonalves Junior pela amizade e ensinamentos transmitidos. Aos integrantes do Grupo de Estudos em Solos e Meio Ambiente (Gesoma) e Integrantes do Grupo de Estudos em Controle Biolgico e Alternativo em Fitossanidade (Cobalfi). Aos membros componentes da banca examinadora, pela avaliao do trabalho, orientao, sugestes e contribuies fornecidas. Em especial a Cristiane Claudia Meinerz, Andr Gustavo Battistus e Jullian Luis Stlp pela amizade e auxlio na conduo do experimento. Aos Funcionrios e Pesquisadores da Unioeste, pela viabilizao da realizao do experimento. Aos amigos e colegas pela convivncia, amizade e toda ajuda que recebi durante o decorrer desta graduao. E a todos aqueles que no foram citados, mas que direta ou indiretamente contriburam na realizao desse trabalho.

L est o futuro, no sabemos o que nos espera, que surpresas esto por vir. No adianta pensar nem se preocupar... Voc no pode resolver o que no aconteceu. Por isso viva o aqui e o agora, faa as coisas acontecerem j. O futuro se faz hoje... O passado j se foi! No se prenda a coisas que j no existem e que no mais voltaro. O passado bom como referncia. Assim, cada dia ser uma aventura, um desafio, uma experincia que sempre valer a pena viver.

Nuno Cobra

A Deus OFEREO

RESUMO

HOFFMANN, M. R. B. CONTROLE DO CRESTAMENTO BACTERIANO COMUM POR Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii E LEO ESSENCIAL DE LARANJA EM FEIJOEIRO SUSCETVEL E MODERADAMENTE RESISTENTE. Orientador: Prof. Dr. Odair Jos Kuhn

O objetivo do trabalho foi verificar a ocorrncia de induo de resistncia em feijoeiro suscetvel e moderadamente resistente com o uso do indutor abitico acibenzolar-S-metil (ASM) e biticos (S. cerevisae, S. boulardii e leo de laranja (Orobor)) contra X. anoxopodis pv. phaseoli em casa de vegetao e em campo; Os tratamentos foram dispostos da seguinte forma: Tratamento A leo de Laranja (Orobor 5 mL L-1), Tratamento B Saccharomices cerevisiae ( 2 g L-1), Tratamento C Saccharomices boulardii (2 g L-1), Tratamento D - Acibenzolar-S-metil (100 mg i.a. L-1) e Tratamento E - gua destilada. As aplicaes dos tratamentos foram efetuadas sobre duas cultivares, IPR 139, resistente doena e IAPAR-81, suscetvel) aos 14, 28 e 42 dias aps a emergncia e, em casa de vegetao. Quatro dias aps a aplicao dos tratamentos, realizou se a inoculao com suspenso bacteriana nas plantas com pulverizador manual at o ponto de escorrimento. Em condies de campo no foi efetuada inoculao, pois comum a ocorrncia do patgeno. Foram observadas diferenas estatsticas entre tratamentos. De maneira geral, as plantas tratadas com indutores biticos quando comparadas com a testemunha, bem como as plantas pr-tratadas com ASM, apresentaram: a) maior produtividade; b) maior massa de gros e c) menor severidade de doena. O mesmo padro ocorreu com relao s variveis avaliadas em casa de vegetao, porm no ocorrendo diferena estatstica. Plantas tratadas com leveduras reduzem a severidade do crestamento bacteriano comum do feijoeiro e aumentam sensivelmente a produtividade. Em condies de campo sob estresse hdrico, a aplicao de ASM proporciona custo metablico, reduzindo a produtividade. ASM no reduziu a severidade do crestamento bacteriano comum. leo essencial de laranja no reduziu a severidade do crestamento bacteriano comum, porm, no interferiu nos parmetros de produo.

PALAVRAS-CHAVE: Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli, Indutores biticos, Custo adaptativo

ABSTRACT HOFFMANN, M. R. B. CONTROL OF THE COMMON BACTERIAL BLIGHT BY Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii AND ORANGE ESSENTIAL OIL IN SUSCEPTIBLE AND RESISTANT BEAN PLANTS. Advisor: Prof. Dr. Odair Jos Kuhn The objective of this work was to verify the occurrence of the resistance induction in susceptible and in resistant beans with the use of abiotic inductor acibenzolar-Smethyl (ASM) and biotics (S. cerevisiae, S. boulardii and orange oil (Orobor)) against X. axonopodis pv. Phaseoli in greenhouse and in field; The treatments were: Treatment A orange oil (Orobor 5 mL L-1), Treatment B - Saccharomices cerevisiae ( 2 g L-1), Treatment C - Saccharomices boulardii (2 g L-1), Treatment D Acibenzolar-S-methyl (100 mg a.i. L-1) and Treatment E Distilled water. The applications of the treatments were performed in two cultivars (IPR -139, resistant to the disease and IPR-81, susceptible) at 14, 28 and 42 days after emergence and, in greenhouse. Four days after the application of the treatments, was performed the inoculation with bacterial suspension (Xal the point of dripping. In field was not performed the inoculation, because it is common the occurrence of the pathogen. Were observed statistical differences between the treatments. In general, the plants treated with biotic inductors when compared with the control and the plants treated with ASM, presented: a) higher productivities; b) higher grain mass; c) less severity to the disease. The same pattern occurred in relation to the evaluated variables in greenhouse, but without statistic difference. Plants treated with yeast reduce the severity of bacterial blight of bean and significantly increase productivity. In the field under water stress, the ASM provides application metabolic cost, reducing productivity. ASM did not reduce the severity of bacterial blight. Orange essential oil did not reduce the severity of bacterial blight, however, did not affect the production parameters. KEY-WORDS: Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli, biotic inductors, adaptive cost

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 Sistema de auto-irrigao por capilaridade. .............................................. 25 Figura 2 Precipitao pluvial durante a conduo do experimento (22 de setembro a 15 de dezembro de 2011)...................................................... 28 Figura 3 - Avaliao da severidade do crestamento bacteriano comum causado por Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli em plantas de feijo cv. IPR-139 (CV(%)=9,97) e IAPAR-81(17,87). Mdias seguidas pela mesma letra no diferem estatsticamente entre si pelo teste de Tukey a 5%. Dados transformados por (x + 0,5). .......................................................................................................... 35 Figura 4 - Massa de mil gros das cultivares de feijoeiro IPR-139 e IAPAR-81, tratadas com leo de Laranja (Orobor 5 mL L-1), Saccharomices cerevisiae (2 g L-1), Saccharomices boulardii (2 g L-1), Acibenzolar-S-metil (Bion 100 mg i.a. L-1) e gua destilada (200 L ha-1). Aplicao de tratamentos realizada aos 14, 28 e 42 dias aps a emergncia. Mdias seguidas pela mesma letra no diferem estatsticamente entre si pelo teste de Tukey a 5%. ............................................................................................. 37 Figura 5 - Produtividade das cultivares de feijoeiro IPR-139 e IAPAR-81, tratadas com leo de Laranja (Orobor 5 mL L-1), Saccharomices cerevisiae (2 g L-1), Saccharomices boulardii (2 g L-1), Acibenzolar-S-metil (Bion 100 mg i.a. L-1) e gua destilada (200 L h-1). Aplicao de tratamentos realizada aos 14, 28 e 42 dias aps a emergncia. Mdias seguidas pela mesma letra no diferem estatsticamente entre si pelo teste de Tukey a 5%. ............................................................................................. 37

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 - Caractersticas qumicas da mistura de solo utilizada como substrato no experimento ......................................................................... 24 Tabela 2 - Anlise qumica do solo coletado na Fazenda Experimental Prof Dr. Antonio Carlos dos Santos Pessoa da Universidade Estadual do Oeste do Paran Campus de Marechal Cndido Rondon ..................................................................................................... 27 Tabela 3 Dias aps a emergncia (DAE) e dias do calendrio (DC) em que os estdios fenolgicos foram caracterizados. .................................. 30 Tabela 4 Altura de planta; comprimento de raiz; nmero de gros por vagem; nmero de vagens por planta, massa seca de raiz, massa seca de parte area, massa seca de vagens e massa seca de gros em funo do tratamento em aplicao foliar de leo de Laranja (5 ml L-1), Saccharomyces cerevisiae (2 g L-1), Saccharomyces boulardii (2 g L-1), Acibenzolar- S- Metil (100 mg i.a. L-1) e gua nas cultivares IPR-139 e IAPAR-81............................ 32 Tabela 5 Dias aps a emergncia (DAE) e dias do calendrio (DC) em que os estdios fenolgicos foram caracterizados. .................................. 33

SUMRIO

1. 2. 2.1.

INTRODUO ................................................................................................... 11 REVISO DE LITERATURA ............................................................................. 13 A CULTURA DO FEIJOEIRO ......................................................................... 13

2.1.1. Importncia econmica ................................................................................... 13 2.2. CRESTAMENTO BACTERIANO COMUM ..................................................... 14

2.2.1. Etiologia .......................................................................................................... 14 2.2.2. Disseminao ................................................................................................. 15 2.2.3. Sintomas ......................................................................................................... 15 2.2.4. Controle .......................................................................................................... 16 2.3. INDUO DE RESISTNCIA ........................................................................ 16

2.3.1. Aspectos gerais da induo de resistncia ..................................................... 16 2.3.2. Mecanismos de resistncia............................................................................. 17 2.3.3. Custo da resistncia induzida ......................................................................... 18 2.4. PRODUTOS ALTERNATIVOS PARA O CONTROLE DE DOENAS ........... 18

2.4.1. Acibenzolar-S- metil ........................................................................................ 18 2.4.2. Saccharomyces cerevisiae ............................................................................. 19 2.4.3. Saccharomices boulardii ................................................................................. 19 2.4.4. leo de laranja ............................................................................................... 20 2.5. AVALIAO DE DOENAS ........................................................................... 20

2.5.1. Severidade...................................................................................................... 20 3. 3.1. 3.2. 3.3. MATERIAL E MTODOS .................................................................................. 22 OBTENO DOS MICROORGANISMOS FITOPATOGNICOS .................. 22 OBTENO DE CLULAS DE S. boulardii e S. cerevisiae ........................... 22 PRODUO DAS PLANTAS EM CASA DE VEGETAO ........................... 23

3.3.1. Localizao ..................................................................................................... 23 3.3.2. Implantao e conduo do experimento ....................................................... 23 3.3.3. Avaliaes ...................................................................................................... 25

3.4.

CULTIVO EM CONDIES DE CAMPO ....................................................... 26

3.4.1. Localizao ..................................................................................................... 26 3.4.2. Implantao e conduo do experimento ....................................................... 26 3.4.3. Avaliaes ...................................................................................................... 28 4. 4.1. RESULTADOS E DISCUSSES ....................................................................... 30 CULTIVO DO FEIJOEIRO PARA ANLISES DA SEVERIDADE E DOS PARMETROS DA PRODUO EM CASA DE VEGETAO ..................... 30 4.1.1. Avaliao da severidade do crestamento bacteriano comum ......................... 30 4.1.2. Parmetros da produo ................................................................................ 32 4.2. CULTIVO DO FEIJOEIRO PARA ANLISES DA SEVERIDADE E DOS PARMETROS DA PRODUO EM CAMPO ............................................... 33 4.2.1. Avaliao da Severidade do Crestamento Bacteriano Comum ...................... 34 4.3. 4.3 PARMETROS DE PRODUO ............................................................. 35

4.3.1. Massa de mil gros e produtividade ............................................................... 35 5. 6. CONCLUSES .................................................................................................. 39 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS .................................................................. 40

1.

INTRODUO

O feijo (Phaseolus vulgaris L.) um alimento tradicional na dieta do brasileiro, pois constitudo de nutrientes essenciais ao ser humano, como protenas, ferro, clcio, magnsio, zinco, vitaminas, carboidratos e fibras (BARAMPAMA e SIMARD, 1993; BORM e CARNEIRO, 1998; KUTOS et al., 2003; RIBEIRO et al., 2008). O Brasil est entre os principais produtores mundiais, ocupando anualmente, uma rea de 4,5 milhes de hectares (IBGE, 2008). Cultivada em regies com diferentes condies edafoclimticas, a cultura pode atingir um rendimento superior a 3.000 kg.ha-1 (BORM e CARNEIRO, 1998; BACKES et al., 2005). O consumo per capita de feijo de 16,3 kg por habitante ano, sendo uma cultura de grande importncia, com cultivo em grande parte do territrio nacional, nas mais variadas condies, sejam elas climticas ou tecnolgicas (PEREIRA et al., 2010). Apesar do destaque na produo mundial de feijo, a produtividade brasileira considerada baixa, com uma produo mdia de aproximadamente 900 kg ha-1 (IBGE, 2008). Dentre os fatores que podem interferir no rendimento de gros destacam-se os biticos (pragas, doenas e plantas daninhas) e abiticos (disponibilidade de gua no solo, clima e fertilidade do solo) (BORM e CARNEIRO, 1998). As doenas so um dos principais fatores responsveis da queda de produtividade no feijoeiro, podendo provocar perdas de at 100% da produo, resultando na diminuio das qualidades fisiolgicas, nutricionais e sanitrias do produto colhido, afetando o preo e sua comercializao (BIAZON, 2003). A cultura afetada por um grande nmero de doenas cujos agentes causais so vrus, bactrias, fungos e nematides (RAVA, 2002; BIANCHINI et al., 2005). Dentre as vrias doenas que prejudicam o feijoeiro, o crestamento bacteriano comum (Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli), que ocorre principalmente nas regies

12 midas e quentes, considerado uma das doenas de maior importncia desta cultura, podendo causar grande reduo na produtividade (VIEIRA, 1998; SARTORATO e RAVA, 1994). Em razo da ineficcia do controle qumico da doena, e com o objetivo de causar baixo impacto ambiental, uma alternativa o controle ecolgico, que pode fazer uso das mesmas tecnologias adotadas para aplicao de fungicidas, porm, atravs do controle biolgico ou da induo de resistncia em plantas com uso de microorganismos e produtos naturais com atividade antimicrobiana e/ou indutora de resistncia. (SCHWAN-ESTRADA et al., 2003; BIANCHINI et al., 2005). Considerando o exposto acima, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de leveduras Saccharomyces cerevisiae e Saccharomyces boulardii e leo essencial de casca de laranja no controle do crestamento bacteriano comum em cultivares de feijoeiro suscetvel e moderadamente resistente.

2.

REVISO DE LITERATURA

2.1.

A CULTURA DO FEIJOEIRO

O feijo comum (Phaseolus vulgaris), pertencente famlia Fabaceae, subfamlia Faboideae, adaptando-se a vrios pases. O feijoeiro cultivado sob as mais variadas condies edfoclimticas (BACKES et al., 2005; SOUZA e LORENZI, 2005). Uma caractirstica importante o ciclo anual, podendo apresentar hbito de crescimento determinado ou indeterminado que pode variar de 60 a 120 dias, o que permite o melhor planejamento da poca de semeadura e da utilizao racional do campo de produo agrcola (BORM e CARNEIRO, 1998; ZIMMERMANN et al., 1996). O feijo comum possui de 18 a 30% de protena bruta (LEMOS et al., 2004). uma importante fonte de protena das populaes de baixa renda, alm de ser um dos alimentos mais tradicionais na dieta alimentar do brasileiro, sendo uma fonte de protena e caloria bastante significativa. A protena encontrada no feijo de boa qualidade, pois vrias cultivares de feijo, disponveis no Brasil, apresentam elevados teores de aminocidos essenciais sendo superior ao padro considerado adequado pela Organizao das Naes Unidas para Agricultura e Alimentao (SOARES, 1996).

2.1.1. Importncia Econmica

No Brasil, a importncia econmica da cultura do feijoeiro evidenciada, por representar uma importante fonte protica na dieta alimentar da populao e pelo grande nmero de pequenos produtores envolvidos na sua produo, embora tenha havido nos ltimos anos crescente interesse de produtores

14 de outras classes do agronegcio, adotando tcnicas avanadas, incluindo a irrigao e a colheita mecanizada (PATERNIANI, 2001; LEMOS et al., 2004). O Brasil um grande consumidor mundial de feijo, com um consumo dirio per capita de 182,9 g/dia (CONAB, 2009). Um estudo do IBGE indica uma relao entre as condies de alimentao e a renda familiar per capita do brasileiro. De acordo com o levantamento, alimentos considerados saudveis como o feijo so mais consumidos entre a populao de menor renda (IBGE, 2011). No entanto, esse consumo tem cado nos ltimos anos, em razo da preferncia da populao pelos alimentos do tipo fast food.(SCHLINDWEIN e KASSOUF, 2006; BEZERRA e SICHIERI, 2010). O Brasil o maior produtor mundial de feijo, com uma produo que supera 3,5 milhes de toneladas (IBGE, 2008). Borm e Carneiro (1998) explicam as baixas produtividades devido ao esgotamento dos recursos do solo e a problemas fitossanitrios como o crestamento bacteriano comum.

2.2.

CRESTAMENTO BACTERIANO COMUM

A doena causada pela bactria Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli. Devido sua ampla distribuio e de dficil controle, tem grande capacidade de reduzir a produo de forma significativa, ocorrendo em regies de clima quente e mido, principalmente na safra das guas (BIANCHINI et al., 2005).

2.2.1. Etiologia

X. axonopodis pv. phaseoli uma bactria baciliforme, Gram-negativa. Quando cultivada em meio nutriente gar (NA) contendo glicose ou sacarose, apresenta colnias amareladas, de bordos lisos, brilhantes e circulares. Sobrevive em diferentes formas. Em sementes, pode sobreviver por perodos variveis de 2 a 15 anos, no estado hipobitico, podendo estar localizada interna ou externamente, sem perder sua patogenicidade (SARTORATO e RAVA, 1994; KUHN, 2007).

15 2.2.2. Disseminao

A semente do feijoeiro um veculo importante para a disseminao de X. axonopodis pv. phaseoli. O patgeno pode ser transmitido interna e externamente pela semente, sendo esta a fonte principal de inculo primrio da doena (VALARINI e MENTEN, 1992). Devido suscetibilidade doena da maioria das cultivares comercializadas, tem se recomendado vrias medidas de controle, como o uso de sementes certificadas, tratamento de sementes, uso de variedades resistentes, manejo da irrigao, incorporao ou queima dos restos culturais, rotao de culturas e controle de insetos vetores (MARINGONI & LAURETTI, 1999; BIANCHINI et al., 2005; TORRES et al., 2009).

2.2.3. Sintomas

A doena manifesta os sintomas em toda parte area da planta do feijoeiro, como folhas, caule, vagens e sementes. Nas folhas, se observam pequenas leses encharcadas, e com a evoluo da doena os tecidos afetados tornam-se secos e quebradios e circundados por halos clorticos. No caule, possvel observar leses deprimidas iniciando como manchas aquosas que se tornam secas, deprimidas e avermelhadas com o avano da doena. As leses podem ser caracterizadas por riscos avermelhados longitudinais no caule, cuja superfcie pode rachar e acumular exsudato bacteriano. Nas vagens so observadas manchas aquosas, as quais aumentam com o progresso da doena, freqentemente cobertas por incrustaes amarelas. Na medida que estas leses evoluem o tecido afetado perde sua aparncia aquosa, tornando-se seco, deprimido e avermelhado. O patgeno penetra nas sementes freqentemente atravs do funculo que em decorrncia de infeco severa pode-se observar a seca e as mortes das vagens e sementes (BIANCHINI et al., 2005).

16 2.2.4. Controle

A eficcia do controle qumico do crestamento bacteriano comum do feijoeiro, atravs de pulverizao das plantas com produtos bactericidas, tem sido muito contraditria (BIANCHINI et al., 2005). Sendo assim, o mtodo de controle a adoo de vrias prticas simultaneamente como o uso de sementes certificadas, tratamento de sementes, uso de variedades resistentes, manejo da irrigao, incorporao ou queima dos restos culturais, rotao de culturas e controle de insetos vetores (MARINGONI e LAURETTI, 1999; BIANCHINI et al., 2005; TORRES et al., 2009). Percebe-se, que em lavouras de subsistncia, onde utilizado baixo nvel tecnolgico, o agricultor utiliza as sementes produzidas para um novo plantio, implicando na disseminao, aumento do inculo inicial e sobrevivncia do patgeno no campo de produo (BIANCHINI et al., 2005; KUHN, 2007). Como a maioria das cultivares susceptvel doena, o uso de sementes certificadas de extrema importncia como medida de controle (VALARINI e MENTEN, 1992; BIANCHINI et al., 2005).

2.3.

INDUO DE RESISTNCIA

2.3.1. Aspectos gerais da induo de resistncia

Quando se utiliza agentes externos para aumentar o nvel de resistncia das plantas, ou seja, quando no se altera o genoma da planta, utiliza-se o termo resistncia induzida (VAN LOON et al., 1998). Os diferentes mecanismos de defesa de uma planta dependem da expresso dos genes de resistncia, que podem ser estruturais ou bioqumicos (PASCHOLATI e LEITE, 1995). Tal resistncia efetiva contra um amplo espectro de patgenos e parasitas, incluindo fungos, bactrias, vrus e nematides (KUHN, 2007).

17 Os mecanismos de defesa estrutural da planta podem ser: cutcula, tricoma, estmatos, fibras e vasos condutores, e os bioqumicos podem ser os fenis, alcalides glicosdicos, lactonas insaturadas, glicosdeo fenlicos e cianognicos, inibidores proticos, fototoxinas, quitinases e -1,3-glucanase (KUHN, 2007; FAULIN, 2010). A induo de resistncia envolve a ativao de mecanismos de defesa latentes existentes nas plantas em resposta ao tratamento com agentes biticos ou abiticos. Entre os compostos abiticos que tem a capacidade de induzir a resistncia, estudos tem sido realizados com silcio (Si) (FAUTEUX et al., 2005), cloreto frrico, fosfato de potssio dibsico (MANANDHAR et al., 1998; BCOT et al., 2000), cido saliclico (AS)( MANANDHAR et al., 1998; ZHANG, 2002), acibenzolar-S-metil (ASM) (SOYLU et al., 2003) e cido jasmnico (AJ) (CIPOLLINI, 2002; UEEDA et al., 2006). Estudos realizados com S. cerevisiae, S. boulardi, Bacillus subtilis, fraes de parede celular de plantas, extratos vegetais, extratos de fungos, extratos de bactrias (rizobactrias), extratos vegetais e leos essenciais tem mostrado eficincia no controle de doenas. Diante da possibilidade de utilizao de diferentes tipos de indutores de resistncia, torna se possvel evidenciar que no ocorre uma forma nica na atividade dos elicitores (STANGARLIN et al., 1999).

2.3.2. Mecanismos de resistncia

Como vimos, tem sido demonstrado que a induo de resistncia ocorre em diferentes interaes hospedeiro-patgeno, ativando genes envolvidos em diversas respostas de defesa (RIVERO et al., 2001; HAMMERSCHMIDT, 2005a), provocando alteraes estruturais da parede celular vegetal pelo depsito de calose e lignina (HE et al., 2002), formao de papila (BESSER et al., 2000), sntese de compostos fenlicos e fitoalexinas (STANGARLIN et al., 1999; BONALDO et al., 2004) e protenas relacionadas a patognese (VAN LOON, 1985; DURNER et al., 1997).

18 2.3.3. Custo da resistncia induzida

Para promover crescimento, ou induo de resistncia, as plantas devem balancear seus gastos energticos nesses processos (KUHN, 2007; FAULIN, 2010). Com a evoluo do reino vegetal, as plantas desenvolveram um sistema de defesa latente, com finalidade de economizar energia. Quando em contato com o patgeno, este sistema investe sua reserva energtica em defesa. Sendo assim, pode se afirmar que em condies naturais, o custo da induo de defesa ser gerado apenas na presena do patgeno (HEIL e BOSTOK, 2002; CIPOLLINI et al., 2004). Porm, se ocorrer induo de resistncia em plantas em que no h presena de patgeno, poder resultar em reduo de produtividade, pois as plantas investiro seus recursos em induo de defesa, desnecessariamente (KUHN, 2007; GOMES et al., 2008; KUHN e PASHOLATI, 2010; FAULIN, 2010). Tambm importante considerar que existe variao de custos em plantas sadias e plantas doentes. No primeiro caso, supe-se ser a alocao de recursos menor, visto que a expresso dos mecanismos de defesa menor (LATUNDEDADA e LUCAS, 2001). Quando a planta expressa um gene de resistncia, representa um custo energtico para a planta (WALTERS e HEIL, 2007).

2.4.

PRODUTOS ALTERNATIVOS PARA O CONTROLE DE DOENAS

2.4.1. Acibenzolar-S- metil

Descoberto por Kessmann et al. (1994), o acibenzolar-S-metil, tambm denominado pelas siglas ASM, BTH (Bion, Actigard) um produto considerado de baixa toxicidade e sistmico, o qual rapidamente absorvido e translocado atravs das plantas (OOSTENDORP et al., 2001), apresentando um modo de ao inespecfico, o que diminui o risco de seleo de isolados resistentes dentro de uma populao de patgenos (PASCHOLATTI et al., 2005; SILVA et al., 2003).

19 No Brasil, o ASM mais conhecido como Bion (Syngenta Ltda), registrado para as culturas de tomate, cacau e citros, enquadrado na definio de um indutor de resistncia, pois fornece proteo a um amplo espectro de patgenos (KESSMAN et al., 1994; CAVALCANTI et al., 2006; DEBONA et al., 2009). Diversas pesquisas evidenciam a capacidade de o ASM induzir a resistncia em plantas, porm, percebe-se que h poucos estudos relacionados aos efeitos dos indutores em plantas livres de doenas.

2.4.2. Saccharomices cerevisiae

Saccharomyces cerevisiae um fungo ascomiceto que produz ascos sem a produo de ascocarpos e o crescimento da colnia se d por brotao das clulas, no produzindo miclio (AGRIOS, 2005). Esta levedura habitante da superfcie vegetal, encontrada principalmente em cascas de frutos, com capacidade de crescer, se multiplicar e at penetrar nas primeiras camadas de clulas de um rgo vegetal (BEHNAMOU e GARAND, 2001). Suspenses de clulas e outras preparaes obtidas a partir de S. cerevisiae so capazes de protegerem plantas de caf contra Hemileia vastatrix (ferrugem do cafeeiro) (MARTINS et al., 1986). Lopez (1991) observou reduo significativa na produo de condios do patgeno de Colletotrichum sublineolum em plantas de sorgo.

2.4.3. Saccharomices boulardii

A levedura S. boulardii, isolada de frutas silvestres tropicais, uma levedura no patognica, termotolerante (cresce na temperatura de 37C) (MCFARLAND & BERNASCONI, 1993). Tambm pode ser encontrada na forma liofilizada no medicamento Floratil (Merck), muito utilizado como auxiliar na restaurao da flora intestinal e possui antagonismo a Escherichia coli, Shigella sp., Salmonella sp.,

20 Pseudomonas sp., Staphylococcus sp. e Candida albicans (STANGARLIN et al., 2010).

2.4.4. leo de laranja

Trabalhos desenvolvidos com extrato bruto ou leo essencial de plantas medicinais e aromticas, obtidos a partir da flora nativa, tm indicado o potencialde controle de fitopatgenos, tanto pela ao fungitxica direta, inibindo o crescimento micelial e a germinao de esporos, quanto pela induo de fitoalexinas, indicando a presena de composto(s) com caracterstica(s) de elicitor(es) (STANGARLIN et al.,1999; SCHWAN-ESTRADA et al., 2000; CUNICO et al., 2004; BONALDO et al., 2004; BASTOS e ALBUQUERQUE, 2004). Stlp et al. (2011) demonstraram que o leo essencial de laranja representado pelo produto Orobor apresentou bons resultados no controle de doenas em sementes de trigo, mostrando que conforme a concentrao do produto aumenta na soluo, aumenta a eficcia de controle de patgenos na semente.

2.5.

AVALIAO DE DOENAS

De acordo com Bergamin Filho e Amorin (1996), de nada adianta se conhecer o patgeno causador de uma determinada doena se no for possvel quantificar os sintomas provocados pelo mesmo.

2.5.1. Severidade

Por severidade entende-se como sendo a porcentagem da rea ou do volume de tecido coberto por sintomas. Este um dos parmetros mais apropriados para medir doenas foliares, como ferrugens, odios, mldios e manchas. Nesses

21 casos, a porcentagem da rea de tecido coberto por sintomas retrata melhor a quantidade de doena que a incidncia. A contagem de leses, com posterior medida de seu comprimento e largura para determinao da rea, s executvel em trabalhos experimentais, quando se requer alta preciso. Mesmo assim, quando o nmero de amostras elevado e quando as leses so numerosas e irregulares a avaliao tornar-se impraticvel (BERGAMIN FILHO et al., 1995). Para contornar este inconveniente, vrias estratgias tm sido propostas para a avaliao da severidade de doenas, dentre as quais merecem destaque: as chaves descritivas e as escalas diagramticas, estes dois mtodos tm sido os mais utilizados. As chaves descritivas utilizam escalas arbitrrias com certo nmero de graus para quantificar doenas, enquanto que, as escalas diagramticas so representaes ilustradas de uma srie de plantas, folhas ou partes de plantas com sintomas em diferentes nveis de severidade. Escalas diagramticas tm sido ferramentas muito teis para minimizar a subjetividade das estimativas de severidade e tambm auxiliar o avaliador. Entretanto, devem ser de fcil uso, aplicveis em diferentes condies e produzir resultados reprodutveis, alm de apresentarem nveis suficientes que representem todos os estdios de desenvolvimento da doena (BERGAMIN FILHO e AMORIN, 1996).

3.

MATERIAL E MTODOS

3.1.

OBTENO DOS MICROORGANISMOS FITOPATOGNICOS

A bactria Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli, gentilmente cedida pelo Dr. Jos Renato Stangarlin, foi cultivada em placas de petri contendo meio de cultura nutriente-gar (NA) e mantida a 25 C. Para a inoculao, foi preparada suspenso bacteriana com concentrao ajustada a 10 8 ufc mL-1, com base em curva de absorbncia a 580 nm (GONALVES et al., 2007).

3.2.

OBTENO DE CLULAS DE S. BOULARDII E S. CEREVISIAE

Clulas de S. boulardii foram obtidas a partir do produto comercial Floratil (Merck), bem como clulas de S. cerevisiae foram obtidas do fermento de panificao, marca Fleischmann. Posteriormente, as leveduras foram cultivadas em meio YEPG, contendo 10 g de extrato de levedura, 20 g de peptona, 20 g de glicose, 20 g de gar, 1000 mL de gua e mantidas em constante agitao (100 rpm) por sete dias. Aps esse perodo, os meios foram centrifugados a uma rotao de 2000 (rpm). Efetuou-se o descarte da parte sobrenadante e ajustou se a concentrao com auxilio de espectofotmetro para 1 x 105 clulas mL-1, com base em curva de absorbncia a 580 nm.

23 3.3. PRODUO DAS PLANTAS EM CASA DE VEGETAO

3.3.1. Localizao

O experimento foi conduzido em casa de vegetao com cobertura plstica, na Estao de Horticultura e Cultivo Protegido Professor Mrio Csar Lopes, pertencente ao Ncleo de Estaes Experimentais da Universidade Estadual do Oeste do Paran - UNIOESTE, Campus de Marechal Cndido Rondon PR. O municpio est localizado no extremo Oeste do Estado do Paran sob as coordenadas geogrficas 54 22 W longitude, latitude 24 46 S e altitude mdia de 420 metros.

3.3.2. Implantao e conduo do experimento

O solo, matria orgnica e areia foram misturados com auxlio de uma betoneira, misturando-se, na proporo de 2:2:1. Posteriormente, foi realizada anlise qumica do solo e com base na interpretao dos resultados (Tabela 1), sendo necessria a realizao de adubao de correo, resultando na aplicao de 15,2 g dm-3 de P e 5,3 g dm-3 de K, na forma de superfosfato triplo e cloreto de potssio, respectivamente. A semeadura foi realizada no dia 16/09/2011, utilizando-se as cultivares de feijo IAPAR - 81 (suscetvel) e IPR 139 (moderadamente resistente). Semeou-se seis sementes de feijo por vaso, sendo que nove dias aps a germinao realizouse desbaste deixando duas plantas por vaso. O experimento foi implantado e conduzido em vasos com capacidade para 8 dm3 de solo.

24 Tabela 1 - Caractersticas qumicas da mistura de solo utilizada como substrato no experimento


Ca
(2)

Mg

(2)

(1)

Al

(2)

H+Al

(3)

SB

CTC

MO

(4)

(1)

pH
-3

*********************** cmolc dm
(1)

-3 ***********************************

g dm

-3

**** % ****

mg/dm

CaCl(2)

4,76 1,65 0,58 0,06 4,67 7,03 11,7 14,36 60,27 0,51 9,41 5,13 -1 (2) -1 (3) (4) Extrator Mehlich ; Extrator KCl 1 mol L ; pH SMP (7,5); Mtodo Walkey-Black. *Anlise realizada pelo Laboratrio de Qumica Agrcola e Ambiental da UNIOESTE.

O delineamento experimental utilizado foi de blocos ao acaso com esquema fatorial (2 x 5) considerando duas cultivares (IAPAR 81 e IPR 139), quatro repeties e cinco tratamentos que foram dispostos da seguinte maneira: Tratamento A leo de Laranja (Orobor 5 mL L-1), Tratamento B Saccharomyces cerevisiae ( 2g L-1), Tratamento C Saccharomyces boulardii (2g L1

), Tratamento D - Acibenzolar-S-metil (100 mg i.a. L-1) e Tratamento E - gua

destilada. As aplicaes dos tratamentos foram efetuadas aos 14, 28 e 42 dias aps a emergncia e, quatro dias aps, realizou se a inoculao com suspenso bacteriana (X. axonopodis pv. phaseoli) nas plantas com pulverizador manual at o ponto de escorrimento. A fertilizao nitrogenada foi realizada aos em duas etapas, a primeira 22 dias aps a emergncia (estdio V3) e a segunda 28 dias aps a emergncia (estdio V4), as quais perfizeram um total de 10,7 g dm -3 de N adicionado como uria (CO(NH2)2). Esta adubao foi realizada na forma liquida e diretamente em cada vaso, para facilitar e uniformizar a aplicao. O controle da umidade do solo foi efetuado por um sistema auto-irrigante subsuperficial via capilaridade, onde a base dos vasos ficava imersa em uma lmina de gua, que permitia a reposio automtica conforme a evapotranspirao da planta (Figura1).

25

Figura 1 Sistema de auto-irrigao por capilaridade.

3.3.3. Avaliaes

Ao final do ciclo do feijoeiro foram coletados dados como massa seca de parte area, raiz, vagens, gros, altura de planta, comprimento de raiz, nmero de gros por vagem e nmero de vagens por planta. A massa seca foi obtida pela pesagem dos restos culturais de cada vaso aps permanncia do material em estufa de circulao forada 65 C at peso constante. A avaliao da severidade do crestamento bacteriano comum, no foi realizada neste experimento, pois as plantas no apresentaram sintomas da doena. Esse experimento foi conduzido entre 16 de setembro a 15 de dezembro de 2011.

26 3.4. CULTIVO EM CONDIES DE CAMPO

3.4.1. Localizao

O experimento foi desenvolvido em condies de campo, na fazenda experimental Prof. Dr. Antonio Carlos dos Santos Pessoa, pertencente ao ncleo de estaes experimentais do Campus Marechal Cndido Rondon, da Universidade Estadual do Oeste Paran. O municpio de Marechal Cndido Rondon est localizado na regio Oeste do Paran, sob latitude 24 33' 22'' S e longitude 54 03' 24'' W, com altitude aproximada de 400 m. O clima local, classificado segundo Koppen, do tipo Cfa, subtropical com chuvas bem distribudas durante o ano e veres quentes (ROLIM et al., 2007).

3.4.2. Implantao e conduo do experimento

Anteriormente a implantao do experimento, se fez necessrio a dessecao da rea com o herbicida Glifosato (Roundup Original) na dose de 3,0 L ha-1. O experimento foi implantado em um Latossolo Vermelho eutrofrrico (EMBRAPA, 2006). A semeadura foi realizada no dia 22/09/2011, utilizando-se as cultivares de feijo IAPAR - 81 e IPR 139. O delineamento experimental utilizado foi o de blocos ao acaso, com o arranjo fatorial de 5x2 (cinco tratamentos e duas cultivares) em quatro repeties, totalizando quarenta unidades experimentais. Previamente implantao do experimento, foi realizada anlise de solo (Tabela 2) e, atravs da interpretao, constatou-se que no era necessria aplicao de corretivos ou fertilizantes agrcolas. Semearam-se uniformemente, 14 sementes por metro linear, com espaamento de 0,45 m entrelinhas, sendo a rea til do experimento constituda

27 das trs linhas centrais da parcela, desconsiderando 0,5 m da extremidade de cada linha, correspondendo a 5,4 m2. Na adubao de semeadura foram aplicados 400 kg h-1 da formula 00-2518, de forma a fornecer 90 kg ha-1 de P2O5 e 60 kg ha-1 de K2O. Aos 25 dias aps a emergncia de plantas (estdio V4), foi realizada aplicao nitrogenada de cobertura com 100 kg ha-1 de ureia (CO(NH2)2), de forma a fornecer 40 kg ha-1 de N. Tabela 2 - Anlise qumica do solo coletado na Fazenda Experimental Prof Dr. Antonio Carlos dos Santos Pessoa da Universidade Estadual do Oeste do Paran Campus de Marechal Cndido Rondon.
Ca
(2)

Mg

(2)

(1)

Al

(2)

H+Al

(3)

SB

CTC

MO

(4)

V
-3

(1)

pH
-3

*********************** cmolc dm

-3 ***********************************

g dm

**** % ****

mg/dm

CaCl(2)

4,06 1,60 0,47 0,08 3,42 6,13 9.55 16,78 64,19 0,83 36,50 5,32 -1 (2) -1 (3) (4) Extrator Mehlich ; Extrator KCl 1 mol L ; pH SMP (7,5); Mtodo Walkey-Black. *Anlise realizada pelo Laboratrio de Qumica Agrcola e Ambiental da UNIOESTE.
(1)

Foram os seguintes tratamentos: Tratamento A leo de laranja (Orobor 5 mL L-1), Tratamento B Saccharomyces cerevisiae ( 2g L-1), Tratamento C Saccharomyces boulardii (2g L-1), Tratamento D - Acibenzolar-S-metil (100 mg i.a. L1

) e Tratamento E - gua destilada. As aplicaes dos tratamentos foram efetuadas ao entardecer, com intuito

de promover uma melhor condio de aplicao e menor fotodegradao dos tratamentos, realizou-se a aplicao aos 14, 28 e 42 dias aps a emergncia. Utilizou-se um pulverizador manual, com volume de calda de 200 L ha-1. No foi efetuada inoculao de patgenos, pois em condies de campo comum a ocorrncia de crestamento bacteriano (Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli) na regio Oeste do Paran (TORRES et al., 2009). Durante o cultivo do feijoeiro, houve a necessidade de controle de plantas daninhas, cujo mtodo adotado foram duas capinas manuais, aos 14 e 28 dias aps a emergncia. Tambm se fez necessrio o controle da larva minadora (Liriomyza huidobrensis) e percevejo marron (Euschistus heros) com aplicao de lambdacialotrina (piretride) + tiametoxam (neonicotinide) (Engeo Pleno) na dose de 200 ml h-1. Por outro lado, a lavoura foi prejudicada por veranicos no final de ciclo

28 (primeira quinzena de dezembro) (Figura 2), interferindo na produtividade da cultura e tambm, possivelmente, interferindo na ao dos tratamentos sobre a cultura. Os dados climticos referentes ao perodo experimental (Figura 2) foram obtidos em estao meteorolgica do Centro de Cincias Agrrias, da Universidade Estadual do Oeste do Paran Campus Marechal Cndido Rondon, distante cerca de 600 metros da rea experimental.
140
120

Precipitao (mm)

100
80

60
40

20
0

V1

V2

V3

V4 R5 R6 Estdios Fenolgicos

R7

R8

R9

Figura 2 Precipitao pluvial durante a conduo do experimento (22 de setembro a 15 de dezembro de 2011).

3.4.3. Avaliaes

A doena do feijoeiro foi avaliada a partir de escalas diagramticas para crestamento bacteriano comum a partir da escala proposta por Diaz et al. (2001). Aps a colheita de cada parcela foi avaliada a massa de mil gros e produtividade da cultura do feijo. A massa de mil gros foi obtida a partir de valores mdios de quatro subamostras de 100 sementes de cada parcela experimental. A produo de cada parcela teve a umidade corrigida para 13% em base mida e os resultados expressos em kg ha-1. Os dados de severidade do experimento para constatar induo de resistncia sistmica foram avaliados por anlise de varincia geral e teste de Tukey

29 (5%) para distinguir os tratamentos com auxlio do programa computacional Sisvar v. 4.6 (FERREIRA, 2002). A partir dos valores gerados pelos programas, foram construdos grficos e tabelas com o auxlio dos programas computacionais Excel v. 7 e Word v. 7 (MICROSOFT, 2007), com objetivo de um melhor entendimento do efeito dos tratamentos em estudo.

4.

RESULTADOS E DISCUSSES

4.1. CULTIVO DO FEIJOEIRO PARA ANLISES DA SEVERIDADE E DOS PARMETROS DA PRODUO EM CASA DE VEGETAO

4.1.1. Avaliao da severidade do crestamento bacteriano comum

Para uma possvel anlise comparativa, est representada na tabela 3 a escala fenolgica do feijoeiro do experimento em estudo, com base na proposta por Fernadez et al. (1986). Tabela 3 Dias aps a emergncia (DAE) e dias do calendrio (DC) em que os estdios fenolgicos foram caracterizados.
Estdio V1 V2 V3 V4 R5 R6 R7 R8
(1)

Descrio

(1)

DAE 0 7 22 28 42 49 63 82

DC 23/09 30/set 15/out 21/out 04/nov 11/nov 24/nov 07/dez

Emergncia Folhas primrias abertas Primeira folha trifoliolada aberta e plana Terceira folha trifoliolada aberta e plana Primeiro racimo floral nos ns inferiores pr florao Primeira flor aberta florao Formao de vagem Enchimento de gros

R9 Maturao 94 19/dez A caracterizao do estdio definida quando 50% ou mais plantas da parcela ou amostra apresentam as caractersticas descritas.

Nas plantas tratadas e desafiadas com a bactria X. axonopodis pv. phaseoli no foi possvel realizar as avaliaes de severidade, pois as plantas no apresentaram quaisquer sintomas da doena.

31 Adubao equilibrada, controle da temperatura, umidade relativa do ar baixa, umidade do solo prxima a capacidade de campo, ausncia de molhamento foliar e ausncia de pragas foram fatores responsveis para uma tima condio de desenvolvimento da cultura, resultando em plantas sadias e vigorosas, que podem ter oferecido resistncia ao estabelecimento do patgeno, tanto na cultivar suscetvel (IAPAR-81) bem como na cultivar moderamente resistente (IPR-139). De acordo com Chaboussou (1999), este fato pode ser explicado pela Teoria da Trofobiose, que defende a idia de que o organismo vegetal s ser atacado por algum inseto, caro, nematide, fungos ou bactrias, quando estiver desequilibrado em seu metabolismo, disponibilizando em sua seiva o alimento que eles necessitam, principalmente aminocidos. Estando em equilbrio, o vegetal dificilmente ser atacado. O autor ainda salienta que a utilizao de agrotxicos no sistema convencional provocaria algum desequilbrio na planta, contribuindo assim para o aumento do nmero de patgenos. A resistncia das plantas a pragas e doenas pode ser induzida pelo efeito da nutrio mineral, causando alteraes sobre as estruturas anatmicas, como clulas epidrmicas e cutculas, parede celular e seu grau de silicificao, suberizao e lignificao. Alm disso, a nutrio pode afetar as propriedades bioqumicas, como reduo de compostos fenlicos que atuam como inibidores do desenvolvimento de pragas e doenas ou acmulo de compostos orgnicos de baixo peso molecular, como glicose, sacarose e aminocidos, resultado da maior atividade de enzimas decompositoras como amilase, celulase, protease e sacarase (PERRENOUD, 1990; MARSCHNER, 1986). Com base nessas afirmaes, a doena pode no ter ocorrido devido cultura estar sendo suprida com uma adubao equilibrada. Ainda, segundo Bergamim Filho et al. (1995) o uso em excesso de adubos qumicos pode favorecer o patgeno, por aumentar a suculncia de tecidos e retardar a maturao dos mesmos, prolongando a durao do perodo vegetativo. Tecidos suculentos apresentam menor resistncia penetrao e colonizao por agentes patognicos. Como no experimento em casa de vegetao recebeu adubao equilibrada, foi possvel o pleno funcionamento dos processos da planta, sem interferir no crescimento (MALAVOLTA, 2006). Sendo assim, se a ativao de defesa demanda

32 da sntese de protenas, oriundas da absoro eficiente de nutrientes, a planta no precisa deixar de investir em crescimento e reproduo para investir em defesa.

4.1.2. Parmetros da produo

Todas unidades experimentais, no apresentaram diferena significativa em nenhum dos parmetros avaliados (altura de planta, comprimento de raiz, nmero de gros por vagem, nmero de vagens por planta, massa seca de raiz, massa seca de parte area, massa seca de vagens e massa seca de gros), contrariando as descries feitas por Kuhn (2007) e Faulin (2010). Na Tabela 4 pode-se observar que no houve diferena significativa para nenhuma varivel avalida, porm, observa-se uma ntida tendncia do favorecimento aos parmetros de produo nos tratamentos com indutores biticos. Tabela 4 Altura de planta; comprimento de raiz; nmero de gros por vagem; nmero de vagens por planta, massa seca de raiz, massa seca de parte area, massa seca de vagens e massa seca de gros em funo dos tratamentos leo de Laranja (5 mL L-1), Saccharomyces cerevisiae (2 g L-1), Saccharomyces boulardii (2 g L-1), Acibenzolar-S-Metil (100 mg i.a. L-1), gua nas cultivares IPR-139 e IAPAR-81
TRATAMENTO leo de Laranja H2O S. cerevisiae S. boulardii ASM CULTIVARES IPR 139 IAPAR 81 EFEITO Tratamento Cultivar Tratamento x Cultivar Coeficiente de variao CV (%) ns* ns* ns* 4,62 ns* ns* ns* 15,11 ns* ns* ns* 7,20 ns* ns* ns* 11,36 ns* ns* ns* 24,78 ns* ns* ns* 18,55 ns* ns* ns* 14,39 ns* ns* ns* 15,4 133,50a 126,50a 31,80a 30,80a 4,22a 4,33a 36,25a 35,30a 5,06a 5,34a 13,51a 12,38a 10,18 10,80 28,62a 27,40a Altura de planta (cm) 131,00a 134,25a 130,62a 129,86a 124,25a Comp. Raiz (cm) 31,25a 26,88a 30,50a 33,25a 34,62a N gros por vagem 4,36a 4,45a 4,34a 3,92a 4,32a N vagens por planta 37,88a 36,50a 37,00a 37,50a 30,00a Massa Seca de Raiz (g) 5,02a 4,86a 5,36a 6,08a 4,69a Massa seca parte area (g) 13,58a 13,48a 14,56a 13,02a 10,09a Massa seca de vagens (g) 10,19a 10,49a 11,80a 11,20a 8,78a Massa seca de gros (g) 27,25a 26,69a 30,44a 29,49a 26,19a

Letras iguais no diferem entre si nos diferentes tratamentos, a 5% de probabilidade pelo teste de Tukey. ns*: Dado no significativo.

33 As plantas mantm latentes os mecanismos de resistncia, com intuito de poupar energia para a reproduo at a eventual chegada do patgeno (HEIL, 2002; BOSTOCK, 2005). O custo de maior importncia est nesse perodo, visto que, o custo para proteger a planta, quando um patgeno ataca as mesmas, deve valer a pena, e, as plantas induzidas serem beneficiadas (COLEY et al., 1985). Se energia alocada para proteo, onde no h condies para a ocorrncia da doena, o investimento pode no valer a pena e o custo ser muito maior do que simplesmente o valor de aplicao de um indutor.

4.2. CULTIVO DO FEIJOEIRO PARA ANLISES DA SEVERIDADE E DOS PARMETROS DA PRODUO EM CAMPO

Para uma possvel anlise comparativa, est representada na Tabela 5, a escala fenolgica do feijoeiro do experimento em estudo, com base na proposta por Fernadez et al. (1986). Tabela 5 Dias aps a emergncia (DAE) e dias do calendrio (DC) em que os estdios fenolgicos foram caracterizados.
Estdio V1 V2 V3 V4 R5 R6 R7 R8
(1)

Descrio

(1)

DAE 0 7 20 25 38 46 58 67

DC 29/09 06/10 19/10 24/10 06/11 14/11 25/11 04/12

Emergncia Folhas primrias abertas Primeira folha trifoliolada aberta e plana Terceira folha trifoliolada aberta e plana Primeiro racimo floral nos ns inferiores pr florao Primeira flor aberta florao Formao de vagem Enchimento de gros

R9 Maturao 78 15/12 A caracterizao do estdio definida quando 50% ou mais plantas da parcela ou amostra apresentam as caractersticas descritas.

34 4.2.1. Avaliao da severidade do crestamento bacteriano comum

Nas plantas de feijoeiro tratadas com os produtos biticos (leo de laranja, S. boulardii, S. cerevisiae), foi possvel observar a reduo na severidade da doena em relao ao controle (gua), tanto para cultivar moderadamente resistente doena (IPR-139) bem como a suscetvel (IAPAR-81) (Figura 3). possivel verificar que os tratamentos alternativos foram superiores testemunha e ocasionaram efeito positivo para reduo da doena (Figura 3), massa de mil gros (Figura 4) e produtividade (Figura 5). No foi constatada diferena signicativa para doenas entre as cultivares avaliadas. Observou-se uma menor severidade da doena para os indutores biolgicos, destacando-se S. boulardii e S. cerevisiae, que no diferiram estatisticamente entre si. Com exceo da aplicao de ASM para a cultivar Iapar 81, observou-se, em todos os produtos testados, efeito na reduo do crestamento bacteriano. Notase que, estatisticamente, a menor severidade da doena, para ambas as cultivares, ocorreu com pulverizaes de Saccharomyces cerevisiae, seguido por

Saccharomyces boulardii. O extrato da levedura contm vrios componentes que podem eliciar respostas de defesa, como quitina, oligmeros de N-

acetilglucosamina, beta-glucanas, glicopeptdeos e ergosterol (BOLLER, 1995). Diversos trabalhos mostraram o potencial de compostos eliciadores de clulas da levedura S. cerevisiae, na ativao de repostas de defesa contra fitopatgenos e no controle de doenas em plantas de milho, sorgo, eucalipto e maracuj (PASCHOLATI, 1998). Diversos trabalhos mostraram o potencial de compostos eliciadores de clulas da levedura S. cerevisiae, na ativao de repostas de defesa contra fitopatgenos e no controle de doenas em plantas de milho, sorgo, eucalipto e maracuj (PASCHOLATI, 1998). Zanardo et al. (2009) concluiram que a levedura comercial S. cerevisiae contm fraes indutoras de resistncia conta a antracnose. Bonaldo (2005) verificaram que preparaes de S. cerevisiae (fermento biolgico) induziram o acmulo de fitoalexinas em mesoctilos do sorgo.

35 Stangarlin et al. (2010) verificaram que S. boulardii e derivados, como filtrado de cultura e produto comercial base de clulas desta levedura, induzem a sntese das fitoalexinas gliceolina em soja e deoxiantocianidinas em sorgo. Boava et al. (2010), em estudos sobre o efeito de Saccharomyces cerevisiae na ativao de defesa do eucalipto contra ferrugem, observaram maiores nveis de atividade da enzima peroxidase, evidenciando uma promissora alternativa para o controle da doena atravs da induo de resistncia, provocando expressivo aumento na atividade de quitinases.
IPR-139
30,00 25,00 b

IAPAR-81
30,00 25,00 bc 20,00 ab 15,00 10,00 5,00 0,00 ab a c

Severidade mdia (%)

ab 20,00 ab 15,00 10,00 5,00 0,00 ab a

Figura 3 - Avaliao da severidade do crestamento bacteriano comum causado por Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli em plantas de feijo cv. IPR-139 (CV(%)=9,97) e IAPAR-81(17,87). Mdias seguidas pela mesma letra no diferem estatsticamente entre si pelo teste de Tukey a 5%. Dados transformados por (x + 0,5).

4.3.

PARMETROS DE PRODUO

4.3.1. Massa de mil gros e produtividade

A produtividade foi seriamente afetada a campo especialmente pelo estresse hdrico (Figura 2) a partir do enchimento de gros (estdio R8), resultando na produtividade mdia no experimento de 647,24 kg ha -1 para cultivar IAPAR-81 e

Severidade mdia (%)

36 787,98 kg ha-1 para IPR-139, sendo a produtividade maior se comparado ao tratamento controle (gua), cujas cifras mdias resultam em 647,24 kg ha -1(IAPAR81) e 787,98 kg ha-1 (IPR-139). A aplicao dos indutores biticos (Saccharomyces cerevisiae,

Saccharomyces boulardii e leo de laranja) resultou na produtividade de 888,9; 782,4 e 750 kg ha-1, respectiavamente, para cultivar IAPAR-81. Por outro lado, para cultivar IPR-139, a produtividade mdia situou-se em 976,8; 958,4 e 907,4 kg ha-1, respectivamente para Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces boulardii e leo de laranja. Quanto aplicao do ASM, a produtividade mdia se situou em 338 kg ha -1 para IAPAR-81 e 356,5 kg ha-1para IPR-139, no diferindo estatisticamente do tratamento controle (gua). No houve diferena estatstica em relao massa de mil gros (Figura 4) e produtividade (Figura 5) entre cultivares, porm, numericamente, se observou uma leve tendncia de maiores cifras em favor a cultivar IPR-139. Tambm foi possvel observar que a massa de mil gros teve um comportamento semelhante produtividade, apresentando valores superiores para gros provenientes de plantas tratadas com leveduras e leo de laranja e inferiores para plantas gros oriundos de plantas tratadas com ASM (Figura 4). Desta forma os tratamentos biticos diferiram significativamente tanto para massa de mil gros (Figura 4), bem como para produtividade (Figura5) do tratamento com ASM, para ambas as cultivares.

37
0,200 0,180 a ab ab b a ab bc c ab a

Massa de mil gros (kg)

0,160 0,140 0,120 0,100 0,080 0,060 0,040 0,020 0,000

gua ASM leo de laranja S. boulardii S. cerevisiae

IPR - 139

Cultivares

IAPAR - 81

Figura 4 - Massa de mil gros das cultivares de feijoeiro IPR-139 e IAPAR-81, tratadas com leo de Laranja (Orobor 5 mL L-1), Saccharomyces cerevisiae (2 g L1

), Saccharomyces boulardii (2 g L-1), Acibenzolar-S-metil (Bion 100 mg i.a. L-1) e

gua destilada (200 L ha-1). Aplicao de tratamentos realizada aos 14, 28 e 42 dias aps a emergncia. Mdias seguidas pela mesma letra no diferem estatsticamente entre si pelo teste de Tukey a 5%.

1200

Produtividade (Kg ha-1)

1000 800 600 400 200 0 IPR - 139 a a

a ab

a gua ASM

ab b b

leo de laranja S. boulardii S. cerevisiae

IAPAR - 81 Cultivares

Figura 5 - Produtividade das cultivares de feijoeiro IPR-139 e IAPAR-81, tratadas com leo de Laranja (Orobor 5 mL L-1), Saccharomyces cerevisiae (2 g L-1), Saccharomyces boulardii (2 g L-1), Acibenzolar-S-metil (Bion 100 mg i.a. L-1) e gua destilada (200 L h-1). Aplicao de tratamentos realizada aos 14, 28 e 42 dias aps a emergncia. Mdias seguidas pela mesma letra no diferem estatsticamente entre si pelo teste de Tukey a 5%.

38 Faulin (2010) observou a reduo no peso de gros em plantas que receberam aplicaes sucessivas de ASM. Kuhn (2007) verificou que a produtividade do feijoeiro com resistncia induzida por ASM foi reduzida na medida em que se aumentava o nmero de aplicaes. Com reduo na massa de gos, consequentemente, houve reduo da produtividade em plantas tratadas com ASM. Iriti e Faoro (2003) observaram uma pequena diferena na produtividade devido a um menor nmero de vagens e menor massa gros de plantas de feijo tratadas com ASM. A menor produtividade de plantas tratadas com ASM pode ser atribuda principalmente pelo custo metablico da alterao nos processos bioqumicos da planta, que ocorre em maior intensidade em condies de estresse, principalmente no que diz respeito nutrio nitrogenada (DIETRICH et al., 2004). Cabe salientar que este experimento no ocorreu em condies de cultivo consideradas ideais, como demonstrados na Figura 2. Por outro lado, as leveduras no causaram custo metablico. Evidenciado nestes resultados, o que de acordo com Kuhn et al., (2006) no foi encontrado nenhum trabalho na literatura com uso de microorganismos que mostrasse a evidencia de custo metablico.

5.

CONCLUSES

Plantas tratadas com leveduras reduzem a severidade do crestamento bacteriano comum do feijoeiro e aumentam sensivelmente a produtividade. Em condies de campo sob estresse hdrico, a aplicao de ASM proporciona custo metablico e reduz a produtividade. ASM no reduziu a severidade do crestamento bacteriano comum. leo essencial de laranja no reduziu a severidade do crestamento bacteriano comum, porm, no interferiu nos parmetros de produo.

6.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

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