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BIORREACTOR DE 3 LITROS 1. DESCRIPCIÓN DEL EQUIPO

BIORREACTOR DE 3 LITROS 1. DESCRIPCIÓN DEL EQUIPO El biorreactor se configura para proveer al usuario

El biorreactor se configura para proveer al usuario un sistema tipo paquete que contiene elementos necesarios para funcionar en un proceso de fermentación; los dispositivos basicos requeridos para funcionar en un proceso de fermentación son:

Equipo para suministrar aire, Equipo generar y controlar la temperatura, Equipo para la agitación mecánica otros equipos como bombas, rotámetros, válvulas, filtros , tuberías, abrazaderas, pHmetro y su controlador, oxímetro y su controlador entre otros deben ser adquiridos por aparte, teniendo en claro que el equipo puede emplearse para realizar una fermentación controlando manualmente el pH, el oxígeno disuelto y el nivel de espuma. Este equipo incorpora las especificaciones de diseño para un sistema biorreactor de 3 litros para usos microbianos de fermentación. El recipiente se puede utilizar para fermentaciones de levadura y tipos similares de organismos. El sistema se configura para controlar la temperatura, la agitación y para suministrar aireación al sistema. El fermentador incluye un montaje de sello mecánico y agitador con un impeller de 6- cuchillas tipo Rushton. El sistema del agitador es accionado por un motor y controlado por un regulador. El regulador de velocidad funciona dentro de una rango de 1 - 1410 rpm; pero se limitará a funcionar solo hasta 600 rpm. La adición de oxígeno se realiza mediante una bomba del tipo Diafragma, a la cual se le puede dosificar el flujo de aire mediante una perilla. El gas se agrega al fermentador a través del tubo difusor de gas. Para el control de temperatura el equipo utiliza un sistema de control para regular la calefacción del cultivo. La manta de calefacción está alrededor del cuerpo del recipiente y se acciona según el setpoint del controlador de temperatura. La temperatura es medida

por el sensor. Para los cultivos que generan calor en altas densidades celulares se utilizará el intercambiador de calor y siendo necesario instalar un sistema de control para baja temperatura. La válvula de enfriamiento debe ser conectada a una fuente de agua fría. El agua fría atraviesa un intercambiador de calor incorporado en el biorreactor para mantener la temperatura baja.

Es necesario colocar un filtro para el difusor de aire. El equipo viene con un tubo para el muestreo. El montaje triple a la entrada incorpora tres tuberías para la adición de reactivos. Se proporciona un puerto que contiene un septum por el cual se hace la inoculación o la adición de reactivos. Los septum de goma se perforan con una aguja o una jeringuilla para hacer estas adiciones. Se proporciona un gabinete que contiene el controlador de velocidad, el controlador de temperatura y el disyuntor de la bomba de aire; esto permite una manipulación más conveniente por parte del usuario.

  • 2. DISPOSICIONES GENERALES

Los sistemas del biorreactor se diseñan para resolver exigencias específicas del consumidor. Debido a su configuración estos sistemas se pueden modificar fácilmente para usos específicos. La configuración de los sistemas se hace de forma fácil para que

sean modificados en el futuro para otros usos. La siguiente es una lista de los criterios de diseño que formulan el concepto general de este equipo:

  • 1. La configuración del equipo da lugar a un sistema que llena las necesidades exactas del usuario pero no lo limita en su uso. El sistema se puede modificar o ampliar fácilmente en fechas posteriores de una manera rentable.

  • 2. Todo el material en contacto con el recipiente se construye de acero inoxidable 304 y cristal de borosilicato. Todos estos materiales son no tóxicos y químicamente inertes con el proceso de cultivo.

  • 3. El sistema se entrega con toda la documentación apropiada requerida para ser operado; esta documentación incluye tópicos de operación, instrucciones generales del mantenimiento y dibujos seleccionados.

  • 4. El sistema se diseña para funcionar asépticamente después de la inoculación y según estándares de GMP.

  • 3. ESPECIFICACIONES DEL EQUIPO

Este reactor

se utiliza

sobre todo para

cultivar células u

organismos sensibles. El fondo redondo asegura

características de mezcla con grado óptimo.

El fermentador

de 3 litros es ideal para las fermentaciones microbianas, de levadura y de cultivo de células. El fermentador de 3 litros es conveniente para:

  • 1. Optimización de medios

  • 2. Optimización de producción

por el sensor. Para los cultivos que generan calor en altas densidades celulares se utilizará el

3.

Estudios de escalado

4.

Optimización de reactores

5.

Cultivos continuos

6.

Sistemas de perfusión, etc.

3.1

VASO

El cuerpo del recipiente por su parte externa es de cristal de borosilicato.

1.

Volumen total: 3 l (relación H/D = 1.9)

2.

Volúmenes mínimo de trabajo: 0,5 l

3.

Volumen de trabajo: 2.7 l (relación H/D = 1.5)

4.

Espacio requerido para esterilizarlo: HxD = 450 mm x 250 mm (17.7in x 9.8in)

3.2

DISCO SUPERIOR

Los puertos del disco superior permiten que una variedad amplia de componentes sea instalada en este fermentador. Esto demuestra ser una ventaja importante para los usos donde la configuración del recipiente puede cambiar a menudo. El disco superior se construye de acero inoxidable 304. (Ver sección planos en este documento)

1 puerto central (para el montaje del agitador).

2 Puertos de 12 milímetros para auxiliares, se pueden intercambiar para:

a.

Sonda de oxígeno disuelto

b.

Sonda depH

c.

Puerto triple

d.

Septum, (para la cual si se desea tener dos puertos, el equipo dispone de dos soportes para el septum).

1 Puertos de 3/8 Pära el intercambiador de calor.

3 Puertos de ¼ NPT para:

a.

Elemento primario de temperatura

b.

Tubo de muestreo

c.

Difusor de aire.

3 Puertos de 6 milímetros, para El sistema de baffles).

3.3

ANILLO DE SUJECIÓN

El anillo de sujeción y cierre del disco superior se hace con 2 orings de silicona

1 Anillo de silicona de 150 x 156 x 3 mm

1 Anillo de silicona de 135 x 143 x 4 mm

6 Tuercas para montar el disco superior al anillo de sujeción.

3.4

MOTOR

El motor se coloca sobre la tapa del montaje del agitador sin el uso de herramientas. Un acople tipo cruceta asegura la orientación apropiada del motor en el montaje del agitador. Algunas de las características del motor incluyen:

  • 1. Larga vida.

  • 2. Alto torque.

  • 3. Control de velocidad.

El motor puede funcionar hasta velocidades de 1750 rpm; pero nunca sera conveniente en procesos de biorreacción manejar más de 500 rpm, por razones que se explican en la sección de agitación.

Este motor es de inducción trifásico a 220 V AC, con Ventilación independiente por medio de ventilador a 12 V DC.

  • 3.5 CONTROLADORES

    • 3.5.1 Temperatura

El controlador de temperatura para una resistencia que se referencia según instrucciones en el anexo 1

  • 2.5.2 Variador de revoluciones del motor

El controlador de velocidad para el motor se referencia según instrucciones en el anexo 2 Indicador de pH, se referencia según instrucciones en el anexo 4

4. SISTEMA DE AIREACIÓN - DIFUSIÓN

El montaje del tubo para el difusor se hace en un puerto de ¼ NPT sobre el disco superior. Este difusor "en forma de L" se diseña para los usos microbianos donde se requiere gran cantidad de gas. La tubería del difusor se extiende al fondo del recipiente y termina apenas debajo del impellers situados en el eje del agitador. Esto permite que las burbujas que salen del difusor puedan levantarse hacia el impeller donde serán partidas para mejorar la difusión. 7 agujeros en la superficie inferior del difusor previenen un potencial bloqueo. Los agujeros tienen un diámetro de 1 milímetro. El extremo de la tubería del difusor termina con un tornillo de cabeza plana lo que simplifica la limpieza de la tubería. El tornillo se puede remover para una difusión rápida cuando se requiere aireación agresiva. La tubería del difusor se hace de acero inoxidable 304. La longitud del difusor es de 236 milímetros. La bomba Air Master 2000 para suministro de aire consiste en una bomba del tipo diafragma que se provee con el equipo como elemento auxiliar (Ver anexo 5); si el usuario requiere mas exigencia en la aireación el equipo se puede conectar directamente a la red de aire del usuario, con los respectivos cuidados de regulación de presión y caudal. Los filtros para aire se sugiere sean del tipo filtro para línea gas – líquido EW-02908-90 Cole Parmer catálogo de productos 2006 página 439 filtro de 0.3 milimicras.

3.4 MOTOR El motor se coloca sobre la tapa del montaje del agitador sin el uso
  • 5. SELLO MECÁNICO

El eje del agitador es encajado directamente por el motor en el ensamble de sello mecánico. Ésta es la manera más común de acoplar, pues la operación está libre de contaminación siendo asegurada por el uso del sello. El sello permite la operación a largo plazo (aproximadamente 5.000 horas) con mantenimiento mínimo. Además el montaje de sello mecánico produce una superficie baja para fricción que consume poca energía. Esto asegura que la energía sea entregada más eficientemente a los bioprocesos. La fricción superficial baja reduciendo al mínimo la generación de calor debido a la fricción y proporcionando una operación silenciosa.

5. SELLO MECÁNICO El eje del agitador es encajado directamente por el motor en el ensamble
  • 6. BAFLES

El montaje de los bafles se realiza en los puertos de 6 mm del disco superior. Este ensamble se utiliza para romper el flujo rotatorio de líquido en el recipiente que puede ocurrir a altas velocidades de agitación. El uso de bafles elimina el flujo laminar, crea un flujo turbulento y realza la transferencia de masa. El bafle se monta cerca de la pared del recipiente. Típicamente tres bafles son instalados a 120º uno del otro. Los bafles son de 200 milímetros en longitud y tienen una anchura aproximadamente de 0,1 veces el diámetro del recipiente. Los bafles se hacen de acero inoxidable 304.

5. SELLO MECÁNICO El eje del agitador es encajado directamente por el motor en el ensamble
  • 7. IMPELLER

5. SELLO MECÁNICO El eje del agitador es encajado directamente por el motor en el ensamble

El impeller de turbina plana de disco Rushton se utiliza típicamente para usos microbianos donde se requiere mezcla vigorosa. Dependiendo del recipiente generalmente se requieren 1 ó 2 impellers. La forma del impeler ayuda a romper y separar burbujas de aire mejorando la transferencia del oxígeno. Una variedad de impeller se pueden montar en el eje del agitador a varias alturas. El diámetro del impeler es 46 milímetros que es aproximadamente 1/3 del diámetro del recipiente.

5. SELLO MECÁNICO El eje del agitador es encajado directamente por el motor en el ensamble
  • 8. SOPORTE PARA EL SEPTUM

Este soporte para el septum se ubica en un puerto del disco superior de ¾ NPT. El soporte contiene los septum de goma que se pueden penetrar con una aguja o una jeringuilla. Éste es un medio simple para la adición de inoc ulo o de reactivos. Los tabiques de goma se hacen de caucho vulcanizado y se substituyen fácilmente por los septum de reemplazo.

9. MONTAJE TRIPLE PARA LA ADICIÓN DE REACTIVOS

El montaje triple para la entrada de reactivos se monta en un disco septum, este ensamble incorpora tres tubos separados para el uso eficiente del espacio. Cada tubo se puede utilizar independientemente para la adición de reactivo. Las tuberías se espacian en varias longitudes debajo del disco superior para evitar posibles mezclas del reactivo que se puedan suspender de la tubería. Las longitudes de las tuberías son 30 milímetros, 25 milímetros y 20 milímetros. El montaje triple de la entrada se hace de acero inoxidable 304.

9. MONTAJE TRIPLE PARA LA ADICIÓN DE REACTIVOS El montaje triple para la entrada de reactivos
  • 10. MUESTREO

El ajuste de la tubería de muestreo se ubica en un puerto del disco superior de ¼ NPT. Este ensamble tiene una longitud fija de 213 milímetros y un ID de 5 milímetros. La tubería se hace de acero inoxidable 304.

  • 11. INTERCAMBIADOR DE CALOR

El montaje del intercambiador de calor se realiza en un puerto de 3/8 del disco superior. El intercambiador de calor se puede utilizar para el calentamiento o enfriamiento de los medios conjuntamente con un termocirculador no suministrado por el proveedor. El agua caliente o fría, según lo requerido, se circula a través del intercambiador de calor para mantener el setpoint de temperatura. El intercambiador de calor se hace de acero inoxidable 304 e incorpora un montaje de bafle en una sola intersección permitiendo mayor eficacia en la distribución del calor mientras que mantiene una geometría pequeña.

  • 12. ELEMENTO SENSOR PRIMARIO – SENSOR DE

TEMPERATURA

9. MONTAJE TRIPLE PARA LA ADICIÓN DE REACTIVOS El montaje triple para la entrada de reactivos

El montaje del elemento sensor primario se realiza en un puerto de ¼ NPT del disco superior. Este elemento se utiliza para sensar la temperatura. es del tipo Termopar K, este sensor entra en contacto directo con los medios. Tiene un OD de 6,1 mm y una longitud de 315mm. la funda del sensor es de acero inoxidable 304. Es muy importante que el sensor se ubique a una altura de 200 mm después la tapa del reactor, esto con el fin de quede lugar donde pueda sensar correctamente la temperatura y no interfiera con el movimiento del agitador.

  • 13. ABRAZADERA DE CALEFACCIÓN – RESISTENCIA DE

BANDA

La resistencia de abrazadera se utiliza para calentar el contenido del biorreactor. La resistencia de abrazadera contiene tres ventanas de visión circulares de una (1) pulgada de diámetro. La resistencia de abrazadera es ideal para los usos donde las células pueden ser sensibles a la calefacción tal como células mamíferas. La resistencia de abrazadera distribuye el calor sobre un área superficial grande por lo tanto la calefacción es uniforme y se eliminan los puntos calientes. El uso de una resistencia de abrazadera es una alternativa económica a los baños térmicos. Además la resistencia de abrazadera ahorra

espacio por la eliminación del baño térmico, elimina la preocupación de la evaporación del agua, los escapes de agua y también permite el control del contenido del fermentador reaccionando a la temperatura real de los medios en el recipiente mejor que controlando la temperatura de los medios en el baño térmico. Marca de la abrazadera: Ovelma Ref PNB097 Voltaje de operación: 110 V AC Potencia de operación: 500 Vatios Alto de la abrazadera: 141.75 mm (5.58 in) Diámetro interno de la abrazadera: 142 mm (5.59 in) Evite esterilizar y exponer al contacto directo con el agua la abrazadera de calefacción.

espacio por la eliminación del baño térmico, elimina la preocupaci ón de la evaporación del agua,
espacio por la eliminación del baño térmico, elimina la preocupaci ón de la evaporación del agua,