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Validao de Processos de Esterilizao

SRGIO LUIZ NOGAROTO THEREZA CHRISTINA VESSONI PENNA ALZIRA MARIA DA SILVA MARTINS IVAN PEREIRA DE GODOI

INTRODUO
Considerando a validao do processo esterilizante, h vrios aspectos de similaridade que independem do procedimento especfico adotado, sendo sempre fundamental a sua documentao. Sem protocolos completos, incluindo relatrios de validao com dados acurados e acessveis, virtualmente impossvel substanciar que um processo tenha sido adequadamente validado. Em todos os casos, a preocupao inicial deve ser com a qualificao do equipamento, utilidades e instalaes a ele vinculadas. As vantagens de documentao adequada do equipamento antes de iniciar a validao so evidentes. Principalmente no que diz respeito aos tpicos de controle de alterao do equipamento, controle das alteraes desenvolvidas e documentaes do processo, sendo todos dependentes do desempenho do equipamento1.

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Planos de Validao para Processos Esterilizantes

Para que haja coerncia no processo esterilizante, devem ser estabelecidos planos de validao, incluindo os seguintes aspectos: qualificao do esterilizador, validao do produto e validao do processo1. Qualificao do Esterilizador Antes de ser introduzido em uso rotineiro, deve ser avaliado o correto funcionamento do equipamento. Qualificao da Instalao Deve ser avaliada a correta instalao de todas as partes, calibrao de todos os instrumentos de medio e conformidade com especificaes do equipamento a serem demonstradas e certificadas. Isto normalmente feito pelo fornecedor, em colaborao com o usurio do equipamento (Figs. 4.1 e 4.2). A qualificao deve ser refeita, ao menos parcialmente, quando alteraes tcnicas ocorrerem durante a manuteno ou modificao do equipamento. Qualificao de Operao Para um dado tipo de carga, a condio de confiabilidade do equipamento deve ser demonstrada ao menos trs ciclos consecutivos. Para autoclaves e outros esterilizadores a calor, devem ser feitos estudos de distribuio do calor em posies adequadas considerando a cmara e a carga (Fig. 4.3). O nmero e posio dos termopares so determinados pelo tipo e configurao da carga, bem como pelo tipo de instrumento e de ciclo empregados. Para esterilizadores a gs, a umidade relativa e a temperatura devem ser medidas por sensores fsicos distribudos em posi-

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Fig. 4.1 Vista lateral da cmara de esterilizao.

Fig. 4.2 Painel de controle da cmara de esterilizao.

es adequadas. Indicadores biolgicos ou monitores biolgicos distribudos na carga devem ser usados para verificar condies esterilizantes em todas as posies (Fig. 4.4). A penetrao da radiao ionizante na carga mais confiavelmente monitorada pela distribuio de dosmetros.

Validao do Produto/Compatibilidade do Produto com o Processo Esterilizante

Para cada produto a ser esterilizado, deve haver cuidadosas consideraes quanto adequao do mtodo de esterilizao proposto. Para produtos estveis ao calor, o processamento em autoclave no acondicionamento final usualmente o mtodo de escolha. , porm, necessrio confirmar que todas as partes do material de acondicionamento sejam igualmente resistentes ao processo de autoclavao e que a estabilidade do produto no seja prejudicada.

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Fig. 4.3 Configurao da carga em Pallets.

O tipo de autoclave tambm deve ser considerado. Se gravitacional, com pr-vcuo ou mistura ar-vapor, compatibilizando a profundidade do vcuo ao produto. Alm de se proceder adequao do processo, durante o desenvolvimento do ciclo devem ser includos estudos de inativao dos bioindicadores no prprio produto, elucidando possveis interferncias. Para esterilizao gasosa, deve ser dada ateno a possveis reaes do produto com o agente esterilizante, bem como a reteno de gases txicos e seus derivados de degradao no produto. Os procedimentos de degaseificao devem ser validados e criteriosamente seguidos. Na esterilizao por radiao, possveis produtos da radilise, provocados por reaes com radicais livres, devem ser cuidadosamente investigados. Alguns produtos podem apresentar riscos ao consumidor, enquanto outros, causando descolorao, podem ser meramente estticos, mas ainda assim, exigir a deciso quanto adequao do processo de esterilizao.

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Fig. 4.4 Indicadores biolgicos distribuidos na unidade de carga, do produto selecionado.

DEFINIES
Produto Master2
um produto normal ou simulado que representa a maior densidade de produto e que nunca foi esterilizado.

Especificao de Processo de Esterilizao

o detalhamento da especificao do processo de esterilizao qualificada para uma determinada famlia de produto.

Produto Inoculado
um produto normal ou simulado que possui um indicador biolgico (IB) inoculado e que representa a maior dificuldade de esterilizao.

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Indicador Biolgico entre Caixas

um indicador biolgico colocado dentro de um envelope de papel, posiocionado entre as caixas do produto.

Nvel de Garantia de Esterilidade (SAL)

Representa a probabilidade de um microrganismo vivel estar presente em um produto aps a sua esterilizao. definido como o nvel de confiana requerido para operar o sistema de esterilizao de forma eficiente.

IB Indicador Biolgico
Carreador impregnado com suspenso de microrganismo, contendo o nmero de esporos viveis de resistncia conhecida ao processo de esterilizao especificado. Esporos de Bacillus stearothermophilus ATCC 7953 so recomendados para esterilizao por calor mido temperatura 121oC. Esporos de Bacillus atrophaeus ATCC 9372, anteriormente denominado Bacillus subtilis varivel niger ATCC 9372, so recomendados para a esterilizao por xido de etileno e para a esterilizao por calor mido temperatura inferior a 121oC. Os indicadores de endotoxina so usados para monitorar esterilizao por calor seco.

QI Qualificao de Instalao
Obteno de evidncias documentadas de que a instalao do equipamento foi realizada em acordo com as intenes do projeto.

QO Qualificao de Operao
Obteno de evidncias documentadas de que a operao do equipamento est de acordo com as intenes do projeto.

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QD Qualificao de Desempenho
Obteno de evidncias documentadas de que os operadores esto treinados e o equipamento est funcionando de forma confivel, produzindo produtos aceitveis, e que as variveis de processo crticas so conhecidas e controladas.

rea de Aerao
rea sob condies controladas, onde os produtos permanecem retidos, aps a esterilizao, para retirada de resduos de gs3.

Validao
Exerccio de realizar testes programados e documentados para demonstrar que um processo trabalha dentro de limites especificados e ir consistentemente produzir produtos/processo conforme especificaes pr-determinadas.

Pr-condicionamento
Tratamento do produto antes da realizao do ciclo de esterilizao para dar carga a ser esterilizada temperatura e umidade pr-determinada. Obs.: todos os parmetros acima referenciados tomaram como exemplo uma cmara de dupla porta com 11,7m3.

PROCESSOS DE ESTERILIZAO
Os planos de validao para processos de esterilizao so aplicveis a qualquer tipo de equipamento destinado a esse fim. No entanto, neste captulo abordaremos em detalhes trs processos especficos, por serem os mais utilizados:

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 esterilizao por xido de etileno (EtO) ou outro agente qumico como perxido de hidrognio, formaldedo dentre outros; esterilizao por vapor mido; esterilizao por calor seco.

Etapas para Validao do Processo de Esterilizao por xido de Etileno (EtO)4-12

Material de Embalagem Os materiais e o produto de embalagem devem ser compatveis com o processo de esterilizao por xido de etileno e devem ser projetados para manter a esterilidade e a qualidade dos produtos contidos em seu interior at o momento de uso. Todos os materiais de embalagem devem possuir os requisitos de qualidade detalhados em especificaes escritas. As caractersticas mais importantes que devem ser consideradas so: porosidade; no-absorvente; resistncia trao; resistncia selagem; inerte; impermeabilidade gua. A realizao da esterilizao na embalagem final com o produto selado prefervel com relao esterilizao do produto intermedirio, pois no requer um manuseio subseqente. Nestes casos importante que os materiais sejam escolhidos para permitir a penetrao de umidade durante o pr-condicionamento da carga. Pr-condicionamento Caso a empresa opte por realizar um pr-condicionamento da carga a ser esterilizada fora do esterilizador, este procedimento aceitvel desde que:

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 a rea de pr-condicionamento fique locada prxima ao esterilizador para proporcionar uma rpida transferncia dos materiais; a temperatura e a umidade relativa de rotina da rea sejam adequadas s condies usadas no ciclo de esterilizao; a rea seja projetada de forma a garantir condies de temperatura e umidade relativa homogneas durante o ciclo de pr-condicionamento; a temperatura mnima aceitvel dos produtos antes de os mesmos entrarem na rea de pr-condicionamento seja definida; o tempo mximo para a transferncia da carga do pr-condicionamento para o esterilizador seja definido. O condicionamento da carga a ser esterilizada tambm pode ser executado no interior do esterilizador. Para tanto, preciso definir condies mnimas de temperatura e umidade relativa na carga antes da injeo de gs nos produtos. A temperatura e a umidade relativa devem ser monitoradas e mantidas em condies controladas definidas em validao. Qualificao de Instalao do Esterilizador O projeto de construo da rea de esterilizao e sistemas auxiliares devem levar em considerao o seguinte: a rea de estocagem deve ser segura, ventilada e estar de acordo com as normas de segurana; o sistema de entrada de gs deve incluir um vaporizador para garantir que o gs no seja enviado para o esterilizador na forma de lquido; o sistema e/ou equipamento de controle de entrada de gs no esterilizador deve permitir monitorao da quantidade de gs que entrou no esterilizador; o esterilizador deve possuir instrumentos para medir e registrar a temperatura, a presso e a umidade no interior da cmara, a

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temperatura da jaqueta da cmara e a temperatura do gs na entrada na cmara. A qualificao de instalao implica na verificao e obteno de evidncia documental de que: os equipamentos e instrumentos foram instalados de acordo com as instrues dos seus fabricantes; os instrumentos instalados possuem capacidade de medio adequada inteno de uso; os instrumentos instalados foram calibrados e introduzidos em um programa de calibraes; haja realizao de ciclo com cmara vazia para observar distribuio de calor (pontos frios); haja realizao de teste de vazamento na cmara (sob vcuo e sob presso positiva at 1,5 vez a presso normal de operao); determinao de fatores de desempenho fsico para cmara vazia, tais como: vcuo mximo atingido e razo de decaimento da presso; presso positiva mxima atingida, razo de crescimento da presso durante a injeo do gs e a correlao dos fatores para a monitorao da concentrao do gs no interior da cmara; vcuo mximo atingido e razo de decaimento da presso para a remoo do EtO da cmara; presso positiva mxima atingida, razo de crescimento da presso durante a injeo do ar comprimido. Qualificao de Operao A qualificao de operao implica na verificao e obteno de evidncia documental de que: os equipamentos e instrumentos estejam operando em conformidade com o planejado;

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 os procedimentos de operao, manuteno e segurana no manuseio dos equipamentos estejam implementados; os operadores foram treinados nos procedimentos de operao, manuteno e segurana no manuseio de todos equipamentos; haja realizao de ciclo de esterilizao completo, incluindo todas as fases da esterilizao (vcuo-injeo de vapor, condicionamento, injeo de gs, exposio ao gs e lavagens com ar comprimido filtrado). Qualificao de Desempenho A qualificao de desempenho implica na verificao e obteno de evidncia documental de que o ciclo de esterilizao atinge consistentemente parmetros pr-determinados, estabelecidos em condies operacionais. Qualificao de Desempenho Fsico A qualificao de desempenho fsico implica na verificao e obteno de evidncia documental de que: a configurao da carga de esterilizao foi especificada para cada esterilizador. Somente configuraes validadas podem ser usadas nos ciclos de rotina; os produtos ou famlias de produtos com maior dificuldade de esterilizao so identificados. Novos produtos devem ser comparados com produtos j validados como referncia de configurao de carga e, se for julgado como pior caso para a esterilizao, dever ser submetido a uma qualificao completa de esterilizao; a distribuio da temperatura, presso e umidade relativa na carga monitorada. O nmero de sensores de temperatura e de umidade relativa necessrio para o respectivo monitoramento

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deve estar relacionado ao volume da cmara esterilizadora e da configurao da carga. os sensores de temperatura devem ser distribuidos na cmara, entre as unidades de carga e no interior das mesmas (Fig. 4.5), nas posies especificadas por configuraes da carga, previamente validadas.

Fig. 4.5 - Posio dos sensores de temperatura na carga.

Qualificao de Desempenho Microbiolgico A qualificao de desempenho microbiolgico implica na verificao e obteno de evidncia documental de que:

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 estudos microbiolgicos so executados. As condies do ciclo devem ser equivalentes ou levemente inferiores s condies mnimas aceitveis de operao; os indicadores biolgicos usados no ciclo de qualificao possuem populao e resistncia conhecidas; os indicadores biolgicos so inoculados em produtos e distribudos pela carga de esterilizao incluindo locais considerados mais difceis de esterilizao. o nmero mnimo de indicadores biolgicos na carga de 20 para cmaras de at 5.000 litros e mais dois para cada 1.000 litros; para qualificaes biolgicas iniciais, um nmero de replicatas executado para demonstrar a reprodutibilidade do ciclo; a carga microbiana inicial do produto a ser esterilizado determinada e mantida sob condies controladas (Fig. 4.6).

31/9 32/8 28/7 Entrada da cmara 25/4 24/5 22 27/6 28 28

30 21

20

19/14 18/13 17 13 11 7

10 9/16 6/17 3 4 PALLET 1 1/20

9/15

18/12 23 15/10 PALLET 2 11/11

5/18 2/19

SADA DA CMARA

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PALLET 3 01 VAPOR 02 ETO 03 SENSOR X/Y

X = IBs Y = SENSOR

X = IBs

Fig. 4.6 Posio dos IBs na carga.

Qualificao de Desempenho da rea de Aerao (Degassing) O processo/rea de aerao dos produtos deve ser definido, validado e monitorado. A aerao pode ser executada no interior do esterili-

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zador ou em uma rea separada. A temperatura deve ser monitorada e registrada, e o nmero de trocas de ar da rea estabelecido e controlado. Para cada produto/configurao de carga devero ser estabelecidas curvas de dissipao de resduos de EtO, e devero permanecer em aerao at que os limites especificados/regulamentados sejam atingidos. Liberao de Produtos aps a Esterilizao Os produtos esterilizados devero ser liberados somente aps a realizao de: avaliao dos registros da esterilizao contra os parmetros especificados; realizao e aprovao de teste de esterilidade dos indicadores biolgicos; realizao e aprovao do teste de pirognio dos produtos; realizao e aprovao de teste de resduos de EtO; se aplicvel, realizao e aprovao de inspeo fsica dos produtos, quanto a possveis defeitos causados pelo processo de esterilizao. Freqncia de Requalificaes Requalificaes devero ser executadas periodicamente para detectar qualquer alterao do processo. Tipicamente, uma requalificao simples anual deve ser executada. Uma alterao significante no produto, embalagem ou no processo necessita ser validada. Exemplos de alteraes incluem: embalagem; projeto do produto; configurao ou densidade da carga;

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 equipamentos do esterilizador (incluindo manutenes significantes); processo do ciclo de esterilizao. Qualificao Inicial Os seguintes estudos devero ser realizados para qualificaes iniciais: trs estudos de distribuio de temperatura com a cmara vazia e com monitorao de temperatura em 20 posies. Realizar ciclos completos; um estudo de condicionamento, para avaliar a umidade relativa e temperatura durante a fase de umidificao do processo com 20 sensores de temperatura e trs sensores de umidade relativa. O fornecimento de gs EtO dever estar fechado durante este estudo. O ciclo dever ser abortado antes da injeo do gs, pois os sensores de gs e de umidade podem ser danificados. Usar cmara completa; uma srie de estudos fracionados em condies mnimas para concentrao de EtO e temperatura da cmara durante a exposio, usando IBs e sensores de temperatura. O tempo de exposio para os estudos fracionados dever ser definido com base no desenho do produto a ser esterilizado e em outros produtos j qualificados, usando cmara completa; trs estudos de meio-ciclo (half-cycle) usando IBs e sensores de temperatura. Estes estudos sero executados em condies mnimas de concentraes de EtO, tempo de exposio e temperatura da cmara durante a exposio. Usar cmara completa; um estudo de distribuio de temperatura completo em condies nominais com monitorao de 20 sensores de temperatura. Usar cmara completa.

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Requalificao Uma reviso da qualificao da cmara vazia e uma avaliao do desempenho da cmara devem ser documentadas e aprovadas por pessoal qualificado dentro de um perodo de 12 meses. Esta reviso deve incluir no mnimo: comparao das temperaturas da cmara vazia, paredes e jaqueta atual com as leituras obtidas na ltima qualificao ou requalificao; avaliao de qualquer tendncia de alarmes no equipamento; pesagem do gs e presso do vapor do condicionamento; comparao da concentrao do gs, baseado na pesagem e no diferencial de presso de um ciclo completo com uma carga de produo versus a ltima qualificao/requalificao; comparao da presso do vapor para uma carga completa versus a ltima qualificao/requalificao; resultados de teste de esterilidade dos IBs; reviso das manutenes realizadas no esterilizador; teste de vazamento da cmara. Caso os resultados forem aceitveis e no mostrarem tendncia adversa, a reviso da qualificao aceita. Qualquer produto esterilizado deve ser retido at a reviso da requalificao. Caso forem observadas diferenas significativas ou tendncias adversas, uma requalificao completa deve ser executada com os mesmos parmetros do ciclo validado inicialmente, incluindo no mnimo: estudo de distribuio de temperatura aceitvel com a cmara vazia, conforme requisitos deste procedimento; estudo de meio ciclo aceitvel para cada especificao, usando IBs inoculados e avaliao de distribuio de temperatura; anlise da distribuio de temperatura para o ciclo completo.

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A cmara pode continuar sendo usada para processar e liberar produtos em outros ciclos se estes estiverem aprovados e validados. Qualificao de Produtos Novos ou Modificados Uma qualificao de desempenho microbiolgico dever ser executada na introduo de novos produtos, embalagens ou mudanas nas configuraes das cargas de esterilizao, a menos que essas modificaes tenham sido previamente qualificadas em um ciclo equivalente. A demonstrao dessa equivalncia deve ser documentada. Caso o novo produto no esteja qualificado para a cmara de esterilizao, a qualificao dever ser executada conforme o procedimento de qualificao inicial. Requalificaes Especiais Se faz necessria requalificao do esterilizador anterior a sua data de expirao, caso o equipamento seja alterado de forma significativa. Controles e Artigos de Teste
Para Cada Estudo Fracionado

Mnimo de 20 indicadores biolgicos (IBs) com esporos de Bacillus atrophaeus ATCC 9372 inoculados em fitas de papel, contendo uma populao mdia de 1 106 esporos/fita, so necessrios para cmara de 5 m3 a 10 m3. Um IB no esterilizado ser usado como controle positivo.
Para Cada Estudo Meio-Ciclo

Trinta e dois indicadores biolgicos entre caixas (ICBIs) de Bacillus atrophaeus ATCC 9372 em fitas de papel, contendo populao mdia de 1 106 esporos/fitas.

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Um ICBI no-esterilizado ser usado como controle positivo. Trinta e dois indicadores biolgicos (IBs) de esporos de Bacillus atrophaeus inoculados diretamente na unidade de carga. O produto inoculado para validao deve ser selecionado, baseando-se em avaliaes fsicas dos produtos (densidade, peso e desenho). Um IB no esterilizado ser usado como controle positivo.
Produtos para Composio da Carga de Validao

Cada pallet dever ser constitudo por produtos paletizados conforme especificao (Fig. 4.3). Cada carga de estudo dever ser constituda por trs pallets de produtos com densidade maior ou igual a do produto a ser validado. As cargas que forem submetidas ao gs EtO s podero ser utilizadas para outro estudo aps atingirem condies iniciais de temperatura e realizao de inspeo visual em no mnimo cinco caixas por pallet, verificando a presena de caixas danificadas. Monitoramento dos Eventos de Cada Estudo O dia e a hora dos registros grficos da cmara devero ser sincronizados com o registrador (data logger) ligado aos sensores de temperatura e umidade. Caso isto no seja possvel, usar um cronmetro calibrado e referenci-lo nos documentos. Os seguintes eventos e seus horrios de acontecimento devero ser registrados (data logger): incio do ciclo; final do condicionamento (umidificao); final da injeo de gs (incio da exposio); final da exposio.

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ESTERILIZAO POR CALOR MIDO13,14

O procedimento de esterilizao de materiais que oferece maior segurana o vapor saturado sob presso, realizado em autoclaves. Neste equipamento, os microrganismos so destrudos pela ao combinada da temperatura, presso e umidade que promovem a termocoagulao e a desnaturao das protenas da estrutura gentica celular. O vapor saturado possui caractersticas vantajosas e outras limitantes como processo de esterilizao. As vantagens consistem no rpido aquecimento e rpida penetrao em artigos txteis ou tecidos de algodo, destruio dos esporos microbianos em curto perodo de exposio, fcil controle de qualidade e letalidade, a no presena de resduos txicos nos materiais submetidos a este processo e ser econmico. As limitaes consistem na incompleta remoo do ar da cmara interna, no permitindo a difuso e a expanso do vapor para realizar esterilizao e o uso incorreto do equipamento, que pode levar ao superaquecimento do vapor, com diminuio do poder microbicida, alm de no esterilizar leos e ps. A NBR ISO 1113415 especifica requisitos para o uso do calor mido no desenvolvimento do processo de esterilizao, na validao do processo de esterilizao e no controle da rotina de esterilizao. Envolve todos os processos por calor mido, incluindo vapor saturado e mistura ar-vapor, aplicvel a todos os processos de fabricao industriais e a todos os outros que realizam terceirizao da esterilizao por calor mido. Os princpios esquematizados podem ser teis no uso da esterilizao por calor mido em estabelecimentos que no sejam indstrias de produtos hospitalares.

Validao de Processo de Esterilizao por Calor mido13,15

Esterilizao por Calor mido O processo de esterilizao por calor mido utiliza vapor saturado sob presso, o qual injetado dentro da cmara esterilizadora (au-

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toclave). O princpio bsico da sua operao consiste na eliminao do ar contido no interior da autoclave substituindo-o por vapor; este vapor aquecer todo material at a temperatura especificada, promovendo a reduo microbiolgica desejada. Qualificao de Instalao Na qualificao de instalao, o que se busca a garantia de que: os equipamentos adquiridos/disponveis so adequados; a instalao do(s) equipamento(s) ser realizada conforme instrues dos fornecedores e de modo a proporcionar o melhor desempenho possvel; os instrumentos instalados em todos os equipamentos sero calibrados em suas faixas de uso contra padres rastreveis a padres nacionais/internacionais. Qualificao de Operao Na qualificao de operao, o que se busca a garantia de que: o(s) equipamento(s) instalado(s), como por exemplo bombas de gua, caldeira, torres de resfriamento, sensores e registradores de presso e temperatura, vlvulas etc., esto funcionando adequadamente individualmente e em conjunto com os demais equipamentos do processo; os equipamentos esto atingindo os parmetros de performance preestabelecidos em projeto. Por exemplo, a temperatura da autoclave ser controlada conforme rampa de aquecimento gradativo e atingir os 121C, a entrada do ar comprimido fazer com que a presso interna da autoclave atinja 1,7 bar de sobrepresso, o ajuste dos sprays de gua proporcionarem a eficincia do resfriamento dos produtos desejada etc.

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Qualificao de Desempenho Fsico Na qualificao de desempenho fsico o que se busca a garantia de que a autoclave atinja de forma consistente os parmetros de temperatura e presso durante todo o processo. Para tanto, deve-se realizar um mapeamento da distribuio de calor no interior da autoclave (estudo de distribuio de calor) com o acompanhamento tambm da distribuio de calor no interior do produto (estudo de penetrao de calor). Qualificao de Desempenho Microbiolgico Na qualificao de desempenho microbiolgico o que se busca a garantia de que os equipamentos em conjunto com os parmetros de processo definidos sejam capazes de proporcionar o nvel de garantia de esterilidade desejado. O ndice de letalidade mnimo normalmente utilizado Fo = 8,0 min7 (para 121oC como temperatura referncia). importante lembrar neste ponto que o produto com indicador biolgico inoculado deve ser posicionado sempre no mesmo ponto onde foi ou est sendo realizado o mapeamento de temperatura. Etapas do Processo de Esterilizao por Calor mido O processo de esterilizao em uma autoclave segundo normas internacionais de operao ocorre da seguinte forma: primeiramente, realizado o fechamento das portas da autoclave de forma a vedar qualquer ponto de vazamento de gua e/ ou vapor; ou feita a introduo de gua filtrada no interior da autoclave aquecida e resfriada atravs de chuveiro de gua com circulao contida; o volume de gua a ser introduzido varia em funo do volume da autoclave e deve ser inferior ao nvel dos produtos a serem esterilizados; ou

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 inicia-se o aquecimento com a injeo de vapor saturado em autoclave a vapor (Fig. 4.7); o aquecimento realizado de forma controlada permitindo que o ar contido no interior da autoclave seja eliminado por uma vlvula localizada na parte superior da cmara; quando a temperatura da autoclave atinge a temperatura estabelecida, a vlvula de sada do ar se fecha;

Entrada de vapor na autoclave

Fig. 4.7 - Entrada de vapor na autoclave.

com o fechamento da vlvula em conjunto com a entrada de vapor saturado, a temperatura e a presso da autoclave aumentam rapidamente at atingir o ponto de ajuste com o auxlio de termopares (Fig. 4.8); depois de atingida a temperatura de esterilizao, registrada por sensores (Fig. 4.8), inicia-se a contagem do tempo de exposio do produto ao vapor mido; este tempo varia em funo do volume, embalagem e configurao de carregamento do produto a ser esterilizado; ou

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Sensor que mede a temperatura da autoclave

Fig. 4.8 Sensor de temperatura na cmara da autoclave.

a gua contida no interior da autoclave passa a ser pulverizada (Fig. 4.9) sobre os produtos, atravs de vlvulas spray distribudas no interior da autoclave de chuveiro de gua; com a pulverizao da gua, a temperatura dos produtos aumenta rapidamente; na autoclave de chuveiro de gua, aproximadamente 10 minutos aps atingir a temperatura de esterilizao, realizada uma injeo de ar comprimido filtrado no interior da autoclave at aproximadamente 1,7 bar; esta injeo de ar causa uma sobrepresso na autoclave, no permitindo que o produto se infle e estoure em funo do aumento da temperatura; na autoclave de chuveiro de gua, terminado o tempo de exposio, inicia-se o resfriamento do produto; a gua contida na autoclave que usada para o aquecimento do produto, agora passa por torres de resfriamento e em seguida pulverizada sobre o produto para proporcionar o resfriamento;

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Spray usado para pulverizar gua a 121oC

Fig 4.9 Pulverizao da gua a 121C. A. Vista interna da autoclave. B. Detalhe dos sprays.

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 depois de atingida a temperatura de resfriamento definida como aceitvel para o produto, a autoclave despressurizada e o ciclo de esterilizao finalizado. Padronizao da Carga Para se validar um processo de esterilizao por calor mido, devemos inicialmente padronizar a configurao do carregamento da autoclave, ou seja, definir a quantidade e a configurao que os produtos devem ser colocados em cada carro de esterilizao. Estudo de Distribuio de Calor Sensores de temperatura (termopares) previamente calibrados devem ser distribudos na carga configurada a ser esterilizada, em posies previamente definidas com maior e menor dificuldades de aquecimento. Esses sensores devem ser acoplados a um registrador de temperatura, registrado em intervalos de tempo preestabelecidos. A funo dos sensores acompanhar o aquecimento e observar a distribuio de calor na carga. O nmero de sensores a ser distribudo pela carga depende do volume da autoclave. Durante o tempo de exposio do produto ao calor mido, a temperatura de todos os sensores dever atingir entre 119 e 122C e a diferena de temperatura entre todos os sensores de distribuio de calor no dever exceder 0,5C. Estudo de Penetrao de Calor Sensores de temperatura (termopares) previamente calibrados devem ser introduzidos em produtos que simulem exatamente o volume e embalagens do produto a ser validado. Novamente, o nmero de produtos com sensores de penetrao que devem ser utilizados depende do volume da autoclave. A funo dos sensores de temperatura de penetrao acompanhar o aquecimento dos produtos em

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vrios pontos da carga de esterilizao, e atravs de clculo de ndice de letalidade (Fo), definir o ponto ideal para o final do tempo de esterilizao (exposio) para o produto. Estudo Microbiolgico Uma carga microbiana conhecida (indicador biolgico) deve ser inoculada em produtos simulados constitudos por soluo salina 0,9%, embalados com volume e embalagens similares ao produto a ser validado. O indicador biolgico recomendado para este tipo de esterilizao o Bacillus stearothermophilus ATCC 7953, porm, o Bacillus atrophaeus ATCC 9372 tambm aceito para temperaturas inferiores a 121oC. O nmero de produtos com indicador biolgico inoculado deve ser igual ao nmero de sensores de penetrao de calor. A distribuio dos produtos inoculados no interior da carga de esterilizao deve ser ao lado de cada produto com sensor de temperatura de penetrao (Fig. 4.10). A funo do estudo microbiolgico garantir que o processo de esterilizao estabelecido seja capaz de reduzir uma populao de microrganismos de resistncia e populao conhecidos a nveis aceitveis.
Teste dos Indicadores Biolgicos
Indicadores em Fitas de Papel

Testar os indicadores biolgicos em fitas de papel, transportando-os para tubos de TSB (tryptic soy broth). Os indicadores biolgicos devero ser incubados dentro de trs horas aps retirados da autoclave, e mantidos por sete dias temperatura de 35 a 37oC para B. atrophaeus e de 55 57C para B. stearothermophilus.
Indicadores Biolgicos em Ampolas

Transferir os indicadores biolgicos em ampolas para o banho-maria. Os indicadores biolgicos devero ser incubados den-

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10

Fig. 4.10 Configurao da carga e posies dos sensores de temperatura e dos indicadores biolgicos.

tro de trs horas aps retirados da autoclave, e mantidos por sete dias temperatura de 35 a 37 oC para B. atrophaeus e de 55 57C para B. stearothermophilus.
Controle Positivo

Para cada dia em que os indicadores biolgicos so usados na qualificao, devem ser testados dois indicadores biolgicos, no esterilizados, do mesmo lote que aqueles usados na qualificao como controle. Incubar por sete dias temperatura de 35 a 37oC para B. atrophaeus e 55 a 57C para o B. stearothermophilus.

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Critrio de Aceitao

Ser considerado aprovado caso: os controles positivos mostrem-se positivos dentro sete dias de incubao e, os indicadores biolgicos esterilizados mostrarem-se negativos dentro dos sete dias de incubao. Freqncia de Qualificaes Qualificao inicial: realizar um estudo de distribuio de calor com a autoclave vazia; realizar trs estudos de distribuio de calor com a autoclave com carga mnima de produtos; realizar trs estudos de penetrao de calor com a autoclave com carga mxima de produtos; realizar no mnimo um estudo microbiolgico em conjunto com estudos de penetrao de calor. Requalificao da Autoclave Realizar um estudo de distribuio de calor com a carga mxima a cada seis meses. Realizar um estudo de penetrao de calor com a carga mxima a cada seis meses. Requalificao dos Produtos Realizar um estudo de distribuio de calor com a autoclave cheia a cada dois anos para cada produto. Realizar um estudo de penetrao de calor com autoclave cheia a cada dois anos para cada produto.

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ESTERILIZAO PELO CALOR SECO15

Outra forma de destruio de microrganismos a utilizao do calor seco, gerado em estufas eltricas prprias para esterilizao pela conduo trmica. Inicialmente, o calor absorvido pela superfcie exterior de um material e depois pela prxima camada. Progressivamente, a temperatura necessria para esterilizao alcana todo o artigo. A morte dos microrganismos pelo calor seco ocorre por meio da oxidao e dessecao. O processo de esterilizao realiza-se com o aquecimento dos artigos por irradiao do calor das paredes laterais e da base da estufa associada conduo. O uso de estufa limitado, pois o calor seco no to penetrante quanto o vapor, e a sua distribuio dentro da cmara no ocorre de maneira uniforme, sendo recomendado que no se utilize o centro da estufa, pois concentra os chamados pontos frios. A carga dever ser o mais uniforme possvel, e as caixas devem conter uma quantidade limitada de intrumental. O uso de caixas em ao inoxidvel ou com paredes espessas dificulta ainda mais a transmisso do calor na carga. Em razo dessa limitao e da inexistncia at o momento de uma soluo, a esterilizao pelo calor seco vem sendo gradativamente abandonada e substituda por outros processos. o caso, por exemplo, da esterilizao de instrumentais, que est sendo realizada em autoclaves com vapor mido saturado, em recipientes metlicos perfurados ou sem tampa e acondicionados com tecido de algodo ou similar. Outra alternativa o aumento da temperatura e o tempo de exposio dos artigos ao calor seco. Contudo, os resultados prticos e os benefcios dessas alternativas ainda no esto suficientemente documentados e divulgados 16 .

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Validao do Processo de Esterilizao por Calor Seco17

A esterilizao por calor seco usada para despirogenizar vidranias e outros materiais no-termosensveis. A validao deste processo realizada atravs do estudo da distribuio do calor dentro da estufa, sendo o desafio dos pontos crticos (pontos frios) executado utilizando-se indicadores de endotoxinas bacterianas. Aps estudos da distribuio do calor dentro da estufa, frascos de endotoxina so colocados nas posies predeterminadas (pontos frios) (Fig. 4.11).

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Notas: Frente da estufa = nmeros: 1, 2, 6 e 7. Centro da estufa = nmeros: 5 e 10. Fundo da estufa = nmeros: 3, 4, 8 e 9. Efetuar dois ciclos de despirogenizao, um com a estufa carregada com vidrarias na sua capacidade mxima e outro com a estufa vazia. Para cada ciclo, sero utilizados dois indicadores de endotoxina como controle positivo, ou seja, os indicadores no sero expostos ao ciclo de despirogenizao.

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Fig. 4.11 Posies dos frascos com endotoxina na estufa.

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A farmacopia americana17 recomenda a exposio dos frascos com indicadores de endotoxina por um perodo mnimo de 30 minutos a 250oC. Para a validao do processo, os nveis de endotoxina presentes nos frascos devem ser reduzidos ao menos em 3 ciclos logartmicos. Aps o trmino do ciclo de despirogenizao, a reduo da concentrao de endotoxina determinada comparando a concentrao de endotoxina dos frascos desafio contra um controle no exposto ao ciclo (250oC/30 minutos). Para quantificar os nveis de endotoxina presentes nos frascos, a endotoxina dos frascos deve ser recontituda com gua apirognica e submetida ao teste de deteco de pirognio pelo mtodo LAL (lisado de ambcitos de lmulus)

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
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14. Vessoni Penna TC et al. Validao de Processo de esterilizao a vapor mido. Revista controle de Contaminao. Ano 5, n 38, Junho/2002. 15. NBR ISO 11134/2001 Esterilizao de produtos hospitalares. Requisitos para validao e controle de rotina. Esterilizao por calor mido. 16. Rutala WA. Disinfection, sterilization and waste disposal. In: Wenzel RP, ed. Prevention and control of nosocomial infections. Baltimore, Williams & Wilkin, 539-594, 1997. 17. The United States Pharmacopeia 24 & National Formulary 19, 1999. The United States Pharmacopeia (USP24) The national Formulary: NF 19: by authority of the United States Pharmacopeial Convention Inc., meeting at Washington D.C., march 9-12,1995 Published by Board of Trustees Rockville, Maryland: United States Pharmacopeial Convention, 1999.

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