CUADERNO-GUIN DE PRCTICAS DE MICROBIOLOGA

GRADO EN NUTRICIN HUMANA Y DIETTICA

SEGUNDO CURSO

DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGA FACULTAD DE FARMACIA UNIVERSIDAD DE GRANADA

PRCTICAS DE MICROBIOLOGA EN EL GRADO DE NUTRICIN HUMANA Y DIETTICA

CURSO ACADMICO 2011-2012

ALUMNO: FECHA DE REALIZACIN: TURNO: PROFESOR: MARGARITA AGUILERA GMEZ EVALUACIN-CALIFICACIN:

La elaboracin del Cuaderno-Guin de Prcticas ha sido realizada por la Dra. Margarita Aguilera Gmez.

PRCTICAS DE MICROBIOLOGA EN EL GRADO DE NUTRICIN HUMANA Y DIETTICA Presenciales) PRCTICAS DE LABORATORIO 1,5 Crditos (15 Horas de Laboratorio Presenciales)

TEMARIO PRCTICO: 1. Preparacin de medios de cultivo. Esterilizacin. Control de los microorganismos por microorganismos mtodos fsicos y qumicos. 1. Efecto de la temperatura sobre la viabilidad de los microorganismos en alimentos. 2. Tcnicas de observacin de los microorganismos: Tincin de Gram. Tincin de esporas. 3. Tcnicas de cultivo de los microorganismos: Aislamiento y recuento de microorganismos.

4. Microbiota

Humana:

Microbiota

Intestinal.

Estudio

de

portadores

nasales

de

Staphylococcus aureus

NDICENDICE- CONTENIDO Y DAS DE REALIZACIN DE LAS PRCTICAS

DA 1.

Laboratorio - Normas generales de Trabajo en un Laboratorio de Microbiologa - Material de uso normal en un Laboratorio de Microbiologa *Prctica 1. PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO. ESTERILIZACIN. *Prctica 2. AISLAMIENTO Y/O RECUENTO DE MICROORGANISMOS: HUMANA 2.1. DE LA MICROBIOTA INTESTINAL FECAL HUMANA 2.2. DE UN ALIMENTO QUE CONTIENE MICROORGANISMOS

DA 2. *Prctica 3. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VIABILIDAD DE LOS MICROORGANISMOS EN ALIMENTOS *Prctica 4. ESTUDIO DE PORTADORES NASALES DE Staphylococcus aureus (MICROBIOTA HUMANA)

DA 3. *Prctica 5. MICROSCOPIO PTICO. TINCIONES. BACTERIANAS. MOVILIDAD *Prctica

DA 4. *Prctica 6. OBSERVACIN MICROSCPICA DE MICROORGANISMOS EUCARIOTAS: MOHOS Y LEVADURAS. LECTURA E INTERPRETACIN DE LOS RECUENTOS. DA 5. EXAMEN, CUADERNO Y EVALUACIN DEL APRENDIZAJE DEL ALUMNO APRENDIZAJE

DA 1. - Normas generales de Trabajo en un Laboratorio de Microbiologa * Leer atentamente el guin de prcticas antes de cada experimento. * Estar atento a cada una de las explicaciones de las prcticas por parte del profesor. * Mantener las mesas de trabajo libre de objetos personales * Planificar el trabajo antes de realizarlo. Comprobar que se dispones de todo el material para la realizacin de la prctica. * Utilizar siempre bata de laboratorio. * Los cultivos de microorganismos deben manipularse como potencialmente patgenos, aun cuando las bacterias utilizadas son inofensivas y mnimamente patgenas. * No fumar o ingerir alimentos en el laboratorio. No beber agua en material de laboratorio. * Trabajar siempre en la cercana de un mechero que ser el entorno estril. No guardar material de laboratorio en los bolsillos de las batas. * Rotular adecuadamente el material que se vaya a incubar o guardar en nevera con el nombre del alumno/grupo de trabajo, fecha y tipo de material. * Someter a los medios a un control de esterilidad antes de su utilizacin. * El material de desecho biolgico debe disponerse en recipientes habilitados para ello en el laboratorio, para permitir su posterior descontaminacin, limpieza y eliminacin. * Los restos de colorantes deben ser vertidos en los bidones de residuos txicos. * Debe ser comunicado inmediatamente al profesor cualquier accidente personal (cortes, quemaduras, por pequeo que sea, etc) o rotura de material de laboratorio con material biolgico. * Al finalizar la tarea de prcticas diaria debe dejarse el material recogido, comprobar que los mecheros y los grifos estn cerrados. * Lavarse las manos antes de abandonar el laboratorio.

- Material y aparatos de uso normal en un Laboratorio de Microbiologa Microbiologa

Material de laboratorio de Microbiologa: 1 , placas de Petri con medio de cultivo slido; 2, tubos de ensayo con medio de cultivo lquido (caldo); 3, tubos de ensayo con medio de cultivo slido; 4, matraz con brazo lateral para turbidimetra; 5, mechero Bunsen; 6, pipetas; 7, microplacas de 96 pocillos; 8, asas de siembra; 9, esptula de Digralski o varilla de vidrio acodada; 10, micropipeta automtica; 11, pipeteador manual; 12, puntas de pipeta automtica; 13, placas de Petri; 14, Jarra para el crecimiento de microorganismos anaerobios; 15, placas de contacto RODAC; 16, lengeta o lmina para anlisis de superficies. *Prctica 1. PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO. ESTERILIZACIN. Video 1: Preparacin de Medios de Cultivos. 7 minutos Video 2: Siembra y Aislamiento: 13 min Video 3: Microscopio ptico: 2: 9 min Video 4: Preparacin de Tinciones: 6 min (Material realizado por la Universidad de Sevilla) Lo podis volver a ver en www.pomif.es Prcticas de Bacteriologa

RECUENTO *Prctica 2. CULTIVO, AISLAMIENTO Y/O RECUENTO DE MICROORGANISMOS: 2.1. DE LA MICROBIOTA INTESTINAL FECAL HUMANA

2.2. DE UN ALIMENTO QUE CONTIENE MICROORGANISMOS

microorganismos: Cultivo de microorganismos medios lquidos y slidos, selectivos y diferenciales. 2.1. Aislamiento de microorganismos de muestras fecales

Imagen del Manual Prctico de Microbiologa. R. Daz, C. Gamazo, I. Lpez-Goi (1995). Ed. Masson, S.A. (ISBN-84-458-0281-X).

MEDIO SELECTIVO

Se parte de una muestra fecal de beb que se mantiene a -80 C hasta su manipulacin. Se hace un aislamiento tanto en un medio nutritivo para mesfilos como el TSA y comparativamente se hace una siembra o aislamiento en medio MRS para la seleccin de lactobacilos.

2.2. Recuento de microorganismos mesfilos presentes en un alimento

Imagen del Manual Prctico de Microbiologa. R. Daz, C. Gamazo, I. Lpez-Goi (1995). Ed. Masson, S.A. (ISBN-84-458-0281-X).

Se realiza un recuento de Mesfilos totales en un alimento sin tratar y comparativamente con alimento tratado con calor a travs de microondas. Se realizan diluciones seriadas de un alimento en caldo nutritivo desde la 10-1 a la 10-4 y se siembra en placa petri 0,1 ml mediante extensin con la esptula de Digralsky.

AISLAMIENTO: Obtencin de cultivos puros mediante agotamiento por estra y diluciones seriadas. Recuento de viables.

Imagen del Manual Prctico de Microbiologa. R. Daz, C. Gamazo, I. Lpez-Goi (1995). Ed. Masson, S.A. (ISBN-84-458-0281-X).

RECUENTO DE MICROORGANISMOS VIABLES

Imagen del Manual Prctico de Microbiologa. R. Daz, C. Gamazo, I. Lpez-Goi (1995). Ed. Masson, S.A. (ISBN-84-458-0281-X).

DA 2. *Prctica 3. EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE LA VIABILIDAD DE LOS

MICROORGANISMOS EN ALIMENTOS Efecto de los agentes germicidas (calor luz ultravioleta, antibiticos) sobre el crecimiento calor, calor bacteriano.

*Prctica 4.

ESTUDIO DE PORTADORES NASALES DE Staphylococcus aureus

(MICROBIOTA HUMANA) Realizar una toma con escobilln estril y sembrar de forma masiva en una placa de medio selectivo Manitol Salado. Incubar a 37 C 24 h.

DA 3. *Prctica 5. MICROSCOPIO PTICO. TINCIONES. BACTERIANAS. MOVILIDAD

compuesto: Microscopio ptico compuesto Partes Principales: A) Base; B) Fuente de Iluminacin; C) Diafragma; D) Brazo; E) Platina; F) Macro y Micromtrico; G) Condensador; H) Objetivos; I) Ocular OBJETIVOS SECO DBIL SECO FUERTE INMERSIN AUMENTO DEL OBJETIVO X10 X40 X100 AUMENTO DEL OCULAR X10 X10 X10 AMPLIFICACIN TOTAL 100 400 1000

Microscopa: uso y conservacin del microscopio. Manejo de muestras en condiciones aspticas. Preparacin de frotis bacterianos para tincin. Tinciones simples. Tincin negativa.

Prctica 2. Tinciones diferenciales (tincin de Gram) y especficas (tincin para endosporas). Ubicuidad de los microorganismos: presencia en agua, tierra, alimentos y material seleccionado por los alumnos.

PREPARACIN DE LAS TINCIONES

Imagen del Manual Prctico de Microbiologa. R. Daz, C. Gamazo, I. Lpez-Goi (1995). Ed. Masson, S.A. (ISBN-84-458-0281-X).

TINCIN DE GRAM

ESCURRIR

ESCURRIR

ESCURRIR

Imagen del Manual Prctico de Microbiologa. R. Daz, C. Gamazo, I. Lpez-Goi (1995). Ed. Masson, S.A. (ISBN-84-458-0281-X).

TINCIN DE ESPORAS

Imagen del Manual Prctico de Microbiologa. R. Daz, C. Gamazo, I. Lpez-Goi (1995). Ed. Masson, S.A. (ISBN-84-458-0281-X).

MICROBIANA: MOVILIDAD MICROBIANA Observacin microscpica de bacterias mviles.

Movilidad entre porta y cubre

Movilidad en gota pendiente

Imagen del Cuaderno de Prcticas de Microbiologa I del Grado en Farmacia (Universidad de Granada).

DA 4. EUCARIOTAS: *Prctica 6. OBSERVACIN MICROSCPICA DE MICROORGANISMOS EUCARIOTAS: MOHOS Y LEVADURAS. Material necesario: Portaobjetos, cubreobjetos, Azul de Metileno Microscopio: Objetivos de 10 y 40

Imagen sacada del cuaderno de Prcticas de Microbiologa Alimentaria de Ciencia y Tecnologa de los Alimentos (Universidad de Granada).

*LECTURA E INTERPRETACIN DE LOS RECUENTOS.

*INRORME FINAL DE LA REALIZACIN DE LAS PRCTICAS INRORME

COMENTARIOS Y NOTAS DEL ALUMNO DURANTE LA REALIZACIN DE LAS PRCTICAS

BIBLIOGRAFA: DAZ R., GAMAZO C., LPEZ-GOI I. (1995). MANUAL MICROBIOLOGA. ED. MASSON, S.A. (ISBN-84-458-0281-X). PRCTICO DE

MOSSEL, D.A.A., MORENO, B. Y STRUIJK, C.B. (2003).MICROBIOLOGA DE LOS ALIMENTOS. 2 EDICIN. ACRIBIA. ZARAGOZA. ESPAA. MADIGAN, M.T., MARTINKO, J.M. Y PARKER, J. (2009). BROCK. BIOLOGA DE LOS MICROORGANISMOS. 11 EDICIN. PEARSON PRENTICE HALL. MADRID. ESPAA PRESCOTT, L.M., HARLEY, J.P. Y KLEIN, D.A. (2009). MICROBIOLOGA 6 EDICIN. MACGRAW HILL. MADRID.