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COMUNICAO CIENTFICA

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PREPARO DE AMOSTRAS E MTODOS PARA A DETERMINAO DO TEOR DE LEO ESSENCIAL DE FRUTOS DE LIMOEIRO1
HLIO GRASSI FILHO2 *, BRUNA BADRA PENTEADO3 , CARLOS HENRIQUE DOS SANTOS4
RESUMO - Objetivou-se avaliar alternativas de preparo da amostra e os mtodos quantitativos para a determinao do teor de leo em frutos de limo. Os tratamentos foram avaliados por meio do delineamento estatstico inteiramente casualizado, em esquema fatorial 2x2x6, com quatro repeties, sendo duas variedades-copa de limoeiro verdadeiro (Siciliano e Eureka), dois mtodos analticos para a determinao do teor de leo (Scott e Clevenger) e seis formas de preparo dos frutos para anlise (anlise do fruto inteiro; frutos cortados na longitudinal e anlise de ; frutos cortados na longitudinal e anlise de 1/2; frutos cortados ao meio e anlise da parte superior; frutos cortados ao meio e anlise da parte inferior; e anlise de 2/ do fruto). O mtodo denominado de Clevenger foi o mais eficiente na determinao do teor de leo essencial, e as formas de preparo de amostras 8 inferior, superior, longitudinal e longitudinal dos frutos proporcionaram valores superiores de leo essencial. Termos para indexao: Citrus limon, limo, leo essencial.

SAMPLES PREPARATION FORM AND METHODS OF ANALYSIS FOR DETERMINATION OF ESSENTIAL OIL CONTENT ON LEMON FRUITS
ABSTRACT - The aim of this research was to evaluate the samples preparation form and methods of analysis to determinate the essential oil content in Siciliano and Eureka lemon fruits. The better sample form was determinated using the fresh and mature fruit, as following: analysis of full fruits, fruits cut in longitudinal way and analysis of 1/4 of this one, fruits cut in longitudinal way and analysis of the half, fruits cut in the middle and superior part analysis, fruits cut in the middle and inferior part analysis and 2/8 of fruits analysis. The treatments were evaluated by a completely randomized experimental design, in a factorial scheme 2x2x6, with four replications. It was concluded that the Clevenger method was more efficient on the determination of the oil content, and the fruits cut in the inferior, superior, longitudinal and longitudinal way provided superior values of essential oil content. Index terms: Citru limon, lemon, essential oil. A produo de limo, alm de destinar-se para o consumo in natura e para indstria de suco, destina-se para extrao do leo essencial contido na casca dos frutos. Este leo comumente utilizado por indstrias de bebidas de refrigerantes, como tambm para fabricao de cosmticos, essncias aromticas e na culinria, entre outros. Os frutos ctricos apresentam trs partes morfologicamente diferentes: o epicarpo, o mesocarpo e o pericarpo. O epicarpo a poro colorida da casca, conhecida como flavedo, e contm os carotenides que diferenciam a cor da casca de laranja, tangerina, limo e outros. As glndulas de leo esto presentes no flavedo e so as estruturas elevadas das cascas dos frutos que contm o leo essencial caracterstico de cada cultivar (Ting & Rouseff, 1994). O mercado exigente quanto qualidade da casca do limo, uma vez que esta caracterstica refletida diretamente na indstria, que requer rendimento na extrao de leo essencial. Entretanto, a necessidade de valorizao da determinao do contedo de leo total na casca de frutos ctricos surgiu com o incio de sua industrializao (Almeida, 1995). A determinao do teor de leo essencial para frutos de limo um assunto importante, mas que, at o momento, mereceu pouca ateno da comunidade cientfica, talvez pela pequena fatia do mercado de frutos ctricos destinados extrao de leo essencial, ou pela dificuldade de se trabalhar com espcies ctricas que apresentam de 3 a 4 florescimentos por ano. Assim sendo, este trabalho teve como objetivo avaliar os mtodos quantitativos para a determinao do teor de leo em frutos de limo, determinar quais as melhores formas de preparo de amostras destes frutos e a associao destes fatores com a produtividade. A Fazenda Morrinhos est localizada a 25 km ao sudoeste de Botucatu, cujas coordenadas geogrficas so: 22o58 de latitude sul e 48o36 de longitude oeste, encontrando-se a uma altitude mdia de 745 metros. Os tratamentos foram avaliados por meio do delineamento
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estatstico inteiramente casualizado, em esquema fatorial 2x2x6, com quatro repeties (Pimentel Gomes, 1990), sendo duas variedades-copa de limoeiro verdadeiro (Siciliano e Eureka), dois mtodos analticos para a determinao do teor de leo (Scott e Clevenger) e seis formas de preparo dos frutos para anlise (anlise do fruto inteiro; frutos cortados na longitudinal e anlise de ; frutos cortados na longitudinal e anlise de 1/2; frutos cortados ao meio e anlise da parte superior; frutos cortados ao meio e anlise da parte inferior; e anlise de 2/8 do fruto). Os frutos foram coletados, no ms de julho, nos talhes So Francisco 41 e 61 (SF-41 e SF-61), que possuem plantadas as variedadescopa Siciliano e Eureka, respectivamente. De cada tratamento, foram selecionados 16 frutos. O teor de leo essencial formado na casca foi determinado com base no Mtodo de Scott e no Mtodo de Clevenger, que se encontram descritos por: Association of Official Analytical Chemists (Aoac, 1990), Shiota & Itoo (1991) e Melendreras (1991). Para a determinao da produo de leo/hectare, utilizou-se a produo de frutos por hectare dos talhes SF-41 e SF-61, de 33,52 e 28,0 toneladas/hectare, multiplicados, respectivamente, pelos valores obtidos pelas determinaes de leo dos respectivos tratamentos. A comparao entre as mdias dos tratamentos foi realizada pelo teste de Tukey, ao nvel de significncia de 5%. A Figura 1 mostra que houve diferena estatstica, ao nvel de 1% de probabilidade, pelo teste de Tukey, entre os mtodos de determinao de leo. O mtodo Clevenger extraiu 11,28% mais leo que o Scott, destacando-se tambm que ambos produziram de 5,13 e 4,61 kg de leo por tonelada de fruto, respectivamente. Os frutos de limo Siciliano apresentaram maiores teores de leo do que os de limo Eureka (Figura 2). A produo das plantas de limo Siciliano e Eureka foi de 5,16 e 4,58 kg de leo por tonelada de fruto, respectivamente. Segundo Bartholomew & Sinclair (1951), deve-se esclarecer que, embora haja diferena na eficincia dos processos de extrao de

(Trabalho 011/2004). Recebido: 22/01/2004. Aceito para publicao: 09/03/2005. Prof. Adjunto - Depto. de RN/ rea de Cincia do Solo, FCA/UNESP, 18.603-970, Botucatu-SP. E-mail: heliograssi@fca.unesp.br/*Pesquisador Cientfico: bolsista do CNPq. 3 Graduanda em Agronomia, Bolsista de Iniciao Cientfica - CNPq, FCA/UNESP, Botucatu-SP. E-mail: bbpenteado@fca.unesp.br. 4 Ps-Doutorando - Depto. de RN/rea de Cincia do Solo, FCA/UNESP, 18.603-970, Botucatu-SP. E-mail: chenrique@fca.unesp.br.
Rev. Bras. Frutic., Jaboticabal - SP, v. 27, n. 1, p. 191-193, Abril 2005

192 PREPARO DE AMOSTRAS E MTODOS PARAA DETERMINAO DO TEOR DE LEO ESSENCIAL DE FRUTOS DE LIMOEIRO

160

5,20 5,00

A A

155

Kg leo/T Fruto

Kg de leo h -1

150

4,80

B
4,60 4,40 4,20

145

140 135

4,00
130 Scott Clevenger Mtodos de Anlise do Teor de leo FIGURA 1 - Produo de leo ha 1 em funo dos mtodos de anlise CV = 4,80% e dms = 2,93.

Forma de Preparo das Amostras Inferior Longitudinal Superior 2/8 do Fruto longitudinal Fruto Inteiro

200 180 160 140

FIGURA 3 - Produo de leo essencial por tonelada de fruto em funo das formas de preparo de amostras de frutos. CV = 4,80% e dms = 2,93. mistura e diluio do leo no suco. Talvez, no caso das amostras fatiadas, exista uma relao mais favorvel entre ambos, permitindo bom rendimento na determinao quando comparado com o fruto inteiro. Com relao diferenciao entre o teor de leo obtido nas amostras fatiadas Superior, Inferior, Longitudinal e Longitudinal comparado com as fatias de 2/8 do fruto, destaca-se que pode haver perda de leo no preparo das amostras. Provavelmente, quanto menor o nmero de fatias nos frutos, menor a chance de causar rompimento das glndulas de leo durante o corte, e menor a perda deste antes de se realizar a determinao. Para uma avaliao mais criteriosa, a metodologia de anlise deve considerar que as glndulas no se distribuem de maneira homognea no fruto. A regio peduncular, por exemplo, apresenta maior nmero de glndulas que a apical, alm do que, a relao entre o nmero de glndulas e a superfcie e a espessura da casca no se apresenta uniforme por todo o fruto (Bartholomew & Sinclair, 1951). Associado a estes fatores, deve-se considerar tambm que a distribuio das glndulas nos frutos pode variar entre as variedades-copa de limoeiro. Nestas condies, pode-se concluir que o mtodo denominado de Clevenger foi o mais eficiente na determinao de leo essencial e que as formas de preparo de amostras inferior, superior, longitudinal e longitudinal dos frutos proporcionaram valores maiores de leo essencial do que a anlise do fruto inteiro ou a anlise de 2/8 do fruto. REFERNCIAS ALMEIDA, E.L.P. Limo Siciliano: mais uma opo para o citricultor. Laranja, Cordeirpolis, v.16, n.2, p.335-339, 1995. ALVES, F.L. Caractersticas fsicas, qumicas e fsico-qumicas de frutos de cultivares de limo (Citrus limon Burm.). 1986. 201f. Dissertao (Mestrado em Produo Vegetal - rea de Horticultura) - Faculdade de Cincias Agronmicas, Universidade Estadual Paulista, Botucatu, 1986. ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of analysis. 15th ed. Washington, 1990. v.2, 1.278p. BARTHOLOMEW, E.T.; SINCLAIR, W.B. The lemon fruit: its composition, physiology and products. Berkeley: University of California, 1951. 163p.

Kg de leo h -1

120 100 80 60 40 20

Eureka Cultivar Copa FIGURA 2 - Produo de leo ha 1 em funo da variedade copa. CV = 4,80% e dms = 2,93.

Siciliano

leo, o rendimento do produto pode ser influenciado pela colorao, espessura da casca e localizao das glndulas na casca dos frutos. Para Laencina Sanches et al. (1988), o rendimento tambm pode estar associado ao material gentico e diferena na resposta destes materiais s condies ambientais, entre outros. A diferena de rendimento de teor de leo essencial entre os limoeiros tambm foi constatada por Alves (1986) e Bartholomew & Sinclair (1951). Segundo estes autores, dos frutos do limoeiro Eureka, foi possvel extrair 4,31 kg de leo por tonelada de fruto, enquanto para o Lisboa o rendimento foi de 4,58 e o Villafranca de 4,85 kg de leo por tonelada/fruto. De acordo com a Figura 3, as formas de preparo das amostras, Superior, Inferior, Longitudinal e Longitudinal, para as duas metodologias de anlise, so semelhantes entre si e maiores que as duas ltimas, ou seja, 2/8 do fruto e fruto inteiro, de acordo com o teste de Tukey, ao nvel de 5% de probabilidade. A diferenciao entre as amostras fatiadas com o fruto inteiro pode estar correlacionada com o efeito de
Rev. Bras. Frutic., Jaboticabal - SP, v. 27, n. 1, p. 191-193, Abril 2005

H. GRASSI FILHO et al. LAENCINA SANCHES, J.; MELENDRERAS, F.C.; FLORES, J. et al. Characteristics and essential oil of leaves, flowers and fruits of lemon-tree flowers and fruits of lemon-tree cultivars. In: International citrus congress, 4., 1984, So Paulo. Proceedings So Paulo:ISCC, 1988. p. 11. MELENDRERAS, F.A. Influencia de diferentes mtodos aplicados al fruto sobre el rendimiento en aceite esencial de limn. Agrochimica, Pisa, n. 4, v. 35, p. 305-313, 1991.

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PIMENTEL GOMES, F. Curso de estatstica experimental. 13. ed. Piracicaba: ESALQ-USP, 1990. 468 p. SHIOTA, H.; ITOO, S. The characteristics of the peel oil obtained from shima-mikan (Citrus Kinokuni Hort. ex Tanaka). Flavour and Fragrance Journal, Chichester, v.6, p.57-62, 1991. TING, S.V.; ROUSEFF, R.L. Citrus fruits and their products: analysis and technology. New York: Marcel Dekker, 1994. 293p.

Rev. Bras. Frutic., Jaboticabal - SP, v. 27, n. 1, p. 191-193, Abril 2005