Você está na página 1de 189

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA BIOQUMICA


PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM TECNOLOGIA DE
PROCESSOS QUMICOS E BIOQUMICOS











TRATAMENTO MICROBIOLGICO SEQUENCIAL DE
SOLO PROVENIENTE DE UNIDADE DE DESSORO
TRMICA






ULRICH VASCONCELOS DA ROCHA GOMES


















Rio de Janeiro, 2011

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO DE JANEIRO
DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA BIOQUMICA
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM TECNOLOGIA DE
PROCESSOS QUMICOS E BIOQUMICOS











TRATAMENTO MICROBIOLGICO SEQUENCIAL DE
SOLO PROVENIENTE DE UNIDADE DE DESSORO
TRMICA





TESE APRESENTADA AO PROGRAMA DE PS-
GRADUAO EM TECNOLOGIA DE PROCESSOS
QUMICOS E BIOQUMICOS PARA OBTENO DO
GRAU DE DOUTOR EM CINCIAS (DSc.)

Orientadores: Francisca Pessa de Frana, D.Sc.
Fernando Jorge Santos de Oliveira, D.Sc.














Rio de Janeiro, 2011





















































G 633t Gomes, Ulrich Vasconcelos da Rocha.

Tratamento microbiolgico sequencial de solo proveniente de unidade de
dessoro trmica/ Ulrich Vasconcelos da Rocha Gomes. 2011.
xvi, 180 f.: il.

Tese (Doutorado em Tecnologia de Processos Qumicos e Bioqumicos)
Universidade Federal do Rio de Janeiro, Escola de Qumica, Rio de Janeiro,
2011.

Orientadores: Francisca Pessa de Frana e Fernando Jorge Santos de Oliveira

1. Biorremediao. 2. Resduos da Indstria do Petrleo. 3. Hidrocarbonetos
Policclicos Aromticos. 4. Bioestmulo Teses. I. Frana, Francisca Pessa de.
(Orient.). II. Oliveira, Fernando Jorge Santos de (Orient.). III. Universidade
Federal do Rio de Janeiro, Programa em Tecnologia de Processos Qumicos e
Bioqumicos, Escola de Qumica. IV. Ttulo.


CDD: 628.55


i








































Medicus curat, natura sarat

Hipcrates (460 AC 377 AC)


ii





































Este trabalho dedicado memria
de meu pai, Jos Rocha Gomes
(1945-2008), que partiu to cedo
para a espiritualidade e no assiste
entre ns realizao desse
momento. para voc com todo o
meu amor, respeito e considerao.


iii

AGRADECIMENTOS

O final de uma etapa nos apresenta o incio de um novo ciclo de desafios, quando
novas tramas so desenhadas, criando posteriormente vida, de acordo com as nossas aes e
merecimentos. Nesta etapa finalizada, gostaria de expressar meus sinceros agradecimentos:
Aos meus orientadores por acreditarem na minha capacidade, pelo apoio tcnico e
pelo encorajamento, mesmo que em tantas vezes no o tenha percebido nitidamente.
minha amada me, Dulce por toda a fora, apoio e estmulo que precisei durante
todos estes anos. Obrigado por sempre ter estado por perto, protagonizando meu porto seguro
nos momentos de aflio.
Ao meu pai que partiu para a espiritualidade antes da finalizao deste projeto, por me
cobrir de apoio e no deixar perder a garra de enfrentar meus desafios. Nosso ltimo
momento nesta vida, em 21 de setembro de 2008 foi selado com um caloroso abrao.
s minhas irms Uliana e Ulnary pelo apoio, amizade, crdito e por me fazerem
enxergar o verdadeiro sentido de famlia.
Aos meus avs maternos, tambm j na espiritualidade, Evalda e Gasto, pelas cartas
de incentivo, enviadas nos meus tempos de criana, para que estudasse e amasse a arte de
estudar.
Professora Glcia Calazans, grande amiga, mentora e razo de ter vindo ao Rio de
Janeiro. Sua contribuio minha formao acadmica e aos caminhos que desejo percorrer
foi fundamental e sem ela, meu destino teria sido outro.
Ao Professor Carlos Roberto Weber Sobrinho, testemunha de todas as tramas
envolvidas nesta tese, iniciada na postagem dos meus documentos para o Rio. Agradeo por
sua valiosa companhia, conhecimento, palavras de incentivo e participao ativa em
momentos-chave deste trabalho.
Professora Eliana Flvia, por praticar o significado da palavra educador. Obrigado
pela sua pacincia, pela doura de seus gestos e voz, pela chave da porta do Laboratrio, pela
iv

confiana depositada, pelo carinho de amiga, pela preocupao de me, pela orientao
afetiva, por ser o meu porto seguro nos momentos difceis e por ter me ajudado a no desistir.
Pragati Nigam, que sempre ser a referncia acadmica da minha gerao, por
acompanhar esta caminhada h anos, sempre acreditando no meu potencial.
Swati Nigam pela motivao e amizade.
Aos meus grandes companheiros de amizade e trabalho no laboratrio E-109. Mesmo
sob forte presso e dificlimos desafios dirios, entre risos e lgrimas, continuamos mantendo
o humor, a criatividade, o companheirismo e a cumplicidade: Diogo Simas, Aike Costa,
Flvia Padilha, Camila Gonzales, Rafael Bittencourt, Rafael Lima, Leonardo Jordo, Gustavo
SantAnna, Renata Calixto, Carlos Eduardo Felippe, Milton Anterio, Adilza Evangelista e Eni
Silva.
amiga, confidente e cumadi Teresa Cristina do Nascimento pelos bons momentos
juntos.
Um agradecimento especial Jamille Lima, pela fiel amizade e reais palavras
encorajadoras. Tenho voc como a minha terceira irm e o Thor como sobrinho.
Aos meus vizinhos do estratgico laboratrio E-107, meus agradecimentos pelo apoio
e amizade nas horas de trabalho e de lazer, particularmente Diego Cara, Juliana Davies e
Mahdi Gobai.
Kally Souza, pela amizade e companheirismo na repblica e no laboratrio, assim
como pelo auxlio na parte estatstica desse trabalho.
Ao Andr Tavares, pela amizade e diviso do apartamento na Ilha.
Ao Paulo Santana, meu reconhecimento pela fora e dedicao ao trabalho.
s professoras rika Chrisman, Maria Antonieta Couto e Magali Cammarota, cujo
contato durante minha vida de doutorando representou pontos de luz, em momentos decisivos
da tese.
v

Ao Dr. Leon Rabinovich pelas valiosas sugestes e contribuies, principalmente com
respeito aos ensaios microbiolgicos.
Aos funcionrios da EQ, em especial s senhoras Marlene de Souza, Suely Rocha e
Ctia de Assis.
Aos amigos Douglas Guedes, Mariana Galvo do INT e Adriana Nunes da Micoteca
URM/UFPE, pela gentileza na identificao das linhagens bacterianas e das linhagens
fngicas.
Doutora Ana Paula Ahualli e ao Mestre Klaus Reichel dos laboratrios Ipex, pela
gentileza na anlise de dioxinas e furanos.
Ao senhor Luiz Carlos de Oliveira pela realizao das anlises granulomtricas.
Ao Prof. Luiz Guilherme Marques pela amostra de glicerol bruto.
Ao amigo Kenneth R. Vanlerberghe do Kings Cross Doctors Office-Toronto, por
toda reviso e correes gramaticais dos textos em lngua inglesa, relacionados esta tese.
equipe instalada na Bahia, pela sempre amvel receptividade do povo baiano e pelo
suporte durante as visitas tcnicas.
Aos cariocas e fluminenses pelo convvio, ao som do mais musical sotaque do Brasil.
Aos membros da banca por suas apreciaes e sugestes, em sua maioria, acatadas.
Ao Petrleo Brasileiro S/A pelo incentivo financeiro e apoio tcnico.
CAPES, CNPq e FAPERJ pelo financiamento dos projetos que so desenvolvidos
no Laboratrio de Microbiologia do Petrleo (E-109).
E finalmente espiritualidade, que me acompanha em todos os momentos. Agradeo
pelo merecimento da conquista, pela inspirao em momentos-chave, pela proteo e por me
fazerem perceber que crescimento tambm se faz com dor, sem que para isso, a f seja
abalada.
SJT

vi

SUMRIO
Lista de Figuras ix
Lista de Tabelas xii
Lista de abreviaturas xiv
Resumo xv
Abstract xvi
1 Introduo 17
2 Objetivos 23
2.1 Objetivo geral 23
2.2 Objetivos especficos 23
3 Reviso da Literatura 24
3. 1 Resduos da indstria do petrleo 24
3. 2 Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos (HPA) 29
3. 3 Vias para tratamento de solos contaminados com leo 34
3. 3. 1 Dessoro trmica 36
3. 3. 2 Biorremediao 44
3. 4 Degradao dos HPA por micro-organismos hidrocarbonoclsticos do solo 48
3. 5 Glicerol: generalidades e uso como cossubstrato 56
3. 6 Ensaios de fitotoxicidade 60
4 Materiais e Mtodos 62
4. 1 A Unidade de Dessoro Trmica (UDT) 62
4. 2 Amostragens e coleta 65
4. 3 Isolamento e identificao de micro-organismos presentes no solo 67
4. 3. 1 Identificao das bactrias 68
4. 3. 2 Identificao dos fungos filamentosos 69
4. 4 Adaptao dos isolados em leo 71
vii

4. 5 Experimentos de biodegradao 72
4. 5. 1 Planejamento experimental 72
4. 5. 2 Experimentos com aplicao dos dados obtidos no planejamento
experimental
76
4. 5. 3 Experimentos utilizando glicerol bruto 76
4. 6 Anlises quantitativas 78
4. 6. 1 Umidade em base seca
4. 6. 2 Capacidade de Reteno de gua (CRA)
78
78
4. 6. 3 pH em gua 79
4. 6. 4 Textura do solo 79
4. 6. 5 Teores de Carbono Orgnico Total, Nitrognio Total e Fsforo Total 80
4. 6. 6 Hidrocarbonetos Totais do Petrleo (TPH) 80
4. 6. 7 Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos (HPA) 81
4. 6. 8 Dioxinas e Furanos 81
4. 6. 9 Ensaios microbiolgicos das amostras 82
4. 6. 10 Ensaios de fitotoxicidade 82
5 Resultados e Discusso 86
5. 1 Caractersticas do contaminante do solo 86
5. 2 Caractersticas do solo antes do tratamento por dessoro trmica 88
5. 3 Identificao dos contaminantes remanescentes e propriedades do solo tratado
na UDT
91
5. 4 Microbiota do solo tratado na UDT 98
5. 5 Ensaios de fitotoxicidade do solo contaminado e do solo tratado na UDT 99
5. 6 Ensaios de biorremediao 105
5. 6. 1 Micro-organismos utilizados no bioaumento 105
5. 6. 2 Biorremediao com uso do planejamento experimental 107
viii

5. 6. 3 Monitoramento da biorremediao 119
5. 7 Aplicao dos resultados do planejamento experimental 124
5. 7. 1 Testes de fitotoxicidade nos solos biorremediados 135
5. 8 Biorremediao utilizando glicerol bruto 138
6 Concluses 143
Referncias Bibliogrficas 145
ANEXO A
1
- Produo bibliogrfica 180
















Este documento foi elaborado em conformidade ao Decreto n 6583/08-MRE, que promulga o acordo
ortogrfico da lngua portuguesa, assinado em Lisboa em 16 de dezembro de 1990. O estilo antigo foi mantido
como originalmente impresso apenas nos ttulos publicados anteriormente publicao do Decreto no D.O.U.,
em 30/09/2008.
ix

LISTA DE FIGURAS
Figura 3.1 Percentual de resduos perigosos gerados em uma refinaria de
grande porte, calculados a partir de dados de Mariano (2001)
27
Figura 3.2 Estruturas qumicas dos 16 HPA prioritrios da USEPA
(fonte: RAVINDRA; SOKHI e VAN GRIEKEN, 2008)
32
Figura 3.3 Esquema simplificado de uma Unidade de Dessoro Trmica.
1- armazenamento do resduo; 2 preparao e estoque; 3-
admisso; 4 dispositivo transportador; 5 forno; 6- sistema
de tratamento de gases; 7 sistema de tratamento e reciclo dos
efluentes; 8 armazenagem dos slidos; inclinao do
forno (adaptado de SECOND, 2000)
39
Figura 3.4 Corte longitudinal de um forno rotatrio (adaptao de
HEYDENRYCH, GREEFF e HEESINK, 2002)
41
Figura 3.5 Mecanismos de transporte dos HPA por micro-organismos:
difuso simples - HPA de baixa massa molecular (1) e
transporte facilitado - HPA de alta massa molecular (2). O
efluxo dos HPA ocorre com gasto de energia (3) (elaborao
prpria)
52
Figura 3.6 Vias propostas para o metabolismo dos HPA de baixa massa
molecular, naftaleno (A) e de alta massa molecular, pireno (B)
por bactrias aerbias. Fontes: Mrozik, Piotrowska-Seget e
Labuzec (2003); Kanaly e Harayama (2000)
54
Figura 3.7 Principais rotas do metabolismo microbiano do glicerol
(RIVALDI et al. 2009)
57
Figura 4.1 Diagrama de operao da Unidade de Dessoro Trmica 62

x

Figura 4.2 Unidade de Dessoro Trmica 64
Figura 4.3 Aspecto do solo contaminado com resduo de vcuo (A) e
tratado por dessoro trmica (B), retido na rea de quarentena
66
Figura 4.4 Mtodo de isolamento microbiano do solo (adaptado de
BECKER, 1999)
67
Figura 4.5 Confeco do inculo 74
Figura 5.1 Germinao Relativa das Sementes (GRS) 100
Figura 5.2 Elongao Relativa da Raiz (ERR) 102
Figura 5.3 Elongao das razes de Cucumis anguria (maxixe-do-norte)
no extrato do solo contaminado com resduo oleoso de fundo
da cmara de destilao a vcuo, apresentando
desenvolvimento de razes secundrias (destaque, aumento:
4X). Foto: Ulrich Vasconcelos
103
Figura 5.4 ndice de Germinao das sementes (I
G
) 104
Figura 5.5 Diagrama de Pareto 111
Figura 5.6 Curva de contorno demonstrando o efeito da utilizao do
fertilizante comercial NPK e de glicerol sobre o percentual de
biodegradao dos HPA no solo
112
Figura 5.7 Curva de contorno demonstrando o efeito da utilizao de
fertilizante comercial NPK e da cultura mista sobre o
percentual de biodegradao dos HPA no solo
114
Figura 5.8 Curva de contorno demonstrando o efeito da utilizao do
glicerol e da cultura mista sobre o percentual de biodegradao
dos HPA no solo
118
Figura 5.9 Quantificao das Bactrias Heterotrficas Aerbias do solo
durante 60 dias nos diferentes tratamentos sequenciais:
120
xi

1- fertilizante + cossubstrato + bioaumento; 2- cossubstrato +
bioaumento; 3- fertilizante + cossubstrato; 4- cossubstrato;
5- fertilizante + bioaumento; 6- bioaumento; 7- fertilizante;
8- sem tratamento
Figura 5.10 Quantificao dos Fungos Filamentosos do solo durante 60
dias nos diferentes tratamentos sequenciais: 1- fertilizante +
cossubstrato + bioaumento; 2- cossubstrato + bioaumento; 3-
fertilizante + cossubstrato; 4- cossubstrato; 5- fertilizante +
bioaumento; 6- bioaumento; 7- fertilizante; 8- sem tratamento
123
Figura 5.11 Biodegradao dos HPA durante 60 dias de processo
(concentrao inicial de HPA = 8,43 mg/kg)
125
Figura 5.12 Bactrias Heterotrficas Aerbias no solo 126
Figura 5.13 Fungos Filamentosos no solo 127
Figura 5.14 Variao da temperatura mdia do ambiente e do solo e da
umidade relativa do ar durante o experimento
134
Figura 5.15 Biodegradao dos HPA em presena de glicerol de diferentes
origens durante 60 dias de processo (concentrao inicial de
HPA = 8,43 mg/kg)
139
Figura 5.16 Bactrias Heterotrficas Aerbios no solo 140
Figura 5.17 Fungos Filamentosos no solo 140





xii

LISTA DE TABELAS
Tabela 3.1 Resduos gerados na indstria do petrleo listados por
origem*
25
Tabela 3.2 Caractersticas fsico-qumicas e classificao da atividade
genotxica dos 16 HPA prioritrios listados pela EPA*
31
Tabela 3.3 Exemplos de tratamentos de solos contaminados por leo e
derivados*
35
Tabela 3.4 Principais fatores limitantes na remoo dos HPA no solo 45
Tabela 4.1 Especificaes tcnicas do forno do sistema de dessoro 65
Tabela 4.2 Caracterizao das amostras de glicerol bruto e glicerol PA 77
Tabela 4.3 Caractersticas das sementes do teste de fitotoxicidade 83
Tabela 5.1 Teores de HPA e TPH do resduo oleoso de fundo da coluna
de destilao a vcuo
86
Tabela 5.2 Caractersticas fsico-qumicas e microbiolgicas do solo
contaminado com resduo oleoso de fundo da cmara de
vcuo
89
Tabela 5.3 Concentrao dos Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos
(HPA) no solo contaminado com resduo oleoso de fundo da
cmara de destilao a vcuo (p<0,05)
90
Tabela 5.4 Caractersticas fsico-qumicas do solo tratado na UDT 92
Tabela 5.5 Concentrao de HPA de baixa massa molecular no solo
tratado na UDT (p<0,05)
94
Tabela 5.6 Concentrao de HPA de alta massa molecular no solo
tratado na UDT (p<0,05)
94
Tabela 5.7 Comparao e quantificao dos teores de micro-organismos
do solo contaminado com resduo de fundo da cmara de
98
xiii

destilao a vcuo e do solo tratado na UDT, armazenado na
rea de quarentena
Tabela 5.8 Matriz estendida do planejamento fatorial 2
3
108
Tabela 5.9 Coeficientes de regresso 109
Tabela 5.10 Tabela ANOVA e de parmetros estimados 110
Tabela 5.11 Percentual de biodegradao dos 16 HPA prioritrios da
USEPA (p<0,05)
129
Tabela 5.12 Taxa de reduo diria dos HPA (mg/kg x dia
-1
) (p<0,05) 133
Tabela 5.13 Germinao Relativa das Sementes aps biorremediao
(p<0,05)
135
Tabela 5.14 Elongao Relativa das Razes aps biorremediao
(p<0,05)
136
Tabela 5.15 ndice de Germinao das sementes nas amostras de solo
(p<0,05)
137
Tabela 5.16 ndice de Germinao das sementes nas amostras de solo
(p<0,05)
142

















xiv

LISTA DE ABREVIATURAS

ABNT Associao Brasileira de Normas Tcnicas
BHA Bactrias Heterotrficas Aerbias
CONAMA Conselho Nacional do Meio Ambiente
CPC Cmara de Ps-Combusto
CRA Capacidade de Reteno de gua
EMBRAPA Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuria
ERR Elongao Relativa da Raiz
FAO Food and Agriculture Organization
FF Fungos Filamentosos
FTB Fotoblastismo
GLP Gs Liquefeito de Petrleo
GRS Germinao Relativa das Sementes
HPA Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos
HPA-AMM HPA de Alta Massa Molecular
HPA-BMM HPA de Baixa Massa Molecular
HPA-AMM:HPA-BMM Razo entre HPA de alta e de baixa massa molecular
I
G
ndice de Germinao
INMET Instituto Nacional de Meteorologia
K
w/o
Constante de partio em gua/octanol
PCDD Dibenzo-p-dioxinas Tetra a Octacloradas
PCDF Dibenzofuranos Tetra a Octaclorados
OECD Organization for Economic Co-operation and Development
OMS Organizao Mundial da Sade
OTAN Organizao do Tratado do Atlntico Norte
pb Pares de base
TEF Fatores de Toxicidade Equivalente
TPH Hidrocarbonetos Totais de Petrleo
UDT Unidade de Dessoro Trmica
UFC/g Unidades Formadoras de Colnias por grama de solo
UFC/mL Unidades Formadoras de Colnias por mililitro
USEPA United States Environmental Protection Agency

HPA-AMM:BMM
Variao da razo dos HPA de alta e baixa massa molecular


xv

RESUMO

GOMES, Ulrich Vasconcelos da Rocha. Tratamento Microbiolgico Sequencial de Solo
Proveniente de Unidade de Dessoro Trmica. Rio de Janeiro, 2011. Tese (Doutorado em
Tecnologia de Processos Qumicos e Bioqumicos) Escola de Qumica, Universidade
Federal do Rio de Janeiro, 2011

Os resduos oleosos gerados nas operaes industriais so perigosos e a gesto correta
representa um desafio para o setor industrial. Tratamentos trmicos so amplamente
utilizados na remediao de solos contaminados por petroderivados, porm as temperaturas
empregadas podem permitir a presena de compostos remanescentes ao final do processo. O
presente trabalho teve como objetivo avaliar estratgias de tratamento microbiolgico
sequencial de um solo oriundo de uma Unidade de Dessoro Trmica. No extrato total do
solo foram identificados os 16 HPA prioritrios da USEPA, no sendo detetadas dioxinas e
furanos. Em seguida, foi empregado um planejamento experimental fatorial completo 2
3
,
utilizando como variveis de entrada: adio de fertilizante mineral NPK, adio de glicerol
PA e presena ou ausncia do bioaumento. A biodegradao dos HPA foi escolhida como
varivel de resposta. A anlise estatstica indicou que a adio de glicerol PA em uma
concentrao menor que 0,63 mg/kg, em detrimento do bioaumento e da adio de
fertilizante, foi o fator determinante na biorremediao. A partir desse resultado, foram
testadas as concentraes de 0,32 e 0,16 mg/kg do cossubstrato. A primeira condio
estudada obteve a melhor biodegradao dos HPA, em 60 dias de tratamento, 71,80,2%.
Posteriormente foi empregado glicerol bruto, proveniente da indstria do biodiesel, em
condies similares, obtendo-se um percentual de biodegradao de 68,00,1%, confirmando
que o composto pode ser empregado como cossubstrato, bem como agregando valor a este
resduo. Os ensaios de ecotoxicidade no solo provaram que a biorremediao eliminou o
efeito fitotxico ainda observado aps o tratamento trmico.
Palavras-chaves: Biorremediao. Bioestmulo. Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos. Glicerol. Dessoro
trmica.
xvi

ABSTRACT

GOMES, Ulrich Vasconcelos da Rocha. Sequential Microbiological Treatment of Soil
Obtained from a Thermal Desorption Unit. Rio de Janeiro, 2011. Thesis (Post-Graduation in
Technology of Chemical and Biochemical Processes) Escola de Qumica, Universidade
Federal do Rio de Janeiro, 2011

Oily wastes generated in industrial operations are hazardous and proper management
represents a challenge to the industrial sector. Thermal treatment is a widely used technique
for oil-contaminated soil remediation however some temperatures may lead to the presence
of residual compounds. The purpose of this investigation was to evaluate the efficacy of
sequential microbiological treatment strategies in a soil obtained from a Thermal Desorption
Unit. The USEPA 16 priority PAHs were found in the soil extracts, but neither dioxins nor
furans were detected. Screening was then performed by using a complete 2
3
factorial
experimental design with these input factors: addition of mineral NPK fertilizer, addition of
pure glycerol and the presence or absence of bioaugmentation. PAH degradation was chosen
as the response variable. Statistical analysis indicated that the addition of pure glycerol at a
concentration lower than 0.63 mg/kg was the determinant factor in bioremediation. Based on
this result, further experiments were carried out using pure glycerol at 0.32 and 0.16 mg/kg.
The first condition resulted in the best PAH biodegradation at 60 days, 71.80.2%.
Afterwards, raw glycerol obtained as a by-product from the biodiesel manufacturing industry
was used in similar testing and achieved 68.00.1%, confirming that this compound may be
used as a cosubstrate and adding value to this residue. Ecotoxicity assays on soil samples
proved that bioremediation eliminated the phytotoxic effects still observed after the thermal
treatment.



Key words: Bioremediation. Biostimulation. Polycyclic Aromatic Hydrocarbons. Glycerol. Thermal
Desorption.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)

17
CAPTULO 1
INTRODUO

A matriz energtica atual depende de combustveis fsseis e petroderivados. Com a
industrializao, o aumento dessa demanda gerou ao longo das dcadas, impactos positivos na
qualidade de vida da populao mundial, bem como a perturbao ambiental, como um dos
seus maiores efeitos adversos, seja resultado de acidentes e vazamentos de leo, sejam por
atos de guerra (MOHAMED et al. 2006, LEMIEUX; LUTES e SANTOIANNI, 2004).
Independentemente do grau de desenvolvimento tecnolgico e da gesto ambiental,
toda atividade industrial de ampla escala gera grande quantidade de resduos, em
determinados casos, como no setor qumico e petroqumico, o manejo de resduos demanda
elevada ateno, assim como recursos financeiros e humanos especializados (OUYANG et al.
2005).
Por se tratarem de substncias perigosas, a destinao final dos resduos
cuidadosamente planejada, seguindo normas e parmetros previstos por legislaes, manuais
ou estudos tcnicos (RMBKE et al. 2005). Os resduos da indstria do petrleo e gs natural
esto inseridos nesse contexto, por compreenderem uma mistura de hidrocarbonetos alifticos
e aromticos, metais pesados e compostos sulfurados, nitrogenados e oxigenados, de
toxicidade variada (MOHAMED et al. 2006, YUSTE et al. 2000).
Estima-se que 90% da descarga de contaminantes na natureza sejam de origem
antropognica e cerca de 70% de todos os contaminantes ambientais sejam hidrocarbonetos.
Em termos de contaminao por leo, o solo considerado a poro mais afetada. Muitos
poluentes esto no solo h anos, porm o pblico no tem a conscincia adequada da
magnitude e da importncia desse fato (WILCKE, 2007, NIKOLOPOULOU et al. 2006,
ALEXANDER, 2000).
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)

18
No caso de descarte de contaminantes em solos, todos os seus constituintes so
impactados, incluindo a microbiota, considerada a chave central para a recuperao da rea.
Tal recuperao caracterizada como um processo lento, quando comparado velocidade da
contaminao, mesmo que ocorra de forma gradual ou por vezes, indireta como nos casos de
microvazamentos e contaminao relacionada pluviosidade (WATANABE e
HAMAMURA, 2003).
A variedade e a concentrao dos contaminantes oriundos dos resduos oleosos podem
influenciar negativamente a fertilidade do solo, principalmente pelas caractersticas de alguns
compostos, que podem ocasionar mutaes e alteraes na composio da macro e da
microbiota nativa. No obstante, o aporte de hidrocarbonetos no solo proporciona ao longo do
tempo, a seleo de micro-organismos degradadores, fundamentais ao processo de
recuperao do sistema impactado (CRAWFORD et al. 2005). importante enfatizar que a
natureza persistente de alguns contaminantes, como os Hidrocarbonetos Policclicos
Aromticos (HPA), pode interromper ou estender o tempo do bioprocesso (HERWIJNEN et
al. 2003).
Os HPA compreendem uma das classes de molculas mais ocorrentes no ambiente. De
carter hidrofbico, estas molculas tendem a se ligar fortemente s partculas do solo,
dificultando o bioacesso e consequentemente sua biodegradao. Alm disso, o potencial
mutagnico e carcinognico dos HPA conhecido e amplamente divulgado na literatura
(GONG et al. 2007, MATER et al. 2006, ENELL et al. 2005, WATANABE, 2001).
Considerando a complexidade inerente aos solos, bem como a diversidade e natureza
dos contaminantes, vrias tecnologias tm sido desenvolvidas e empregadas na remoo de
compostos qumicos poluentes. Dentre esse grupo de processos, destacam-se as operaes
trmicas, como por exemplo, a dessoro trmica, cuja maior vantagem diz respeito
eficincia na remoo de grande quantidade de constituintes em um curto espao de tempo
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)

19
(WARD; SINGH e VAN HAMME, 2003, REMMLER e KOPINKE, 1995). A dessoro
trmica uma tcnica baseada no aquecimento do solo, em uma faixa de temperatura
variando de 100 a 350C, na qual promove a transferncia de massa dos contaminantes da
matriz do solo para a fase gasosa, sem que haja destruio desses compostos (MERINO e
BUCAL, 2007, LIGHTY; SILCOX e PERSHING, 1990).
A dessoro trmica no foi uma tcnica desenvolvida para a destruio dos
compostos orgnicos, entretanto, algumas dessas molculas podem ser parcialmente
decompostas, gerando produtos indesejados, como HPA, dioxinas e furanos (KULKARNI;
CRESPO e AFONSO, 2008). Recentemente, em uma extensa reviso sobre produtos
formados a partir de mecanismos envolvendo pirlise e pirossntese, Ravindra, Sokhi e Van
Grieken (2008) enfatizaram a formao de compostos carcinognicos e mutagnicos,
sobretudo HPA. A faixa de temperatura, na qual a maioria destes compostos formada,
atravs de reaes catalisadas pelos minerais presentes no solo, coincide com a faixa de
temperatura empregada na dessoro trmica.
Neste contexto, o grau de eficincia desse processo pode estar sujeito s oscilaes
intrnsecas das condies, em escala industrial, reforma de molculas, ao tipo do solo e ao
teor e natureza dos contaminantes. Tais fatores podem contribuir para a presena de HPA e
outros compostos nos solos j tratados, justificando a necessidade de um tratamento
sequencial, que tenha por objetivo, diminuir ou extinguir o risco que os HPA residuais podem
representar.
Geralmente, os tratamentos sequenciais para a remoo de compostos em solo
envolvem combinaes de metodologias complementares a um tratamento fsico ou qumico
prvio, cuja finalidade ser aumentar a disponibilidade das molculas para uma posterior
remoo por via microbiolgica. A utilizao de micro-organismos na remoo de
hidrocarbonetos de petrleo em solos naturais encontra-se amplamente documentada na
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)

20
literatura, sendo considerada ambientalmente correta e com boa aceitao pela opinio
pblica (JACQUES et al. 2007, SUPAPHOL et al. 2006, BONTEN; GROTENHUIS e
RULKENS, 1999).
De uma forma geral, dois tipos de abordagens podem ser aplicados na biorremediao
de solos: bioestmulo e bioaumento. Tais estratgias compreendem um conjunto de tcnicas
consolidadas tanto pelo meio cientfico como pela indstria. As metodologias que empregam
o bioestmulo ou o bioaumento esto atreladas s estratgias metablicas dos micro-
organismos, por exemplo, a produo de biossurfatantes e o cometabolismo, as quais auxiliam
a remoo dos contaminantes do solo por convert-los em biomassa e metablitos. Ressalta-se
que as interaes ecolgicas positivas entre diferentes grupos microbianos potencializam o
bioprocesso como um todo (SENEVIRATNE et al. 2008, CHANEAU et al. 2005,
MULLIGAN, 2004).
Em solos, a biodegradao dos HPA mais lenta quando comparada a outros
hidrocarbonetos. Tais molculas no constituem fontes preferenciais de carbono, fazendo com
que o processo de remoo microbiolgica ocorra por meio de vias cometablicas. Partindo
deste princpio, a adio de cossubstratos, como o glicerol, ao solo contaminado, pode
contribuir para o aumento da velocidade de biodegradao. O glicerol um dos adjuvantes
mais empregados na funo de cossubstrato em diversos bioprocessos industriais e bons
resultados foram reportados na literatura quando da utilizao do composto na biodegradao
de leo cru (ZHANG et al. 2005) e no processo de desnitrificao de guas residurias
(BODK et al. 2009).
O glicerol possui diversas vantagens em relao a outros cossubstratos, tais como, a
propriedade osmorreguladora (NEVOIGT e STAHL, 1997), o fato de poder atuar como fonte
preferencial de carbono na sntese de biossurfatantes (BATISTA et al. 2006) e a grande
disponibilidade no mercado. Neste contexto, o glicerol bruto, um coproduto da indstria do
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)

21
biodiesel, passa a ter valor agregado, pelo seu reuso dentro do setor de petrleo e gs, uma
vez que sua produo e oferta vm sendo crescentes ao longo dos ltimos anos, por
conseguinte estimulam pesquisas visando o desenvolvimento de aplicaes funcionais para o
produto (OOI et al. 2004).
O glicerol bruto considerado um resduo industrial em funo da concentrao de
metais alcalinos, sabes e outras impurezas, oriundas do processo de produo de biodiesel e
mesmo na forma bruta, o composto pode ser assimilado como fonte de carbono para obteno
de energia e produo de biomassa, apresentando resultados similares aos obtidos quando
empregado o glicerol PA (LIU et al. 2009).
Por tratar-se como uma matria recente, na literatura pesquisada no foram
encontrados estudos que investigaram a aplicao do composto como cossubstrato durante a
biorremediao de solos contaminados com HPA. Outro ponto importante refere-se
ausncia de investigaes sobre as estratgias de tratamento sequencial, microbiolgicos ou
de outra natureza, na remoo dos HPA residuais em solos tratados por dessoro trmica.
A nica explicao para a deficincia deste tipo de abordagem pode estar na prpria
bibliografia relacionada ao tema dessoro trmica como um mtodo propriamente dito.
At hoje, a literatura especializada se preocupou apenas em esclarecer as dvidas relacionadas
aos possveis pontos crticos do processo, bem como demonstrar e discutir a sua eficcia, sob
o ponto de vista das anlises fsico-qumicas, negligenciando o grau de risco que uma possvel
presena de compostos residuais, pode representar, como nos casos da fitotoxicidade, do
bioacmulo e da biomagnificao, mesmo quando as concentraes de compostos
remanescentes so baixas. Neste cenrio, torna-se clara a necessidade de estudos que visam
investigar como a integrao de metodologias pode garantir a real eficcia da interveno.
Por razes j mencionadas, um questionamento sobre a presena dos HPA residuais no
solo pode vir luz, tornando possvel a percepo da existncia de lacunas no que diz respeito
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)

22
ao risco sade humana e ambiental, representado por tais compostos. Estas lacunas podem
tambm se estender aos eventos que se seguem ao tratamento de solos por dessoro trmica,
diretamente relacionados microbiota, dinmica dos nutrientes no solo e recuperao do
equilbrio do ecossistema (DAZY; FRARD e MASFARAUD, 2009).
As informaes presentes neste documento dissertam sobre o ineditismo do tema e
descrevem estratgias de tratamento microbiolgico sequencial, em escala de laboratrio, de
um solo previamente tratado em uma Unidade de Dessoro Trmica, em escala industrial,
contendo ao final deste processo, baixos teores de HPA residuais, implicados na toxicidade de
grau moderado alto, nos vegetais testados.
















Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)

23
CAPTULO 2
OBJETIVOS

2. 1 Objetivo geral

Avaliar o tratamento microbiolgico sequencial de um solo tratado por dessoro
trmica, utilizando a degradao dos 16 Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos
listados pela United States Environmental Protection Agency, como varivel de
resposta.

2. 2 Objetivos especficos

Caracterizar o resduo oleoso de fundo de coluna da cmara de destilao a vcuo,
contaminante do solo.
Avaliar a eficincia do tratamento trmico atravs da caracterizao das amostras de
solo antes e depois do processo.
Identificar os contaminantes residuais no solo aps tratamento trmico.
Investigar a biodegradao dos hidrocarbonetos residuais identificados, empregando
tcnicas de bioestmulo e bioaumento, com uso de ferramentas estatsticas e de
planejamento experimental.
Utilizar o glicerol bruto, resduo da fabricao do biodiesel, como cossubstrato do
processo de biodegradao dos hidrocarbonetos policclicos aromticos residuais.
Avaliar a fitotoxicidade dos solos pr e ps-dessoro trmica, bem como aps a
biorremediao.

Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)

24
CAPTULO 3
REVISO DA LITERATURA

3. 1 Resduos da indstria do petrleo

H pouco mais de 150 anos, desde a primeira explorao comercial do petrleo nos
Estados Unidos, o ouro negro, como ficou conhecido, firmou-se como um dos mais
importantes pilares da atividade humana em toda a histria, assumindo uma posio
privilegiada em nossa sociedade e decidindo os progressos, comodidades, benefcios
oferecidos e a organizao de como a conhecemos (CHEREMISINOFF e ROSENFELD,
2009).
O leo cru necessita de vrios tratamentos, sendo o refino, a operao, pela qual so
obtidos os derivados, com maior valor comercial, ao menor custo operacional. O processo do
refino do petrleo consiste em etapas de separao, converso, tratamento de derivados e
formulao. Na etapa de separao ocorre o desmembramento das fraes bsicas do leo
empregando operaes primrias, como a destilao atmosfrica e operaes secundrias, por
exemplo, a destilao a vcuo (CUNHA, 2009, SZKLO, 2005).
Aps a separao das fraes, os resduos depositados no fundo das cmaras de
destilao a vcuo so principalmente constitudos por resinas e asfaltenos. Nas operaes de
converso, ocorre a transformao das fraes separadas e tambm do resduo de fundo das
cmaras de separao, atravs de reaes de quebra, de reagrupamento ou de reestruturao
molecular, tais como, tcnicas de craqueamento, alquilao e condensao de anis,
respectivamente. Na fase de tratamento de derivados so eliminadas ou modificadas algumas
propriedades indesejadas, associadas presena de diversos contaminantes do leo, como o
enxofre, por exemplo. Na etapa de formulao, os derivados do petrleo sofrem um
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)

25
polimento, alcanando diferentes especificaes de presso de vapor, peso especfico,
contedo de enxofre, viscosidade, entre outras (CUNHA, 2009, SZKLO, 2005).
Apesar do planejamento e gerenciamento adequados nas refinarias, visando minimizar
possveis perturbaes ambientais, importantes impactos ainda podem ocorrer. Alguns
exemplos desses impactos so o consumo excessivo de gua e energia, a produo de grandes
quantidades de efluentes lquidos, a emisso de gases txicos e o efeito estufa, bem como a
gerao de resduos slidos, de difcil tratamento e disposio (BAIRD, 2008).
De acordo com a Associao Brasileira de Normas Tcnicas, ABNT (2004), os
resduos so definidos como um material resultante da atividade humana de origem industrial,
domstica, hospitalar, agrcola, de servios e de varrio. Em funo de suas caractersticas
fsico-qumicas, podem representar risco para a sade pblica e ambiental, dado os diferentes
graus de toxicidade, podendo ser teratognicos, quando afetam a vida embrionria;
mutagnicos, quando aumentam as taxas de alteraes genticas espontneas e
carcinognicos, quando aumentam a probabilidade do desenvolvimento de cncer.
Os resduos oleosos da indstria do petrleo compreendem uma mistura de substncias
hidrofbicas, de graus de recalcitrncia distintos e por vezes, carcinognicas, podendo ser de
natureza orgnica e inorgnica. Os resduos slidos, semisslidos e lquidos so formados em
muitas etapas do processo do refino e tratamento de efluentes, bem como durante o transporte
e estocagem da matria-prima ou do produto pronto (DEUEL Jr. e HOLLIDAY, 1997). A
Tabela 3.1 apresenta alguns dos principais resduos gerados na indstria do petrleo.

Tabela 3.1 Resduos gerados na indstria do petrleo listados por origem*
Tipo de operao Exemplos
Refino

lama do dessalinizador; resduo de fundo de tanque de
refino; resduo de coque; borras oleosas; catalisadores
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)

26
Refino (continuao) exauridos; finos do catalisador exaurido; finos depositados
nos tratamentos trmicos; lamas dos processos de
converso de produtos de fundo de cmaras de destilao a
vcuo; guas cidas; argilas de converso; argilas de
filtrao de leo lubrificante; slidos emulsionados em
leos; sedimento de filtrao; lamas cidas; lamas de
enxofre; produtos fora da especificao.
Tratamento lamas do tratamento de efluentes; lodo de separao leo-
gua; sobrenadante de separadores; lodo biolgico; lama
de limpeza dos trocadores de calor e torres de refrigerao;
argilas de absoro.
Limpeza lodo de limpeza de tubos; lodo de limpeza de separadores;
lodo de poeiras do sistema de emisso de gases; efluentes
oleosos em condensadores.
Transporte e estocagem sedimento de fundo do tanque de armazenamento; borras
oleosas; slidos emulsionados no leo; ferrugem; crostas;
solo contaminado por derramamentos.
* dados reunidos a partir de diversas fontes

Os resduos gerados na indstria do petrleo e gs natural podem ser classificados
como resduos perigosos e no perigosos. Os resduos perigosos ou classe I apresentam
propriedades que lhes conferem graus de periculosidade, ou seja, inflamabilidade,
corrosividade, reatividade, toxicidade e patogenicidade. Ressalta-se que um resduo classe I
no necessariamente tem que apresentar todas essas propriedades (ABNT, 2004). As borras
oleosas, resduos de fundo de tanques e das cmaras de destilao, lodos de tratamento de
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)

27
Slidos emulsionados no leo (67,2%) Catalisadores exauridos (25,0%)
Borra oleosa (4,5%) Sedimentos depositados (2,4%)
Lodo biolgico (0,6%) Lamas (0,4%)
Argilas de absoro (0,2%) Resduo de fundo de cmara de destilao (0,1%)
efluentes e de limpeza, amnia e catalisadores exauridos, isto , saturados por metais pesados
e hidrocarbonetos, so exemplos de resduos gerados na indstria do petrleo, pertencentes
esta classe.
Os resduos no perigosos ou classe II compreendem os compostos que no se
enquadram na definio para os resduos perigosos. Os resduos classe II se subdividem em
dois grupos: classe IIA ou no inertes, os quais podem apresentar caractersticas como
biodegradabilidade, combustibilidade e solubilidade em gua; e classe IIB ou inertes,
caracterizados desta forma quando todos os seus constituintes solubilizados apresentam
valores inferiores aos padres de potabilidade da gua, excetuando aspecto, cor, turbidez,
dureza e sabor (ABNT, 2004).
A Figura 3.1 apresenta o percentual de resduos perigosos gerados em uma refinaria de
grande porte.








Figura 3.1 Percentual de resduos perigosos gerados em uma refinaria de grande porte,
calculados a partir de dados de Mariano (2001)

Os resduos perigosos da indstria de petroderivados so constitudos principalmente
por hidrocarbonetos aromticos monocclicos, policclicos e heterocclicos, de alta e baixa
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)

28
massa molecular, alm de gua e partculas minerais, incluindo metais pesados. No ponto de
sua gerao, podem conter, em mdia, os seguintes teores: 40-60% de leo, 30-90% de gua e
5-40% de slidos totais. Desta forma, qualquer resduo gerado em operaes industriais
representa risco para o ambiente e um problema para o setor, determinando que o correto
gerenciamento dos resduos seja empregado, prtica existente mesmo antes do atual
movimento ecolgico (DAS e MUKHERJEE, 2007, LAZAR et al. 1999, DEAN, 2005). A
literatura sugere que antes da destinao de tais resduos, se faz necessrio o emprego de
operaes de manejo e de tratamento, como por exemplo, o acondicionamento seguro, a
estabilizao e a disposio em aterros (MACHN-RAMIREZ et al. 2008, MARIANO, 2001).
Quando se dispem borras oleosas ou qualquer outro tipo de resduos em aterros, esse
processo deve ser conduzido de forma a garantir a estabilidade hidrolgica e mecnica, no
intuito de evitar lixiviao e contaminao por infiltraes. Do contrrio, o tratamento e a
disposio final imprprios desses materiais podem causar impactos relevantes e adversos,
principalmente ao solo e aos corpos hdricos subterrneos (RITTER et al. 2006, MISHRA et
al. 2001, VASUDEVAN e RAJARAM, 2001).
Ao se optar em dispor resduos oleosos diretamente no solo, a execuo equivocada ou
insegura dessa operao pode causar graves danos ao ambiente. No entanto,
independentemente do cuidado e da tecnologia empregada na disposio de resduos
diretamente no solo, a transferncia de massa dos contaminantes atravs de suas camadas
pode ocorrer e dessa forma, o transporte da matria orgnica pode seguir trs vias: parte se
dissolve na fase lquida do solo, outra fica retida nos poros e uma terceira, compe a fase
gasosa. Alm disso, observa-se que a rea onde ocorre a adsoro dos contaminantes nos
agregados maior do que toda a rea encontrada na superfcie do solo (NADIM et al. 2000).
Uma vez em contato, os resduos do petrleo podem afetar propriedades importantes
do solo, tais como, permeabilidade, porosidade, densidade, resistncia, estabilidade, umidade,
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)

29
entre outras. Em alguns casos, a ao do tempo pode potencializar o impacto negativo no
bioacesso e na biodisponibilidade de certas molculas, tornando os Hidrocarbonetos
Policclicos Aromticos uma das principais classes de compostos reconhecidamente
persistentes (SEMPLE et al. 2007, DUA et al. 2002, VISVANATHAN, 1996).

3. 2 Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos (HPA)

Os Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos (HPA) compem uma importante e
complexa classe de compostos ubquos, dotados de dois ou mais anis aromticos e
ciclopentanos, condensados e arranjados na forma linear, angular ou em grupos. Os HPA so
geralmente formados a partir de hidrocarbonetos saturados, sob condies deficientes de
oxignio, utilizando vias de pirossntese ou de pirlise, catalisadas por certos constituintes
presentes no meio (MUCKIAN et al. 2007, VO-DINH; FETZER e CAMPIGLIA, 1998).
Os HPA se originam a partir de trs fontes: 1 vegetal, pela razo de muitos dos
constituintes das plantas serem formados por molculas aromticas, tais como, carotenoides,
lignina, alcaloides e terpenoides; 2- geoqumica, quando a matria orgnica exposta altas
temperaturas, permitindo a formao desses compostos; 3- antropognica, mais comum e
muito acima do padro natural de formao (MUELLER; CERNIGLIA e PRITCHARD,
2005).
A maior preocupao com relao aos HPA diz respeito ao seu elevado potencial
mutagnico e carcinognico, amplamente divulgados na literatura (MATER et al. 2006,
ENELL et al. 2005, WATANABE, 2001, entre outros). Dada a natureza hidrofbica, os HPA
so bem absorvidos pelos mamferos, atravs de trs rotas de exposio: ingesto, inalao e
drmica, resultando em mutaes e perturbao nos gametas, alm do acmulo na cadeia
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)

30
trfica (FARHADIAN et al. 2011, CEBULSKA-WASILEWSKA et al. 2007, CHEN e LIAO,
2006).
Como xenobiticos, os HPA so considerados os principais contaminantes orgnicos
na natureza, tendo o solo como principal receptor. Essas molculas podem sofrer
transformaes por de diversas vias: oxidao, fotlise, volatilizao e biodegradao. Os
principais fatores determinantes da rota de remoo dos HPA esto principalmente
relacionados ao ambiente e s propriedades qumicas dessas molculas, por exemplo, tamanho
e o nmero e a configurao dos anis (HAMDI et al. 2007, ZHANG et al. 2006, GONG et al.
2005, KANALY e HARAYAMA, 2000).
Os HPA so classificados em dois grupos de acordo com o nmero de anis em HPA
de baixa massa molecular, com dois ou trs e HPA de alta massa molecular, com quatro ou
mais anis (DAUGULIS e McCRACKEN, 2003). A Tabela 3.2 apresenta as principais
caractersticas dos dezesseis HPA prioritrios listados pelo rgo americano de proteo
ambiental, USEPA (United States Environmental Protection Agency).

Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
31
Tabela 3.2 Caractersticas fsico-qumicas e classificao da atividade genotxica dos 16 HPA prioritrios listados pela USEPA*


HPA

n de
anis

Massa
molecular
(g)

Genotoxicidade
(classes)


Frmula

Solubilidade
(mg/L)
Presso
de vapor
(mmHg)

logK
w/o


Ponto
de fuso
(C)
Ponto
de
ebulio
(C)
d
(g/L)

Naftaleno 2 128,17 2B C
10
H
8
31,0 8,89x10
-2
3,4 80 218 1,14
Acenafteno 3 154,21 3 C12H10 3,8 3,75x10
-3
3,9 94 280 1,02
Acenaftileno 3 152,20 -- C
12
H
8
16,1 2,90x10
-2
4,1 91 280 1,01
Fluoreno 3 166,22 3 C13H10 1,9 3,24x10
-3
4,2 116 295 1,20
Fenantreno 3 178,23 3 C
14
H
10
1,1 6,80x10
-4
4,6 101 339 1,25
Antraceno 3 178,23 3 C14H10 0,045 2,55x10
-5
4,5 218 340 1,25
Fluoranteno 4 202,26 3 C
16
H
10
0,26 8,13x10
-6
5,2 111 375 1,25
Pireno 4 202,26 3 C
16
H
10
0,132 4,25x10
-6
5,2 146 404 1,27
Benzo[a]antraceno 4 228,29 2B C
18
H
12
0,011 1,54x10
-7
5,6 162 435 1,27
Criseno 4 228,29 2B C
18
H
12
0,0015 7,80x10
-9
5,9 254 448 1,27
Benzo[b]fluoranteno 5 252,32 2B C20H12 0,0015 8,06x10
-8
6,1 168 481 1,24
Benzo[k]fluoranteno 5 252,32 2B C
20
H
12
0,0008 9,59x10
-11
6,8 217 480 1,24
Benzo[a]pireno 5 252,32 1 C20H12 0,0038 4,89x10
-9
6,5 179 495 1,24
Dibenzo[a,h]antraceno 5 276,34 3 C
22
H
12
0,005 2,10x10
-11
6,5 267 324 1,28
Benzo[g,h,i]perileno 6 278,35 3 C22H14 0,00026 1,00x10
-10
6,6 278 550 1,30
Indeno[1,2,3-c,d]pireno 6 278,35 2B C
22
H
14
0,062 1,40x10
-10
7,1 164 536 1,30
fontes: IARC (2010); Bojes e Pope (2007), Cai et al. (2007), Eom et al. (2007), Zhang et al. (2006), Daugulis e McCracken (2003) e Pope, Peters e Howard (2000)
* United States Environmental Protection Agency

classes: 1- carcinognico para humanos; 2B- possivelmente carcinognico para humanos; 3 no classificado como carcinognico para humanos

constante de partio gua/octanol



densidade (g/L)
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
32
Os dezesseis HPA prioritrios listados pela USEPA representam um modelo de
unidade geral para um grande grupo de molculas e foram escolhidos utilizando critrios
baseados nos seguintes fatos: 1- h bastante informao disponvel; 2- so compostos
representativos da classe, em termos de toxicidade e 3- se encontram em concentraes
superiores aos demais HPA, consequentemente, aumentando o risco, pela maior exposio
(RAVINDRA; SOKHI e VAN GRIEKEN, 2008, THOMAS e WORNAT, 2008)
A Figura 3.2 apresenta as estruturas qumicas dos 16 HPA prioritrios da USEPA.
Figura 3.2 Estruturas qumicas dos 16 HPA prioritrios da USEPA (fonte:
RAVINDRA; SOKHI e VAN GRIEKEN, 2008)

As molculas dos HPA so bastante hidrofbicas, em razo de fenmenos de
ressonncia eletrnica e outras propriedades qumicas, ligando-se fortemente s partculas do
solo, dificultando o bioacesso e aumentando a resistncia biodegradao (GONG et al.
2007, ENELL et al. 2005). Diversas razes podem ser identificadas para explicar o carter
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
33
persistente desses compostos: baixa solubilidade em gua (JACQUES et al. 2008,
HARAYAMA, 1997), baixa biodisponibilidade (SAMANTA; SINGH e JAIN, 2002),
estabilidade molecular (KANALY e HARAYAMA, 2000, YUSTE et al. 2000), alto
coeficiente de adsoro no solo (MOHAMED et al. 2006, VAN HAMME; SINGH e WARD,
2003), altos pontos de fuso e ebulio (GONG et al. 2007), atividade inibitria da microbiota
(TOLEDO et al. 2006) e participao de reaes de condensao de anis e de formao de
radicais livres, catalisadas por metais do solo (RISOUL et al. 2005, LEDESMA et al. 2000,
KARIMI-LOFTABAD; PICKARD e GRAY, 1996).
O Ministrio da Habitao, Planejamento e Meio Ambiente da Holanda considera a
soma da concentrao de 10 HPA padres (naftaleno, antraceno, fenantreno, fluoranteno,
benzo[a]antraceno, criseno, benzo[a]pireno, benzo[g,h,i]perileno, benzo[k]fluoranteno e
indeno[1,2,3-c,d]pireno), cujos valores so distintos para duas categorias denominadas valor
de referncia, 1 mg/kg e valor de interveno, 40 mg/kg. O valor de referncia indica o padro
natural desses HPA no solo, no representando risco para a sade do ambiente e do homem.
Por outro lado, o valor de interveno refere-se ao caso de contaminao do solo, cuja
implantao imediata de estratgias de remediao da rea necessria (NEDERLAND,
2006).
No Brasil, o Conselho Nacional do Meio ambiente, CONAMA, determina valores
orientadores dos HPA para solo, distribudos em trs classes denominadas: referncia,
preveno e interveno. Os valores de interveno ainda esto subdivididos em outras trs
categorias: para reas agrcolas, para reas residenciais e para reas industriais. Diferente na
lista holandesa, os valores orientadores de interveno em reas industriais no correspondem
uma soma de 10 HPA padres e sim, a valores individuais, em mg/kg de solo seco, de 10
HPA, cujas concentraes no podero estar acima dos seguintes valores: antraceno (0,0),
benzo[a]antraceno (65,0), benzo[k]fluoranteno (0,0), benzo[g,h,i]perileno (0,0),
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
34
benzo[a]pireno (3,5), criseno (0,0), dibenzo[a,h]antraceno (1,3), fenantreno (95,0),
indeno[1,2,3-c,d]pireno (130,0) e naftaleno (90,0) (BRASIL, 2009).

3. 3 Vias para tratamento de solos contaminados com leo

Ao longo das ltimas dcadas, o aumento da necessidade da proteo ambiental
proporcionou uma intensa cobrana por parte da opinio pblica, motivada principalmente
por eventos de grande apelo visual e impacto na mdia, tais como, os derramamentos de leo,
a poluio de corpos hdricos, as grandes chamins de fbricas e o desmatamento de florestas.
O momento histrico que deu incio ao que chamamos de conscincia ambiental ocorreu a
partir do impacto causado pelas fotos do planeta Terra, vista no espao, tiradas por
astronautas, entre os anos de 1968-1970. Pela primeira vez na histria, o planeta foi visto por
inteiro e pde-se perceber o quo solitrio e frgil est no espao. Nas dcadas seguintes,
registrou-se o crescimento da preocupao com relao poluio ambiental, proteo de
reas naturais e crescimento populacional, entre outros. Por vezes, assuntos como a guerra fria
e a recesso puseram a necessidade de proteo ambiental em segundo plano, somente
tornando-se prioritrio com a proximidade do incio do sculo XXI (ODUM e BARRETT,
2008, LESCHINE, 2002).
O tratamento do solo contaminado por leo tem como objetivo a reduo do volume
do contaminante e a desintoxicao da rea impactada. Os mtodos e tecnologias aplicados
so limitados pelas condies ambientais e requerem deciso baseada em estudos de caso
(ANDERSON, 2002, NORDVIK, 1999, SAXENA e JOTSHI, 1996). A Tabela 3.3 apresenta
as principais estratgias aplicadas no tratamento de solos impactados com leo e derivados.



Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
35
Tabela 3.3 Exemplos de tratamentos de solos contaminados por leo e derivados*
Tratamentos fsicos Tratamentos qumicos Tratamentos biolgicos
Dessoro trmica
Escavao e Aterro
Extrao do vapor do solo
Remoo mecnica
Lavagem
Imobilizao

Queima in situ e ex situ
Injeo de oxidantes
Injeo de emulsificantes
Aplicao de dispersantes
Extrao por solvente
In situ flushing

Estratgias de Bioestmulo
Bioaumento
Biopilha
Fitorremediao
Compostagem
Biorreatores
Biofiltros
Landfarming
* dados reunidos a partir de diversas fontes

Dentre as tcnicas mais empregadas e comercialmente disponveis para a remoo de
contaminantes em solos impactados por leo destacam-se os tratamentos trmicos,
reconhecidos por alguns autores, como os mais eficientes. No entanto, as alternativas
biolgicas so consideradas menos invasivas e ambientalmente corretas. De acordo com a
temperatura empregada, os tratamentos trmicos so classificados em dois tipos: 1- tcnicas
de dessoro, operando na faixa de temperatura entre 100 e 350C, as quais promovem o
aquecimento do solo e a separao fsica atravs da transferncia de massa para a fase gasosa
e 2- tcnicas de destruio, operando na faixa de temperatura acima de 350C, promovendo a
modificao qumica dos contaminantes (MERINO e BUCAL, 2007, SAXENA e JOTSHI,
1996).
A complexidade e a concentrao dos poluentes, as propriedades dos solos e a
contaminao residual aps algumas alternativas de tratamento trmico, com nfase nos
compostos menos volteis, sugerem a necessidade de alternativas sequenciais, menos
agressivas e economicamente atrativas. Nesses casos, os tratamentos biolgicos seriam
indicados como uma complementao. Outro fator importante na determinao da estratgia
de tratamento de solos impactados com leo o tempo necessrio para a remediao. Esse
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
36
perodo pode variar de poucos meses a muitos anos e a escolha do processo depende de
alguns fatores, tais como, qualidade e quantidade dos contaminantes presentes, tamanho e
profundidade da rea contaminada, tipo de solo e condies ambientais. Entre esses fatores, o
tipo do contaminante considerado o parmetro determinante (FRIIS et al. 2006, ENELL et
al. 2005, ARARUNA Jr. et al. 2004).
Geralmente, a interao entre os tratamentos fsico-qumicos com os tratamentos
biolgicos ocorre de forma sequencial ou secundria, sendo empregados antes ou depois da
biorremediao. Tais abordagens podem ser exemplificadas pela adio de solventes ao solo
ou pelo emprego do reagente de Fenton ou oznio aps o biotratamento, respectivamente. No
primeiro exemplo, os compostos hidrofbicos so dissolvidos, favorecendo a assimilao
desses compostos pelos micro-organismos, isto , aumentando sua biodisponibilidade. No
segundo exemplo, as estratgias empregadas participam de reaes de oxidao dos
contaminantes residuais e seus metablitos (GAN; LAU e NG, 2009).
Na extensa literatura consultada, a aplicao de qualquer tratamento biolgico
sequencial para a remoo de compostos residuais, em solos tratados por dessoro trmica,
ainda no foi executada, uma vez que os autores enfatizam a eficincia da operao baseados
nas caractersticas fsico-qumicas do solo aps a passagem pelo forno. Contudo, ressalta-se
que as altas temperaturas e certas oscilaes intrnsecas do processo podem promover
determinadas condies, nas quais, um tratamento secundrio se faa necessrio.

3. 3. 1 Dessoro trmica

A dessoro trmica um processo de remoo de molculas no estado lquido ou
gasoso, aderidas superfcie, contidas nos micro e nos mesoporos dos slidos, atravs da
aplicao de energia trmica. O tratamento de solos contaminados utilizando o processo de
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
37
dessoro trmica considerado uma das tcnicas de remediao mais adequadas e versteis,
dentre as existentes na atualidade. Isto se deve ao amplo espectro de contaminantes orgnicos
e de alguns metais que podem ser convertidos s suas formas volteis. Em solos
contaminados com leos, o mtodo est fundamentado no fenmeno de volatilizao dos
constituintes do contaminante, envolvendo equilbrio de fases e transferncia de massa, sendo
a temperatura, um dos principais fatores do processo. Os tipos dos contaminantes, as
caractersticas do solo, incluindo a textura e o tempo de residncia do material nos
equipamentos, tambm so fatores importantes ao sucesso da dessoro trmica
(FALCIGLIA; GIUSTRA e VAGLIASINDI, 2011, DAZY; FRARD e MASFARAUD,
2009, GEORGE et al. 1995, BUCAL et al. 1994).
Vrias tecnologias podem ser empregadas na extrao ou na recuperao de
compostos orgnicos, bem como no tratamento de solos contaminados por leo. No entanto, a
partir da dcada de 1990, a dessoro trmica, apesar de envolver grande investimento,
recebeu destaque pela eficcia, ganho em tempo e menor investimento por tonelada de solo,
correspondendo aproximadamente 50% dos gastos quando comparada biorremediao.
Outras importantes vantagens apresentadas pela tcnica so a possibilidade de remediar
grandes quantidades de solo em menor tempo, a no produo de metablitos por no
envolver atividade biolgica, o potencial de aplicao na recuperao do leo e a
possibilidade de aumentar a biodisponibilidade do contaminante atravs de sua redistribuio
no solo (ROBINSON et al. 2008, WORLD OIL, 2001, BROTEN; GROTENHUIS e
RULKENS, 1999).
Deve-se tambm ressaltar que embora o processo de dessoro trmica no tenha sido
desenvolvido para decompor molculas orgnicas, alguns deles podem o ser, de forma parcial.
As temperaturas empregadas podem promover reaes de isomerizao e ou alongamento de
cadeia, gerando a presena de compostos residuais aps a passagem pelo forno. Em relao a
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
38
este processo, a no destruio total dos constituintes txicos pode se tornar um problema,
caso no haja um planejamento eficaz para descarte de resduos remanescentes. Outros pontos
crticos importantes da operao so a gerao de emisses de gases de efeito estufa e a
formao de produtos e subprodutos da combusto incompleta, tais como, dioxinas, furanos,
xidos de enxofre e nitrognio e os vapores de metais. Para contornar tais inconvenientes, a
Unidade de Dessoro Trmica possui um sistema de controle de poluio de gases, que ser
discutido mais adiante (POPE; PETERS e HOWARD, 2000, McGOWAN; GREER e
LAWLESS, 1996).
Os fenmenos envolvidos na dessoro trmica so divididos em duas etapas:
liberao de compostos orgnicos volteis e gua, seguida pela liberao lenta de leo com o
aumento gradual da temperatura, tendo como consequncia a perda de massa representada
pelas perdas de gua, hidrocarbonetos, material hmico, metais e alguns minerais como
carbonatos. A dessoro trmica pode ser aplicada nos casos de solos contaminados com
misturas de hidrocarbonetos, no entanto, um elevado grau de ateno deve ser tomado quando
o tratamento envolve solos contaminados com leos ou resduos oleosos contendo elementos
metlicos em elevadas concentraes, em especial, arsnio e mercrio, bastante comuns em
alguns leos crus (WORLD OIL, 2001).
A natureza do leo e do solo pode requerer ainda, um elevado gradiente de
temperatura, associado a um aumento do tempo de residncia no equipamento trmico para a
remoo satisfatria dos contaminantes, conferindo o aumento significativo do custo, um dos
limitantes do processo (LEE et al. 1998).
Geralmente, as Unidades de Dessoro Trmica em escala industrial utilizam o
esquema simplificado apresentado na Figura 3.3.


Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
39
1
2
3
8
4
5
6
7
Resduo
Efluente Gasoso
Tratado
Slidos
Tratados
Efluente Lquido
Tratado
u


Figura 3.3 - Esquema simplificado de uma Unidade de Dessoro Trmica. 1-
armazenamento do resduo; 2 preparao e estoque; 3- admisso; 4 dispositivo
transportador; 5 forno; 6- sistema de tratamento de gases; 7 sistema de tratamento e
reciclo dos efluentes; 8 armazenagem dos slidos; inclinao do forno (adaptado de
SECOND, 2000)

Segundo De Percin (1995), independentemente do tipo do resduo, esse material
necessita passar por unidades de operaes de recepo e armazenamento temporrio visando
dar condies para as anlises no material recebido e o correto acondicionamento, respeitando
a compatibilidade qumica entre os vrios materiais. Nessa etapa, pode ser verificado se os
materiais possuem propriedades radioativas, oxidantes, explosivas, entre outras, e por isso
de fundamental importncia para a segurana do processo e dos trabalhadores, bem como para
o desempenho do processo. Os dados obtidos na recepo e armazenagem dos resduos
permitem escolher as operaes unitrias a serem empregadas na preparao do material que
seguir para o equipamento trmico. Dentre essas operaes, destacam-se a mistura dos
slidos e dos lquidos, moagem e a separao granulomtrica. Assim, pode-se obter uma
mistura de resduos, com poder calorfico adequado, evitando exploses dentro do forno e
reduzindo custos com energia.
Aps a etapa de preparao, tambm conhecida como blendagem, segue a operao de
admisso. Nessa etapa, a massa a ser admitida no equipamento trmico dosada, em geral,
com um equipamento denominado moega. A quantidade de material que sai da moega
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
40
depende das caractersticas da mistura preparada na etapa de blendagem, da temperatura do
forno, das dimenses do equipamento e dos sistemas de controle de emisses acoplados.
Aps a moega, encontra-se a operao de transporte dos resduos para o forno. Esta
etapa determina o fluxo de massa na entrada, de forma a garantir uma homogeneidade do
material, incrementando a eficincia do processo. O transporte de material para o forno pode
ser feito por meio de equipamentos mecnicos, como as correias transportadoras e os
parafusos-sem-fim. As operaes manuais de transporte podem ser realizadas, no entanto, so
menos eficientes, pois apresentam dificuldades para manuteno de velocidade constante e
esto relacionadas aos problemas de sade ocupacional.
Ao serem admitidos no forno, os resduos entram em contato com a energia trmica
presente no equipamento. Esse contato pode ser feito de forma direta ou indireta. Os
equipamentos que possibilitam o contato direto dos resduos com a chama no forno so
denominados Unidades de Dessoro Trmica com chama direta, j os equipamentos que no
possibilitam o contato dos resduos com a chama so denominados de Unidades de Dessoro
Trmica com chama indireta. Nesse caso, o calor transferido uma superfcie que conduz
calor aos materiais nela dispostos. A temperatura de operao dos fornos varia, conforme o
ponto de ebulio dos compostos que se deseja remover dos resduos (DE PERCIN, 1995).
O tempo de residncia dos resduos no forno controlado por duas variveis: a
inclinao e a rotao do forno. Os sistemas rotatrios para dessoro trmica so os mais
comuns e tais sistemas, quando aplicados em chama direta contracorrente, so considerados
mais eficientes para o processo (McGOWAN; GREER e LAWLESS, 1996). A Figura 3.4
apresenta o esquema de um forno rotatrio usado no tratamento de solos contaminados por
leo.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
41

Figura 3.4 Corte longitudinal de um forno rotatrio (adaptado de HEYDENRYCH;
GREEF e HEESINK, 2002)

medida que ocorre o movimento giratrio, o solo dentro do tambor rotatrio se
distribui em duas regies com caractersticas distintas. Prximo base, forma-se a camada
passiva, que compreende a maior poro, enquanto que na parte superior, forma-se a camada
ativa. A camada ativa possui uma profundidade varivel em funo da velocidade empregada
e das partculas que se movem da superfcie para a parte inferior da face do rotor, ocorrendo
nesta regio a transferncia de massa (HEYDENRYCH; GREEF e HEESINK, 2002).
O tempo de residncia e a velocidade de rotao tambm promovem modificaes da
matriz slida. Essas modificaes so causadas pela quebra das partculas em funo do atrito,
gerando partculas com dimetros menores, principalmente na camada passiva. Alm da
temperatura, a matriz do solo outro fator importante e geralmente areia e cascalho produzem
resultados melhores que solos argilosos (ARARUNA Jr. et al. 2004, McGOWAN; GREER e
LAWLESS, 1996, RINK et al. 1993).
Os vapores e gases emanados no forno so direcionados para o sistema de tratamento
de gases. Esse sistema pode possibilitar a condensao do efluente gasoso atravs da reduo
da temperatura, permitindo, assim, a recuperao de contaminantes de interesse, como por
exemplo, hidrocarbonetos. Em outros casos, o sistema equipado com uma cmara de ps-
Luz do forno
camada ativa
camada passiva
sentido da rotao
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
42
combusto, CPC, na qual ocorre nova adio de calor no sistema, promovendo a oxidao da
fase gasosa. Para esse caso, a temperatura deve estar entre 800 e 1200C (BRASIL, 2002).
Independentemente da presena da CPC ou de sistema de condensao, os efluentes
gasosos emanados desses dispositivos so encaminhados para sistemas de resfriamento,
visando reduzir a formao de outras molculas, destacam-se as dioxinas e os furanos,
compostos altamente carcinognicos. Os efluentes gasosos, em seguida, so encaminhados
para lavadores de gases e para ciclones e/ou filtros visando remoo de gases cidos, xidos
de nitrognio e de enxofre, bem como remoo de material particulado (KULKARNI;
CRESPO e AFONSO, 2008).
A legislao brasileira preconiza que esses sistemas de tratamento de gases devem ser
equipados com sistemas automticos para monitoramento das emisses, possibilitando o
fechamento da entrada do forno para casos de emisses fora dos padres estabelecidos,
ausncia de chama, baixo teor de oxignio, alto teor de monxido de carbono, entre outros
parmetros que possam indicar queima inadequada (BRASIL, 2002). Esse processo de
monitoramento contnuo das emisses, com interligao da resposta analtica automatizada
porta do forno denominado de intertravamento.
Para resfriamento e tratamento dos gases usam-se lquidos e equipamentos diversos.
Os lquidos gerados na unidade so em geral, recirculados no processo com vista reduo
dos custos do processo e os slidos tratados so encaminhados para um local de
armazenamento para anlises. Caso seja considerado adequado, o resduo tratado
encaminhado para destino selecionado, caso seja considerado inadequado, retorna etapa de
preparao, reingressando ao processo.
O tratamento trmico promove modificaes no solo, alterando suas caractersticas
micro e macroscpicas, bem como muitas de suas propriedades fsicas, por exemplo,
resistncia, plasticidade, densidade e capacidade de reteno de gua. A temperatura
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
43
apresenta efeitos significativos principalmente na faixa acima de 100C (ABU-ZREIG; AL-
AKHAS e ATTOM, 2001).
De acordo com McGrath, Sharma e Hajaligol (2001), dentro do forno ocorrem
concomitantemente, vrias reaes mediadas pela temperatura e pelo tempo de residncia, de
modo que HPA podem ser eliminados e outras substncias podem ser transformadas em HPA,
atravs do processo denominado por reforma ou sntese de novo
1
, isto , quando sob altas
temperaturas, molculas complexas so formadas a partir de precursores simples. Em recente
estudo, o catecol, molcula composta por apenas um anel aromtico, foi utilizado como
modelo para a investigao da formao de produtos de combusto incompleta, sendo
observada a formao de 43 diferentes tipos de HPA, desde naftaleno (C
10
) ao coroneno (C
24
)
(THOMAS e WORNAT, 2008).
Os compostos de C
1
a C
5
constituem as maiores fontes para formao dos HPA. Tais
molculas submetidas temperaturas acima de 300C perdem radicais alquila, gerando a
liberao de hidrognio e de hidrocarbonetos leves, destacando-se o acetileno e o metano.
Neste cenrio tambm possvel a formao de radicais livres, que ao se combinarem com os
hidrocarbonetos leves, promovem reaes de condensao de anis aromticos, bem como
interaes com HPA de baixa massa molecular, produzindo ismeros ou aumentando a massa
molecular por conta do alongamento da cadeia (RAVINDRA; SOKHI e VAN GRIEKEN,
2008, POPE; PETERS e HOWARD, 2000, BUCAL et al. 1996).
Neste contexto, pode existir tambm a converso de HPA no mutagnicos em HPA
mutagnicos como, por exemplo, pireno em benzo[a]pireno. Os HPA mais reativos so o
acenafteno, fluoreno, antraceno, e as formas metiladas de naftaleno, fenantreno e antraceno.
As reaes de isomerizao e aromatizao tambm podem ocorrer e serem catalisadas por

1
Do latim de novo que vem do novo, do incio ou do zero


Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
44
minerais e metais presentes no solo (POPE; PETERS e HOWARD, 2000, REMMLER e
KOPINKE, 1995).

3. 3. 2 Biorremediao

A biorremediao um processo que visa a recuperao de solos contaminados por
substncias txicas pela ao de micro-organismos. A biorremediao de solos pode ser
classificada em dois grupos: in situ, isto , na prpria rea contaminada, ou ex situ, quando se
faz necessria remoo fsica (MARGESIN et al. 2007, PALA et al. 2006, POPP;
SCHLMANN e MAU, 2006).
Do ponto de vista do seu planejamento, a biorremediao de solo contaminado por
hidrocarbonetos um processo transdisciplinar, envolvendo interaes entre engenharia,
microbiologia, ecologia, geologia e a qumica (SAMANTA; SINGH e JAIN, 2002). A
biorremediao uma alternativa atraente e de baixo custo, baseada no estmulo da atividade
metablica dos micro-organismos para a converso dos contaminantes em substncias
atxicas e biomassa (CHANEAU et al. 2005, PAZA et al. 2005, RAHMAN et al. 2002,
WATANABE, 2001). Entre as vantagens consideradas mais importantes da biorremediao
de solos contaminados por leo destacam-se: o custo, a possibilidade de aplicao em
conjunto a outros mtodos de remoo e a aceitao pblica. Por outro lado, o acmulo de
metablitos txicos se caracteriza como a principal desvantagem do processo (CHAILLAN et
al. 2004, BOOPATHY, 2000).
A biorremediao de solos contendo HPA requer tempo e apresenta maior
complexidade quando comparada aos processos desenvolvidos para tratamento de ambientes
contaminados com alguns hidrocarbonetos alifticos. A maior dificuldade vem do fato de que
parte significativa dos HPA e de metablitos pode estar incorporado matria hmica,
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
45
tornando a razo soro/dessoro dos HPA, o principal fator governante de sua remoo
(BARRIOS, 2007, WATANABE, 2001, YUSTE et al. 2000).
importante salientar que fatores intrnsecos e extrnsecos incrementam a dificuldade
de biorremediar solos contaminados com HPA e alguns deles esto listados na Tabela 3.4.

Tabela 3.4 Principais fatores limitantes na remoo dos HPA no solo
Fatores Exemplos Referncias
Intrnsecos da Microbiota
composio
tamanho e diversidade
versatilidade metablica
aumento da atividade enzimtica
produo de biossurfatantes
viabilidade de aceptores de eltrons
interaes ecolgicas
do Contaminante
natureza
tamanho e estrutura da molcula
biodisponibilidade
toxicidade de metablitos
histrico da contaminao

vres (2000)
Liu et al. (2006)
Marin, Hernandez e Garcia (2005)
Lser et al. (1998)
Singh, Van Hamme e Ward (2007)
Mulligan e Yong (2004)
Tilman (2000)

Atlas (1981)
Bossert, Kachel e Bartha (1984)
Semple et al. (2007)
Boopathy (2000)
Paza et al. (2006)
Extrnsecos









do Ambiente
temperatura
tempo
mudanas sazonais
umidade
matria orgnica
nutrientes essenciais
pH
propriedades do solo
profundidade

Dibble e Bartha (1979)
Rivas (2006)
Marschner e Kalbitz (2003)
Ettema e Wardle (2002)
Amellal, Portal e Berthelin (2001)
ejkov, Mask e Jirk (1997)
Rahman et al. (2002)
Margesin et al. (2007)
Vasudevan e Rajaram (2001)
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
46
Extrnsecos
(continuao)
presena de cossubstrato Romantschuk et al. (2000)

A biorremediao de solos contaminados com HPA um processo controlado que
necessita aplicao de condies muitas vezes no encontradas naturalmente. O revolvimento
do solo uma das condies primordiais, permitindo a homogeneizao, ao mesmo tempo em
que promove aerao, quebra de agregados, eliminao de compostos volteis e o aumento do
contato de micro-organismos com nutrientes e substratos (JONER et al. 2004). O tipo e a
estrutura do solo afetam diretamente a biodisponibilidade do contaminante, bem como a
organizao e a densidade das comunidades degradadoras, consideradas os pontos centrais da
biorremediao (SCHERR et al. 2007).
Os micro-organismos dominam e possuem um papel fundamental na natureza, por
conta da sua biomassa e da atividade metablica, envolvendo na maioria das vezes a atuao
de enzimas indutivas e constitutivas. Geralmente, os consrcios microbianos so o foco dos
processos de biorremediao, sendo a sua importncia atribuda cooperao metablica e ao
cometabolismo (ALDN; DEMOLING e BTH, 2001, JOHNSEN; WICK e HARMS,
2005, SPAIN e VAN VELD, 1983).
A temperatura considerada o principal fator na biodegradao dos HPA quando
presentes no solo. A faixa tima est estabelecida entre 30 e 40C, facilitando a mobilizao
dos HPA e aumentando a solubilidade (PERFUMO et al. 2007, LEAHY e COLWELL, 1990),
como tambm refletindo diretamente na atividade microbiana, promovendo o aumento da
atividade enzimtica (POPP; SCHLMANN e MAU, 2006).
A faixa de pH considerada ideal da biodegradao de hidrocarbonetos do petrleo,
incluindo HPA, se encontra entre 7,4 e 7,8, sendo considerada tima em 7,8 e valores de 8,5
ou superior, no indicados (FRANCO et al. 2004, RAHMAN et al. 2002, ROWLAND et al.
2000).
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
47
O teor de umidade entre 15 e 20% considerado ideal da biodegradao dos HPA.
Nesta faixa, pode ser estabelecido um cenrio propcio competio entre as molculas de
gua pelos mesmos stios minerais de soro dos HPA nos agregados do solo. Dessa forma,
maior quantidade de HPA pode ser encontrada no sorvida matriz e como consequncia, o
bioacesso pode sofrer um aumento (KOTTLER; WHITE e KELSEY, 2001).
A presena de oxignio fundamental para o incio do processo degradativo porque
diversas enzimas envolvidas na quebra das molculas so oxigenases. A aerao artificial
acelera o processo e se caracteriza como fator determinante na velocidade da biorremediao
(LEAHY e COLWELL, 1990).
A concentrao de nutrientes, representados principalmente por nitrognio e fsforo
o fator limitante mais comum da biorremediao de solos. As fontes de nitrognio e fsforo
so essenciais para aumento da biomassa, refletindo diretamente na eficincia da
biodegradao (KIM et al. 2005, SARKAR et al. 2005, VAN HAMME; SINGH e WARD,
2003, ODONNELL et al. 2001).
A melhoria da aerao, a correo do pH e a umidade do ambiente, bem como a
adio de nutrientes compem etapas da tcnica de bioestmulo e visam adequar o ambiente
s melhores condies para a biodegradao (MARGESIN; HMMERLE e TSCHERKO,
2007, BENTO et al. 2005, SARKAR et al. 2005).
Por outro lado, o bioaumento baseia-se na introduo de micro-organismos originados,
na sua grande maioria, do prprio solo a ser tratado (DEJONGHE et al. 2001). A forma usual
da aplicao do bioaumento realizada utilizando consrcios microbianos. Preferidos no
lugar de culturas axnicas, os consrcios microbianos so extremamente prticos, podendo ser
exclusivamente bacterianos (JACQUES et al. 2008, AYOTAMUNO et al. 2007),
exclusivamente fngicos (MEYSAMI e BAHERI, 2003) ou mistos, isto , compostos por
bactrias e fungos (BOONCHAN et al. 2000).
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
48
estabelecido na literatura que a concentrao do inculo esteja entre 10
7
e 10
12
UFC/g para os solos onde a biodisponibilidade um fator limitante, como no caso dos solos
contaminados por HPA. No caso do bioaumento, acredita-se que o inculo deve ser maior ou
igual populao microbiana encontrada no solo a ser tratado. Isto pode promover garantias
contra obstculos importantes a partir da inoculao, tais como, adaptao, predao,
competio, imobilidade e substncias inibidoras como metablitos ou altas concentraes de
cossubstratos e fertilizantes (MACNAUGHTON et al. 1999, VOGEL, 1996, LEAHY e
COLWELL, 1990).
Alguns autores sugerem, no entanto, que a interao das tcnicas de bioaumento e
bioestmulo seria uma alternativa muito interessante, dada as vantagens que este tipo de
associao pode trazer para a biorremediao de solos contaminados por petroderivados
(HAMDI et al. 2007, NIKOLOPOULOU; PASADAKIS e KALOGERAKIS, 2007,
MRQUES-ROCHA et al. 2005). Outros autores comparam as duas tcnicas na tentativa de
eleger qual o tipo ideal de tratamento, isto , se o aumento da populao por injeo de micro-
organismos ou por estratgias de bioestmulo. No entanto, cada histrico de contaminao
nico, no podendo assim ser apontado qual o melhor tratamento antes de uma investigao
prvia. Em algumas situaes o bioaumento foi melhor que o bioestmulo (MANCERA-
LPEZ et al. 2008) e em outras, foi observado o contrrio (BENTO et al. 2005).

3. 4 Degradao dos HPA por micro-organismos hidrocarbonoclsticos do solo

O solo caracteriza-se como um ambiente de alta complexidade biolgica, contendo a
maior poro de biodiversidade, contribuindo dessa forma, para a sustentabilidade de diversos
ecossistemas. Grande parte da atividade humana ocorre em terra, razo pela qual conferida
ao solo, a maior suscetibilidade a possveis impactos, resultados da contaminao por diversas
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
49
fontes, tais como pesticidas, resduos slidos urbanos e hidrocarbonetos do petrleo.
Particularmente o petrleo, produto explorado comercialmente desde 1859, apresenta um
significativo potencial de risco ao ambiente durante qualquer etapa de sua produo,
distribuio e consumo (BARRIOS, 2007, PAUL, 2007, LILLEY et al. 2006, THOMAS,
2001).
A introduo de hidrocarbonetos do petrleo no solo tem origem antropognica em
mais de 90% dos casos. A presena dos hidrocarbonetos no solo responsvel pelo aumento
da razo C:N:P, tornando-a muito mais alta do que em ecossistemas livres desses compostos.
Em muitos casos, ao ser identificada a contaminao, encontra-se no solo uma mistura de
metablitos com leos no biodegradados (NIKOLOPOULOU; PARADAKIS e
KALOGERAKIS, 2006, OLLIVIER e MAGOT, 2005).
As reaes microbianas so a chave para a recuperao de solos contaminados por
leo e o processo de adaptao dos micro-organismos na presena do contaminante, bem
como o estresse causado ao ecossistema promovem uma presso seletiva permitindo que
geraes de indivduos hidrocarbonoclsticos se estabeleam (LEE; OH e KIM, 2008,
HAMAMURA et al. 2006). Ao longo do tempo, tais micro-organismos reduzem o avano da
contaminao atravs da formao de produtos menos txicos ou da sua total mineralizao
(MULLIGAN e YONG, 2004, SMETS e PRITCHARD, 2003). A biodegradao de
hidrocarbonetos do petrleo em solo dividida em duas fases distintas: a primeira, mais
rpida e mediada pela biodisponibilidade do poluente e a segunda fase, mais lenta, controlada
pela relao soro/dessoro dos hidrocarbonetos nos agregados do solo (KAPLAN e
KITTS, 2004, CORNELISSEN et al. 1998).
Em solos no contaminados por leo, estima-se que apenas 0,1% dos organismos
sejam hidrocarbonoclsticos, no entanto, nos casos de solos contaminados por longos
perodos, podem representar 100% dos indivduos. A presena de hidrocarbonetos do petrleo
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
50
muda a composio da microbiota endgena do solo e esta mudana proporcional
concentrao das substncias xenobiticas (MOON et al. 2006, ATLAS, 1981).
Cada classe de hidrocarbonetos degradada por diferentes maneiras pelos micro-
organismos, utilizando enzimas indutivas e constitutivas. Ao longo do tempo, o fenmeno de
tolerncia ao contaminante estabelecido, tornando o sistema mais resistente a estresses
adicionais, at que os hidrocarbonetos e os metablitos resultantes da biodegradao sejam
totalmente degradados (HAMAMURA et al. 2006, ZOCCA et al. 2004).
Os micro-organismos e as plantas so os maiores agentes de remoo dos HPA do
solo. Dada a sua estrutura qumica, os HPA no so substratos de preferncia microbiana,
entretanto, a maioria dos micro-organismos pode degradar HPA de baixa massa molecular,
utilizando-os como cossubstratos durante a metabolizao dos HPA de alta massa molecular
(BEN SAID et al. 2008, TOLEDO et al. 2006, YUSTE et al. 2000).
Nos solos contaminados por hidrocarbonetos de petrleo, pode ocorrer o
desenvolvimento de micro-organismos aerbios, anaerbios, facultativos e microaerfilos.
Dentre os grupos predominantes, as bactrias Gram-negativas so as principais responsveis
pela biodegradao dos hidrocarbonetos. Vale ressaltar que os fungos tambm so relevantes
no processo de degradao dos HPA, dada a inespecificidade enzimtica, significativamente
importante durante a fase inicial (MARGESIN; HMMERLE e TSCHERKO, 2007,
CHAILAN et al. 2006, TOBOR-KAPLON et al. 2005).
A concentrao e a biodisponibilidade dos HPA no solo influenciam sua degradao,
por implicarem diretamente na taxa de transferncia de massa para os micro-organismos. Em
condies apropriadas, a microbiota utiliza de artifcios e estratgias que visam driblar o
carter persistente dos HPA, por exemplo: quimiotaxia (CELANI e VERGASSOLA, 2010),
aumento da afinidade por HPA com produo de fatores de adeso (JOHNSEN; WICK e
HARMS, 2005), formao de biofilme (BURMLLE; HANSEN e SRENSEN, 2007),
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
51
cometabolismo (CARMICHAEL e PFAENDER, 1997) e aumento da solubilidade de
compostos hidrofbicos pela sntese de molculas com propriedades emulsificantes e
surfatantes (DAS e MUKHERRJEE, 2007, YUSTE et al. 2000). Os bioemulsificantes e
biossurfatantes so substncias de diversas naturezas que interagem diretamente nas gotas de
leo ou na interface leo/gua e possuem caractersticas importantes como, por exemplo,
baixa toxicidade, seletividade, biocompatibilidade e eficincia nos extremos para valores de
pH, temperatura e salinidade. Todo biossurfatante um bioemulsificante, entretanto, nem
todo bioemulsificante um biossurfatante (LUNA-VELASCO et al. 2007, SINGH; VAN
HAMME e WARD, 2007, BATISTA et al. 2006).
Tornar uma molcula biodisponvel um processo dinmico, determinado pela
transferncia de massa do substrato para as clulas microbianas e quanto maior for a massa
molecular do contaminante, menor ser a sua biodisponibilidade. Cabe ressaltar que, com
respeito biodisponibilidade, a frao total presente do contaminante no solo maior que a
frao acessvel ao micro-organismo, implicando no aumento das interaes microbianas
(SEMPLE et al. 2007, JOHNSEN; WICK e HARMS, 2005, ALEXANDER e ALEXANDER,
2000).
As bactrias so os organismos mais especializados na utilizao dos HPA como fonte
de carbono, apesar de que por vezes, o carter persistente dessas molculas, possa constituir
um obstculo ao processo de biodegradao. Embora algumas bactrias sejam dotadas de
estruturas de locomoo como flagelos, tais micro-organismos podem penetrar cerca de 3 a 5
cm no solo uma velocidade mdia de difuso de 0,1 cm
2
.dia
-1
, ao mesmo tempo que a taxa
de dessoro dos HPA nos agregados de muito baixa nenhuma. Dessa forma, o bioacesso
s molculas dos HPA depende muito mais das interaes microbianas do que da prpria
constituio morfolgica de um nico indivduo. O transporte de micro-organismos
desprovidos de estruturas de locomoo, atravs dos canais abertos pelas hifas, resultando um
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
52
aumento do deslocamento para cerca de 1 cm
2
por dia um claro exemplo de como as
interaes entre bactrias e fungos podem ocorrer no solo (GONG et al. 2007, ZHANG et al.
2006, KOHLMEIER et al. 2005, JOHNSEN; WICK e HARMS, 2005; HARMS e BOSMA,
1997).
Huesemann, Huesemann e Fortman (2004) argumentam que a interao da microbiota
no solo torna o processo de biodegradao de HPA mais eficiente, pelo fato dos diferentes
micro-organismos possurem diferentes estratgias metablicas, entretanto bactrias e fungos
no se diferenciam pelo modo de assimilao das molculas, como mostrado na Figura 3.5.


Figura 3.5 Mecanismos de transporte dos HPA por micro-organismos: difuso simples -
HPA de baixa massa molecular (1) e transporte facilitado - HPA de alta massa molecular (2).
O efluxo dos HPA ocorre com gasto de energia (3) (elaborao prpria)

Nas bactrias e nos fungos, o transporte dos HPA do meio externo para o meio interno
da clula pode ser realizado sem gasto de energia, independente da temperatura, atravs de
difuso simples ou por transporte facilitado. Isto se d em funo da baixa solubilidade em
gua e da elevada K
o/w
dos HPA e pelos fosfolipdeos presentes na membrana. A interao
entre a membrana externa e a molcula do HPA ocorre pela alta afinidade desse composto
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
53
com os fosfolipdeos, mesmo quando as clulas esto mortas. A velocidade de difuso lenta,
dada a natureza polar na membrana e do HPA. Entretanto, a passagem do composto atravs da
membrana no mediada pelo gradiente de concentrao formado, sendo desta forma
dependente da presena de metablitos intermedirios e/ou finais no interior da clula, uma
vez que o processo de metabolismo do HPA inicia assim que soluto difundido para o meio
intracelular (ICHIKAWA et al. 2010, BATEMAN et al. 1986).
A maioria dos estudos sobre difuso simples dos HPA foi realizada utilizando
compostos de baixa massa molecular. A partir de modelos matemticos gerados em um
estudo do efeito da ligao do fenantreno e fluoreno uma matriz orgnica, concluiu-se que
HPA com mais de 24 tomos, isto , com 4 ou mais anis, podem ser transportados na
membrana a partir de transporte facilitado e para tal, necessrio alta afinidade com a
permease (SABBAH; REBHUN e GERSTL, 2004).
Alguns autores sugerem a possibilidade de molculas de HPA muito grandes serem
transportadas atravs da membrana por transporte ativo, porm este tipo de fenmeno ainda
no foi confirmado. Sabe-se que o gasto de energia pela clula ocorre durante o efluxo dos
HPA, nas condies da molcula ser txica ao micro-organismo ou quando no h
possibilidade de armazen-lo em vesculas. O consumo de ATP durante a passagem do HPA
para o meio externo explicado pela natureza hidrofbica da molcula e quanto maior for sua
K
w/o
, maior ser a demanda de energia (CHAUHAN et al. 2008, BUGG et al. 2000).
No caso dos fungos filamentosos, apesar da participao de enzimas extracelulares no
processo de degradao dos HPA, estes compostos tambm podem ser metabolizadas no meio
intracelular. Independentemente da massa molecular, aps a passagem pela membrana, os
HPA so armazenados em vesculas lipdicas, localizadas nas hifas, as quais constituam
possivelmente o local inicial para oxidao desses compostos (VERDIN et al. 2005).
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
54
A degradao intracelular na maioria das vezes iniciada pela fisso do anel atravs
da incorporao do oxignio molecular nos ncleos aromticos. Nas condies de
anaerobiose, aceptores de eltrons alternativos, tais como NO
3
-
, Fe
+2
e SO
4
-2
so utilizados,
porm, a aerobiose a principal via de degradao dos HPA (YUSTE et al. 2000).
Como apresentado na Figura 3.6, acredita-se que as vias metablicas utilizadas para
degradao aerbica quer sejam os HPA de baixa massa molecular, por exemplo, naftaleno,
quer sejam os HPA de alta massa molecular, como o pireno, seguem o mesmo padro, isto ,
a produo de catecol com posterior formao de intermedirios do ciclo do cido ctrico.


Figura 3.6 Vias propostas para o metabolismo dos HPA de baixa massa molecular,
naftaleno (A) e de alta massa molecular, pireno (B) por bactrias aerbias. Fontes: Mrozik,
Piotrowska-Seget e Labuzec (2003); Kanaly e Harayama (2000)

A B
catecol
catecol
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
55
O mecanismo de biodegradao dos HPA melhor compreendido diz respeito aos HPA
de baixa massa molecular iniciado pela ao de mono-oxigenases e dioxigenases levando
formao de intermedirios centrais que, convertidos por outras dioxigenases e mono-
oxigenases, formam o catecol. Por fim, a quebra do anel do catecol pode conduzir a sntese de
citrato, sucinato e fumarato, entre outros intermedirios do ciclo do cido ctrico. J na
biodegradao dos HPA de quatro ou mais anis, isto , HPA de alta massa molecular, as
bactrias necessitam utilizar o recurso do cometabolismo e para isto, so necessrios sistemas
enzimticos multicompetentes (ZHANG et al. 2006, SAMANTA; SINGH e JAIN, 2002,
KANALY e HARAYAMA, 2000).
Por conta das caractersticas morfolgicas dos fungos filamentosos, tais como, o
tamanho e os constituintes estruturais, por exemplo, as hifas, estes micro-organismos podem
alcanar regies mais amplas do solo, quando comparados s bactrias e por consequncia,
estabelecem maior contato mecnico e enzimtico. A inespecificidade das enzimas dos fungos
promove o primeiro ataque aos HPA e atravs desse sistema enzimtico inespecfico ocorre a
formao de metablitos menos txicos e mais solveis, podendo ser aproveitados por
diversos outros micro-organismos, incluindo outras espcies fngicas e bactrias (ROMERO
et al. 2010, LI et al. 2008, BOONCHAN; BRITZ e STANLEY, 2000).
Sabe-se que o sistema enzimtico dos fungos filamentosos envolve trs grupos
principais: lignina peroxidases, mangans peroxidases e lacases. Um dos grandes artifcios
metablicos dos fungos diz respeito liberao de altas concentraes de enzimas, na
tentativa de suprir as perdas por soro ou complexao no solo. No entanto, muitos fatores
ainda conferem obstculos, tais como, a formao de perxidos e a biodisponibilidade
limitada das molculas, entre outros (DANIBALLE et al. 2006, NOVOTN et al. 2004,
CANET et al. 2001).

Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
56
3. 5 Glicerol: generalidades e uso como cossubstrato

O glicerol, glicerina ou 1,2,3-propanotriol (C
3
H
8
O
3
) um lcool, lquido,
higroscpico, incolor, inodoro, viscoso, de sabor doce, solvel em gua, insolvel em ter
que se caracteriza como uma das molculas mais abundantes na natureza, com inmeras
aplicaes na indstria, podendo ser transformado tanto por reaes biolgicas, quanto por
reaes qumicas. No entanto, apesar da abundncia, o glicerol somente encontrado na
forma combinada aos cidos graxos compondo os triglicerdeos, principais constituintes de
leos e gorduras (DE ARRUDA; RODRIGUES e FELIPE, 2007, SDA, 1990). As trs
hidroxilas, grupamentos hidroflicos que compem a molcula do glicerol so responsveis
pela alta solubilidade na gua e pela natureza higroscpica do composto. A sua baixa massa
molecular confere um elevado coeficiente de permeabilidade membrana, implicando no
acmulo intracelular do composto pelos micro-organismos. Alguns deles, como os fungos,
garantem o acmulo de glicerol intracelular atravs de transportadores localizados na
membrana, com grande afinidade molcula de glicerol (RAHMAT; ABDULLAH e
MOHAMED, 2010, DAVIS; BURLAK e MONEY, 2000).
A assimilao microbiana do composto pode ocorrer tanto via transporte passivo
como via transporte ativo. No primeiro caso, o glicerol penetra na clula por difuso simples
ou por difuso facilitada, mediada por protenas. O transporte ativo acontece atravs de
simporte glicerol/H
+
ou glicerol/Na
+
dependente de ATP (RIVALDI et al. 2009, LIN, 1976).
Um grande nmero de micro-organismos aerbios e anaerbios utiliza o glicerol, durante a
fase exponencial, para produo de biomassa ou sntese de diversos compostos, tais como,
cidos orgnicos, gliceraldedos, cetonas, alcois, enzimas intracelulares e extracelulares
(JOHNSON e TACONI, 2009, DECKWER, 1995), como apresentado na Figura 3.7.

Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
57

Figura 3.7 Principais rotas do metabolismo microbiano do glicerol (RIVALDI et al. 2009)

O glicerol possui um importante papel osmorregulador por desempenhar a funo de
soluto compatvel. Muitos micro-organismos podem acumular uma variedade de compostos,
entre ons e molculas orgnicas, em concentraes superiores ao meio externo, gerando uma
diferena de gradiente, o qual permite o fluxo de gua para o interior da clula, mantendo suas
funes vitais.
O glicerol em concentraes menores que 1 mol/L mantm a mesma presso osmtica
dos poliis de alta massa molecular, conferindo uma vantagem, do ponto de vista dos custos.
Alm do papel como osmlito, o glicerol acumulado realiza as funes de reserva de carbono
e energia, bem como de agente de proteo das enzimas e estruturas intracelulares contra os
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
58
efeitos das mudanas no meio externo, isto , proteo contra a dessecao e extremos de
salinidade e temperatura (DERRICO; CICCARELLI e ORTONA, 2005, WELSH, 2000).
Outra importante vantagem metablica do glicerol diz respeito ao fenmeno de
tolerncia dos micro-organismos a compostos txicos presentes no meio. Em um estudo de
degradao de fenol utilizando 0,1% (m/v) de glicerol como cossubstrato, foi observado um
melhoramento no mecanismo de tolerncia microbiana ao fenol, discutido pelos autores como
um fenmeno de antagonismo toxicidade, ilustrado pelo aumento significativo da
populao microbiana e degradao completa do fenol (CHEN; CHEN e CHANG, 2007).
Quando o foco da investigao a biodegradao de hidrocarbonetos, a propriedade
emulsificante do glicerol tambm pode ser explorada. Mais importante que a propriedade
emulsificante, o composto pode servir de substrato para sntese de biossurfatantes, durante a
fase estacionria de crescimento, mesmo quando o glicerol est presente em concentraes
abaixo de 0,1 mol/L (PARTHASARATHI e SIVAKUMAAR, 2009, TURKOVSKAYA;
DMITRIEVA e MURATOVA, 2001).
de extrema importncia o uso do glicerol como fonte de carbono solvel, dadas as
diversas aplicaes que o composto possui, incluindo o potencial para fins biotecnolgicos,
considerando que ao longo dos anos, o produto se tornou uma fonte abundante e de baixo
custo, para o desenvolvimento de novas tecnologias (GALAN et al. 2009). A indstria blica
promoveu o primeiro grande aumento na demanda mundial de glicerol, em meados do sculo
XIX, com a inveno da dinamite. A segunda elevao na demanda mundial ocorreu mais
recentemente, tornando mais nobres as aplicaes prticas do produto, atravs do aumento da
produo de biodiesel, em um cenrio, cuja busca por combustveis alternativos foi motivada,
principalmente, em funo da poltica de preos e das projees sobre as reservas de petrleo
no mundo (MORITA et al. 2007, LEUNG; KOO e GUO, 2006, PINTO et al. 2005). O
biodiesel obtido na maioria das vezes pelo processo de transesterificao, caracterizado pela
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
59
reao entre os cidos graxos presentes nos leos e gorduras, com um lcool de cadeia curta,
metanol ou etanol, em presena de um catalisador alcalino, cido ou enzimtico. A reao de
transesterificao resulta em uma mistura heterognea composta de duas fases, uma de cidos
graxos metilados, isto , o biodiesel propriamente dito e a outra correspondendo ao glicerol
bruto (BOURNAY et al. 2005, OOI et al. 2004).
Desta forma, o glicerol bruto o maior coproduto da indstria do biodiesel. O
composto caracterizado como um lquido de colorao marrom escura, de composio
varivel, dependente de diversos fatores, principalmente das condies empregadas na reao
de transesterificao. Para cada litro de biodiesel so produzidos 100 mL de glicerol bruto,
contendo um teor de glicerol na faixa entre 85 e 98%. As impurezas mais significativas so a
gua, lcool, resduos do catalisador, glicerdeos e sabes, que variam de acordo com a
refinaria e o material utilizado na preparao do biodiesel. O custo do processo de purificao
do glicerol bruto bastante dispendioso e neste contexto, encorajou diversos estudos por
alternativas biotecnolgicas de aproveitamento deste resduo, apresentando resultados muito
semelhantes aos obtidos quando glicerol PA foi utilizado como substrato (CAVALHEIRO et
al. 2009, LIMA, 2009, EASTERLING et al. 2009, WOLFSON et al. 2009,
PAPANIKOLAOU et al. 2008).
O glicerol bruto pode ser utilizado como fonte primria ou secundria de carbono em
diversos bioprocessos enfatizando-se a produo de biossurfatantes e a biorremediao. Como
o composto proveniente da indstria do biodiesel, comercialmente o valor de mercado
muito lucrativo, em comparao ao valor de outros substratos, em mdia US$ 0,08 por mL,
gerando um crdito de US$ 115 milhes, por tonelada, em um ano (ATHALYE; GARCIA e
WEN, 2009, BODK et al. 2009, JOHNSON e TACONI, 2007).


Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
60
3. 6 Ensaios de fitoxicidade

A germinao das sementes um mecanismo complexo, no qual se inicia com o
intumescimento da semente e termina com a emergncia da raiz primria e do cotildone. Este
processo pode ser influenciado por diversos fatores, como por exemplo, a umidade, o pH e a
salinidade do meio (HAMDI et al. 2007, DOS SANTOS e CARDOSO, 2001). O tegumento
que envolve a semente, alm de servir de filtro de luz, participa dos estgios iniciais da
germinao por estabelecer uma barreira de permeabilidade e interferir nos processos de
difuso de gua e troca gasosa, os quais exercem efeitos de constrio ou expanso mecnica
no embrio. Na maioria das espcies, o rompimento do tegumento ocorre atravs de processos
enzimticos e dessa forma, regulam o tempo de emergncia da radcula (DOS SANTOS e
CARDOSO, 2001).
Entende-se por fitotoxicidade, a intoxicao de plantas por substncias presentes no
meio, as quais podem ser absorvidas e acumularem nos tecidos vegetais (ARAJO e
MONTEIRO, 2005). A determinao da fitotoxicidade compreende um dos critrios mais
utilizados para avaliao da biodisponibilidade de compostos txicos, a exemplo dos HPA,
empregando para isso, metodologias simples, rpidas e confiveis (REYNOSO-CUERVAS et
al. 2008, WANG et al. 2002).
Na literatura, a maioria dos estudos relacionados fitotoxicidade discutiu os efeitos
txicos de pesticidas e de alguns metais, porm o nmero de publicaes abordando o efeito
dos compostos derivados do leo vem sendo crescente (ANASTASI et al. 2009, HAMDI et
al. 2007, SVERDRUP et al. 2003). A fitotoxicidade dos HPA tem sido descrita como um
importante efeito adverso para o metabolismo das plantas, em concentraes, que na maioria
dos estudos variam na faixa de 10 a 1000 mg/kg (DEBIANE et al. 2008, BAECK et al. 2004).
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
61
Em contrapartida, as concentraes superiores a 1000 mg/kg de leo j foram reportadas
como estimulantes do crescimento de plantas (REYNOSO-CUERVAS et al. 2008).
A OECD, sigla inglesa para Organizao de Cooperao e Desenvolvimento
Econmico, rgo com sede na Frana e ligado Organizao de Alimentos e Agricultura das
Naes Unidas (FAO), em seu manual publicado em 1984, ainda em uso, sugere que os testes
de fitotoxicidade sejam realizados pelo menos com trs espcies vegetais, no entanto podem
ser reduzidos para uma dicotilednea e uma monocotilednea. Os testes buscam identificar os
parmetros mais sensveis, sendo a germinao da semente e a elongao da raiz, um dos mais
utilizados (OECD, 1984).
Outra caracterstica importante diz respeito ao efeito que o tipo e o tamanho da
semente exercem sob a resposta do teste, isto , as sementes com dois cotildones, pequenas e
escuras so mais sensveis que as sementes maiores, com um cotildone e claras (TIQUIA;
TAM e HODGKISS, 1996). Alm disso, considerando que as sementes escuras absorvem
mais energia que as sementes claras, a presena de luz para sua germinao requerida,
enquanto que nas sementes claras, a germino pode ocorrer em condies de presena ou
ausncia de energia luminosa. Logo, as caractersticas das sementes escolhidas devem ser
bem conhecidas, principalmente no que diz respeito ao seu tempo de germinao e
fotoblastismo (CORDAZZO e ARACAMA, 1998).
A maioria dos ensaios in vitro preferencialmente conduzida por 5 dias e em ausncia
de luz, sendo assim, o resultado expressa a fitoxicidade do contaminante e no do produto das
reaes foto-oxidativas que podem ocorrer durante o experimento (WIECZOREK e
WIECZOREK, 2007). As principais vantagens do mtodo dizem respeito ao fato das plantas
crescerem independentemente da sazonalidade e da facilidade na manipulao. Alm disso,
podem revelar potenciais candidatos para aplicao na fitorremediao (REYNOSO-
CUERVAS et al. 2008).
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
62
Solo contaminado
Peneiramento Mistura Aduo Transporte
Forno Queima dos gases Descarte dos gases
Solo tratado
Sol os
Si stema de preparao e aduo de solos contami nados
Sistema de dessoro
Gases
Sistema de Tratamento de Gases
S
i
s
t
e
m
a
S
u
p
e
r
v
i
s

r
i
o

d
e
d
e
C
o
n
t
r
o
l
e
Solo contaminado
Peneiramento Mistura Aduo Transporte
Forno Queima dos gases Descarte dos gases
Solo tratado
Sol os
Si stema de preparao e aduo de solos contami nados
Sistema de dessoro
Gases
Sistema de Tratamento de Gases
S
i
s
t
e
m
a
S
u
p
e
r
v
i
s

r
i
o

d
e
d
e
C
o
n
t
r
o
l
e
CAPTULO 4
MATERIAIS E MTODOS

4. 1 A Unidade de Dessoro Trmica (UDT)

A Unidade de Dessoro Trmica (UDT) era mvel e composta por um conjunto de
equipamentos de grande porte, acoplados de forma a montar um sistema para a remoo de
compostos orgnicos do solo, por ao de energia trmica, atravs da volatilizao dos
contaminantes e a posterior oxidao em cmara de combusto secundria. A unidade
industrial era automatizada e composta por quatro sistemas: preparao e aduo de solos
contaminados; dessoro dos compostos orgnicos; tratamento dos gases dessorvidos e por
fim, do sistema supervisrio, para o controle e o intertravamento da planta. O diagrama de
operao da UDT est apresentado na Figura 4.1.



Figura 4.1 Diagrama de operao da Unidade de Dessoro Trmica

Lavagem
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
63
Considerando o fluxo do resduo na planta, o primeiro sistema era usado para a
preparao e aduo de solos contaminados. Esse conjunto de facilidades era constitudo por
um ptio de mistura, peneira rotatria, moega e correia transportadora dos solos. A correia
transportadora representava o elo com o segundo sistema, de dessoro trmica. Este sistema
consistia de um forno rotativo, construdo em ao carbono e revestido por materiais
refratrios. O forno estava equipado com dispositivos para proporcionar e controlar a
velocidade de rotao e a inclinao do equipamento. O forno tambm contava com
queimadores que operavam em um conjunto nico, funcionando base de gs liquefeito de
petrleo (GLP). A inclinao do forno e a velocidade de rotao permitiam o controle do
tempo de residncia dos solos no interior do equipamento, cuja passagem ocorreu por ao da
fora da gravidade, sendo posteriormente descartados no ptio de armazenamento temporrio
de solos. O material tratado era ento resfriado e transferido para a rea de quarentena at
liberao pelo controle de qualidade, aps semanas. Uma vez comprovada a reduo dos
contaminantes para os limites pr-estabelecidos, o solo era considerado tratado, sendo
posteriormente transferido para o local de destinao final, denominado por reaterro.
O gradiente de temperatura, 300 a 350C, no forno, proporcionou a dessoro de
certos compostos orgnicos do solo para a mistura gasosa contida no interior do equipamento.
Essa mistura de gases, por sua vez, era encaminhada para o terceiro sistema da planta, no qual
se realizava o tratamento de gases. O sistema de tratamento de gases era constitudo por uma
tubulao, uma cmara de ps-combusto (CPC), tambm denominada de cmara de
combusto secundria, um equipamento para resfriamento e lavagem dos gases, e uma
chamin. Na cmara de combusto secundria, os gases foram oxidados por ao do calor
obtido na queima de GLP em queimadores dispostos ao longo do equipamento.
No quarto e ltimo sistema, denominado supervisrio, eram atribudas atividades de
superviso, controle e intertravamento da UDT. Os parmetros de controle e monitoramento
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
64
desse sistema compreendiam: a temperatura no forno e na cmara de combusto, a velocidade
de alimentao de solos, a velocidade de rotao e o ngulo de inclinao do forno, bem como
a ausncia e presena de chama e os parmetros de controle de emisso de efluentes gasosos
na chamin. Caso alguma das variveis controladas apresentasse anomalias operacionais, o
sistema supervisrio de intertravamento da UDT podia ser acionado de forma automatizada,
impedindo a entrada de material no forno.
A Figura 4.2 apresenta uma vista parcial da UDT, destacando o forno rotatrio.


Figura 4.2 Unidade de Dessoro Trmica

Dadas as caractersticas dos contaminantes presentes no solo, a UDT operou com uma
faixa de temperatura no forno que permite classific-la como um equipamento de baixa
temperatura, LTTD, sigla inglesa para Dessoro Trmica Baixa Temperatura (GEORGE et
al. 1995). As especificaes do equipamento esto apresentadas na Tabela 4.1.

Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
65
Tabela 4.1 - Especificaes tcnicas do forno do sistema de dessoro
Porte Industrial
Capacidade de tratamento 25 ton/h
Chama Direta
Voltagem 480 V
Alimentao da chama GLP
Volume dirio tratado 200 m
3
/dia
Frequncia 18 Hz
Temperatura de trabalho do forno 300-350C
Temperatura mxima atingida no forno
Temperatura da Cmara de Ps-Combusto
800C
1200C
Tempo de residncia 12 min
GLP gs liquefeito de petrleo

4. 2 Amostragens e coleta

Foram realizadas amostragens do solo contaminado com resduo oleoso de fundo de
coluna da cmara de destilao a vcuo e do solo submetido ao tratamento por dessoro
trmica, coletadas antes da admisso na UDT e na rea de quarentena, respectivamente
(Figura 4.3). Ademais, objetivando caracterizar o resduo oleoso, foram tomadas amostras do
contaminante, disperso em espaos ao longo da face exposta do solo, em funo da escavao.
O procedimento de coleta das amostras do solo contaminado e do solo tratado na UDT
foi conduzido sob duas formas, em conformidade aos ensaios de caracterizao fsico-qumica
e microbiolgica, aos quais foram submetidos. Para as amostras utilizadas na caracterizao
fsico-qumica, foi realizada a coleta de cerca de 200 g de solo a uma profundidade de 15 a 20
cm a partir do nvel do terreno, com o auxlio de uma esptula. As amostras foram
acondicionadas em frascos de vidro, com capacidade para 200 mL, dotados de bocas
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
66
rosqueadas e tampas de teflon. Os frascos vedados foram identificados e transportados sob
refrigerao 4C at o laboratrio para a realizao das anlises.


Figura 4.3 Aspecto do solo contaminado com resduo de vcuo (A) e tratado por dessoro
trmica (B), retido na rea de quarentena

Para as amostras utilizadas na caracterizao microbiolgica foram coletados cerca de
50 g de solo a uma profundidade de aproximadamente 10 a 15 cm com relao ao nvel do
terreno, utilizando coletores universais descartveis para amostras biolgicas, confeccionados
em poliestileno, com capacidade de 80 mL, dotados de esptula de poliestileno e esterilizados
com xido de etileno (Discret, Rio de Janeiro, Brasil). Os frascos vedados foram identificados
e transportados sob refrigerao 4C at o laboratrio para a realizao das anlises.
Para as amostras utilizadas na caracterizao fsico-qumica do resduo oleoso de
fundo de coluna da cmara de destilao a vcuo, contaminante do solo, foram coletados
cerca de 200 g do resduo a uma profundidade de 10 cm a partir da superfcie da cava, com o
auxlio de uma esptula. As amostras foram posteriormente acondicionadas em frascos de
vidro, com capacidade para 200 mL, dotados de bocas rosqueadas e tampas de teflon. Os
frascos vedados foram identificados e transportados at o laboratrio sob refrigerao 4C.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
67
Finalmente, para a conduo dos ensaios de biorremediao, cerca de 80 kg de solo
tratado na UDT foram coletados com auxlio de ps apenas da rea de quarentena. O solo foi
acondicionado em saco plstico, o qual foi vedado e transportado em uma caixa de madeira
at o laboratrio.

4. 3 Isolamento e identificao de micro-organismos presentes no solo

Para o isolamento dos micro-organismos foi empregada a tcnica de plaqueamento
Pour Plate descrita por Genhartdt et al. (1994). A metodologia est apresentada
esquematicamente na Figura 4.4.

Figura 4.4 - Mtodo de isolamento microbiano do solo (adaptado de BECKER, 1999)

Foram isolados Bactrias Heterotrficas Aerbias (BHA) e Fungos Filamentosos (FF)
do solo contaminado com o resduo oleoso de fundo de coluna da cmara de destilao a
vcuo e do solo tratado na UDT. Para tal, uma amostra de 10 g do solo foi assepticamente
transferida para um frasco de capacidade de 500 mL contendo 90 mL de soluo tampo
Diluies seriadas em sol. salina
Amostra do solo em
tampo fosfato
(pH = 7,0)
1mL em meio definido
Determinao das UFC/g
de solo seco
Separao de colnias por esgotamento
Escolha arbitrria dos isolados

Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
68
fosfato estril (pH 7,0), sendo homogeneizada sob agitao de 150 rpm (Tecnal TE920),
durante 15 minutos.
A seguir, diluies decimais seriadas foram realizadas utilizando soluo salina estril
(NaCl 0,85%) e alquotas de 1 mL foram transferidas para placas de Petri previamente
esterilizadas, nas quais foram vertidos 10 mL de Agar Nutriente (Merk, Darmstadt,
Alemanha), adicionado de 50 mg/L de nistatina suspenso 10.000 UI/mL (Sigma, St. Louis,
EUA) para o isolamento de BHA. Para o isolamento de FF utilizou-se Agar Sabouraud com
2% de glicose (Vetec, Rio de Janeiro, Brasil), adicionado de 50 mg/L de ampicilina tri-
hidratada 96,0-100,5% de pureza (Sigma, St. Louis, EUA). Aps o perodo de incubao em
estufa 281C (Nova tica, 411D), 48 h para BHA e 72 h para FF, todas as placas foram
observadas, sendo escolhidas as colnias predominantes desenvolvidas na superfcie do agar,
as quais foram isoladas atravs da tcnica do esgotamento em placa (HALDEMAN e AMY,
1993). Posteriormente, cada isolado foi mantido em tubos contendo meios inclinados, Agar
Nutriente ou Agar Sabouraud com 2% de glicose, sob refrigerao 5C (Cnsul 310). Nesta
fase, todas as linhagens receberam a identificao preliminar CW, seguida de um algarismo
arbico.

4. 3. 1 Identificao das bactrias

A identificao biomolecular dos isolados bacterianos foi gentilmente realizada de
acordo com o protocolo seguido pelo Laboratrio de Biocorroso e Biodegradao (LABIO),
do Instituto Nacional de Tecnologia (INT). O DNA dos cultivos foi extrado com auxlio do
kit UltraClean Microbial DNA (MOBio, Carlsbad, EUA) com posterior visualizao por
eletroforese em gel de agarose 1%, utilizando SYBR Safe como marcador. A amplificao do
gene do RNA ribossomal 16S (1500 pb) foi efetuada atravs de PCR, utilizando primers
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
69
universais: SAdir (5-AGAGTTTGATCATGGCTCAGA-3) e S17rev (5-
GTTACCTTGTTACGACTT-3).
As reaes de amplificao foram realizadas em termociclador (GeneAmp PCR
System 9700, Applied Biosystems) nas seguintes condies: ciclo inicial de desnaturao
94C por 5 minutos, 30 ciclos intermedirios de desnaturao 94C por 30 segundos,
anelamento 55C por 30 segundos, extenso 72C por 30 segundos e ciclo de extenso
final 72C por 5 minutos. Os produtos de PCR foram visualizados atravs de eletroforese
em gel de agarose 1%, marcado com SYBR Safe e posteriormente purificados com auxlio do
kit UltraClean PCR Clean-up (MOBio, Carlsbad, EUA). A pureza dos produtos de PCR foi
determinada por densidade tica em espectrofotmetro (ND-1000 UV-Vis, Thermo
Scientific). A seguir, as amostras foram enviadas para o Setor de Sequenciamento de DNA do
Centro de Estudos do Genoma Humano da Universidade de So Paulo (USP).
Utilizou-se um sequenciador composto por 48 capilares de 36 cm (ABI 3730 DNA
Analyser, Applied Biosystems), os quais separaram os fragmentos de DNA utilizando o
polmero POP-7. Ao final das corridas, um nmero entre 600 e 700 pb foi analisado pelo
software Sequencing Analysis

, verso 5.3.1, integrado ao programa KB Basecaller.


Os resultados do sequenciamento foram verificados com a ajuda do programa
Chromas Lite

, verso 2.01. As sequncias de DNA obtidas foram comparadas s depositadas


no banco de dados do GenBank (www.ncbi.nlm.nih.gov). A anlise de similaridades foi
conduzida utilizando o programa BLASTn (Basic Alignment Search Tool).

4. 3. 2 Identificao dos fungos filamentosos

A identificao dos isolados fngicos foi gentilmente realizada de acordo com o
protocolo seguido pela Micoteca URM, do Departamento de Micologia, da Universidade
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
70
Federal de Pernambuco (UFPE). A identificao fundamenta-se na observao da morfologia
da colnia e nos aspectos microscpicos, a partir de uma colnia inoculada no ponto central,
em Agar Czapeck (Merk, Darmstadt, Alemanha) ou BDA, Agar Dextrose Batata (Difco,
Franklin Lakes, EUA), distribudo em placa de Petri. A velocidade de crescimento da colnia
pode variar de menos de 7 a mais de 15 dias, sendo fundamental para identificao presuntiva
do fungo. Durante a anlise macroscpica da colnia, foram observadas as caractersticas de
cor, textura, superfcie e pigmento difusvel no meio de cultura, entre outros.
A anlise microscpica foi conduzida atravs da tcnica do microcultivo, na qual foi
preservado o arranjo original dos esporos sobre as hifas, bem como certas estruturas
formadoras de esporos. O microcultivo dos fungos filamentosos foi realizado sob condies
asspticas, em placas de Petri. Os micro-organismos foram semeados a partir de repique
recente, nos quatro lados de um cubo de agar apropriado (Czapeck ou BDA), sendo disposto
na placa sobre uma lmina apoiada em um suporte. O cubo de agar foi recoberto com uma
lamnula e para evitar dessecao, foi adicionado placa um pequeno chumao de algodo
estril embebido por 1 a 2 ml de gua destilada estril. A incubao se deu temperatura
ambiente por 7 a 10 dias, at que fosse observado o desenvolvimento de hifas, com ou sem
pigmentao.
Aps este perodo, a esporulao foi inibida com formol por 24 a 48h e a seguir, a
lamnula foi cuidadosamente removida com auxlio de uma pina, sendo o cubo de agar
desprezado. Adicionou-se uma gota de azul de lactofenol-algodo por sobre a lamnula e na
lmina que serviu de suporte para o cubo de agar. Os tipos de hifas e a formao e disposio
dos esporos foram observados em microscpio tico, com objetiva de 40X. A identificao
das espcies foi conduzida utilizando bibliografia especializada de textos, manuais e atlas.


Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
71
4. 4 Adaptao dos isolados em leo

O procedimento para a aclimatao dos isolados em leo foi conduzido como descrito
por Palittapongarnpim et al. (1998). Uma alquota de 1 mL da suspenso em soluo
fisiolgica estril, NaCl 0,85%, das clulas jovens, de cada um dos micro-organismos
isolados do solo foi transferida para frasco de capacidade de 500 mL contendo 100 mL de
Caldo Bushnell-Haas (BUSHNELL e HAAS, 1941) e 1% de leo rabe leve, como nica
fonte de carbono. O intuito da aclimatao nesse leo se deu por conta do seu elevado teor de
compostos aromticos e polares.
O leo utilizado na aclimatao dos isolados foi obtido do tanque n 441.005 do navio
Doecannyon. Apresentando uma densidade relativa de 0,856 (20/40 C), o produto era
composto por 46,5% de hidrocarbonetos saturados, 32,2% de compostos aromticos e 21,3%
de compostos polares, relacionados principalmente s resinas e asfaltenos (DELARCO e DE
FRANA, 2001).
Os frascos contendo cada um dos micro-organismos isolados foram incubados sob
agitao de 150 rpm durante 7 dias 28 1C (Tecnal TE920). O processo de aclimatao
prosseguiu, em concentraes crescentes de leo at perfazer 10%, utilizando 1 mL de
inculo de um frasco para outro. Durante o processo, observaes microscpicas foram
realizadas para o acompanhamento dos cultivos e para verificao de possveis contaminaes
das culturas. As linhagens adaptadas foram mantidas sob refrigerao 5C.





Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
72
4. 5 Experimentos de biodegradao

4. 5. 1 Planejamento experimental

Foi utilizado um planejamento fatorial 2
3
completo, representando oito combinaes
possveis, com trs variveis, em dois nveis. Todos os clculos estatsticos envolvidos nesta
etapa da pesquisa foram realizados utilizando o pacote computacional Statistica
TM99
for
Windows

, verso 7.0.
Os experimentos de biodegradao foram conduzidos por um perodo de 60 dias em
reatores de polietileno (Plasmont 408, Pedreira, Brasil), com capacidade para 4 L e dimenses
de 0,22 m de largura, 0,22 m de comprimento e 0,09 m de profundidade, os quais receberam 2
kg de solo tratado por dessoro trmica, pesados em balana semianaltica (Gehaka
BG2000).
Foram estudados os efeitos de trs variveis sobre a biodegradao dos HPA, a saber:
suplementao com fertilizante comercial, adio de cossubstrato e bioaumento. Para
suplementar os solos com fertilizante foram utilizados 100 mg/kg de fertilizante comercial
N:P:K 10:10:10 (Vitaplan, Capito Lenidas Marques , Brasil). Este valor foi escolhido a
partir dos resultados da caracterizao do solo tratado na UDT.
O glicerol (Vetec, Rio de Janeiro, Brasil) foi utilizado como cossubstrato e para tal,
empregou-se o volume de 0,5 mL/kg, equivalente a 0,63 mg/kg do composto (MOORTHI;
DEECARAMAN e KALACHELVAN, 2008). A razo C:N:P obtida foi de 25:1:1.
A varivel bioaumento foi representada pela adio de um consrcio microbiano
misto, cujo critrio adotado de seleo e de preparao visou garantir a qualidade e
reprodutibilidade dos ensaios, isto , ser composto por bactrias e fungos autctones e ter uma
elevada concentrao celular. A cultura mista foi preparada sob a forma de suspenso a partir
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
73
de um pr-inculo e era composta por oito espcies de micro-organismos, sendo quatro
bactrias, Bacillus cereus (Frankland e Frankland 1887) CW-4, Gordonia amicalis (Kim et al.
2000) CW-7, Pantoea agglomerans (Beijerinck 1888) CW-18 e Serratia marsescens (Bizio
1823) CW-20 e quatro fungos filamentosos, Aspergillus fumigatus (Fresenius 1863) CW-10;
Aspergillus terreus (Thom 1918) CW-11; Aspergillus carneus (Blochwitz 1933) CW-12 e
Syncephalastrum racemosum (Cohn 1886) CW-14. O volume da suspenso contendo a
cultura mista foi de 100 mL, correspondendo a 5% (v/v) do volume do reator
(PALITTAPONGARNPIM et al. 1998).
O pr-inculo foi confeccionado a partir dos cultivos puros das bactrias e dos fungos,
mantidos em estoque. Para tanto, alquotas de 10 mL dessas suspenses de estoque foram
transferidas para dois frascos cnicos com capacidade para 500 mL contendo 90 mL de Meio
Bushnell-Haas, adicionado da fonte de carbono, leo rabe leve. O primeiro frasco reuniu
todos os isolados bacterianos e o segundo frasco todos os isolados fngicos. A incubao foi
conduzida sob agitao de 150 rpm por 48 h 30C (Tecnal TE920).
Aps o perodo de incubao, cerca de 60 a 70 mL de cada frasco, contendo as clulas
desenvolvidas do pr-inculo, foram separados da fase oleosa, com o auxlio de um funil de
separao, sendo posteriormente tratados por centrifugao a 959 g por 15 minutos (Fanem
206MP). As clulas foram lavadas por trs vezes em soluo fisiolgica estril. O inculo foi
preparado atravs da ressuspenso dessas clulas, em Meio Bushnell-Haas estril, de modo a
se obter uma leitura de 0,5 de absorbncia a 540 nm (Hach, Odessey). Os valores do
comprimento de onda e da leitura da absorbncia e foram obtidos da literatura (GHAZALI et
al. 2004).
A Figura 4.5 apresenta o esquema da confeco do inculo adicionado ao solo. Em um
frasco contendo Meio Bushnell-Haas estril foram transferidas alquotas das novas
suspenses contendo as clulas fngicas e as clulas bacterianas, nesta ordem, de modo que
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
74
correspondessem a 5% e 1%, respectivamente, do volume final da suspenso contendo o
inculo (MISHRA et al. 2001). Tal suspenso, aps todas as diluies necessrias durante o
processo de sua confeco, continha 4,60,7x10
7
UFC/mL de clulas viveis de Bactrias
Heterotrficas Aerbias (BHA) e 2,00,1x10
6
UFC/mL de Fungos Filamentosos (FF),
responsveis pela obteno de uma concentrao celular de 5,00,4x10
8
UFC/mL e
4,20,1x10
6
UFC/mL de BHA e FF, respectivamente, aps a adio do inculo ao solo.

Figura 4.5 - Confeco do inculo

A razo do maior volume da suspenso dos fungos, cinco vezes o volume da
suspenso das bactrias, justificada por: 1- ser o grupo responsvel pela degradao inicial
dos HPA, dada a inespecificidade de suas enzimas; 2- porque mesmo adaptados ao leo, os
fungos podem estar inativos metabolicamente e 3- pelo tempo mais lento da fase exponencial
(DANIBALLE et al. 2006).
Cabe ressaltar que em funo das condies do cultivo do pr-inculo bem como da
confeco do inculo, um teste de atividade antagnica foi realizado para assegurar que
fenmenos de antibiose entre indivduos do mesmo grupo ou de grupos diferentes no
comprometessem a eficcia do consrcio misto. Foi empregada a tcnica dos blocos de gelose

5 mL 1 mL
94mL

Pr-inculo
Incubao 48h
30C - 150rpm

Centrifugao
Confeco da suspenso
Inculo
reator
Suspenso
dos fungos
Suspenso
das bactrias
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
75
descrita por Vasconcelos, Lima e Calazans (2010). Uma alquota de 10 L da suspenso de
cada micro-organismo teste (10
8
UFC/mL) foi inoculada na superfcie de discos de 7 mm de
dimetro e 2 mm altura de Agar Meller-Hinton (Merk, Darmstadt, Alemanha), sendo
posteriormente transferidas para placas de Petri estreis e incubadas por 24 h 301C.
Aps o perodo de incubao, foi confeccionada uma suspenso dos oito micro-
organismos teste (10
8
UFC/mL), espalhando-as por sobre a superfcie do agar Meller-
Hinton em placas de Petri estreis. Com a superfcie seca, os discos de gelose contendo as
culturas de 24 h foram transferidos para a placa e incubao por mais 24 h 301C. A
seguir, as placas foram verificadas quanto a formao de halos de inibio. O maior tamanho
desses halos, medido em milmetros, correspondia maior susceptibilidade microbiana.
A perda abitica foi determinada atravs de experimentos paralelos conduzidos sob as
mesmas condies e com adio de soluo 10% (m/v) de nitrato de prata (Vetec, Rio de
Janeiro, Brasil) empregada como biocida (VASUDEVAN e RAJARAM, 2001).
Durante a fase do planejamento experimental, a umidade do solo nos reatores foi
mantida entre 70 e 80% da capacidade de reteno de gua, o pH foi monitorado e a aerao
foi realizada a cada trs dias, atravs de revolvimento do solo com o auxlio de basto de
vidro (OLIVEIRA e DE FRANA, 2004).
A temperatura do local do experimento foi monitorada com termmetro de mercrio
com bulbo de vidro (Konus 6201) e a temperatura do solo com termmetro digital tipo espeto,
para uso em laboratrio (Equitherm TM879H). Dados oficiais de temperatura mdia e
umidade relativa do ar na cidade do Rio de Janeiro foram obtidos nos arquivos eletrnicos do
Instituto Nacional de Meteorologia, INMET.
Para cada determinao quantitativa foram retiradas trs subamostras em diferentes
pontos do reator. As subamostras foram homogeneizadas e quarteadas at comporem uma
nica amostra, a qual foi submetida s anlises. A concentrao dos HPA no solo foi
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
76
determinada nos tempos de processo 0, 30 e 60 dias. Para as anlises microbiolgicas foram
tomadas amostras, sob condies asspticas, nos tempos 0, 7, 15, 30 e 60 dias de bioprocesso.

4. 5. 2 Experimentos com aplicao dos dados obtidos no planejamento experimental

Foi verificado o efeito das seguintes concentraes de glicerol (Vetec, Rio de Janeiro,
Brasil) sob a degradao dos HPA residuais, 0,63; 0,32 e 0,16 mg/kg. Um reator controle, isto
, sem adio de glicerol, tambm foi confeccionado. As demais condies de operao
permaneceram iguais s adotadas na fase de seleo das variveis importantes. As
determinaes quantitativas de umidade, pH em gua, HPA foram executadas, como descritas
na seo 4.6 deste captulo. Os dados oficiais de temperatura mdia e umidade relativa do ar
na cidade do Rio de Janeiro foram obtidos nos arquivos eletrnicos do INMET. As
concentraes de Bactrias Heterotrficas Aerbias e Fungos Filamentosos foram
determinadas a partir de amostras coletadas nos tempos: 0, 7, 15, 30 e 60 dias. Para garantir o
suprimento de oxignio, o solo foi regularmente aerado atravs de revolvimento a cada 72h,
com auxlio de um basto de vidro.

4. 5. 3 Experimentos utilizando glicerol bruto

As trs condies do experimento anterior foram repetidas utilizando glicerol bruto
como cossubstrato. O composto foi gentilmente cedido pelo professor Luiz Guilherme da
Costa Marques, da Planta Piloto de Produo de Biodiesel, do Instituto Virtual Internacional
de Mudanas Globais, IVIG-COPPE/UFRJ. O glicerol bruto foi coproduzido durante o
processo de obteno do biodiesel de soja (Glycina max, L. Merril), por meio de reao de
transesterificao via rota etlica, utilizando hidrxido de potssio como catalisador. O
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
77
composto recebe tal denominao, dadas as impurezas acumuladas durante o processo de
produo do biodiesel. Amostras do glicerol bruto e do glicerol PA utilizado nos
experimentos aplicando os dados obtidos do planejamento experimental foram submetidos a
anlises de caracterizao, cujos teores dos principais constituintes esto apresentados na
Tabela 4.2. As determinaes quantitativas nos dois tipos de glicerol foram realizadas pelo
Laboratrio ASG do Brasil, no Rio de Janeiro e pelo Laboratrio de Espectrometria Atmica
da Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC), em Florianpolis.

Tabela 4.2 Caracterizao das amostras de glicerol bruto e glicerol PA
Resultados
Analitos Glicerol bruto Glicerol PA Metodologia
Densidade (g/L) 1,05 1,26 ASTM D4052
pH 9,9 5,9 ASTM E70-07
Teor de etanol [% (m/m)] 2,8 NR EN 14110
gua [% (m/m)] 9,3 NR EN 12937
Teor de KOH [% (m/m)] 2,0 NR BS 5711-5
Teor de glicerol [% (m/m)] 84,4 99,9 BS 5711-3
Diglicerdeos [% (m/m)] 1,0 NR EN 14105
Triglicerdeos [% (m/m)] < 0,5 NR EN 14105
Alumnio [% (m/m)] 0,0015 < 0,6 ASTM D5185-09
Clcio (g/g) < 0,2 < 0,2 ASTM D5185-09
Cromo (g/g) < 0,1 < 0,1 ASTM D5185-09
Cobre (g/g) 0,52 < 0,006 ASTM D5185-09
Ferro (g/g) 12,6 < 0,5 ASTM D5185-09
Magnsio (g/g) < 0,2 < 0,2 ASTM D5185-09
Mangans (g/g) 0,11 < 0,02 ASTM D5185-09
Sdio (mg/g) 0,94 < 0,004 ASTM D5185-09
Chumbo (g/g) 0,12 < 0,006 ASTM D5185-09
Zinco (g/g) 1,08 0,20 ASTM D5185-09
Potssio (mg/g) 50,7 < 0,2 ASTM D5185-09
NR no realizado
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
78
4. 6 Anlises quantitativas

4. 6. 1 Umidade em base seca

O ensaio foi baseado na metodologia 1.3 da EMPRAPA (1979). Amostras do solo
foram transferidas para becker de teflon com capacidade de 25 mL, de peso conhecido. Aps
a pesagem inicial, os sistemas foram levados para estufa (Tecnal TE-395) 105C por 24 h.
Passado o perodo, os sistemas foram resfriados em dessecador com slica gel ativa e o peso
seco do solo foi determinado. A umidade foi calculada como a diferena entre o peso mido e
o peso seco e expressado em percentual de acordo com a seguinte frmula:
100
|
.
|

\
|
=
mi
mf mi
U
Onde: U- umidade; mi- massa inicial da amostra, em gramas e mf- massa final da
amostra, em gramas, aps a secagem. O ensaio foi conduzido em triplicata e as pesagens
realizadas em balana analtica (TDS FA2104N).

4. 6. 2 Capacidade de Reteno de gua (CRA)

O ensaio foi conduzido como descrito por Watwood, White e Dahn (1991). Uma
massa conhecida de solo foi transferida e compactada em um funil de vidro coberto com papel
de filtro qualitativo (massa inicial seca). O funil de vidro foi ento transferido para um becker
de capacidade de 500 mL, ao qual foi adicionada gua destilada at pouco acima do nvel do
papel de filtro.
Posteriormente ao umedecimento da amostra, mais gua foi adicionada at o topo do
funil. Aps o perodo de repouso de 30 minutos, o funil de vidro foi retirado do becker e
esperou-se mais 30 minutos para o escoamento da gua. Em seguida, a amostra foi transferida
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
79
para becker de teflon com capacidade de 50 mL, previamente tarado (massa inicial mida).
Realizada a pesagem final, o sistema foi levado para estufa (Tecnal TE-395) 105C por 24h.
Aps o perodo, o sistema foi resfriado em dessecador contendo slica gel ativa e o
peso seco do solo foi determinado. A capacidade de reteno de gua foi calculada como a
diferena entre o peso mido e o peso seco sendo expressa em percentual de acordo com a
seguinte frmula:
100
3
2 1

|
.
|

\
|
=
m
m m
CRA
Onde: CRA- Capacidade de Reteno de gua; m1- massa inicial seca, em gramas;
m2- massa final, em gramas e m3- massa inicial mida, em gramas. O ensaio foi conduzido
em triplicata e as pesagens realizadas em balana analtica (TDS FA2104N).

4. 6. 3 pH em gua

O ensaio foi baseado na metodologia 2.1.1 da EMPRAPA (1979). Em um becker com
capacidade para 50 mL, foram adicionados 10 g de solo e 25 mL de gua. A mistura foi
homogeneizada durante 30 minutos com auxlio de agitador magntico revestido de teflon.
Aps o perodo de repouso para separao das fases, o decantado foi transferido para um
becker com capacidade de 25 mL e o pH foi determinado em potencimetro (Digimed DM-
20), previamente calibrado com solues tampo padronizadas de pH = 4,0 e pH = 7,0. O
ensaio foi conduzido em triplicata.

4. 6. 4 Textura do solo

O ensaio foi gentilmente realizado no Laboratrio de Geotecnia do Instituto Alberto
Luiz Coimbra de Ps-Graduao e Pesquisa em Engenharia (COPPE) da Universidade
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
80
Federal do Rio de Janeiro, segundo a metodologia de peneiramento e sedimentao (ABNT,
1984).

4. 6. 5 Teores de Carbono Orgnico Total, Nitrognio Total e Fsforo Total

Para a determinao de Carbono Orgnico Total foi utilizado o mtodo USEPA 9060,
fundamentado na oxidao da matria orgnica pelo dicromato de potssio, em meio cido. A
determinao do Nitrognio Total foi realizada por colorimetria de acordo com o mtodo
USEPA 315.2, Kjeldahl. O Fsforo Total foi quantificado por colorimetria e complexao
com cido ascrbico, de acordo com o mtodo USEPA 365.3. Os ensaios foram realizados no
Laboratrio Analytical Technology, em So Paulo.

4. 6. 6 Hidrocarbonetos Totais do Petrleo (TPH)

Para a determinao do TPH e suas faixas foi empregada a metodologia USEPA 8015,
que determina compostos orgnicos no halogenados atravs de cromatografia gasosa
acoplada a um detetor de ionizao de chama. Foi utilizado um cromatgrafo a gs (HP 5990)
e coluna DB-5 (30 m x 0,25 mm). Os extratos foram obtidos seguindo o mtodo USEPA
3540C (Soxhlet extraction) empregando o diclorometano seco com solvente. A pr-
concentrao das amostras foi realizada em atmosfera inerte, N
2
. A preparao dos extratos
(clean-up) anterior cromatografia seguiu o mtodo USEPA 3630C, com uso de cartuchos
descartveis de slica gel. Os valores de TPH consideraram os resultados das faixas de
gasolina, querosene, diesel e leo combustvel, assim como a frao no resolvida no
cromatograma, tambm denominada mistura complexa no resolvida. Os ensaios foram
realizados no Laboratrio Analytical Technology, em So Paulo.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
81
4. 6. 7 Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos (HPA)

Os dezesseis HPA prioritrios listados pela Agncia de Proteo Ambiental dos
Estados Unidos, naftaleno, acenafteno, acenaftileno, fluoreno, fenantreno, antraceno,
fluoranteno, pireno, benzo[a]antraceno, criseno, beno[b]fluoranteno, benzo[k]fluoranteno,
benzo[a]pireno, dibenzo[a,h]antraceno, benzo[g,h,i]perileno e indeno[1,2,3-c,d]pireno, foram
determinados por cromatografia gasosa acoplada espectrometria de massa, conforme o
mtodo USEPA 8270C. Foi utilizado um cromatgrafo a gs (HP 5880), coluna DB-5 (30 m
x 0,25 mm) e um espectrmetro de massa (EM 5987). Antes da injeo, os extratos foram
obtidos seguindo o mtodo USEPA 3540C (Soxhlet extraction) empregando o diclorometano
seco com solvente. A pr-concentrao das amostras foi realizada em atmosfera inerte, N
2
. A
preparao dos extratos (clean-up) anterior cromatografia seguiu o mtodo USEPA 3630C,
com uso de cartuchos descartveis de slica gel. Os ensaios foram realizados no Laboratrio
Analytical Technology, em So Paulo.

4. 6. 8 Dioxinas e Furanos

O ensaio foi gentilmente realizado pelo Laboratrio Ipex, no Rio de Janeiro. Foi
empregado o mtodo USEPA 1613, que determina a concentrao de sete dibenzo-p-dioxinas
Tetra a Octacloradas (PCDD) e dez dibenzofuranos Tetra a Octaclorados (PCDF), por
cromatografia gasosa de alta resoluo, acoplada espectrometria de massa de alta resoluo.
Os extratos foram obtidos seguindo o mtodo USEPA 8290A. Os resultados foram calculados
a partir de fatores de toxicidade equivalente (TEF) regulamentadas pela OTAN (Organizao
do Tratado do Atlntico Norte) e pela OMS (Organizao Mundial da Sade).

Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
82
4. 6. 9 Ensaios microbiolgicos das amostras

As quantificaes de Bactrias Heterotrficas Aerbias (BHA) e Fungos Filamentosos
(FF) nas amostras de solo contaminado pelo resduo de vcuo, tratado na UDT e do
tratamento microbiolgico sequencial foram realizadas empregando a tcnica de
plaqueamento Pour Plate, como descrita na seo 4.3 deste captulo. A metodologia adotada
para contagem das Unidades Formadoras de Colnia (UFC) e expresso dos resultados em
Unidades Formadoras de Colnia por grama de solo (UFC/g) baseou-se na Instruo
Normativa n 62 do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (BRASIL, 2003).

4. 6. 10 Ensaios de fitotoxicidade

Os ensaios de fitotoxicidade tiveram como objetivo verificar o impacto do
contaminante do solo, dos compostos residuais aps tratamento na UDT e dos metablitos
presentes aps o tratamento microbiolgico sequencial. Foram realizados testes de
germinao da semente e de alongamento da raiz para a determinao da Germinao
Relativa das Sementes, da Elongao Relativa da Raiz e do ndice de Germinao, como
descrito por Tiquia, Tam e Hodgkiss (1996). Foram utilizadas sementes claras (Ouro flora,
So Paulo, Brasil), adquiridas em estabelecimento comercial, seguindo o critrio de tamanho,
fotoblastismo e nmero do cotildone, conforme apresentado na Tabela 4.3.





Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
83
Tabela 4.3 Caractersticas das sementes do teste de fitotoxicidade
Planta (sinonmia)
Tamanho
(mm)
Fotoblastismo Cotildone TG (dias)
Allium porrum (alho-porr) 3,9 0,3 Negativo Um 3
Cucumis anguria (maxixe-do-norte) 6,0 0,4 Negativo Dois 3
Cucumis sativus (pepino-caipira) 9,9 0,6 Neutro Dois 2
Cucumis melo (melo-caipira) 12,5 0,5 Negativo Dois 2
TG tempo de germinao da semente no controle

Antes do ensaio de fitotoxicidade, as sementes sofreram trs lavagens sucessivas com
gua destilada, com o intuito de eliminar excessos de corantes e conservantes. Durante a
lavagem, as sementes com morfologia irregular foram prontamente separadas das sementes
ntegras. O processo de secagem foi realizado em papel de filtro, temperatura ambiente por
trs horas.
Os extratos do solo foram obtidos a partir de uma amostra de 10 g, transferida para um
frasco cnico com capacidade para 250 mL contendo 90 mL de gua destilada. Aps agitao
de 250 rpm por 10 minutos (Tecnal TE920), a suspenso foi filtrada. Em seguida, o volume
de 5 mL do filtrado foi transferido para placas de Petri com dimetro de 90 mm, embebendo-
se suavemente o papel filtro n 1 (Whatman, 90 mm de dimetro) disposto dentro da placa,
contendo dez sementes distribudas sobre a superfcie do papel. Para cada planta foram
confeccionadas trs placas. O controle foi realizado com gua destilada, substituindo o extrato
de solo. A incubao ocorreu 22 1C, em ausncia de luz, por 5 dias (Nova tica, 411D) e
aps este perodo, as sementes germinadas foram contadas e o tamanho das razes mensurados
com auxlio de um paqumetro.


Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
84
A Germinao Relativa das Sementes foi determinada de acordo com o seguinte
clculo:
100
2
1
|
.
|

\
|
=
S
S
GRS
Onde: GRS- Germinao Relativa das Sementes; S1- o nmero de sementes
germinadas no extrato de solo e S2- o nmero de sementes germinadas no controle.
A Elongao Relativa da Raiz foi determinada de acordo com o seguinte clculo:
100
2
1

|
.
|

\
|
=
R
R
ERR
Onde: ERR- Elongao Relativa da Raiz; R1- a mdia do comprimento da raiz no
extrato de solo, em milmetros e R2- a mdia do comprimento da raiz no controle, em
milmetros.
O ndice de Germinao foi determinado de acordo com o seguinte clculo:
|
.
|

\
|
=
% 100
ERR GRS
IG

Onde: I
G
- ndice de Germinao; GRS- Germinao Relativa das Sementes e ERR-
Elongao Relativa da Raiz.
Uma vez que o teste foi realizado em ausncia de luz, a excluso das sementes com
fotoblastismo positivo foi conduzida como descrito por Cordazzo e Aracama (1998). Para
cada planta foram preparadas duas placas de Petri como descrito anteriormente, contendo em
cada uma, dez sementes distribudas sobre o papel filtro n 1 (Whatman, 90 mm de dimetro),
embebido com 5 mL de gua destilada. As placas foram incubadas 22 1C por 5 dias
(Nova tica, 411D), em ausncia de luz e na presena de luz artificial. Aps o perodo, as
sementes germinadas foram contadas, aplicando-se o seguinte clculo:
|
|
.
|

\
|
=
c
e
S
S
FTB
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
85
Onde: FTB- fotoblastismo; S
e
- o nmero de sementes germinadas no escuro e S
c
- o
nmero de sementes germinadas no claro.
O fotoblastismo da semente foi classificado como positivo se FTB > 1, negativo se
FTB < 1 e neutro quando o valor de FTB = 1. Foram selecionadas apenas as plantas cujas
sementes apresentaram fotoblastismo negativo ou neutro.




















Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
86
CAPTULO 5
RESULTADOS E DISCUSSO

5. 1 Caractersticas do contaminante do solo

O resduo oleoso de fundo da coluna de destilao a vcuo, tambm denominado
resduo de vcuo, contaminou o solo utilizado no presente estudo, por um perodo superior a
55 anos.
O contaminante apresentou concentraes variadas de HPA e TPH, conforme a
Tabela 5.1.

Tabela 5.1 Teores de HPA e TPH do resduo oleoso de fundo
da coluna de destilao a vcuo
Analitos Concentrao (mg/kg) Valores orientadores*
Naftaleno 34,0 90,0
Acenaftileno 2,0 _____
Acenafteno 0,6 _____
Fluoreno 9,7 _____
Fenantreno 148,2 95,0
Antraceno 8,8 0,0
Fluoranteno 7,3 _____
Pireno 381,0 _____
Benzo[a]antraceno 54,6 65,0
Criseno 46,2 0,0
Benzo[b]fluoranteno 6,3 _____
Benzo[k]fluoranteno 5,9 0,0
Benzo[a]pireno 71,5 3,5
Indeno[1,2,3-cd]pireno 3,2 130,0
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
87
Dibenzo[a,h]antraceno 31,8 1,3
Benzo[g,h,i]perileno 93,9 0,0
TPH 4.274,0 _____
* Valores orientadores (mg/kg) para solos de reas industriais (BRASIL, 2009)
HPA Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos
TPH Hidrocarbonetos Totais do Petrleo


Verificaram-se no contaminante, elevados teores de HPA e TPH, na razo HPA:TPH
de 1:5. Estes teores elevados foram condizentes com a fonte de gerao, revelando o carter
persistente do resduo oleoso de fundo da coluna de destilao a vcuo.
Nos meados do sculo XX, as tecnologias existentes no Brasil empregavam para o
refino de petrleo, apenas a destilao em colunas presso atmosfrica e a destilao em
colunas a vcuo. Estas operaes eram executadas aps as etapas de dessalgao e de
remoo de gua. At os dias de hoje, o resduo de fundo da destilao atmosfrica
transferido e processado como carga do sistema de destilao a vcuo, sendo empregadas
presses entre 50 e 75 mmHg e temperaturas de aproximadamente 370C, as quais separam
as fraes de gasleo, resinas e leos lubrificantes pesados. Cerca dos 15 a 25% da carga
processada so convertidas em resduo da coluna de destilao a vcuo, o qual pode
apresentar uma elevada viscosidade.
Na dcada de 1950, o processamento dos resduos de fundo das colunas de destilao
a vcuo era economicamente invivel, pois demandava temperaturas ainda mais altas para o
refino e tecnologia de craqueamento, no disponvel poca, no Brasil. Por esta razo, tais
resduos eram descartados, por exemplo, em cavas nos solos ou em aterros nas reas
industriais, promovendo eventos de contaminao ambiental e demandando aes futuras
para o tratamento dos locais contaminados. Atualmente, vrias misturas de hidrocarbonetos
podem ser obtidas do resduo de fundo da coluna de destilao a vcuo, atravs de operaes
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
88
que incluem, por exemplo, o craqueamento trmico e o craqueamento fluido cataltico
(CUNHA, 2009, MURTA VALLE, 2007).
O histrico de contaminao antiga e os elevados valores de concentrao dos
hidrocarbonetos no solo incrementaram as dificuldades de tratamento biotecnolgico do
local. Como alternativa de interveno, o solo foi escavado e retirado do local da
contaminao, sendo em seguida, tratado por operao trmica, no caso, com uso de uma
Unidade de Dessoro Trmica (UDT), em escala industrial.

5. 2 Caractersticas do solo antes do tratamento por dessoro trmica

A Tabela 5.2 apresenta as caractersticas do solo contaminado amostrado no local
impactado. A composio granulomtrica revelou que o estudo foi conduzido em uma areia
silto-argilosa com capacidade de reteno de gua em torno de 30%, caractersticas de solos
tropicais.
Segundo Falciglia, Giustra e Vagliasindi (2011), mesmo nos casos de baixos teores de
partculas finas, o material pode apresentar propriedades adsorventes ativas, uma vez que
possuem elevadas reas superficiais e cargas parciais que favorecem o processo de soro dos
contaminantes e a formao de agregados. Dessa forma, o material fino do solo pode
influenciar significativamente sua vulnerabilidade a um evento de contaminao,
incrementando desta forma, a dificuldade de tratamento.
Vale ressaltar que o solo em questo era do tipo vertissolo, caracterizado pelo alto teor
de esmectina, grupo de minrios que incluem a montmorilonita. Tais minrios so formados
por partculas, cujo arranjo em folhas confere importantes propriedades ao vertissolo, por
exemplo, elevada superfcie especfica, densidade e capacidade de troca inica, de 800 m
2
/g,
113
2
/on e 100 me/100g, respectivamente (LAMBE e WHITEMAN, 1979).
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
89
Tabela 5.2 Caractersticas fsico-qumicas e microbiolgicas do solo
contaminado com resduo oleoso de fundo da coluna de destilao a vcuo
Ensaios Resultados
Textura (%)
Argila
Silte
Areia fina
Areia mdia
Areia grossa
Pedregulho

32
271
292
221
154
43
Carbono Orgnico Total (mg/kg) 75.5001.000
Nitrognio Total (mg/kg) 1.59110
Fsforo Total (mg/kg) 91410
16 HPA USEPA (mg/kg) 193,41,1
TPH (mg/kg) 58.0471.000
16 HPA:TPH 1:300
Densidade de slidos (kg/dm
3
) 2,580,01
pH (H
2
O) 5,70,1
Umidade (%) 12,70,1
Capacidade de Reteno da gua (%) 30,20,1
C:N:P 100:2:1
Bactrias Heterotrficas Aerbias (UFC/g) 351x10
4
Fungos Filamentosos (UFC/g) 501x10
1

HPA Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos
USEPA United States Environmental Protection Agency
TPH Hidrocarbonetos Totais do Petrleo
UFC/g - Unidades Formadoras de Colnia por grama de solo

O solo apresentou elevados teores de carbono orgnico, assim como nitrognio e
fsforo, permitindo o desenvolvimento de micro-organismos, embora determinados em
concentraes inferiores ao padro natural de solos, estimados entre 10
6
e 10
10
, possivelmente
em funo do alto teor de hidrocarbonetos presentes.
A Tabela 5.3 apresenta as concentraes de dezesseis HPA nas amostras de solo.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
90
Tabela 5.3 Concentrao dos Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos (HPA) no solo
contaminado com resduo oleoso de fundo da cmara de destilao a vcuo (p<0,05)
HPA (n de anis) Concentrao (mg/kg) Valores orientadores*
Naftaleno (2) <5,730,08 90,0
Acenafteno (3) <5,730,08 _____
Acenaftileno (3) <5,730,08 _____
Fluoreno (3) <5,730,08 _____
Fenantreno (3) 29,250,08 95,0
Antraceno (3) 7,770,07 0,0
Fluoranteno (4) 6,530,08 _____
Pireno (4) 83,000,44 _____
Benzo[a]antraceno (4) 7,240,07 65,0
Criseno (4) 9,370,07 0,0
Benzo[b]fluoranteno (5) 5,930,08 _____
Benzo[k]fluoranteno (5) 5,730,08 0,0
Benzo[a]pireno (5) 10,470,10 3,5
Dibenzo[a,h]antraceno (5) 5,830,08 1,3
Benzo[g,h,i]perileno (6) 14,930,13 0,0
Indeno[1,2,3-c,d]pireno (6) 7,090,08 130,0
Total 193,401,13 _____
* Valores orientadores (mg/kg) para solos de reas industriais (BRASIL, 2009)

No solo estudado, a soma das concentraes dos 10 HPA padres da Lista holandesa
de valores de qualidade do solo, naftaleno, antraceno, fenantreno, fluoranteno,
benzo[a]antraceno, criseno, benzo[a]pireno, benzo[g,h,i]perileno, benzo[k]fluoranteno e
indeno[1,2,3-c,d]pireno, totalizou 104,11 mg/kg. Este valor foi superior cerca de duas vezes e
meia o limite permitido, 40 mg/kg, indicando a necessidade de interveno na rea estudada
(NEDERLAND, 2006).
Diferente da legislao holandesa, os valores orientadores para o solo da Resoluo n
420/09 do Conselho Nacional do Meio Ambiente, CONAMA, so determinados
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
91
individualmente para dez HPA padres, antraceno, benzo[a]antraceno, benzo[k]fluoranteno,
benzo[g,h,i]perileno, benzo[a]pireno, criseno, dibenzo[a,h]antraceno, fenantreno,
indeno[1,2,3-c,d] e naftaleno (BRASIL, 2009). Foram verificadas concentraes acima dos
valores de interveno em seis desses compostos, antraceno, benzo[k]fluoranteno,
benzo[g,h,i]perileno, benzo[a]pireno, criseno e dibenzo[a,h]antraceno, confirmando a
necessidade de tratamento e identificando o risco para a sade humana neste cenrio de
exposio, em rea industrial.
O pireno foi o HPA com a concentrao mais elevada nas amostras, representando
43% do total. Esta molcula foi descrita como o mais ou um dos mais abundantes HPA em
solos impactados por leo, pelo fato do pireno constituir um de seus principais componentes
(GALLEGO et al. 2006, MOON et al. 2006, DEL PANNO et al. 2005, GONG et al. 2005,
VIAS et al. 2005, KAZUNGA e AITKEN, 2000). Entretanto, diversas outras razes podem
justificar sua presena, tais como, a baixa solubilidade e a persistncia no solo por mais
tempo que outros HPA, por exemplo, o antraceno e o naftaleno (OLESZCZUK, 2009,
ALEXANDER e ALEXANDER, 2000, SCHNEIDER et al. 1996).

5. 3 Identificao dos contaminantes remanescentes e propriedades do solo tratado na
UDT

Para a identificao e quantificao dos compostos remanescentes, bem como de
algumas caractersticas do solo tratado na UDT, foram coletadas amostras na rea de
quarentena, isto , o local reservado para estocagem de solo remediado e resfriado, at sua
liberao pelo laboratrio de controle de qualidade, finalizando o processo com a disposio
definitiva do solo na rea de reaterro.
As caractersticas do solo tratado na UDT esto apresentadas na Tabela 5.4.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
92
Tabela 5.4 Caractersticas fsico-qumicas do solo tratado na UDT
Ensaios Resultados
Solo
contaminado
Textura (%)
Argila
Silte
Areia fina
Areia mdia
Areia grossa
Pedregulho

95 32
331 271
222 292
191 221
124 154
55 43
Carbono Orgnico Total (mg/kg) 23.0001.000 75.5001.000
Nitrognio Total (mg/kg) 1.39730 1.59110
Fsforo Total (mg/kg) 77711 91410
16 HPA USEPA (mg/kg) 8,430,59 193,41,1
TPH (mg/kg) 69950 58.0471.000
16 HPA:TPH 1:82 1:300
Densidade de slidos (kg/dm
3
) 2,490,01 2,580,01
pH (H
2
O) 7,80,1 5,70,1
Umidade (%) 10,00,1 12,70,1
Capacidade de Reteno da gua (%) 21,40,1 30,20,1
C:N:P 100:6:3 100:2:1
Dioxinas ND NR
Furanos ND NR
UDT Unidade de Dessoro Trmica
HPA Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos
USEPA United States Environmental Protection Agency
TPH Hidrocarbonetos Totais do Petrleo
ND - No detetado
NR No realizado

Verifica-se que a ao do calor promoveu um aumento no percentual de finos do solo.
De acordo com Araruna Jr. et al. (2004), os solos contaminados por leo possuem partculas
com dimetros maiores, quando comparados aos solos tratados por dessoro trmica. Tal
fato pode ser observado pela reduo do nmero das partculas mais grossas, como tambm
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
93
pelo aumento cerca de 20% no percentual de silte e mais de 60% no percentual de argila,
entre o solo impactado e o solo tratado na UDT. A capacidade de reteno de gua pelo solo,
outro importante parmetro fsico, sofreu alteraes significativas aps o tratamento trmico,
sendo observada uma reduo de 29%. Esta alterao comum em solos tratados por
operaes de dessoro trmica, estando associada aplicao de temperaturas elevadas no
processo, as quais resultam em mudanas na microestrutura do solo, provavelmente por conta
da destruio da matria orgnica, um agente de coeso nesses materiais. Esses resultados
concordaram aos apresentados por Abu-Zreig, Al Akhas e Attom (2001) ao estudarem o
comportamento de solos sob a influncia de diferentes temperaturas empregadas no
tratamento de solos por dessoro trmica.
O tratamento na UDT promoveu o aumento do pH dos solos para faixa levemente
alcalina, o qual pode estar relacionado ao consumo de compostos cidos presentes no
contaminante, como tambm incorporao de cinzas, originadas durante a queima dos gases
dessorvidos.
O processo trmico promoveu a remoo de cerca de 70% do carbono orgnico do
solo, com significativa reduo do TPH, 98,8%, cujo resultado representou um bom indicador
da eficincia na remoo de compostos volteis e semivolteis pelo processo.
As amostras apresentaram teores HPA residuais de baixa e de alta massa molecular,
como apresentam as Tabelas 5.5 e 5.6. Considerando os critrios estabelecidos pela resoluo
420/09 do CONAMA e pela Lista holandesa, do ponto de vista fsico-qumico, o solo foi
considerado tratado, por apresentar baixas concentraes destes contaminantes.




Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
94
Tabela 5.5 Concentrao de HPA de baixa massa molecular no solo
tratado na UDT (p<0,05)
HPA (n de anis)
Concentrao
(mg/kg)
Valores
orientadores*
% de
reduo
Naftaleno (2) <0,100,02 90,0 >98,3
Acenafteno (3) <0,100,02 ____ >98,3
Acenaftileno (3) <0,100,02 ____ >98,3
Fluoreno (3) 0,100,02 ____ >97,7
Fenantreno (3) 0,200,02 95,0 99,3
Antraceno (3) 0,100,02 0,0 98,7
Total 0,400,03 ____ 98,9
*Valores orientadores (mg/kg) para solos de reas industriais (BRASIL, 2009)
HPA Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos
UDT Unidade de Dessoro Trmica

Tabela 5.6 Concentrao de HPA de alta massa molecular no solo
tratado na UDT (p<0,05)
HPA (n de anis)
Concentrao
(mg/kg)
Valores
orientadores*
% de
reduo
Fluoranteno (4) 0,260,02 ____ 96,0
Pireno (4) 1,400,09 ____ 98,3
Benzo[a]antraceno (4) 0,480,02 65,0 93,4
Criseno (4) 0,720,03 0,0 92,3
Benzo[b]fluoranteno (5) 0,820,03 ____ 86,2
Benzo[k]fluoranteno (5) 0,400,02 0,0 93,0
Benzo[a]pireno (5) 0,930,04 3,5 91,1
Dibenzo[a,h]antraceno (5) 0,220,02 1,3 96,2
Benzo[g,h,i]perileno (6) 1,700,06 0,0 88,6
Indeno[1,2,3-c,d]pireno (6) 1,100,04 130,0 84,5
Total 8,030,03 ____ 94,9
* Valores orientadores (mg/kg) para solos de reas industriais (BRASIL, 2009)
HPA Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos
UDT Unidade de Dessoro Trmica

Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
95
Remmler e Kopinke (1995) observaram a vaporizao completa de todos os HPA de
at quatro anis no solo, aps tratamento por dessoro trmica. No entanto, acima de 272C,
isto , uma temperatura inferior temperatura mnima do processo estudado, diversas reaes
promovem o aumento das cadeias ou formam ismeros dos HPA, tanto de baixa quanto de
alta massa molecular, possivelmente explicando a presena dos HPA residuais de at quatro
anis (POPE; PETERS e HOWARD, 2000).
No presente estudo, foi verificado que a concentrao total dos HPA de alta massa
molecular, aps o tratamento na UDT, 8,03 mg/kg, encontrava-se cerca de vinte vezes maior
que a concentrao total dos HPA de baixa massa molecular, 0,40 mg/kg. Tal observao
pode ser explicada pela menor presso de vapor e maior temperatura de ebulio desses
compostos. Alm disso, os HPA de seis anis foram removidos em grau ligeiramente menor
de eficincia que os HPA com cinco anis e isso pde estar relacionado aos fenmenos de
reforma, isto , quando molculas complexas so formadas a partir de precursores simples
como os HPA de baixa massa molecular (ALAPPAT et al. 2007).
O menor percentual de remoo entre todos os HPA monitorados foi o do
indeno[1,2,3-c,d]pireno, 84,5%, possivelmente relacionado maior estabilidade trmica do
composto, bem como aos fenmenos de ruptura de ligaes e reforma (POPE; PETERS e
HOWARD, 2000).
A razo entre os HPA de baixa e de alta massa molecular diminuiu de 0,24 no solo
impactado para 0,05 no solo tratado na UDT. Esta diminuio indicou que houve uma
mudana na distribuio dos HPA, com o consumo preferencial dos compostos de baixa
massa molecular durante o processo de dessoro trmica. Este fenmeno tambm foi
observado em um estudo recente sobre a eficincia da metodologia (BIACHE et al. 2009).
As concentraes de nitrognio e fsforo tiveram variao muito pequena quando
comparadas ao teor de carbono orgnico, de 914 a 777 mg/kg e de 1591 para 1397 mg/kg,
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
96
respectivamente. Isso indicou que o nitrognio e o fsforo contidos nos solos estavam
provavelmente associados s matrizes inorgnicas, uma vez que o contaminante era muito
pobre de compostos nitrogenados e compostos de fsforo. A reduo da concentrao de
carbono orgnico e a manuteno dos teores de nitrognio e fsforo implicaram no aumento
da relao C:N:P para 100:6:3 no solo tratado na UDT, enquanto no solo contaminado essa
relao era 100:2:1.
Em todas as amostras analisadas, no foi detetada a presena de dioxinas e furanos,
embora a temperatura mdia do forno de 350C e a possvel presena de ons cloreto
favorecessem condies para a formao desses contaminantes. Isto pode ser justificado pela
eficincia do tratamento dos gases vaporizados, pois dioxinas e furanos so produzidas nas
correntes gasosas, durante o resfriamento. Cabe enfatizar que o baixo limite de deteo do
mtodo analtico empregado, menor que 20 ng/kg, sustenta a hiptese de alta eficincia do
tratamento trmico.
Em um estudo recente foi verificada a formao de dioxinas e furanos em uma UDT,
operando com temperaturas variando de 315 a 426C. Observou-se que os tratamentos da
amostra antes da admisso no forno, tais como, moagem e secagem, auxiliaram na eliminao
de 98,9% desses compostos, posteriormente removidos atravs de um eficiente sistema de
tratamentos de efluentes gasosos (REINER, 2009). Ressalta-se que a moagem e a secagem
foram procedimentos rotineiros durante a etapa de blendagem do solo contaminado para
admisso na UDT, cujas amostras utilizadas neste trabalho so oriundas, revelando a
importncia da fase de pr-admisso na eficincia do processo.
Kulkarni, Crespo e Afonso (2008) e Weber et al. (2001) afirmam que dioxinas e
furanos se formam em temperaturas entre 300 e 500C, atravs de dois mecanismos:
combusto incompleta e reforma. Com uma temperatura de trabalho da UDT na faixa entre
300 e 350C e mximo de 800C, possivelmente houve a formao de dioxinas e furanos no
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
97
forno. Entretanto, a unidade era dotada de um sistema de tratamento de efluentes, no qual
inclua uma Cmara de Ps-Combusto (CPC) capaz de atingir at 1200C. De acordo com
Pereira (2004), dioxinas e furanos se decompem a partir de 600C e so totalmente
eliminados com o dobro desta temperatura. Sendo assim, dado o risco para a sade ambiental
e humana que dioxinas e furanos representam, a no determinao de tais compostos nas
amostras de solo tratado provou mais uma vez, a eficcia do processo de dessoro trmica,
servindo tambm como indicativo da excelncia de qualidade da UDT.
Diante do exposto, do ponto de vista fsico-qumico, o processo de dessoro trmica,
em escala industrial, atingiu o objetivo de reduzir o teor de contaminantes orgnicos. No
entanto, enfatiza-se que no foi verificada a remoo total dos HPA e TPH, contrariando o
reportado pela literatura (ROBINSON et al. 2008, LEE et al. 1998, GEORGE et al. 1995).
A soma dos 16 HPA prioritrios da USEPA revelou uma concentrao residual de
8,43 mg/kg no solo tratado. Os fenmenos ligados dinmica dos processos trmicos, a
resistncia trmica dos agregados solo-leo, as oscilaes intrnsecas aos procedimentos em
escala industrial, o tipo de solo, a quantidade e a idade da contaminao, entre outros fatores,
podem servir de exemplos para justificar a presena de compostos remanescentes, bem como
indicar a necessidade de aes de polimento, uma vez que se conhece o potencial
carcinognico e genotxico dessas molculas.
Desta forma, a presena de molculas residuais constitui um problema para o processo
e o baixo poder calorfico dos solos tratados via UDT torna a realimentao desses materiais
ao forno economicamente invivel, pois requer incremento substancial no consumo de GLP,
limitante econmico do processo trmico. Logo, justificam-se os estudos sobre alternativas
de baixo custo e ambientalmente seguras para o tratamento sequencial de polimento dos solos
oriundos de UDT.

Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
98
5. 4 Microbiota do solo tratado na UDT

Na unidade industrial, aps a sada da UDT, o solo era deixado em um local ao ar
livre, denominado de rea de quarentena, por semanas, antes do descarte final, na rea de
reaterro. As anlises microbiolgicas do solo coletado na rea de quarentena confirmaram
que o tratamento trmico criou um meio, no qual condies para o desenvolvimento da
microbiota foram estabelecidas, revelando que as concentraes de hidrocarbonetos presentes
no solo contaminado apresentavam propriedades bacteriostticas e fungistticas. Foram
observadas diferenas significativas na quantificao celular entre as amostras de solo
contaminado com as do solo tratado na UDT, cem vezes na populao de Bactrias
Heterotrficas Aerbias e mil vezes no teor de Fungos Filamentosos, conforme apresentado
na Tabela 5.7.

Tabela 5.7 Comparao e quantificao dos teores de micro-organismos do solo
contaminado com resduo de fundo da cmara de destilao a vcuo e do solo tratado na
UDT, armazenado na rea de quarentena
Micro-organismos
Concentrao (UFC/g)
Solo contaminado Solo tratado
Bactrias Heterotrficas Aerbias 351x10
4
341x10
6

Fungos Filamentosos 501x10
1
221x10
4

UDT Unidade de Dessoro Trmica
UFC/g - Unidades Formadoras de Colnia por grama de solo

O efeito negativo do incremento da concentrao de hidrocarbonetos sobre a
microbiota vem sendo observado desde os primeiros estudos de degradao desses compostos
entre os anos de 1908 e 1919 (BUSHNELL e HAAS, 1941). DelArco e de Frana (1999)
verificaram uma significativa reduo nas taxas de biodegradao de leo rabe leve em solo
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
99
arenoso, quando se aumentava a concentrao de leo no solo de 7 para 14 g/kg, enquanto
Meysami e Baheri (2003) observaram ao fungisttica para valores de TPH no solo acima de
14 g/kg. Assim, pode-se inferir que a reduo da concentrao de hidrocarbonetos no solo em
estudo constituiu uma condio favorvel microbiota.
Dado que os solos foram tratados na UDT 350C, por 12 minutos, o solo na sada do
forno se encontrava estril. Entretanto, no ptio de armazenamento, local da amostragem, os
solos tiveram contato com o ambiente, sendo recolonizados por micro-organismos, os quais
puderam se multiplicar, justificando as concentraes observadas de Bactrias Heterotrficas
Aerbias e Fungos Filamentosos.
Outra hiptese para o aumento da concentrao microbiana nos solos tratados pela
UDT a reduo da concentrao de compostos persistentes e intemperizados ao longo dos
55 anos, desde a disposio at a interveno. O tratamento trmico pde ter possibilitado as
concentraes de hidrocarbonetos alcanarem nveis abaixo dos valores inibitrios, tanto para
os fungos, quanto para as bactrias. Alm disso, o pH do solo tratado via UDT e a relao
C:N:P obtida se encontravam na faixa considerada adequada para o crescimento de micro-
organismos em solos, s custas de hidrocarbonetos (FRANCO et al. 2004, RAHMAN et al.
2002).

5. 5 Ensaios de fitotoxicidade do solo contaminado e do solo tratado na UDT

A maioria dos estudos discutindo a eficincia de processos trmicos para o tratamento
de solos contaminados por hidrocarbonetos do petrleo foi demonstrada apenas sob o ponto
de vista fsico-qumico. Tal fato explicado pela constatao da reduo dos contaminantes,
para padres considerados aceitveis ou de risco aceitvel pelas legislaes vigentes
(BIACHE et al. 2009, KULKARNI et al. 2008). Por outro lado, pouca informao foi
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
100
divulgada com respeito ao impacto da operao sobre a recuperao do funcionamento do
habitat natural do solo, sendo o teste de fitotoxicidade uma das mais simples formas de
diagnstico da fertilidade de solos tratados por dessoro trmica (DAZY; FRARD e
MASFARAUD, 2009).
Nas amostras de solo impactado por hidrocarbonetos de petrleo e no solo tratado por
dessoro trmica, o efeito fitotxico foi observado utilizando-se os vegetais: Cucumis
anguria (maxixe-do-norte), Allium porrum (alho-porr) e Cucumis melo (melo-caipira).
Os dois tipos de solo no mostraram efeito fitotxico para Cucumis sativus (pepino-
caipira). Os resultados da Germinao Relativa das Sementes (GRS) para os outros vegetais
esto apresentados na Figura 5.1.
Figura 5.1 Germinao Relativa das Sementes (GRS)

A determinao da GRS compara o nmero de sementes germinadas na amostra com
o nmero de sementes germinadas no controle e por esta razo, os valores podem ser
superiores a 100%. No solo contaminado, a GRS foi de 3,4 a 69,21,1% (p<0,05) enquanto
que no solo tratado por dessoro trmica foi de 72,2 a 107,71,1% (p<0,05). Os resultados
revelaram que as altas concentraes do contaminante no solo exerceram um efeito
0
20
40
60
80
100
120
C. melo C. anguria A. porrum
G
R
S

(
%
)
Solo contaminado Solo tratado na UDT

Cucumis melo Cucumis anguria Allium porrum
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
101
significativamente negativo para a germinao de C. anguria e A. porrum. Sob a germinao
de C. melo, este efeito foi mais sutil.
O processo de germinao, isto , o conjunto de eventos que antecedem o rompimento
do tegumento e finalizam com a emergncia da radcula, depende em maior grau, de fatores
internos do que de fatores externos. Isto significa que em condies apropriadas de luz e
umidade, o embrio requer mais dos nutrientes armazenados, enquanto os nutrientes
disponveis no meio so absorvidos mais tarde, quando da formao da raiz (ARAJO e
MONTEIRO, 2005).
Tal fato pode explicar a coincidncia nos tempos de germinao, ocorridos entre 48 e
72 h do incio do teste, nas sementes expostas ao extrato do solo e ao controle com gua
destilada. Considerando que os HPA e os nutrientes dissolvidos na gua destilada, utilizada
em ambos os casos, no foram absorvidos como uma fonte complementar de energia, a
inibio da germinao pode ter sido causada por outros fatores, como por exemplo, a
diferena de presso osmtica, formada pelo gradiente de concentrao dos HPA no meio ou
pelo tamanho da semente (REYNOSO-CUERVAS et al. 2008, FORTUNATO e
NICOLOSO, 2004).
Sob a influncia dos compostos txicos do solo, mais de 70% das sementes de C.
melo germinaram, porm os contaminantes impediram significativamente a germinao de C.
anguria e A. porrum. Com a reduo da concentrao dos contaminantes aps a dessoro
trmica, a diferena entre o nmero de sementes germinadas de C. anguria e A. porrum do
nmero de sementes germinadas de C. melo foi superior a 30%.
Isto implica no fato da quantidade de reservas de energia nas sementes exercer
influncia direta sob a germinao de sementes na presena de compostos txicos, ou seja, as
sementes pequenas como C. anguria e A. porrum so mais sensveis, por serem constitudas
de menos reservas que as sementes maiores como C. melo (TIQUIA; TAM e HODGKISS,
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
102
1996). Alguns exemplos na literatura reforam esta hiptese, tais como, Rhynchelytrum
repens (capim-gafanhoto) (REYNOSO-CUERVAS et al. 2008), Lactuca sativa (alface)
(HAMDI et al. 2007), Festuca arundinacea (festuca) (SMITH et al. 2006) e Lepidium
sativum (mastruo) (McCLURE; FRY e WEIGHTMAN, 1991).
A utilizao de sementes claras garantiu que nenhuma delas apresentasse
fotoblastismo positivo, permitindo que a ausncia da luz no constitusse um fator de inibio
da germinao, concordando com os achados de Cordazzo e Aracama (1998). De acordo com
dos Santos e Cardoso (2001), C. anguria um vegetal cujas sementes compostas por dois
cotildones, germinam em temperaturas na faixa de 16,0 a 35,5C. Uma vez que o ensaio foi
conduzido 22,0C, descartaram-se todas os vieses importantes, confirmando o papel do
tamanho das sementes sobre os resultados.
O teste de elongao relativa da raiz considerado um dos mtodos mais importantes
no monitoramento de compostos txicos no meio. Os resultados do teste esto mostrados na
Figura 5.2.
Figura 5.2 Elongao Relativa da Raiz (ERR)

0
20
40
60
80
C. melo C. anguria A. porrum
E
R
R

(
%
)
Solo contaminado Solo tratado na UDT
Cucumis melo Cucumis anguria Allium porrum
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
103
A Elongao Relativa da Raiz (ERR) no teste com solo antes do tratamento trmico
variou de 4,9 a 68,21,1% (p<0,05). C. anguria foi o vegetal mais sensvel e C. melo o mais
resistente. No solo tratado na UDT, a ERR ficou entre 56,2 e 68,21,1% (p<0,05), tendo C.
melo mantido o mesmo resultado.
Quando comparado ao teste de germinao relativa, a ERR se mostrou mais sensvel,
confirmando as observaes de Arajo e Monteiro (2005). Ao contrrio da germinao, a
elongao da raiz pode ser influenciada por diversos fatores externos, tais como, pH,
temperatura, salinidade, presena de metais e concentrao dos HPA. As razes so os rgos
responsveis pela absoro e bioacmulo dos HPA nos vegetais e por conta das
caractersticas destes compostos, as razes compreendem a parte mais afetada da planta,
superando inclusive as partes areas (ARAJO e MONTEIRO, 2005).
As razes das espcies estudadas apresentaram-se visualmente brancas em todos os
testes. Alm disso, foi observado o desenvolvimento de razes secundrias no C. melo e C.
anguria (Figura 5.3). De acordo com Inderjit, Saini e Kaur (2005) e Fortunato e Nicoloso
(2004), o surgimento de razes secundrias pode ser indicativo de estresse osmtico, bem
como pode marcar a diminuio da taxa de alongamento da raiz.









Figura 5.3 Elongao das razes de Cucumis anguria (maxixe-do-norte) no extrato do solo
contaminado com resduo oleoso de fundo da cmara de destilao a vcuo, apresentando
desenvolvimento de razes secundrias (destaque, aumento: 4X). Foto: Ulrich Vasconcelos
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
104
O mecanismo de ao dos HPA nas plantas foi descrito como a reduo da habilidade
da raiz em absorver gua e nutrientes (DEBIANE et al. 2008). No solo tratado na UDT, os
percentuais de elongao das razes foram similares em todas as plantas testadas. No entanto,
A. porrum obteve uma ERR cerca de 20% menor que C. anguria e C. melo. Tal observao
contrariou os resultados de Tiquia, Tam e Hodgkiss (1996). Geralmente, neste tipo de teste,
as monocotiledneas, grupo ao qual A. porrum pertence, so mais resistentes do que as
dicotiledneas, representadas por C. anguria e C. melo. A sensibilidade de A. porrum
possivelmente est relacionada ao tamanho de sua semente, cerca de trs vezes e uma vez e
meia menor que as sementes de C. melo e C. anguria, respectivamente.
O ndice de Germinao das sementes (I
G
) foi o parmetro analisado mais sensvel do
teste (Figura 5.4). A razo da maior sensibilidade justificada pelo fato deste ndice
combinar os valores de germinao das sementes com os da elongao da raiz.
Figura 5.4 ndice de Germinao das sementes (I
G
)

Nas amostras de solo contaminado, os I
G
variaram de 0,2 a 47,21,1% (p<0,05). O
efeito txico mais pronunciado foi observado com C. anguria, ao passo que C. melo obteve o
0
20
40
60
80
C. melo C. anguria A. porrum
I
G

(
%
)
Solo contaminado Solo tratado na UDT
Cucumis melo Cucumis anguria Allium porrum
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
105
maior I
G
. A presena dos contaminantes residuais no solo aps o tratamento na UDT
promoveu o aumento significativo do I
G
nos vegetais estudados, variando de 40,6 a
73,51,1% (p<0,05).
O aumento do I
G
resulta de um nmero semelhante de sementes germinadas no
extrato de solo e no controle, em uma maior taxa de elongao da raiz. Para qualquer vegetal,
quando o I
G
varia de 50 a 80%, a fitotoxicidade dos constituintes do solo considerada
moderada, abaixo de 50%, a fitotoxicidade considerada alta e acima de 80%, no existe
efeito fitotxico (ANASTASI et al. 2009).
Os resultados do teste de ecotoxicidade contriburam para comprovar que a
diminuio do efeito inibitrio nas plantas coincidiu com a reduo significativa da
concentrao de hidrocarbonetos do petrleo do solo, aps o tratamento por dessoro
trmica. Ainda assim, a presena de 8,43 mg/kg de HPA residuais promoveu uma toxicidade
de moderada (C. anguria e C. melo) alta (A. porrum), resultado em desacordo com Debiane
et al. (2008), cujo efeito fitotxico dos hidrocarbonetos foi detetado em concentraes acima
de 10 mg/kg. Desta forma, concluiu-se que do ponto de vista biolgico, o tratamento trmico
no foi eficiente, justificando o emprego de uma etapa para tratamento sequencial desses
solos.

5. 6 Ensaios de biorremediao

5. 6. 1 Micro-organismos utilizados no bioaumento

Os ensaios de bioaumento foram conduzidos utilizando uma cultura mista preparada
com micro-organismos autctones, isolados atravs de tcnicas tradicionais de cultivo,
adotando-se o critrio de predominncia nas placas nas diferentes diluies. De acordo com
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
106
Supaphol et al. (2006), os indivduos isolados de reas impactadas por leo, quando
predominantes nas placas podem ser considerados agentes biorremediadores em potencial.
Partindo-se desta premissa, vinte micro-organismos foram isolados, sendo onze bactrias
(CW-1, CW-2, CW-3, CW-4 e CW-5 do solo contaminado e CW-6, CW-7, CW-8, CW-9,
CW-18 e CW-20 do solo tratado na UDT) e nove fungos filamentosos (CW-10, CW-11, CW-
12, CW-13, CW-14 e CW-15 do solo contaminado e CW-16, CW-17 e CW-19 do solo
tratado na UDT).
Os isolados foram aclimatados em meio mineral utilizando leo cru como nica fonte
de carbono e apenas oito culturas puras restaram ao final desta fase, sendo quatro bactrias e
quatro fungos filamentosos. Dentre as bactrias, duas eram Gram-negativas, Pantoea
agglomerans CW-18 e Serratia marsescens CW-20 e duas outras, Gram-positivas, Bacillus
cereus CW-4 e Gordonia amicalis CW-7, esta ltima uma actinobactria. As bactrias Gram-
negativas juntamente com as actinobactrias so consideradas grupos importantes no
processo de biodegradao de hidrocarbonetos, por serem mais numerosas em solos
contaminados por leo (FRANCO et al. 2004).
Dentre os fungos filamentosos, trs linhagens pertenciam ao filo Ascomycota,
Aspergillus fumigatus CW-10, Aspergillus terreus CW-11 e Aspergillus carneus CW-12. Um
quarto isolado foi identificado como Syncephalastrum racemosum CW-14 inc. sed.
2
. Todos
os micro-organismos so espcies reconhecidamente ligninolticas, as quais apresentam
inespecificidade enzimtica como uma vantagem metablica, favorecendo a quebra dos anis
dos HPA (ROMERO et al. 2010).




2
Incertae sedis - h incertezas quanto a posio do gnero Syncephalastrum no filo Zycomycota, sendo
atualmente includo na ordem Mucorales do subfilo Mucoromycotina.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
107
5. 6. 2 Biorremediao com uso de planejamento experimental

Considerando que o solo tratado na UDT apresentou compostos remanescentes e
efeitos fitotxicos, planejou-se uma implantao de estratgias de tratamento microbiolgico
sequencial s operaes de dessoro trmica. O baixo custo foi o principal critrio de
escolha dessas metodologias. Dado o nmero de variveis nos processos biolgicos, optou-se
por ferramentas de planejamento experimental, com fins de reduzir o tempo e selecionar
variveis importantes.
Sabendo que mltiplas interaes podem agir no solo, os planejamentos fatoriais
constituem uma das ferramentas mais teis durante a fase preliminar em estudos de
biorremediao, pois diminuem o nmero de experimentos, ganham em tempo e reduzem os
custos (PHOA; XU e WONG, 2009, VICENTE et al. 1998). Vale ressaltar que o
planejamento fatorial no compreende uma ferramenta meramente acadmica. Recentemente,
Khan et al. (2011) apresentaram vrios exemplos desta prtica empregada em diversos
segmentos da indstria, tais como automotiva, naval e eletrnica.
A Tabela 5.8 apresenta a matriz estendida do planejamento de experimentos
empregado e os respectivos resultados, considerando as perdas abiticas. Sobre o percentual
de reduo dos HPA, foi estudado o efeito das variveis fertilizante comercial NPK
(bioestmulo), cossubstrato (adio de glicerol PA) e cultura mista (bioaumento), codificadas
por X
1
, X
2
e X
3
, respectivamente. Os smbolos + e indicam, respectivamente, o nvel
superior e o nvel inferior, para cada varivel de entrada. Os valores reais das variveis X
1
e
X
2
tambm esto apresentados. No caso da varivel X
3
, os smbolos + e esto associados
adio ou no da cultura mista.
A variao das condies experimentais promoveu mudanas no percentual de
biodegradao dos HPA no solo e as perdas abiticas, determinadas em 10%, foram
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
108
consideradas baixas, estando em acordo com dados reportados na literatura (PERFUMO et al.
2007, OLIVEIRA e DE FRANA, 2005, McNALLY; MIHELCIC e LUEKING, 1998).

Tabela 5.8 Matriz estendida do planejamento fatorial 2
3
Reatores
Fertilizante
NPK, X
1

Cossubstrato,
X
2

Bioaumento,
X
3

Reduo dos
HPA (%)
*
1 + (100 mg/kg) + (0,63 mg/kg) + (presena) 35,00,4
2 (0 mg/kg) + (0,63 mg/kg) + (presena) 49,00,1
3 + (100 mg/kg) + (0,63 mg/kg) (ausncia) 45,00,2
4 (0 mg/kg) + (0,63 mg/kg) (ausncia) 68,00,1
5 + (100 mg/kg) (0,00 mg/kg) + (presena) 64,00,1
6 (0 mg/kg) (0,00 mg/kg) + (presena) 43,00,1
7 + (100 mg/kg) (0,00 mg/kg) (ausncia) 71,00,2
8 (0 mg/kg) (0,00 mg/kg) (ausncia) 58,00,1
9 Perdas abiticas 10,00,1
HPA - Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos
*

Considerando as perdas abiticas, aps 60 dias de experimentos

Apesar da Tabela 5.8 apresentar os melhores resultados na ausncia do bioaumento e
que na presena do cossubstrato, a adio do fertilizante reduziu a varivel de resposta, tais
valores no puderam ser interpretados de forma direta, dada a necessidade de uma avaliao
da significncia dos parmetros estudados, considerando tambm os efeitos das interaes
dos fatores. Assim, os resultados de biodegradao dos HPA foram usados para construo
de um modelo emprico, com vistas descrio dos dados experimentais, obtendo-se a
Equao 5.1 (Eq. 5.1).

Y = b
0
+b
1
X
1
+ b
2
X
2
+ b
3
X
3
+ b
12
X
1
X
2
+ b
13
X
1
X
3
+ b
23
X
2
X
3
+ b
123
X
1
X
2
X
3
(Eq. 5.1)

Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
109
Onde: Y a varivel resposta; X
1
, X
2
e X
3
so as variveis de entrada, uso de
fertilizante comercial NPK, uso de 0,63 mg/kg de cossubstrato (glicerol PA) e bioaumento; e
b
0
, b
1
, b
2
, b
3
e b
123
so constantes.
Uma regresso hierrquica foi aplicada, implicando na eliminao de forma
sequencial dos termos no significativos, para um nvel de significncia de 95% e na
manuteno dos termos mais significados, obtendo-se a Equao 5.2 (Eq. 5.2).

Y = 54,13 9,75X
2
12,75X
3
17,75X
1
X
2
+ 4,25X
1
X
3
(Eq. 5.2)

Onde: Y o percentual de biodegradao dos HPA e X
1
, X
2
e X
3
so, respectivamente,
uso de fertilizante comercial NPK, uso de 0,63 mg/kg de cossubstrato (glicerol PA) e
bioaumento. Os valores das constantes b
0
, b
2
, b
3
, b
12
e b
13
apresentados na Tabela 5.9 esto
relacionados com os termos lineares da Eq. 2. Todos esses valores foram considerados no
modelo matemtico, baseando-se os valores obtidos nos Testes t e p.

Tabela 5.9 Coeficientes de regresso
Fator
Coeficiente de
regresso
Desvio
padro
Teste t Valor p
b
0
54,13 0,13 443 0,0015
b
1
- 0,75 0,25 - 3 0,2048
b
2
- 9,75 0,25 - 39 0,0163
b
3
- 12,75 0,25 - 51 0,0125
b
12
- 17,75 0,25 - 71 0,0090
b
13
4,25 0,25 17 0,0374
b
23
- 1,75 0,25 - 7 0,0903

A avaliao do modelo emprico foi realizada com auxlio da anlise da varincia,
apresentada na Tabela 5.10.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
110
Tabela 5.10 Tabela ANOVA e de parmetros estimados
Fator
Soma
quadrtica
Grau de
liberdade
Mdia
quadrtica
F p
X
1
1,1 1 1,1 9 0,2048
X
2
190,1 1 190,1 1521 0,0163
X
3
325,1 1 325,1 2601 0,0125
X
1
X
2
630,1 1 630,1 5041 0,0090
X
1
X
3
36,1 1 36,1 289 0,0374
X
2
X
3
6,1 1 6,1 49 0,0903
Erro 0,1 1 0,1
Soma quadrtica total 1.188,9 7

A anlise de regresso mltipla foi usada para avaliar as variveis estudadas. A Tabela
5.10 apresenta a anlise estatstica dos parmetros estimados. Os valores F e p, num intervalo
de confiana de 95%, foram usados como ferramenta para verificar a significncia das
variveis de entrada e das suas interaes. Os valores obtidos nos testes F e p demonstram
que a varivel X
1
X
2
, interao do fertilizante e cossubstrato, foi a mais significativa sobre a
biodegradao dos HPA.
A medida de correlao usada para testar o ajuste da Eq. 5.2 foi o coeficiente de
correlao mltipla r e o coeficiente de determinao r
2
. O fato do valor de r (0,9993), para o
modelo estatstico, ser muito prximo de 1, indica um alto nvel da correlao entre os
valores observados e previstos. O valor do coeficiente de determinao, r
2
= 0,9999, indica
que menos de 1% das variaes do processo no so explicadas pelo modelo. Os baixos
valores do Teste p indicaram que os termos associados foram significativos.
Uma ferramenta que tambm pode ser empregada para interpretar os dados da Tabela
ANOVA o Diagrama de Pareto, apresentado na Figura 5.5.

Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
111

-3,
-7,
17,
-39,
-51,
-71,
p=,05
X1
X2X3
X1X3
X2
X3
X1X2
X
1
- Fertilizante NPK; X
2
- Cossubstrato; X
3
- Bioaumento











Figura 5.5 Diagrama de Pareto

Observa-se na Figura 5.5, que com um nvel de confiana de 95%, o termo
relacionado com o efeito da adio de fertilizante, X
1
, e o termo relacionado interao das
variveis: cossubstrato e bioaumento, X
2
e X
3
, respectivamente, no foram estatisticamente
significativos sobre a varivel de resposta. O termo associado ao bioaumento, X
3
e aquele
associado ao uso do glicerol PA, X
2
, apresentaram-se significativos. No entanto, o termo mais
significativo entre todos, sobre a degradao dos HPA foi a interao das variveis X
1
e X
2
. A
interao das variveis X
1
e X
3
tambm foi estatisticamente significativa, porm de forma
marginal. As variveis bioaumento e cossubstrato foram as mais importantes, isoladamente.
A varivel fertilizante no foi importante ao bioprocesso. No entanto, a interao deste fator
com os demais variveis estudadas mostraram-se relevantes.
As curvas de contorno foram usadas para estudar os efeitos de sinergia e antagonismo
das variveis de entrada sobre a biodegradao dos HPA. Na Figura 5.6 verifica-se que o uso
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
112
de fertilizante, (+1), promoveu um pequeno aumento no percentual de reduo dos HPA no
solo, passando de 55% para 65%, concordando as observaes do Diagrama de Pareto, no
qual a varivel X
1
no foi estatisticamente significativa sobre o processo. Provavelmente, o
fato do solo j apresentar teores de nitrognio ( 1400 mg/kg) e fsforo ( 780 mg/kg)
requeridos para a biodegradao explique esta observao. Anterior aos experimentos do
planejamento fatorial, a relao C:N:P era de 100:6:3, faixa considerada adequada para
biorremediao de solos (MANCERA-LPEZ et al. 2008, GALLEGO et al. 2006, KING et
al. 2005, EVANS et al. 2004). Com a adio do fertilizante (100 mg/kg) no ocorreu uma
mudana significativa na relao C:N:P, bem como a diminuio na degradao dos HPA.


Figura 5.6 Curva de contorno demonstrando o efeito da utilizao do fertilizante comercial
NPK e de glicerol sobre o percentual de biodegradao dos HPA no solo

Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
113
Oliveira e de Frana (2005) estudaram o efeito da relao C:N na degradao de
hidrocarbonetos, provenientes de leo rabe leve, em solo arenoso, e verificaram que relaes
C:N elevadas; 100:1 e 100:2 foram menos favorveis biodegradao dos hidrocarbonetos.
Nas relaes C:N mais baixas estudadas, 100:5 e 100:10 foram obtidos maiores percentuais
de biodegradao dos compostos orgnicos, indicando a necessidade de suplementao de
nutrientes para a biorremediao.
Considerando a condio de uso de fertilizante, (+1), o uso do cossubstrato (glicerol
PA) possibilitou uma reduo significativa na biodegradao dos HPA, de 65% para valores
inferiores a 50%, em acordo ao observado no Diagrama de Pareto, demonstrando que a
varivel uso do glicerol foi muito importante para a biodegradao dos HPA. Os resultados
sugerem que provavelmente houve degradao preferencial do composto como fonte de
carbono. Na condio de no uso de fertilizante, (-1), a varivel glicerol no influenciou
significativamente a biodegradao dos hidrocarbonetos, revelando a importncia da
interao entre essas duas variveis.
A concentrao de glicerol PA empregada nos experimentos resultou em uma relao
mssica HPA:glicerol de 100:8. Convm salientar que, mesmo nesse valor de relao
mssica, os resultados de biodegradao dos HPA demonstram que houve consumo
preferencial do glicerol, concordando s observaes feitas por Zhang et al. (2005), que
estudaram a biodegradao de leo cru por linhagem de Pseudomonas aeruginosa em meio
lquido, bem como as observaes de Duquenne et al. (1999), em um estudo da utilizao
preferencial do glicerol por linhagens de Bradyrhizobium japonicum e Pseudomonas
fluorescens. Logo, ficou clara a necessidade de um estudo complementar sobre a influncia
da concentrao de glicerol na biorremediao dos solos estudados, considerando relaes
mssicas ainda mais baixas entre esse cossubstrato e os hidrocarbonetos.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
114
A motivao do uso de glicerol foi lanar mo do potencial tensoativo desse
composto, dado que o solo estudado possui um elevado teor de finos, isto , materiais de
elevada rea superficial e que tendem a reter hidrocarbonetos em seus micro e mesoporos,
dificultando a degradao (SEMPLE et al. 2007, JONER et al. 2004, MULLIGAN, 2004).
Na Figura 5.7 verifica-se que, na ausncia de fertilizante, (-1), o bioaumento
promoveu diminuio significativa no percentual de biodegradao dos HPA. Tal reduo na
degradao partiu de 65% para valores inferiores a 45%, correspondendo a um decrscimo de
eficincia de processo em aproximadamente 30%. Na presena de fertilizante, (+1), a adio
dos micro-organismos tambm exerceu um efeito negativo sobre a biodegradao dos HPA.
Nessa condio, a eficincia de biodegradao dos HPA foi reduzida cerca de 20%, passando
de 60% para 50%. Assim, foi possvel concluir que a presena do consrcio microbiano
resultou nas alteraes mais drsticas do processo.

Figura 5.7 Curva de contorno demonstrando o efeito da utilizao de fertilizante comercial
NPK e da cultura mista sobre o percentual de biodegradao dos HPA no solo
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
115
O bioaumento uma tcnica amplamente empregada e diversos estudos concluram
que a adio de micro-organismos foi uma ferramenta favorvel biorremediao de solos
contaminados com HPA (JACQUES et al. 2008, SUPAPHOL et al. 2006, MISHRA et al.
2001, KOMUKAI-NAKAMURA et al. 1996). Entretanto, cabe ressaltar que a maioria desses
estudos ocorreu em sistemas confinados e sob condies controladas, as quais segundo El
Fantrossi e Agathos (2005), podem prolongar a vida da microbiota.
Em contrapartida, alguns relatos na literatura apontaram que o bioaumento no
favoreceu a degradao dos HPA em solos, causados por alguns fatores, como a natureza e a
concentrao do poluente, o uso de culturas axnicas e fatores nutricionais (GREEWOOD et
al. 2009, LIANG et al. 2009, MACHN-RAMREZ et al. 2008, POTIN; VIEGNIE e RAFIN,
2004, SATOH et al. 2003, CANET et al. 2001, HAY; DEES e SAYLER, 2001, entre outros).
A utilizao de indivduos autctones na composio da cultura mista foi baseada nos
relatos que atribuem a estes isolados o melhor desempenho, justificando tal caracterstica
excelente adaptao s condies oferecidas no ambiente de origem (HESSELSOE et al.
2008, SATOH et al. 2003).
Diversos estudos demonstraram a capacidade de biodegradao dos HPA pelos micro-
organismos utilizados na cultura mista: enterobactrias P. agglomerans (IYER; MODY e
JHA, 2006) e S. marsescens (WILSON et al. 1999); Gram-positivas B. cereus (SAMANTHA
et al. 2002) e G. amicalis (SHEN et al. 2010) e pelos fungos filamentosos A. fumigatus (YE
et al. 2011), A. terreus (ANASTASI et al. 2009), A. carneus (ESCALANTE-ESPINOSA et
al. 2005) e S. racemosum (BOONCHAN et al. 2000).
Tais estudos identificaram diferentes genes envolvidos na sntese de protenas
relacionadas na degradao dos HPA, por exemplo, mono-oxigenases, dioxigenases,
peroxidases, lacases e desidrogenases, revelando o potencial degradador de cada micro-
organismo, cultivado sob a forma de culturas axnicas. Por esta razo, antes do incio do
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
116
experimento foram realizados ensaios in vitro com o objetivo de verificar o antagonismo
entre as espcies integrantes do consrcio, no sendo demonstrada a existncia significativa
desta relao.
necessrio destacar que o leo utilizado na aclimatao da microbiota continha um
teor de 32,3% de hidrocarbonetos aromticos e 21,3% de compostos polares (SILVA et al.
2009). O teor de HPA presente no contaminante do solo, resduo de fundo da cmara de
vcuo, representou 20,0% do TPH determinado, tornando ilegtimas as interferncias
promovidas pelo leo durante o enriquecimento das linhagens.
A concentrao do inculo inicialmente fixada entre 10
6
e 10
7
UFC/mL garantiu um
crescimento de 14,7 vezes na populao microbiana do solo, contudo, observou-se um efeito
negativo no bioaumento. O mesmo no foi obtido por Teng et al. (2010), cujo incremento na
populao foi de 16,6 vezes e o bioaumento se mostrou como a melhor alternativa na
biorremediao de HPA no solo.
De acordo com a literatura, diversos fatores podem contribuir no baixo rendimento do
bioaumento, tais como, problemas na adaptao relacionados ao aumento da fase lag
(BOUCHEZ et al. 2000), a presena de inibidores do crescimento no solo, como metais
pesados (DUA et al. 2002), motilidade do micro-organismo (McCLURE; FRY e
WEIGHTMAN, 1991) e interaes ecolgicas negativas (MILLE-LINDBLOM; FISCHER e
TRANVIK, 2006). Nesses casos, a competio entre a microbiota inoculada e a microbiota do
solo pode desencadear um processo que culmina com a morte celular sem que sejam gerados
descendentes, fenmeno conhecido por die-off (MOHAN et al. 2009, POTIN; VEIGNIE e
RAFIN, 2004).
Possivelmente, as falhas do bioaumento neste estudo podem ser atribudas a fatores
nutricionais. O pr-inculo foi confeccionado utilizando o caldo Bushnell-Haas como
veculo, cuja formulao foi desenvolvida para estudos de degradao de hidrocarbonetos,
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
117
contudo, o caldo Bushnell-Haas apresenta ausncia de cofatores, tais como oligoelementos e
vitaminas, essenciais para a sntese de algumas enzimas (BUSHNELL e HAAS, 1941). Este
cenrio de presso seletiva exps um problema bastante recorrente neste tipo de investigao,
isto , quando sob baixas concentraes de nutrientes, o consrcio elege outra fonte
preferencial de carbono no solo, que no os HPA (MOHAN et al. 2009, MACHN-
RAMREZ et al. 2008, MOORTHI; DEECARAMAN e KALAICHELVAN, 2008,
FERENCI, 2001, HAY; DEES e SAYLER, 2001, SATOH et al. 2003). Neste contexto,
sugere-se a possvel existncia de micro-organismos hidrocarbonoclsticos com estado
nutricional deficiente no momento da adio do inculo ao solo.
Cabe ressaltar que outros substratos estavam disponveis no solo, tais como, as
fraes leves do leo e o glicerol, podendo os mesmos, terem servido de fonte de carbono
para uma biomassa em crescente desenvolvimento. Hesselsoe et al. (2008) compararam a
atuao de diferentes culturas mistas compostas por indivduos sobre a degradao de HPA
em solos e observaram que tais consrcios preferiram e se mantiveram utilizando fontes de
carbono de mais fcil assimilao.
Embora registrando o menor percentual de biodegradao dos HPA, o uso do
bioaumento tambm permitiu a remoo desses compostos do solo. Ainda que alguns autores
reconheam as limitaes dessa metodologia, considerando-a controversa e imprevisvel
(MOHAN et al. 2006, RINGELBERG et al. 2001), o bioaumento ainda bastante utilizado e
diversas estratgias so empregadas visando diminuir seus efeitos adversos, tais como, o
encapsulamento de bactrias, hifas e esporos com alginato, a combinao com agentes
emulsificantes e o emprego de organismos geneticamente modificados (EL FANTROUSSI e
AGATHOS, 2005, LETAN e LAMAR, 1996, GOLDSTEIN; MALLORY e ALEXANDER,
1985).
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
118
A Figura 5.8 ilustra que um efeito negativo tambm foi observado para o caso do
bioaumento com ou sem uso de glicerol PA. A cultura mista promoveu uma reduo na
biodegradao dos HPA, de 65% para aproximadamente 50%. Na presena do cossubstrato, a
introduo do inculo promoveu uma reduo significativa na biodegradao dos HPA, de
60% para aproximadamente 45%, enquanto que na ausncia do glicerol, observou-se uma
reduo mais atenuada, de 60% para aproximadamente 55%. Nesse caso, a reduo pde ter
relao com a degradao preferencial do glicerol, que atuaria em sinergismo ao efeito
negativo do bioaumento.


Figura 5.8 Curva de contorno demonstrando o efeito da utilizao do glicerol e da cultura
mista sobre o percentual de biodegradao dos HPA no solo

O conjunto dos dados apresentados permitiu concluir que as variveis, bioaumento e
glicerol, agiram de forma negativa sobre a biodegradao dos HPA do solo. Destaca-se que,
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
119
em todas as condies experimentais testadas houve biodegradao dos HPA, e os valores
obtidos apresentaram-se, aproximadamente, entre 40 e 65%. Foi tambm verificado um
pequeno incremento da biodegradao dos HPA com o uso do fertilizante, no solo estudado,
revelando a maior necessidade de nutrientes, pela microbiota para a biodegradao dos HPA.
Embora de origem comercial, o fertilizante representa uma parcela positiva nos custos da
biorremediao e considerando o decrscimo na remoo dos HPA no solo com o uso do
bioaumento e do glicerol PA, concluiu-se que o bioprocesso nas condies investigadas
ocorreu de forma vivel, eficaz e economicamente atrativa, sem a necessidade de interveno
por bioaumento, por bioestmulo ou pela adio de 0,63 mg/kg do cossubstrato.

5. 6. 3 Monitoramento da biorremediao

As temperaturas do ambiente e do solo, bem como valores de umidade relativa do ar e
umidade e pH do solo no foram tomados como variveis de entrada do planejamento
experimental, uma vez que tais parmetros no se mantm constantes em campo.
Durante os experimentos foi observada em mdia, 24,00,3C e 23,50,3C (p<0,05),
para as temperaturas do solo e do ambiente, respectivamente. A variao de temperatura
dada principalmente pelas passagens de frentes frias pela cidade do Rio de Janeiro, no
entanto, dentro da faixa registrada, o processo de degradao no foi dificultado, em funo
da atividade metablica dos micro-organismos mesfilos (MOHAMED et al. 2006).
A umidade do solo foi mantida numa faixa que compreendeu entre 70 e 80% da
capacidade de reteno de gua, ou seja, entre 15,0 e 17,20,3% (p<0,05), sendo verificada a
mdia de 16,40,2% (p<0,05). A correo da umidade nos reatores se fez mais necessria nos
dias em que a umidade relativa do ar estava abaixo de 70 g/m
3
, entretanto, foi possvel
observar durante todo o processo que a umidade do solo esteve inserida na faixa ideal de
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
120
biodegradao de hidrocarbonetos do petrleo, isto , com valores entre 15 e 20% (KOTER;
WHITE e KELSEY, 2001).
O pH do solo diminuiu ao longo dos 60 dias, registrando a mdia de 7,40,1 (p<0,05),
valor considerado timo para este tipo de bioprocesso (FRANCO et al. 2004). A oxidao
microbiana das fraes leves e pesadas do leo produzem diversos tipos de cidos orgnicos,
entre C
10
e C
20
, em mdia, que reduzem o pH do solo e revelam evidncias de uma microbiota
metabolicamente ativa (WATSON et al. 2002).
A Figura 5.9 expe ao longo dos 60 dias de bioprocessos, a quantificao das
Bactrias Heterotrficas Aerbias (BHA) nos experimentos de biorremediao. Aos reatores
1, 2, 5 e 6 foi adicionado o consrcio microbiano e o reator 8 corresponde ao sistema sem
tratamento sequencial.


Figura 5.9 Quantificao das Bactrias Heterotrficas Aerbias do solo durante 60 dias de
experimento nos diferentes tratamentos sequenciais: 1- fertilizante + cossubstrato +
bioaumento; 2- cossubstrato + bioaumento; 3- fertilizante + cossubstrato; 4- cossubstrato; 5-
fertilizante + bioaumento; 6- bioaumento; 7- fertilizante; 8- sem tratamento

1,00E+06
1,00E+07
1,00E+08
1,00E+09
1,00E+10
1 2 3 4 5 6 7 8
U
F
C
/
g

d
e

s
o
l
o

Reatores
0 7 15 30 60
Tempo (dias)
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
121
O solo anteriormente a qualquer tratamento microbiolgico sequencial apresentou
uma populao de BHA por volta de 10
7
UFC/g (reator 8). Em solos contendo
hidrocarbonetos do petrleo, considera-se elevada uma populao bacteriana nesta
concentrao e valores similares aos observados no presente estudo podem ser encontrados
na literatura (CHEN et al. 2005, ZUCCHI et al. 2003, MISHRA et al. 2001).
Foi verificado que no incio do experimento, a adio do consrcio microbiano
promoveu o aumento, em uma ordem de grandeza, na concentrao de bactrias nos reatores
cuja varivel bioaumento foi empregada (1, 2, 5 e 6), entretanto, ao longo do experimento, o
desenvolvimento celular apresentou um perfil similar em todas as condies testadas.
O maior incremento da populao foi observado com 7 dias, em uma ordem de
grandeza nos sistemas com bioaumento (1, 2, 5 e 6) e em duas ordens de grandeza, nos
reatores sem esta varivel (3, 4 e 7), revelando o estabelecimento de fenmenos de
antagonismo entre a microbiota do solo e o consrcio. Esta competio nos momentos
iniciais do teste possivelmente adiou a velocidade de degradao dos HPA, influenciado nos
resultados obtidos com a varivel bioaumento, como j discutido anteriormente.
Observou-se ainda que o suplemento de 100 mg/kg de fertilizante no formou um
gradiente inibitrio para os micro-organismos, uma vez que o teores de nitrognio (1400
mg/kg) e fsforo (780 mg/kg) no solo eram considerados ideais para a biorremediao.
Sabe-se que esses elementos so importantes para produo de biomassa e quando em altas
concentraes, principalmente o nitrognio, pode ocorrer estase em funo da alterao da
salinidade e do pH (LEYS et al. 2005).
No intervalo de 15 dias, a concentrao celular reduziu cerca de dez vezes em todos
os reatores, iniciando um processo de reestabelecimento das concentraes microbianas
prprias do solo, alcanadas por volta de 30 dias e mantidas at o final do experimento. Este
comportamento comum neste tipo de estudo e est relacionado ao esgotamento de
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
122
nutrientes (BAEK et al. 2007, MORELLI et al. 2005, McCLURE; FRY e WEIGHTMAN,
1991).
O reestabelecimento da densidade celular possivelmente esteve relacionado
adaptao da microbiota ao contaminante e metablitos, formados a partir do incremento da
atividade microbiana promovido pelo emprego do bioaumento e do bioestmulo. Esta
observao foi sugestiva da presena do fenmeno de tolerncia. As estratgias para
manuteno das populaes uma das propriedades mais importantes dos micro-organismos
do solo. De uma forma geral, os estresses ambientais, tais como, a contaminao por
hidrocarbonetos do petrleo, promovem efeitos compensatrios, levando a microbiota ao
equilbrio e estabilidade (FERNNDEZ et al. 1999).
Essas mesmas consideraes podem ser feitas para os Fungos Filamentosos. Na
Figura 5.10 esto apresentadas as mdias da quantificao nos solos ao longo dos 60 dias do
bioprocesso. Nos reatores 1, 2, 5 e 6 foi adicionado o consrcio microbiano e o reator 8
corresponde ao sistema sem tratamento sequencial.
A populao inicial dos Fungos Filamentosos (FF) foi de aproximadamente 10
5
UFC/g (reator 8), valor condizente aos obtidos em solos contendo hidrocarbonetos do
petrleo (CARMICHAEL e PFAENDER, 1997).
Da mesma forma como observado na quantificao anterior, a adio da cultura mista
(reatores 1, 2, 5 e 6) promoveu o aumento da concentrao de fungos em uma ordem de
grandeza e ao longo do experimento, o desenvolvimento celular apresentou um perfil similar
em todos as condies testadas. O maior incremento da populao ocorreu no intervalo de 7
dias, cerca de dez vezes nos reatores adicionados com a cultura mista e cem vezes nos
sistemas sem a varivel bioaumento (3, 4 e 7), indicando que fenmenos de antagonismo
tambm ocorreram entre os fungos adicionados e a microbiota do solo.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
123

Figura 5.10 Quantificao dos Fungos Filamentosos do solo durante 60 dias nos diferentes
tratamentos sequenciais: 1- fertilizante + cossubstrato + bioaumento; 2- cossubstrato +
bioaumento; 3- fertilizante + cossubstrato; 4- cossubstrato; 5- fertilizante + bioaumento; 6-
bioaumento; 7- fertilizante; 8- sem tratamento

No intervalo de 15 dias a concentrao fngica comeou a diminuir, atingindo os
valores quantificados no solo sem tratamento aos 60 dias de experimento. Comparando-se o
intervalo, no qual a reduo da concentrao de bactrias foi observada, verificou-se que os
FF necessitaram apenas da metade desse tempo. Tal comportamento foi igualmente
observado por Ballaminut e Matheus (2007), sendo sua causa atribuda maior sensibilidade
dos fungos com relao ao esgotamento dos nutrientes. Alm disso, a reduo da
concentrao de FF pode ser tambm conferida ausncia de material ligninocelulsico no
solo e do valor do pH do meio (MEYSAMI e BAHERI, 2003).
As perdas abiticas foram determinadas na ordem de 10%. Nas condies
estabelecidas nesta investigao, isto , temperatura ambiente, com variaes de luz e na
presena de oxignio, possivelmente resultaram de fenmenos de volatilizao, foto-
1,00E+04
1,00E+05
1,00E+06
1,00E+07
1,00E+08
1 2 3 4 5 6 7 8
U
F
C
/
g

d
e

s
o
l
o
Reatores
0 7 15 30 60
Tempo (dias)
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
124
oxidao, auto-oxidao e complexao, como reportado pela literatura (IMFELD et al. 2009,
FRASER et al. 2008, BORRACINO et al. 2001, TIEDJE et al. 1999).
O nitrato de prata como alternativa de substituio de substncias txicas como azida
de sdio e sais de mercrio, se mostrou um potente bactericida e fungicida, concordando com
diversos estudos de atividade antimicrobiana contra bactrias Gram-positivas, Gram-
negativas, bem como esporos e formas vegetativas de leveduras e fungos filamentosos
(WRIGHT et al. 1999, HIDALGO et al. 1998, FURR et al. 1994). As propriedades
antimicrobianas da prata so conhecidas h mais de 7000 anos e seu mecanismo de ao
envolve ligao com as protenas e posterior coagulao. A liberao dos ons Ag
+
tambm
promove combinaes com radicais sulfidrilas, fosfato e amina, levando precipitao de
protenas, inativao de enzimas e ligaes com o DNA microbiano, culminando na morte
celular (SILVER; PHUNG e SILVER, 2006, SPACCIAPOLI et al. 2001, TAVARES, 2001,
KLASEN, 2000).

5. 7 Aplicao dos resultados do planejamento experimental

A anlise dos resultados do planejamento experimental revelou que a melhor condio
para a remoo dos HPA remanescentes no solo seria obtida com o estmulo da microbiota
utilizando concentraes menores que 0,63 mg/kg do glicerol, concordando com o estudo
recente de Mohajeri et al. (2010). Assim, foi investigado o efeito do suplemento de glicerol
nos teores de 0,32; 0,16 mg/kg e sem a adio do cossubstrato. Nessas condies, as relaes
mssicas entre o carbono dos HPA e o carbono do glicerol foram de 100:20 e 100:10,
respectivamente. Os percentuais de biodegradao dos HPA esto apresentados na Figura
5.11.

Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
125
55
60
65
70
75
0,00 0,16 0,32 0,63
Concentrao de glicerol PA (mg/kg)
B
i
o
d
e
g
r
a
d
a

o

(
%
)
Figura 5.11 Biodegradao dos HPA durante 60 dias de processo
(concentrao inicial de HPA = 8,43 mg/kg)

A reduo do teor de glicerol aumentou significativamente a remoo dos HPA,
apoiando resultados obtidos em estudos prvios utilizando o composto como cossubstrato
durante a biodegradao de compostos txicos (EASTERLING et al. 2009, CHEN; CHEN e
CHANG, 2007).
Em todas as concentraes testadas houve degradao dos HPA. Apesar do glicerol
provavelmente ter servido como fonte preferencial de carbono, a adio de 0,63 mg/kg do
composto promoveu a reduo de 64,10,5% (p<0,05) dos HPA. A concentrao que mais
estimulou o processo foi 0,32 mg/kg do cossubstrato, resultando um aumento de 12% da
biodegradao, 71,80,2 (p<0,05) e um incremento de 20% sobre o percentual verificado no
reator controle. A tentativa de reduzir a concentrao de glicerol para 0,16 mg/kg no
produziu efeito significativo, obtendo-se uma remoo de 58,30,5 (p<0,05), valor bastante
prximo ao observado no reator controle, 58,10,1% (p<0,05). Tal resultado possivelmente
se deve ao menor crescimento microbiano das linhagens responsveis pela biodegradao dos
HPA. A remoo via biorremediao intrnseca reportada na literatura como sendo um
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
126
processo lento. Contudo, ressalta-se que a dessoro trmica pode redistribuir os
contaminantes no solo, justificando o fato do percentual de remoo dos HPA obtido tenha
sido superior aos observados por outros estudos em solos no tratados previamente em UDT
(AYOTAMUNO et al. 2006, XU e OBBARD, 2004).
O resultado da quantificao de Bactrias Heterotrficas Aerbias (BHT) e de Fungos
Filamentosos (FF) no solo esto mostradas nas Figuras 5.12 e 5.13, respectivamente.


Figura 5.12 Bactrias Heterotrficas Aerbias no solo







1,00E+06
1,00E+07
1,00E+08
1,00E+09
0 7 15 30 60
U
F
C
/
g
Tempo (dias)
0,63 0,32 0,16 0,00
Concentrao de glicerol PA (mg/kg)
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
127
1,00E+04
1,00E+05
1,00E+06
1,00E+07
0 7 15 30 60
U
F
C
/
g
Tempo (dias)
0,63 0,32 0,16 0,00
Concentrao de glicerol PA (mg/kg)

Figura 5.13 Fungos Filamentosos no solo

Os teores de nitrognio e fsforo presentes no solo foram suficientes para garantir os
nutrientes necessrios para a microbiota, verificado pela estabilidade da populao microbiana
no reator sem cossubstrato. A presena de glicerol nas concentraes de 0,32 e 0,63 mg/kg
estimulou o crescimento microbiano, registrando-se o maior incremento da populao nos
primeiros sete dias do experimento, atingindo cerca de duas ordens de grandeza a partir do
valor inicial, cerca de 10
6
e 10
4
UFC/g, para BHA e FF, respectivamente. No reator contendo
0,16 mg/kg de glicerol, observou-se um discreto aumento da microbiota no mesmo perodo.
Tal fato claramente justificado pela baixa concentrao do composto.
Ao longo do tempo, a populao microbiana diminuiu e reestabeleceu uma
concentrao semelhante determinada no incio do experimento, para todas as condies de
glicerol testadas. O tempo necessrio para o reestabelecimento de BHA foi entre 30 a 60 dias,
enquanto para os FF, de 15 a 30 dias. A reduo da microbiota neste tipo de investigao
um evento normalmente previsto, podendo estar relacionada tanto ao esgotamento de
nutrientes, como presena de metablitos txicos e posteriormente ao fenmeno de
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
128
tolerncia, promotor da estabilidade da populao diante do contaminante e metablitos, os
quais so removidos atravs de vias cometablicas (IGWO-EZIKPE et al. 2010,
AYOTAMUNO et al. 2007).
O cometabolismo se caracteriza pelo aumento da taxa de transformao especfica de
um substrato, por unidade de biomassa, na presena de um composto no utilizado durante o
crescimento celular, isto , um cossubstrato (BABOSHIN; FINKELSTEIN e GOLOVLEVA,
2003). O cometabolismo a via metablica preferencial durante a degradao microbiana dos
HPA, tendo a concentrao do cossubstrato, um envolvimento direto com os efeitos
sinrgicos ou antagnicos ao processo (BAGGI, 2000).
De acordo com Spratt e Pratten (2005), diferentes formas e padres de biodegradao
dos HPA podem acontecer no solo e o nmero de anis est diretamente implicado nisso, isto
, quanto maior for o nmero de anis, mais difcil ser a remoo e por esta razo, a
biodegradao dos HPA com quatro ou mais anis pode ocorrer atravs de cometabolismo
(PIZZUL et al. 2007).
A Tabela 5.11 apresenta a degradao de cada um dos 16 HPA prioritrios da USEPA
aps 60 dias, nas diferentes concentraes de glicerol investigadas.
Dentre os HPA de baixa massa molecular (HPA-BMM), isto , com dois e trs anis,
houve praticamente 100% de remoo do naftaleno, acenafteno e acenaftileno em todas as
condies testadas. No reator sem glicerol, o mesmo percentual foi obtido tambm com o
antraceno e fluoreno. Isto se deve em funo da simplicidade do arranjo molecular desses
compostos, bem como as baixas concentraes presentes no solo. Em contrapartida,
observou-se que a presena do glicerol influenciou negativamente a biodegradao do
antraceno e do fluoreno, concordando com os achados de Bengtsson e Zerhouni (2003). Alm
disso, a degradao do fluoreno foi inversamente proporcional concentrao de glicerol, tal
como observado por Baboshin, Finklstein e Golovleva (2003), entretanto, a no remoo
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
129
destes HPA discordou dos resultados obtidos por Richnow et al. (1995), cujo estudo
identificou uma biodegradao preferencial, do fluoreno e do antraceno, nesta ordem, dentre
outros contaminantes testados.

Tabela 5.11 Percentual de biodegradao dos 16 HPA prioritrios da USEPA (p<0,05)

HPA (n de anis) T
i
(mg/kg)
Concentrao de glicerol PA (mg/kg)
0,00 0,16 0,32 0,63
Naftaleno (2) <0,100,02 >99,90,1 >99,90,1 >99.90,1 >99,90,1
Acenafteno (3) <0,100,02 >99,90,1 >99,90,1 >99,90,1 >99,90,1
Acenaftileno (3) <0,100,02 >99,90,1 >99,90,1 >99,90,1 >99,90,1
Fluoreno (3) 0,100,02 >99,90,1 92,00,1 90,00,1 80,00,1
Antraceno (3) 0,100,02 >99,90,1 50,00,1 40,00,1 40,00,1
Fenantreno (3) 0,200,02 20,00,1 32,00,1 45,00,1 40,10,1
Fluoranteno (4) 0,260,02 53,80,1 53,80,1 61,70,1 61,50,1
Pireno (4) 1,400,09 62,90,1 35,70,1 71,40,1 56,40,1
Benzo[a]antraceno (4) 0,480,02 54,20,1 58,30,1 79,20,1 68,80,1
Criseno (4) 0,720,03 47,20,1 48,60,1 72,20,1 58,30,1
Benzo[b]fluoranteno (5) 0,830,03 67,10,1 69,50,1 81,70,1 75,60,1
Benzo[k]fluoranteno (5) 0,400,02 72,50,1 75,00,1 95,00,1 92,50,1
Benzo[a]pireno (5) 0,930,04 54,80,1 57,00,1 87,10,1 83,90,1
Dibenzo[a,h]antraceno (5) 0,220,02 45,50,1 54,50,1 72,70,1 68,20,1
Benzo[g,h,i]perileno (6) 1,700,06 87,10,1 87,60,1 87,10,1 76,50,1
Indeno[1,2,3-c,d]pireno (6) 1,100,04 87,30,1 92,70,1 86,40,1 86,40,1
Biodegradao (%) _______ 58,10,1 58,30,5 71,80,2 64,10,5

HPA-A MM:BMM
- 0,190,1
*
0,020,1 0,020,1 0,060,1 0,020,1
T
i
teor inicial dos HPA no solo tratado por dessoro trmica

HPA-AMM:BMM
Variao da razo HPA de alta massa molecular e HPA de baixa massa molecular
USEPA - United States Environmental Protection Agency
* calculado aps a dessoro trmica

Gramss et al. (1999), investigando a degradao de HPA por 58 linhagens de fungos,
concluram que estes micro-organismos obtiveram mais afinidade pelos HPA com trs anis.
Considerando que a diminuio da densidade de Fungos Filamentosos iniciou na primeira
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
130
metade dos experimentos de biorremediao, revelando a maior sensibilidade do grupo,
possivelmente esta condio pode ter contribudo negativamente sobre a degradao do
fluoreno e do antraceno.
O fenantreno apresentou um baixo percentual de remoo em todos os reatores,
incluindo no controle. Isto pode ser atribudo ao fato do HPA no se encontrasse
biodisponvel. Vias et al. (2005) investigaram a suplementao de nutrientes sobre a
degradao do diversos HPA e verificaram uma degradao incompleta do fenantreno,
relacionando o achado, baixa biodisponibilidade do composto. Na situao inversa, isto ,
quando o fenantreno pde ser assimilado, a literatura reporta que a adio de cossubstratos ao
meio, favoreceu a obteno de elevadas taxas de remoo pelas clulas microbianas (TAO et
al. 2007, TOLEDO et al. 2006).
Com relao aos HPA de alta massa molecular (HPA-AMM), isto , com quatro a seis
anis, o percentual de biodegradao ficou estabelecido entre 35,7 e 95,00,1%. A reduo
de seis dos dez HPA deste grupo, benzo[a]antraceno, criseno, bezo[b]fluoranteno,
benzo[k]fluoranteno, benzo[a]pireno e dibenzo[a,h]antraceno, ocorreu em funo da
concentrao empregada de glicerol. O sucesso da biodegradao dos HPA-AMM
possivelmente pode ser atribudo maior biodisponibilidade desses compostos no solo,
favorecida pela propriedade emulsificante do glicerol (BOGAN; TRBOVIC e PATEREK,
2003). Os valores mais expressivos foram verificados nos HPA com cinco e seis anis,
resultados significativamente superiores aos descritos na literatura (LEI et al. 2005, JONER
et al. 2004, XU e OBBARD 2004).
Alm do glicerol, outros HPA podem realizar o papel de cossubstratos durante a
remoo de alguns HPA-AMM, sendo esta estratgia metablica discutida por diversos
autores (RENTZ; ALVAREZ e SCHNOOR, 2008, SARMA et al. 2004). A biodegradao do
pireno, segundo contaminante mais abundante no solo tratado na UDT, foi investigada
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
131
atravs de estudos de cintica, nos quais foi comprovada a remoo deste HPA na presena
de fluoranteno e fenantreno (HWANG e CUTRIGHT, 2003, DEAN-ROSS; MOODY e
CERNIGLIA, 2002). Isto pode explicar a razo do maior percentual de remoo do pireno,
71,40,1%, ter coincidido com o maior percentual de remoo do fluoranteno, 61,70,1% e
do fenantreno, 45,00,1%, no reator adicionado com 0,32 mg/kg de glicerol. Contudo, o
segundo maior percentual de degradao do pireno foi observado no reator sem adio de
glicerol, tornando evidente que pelo menos na remoo do pireno, a microbiota se valeu de
duas classes de cossubstratos distintas, isto , glicerol e HPA-BMM.
Dean-Ross, Moody e Cerniglia (2002) observaram que alguns HPA podem promover
a inibio da biodegradao de outros HPA, atravs da competio pelo mesmo stio de
ligao da enzima, resultando diferenas significativas nos percentuais de biodegradao
entre molculas semelhantes. Um claro exemplo deste fenmeno pde ser verificado entre o
benzo[k]fluoranteno sobre seu ismero, benzo[b]fluoranteno.
Por outro lado, a atividade enzimtica pode ser induzida pelo surgimento de produtos
da oxidao dos HPA-AMM e tais reaes requerem interaes metablicas mais complexas
entre fungos e bactrias no solo (MARGESIN et al. 2007, DE BOER et al. 2005,
MEULENBERG et al. 1997).
Cabe ressaltar que no reator sem adio de glicerol, foi observado um elevado
percentual de biodegradao de HPA-AMM, entre 45,5 e 87,30,1%, registrando-se as
maiores redues no benzo[g,h,i]perileno e indeno[1,2,3-c,d]pireno, HPA de carter
altamente persistentes. Tal observao pode ser explicada pela redistribuio dos HPA no
solo, ocorrida em funo do tratamento por dessoro trmica. Dados obtidos por Bonten,
Grotenhuis e Rulkens (1999) reforam essa hiptese. Os autores verificaram que o aumento
da disponibilidade dos HPA-AMM no solo aquecido 120C por 1 h, resultou no incremento
do percentual de biodegradao desses compostos de 9,5 para 27,0%. Sendo assim, a
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
132
redistribuio dos HPA-AMM aps o tratamento trmico, a solubilizao pelo glicerol dos
HPA com K
w/o
elevados ou ainda o conjunto desses dois fatores, podem ter favorecido ao
bioacesso e melhorado a biodisponibilidade, tendo como resultado, a remoo preferencial
dos HPA-AMM.
Bengtsson e Zerhouni (2003) estudaram o efeito do glicerol na biorremediao de um
solo tambm contaminado por 8 mg/kg dos 16 HPA e observaram uma degradao
preferencial dos HPA-AMM, a maioria entre 20 e 40%, alguns acima de 50% e nenhum
menor que 10%. Neste estudo, na melhor condio do processo, com a adio de 0,32 mg/kg
de glicerol, nenhum HPA-AMM foi removido menos do que 60%, revelando a importncia
do composto como cossubstrato no tratamento microbiolgico sequencial dos HPA residuais
no solo.
A determinao da razo das concentraes dos HPA de alta e baixa massa molecular
(HPA-AMM:HPA-BMM) consiste uma importante ferramenta para a avaliao da
biodegradao desses compostos. Atravs do clculo da variao da razo HPA-AMM:HPA-
BMM, inicial e final do bioprocesso (
HPA-AMM:BMM
) possvel determinar qual a classe de
HPA foi preferencialmente consumida pelos micro-organismos, sendo o valor positivo dessa
variao, o indicativo da utilizao dos HPA-AMM (ZHANG et al. 2009, TOLUN et al.
2006, KOHLMEIER et al. 2005).
Em solos, as comunidades microbianas esto estruturadas de uma forma que por si s,
podem eliminar os compostos xenobiticos, atravs de mecanismos que envolvem
cooperao metablica, quimiotaxia e cometabolismo. Entretanto, o suplemento do meio,
com uma fonte de carbono solvel, em concentrao no inibitria, influencia diretamente o
bioprocesso atravs da induo do crescimento e do aumento da velocidade do metabolismo
(PIZZUL et al. 2007, GRABOWSKI; BLANCHET e JEANTHON, 2005, ORTEGA-
CALVO et al. 2003, GARLAND e MILLS, 1991).
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
133
A Tabela 5.12 apresenta a taxa de biodegradao diria dos HPA, calculada em
funo da diferena da concentrao desses compostos ao longo do tempo.

Tabela 5.12 Taxa de reduo diria dos HPA (mg/kg x dia
-1
) (p<0,05)
Concentrao de glicerol PA (mg/kg)
Tempo (dias) 0,00 0,16 0,32 0,63
30 0,050,01 0,100,01 0,180,10 0,150,11
60 0,040,01 0,020,01 0,040,11 0,030,10

Baseado nas anlises das concentraes dos HPA nas amostras coletadas nos
intervalos de 0, 30 e 60 dias, verificou-se que as maiores taxas de biodegradao nos sistemas
adicionados com glicerol, ocorreram na primeira metade do bioprocesso, coincidindo com o
perodo, no qual a maior densidade microbiana foi determinada. Em funo do esgotamento
do cossubstrato, a taxa de degradao registrou uma diminuio significativa, revelando a
contribuio do glicerol no processo e concordando com resultados obtidos por Baboshin,
Finklstein e Golovleva (2003).
Em um estudo sobre o efeito de diversas fontes de carbono no desenvolvimento da
microbiota do solo, Duquenne et al. (1999) observaram que o glicerol foi capaz de estimular
o crescimento em uma concentrao de 0,07% e aps 24 h, mais de 80% do composto havia
se difundido no solo, trazendo vantagens para as clulas prximas das regies de difuso.
possvel que com o esgotamento do glicerol, outras molculas possam ter sido utilizadas
como cossubstratos, por exemplo, HPA-BMM e as fraes leves do leo, justificando a
diminuio significativa da taxa de reduo diria dos HPA, entretanto no marcando o final
do bioprocesso, como pde ser verificado no reator sem glicerol.
A Figura 5.14 apresenta as temperaturas e a umidade relativa do ar durante os
experimentos.

Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
134
15
20
25
30
1 15 30 45 60
Tempo (dias)
T
e
m
p
e
r
a
t
u
r
a

(

C
)

30
45
60
75
90
U
m
i
d
a
d
e

R
e
l
a
t
i
v
a

d
o

A
r

(
g
/
m
3
)
Ambiente Solo Umidade relativa do ar

Figura 5.14 Variao da temperatura mdia do ambiente e do solo
e da umidade relativa do ar durante o experimento

Foram observadas mdias nas temperaturas do ambiente e do solo de 24,10,5 C e
26,00,4 C (p<0,05), respectivamente, bem como uma mdia de 62,02,1 g/m
3
(p<0,05) da
umidade relativa do ar. Explica-se a pequena diferena entre as temperaturas pelo fato dos
experimentos terem sidos conduzidos em um ambiente coberto e confinado. Entretanto, o
processo de degradao no foi dificultado, em funo da atividade de micro-organismos
mesfilos.
O pH do solo registrou a mdia de 7,60,1 (p<0,05), semelhante ao valor obtido nos
testes que utilizaram ferramentas de planejamento de experimentos, 7,40,1 (p<0,05),
ressaltando que o pH estava dentro da faixa considerada tima para a biorremediao.
A umidade do solo continuou mantida dentro da faixa entre 70 e 80% da capacidade
de reteno de gua, correspondendo valores entre 15,0 e 17,20,3% (p<0,05). O valor mdio
da umidade observada nos experimentos foi de 17,00,2% (p<0,05). Como na fase anterior, a
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
135
faixa entre 15 e 20%, considerada ideal na biodegradao de hidrocarbonetos do petrleo, foi
mantida.
O papel da umidade foi muito importante para a biodegradao dos HPA. A adio de
gua estimula a microbiota e amplia a interface slido/lquido, aumentando a difuso de
oxignio e a razo de transferncia de massa. Alm disso, a gua compete pelo mesmo stio
de adsoro dos HPA no solo, permitindo um incremento no grau de remoo dos HPA
(BENGTSSON e ZERHOUNI, 2003).

5. 7. 1 Testes de fitotoxicidade nos solos biorremediados

O tratamento microbiolgico sequencial promoveu uma reduo significativa do
efeito fitotxico nas espcies testadas, Cucumis anguria, Allium porrum e Cucumis melo. A
Tabela 5.13 apresenta os resultados do teste da Germinao Relativa das Sementes (GRS).

Tabela 5.13 Germinao Relativa das Sementes aps biorremediao (p<0,05)
Plantas
Solo
tratado na
UDT
Solo biorremediado
Concentrao de glicerol PA (mg/kg)
0,16 0,32 0,63
Allium porrum 72,27,9% 71,17,8% 76,08,4% 70,77,8%
Cucumis anguria 75,98,3% 70,97,8% 65,77,2% 82,59,1%
Cucumis melo 107,711,8% 108,812,0% 105,81,2% 103,011,3%
UDT Unidade de Dessoro Trmica

O teste da GRS revelou um perfil similar ao obtido com o solo tratado na UDT. Tal
fato pode ser justificado pelas baixas concentraes dos HPA presentes no solo. Chouychai et
al. (2007) verificaram que baixos teores de HPA no constituem um limitante externo sobre o
processo da germinao, logo, a concentrao residual dos HPA remanescentes ao tratamento
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
136
trmico proporcionou o estabelecimento de um meio, no qual, independentemente da
manuteno ou reduo da concentrao dos HPA, a germinao das sementes no foi
alterada.
Os resultados do teste da Elongao Relativa das Razes (ERR) esto apresentados na
Tabela 5.14.

Tabela 5.14 Elongao Relativa das Razes aps biorremediao (p<0,05)
Plantas
Solo
tratado na
UDT
Solo biorremediado
Concentrao de glicerol PA (mg/kg)
0,16 0,32 0,63
Allium porrum 56,25,7% 60,36,6% 168,518,5% 148,216,3%
Cucumis anguria 66,37,3% 74,68,2% 128,014,0% 84,09,2%
Cucumis melo 68,27,5% 69,47,6% 126,813,9% 86,79,5%
UDT Unidade de Dessoro Trmica

Houve um aumento significativo da ERR aps o emprego da biorremediao nos
solos tratados na UDT. O teste confirmou que a elongao da raiz pde seguramente ser
utilizada como indicador do efeito fitotxico dos HPA. O aumento da ERR coincidiu com a
reduo da concentrao desses compostos. Os ndices elevados do ERR aps tratamentos
microbiolgicos so bastante divulgados na literatura e confirmam a sensibilidade do teste
como um indicativo da reduo dos hidrocarbonetos no solo (JUHASZ et al. 2010, HAMDI
et al. 2007, DORN e SALANITRO, 2000, DORN et al. 1998).
De acordo com Heitkamp, Franklin e Cerniglia (1988), os metablitos da oxidao
dos HPA podem ter caractersticas qumicas e toxicolgicas nicas, implicando na
necessidade de critrios seguros serem escolhidos para o diagnstico de toxicidade desses
contaminantes. Neste contexto, o clculo do ndice de Germinao (I
G
), por combinar dados
sobre a germinao das sementes com a elongao da raiz, serve como um parmetro
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
137
decisivo. Segundo Paradelo et al. (2008), baseados no valor do I
G
, a fitotoxicidade de um
composto pode ser classificada em trs tipos: alta (I
G
< 50%), moderada (I
G
= 50-80%) e
nenhuma (I
G
> 80%).
A Tabela 5.15 apresenta os valores de I
G
nas condies testadas e os compara com as
amostras de solo contaminado e tratado pela UDT.

Tabela 5.15 - ndice de Germinao das sementes nas amostras de solo (p<0,05)
Plantas
Dessoro trmica Solo biorremediado
Concentrao de glicerol PA (mg/kg)
Antes

Depois
0,16 0,32 0,63
Allium porrum 16,718,3 40,64,5 42,94,7 128,014,0 104,811,5
Cucumis anguria 0,20,1 50,35,5 52,95,8 84,19,3 69,37,6
Cucumis melo 47,25,2 73,58,1 75,58,3 134,214,7 89,39,8
Classificao da fitoxicidade: () alta, () moderada e () nenhuma.

Uma observao da Tabela 5.15 fica evidente a necessidade de um tratamento
sequencial, aps a operao de dessoro trmica. Apesar do aumento significativo do I
G
nas
plantas testadas depois do tratamento trmico, a fitotoxicidade dos compostos residuais ainda
se encontrava, de moderada (C. anguria e C. melo) alta (A. porrum). Na melhor condio
de tratamento microbiolgico sequencial, 0,32 mg/kg de glicerol PA, foi observada a
eliminao do efeito fitotxico. Em alguns casos, o I
G
alcanou valores acima de 100%,
indicativo da presena de nutrientes no extrato do solo (PARADELO et al. 2008).
Por outro lado, na menor concentrao de substrato testada, 0,16 mg/kg, observou-se
um resultado similar ao verificado na amostra de solo tratado por dessoro trmica. Este
resultado provavelmente est relacionado baixa concentrao do cossubstrato, o qual no
produzindo efeito significativo sobre a microbiota e consequentemente, sobre a degradao
dos HPA, manteve as condies similares s estabelecidas aps o tratamento do solo na UDT.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
138
No outro extremo, com a concentrao de glicerol em 0,63 mg/kg, apenas C. anguria
apresentou I
G
menor que 80%. C. anguria foi o vegetal mais sensvel nos testes, sendo assim,
o melhor bioindicador neste trabalho.
A concentrao de 0,63 mg/kg de glicerol pode ter contribudo para a toxicidade
moderada, verificada no teste com C. anguria. Esta hiptese pode ser sustentada nos
resultados obtidos por Maila e Cloete (2002). Os autores observaram um efeito negativo na
reduo do teor dos HPA-BMM durante o tratamento de solos contaminados por HPA
quando 0,60 mg/kg de agentes emulsificantes foram adicionados. Tal resultado foi atribudo
ao fato do emulsificante ter bloqueado a absoro de luz pelo HPA, impedindo as reaes de
foto-oxidao. Esta afirmao complementa os achados de Henner et al. (1999), que ao
estudarem o efeito fitotxico relacionado massa molecular dos HPA, concluram que a
toxicidade pode ser aumentada quando os compostos com at trs anis no so removidos.
Por serem mais volteis, essas molculas podem contribuir para o aumento da inibio da
germinao e do crescimento das plantas, diferente dos HPA-AMM, compostos menos
volteis. importante destacar que o fenantreno e o antraceno, HPA de trs anis,
apresentaram baixos percentuais de biodegradao neste estudo, entre 20,1 e 50,00,1%.

5. 8 Biorremediao utilizando glicerol bruto

Uma das rotas para obteno de glicerol a fabricao de biodiesel. No processo em
escala industrial, esse composto produzido em grande quantidade e considerando a situao
do mercado mundial, bem como a presena de ons potssio, sdio e cloreto, o material tem
sido tratado como resduo. No entanto, o emprego do composto em diversos processos
industriais vem aumentando ao longo dos anos (DA SILVA; MACK; CONTIERO, 2009).
Dessa forma, buscou-se uma rota biotecnolgica para o reuso desse resduo com o intuito de
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
139
agregar valor ao glicerol bruto, realizando testes para estudar a possvel substituio do
glicerol PA, na biorremediao de solo contaminado com HPA.
Os percentuais de biodegradao dos HPA com uso de glicerol bruto e com uso de
glicerol PA esto apresentados na Figura 5.15.











Figura 5.15 Biodegradao dos HPA em presena de glicerol de diferentes origens
durante 60 dias de processo (concentrao inicial de HPA = 8,43 mg/kg)

A adio de 0,16, 0,32 e 0,63 mg/kg de glicerol bruto facilitou a remoo dos HPA
em 59,40,1, 68,00,1% e 63,90,1%, respectivamente (p<0,05). Observou-se um perfil de
degradao dos HPA semelhante ao obtido com o glicerol PA.
Ao longo de 60 dias, o pH do solo foi de 7,40,1 (p<0,05), enquanto a umidade do
solo foi mantida em uma mdia de 17,00,1% (p<0,05).
A quantificao das populaes microbianas est apresentada nas Figuras 5.16 e 5.17.


55
60
65
70
75
0,16 0,32 0,63
B
i
o
d
e
g
r
a
d
a

o

(
%
)
Glicerol PA Glicerol Bruto
Cossubstrato (mg/kg)
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
140
Figura 5.16 Bactrias Heterotrficas Aerbias no solo

Figura 5.17 Fungos Filamentosos no solo


1,00E+06
1,00E+07
1,00E+08
1,00E+09
0 7 15 30 60
U
F
C
/
g
Tempo (dias)
GL 0,32 mg/kg GB 0,32 mg/kg 0,00 mg/kg GL 0,16 mg/kg GB 0,16 mg/kg
Glicerol PA (GL) e Glicerol bruto (GB)
1,00E+04
1,00E+05
1,00E+06
1,00E+07
0 7 15 30 60
U
F
C
/
g
Tempo (dias)
GL 0,32 mg/kg GB 0,32 mg/kg 0,00 mg/kg GL 0,16 mg/kg GB 0,16 mg/kg
Glicerol PA (GL) e Glicerol bruto (GB)
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
141
A presena de glicerol bruto estimulou a microbiota, cujo desenvolvimento apresentou
um perfil semelhante ao observado quando da utilizao do glicerol PA, isto , um maior
incremento da populao nos primeiros sete dias do experimento, o desenvolvimento celular
em funo da concentrao do cossubstrato e o reestabelecimento da populao aos valores,
em mdia, obtidos no solo sem tratamento sequencial, 60 dias para as BHA e 30 dias para FF.
O uso de glicerol bruto impediu que a densidade celular atingisse os valores obtidos com
glicerol PA, ao longo de 30 dias de experimento, mantendo-se cerca de at 10 vezes inferior e
sendo mais perceptvel nas BHA.
De acordo com Bajpai e Tyagi (2006), a inibio de crescimento, mesmo que de
forma sutil, ocorre em funo das impurezas do glicerol bruto. Em um recente estudo, o sdio
foi identificado como o principal responsvel do efeito negativo sobre a taxa de crescimento
da biomassa durante a produo de bioplsticos (CAVALHEIRO et al. 2009).
Em certos casos, a inibio por sdio pode ser maior do que a promovida pelo
potssio, metal utilizado como catalisador da reao de transesterificao, na qual o glicerol
bruto deste estudo foi obtido. As concentraes de sdio e potssio determinadas neste
composto foram de 0,94 e 50,7 mg/g, respectivamente, dessa forma, foi atribudo ao potssio,
a possvel causa da reduo do crescimento microbiano, cuja concentrao encontrava-se 54
vezes superior ao sdio. importante ressaltar que, apesar da inibio da microbiota pelas
impurezas do glicerol bruto, no houve alteraes significativas sobre o percentual de
biodegradao dos HPA, justificado pelo pequeno volume de cossubstrato adicionado aos
reatores.
A utilizao do glicerol bruto tambm contribuiu para a reduo da fitotoxicidade
aps o tratamento microbiolgico sequencial. A Tabela 5.16 apresenta o I
G
obtido com as
plantas testadas.

Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
142
Tabela 5.16 - ndice de Germinao das sementes nas amostras de solo (p<0,05)
Plantas
Dessoro trmica Solo biorremediado
Antes Depois Glicerol PA
*
Glicerol bruto
*

Allium porrum 16,718,3 40,64,5 128,014,0 121,913,4
Cucumis anguria 0,20,1 50,35,5 84,19,3 85,19,4
Cucumis melo 47,25,2 73,58,1 134,214,7 101,911,2
Classificao da fitoxicidade: () alta, () moderada e () nenhuma.
* Concentrao = 0,32 mg/kg

Observando a Tabela 5.16 possvel perceber similaridades do tratamento com a
adio de glicerol PA como cossubstrato, isto , a adio de 0,32 mg/kg de glicerol bruto,
seguida da biodegradao dos HPA residuais, resultou na eliminao do efeito fitotxico.
Vale ressaltar que apesar do alto teor de potssio e de outras impurezas no glicerol bruto,
foram obtidos valores do I
G
acima de 100% em duas das trs plantas testadas, A. porrum e C.
melo.
A utilizao do glicerol bruto como cossubstrato garantiu uma estratgia eficiente
para a remoo dos HPA, bem como da reduo dos efeitos txicos do solo sobre os vegetais
estudados. A atribuio de funcionalidade para o glicerol bruto reflete na questo de
valorizao do produto e contribui positivamente para o equacionamento de uma importante
problemtica contempornea, relacionada ao reuso de resduos de novos processos
industriais.






Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
143
CAPTULO 6
CONCLUSES

A partir dos resultados verificados nas condies experimentais estabelecidas por este
estudo, foram obtidas as seguintes concluses:
O contaminante do solo, resduo oleoso de fundo da cmara de vcuo, aliado ao longo
histrico de contaminao provocaram a inibio da microbiota autctone e desta
forma, dificultaram o processo natural de remoo do poluente, legitimando a escolha
da dessoro trmica como estratgia para a remediao do solo contaminado.
Apenas do ponto de vista fsico-qumico, a dessoro trmica foi um tratamento
eficiente. Alm disso, no foram detetadas dioxinas e furanos nas amostras de solo
tratado na Unidade de Dessoro Trmica (UDT), indicativo da eficcia do sistema
de tratamento de efluentes gasosos da unidade.
A remoo do resduo oleoso de fundo da cmara de vcuo no solo revelou a
propriedade bacteriosttica e fungisttica do contaminante. A comparao da
quantificao de bactrias heterotrficas aerbias e dos fungos filamentos no solo
impactado e no solo tratado na UDT apontou diferenas significativas na
concentrao celular nos grupos microbianos estudados.
Embora observada no solo uma reduo significativa dos teores do contaminante,
aps o tratamento na UDT, o solo apresentou concentraes residuais de
Hidrocarbonetos Policclicos Aromticos (HPA), as quais promoveram um efeito
fitotxico de moderado a alto, sobre Cucumis anguria, Cucumis melo e Allium
porrum, revelando que do ponto de vista biolgico, o solo no estava tratado.
Cucumis anguria foi o melhor bioindicador entre as espcies vegetais testadas.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
144
A verificao do efeito fitotxico dos compostos residuais, presentes em baixas
concentraes no solo tratado pela UDT, indicam a necessidade da investigao de
padres biolgicos durante avaliao da qualidade de solos remediados por dessoro
trmica. Os resultados do teste de fitotoxicidade ressaltam esta carncia e propem
um debate para a incluso de tal parmetro em futuras legislaes.
O tratamento microbiolgico sequencial por bioestmulo foi eficiente e a melhor
estratgia de remoo biolgica dos HPA residuais foi obtida com a adio de 0,32
mg/kg de glicerol PA.
Resultados similares foram obtidos com a adio de 0,32 mg/kg de glicerol bruto.
Neste contexto, o reuso desse resduo da indstria do biodiesel agrega valor ao
composto e torna o processo economicamente vivel. A no remoo das impurezas
originadas durante o processo de transesterificao, em razo do pouco volume
demandado do cossubstrato, evidencia tal afirmao. Alm disso, futuros impactos ao
solo em funo do acmulo de potssio proveniente do catalisador, podem ser
evitados ao empregar-se glicerol produzido em operaes ditas ecologicamente
corretas da fabricao do biodiesel.
Observou-se uma biodegradao preferencial pelos HPA de alta massa molecular
quando utilizados ambos os cossubstratos, glicerol PA e glicerol bruto.
O bioaumento no surtiu efeito significativo na biodegradao de HPA residuais.
Aps o tratamento microbiolgico secundrio o efeito fitotxico dos extratos do solo
sob Cucumis anguria, Cucumis melo e Allium porrum foi eliminado.




Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
145

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

ABNT ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 7181. Solo
Anlise Granulomtrica. Rio de Janeiro: ABNT, 1984. 13p.
ABNT ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 10004. Resduos
Slidos Classificao. Rio de Janeiro: ABNT, 2004. 71p.
ABU-ZREIG, M. M.; AL-AKHAS, N. M.; ATTOM, M. F. Influence of heat treatment on
behavior of clayey soils. Appl Clay Sci. Amsterdam. v. 20, n. 3, p. 129-135, 2001.
ACEA, M. J.; CARBALLAS, T. Microbial fluctuations after soil heating and organic
amendment. Bioresour Biotechnol. Barking. v. 67, n. 1, p. 65-71, 1999.
ALAPPAT, B. J.; DELEBARRE, A.; PRE, P.; CHANDEL, M. K.; DELVINQUIER, V.;
GARABETIAN, J-C.; POUX, D.; GONZALES, J.; MARCHAND, B. Thermal
remediation of oil polluted sands from black tides: the fluidized bed option. Chem Eng J.
Lausanne. v. 129, n. 1-3, p. 143-151, 2007.
ALDN, L.; DEMOLING, F.; BTH, E. Rapid method of determining factors limiting
bacterial growth in soil. Appl Environ Microbiol. Washington. v. 67, n. 4, p. 1830-1838,
2001.
ALEXANDER, M. Aging, bioavailability, and overestimation of risk from environmental
pollutants. Environ Sci Technol. Easton. v. 34, n. 20, p. 4259-4265, 2000.
ALEXANDER, R. R.; ALEXANDER, M. Bioavailability of genotoxic compounds in soil.
Environ Sci Technol. Easton. v. 34, n. 8, p. 1589-1593, 2000.
AMELLAL, N.; PORTAL, J-M.; BERTHELIN, J. Effect of soil structure on the
bioavailability of polycyclic aromatic hydrocarbons within aggregates of a contaminated
soil. Appl Geochem. Oxford. v. 16, n. 14, p. 1611-1619, 2001.
ANASTASI, A.; COPPOLA, T.; PRIGIONE, V.; VARESE, G. C. Pyrene degradation and
detoxification in soil by a consortium of basidiomycetes isolated from compost: role of
laccases and peroxidases. J Hazard Mat. Amsterdam. v. 165, n. 1-3, p. 1229-1233, 2009.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
146
ANDERSON, A. G. The media politics of oil spills. Spill Sci Technol Bull. Amsterdam. v. 7,
n. 1-2, p. 7-15, 2002.
ARARUNA Jr., J. T.; PORTES, V. L. O.; SOARES, A. P. L.; SILVA, M. G.; STHEL, M. S;
SCHRAMM, D. U.; TIBANA, S.; VASGAS, H. Oil spills debris clean up by thermal
desorption. J Hazard Mat. Amsterdam. v. 110, n. 1-3, p. 161-171, 2004.
ARAJO, A. S. F.; MONTEIRO, R. T. R. Plant bioassays to assess toxicity of textile sludge
compost. Sci Agric. Piracicaba. v. 62, n. 3, p. 286-290, 2005.
ASTM - AMERICAN SOCIETY FOR TESTING MATERIALS. Method D4052-09.
Standard test method for density, relative density, and API gravity of liquids by digital
density meter. Book of Standards. v. 05.02. West Conshohocken: ASTM, 2005. 8p.
ASTM - AMERICAN SOCIETY FOR TESTING MATERIALS. Method D5185-09.
Standard test method for determination of additive elements, wear metals and
contaminants in used lubricating oils and determination of selected elements in base oils
by inductively coupled plasma atomic emission spectrometry (ICP-AES). Book of
Standards. v. 05.02. West Conshohocken: ASTM, 2005. 8p.
ASTM - AMERICAN SOCIETY FOR TESTING MATERIALS. Method E70-07. Standard
test method for pH of aqueous solutions with the glass electrode. Book of Standards.
v.15.05. West Conshohocken: ASTM, 2005. 6p.
ATHALYE, S. K.; GARCIA, R. A.; WEN, Z. Use of biodiesel-derived crude glycerol for
producing eicosapentaenoic acid (EPA) by the fungus Pythium irregulare. J Agri Food
Chem. Washington. v. 57, n. 7, p. 2739-2744, 2009.
ATLAS, R. M. Microbial degradation of petroleum hydrocarbons: an environment
perspective. Microbiol Rev. Washington. v. 45, n. 1, p. 180-209, 1981.
AYOTAMUNO, M. J.; KOGBARA, K. B.; OGAJI, S. O. T.; PROBERT, S. P.
Bioremediation of a crude oil polluted agricultural-soil at Port Harcourt, Nigeria. Appl
Energy. Oxford. v. 83, n. 11, p. 1249-1247, 2006.
AYOTAMUNO, M. J.; OKPARANMA, R. N.; NWENEKA, E. K.; OGAJI, S. O. T.;
PROBERT, S. D. Bio-remediation of a sludge containing hydrocarbons. Appl Energy.
Barking. v. 84, n. 9, p. 936-943, 2007.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
147
BABOSHIN, M.; FINKLSTEIN, Z. I.; GOLOVLEVA, L. A. Fluorene cometabolism by
Rhodococcus rhodochrous and Pseudomonas fluorescens cultures. Microbiology.
Washington. v. 72, n. 2, p. 194-198, 2003.
BAEK, K-H.; KIM, H-S.; OH, H-M.; YOON, B-D.; KIM, J.; LEE, I-S. Effect of crude oil, oil
components, and bioremediation on plant growth. J Environ Sci Health. Philadelphia. v.
39, n. 9, p. 2465-2472, 2004, (suplemento).
BAEK, K-H.; YOON, B-D.; KIM, B-H.; CHO, D-H.; LEE, I-S.; OH, H-M.; KIM, H-S.
Monitoring of microbial diversity and activity during bioremediation of crude oil-
contaminated soil with different treatments. J Microbiol Biotechnolol. Seoul. v. 17, n. 1,
67-73, 2007.
BAGGI, G. Ecological implications of synergistic and antagonistic interactions among growth
and non growth analogs present in mixture. Ann Microbiol. Milano. v. 50, n. 2, p. 103-
115, 2000.
BAJPAI, D.; TYAGI, V. K. Biodiesel: source, production, composition, properties and its
benefits. J Oleo Sci. Tokyo. v. 55, n. 10, p. 487-502, 2006.
BALLAMINUT, N.; MATHEUS, D. R. Characterization of fungal inoculum used in soil
bioremediation. Braz J Microbiol. So Paulo. v. 38, n. 2, p. 248-252, 2007.
BAIRD, C. Qumica ambiental. 2 ed. Porto Alegre: Artmed, 2008. 622p.
BARRIOS, E. Soil biota, ecosystems services and land productivity. Ecol Econ. Amsterdam.
v. 64, n. 5-6, p. 283-296, 2007.
BATEMAN, J. H.; SPEER, B.; FEDUIK, L.; HARTLINE, R. A. Naphthalene association and
uptake in Pseudomonas putida. J Bacteriol. Washington. v. 166, n. 1, p. 155-161, 1986.
BATISTA, S. B.; MOUNTEER, A. H.; AMORIM, F. R.; TTOLA, M. R. Isolation and
characterization of biosurfactant/bioemulsifier-producing bacteria from petroleum
contaminated sites. Bioresour Technol. Barking. v. 97, n. 6, p. 868-875, 2006.
BECKER, P. M. About the order in aerobic heterotrophic microbial communities from
hydrocarbon-contaminated soils. Int Biodeterior Biodegradation. Barking. v. 43, n. 3, p.
135-146, 1999.
BEN SAID, O.; GOI-URRIZA, M. S.; EL BOUR, M.; DELLARI, M.; AISSA, P.; DURAN,
R. Characterization of aerobic polycyclic aromatic hydrocarbon-degrading bacteria from
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
148
Bizerte lagoon sediments, Tunisia. J App Microbiol. Oxford. v. 104, n. 4, p. 987-997,
2008.
BENGTSSON, E.; ZERHOUNI, P. Effects of carbon substrate enrichment and DOC
concentration on biodegradation of PAHs in soil. J Appl Microbiol. Oxford. v. 94, n. 4, p.
608-617, 2003.
BENTO, F. M.; CAMARGO, F. A. O.; OKEKE, B. C.; FRANKENBERGER, W. T.
Comparative of bioremediation of soils contaminated with diesel oil by natural
attenuation, biostimulation and bioaugmentation. Bioresour Technol. Barking. v. 96, n. 9,
p. 1049-1055, 2005.
BIACHE, C.; MANSUY-HUAULT, L.; FAURE, P.; MUNIER-LAMY, C.; LEYVAL, C.
Effects of thermal desorption on the composition of two coking plant soils: impact of
solvent extractable organic compounds and metal bioavailability. Environ Pollut. Barking.
v. 156, n. 3, p. 671-677, 2009.
BODK, I.; BLKOV, A.; SEDLEK, S.; HUTAN, M. Biodiesel waste as source of
organic carbon for municipal WWTP denitrification. Bioresour Technol. Amsterdam. v.
100, n. 8, p. 2452-2456, 2009.
BOGAN, B. W.; TRBOVIC, V.; PATEREK, J. R. Inclusion of vegetable oils in Fentons
chemistry for remediation of PAH-contaminated soils. Chemosphere. Oxford. v. 50, n. 1,
p. 15-21, 2003.
BOJES, H. K.; POPE, P. G. Characterization of EPAs 16 priority pollutant polycyclic
aromatic hydrocarbons (PAHs) in tank bottom solids and associated contaminated soils at
an exploration and production sites in Texas. Regul Toxicol Pharmacol. New York. v. 47,
n. 3, p. 288-295, 2007.
BONTEN, L. T. C.; GROTENHUIS, T. C.; RULKENS, W. H. Enhancement of PAH
biodegradation in soil by physicochemical pretreatment. Chemosphere. Oxford. v. 38, n.
15, p. 3627-3636, 1999.
BOONCHAN, S.; BRITZ, M. L.; STANLEY, G. A. Degradation and mineralization of high-
molecular-weight polycyclic aromatic hydrocarbons by defined fungal-bacterial
cocultures. Appl Environ Microbiol. Washington. v. 66, n. 3, p. 1007-1019, 2000.
BOOPATHY, R. Factors limiting bioremediation technologies. Bioresour Technol. Barking.
v. 74, n. 1, p. 63-67, 2000.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
149
BORRACCINO, R.; KHAROUNE, M.; GIOT, R.; AGATHOS, S. N.; NYNS, E-J.;
NAVEAU, H. P.; PAUSS, A. Abiotic transformation of cathecol and 1-naphtol in aqueous
solution influence of environmental factors. Wat Res. Oxford. v. 35, n. 15, p. 3729-
3737, 2001.
BOSSERT, I.; KACHEL, W. M.; BARTHA, R. Fate of hydrocarbons during oily sludge
disposal in soil. Appl Environ Microbiol. Washington. v. 47, n. 4, p. 763-767, 1984.
BOUCHEZ, T.; PATUREAU, D.; DABERT, P.; JURETSCHKO, S.; DOR, J.;
DELGENS, P.; MOLETTA, R.; WAGNER, M. Ecological study of bioaugmentation
failure. Environ Microbiol. Oxford. v. 2, n. 2, p. 179-190, 2000.
BOURNAY, L.; CASANAVE, D.; DELFORT, B.; HILLION, G.; CHODORGE, J. A. New
heterogeneous process for biodiesel production: a way to improve the quality and the
value of the crude glycerin produced by biodiesel plants. Catal Today. Amsterdam. v.
106, n. 1-4, p. 190-192, 2005.
BRASIL. Conselho Nacional do Meio Ambiente. Resoluo n 420 de 28 de dezembro de
2009. Dispe sobre critrios e valores orientadores de qualidade do solo quanto presena
de substncias qumicas e estabelece diretrizes para o gerenciamento ambiental de reas
contaminadas por essas substncias em decorrncia de atividades antrpicas. Dirio
Oficial da Unio, Braslia, DF, 30 dez 2009.
BRASIL. Conselho Nacional do Meio Ambiente. Resoluo n 316 de 29 de outubro de 2002.
Dispe sobre procedimentos e critrios para o funcionamento de sistemas de tratamento
tcnico de resduos. Dirio Oficial da Unio, Braslia, DF, 20 nov 2002.
BRASIL. Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento. Instruo Normativa n 62, de
26 de agosto 2003. Oficializa os mtodos analticos oficiais para anlises microbiolgicas
para controle de produtos de origem animal e gua. Dirio Oficial da Unio, Braslia-DF,
18 set 2003.
BRASIL. Ministrio das Relaes Exteriores. Decreto n 6583 de 29 de setembro de 2008.
Promulga o acordo ortogrfico da lngua portuguesa, assinado em Lisboa, em 16 de
dezembro de 1990. Dirio Oficial da Unio, Braslia-DF, 30 set 2008.
BS - BRITISH STANDARDS. Method BS 5711-3. Methods for sampling and test of
glycerol. Determination of glycerol content. 30 Nov 1979, 6p.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
150
BS - BRITISH STANDARDS. Method BS 5711-5. Methods of sampling and test for
glycerol. Determination of alkalinity or acidity: volumetric method. 30 Nov 1979, 2p.
BUCAL, V.; SAITO, H., HOWARD, J. B.; PETERS, W. A. Thermal treatment of fuel oil-
contaminated soils under rapid heating conditions. Environ Sci Technol. Easton. v. 28, n.
11, p. 1801-1807, 1994.
______. Products compositions and release rates from intense thermal treatment of soils. Ind
Eng Chem Res. Washington. v. 35, n. 8, p. 2725-2734, 1996.
BUGG, T.; FOGHT, J. M.; PICKARD, M. A.; GRAY, M. R. Uptake and active efflux of
polycyclic aromatic hydrocarbons by Pseudomonas fluorescens LP6a. Appl Environ
Microbiol. Washington. v. 66, n. 12, p. 5387-5392, 2000.
BURMLLE, M.; HANSEN, L. H.; SRENSEN, B. J. Establishment and early succession of
a multispecies biofilm composed of soil bacteria. Microb Ecol. New York. v. 54, n. 2, p.
352-362, 2007.
BUSHNELL, L. D.; HAAS, H. F. The utilization of certain hydrocarbons by microorganisms.
J Bacteriol. Washington. v. 41, n. 5, p. 653-673, 1941.
CAI, Q-Y.; MO, C-H.; WU, Q-T.; ZENG, Q-Y.; KATSOYIANNIS, A. Bioremediation of
polycyclic aromatic hydrocarbons contaminated sewage sludge by different composing
process. J Harzard Mat. Amsterdam. v. 142, n. 1-2, p. 535-542, 2007.
CANET, R.; BIRNSTINGL, J. G.; MALCOLM, D. G.; LOPEZ-REAL, J. M.; BECK, A. J.
Biodegradation of polycyclic aromatic hydrocarbon (PAHs) by native microflora and
combinations of white-rot fungi in a coal-tar contaminated soil. Bioresour Technol.
Barking. v. 76, n. 2, p. 113-117, 2001.
CARMICHAEL, L. N.; PFAENDER, F. K. The effect of inorganic and organic supplements
on the microbial degradation of phenanthrene and pyrene in soils. Biodegradation.
Dordrecht. v. 8, n. 1, p. 1-13, 1997.
CAVALHEIRO, J. M. B. T.; DE ALMEIDA, M. C. M. D.; GRANDFILS, C.; DA
FONSECA, M. M. R. Poly(3-hydroxybutyrate) production by Capriavidus necator using
waste glycerol. Process Biochem. Barking. v. 44, n. 5, p. 509-515, 2009.
CEBULSKA-WASILEWSKA, A.; PAWYK, I.; PANEK, A.; WIECHE, A.; KALINA, I.;
POPOV, T.; GEORGIEVA, T.; FARMER, P. B. Exposure to environmental polycyclic
aromatic hydrocarbons: influence on cellular susceptibility to DNA damage (sampling
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
151
Kosice and Sofia). Mut Res Fundam Mol Mech Mutagen. Amsterdam. v. 620, n. 1-2, p.
145-154, 2007.
EJKOV, A.; MASK, J.; JIRK, V. Use of mineral nutrients and surface-active
substances in a biodegradation process modulation. Folia Microbiol. Praha. v. 42, n. 5, p.
513-516, 1997.
CELANI, A.; VERGASSOLA, M. Bacterial strategies for chemotaxis reponse. PNAS.
Washington. v. 107, n. 4, p. 1391-1396, 2010.
CHAILLAN, F.; CHANEAU, C. H.; POINT, V.; SALIOT, A.; OUDOT, J. Factors
inhibiting bioremediation of soil contaminated with weathered oils and drill cuttings.
Environ Pollut. Barking. v. 144, n. 1, p. 255-265, 2006.
CHAILLAN, F.; LE FLCHE, A.; BURY, E.; PHANTAVONG, Y-H.; GRIMONT, P.;
SALIOT, A.; OUDOT, J. Identification and biodegradation potential of tropical aerobic
hydrocarbon-degrading microorganisms. Res Microbiol. Paris. v. 155, n. 7, p. 587-595,
2004.
CHANEAU, C. H.; ROUGEUX, G.; YPRMIAN, C.; OUDOT, J. Effect of nutrient
concentration on the biodegradation of crude oil and associated microbial populations in
soil. Soil Biol Biochem. New York. v. 37, n. 8, p. 1490-1497, 2005.
CHAUAN, A.; FAZLURRAHMAN, OAKESHOTT, J. G.; JAIN, R. K. Bacterial metabolism
of polycyclic aromatic hydrocarbons: strategies for bioremediation. Indian J Microbiol.
Calcutta. v. 48, n. 1, p. 95-113, 2008.
CHEN, B-Y.; CHEN, W-M.; CHANG, J-S. Optimal biostimulation strategy for phenol
degradation with indigenous rhizobium Ralstonia taiwanensis. J Hazard Mat. Amsterdam.
v. 139, n. 2, p. 232-237, 2007.
CHEN, K. F.; KAO, C. M., WANG, J. Y., CHEN, T. Y.; CHIEN, C. C. Microbial growth and
resuscitation alter community structure after perturbation. J Harzard Mat. Amsterdam. v.
125, n. 1, p. 10-16, 2005, (suplemento).
CHEN, S-C.; LIAO, C-M. Health risk assessment on human exposed to environmental
polycyclic aromatic hydrocarbons pollution sources. Sci Total Environ. Amsterdam. v.
366, n. 1, p. 112-123, 2006.
CHEREMISINOFF, N. P.; ROSENFELD, P. The petroleum industry. In: CHEREMISINOFF,
N. P.; ROSENFELD, P. Handbook of pollution prevention and cleaner production - Best
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
152
practices in the petroleum industry. 1
st
. ed. Norwich: William Andrew, 2009. Chapter 1, p.
1-97.
CHOUYCHAI, W.; THONGKUKIATKUL, A.; UPATHAM, S.; LEE, H.;
POKETHITIYOOK, P.; KRUATRACHUE, M. Phytotoxicity assay of crop plants to
phenanthrene and pyrene contaminants in acidic soil. Environ Toxicol. New York. v. 22,
n. 6, p. 597-604, 2007.
CORDAZZO, C. V; ARACAMA, C. V. Influncia do dimorfismo de sementes de Senecio
crassiflorus (Poir.) DC (Asteraceae) na germinao e crescimento das plntulas.
Atlntica. Rio Grande. v. 20, n. 1, p. 121-130, 1998.
CORNELISSEN, G.; RIGTERINK, H.; FERDINANDY, M. M. A.; VAN NOORT, P. C. M.
Rapidly desorbing fractions of PAHs in contaminated sediments as a predictor of the
extent of bioremediation. Env Sci Technol. Easton. v. 32, n. 7, p. 966-970, 1998.
CRAWFORD, J. W.; HARRIS, J. A.; RITZ, K.; YOUNG, I. M. Towards an evolutionary
ecology of life in soil. Trends Ecol Evol. Barking. v. 20, n. 2, p. 81-87, 2005.
CUNHA, C. E. S. C. P. Gesto de resduos perigosos em refinarias de petrleo. 2009.
Dissertao (Mestrado em Engenharia Ambiental) Universidade do Estado do Rio de
Janeiro, Rio de Janeiro, 2009.
DANNIBALE, A.; ROSETTO, F.; LEONARDI, V.; FEDERICI, F.; PETRULCIOLI, M.
Role of autochthonous filamentous fungi in bioremediation of a soil historically
contaminated with aromatic hydrocarbons. Appl Environ Microbiol. Washington. v. 72, n.
1, p. 28-36, 2006.
DERRICO, G.; CICCARELLI, D.; ORTONA, O. Effect of glycerol on micelle formation by
ionic and nonionic surfactants at 25C. J Colloid Interface Sci. Orlando. v. 286, n. 2, p.
747-754, 2005.
DA SILVA, G. P.; MACK, M.; CONTIERO, J. Glycerol: a promising and abundant carbon
source for industrial microbiology. Biotechnol Adv. Oxford. v. 27, n. 1, p. 30-39, 2009.
DAS, K.; MUKHERJEE, A. K. Crude petroleum-oil biodegradation efficiency of Bacillus
subtilis and Pseudomonas aeruginosa strains isolated from petroleum oil contaminated
soil from north-east India. Bioresour Technol. Barking. v. 98, n. 7, p. 1339-1345, 2006.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
153
DAUGULIS, A. J.; McCRACKEN, C. M. Microbial degradation of high and low molecular
weight polyaromatic hydrocarbons in a two-phase partitioning bioreactor by two strains of
Sphingomonas sp. Biotechnol Lett. Dordrecht. v. 25, n. 17, p. 1441-1444, 2003.
DAVIS, D. J.; BURLAK, C.; MONEY, N. P. Osmotic pressure of fungal compatible
osmolytes. Mycol Res. Cambridge. v. 104, n. 7, p. 800-804, 2000.
DAZY, M.; FRARD, J-F.; MASFARAUD, J-F. Use o a plant multiple-species experiment
for assessing the habitat function of a coke factory soil before and after thermal desorption
treatment. Ecol Eng. Amsterdam. v. 35, n. 10, p. 1493-1500, 2009.
DE ARRUDA, P. V.; RODRIGUES, R. C. L. B.; FELIPE, M. G. A. Glicerol: um subproduto
com grande capacidade industrial e metablica. Revista Analytica. So Paulo, n. 26, p. 56-
62, 2007.
DE BOER, W.; FOLMAN, L. B.; SUMMERBELL, R. C.; BODDY, L. Living in a fungal
world: impact of fungi on soil bacterial niche development. FEMS Microbiol Rev.
Amsterdam. v. 29, n. 4, p. 795-811, 2005.
DE MELO, I. S.; DE AZEVEDO, J. L. (Org.) Microbiologia ambiental, 2. ed. Jaguarina:
EMBRAPA, 2008. 647p.
DE PERCIN, P. R. Application of thermal desorption technologies to hazardous waste sites.
J. Harzard Mat. Amsterdam. v. 40, n. 2, p. 203-209, 1995.
DEAN, R. B. Environmental fads and fallacies. Waste Manag Res. London. v. 13, n. 3, p.
201-206, 1995.
DEAN-ROSS, D.; MOODY, J.; CERNIGLIA, C. E. Utilization of mixtures of polycyclic
aromatic hydrocarbons by bacteria isolated from contaminated soils. FEMS Microbiol
Ecol. Amsterdam. v. 41, n. 1, p. 1-7, 2002.
DEBIANE, D.; GARON, G.; VERDIN, A.; FONTAINE, J.; DURAND, R.;
GRANDMOUGIN-FERJANI, A.; SHIRALI, P.; LOUNS-HADJ SAHROUI, A. In vitro
evaluation of the oxidative stress and genotoxic potentials of anthracene on mycorrhizal
chicory roots. Environ Exp Bot. Oxford. v. 64, n. 2, p. 120-127, 2008.
DECKWER, W-D. Microbial conversion of glycerol to 1,3-propanediol. FEMS Microbiol
Rev. Amsterdam. v. 16, n. 2-3, p. 143-149, 1995.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
154
DEJONGHE, N.; BOON, N.; SEGHERS, D.; TOP, E. M.; VERSTRAETE, W.
Bioaugmentation of soils by increasing microbial richness: missing links. Environ
Microbiol. Oxford. v. 3, n. 10, p. 649-657, 2001.
DEL PANNO, M. T.; MORELLI, I. S.; ENGELEN, B.; BERTHE-CORTI, L. Effect of
petrochemical sludge concentrations on microbial communities during soil
bioremediation. FEMS Microbiol Ecol. Amsterdam. v. 53, n. 2, p. 305-316, 2005.
DELARCO, J. P.; DE FRANA, F. P. Biodegradation of crude oil in sandy sediment. Int
Biodeterior Biodegradation. Barking. v. 44, n. 2-3, p. 87-92, 1999.
______. Influence of oil contamination levels on hydrocarbon in sandy sediment. Environ
Pollut. Barking. v. 110, n. 3, p. 515-519, 2001.
DEUEL Jr., L. E.; HOLLIDAY, G. H. Soil remediation for the petroleum extractions
industry. 2
nd
. ed. Tulsa: PennWell, 1997. 242p.
DIBBLE, J. T.; BARTHA, R. Effect of environmental parameters on the biodegradation of oil
sludge. Appl Environ Microbiol. Washington. v. 37, n. 4, p. 729-739, 1979.
DORN, P. B.; SALANITRO, J. P. Temporal ecological assessment of oil contaminated soils
before and after bioremediation. Chemosphere. Oxford. v. 40, n. 4, p. 419-426, 2000.
DORN, P. B.; VIPOND, T. E.; SALANITRO, J. P.; WISNIEWSKI, H. L. Assessment of the
acute toxicity of crude oils in soils using earthworms, Microtox

, and plants.
Chemosphere. Oxford. v. 37, n. 5, p. 845-860, 1998.
DOS SANTOS, D. L.; CARDOSO, V. J. M. Thermal-biological aspects on the seed
germination of Cucumis anguria L.: influence of the seed coat. Revta Brasil Bot. So
Paulo. v. 24, n. 4, p. 435-440, 2001.
DUA, M.; SINGH, A.; SETHUNATHAN, N.; JOHRI, A. K. Biotechnology and
bioremediation: success and limitations. Appl Microbiol Biotechnolol. Berlin. v. 59, n. 2-
3, p. 143-152, 2002.
DUQUENNE, P.; CHENU, C.; RICHARD, G.; CATROUX, G. Effect of carbon source
supply and its location on competition between inoculated and established bacterial strains
in sterile soil microcosm. FEMS Microbiol Ecol. Amsterdam. v. 29, n. 4, p. 331-339,
1999.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
155
EASTERLING, E. R.; FRENCH, W. T.; HERNANDEZ, R.; LICHIA, M. The effect of
glycerol as a sole and secondary substrate on the growth and fatty acid composition of
Rhodotorula glutinis. Bioresour Technol. Barking. v. 100, n. 1, p. 356-361, 2009.
EL FANTROUSSI, S.; AGATHOS, S. N. Is bioaugmentation a feasible strategy for pollutant
removal and site remediation? Curr Opin Microbiol. London. v. 8, n. 3, p. 268-275, 2005.
EMBRAPA EMPRESA BRASILEIRA DE PESQUISA AGROPECURIA. Manual de
mtodos de anlise de solo. Rio de Janeiro: SNLCS, 1979.
ENELL, A.; REICHENBERG, F.; EWALD, G.; WARFVINGE, P. Desorption kinetics
studies on PAH-contaminated soil under varying temperatures. Chemosphere. Oxford. v.
61, n. 10, p. 1529-1538, 2005.
ENGELHAUPT, E. Biodiesel boom creates glut of glycerin. Environ Sci Technol. Easton. v.
1, n. 15, p. 5175, 2007.
EOM, I. C.; RAST, C.; VEBER, A. M.; VASSEUR, P. Ecotoxicity of polycyclic aromatic
hydrocarbons (PAH)-contaminated soil. Ecotoxicol Environ Saf. New York. v. 67, n. 2, p.
190-205, 2007.
ESCALANTE-ESPINOSA, E.; GALLEGOS-MARTNEZ, M. E.; FAVELA-TORRES, E.;
GUTIRREZ-ROJAS, M. Improvement of the hydrocarbon phytoremediation rate by
Cyperus laxus Lam. inoculated with a microbial consortium in a model system.
Chemosphere. Oxford. v. 59, n. 3, p. 405-413, 2005.
ETTEMA, C. H.; WARDLE, D. A. Spatial soil ecology. Trends Ecol Evol. Amsterdam. v. 17,
n. 4, p. 177-183, 2002.
FALCIGLIA, P. P.; GIUSTRA, M. G.; VAGLIASINDI, F. G. A. Low-temperature thermal
desorption of diesel polluted soil: influence of temperature and soil texture on
contaminant removal kinetics. J Hazard Mat. Amsterdam. v. 185, n. 1, p. 392-400, 2011.
FARHADIAN, A.; JINAP, S.; HANIFAH, H. N.; ZAIDUL, I. S. Effects of meat preheating
and wrapping on the levels of polycyclic aromatic hydrocarbons in charcoal-grilled meat.
Food Chem. Barking. v. 124, n. 1, p. 141-146, 2011.
FERENCI, T. Hungry bacteria - definition and properties of a nutritional state. Environ
Microbiol. Oxford. v. 3, n. 10, p. 605-611, 2001.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
156
FERNANDZ, A.; HUANG, S.; SESTON, S.; XING, J.; HICKEY, K.; CRIDDLE, C.;
TIEDJE, J. How stable is stable? Function versus community composition. Appl Environ
Microbiol. Washington. v. 65, n. 8, p. 3697-3794, 1999.
FORTUNATO, R. P.; NICOLOSO, F. T. Toxidez de alumnio em plntulas de grpia
(Apuleia leiocarpa Vog MaBride). Cienc Rural. Santa Maria. v. 34, n. 1, p. 89-95, 2004.
FRANCO, I.; CONTIN, M.; BRAGATO, G.; De NOBILI, M. Microbial resilience of soils
contaminated with crude oil. Geoderma. Amsterdam. v. 121, n. 1-2, p. 17-30, 2004.
FRASER, M.; BARKER, J. F.; BUTTLER, B.; BLAINE, F.; JOSEPH, S.; COOKE, C.
Natural attenuation of a plume from an emplaced coal tar creosote source over 14 years. J
Contam Hydrol. Amsterdam. v. 100, n. 3-4, p. 101-115, 2008.
FRIIS, A. K.; ALBRECHTSEN, H-J.; COX, E.; BJERG, P. L. The need for bioaugmentation
after thermal treatment of a TCE-contaminated aquifer: laboratory experiments. J Contam
Hydrol. Amsterdam. v. 88, n. 3-4, p. 235-248, 2006.
FURR, J. R.; RUSSELL, A.; TURNER, T. D.; ANDREWS, A. Antibacterial activity of
Actisorb Plus, Actisorb and silver nitrate. J Hosp Infec. New York. v. 27, n. 3, p. 201-208,
1994.
GALAN, M-I.; BONET, J.; SIRE, R.; RENEAUME, J-M.; PLEU, A. E. From residual to
useful oil: revalorization of glycerine from the biodiesel synthesis. Bioresour Technol.
Barking. v. 100, n. 5, p. 3775-3778, 2009.
GALLEGO, J. R.; GONZLEZ-ROJAS, E.; PELEZ, A. I.; SANCHZ, J.; GARCA-
MARTNEZ, M. J.; ORTIZ, J. E.; TORRES, T.; LLAMAS, J. F. Natural attenuation and
bioremediation of Prestige fuel oil along the Atlantic coast of Galicia (Spain). Org
Geochem. Oxford. v. 37, n. 12, p. 1869-1884, 2006.
GAN, S.; LAU, E. V.; NG, H. K. Remediation of soils contaminated with polycyclic aromatic
hydrocarbons (PAHs). J Harzard Mat. Amsterdam. v. 172, n. 2-3, p. 532-549, 2009.
GARLAND, J. L.; MILLS, A. L. Classification and characterization of heterotrophic
microbial communities on the basis of patterns of community-level-sole-carbon-source
utilization. Appl Environ Microbiol. Washington. v. 57, n. 8, p. 2351-2359, 1991.
GENHARTDT, P.; MURRAY, R. G. E.; WOOD, W. A.; KIEG, N. R. Methods for general
and molecular bacteriology. 1
st
ed. Washington: American Society for microbiology,
1994. 791p.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
157
GEORGE, C. E.; AZWELL, D. E.; ADAMIS, P. A.; RAO, G. V. N.; AVERETT, D. E.
Evaluation of steam as a sweep gas in low temperature thermal desorption processes used
for contaminated soil clean up. Waste Manag. New York. v. 15, n. 5-6, p. 407-416, 1995.
GHAZALI, F. M.; RAHMAN, R. N. Z. A.; SALLEH, A. B.; BASRI, M. Biodegradation of
hydrocarbons in soil by microbial consortium. Int Biodeterior Biodegradation. Barking. v.
54, n. 1, p. 61-67, 2004.
GOLDSTEIN, R. M.; MALLORY, L. M.; ALEXANDER, M. Reasons for possible failure of
inoculation to enhance biodegradation. Appl Environ Microbiol. Washington. v. 50, n. 4,
p. 977-983, 1985.
GONG, Z.; ALEF, K.; WILKE, B-M.; LI. P. Activated carbon adsorption of PAHs from
vegetable oil used in soil remediation. J Hazard Mat. Amsterdam. v. 143, n. 4, p. 372-
378, 2007.
GONG, Z.; ALEF, K.; WILKE, B-M.; LI, P. Dissolution and removal of PAHs from
contaminated soil using sunflower oil. Chemosphere. Oxford. v. 58, n. 3, p. 291-298,
2005.
GRABOWSKI, A.; BLANCHET, D.; JEANTHON, C. Characterization of long-chain fatty-
acid-degrading syntrophic associations from a biodegraded oil reservoir. Res Microbiol.
Paris. v. 157, n. 7, p. 814-821, 2005.
GRAMSS, G.; KIRSHE, B.; VOIGT, K-D.; GNTHER, Th.; FRITSCHE, W. Conversion
rates of five polycyclic aromatic hydrocarbons in liquid cultures of fifty-eight fungi and
the concomitant production of oxidative enzymes. Mycol Res. Cambridge. v. 103, n. 8, p.
1009-1018, 1999.
GREENWOOD, P. F.; WIBROW, S.; GEORGE, S. J.; TIBBETT, M. Hydrocarbon
degradation and soil microbial community response to repeated oil exposure. Org
Geochem. Oxford. v. 40, n. 3, p. 293-300, 2009.
HALDEMAN, D. L.; AMY, P. S. Diversity within colony morphotype: implications for
ecological researches. Appl Environ Microbiol. Washington. v. 59, n. 3, p. 933-935, 1993.
HAMAMURA, N.; OLSON, S. H.; WARD, D. M.; INSKEEP, W. Microbial population
dynamics associated with crude-oil biodegradation in diverse soils. Appl Environ
Microbiol. Washington. v. 72, n. 9, p. 6316-6324, 2006.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
158
HAMDI, H.; BENZARTI, S.; MANUSADIANAS, L.; AOYAMA, I.; JEDIDI, N.
Bioaugmentation and biostimulation effects on PAH dissipation and soil ecotoxicity under
controlled conditions. Soil Biol Biochem. New York. v. 39, n. 8, p. 1926-1935, 2007.
HARAYAMA, S. Polycyclic aromatic hydrocarbons biodegradation design. Curr Opin
Biotechnol. London. v. 8, n. 3, p. 268-273, 1997.
HARMS, H.; BOSMA, T. N. P. Mass transfer limitation of microbial growth and pollutant
degradation. J Ind Microbiol Biotechnol. Houndmills. v. 18, n. 2-3, p. 97-105, 1997.
HAY, A. G.; DEES, P. M.; SAYLER, G. S. Growth of a bacterial consortium on triclosan.
FEMS Microbiol Ecol. Amsterdam. v. 36, n. 1-2, p. 105-112, 2001.
HEITKAMP, M. A.; FRANKLIN, W.; CERNIGLIA, C. E. Microbial metabolism of
polycyclic aromatic hydrocarbons: isolation and characterization of a pyrene-degrading
bacteria. Appl Environ Microbiol. Washington. v. 54, n. 10, p. 2549-2555, 1988.
HENNER, P.; SCHIAVON, M.; DRUELLE, V.; LICHTFOUSE, E. Phytotoxicity of ancient
gasworks soils. Effect of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) on plant germination.
Org Geochem. Oxford. v. 30, n. 8, p. 963-969, 1999.
HERWIJNEN, R. V.; VAN DE SANDE, B. F.; VAN DER WIELEN, F. W. M.;
SPRINGAEL, D.; GOVERS, H. A. J.; PARSONS, J. R. Influence of phenanthrene and
flouranthene on the degradation of fluorene and glucose by Sphingomonas sp strain
LB126 in chemostat cultures. FEMS Microbiol Ecol. Amsterdam. v. 46, n. 3-4, p. 105-
111, 2003.
HESSELSOE, M.; BJERRING, M. L.; HENRIKSEN, K.; LOLL, P. NIELSEN, J. L. Method
for measuring substrate preferences by individual members of microbial consortia
proposed for bioaugmentation. Biodegradation. Dordrecht. v. 19, n. 5, p. 621-633, 2008.
HEYDENRYCH, M. D.; GREEFF, P.; HEESINK, A. B. M. Mass transfer in rolling rotary
kilns: a novel approach. Chem Sci Eng. New York. v. 57, n. 18, p. 3851-3859, 2002.
HIDALGO, E.; BARTOLOM, R.; BARROSO, C; AMORENO, A.; DOMNGUEZ, C.
Silver nitrate: antimicrobial activity related to cytotoxicity in cultured human fibroblasts.
Skin Pharmacol Appl Skin Physiol. Basel. v. 11, n. 3, p. 140-151, 1998.
HUESEMANN, M. H.; HAUSMANN, T. S.; FORTMAN, T. J. Does bioavailability limit
biodegradation? A comparison of hydrocarbon biodegradation and desorption rates in
aged soil. Biodegradation. Dordrecht. v. 15, n. 4, p. 261-274, 2004.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
159
HWANG, S.; CUTRIGHT, T. J. Effect of expandable clays and cometabolism on PAH
biodegradation. Environ Sci Pollut Res. Landsberg. v. 10, n. 5, p. 277-280, 2003.
IARC - INTERNATIONAL AGENCY FOR RESEARCH ON CANCER. IARC monographs
on the evaluation of carcinogenic risks to humans. Disponvel em
<http://monographs.iarc.fr/ENG/Classification/index.php>, acesso em 11 dez 2010.
ICHIKAWA, H.; NAVARRO, R. R.; IIMURA, Y.; TATSUMI, K. Nature of bioavailability
of DNA-intercalated polycyclic aromatic hydrocarbons to Sphingomonas sp.
Chemosphere. Oxford. v. 80, n. 8, p. 866-871, 2010.
IGWO-EZIKPE, M. N.; GBENLE, O. G.; ILORI, M. O.; OKPUZOR, J.; OSUNTOKI, A. A.
High molecular weight polycyclic aromatic hydrocarbons biodegradation by bacteria
isolated from contaminated soil in Nigeria. Res J Environ Sci. Faisalabad. v. 4, n. 2, p.
127-137, 2010.
IMFELD, G.; BRAECKEVELT, M.; KUSCHK, P.; RICHNOW, H. H. Monitoring and
assessing processes of organic chemicals removal in constructed wetlands. Chemosphere.
Oxford. v. 74, n. 3, p. 349-362, 2009.
INDERJIT; SAINI, M.; KAUR, H. Experimental complexities in evaluating the comparative
phytotoxicity of chemicals with different modes of action. Environ Exp Bot. Oxford. v.
53, n. 1, p. 97-104, 2005.
INMET - INSTITUTO NACIONAL DE METEOROLOGIA. Disponvel em
<http://www.inmet.gov.br>.
ISO INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STARNDARDIZATION. Method EN
14105. Fat and oil derivates. Fatty Acid Methyl Esteres (FAME) Determination of free
and total glycerin and mono-, di-, triglycerides contents. 15 May 2003. 22p.
ISO INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STARNDARDIZATION. Method EN
14110. Fat and oil derivates. Fatty Acid Methyl Esteres (FAME) Determination of
methanol content. 15 May 2003, 14p.
ISO INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STARDIZATION. Method EN 12937.
Methods of test for petroleum and its products. BS 2000-438. Petroleum products.
Determination of water content. Coulometric Karl Fischer titration method. 15 Mar 2001,
22p.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
160
ISPAC - INTERNATIONAL SOCIETY FOR POLYCYCLIC AROMATIC COMPOUNDS.
Disponvel em <http://www.ispac.org>, acesso em 29 fev 2008.
IYER, A.; MODY, K.; JHA, B. Emulsifying properties of a marine bacterial
exopolysaccharide. Enzyme Microb Technol. New York. v. 38, n. 1-2, p. 220-222, 2006.
JACQUES, R. J. S.; BENTO, F. M.; ANTONIOLLI, Z. I.; CAMARGO, F. A. O.
Biorremediao de solos contaminados com hidrocarbonetos aromticos policclicos.
Cienc Rural. Santa Maria. v. 37, n. 4, p. 1192-1201, 2007.
JACQUES, R. J. S.; OKEKE, B. C.; BENTO, F. M.; TEIXEIRA, A. S.; PERALBA, M. C.
R.; CAMARGO, F. A. O. Microbial consortium bioaugmentation of polycyclic aromatic
hydrocarbons contaminated soil. Bioresour Technol. Barking. v. 99, n. 7, p. 2637-2643,
2008.
JOHNSEN, A. R.; WICK, L. Y.; HARMS, H. Principals of microbial PAH-degradation in
soil. Environ Pollut. Barking. v. 133, n. 1, p. 71-84, 2005.
JOHNSON, D. T.; TACONI, K. A. The glycerin glut: option for the value-added conversion
of crude glycerol resulting from biodiesel production. Environ Prog. Illinois. v. 26, n. 4, p.
338-348, 2007.
JONER, E. J.; HIRMANN, D.; SZOLAR, O. H. J.; TODOROVIC, D.; LEYVAL, C.;
LOIBNER, A. P. Priming effects on PAH degradation and ecotoxicity during a
phytoremediation experiment. Environ Pollut. Barking. v. 128, n. 3, p. 429-435, 2004.
JUHASZ, A. L.; SMITH, E.; WALLER, N.; STEWART, R.; WEBER, J. Bioavailability of
residual polycyclic aromatic hydrocarbons following enhanced natural attenuation of
creosote-contaminated soil. Environ Pollut. Barking. v. 158, n. 2, p. 585-591, 2010.
KANALY, R. A.; HARAYAMA, S. Biodegradation of high-molecular-weight polycyclic
aromatic hydrocarbons by bacteria. J Bacteriol. Washington. v. 182, n. 8, p. 2059-2057,
2000.
KAPLAN, C. W.; KITTS, C. L. Bacterial succession in a petroleum land treatment unit. Appl
Environ Microbiol. Washington. v. 70, n. 3, p. 1777-1786, 2004.
KARIMI-LOTFABAD, S.; PICKARD, M. A.; GRAY, M. R. Reactions of polynuclear
aromatic hydrocarbons on soil. Environ Sci Technol. Easton. v. 30, n. 4, p. 1145-1151,
1996.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
161
KAZUNGA, C.; AITKEN, M. D. Products from incomplete metabolism of pyrene by
polycyclic aromatic hydrocarbon-degrading bacteria. Appl Environ Microbiol.
Washington. v. 66, n. 5, p. 1917-1922, 2000.
KHAN, M. M. A.; ROMOLI, L.; FIASCHI, M.; DINI, G.; SARRI, F. Experimental design
approach to the process parameter optimization for laser welding of martensitic stainless
steels in a constrained overlap configuration. Optic Laser Tech. Amsterdam. v. 43, n. 1, p.
158-172, 2011.
KIM, S. J.; CHOI, D. H.; SIM, D. S.; OH, Y. S. Evaluation of bioremediation effectiveness
on crude oil-contaminated sand. Chemosphere. Oxford. v. 59, n. 6, p. 845-852, 2005.
KLASEN, H. J. A historical review of the use of silver in the treatment of burns. II renewed
interest for silver. Burns. Guildford. v. 26, 3, p. 131-138, 2000.
KOHLMEIER, S.; SMITS, T. H. M.; FORD, R. M.; KEEL, C.; HARMS, H.; WICK, L. Y.
Taking the fungal highway: mobilization of pollutant-degrading bacteria by fungi.
Environ Sci Technol. Easton. v. 39, n. 12, p. 4640-4646, 2005.
KOMUKAI-NAKAMURA, S.; SUGIURA, K.; YAMAUCHI-INOMATA, Y.; TOKI, H.;
VENKATESWARAN, K.; YAMAMOTO, S.; TANAKA, H.; HARAYAMA, S.
Construction of bacterial consortia that degrade Arabian light crude oil. J Ferment Bioeng.
Osaka. v. 82, n. 6, p. 570-574, 1996.
KOPINKE, F-D.; REMMLER, M. Reactions of hydrocarbons during thermodesorption from
sediments. Thermochim Acta. Amsterdam. v. 263, p. 123-139, 1995.
KOTTLER, B. D.; WHITE, J. C.; KELSEY, J. W. Influence of soil mixture on the
sequestration of organic compounds in soil. Chemosphere. Oxford. v. 42, n. 8, p. 893-898,
2001.
KULKARNI, P. S.; CRESPO, J. G.; AFONSO, C. A. M. Dioxins sources and current
remediation technologies a review. Environ Int. New York. v. 34, n. 1, p. 139-153,
2008.
LAMBE, T. W.; WHITMAN, R. V. Soil Mechanics, SI version. 1
st
. ed. Series in Soil
Engineering. New York: John Willey & Sons, 1979. p. 29-59; 71-81.
LAZAR, I.; DOBROTA, S.; VOICU, A.; STEFANESCU, M.; SANDULESCU, L.;
PETRISOR, I. G. Microbial degradation of waste hydrocarbons in oily sludge from some
Romanian oil fields. J Pet Sci Eng. London. v. 22, n. 13, p. 151-160, 1999.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
162
LEAHY, J. G.; COLWELL, R. R. Microbial degradation of hydrocarbons in the environment.
Microbial Rev. Washington. v. 54, n. 3, p. 305-315, 1990.
LEDESMA, E. B.; KALISH, M. A.; NELSON, P. F.; WORNAT, M. J.; MACKIE, J. C.
Formation and fate of PAH during the pyrolysis and fuel-rich combustion of coal primary
tar. Fuel. Amsterdam. v. 79, n. 1, p. 1801-1814, 2000.
LEE, S. H.; OH, B. I.; KIM, J. G. Effect of various amendments on heavy metal oil
bioremediation and soil microbial activity. Bioresour Technol. Barking. v. 99, n. 7, p.
2578-2587, 2008.
LEE, J. K.; PARK, D.; KIM, B-U.; DONG, J-I.; LEE, S. Remediation of petroleum-
contaminated soils by fluidized thermal desorption. Waste Manag. New York. v. 18, n. 6-
8, p. 503-507, 1998.
LEI, L.; KHODADOUST, A. P.; SUIDAN, M. T.; TABAK, H. H. Biodegradation of
sediment-bound PAHs in field-contaminated sediment. Wat Res. Oxford. v. 39, n. 2-3, p.
349-361, 2005.
LEMIEUX, P. M.; LUTES, C. C.; SANTOIANNI, D. A. Emissions of organic air toxics from
open burning: a comprehensive review. Prog Energ Combust Sci. Amsterdam. v. 30, n. 1,
p. 1-32, 2004.
LESCHINE, T. M. Oil spills and the social amplification and attenuation risk. Spill Sci
Technol Bull. Amsterdam. v. 7, n. 1-2, p. 63-73, 2002.
LETAN, D.; LAMAR, R. T. Development of fungal inocula for bioaugmentation of
contaminated soil. Appl Environ Microbiol. Washington. v. 62, n. 6, p. 2045-2052, 1996.
LEUNG, D. Y. C.; KOO, B. C. P.; GUO, Y. Degradation of biodiesel under different storage
conditions. Biores Technol. Barking. v. 97, n. 2, p. 250-256, 2006.
LEYS, N. M.; BASTIENS, L.; VERSTRAETE, W.; SPRINGAEL, D. Influence of the
carbon/nitrogen/phosphorus ration on polycyclic aromatic hydrocarbon degradation by
Mycobacterium and Sphingomonas in soil. Appl Environ Biotechnolol. Washington. v. 66,
n. 6, p. 726-736, 2005.
LI, X.; LI, P.; LIN, X.; ZHANG, C.; LI, Q.; GONG, Z. Biodegradation of aged polycyclic
aromatic hydrocarbons (PAHs) by microbial consortia in soil and slurry phases. J Hazard
Mat. Amsterdam. v. 150, n. 1, p. 21-26, 2008.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
163
LIANG, Y.; VAN NOSTRAND, J. D.; WANG, J.; ZHANG, X.; ZHOU, J.; LI, G.
Microarray-based functional gene analysis of soil microbial communities during
ozonation and biodegradation of crude oil. Chemosphere. Oxford. v. 75, n. 2, p. 193-199,
2009.
LIGHTY, J. S.; SILCOX, G. D.; PERSHING, D. W. Fundamentals for thermal remediation of
contaminated soils. Particle and bed desorption models. Environ Sci Technol. Easton. v.
24, n. 5, p. 750-757, 1990.
LILLEY, A.K.; BARLEY, M. J.; CARTWRIGHT, C.; TURNER, S. L.; HIRSCH, P. R. Life
in Earth: the impact of GM plants on soil ecology? Trends Biotechnolol. Barking. v. 24, n.
1, p. 9-14, 2006.
LIMA, J. R. C. Biodegradao de resduo proveniente da indstria do biodiesel por Picchia
guilliermondii MP02. 2009. Dissertao (Mestrado em Tecnologia de Processos Qumicos
e Bioqumicos) Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, 2009.
LIN, E. C. C. Glycerol dissimilation and its regulation in bacteria. Annu Rev Microbiol. Palo
Alto. v. 30, p. 535-578, 1976.
LIU, B-R.; JIA, G-M.; CHEN, J.; WANG, G. A review of methods for studying microbial
diversity in soils. Pedosphere. Amsterdam. v. 16, n. 1, p. 18-24, 2006.
LIU, S.; REBROS, M.; STEPHENS, G.; MARR, A. C. Adding value to renewables: a one pot
process combining microbial cells and hydrogen transfer catalysis to utilize waste glycerol
from biodiesel production. Chem Comm. Cambridge, n. 17, p. 2308-2310, 2009.
LSER, C.; SEIDEL, H.; ZEHNSDORF, A.; STOTTMEISTER, U. Microbial degradation of
hydrocarbons in soil during aerobic/anaerobic changes under purely aerobic conditions.
Appl Microbiol Biotechnol. Berlin. v. 49, n. 5, p. 631-636, 1998.
LUNA-VELASCO, M. A.; ESPERANZA-GARCA, F.; CAIZARES-VILLANUEVA, R.
O.; RODRGUEZ-VZQUEZ, R. Production and properties of bioemulsifier synthesized
by phenanthrene-degrading Penicillium sp. Process Biochem. Barking. v. 42, n. 3, p. 310-
314, 2007.
MACHN-RAMIREZ, C.; OKOH, A. I.; MORALES, D.; MAYOLO-DELOISA, K.;
QUINTERO-R.; TREJO-HERNNDEZ, M. R. Slurry-phase biodegradation of weathered
oily sludge waste. Chemosphere. Oxford. v. 70, n. 4, p. 737-744, 2008.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
164
MAcNALLY, D. L.; MIHELCIC, J. R.; LUEKING, D. R. Biodegradation of three-and-four-
ring polycyclic aromatic hydrocarbons under aerobic and denitrifying conditions. Environ
Sci Technol. Easton. v. 32, n. 17, p. 2633-2639, 1998.
MACNAUGHTON, S. J.; STEPHEN, J. R.; VENOSA, A. D.; DAVIS, G. A.; CHANG, Y-J.;
WHITE, D. C. Microbial population changes during bioremediation of an experimental oil
spill. Appl Environ Microbiol. Washington. v. 65, n. 8, p. 3566-3574, 1999.
MAILA, M. P.; CLOETE, T. E. Germination of Lepidium sativum as a method to evaluate
polycyclic aromatic hydrocarbons (PAHs) removal from contaminated soil. Int
Biodeterior Biodegradation. Barking. v. 50, n. 2, p. 107-113, 2002.
MANCERA-LPEZ, M. G.; ESPARZA-GARCA, F.; CHVEZ-GOMEZ, B.;
RODRGUEZ-VZQUEZ, R.; SAUCEDO-CASTAEDA, G.; BARRERA-CORTS, J.
Bioremediation of an aged hydrocarbon-contaminated soil by a combined system of
biostimulation-bioaugmentation with filamentous fungi. Int Biotederior Biodegradation.
Barking. v. 61, n. 2, p. 151-160, 2008.
MARGESIN, R.; HMMERLE, M; TSCHERKO, D. Microbial activity and community
composition during bioremediation of diesel-oil contaminated soil: effects of
hydrocarbons concentration, fertilizers and incubation time. Microb Ecol. New York. v.
53, n. 2, p. 259-269, 2007.
MARIANO, J. B. Impactos ambientais do refino de petrleo. 2001. Dissertao (Mestrado em
Cincias em Planejamento Energtico) Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de
Janeiro, 2001.
MARN, J. A.; HERNANDEZ, T.; GARCIA, C. Bioremediation of oil refinery sludge by
landfarming in semiarid conditions: influence on soil microbial activity. Environ Res.
New York. v. 98, n. 2, p. 185-195, 2005.
MRQUEZ-ROCHA, F. J.; OLMOS-SOTO, J.; ROSANO-HERNNDEZ, M. C.; MURIEL-
GARCA, M. Determination of hydrocarbon-degrading metabolic capabilities of tropical
bacterial isolates. Int Biodeterior Biodegradation. Barking. v. 55, n. 1, p. 17-23, 2005.
MARSCHNER, B.; KALBITZ, K. Controls of bioavailability and biodegradability of
dissolved organic matter in soils. Geoderma. Amsterdam. v. 113, n. 3-4, p. 211-235, 2003.
MATER, L.; SPERB, R. M.; MADUREIRA, L. A. S.; ROSIN, A. P.; CORREA, A. X. R.;
RADETSKI, C. M. Proposal of a sequential treatment methodology for the safe reuse of
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
165
oil-sludge contaminated soil. J Hazard Mat. Amsterdam. v. 136, n. 3, p. 967-971, 2006,
(suplemento).
McCLURE, N. C.; FRY, J. C.; WEIGHTMAN, A. J. Survival and catabolic activity of natural
and genetically engineered bacteria in a laboratory-scale activated-sludge unit. Appl
Environ Microbiol. Washington. v. 57, n. 2, p. 366-373, 1991.
McGOWAN, T. F.; GREER, B. A.; LAWLESS, M. Thermal treatment and non-thermal
technologies for remediation of manufactured gas plants sites. Waste Manag. New York.
v. 16, n. 8, p. 691-698, 1996.
McGRATH, T.; SHARMA, R.; HAJALIGOL, M. An experimental investigation into the
formation of polycyclic-aromatic-hydrocarbons (PAH) from pyrolysis of biomass
materials. Fuel. Amsterdam. v. 80, n. 12, p. 1787-1797, 2001.
MERINO, J.; BUCAL, V. Effect of temperature on the release of hexadecane from soil by
thermal desorption. J Hazard Mat. Amsterdam. v. 143, n. 1-2, p. 455-461, 2007.
MEULENBERG, R.; RIJNAARTS, H. H. M.; DODDEMA, H. J.; FIELD, J. A. Partially
oxidized polycyclic aromatic hydrocarbons show an increased bioavailability and
biodegradability. FEMS Microbiol Lett. Amsterdam. v. 152, n. 1, p. 45-49, 1997.
MEYSAMI, P.; BAHERI, H. Pre-screening of fungi and bulking agents for contaminated soil
bioremediation. Adv Environ Res. Amsterdam. v. 7, n. 4, p. 881-887, 2003.
MILLE-LINDBLOM, C.; FISCHER, H.; TRANVIK, L. T. Antagonism between bacteria and
fungi: substrate competition and a possible tradeoff between fungal growth and tolerance
towards bacteria. Oikos. Lund. v. 113, n. 1, p. 233-242, 2006.
MISHRA, S.; JYOT, J.; KUHAD, R. C.; LAL, B. Evaluation of inoculum addition to
simulate in situ bioremediation of oily-sludge-contaminated soil. Appl Environ Microbiol.
Washington. v. 67, n. 4, p. 1675-1681, 2001.
MOHAJERI, L.; AZIZ, H. A.; ISA, M. H.; ZAHED, M. A. A statistical experiment design
approach for optimizing biodegradation of weathered crude oil in coastal sediments.
Bioresour Technol. Barking. v. 101, n. 3, p. 893-900, 2010.
MOHAMED, M. E.; AL-DOUSARY, M.; HAMZAH, R. Y.; FUCHS, G. Isolation and
characterization of indigenous thermophilic bacteria active in natural attenuation of bio-
hazardous petrochemical pollutants. Int Biodeterior Biodegradation. Barking. v. 58, n. 3-
4, p. 213-223, 2006.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
166
MOHAN, S. V.; FALKENTOFT, C.; NANCHARAIAH, Y. V.; STURM, B. S. M.;
WAITTIAU, P.; WILDERER, P. A.; WUERTZ, S.; HAUSNER, M. Bioaugmentation of
microbial communities in a laboratory and pilot scale sequencing batch biofilm reactors
using the TOL plasmid. Bioresour Technol. Barking. v. 100, n. 5, p. 1746-1753, 2009.
MOHAN, S. V.; KISA, T.; OHKUMA, T.; KANALY, R. A.; SHIMIZU, Y. Bioremediation
technologies for treatment of PAH-contaminated soil and strategies to enhance process
efficiency. Rev Environ Sci Biotechnol. Dordrecht. v. 5, n. 4, p. 347-374, 2006.
MOON, H. S.; KAHNG, H-Y.; KIM, J. Y.; KUKOR, J. J; NAM, K. Determination of
biodegradation potential by two-culture independent methods in PAH-contaminated soils.
Environ Pollut. Barking. v. 140, n. 3, p. 536-545, 2006.
MOORTHI, P. S.; DEECARAMAN, M.; KALAICHELVAN, P. T. Bioremediation of
automobile oil effluent by Pseudomonas sp. Advanced Biotech. Chennai. v. 8, n. 6, p. 34-
37, 2008.
MORELLI, I. S.; DEL PANNO, M. T.; DE ANTONI, G. L.; PAINCEIRA, M. T.
Laboratorial study on biodegradation of petrochemical sludge-contaminated soil. Int
Biodeterior Biodegadation. Barking. v. 55, n. 4, p. 271-278, 2005.
MORITA, T.; KONISHI, M.; FUKUOKA, T.; IMURA, T.; KITAMOTO, D. Microbial
conversion of glycerol into glicolipid biosurfactants, mannosylerythriol lipids, by a
basidiomycete yeast, Pseudozyma antarctica JCM 10317
T
. J Biosci Bioeng. Osaka. v.
104, n. 1, p. 78-81, 2007.
MROZIK, A.; PIOTROWSKA-SEGET, Z.; ABUEC, S. Bacterial degradation and
bioremediation of polycyclic aromatic hydrocarbons. Pol J Environ Stud. Olsztyn. v. 12,
n. 1, p. 15-25, 2003.
MUCKIAN, L.; GRANT, R.; DOYLE, E.; CLIPSON, N. Bacterial community structures in
soil contaminated by polycyclic aromatic hydrocarbons. Chemosphere. Oxford. v. 8, n. 4,
p. 1535-1541, 2007.
MUELLER, J. G; CERNIGLIA, C. E.; PRITCHARD, P. H. Bioremediation of environments
contaminated by polycyclic aromatic hydrocarbons. In: CRAWFORD, R. L.;
CRAWFORD, D. L. (Ed.) Bioremediation, principals and applications. 1
st
ed. New York:
Cambridge University Press, 2005. Chapter 5, p. 125-194.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
167
MULLIGAN, C. N.; YONG, R. N. Natural attenuation of contaminated soils. Environ Int.
New York. v. 30, n. 4, p. 587-601, 2004.
MURTA VALLE, M. L. Produtos do setor de combustveis e de lubrificantes. 1. ed. Rio de
Janeiro: Publit solues editoriais, 2007. 316p.
NADIM, F.; HOAG, G. G.; LIU, S.; CARLEY, R. J.; ZACK, P. Detection and remediation of
soil and aquifer system contaminated with petroleum products: an overview. J Pet Sci
Eng. London. v. 26, n. 1-4, p. 169-178, 2000.
NATO/CCMS NORTH ATLANTIC TREATY ORGANIZATIONS COMMITTEE ON
CHALLENGES OF MODERN SOCIETY. Report n 176. International Toxicity
Equivalent Factor (I-TEF) method of risk assessment for complex mixtures of dioxins and
related compounds. Pittsburgh: U. S. Government Printing Office, 1988.
NCBI NATIONAL CENTER FOR BIOTECHNOLOGY INFORMATION. The NCBI
entrez taxonomy homepage. Disponvel em <http://www.ncbi.nlm.nih.gov/taxonomy/>,
acesso em 20 nov 2010.
NEDERLAND. Ministerie Van Volkshuisvesting Ruimtelijke Ordening en Milieubeheer. Soil
Protection Act, text based on the most recently published integral version of the Soil
Protection Act (1996), corrected by the Bulletin of Acts, Orders and Decrees 1993 and
updated by the Bulletin of Acts, Orders and Decrees 1996, 1997, 1999, 2000, 2001 and
most recently amended 2005. 01 Jan 2006.
NEVOIGT, E.; STAHL, U. Osmoregulation and glycerol metabolism in the yeast
Saccharomyces cerevisiae. FEMS Microbiol Rev. Amsterdam. v. 21, n. 3, p. 231-241,
1997.
NIKOLOPOULOU, M.; PASADAKIS, N.; KALOGERAKIS, N. Enhanced bioremediation
of crude oil utilizing lipophylic fertilizers. Desalination. Amsterdam. v. 211, n. 1-3, p.
286-295, 2006.
NORDVIK, A. B. Time window-of-opportunity strategies for oil spill planning and response.
Pure Appl Chem. London. v. 71, n. 1, p. 5-16, 1999.
NOVOTN, C.; SVOBODOV, K.; ERBANOV, R.; CAJTHAML, T.; KASINATH, A.;
LANG, E.; AEK, V. Ligninolytic fungi in bioremediation: extracellular enzyme
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
168
production and degradation rate. Soil Biol Biochem. New York. v. 36, n. 10, p. 1545-1551,
2004.
ODUM, E. P.; BARRETT, G. W. Fundamentos de ecologia. 5. ed. So Paulo: Cengage
Learning, 2008, p. 3-4.
ODONELL, A. G.; SEASMAN, M.; MACRAE, A.; WAITE, I.; DAVIS, J. T. Plant and
fertilizers as drivers of change in microbial community structure and function in soil.
Plant Soil. The Hauge. v. 232, n. 1-2, v. 135-145, 2001.
OECD ORGANIZATION FOR ECONOMIC CO-OPERATION AND DEVELOPMENT.
Terrestrial plant, growth test. OECD guidelines for testing of chemicals. Paris: OECD,
1984. 6p.
OLESZCCZUK, P. Application of three methods used for the evaluation of polycyclic
aromatic hydrocarbons (PAHs) bioaccessibility for sewage slurry composting.
Bioresource Technol. Barking. v. 100, n. 1, p. 413-420, 2009.
OLIVEIRA, F. J. S.; DE FRANA, F. P. The use of biostimulation and intinsic
bioremediation methodologies for the treatment of sandy sediment contaminated with oil.
Solos e Rochas. So Paulo. v. 27, n. 3, p. 287-292, 2004.
______. Increase in removal of polycyclic aromatic hydrocarbons during bioremediation of
crude-oil contaminated sandy-soil. Appl Biochem Biotechnol. Clifton. v. 121-124, n. 3, p.
593-603, 2005.
OLLIVIER, B.; MAGOT, M. (Ed.). Petroleum microbiology. 1
st
ed. Washington: ASM
Press, 2005. 365p.
OOI, T. L.; YONG, K. C.; HAZIMAH, A. H.; DZULKEFLY, K.; WAN YUNUS, W. M. Z.
Glycerol residue a rich source of glycerol and medium chain fatty acids. J Oleo Sci.
Tokyo. v. 53, n. 1, p. 29-33, 2004.
ORTEGA-CALVO, J. J.; MARCHENKO, A. I.; VOROBYOV, A. V.; BOROVICK, R. V.
Chemotaxis in polycyclic aromatic hydrocarbon-degrading bacteria isolated from coal-tar-
and oil-polluted rhizospheres. FEMS Microbiol Ecol. Amsterdam. v. 44, n. 3, p. 373-381,
2003.
OUYANG, W.; LIU, H.; MURYGINA, V.; YU, Y.; XIU, Z.; KALYUZHNYI, S.
Comparison of bio-augmentation and composting for remediation of oil sludge: a field-
scale study in China. Process Biochem. Barking. v. 40, n. 12, p. 3763-3778, 2005.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
169
VRES, L. Population and community level approaches for analyzing microbial diversity
in natural environments. Ecol Lett. Oxford. v. 3, n. 3, p. 236-251, 2000.
PALA, D. M.; DE CARVALHO, D. D.; PINTO, J. C.; SANTANNA JR., G. L. A suitable
model to describe bioremediation of a petroleum-contaminated soil. Int Biodeterior
Biodegradation. Barking, v. 58, n. 3-4, p. 254-260, 2006.
PALITTAPONGARNPIM, M.; POKETHITIYOOK, P.; UPATHAM, E. S.;
TANGBANLUEKAL, L. Biodegradation of crude oil by soil microorganisms in the
tropic. Biodegradation. Dordrecht. v. 9, n. 2, p. 83-90, 1998.
PAPANIKOLAOU, S.; FAKAS, S.; FICK, M.; CHEVALOT, I.; GALIOTOU-
PANAYOTOU, M.; KOMATIS, M.; MARC, I.; AGGELIS, G. Biotechnological
valorization of raw glycerol discharged after biodiesel (fatty acid methyl esteres)
manufacturing process: production of 1,3-propanediol, citric acid and single cell. Biomass
Bioenerg. Amsterdam. v. 42, n. 1, p. 60-71, 2008.
PARADELO, R.; MOLDES, A. B.; RODRGUEZ, M.; BARRAL, M. T. Relahionship
between heavy metals and phytotoxicity in composts. Cienc Tecnol Aliment. Reynosa. v.
6, n. 2, p. 143-151, 2008.
PARTHASARATHI, R.; SIVAKUMAAR, P. K. Effect of different carbon sources on the
production of biosurfactant by Pseudomonas fluorescens isolated from mangrove forests
(Pichavaram), Tamil Nadu, India. Global J Environ Sci. Tehran. v. 3, n. 2, p. 99-101,
2009.
PAUL, E. A. (Ed.) Soil microbiology, ecology and biochemistry. 3
rd
ed. San Diego: Academic
Press, 2007. 537p.
PEREIRA, M. S. Polychlorinated dibenzo-p-dioxins (PCDD) and polychlorinated biphenyls
(PCB): main sources, environmental behavior and risk to man and biota. Quim Nova. So
Paulo. v. 27, n. 6, p. 934-943, 2004.
PERFUMO, A.; BANAT, I. M.; MARCHANT, R.; VEZZULLI, L. Thermally enhanced
approaches for bioremediation of hydrocarbon-contaminated soils. Chemosphere. Oxford.
v. 66, n. 1, p. 179-184, 2007.
PHOA, F. K. H.; XU, H.; WONG, W. K. The use of nonregular fractional factorial designs in
combination toxicity studies. Food Chem Toxicol. Oxford. v. 47, n. 9, p. 2183-2188, 2009.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
170
PINTO, A. C.; GUARIEIRO, L. L. N.; REZENDE, M. J. C.; RIBEIRO, N. M.; TORRES, E.
A.; LOPES, W. A.; PEREIRA, P. A. P.; DE ANDRADE, J. B. Biodiesel: an overview. J
Braz Chem Soc. Campinas. v. 16, n. 6, p. 1313-1330, 2005, (suplemento).
PIZZUL, L.; SJGREN, .; CASTILLO, M. P.; STENSTRM, J. Degradation of polycyclic
aromatic hydrocarbons in soil by a two-step sequential treatment. Biodegradation.
Dordrecht. v. 18, n. 5, p. 607-616, 2007.
PAZA, G.; NACZ-JAWECKI, G.; ULFIG, K.; BRIGMON, R. L. Assessment of
genotoxic activity of petroleum hydrocarbon-bioremediated soil. Ecotoxicol Environ Saf.
New York. v. 62, n. 3, p. 415-420, 2005.
POPE, C. J.; PETERS, W. A.; HOWARD, J. B. Thermodynamic driving forces for PAH
isomerization and growth during thermal treatment of polluted soils. J Hazard Mat.
Amsterdam. v. 79, v. 1-2, p. 189-208, 2000, (suplemento).
POPP, N.; SCHLMANN, M.; MAU, M. Bacterial diversity in active stage of a
bioremediation system for mineral oil hydrocarbon-contaminated soils. Microbiology.
Washington. v. 152, n. 11, p. 3291-3304, 2006, (suplemento).
POTIN, O.; VEIGNIE, E.; RAFIN, C. Biodegradation of polycyclic aromatic hydrocarbons
(PAHs) by Cladosporium sphaerospermum isolated from an aged PAH contaminated soil.
FEMS Microbiol Ecol. Amsterdam. v. 51, n. 1, p. 71-78, 2004.
RAHMAN, K. S. M.; THAHIRA-RAHMAN, J.; LAKSHMANAPERUMALSAMY, P.;
BANAT, I. M. Towards efficient crude oil degradation by a mixed bacterial consortium.
Bioresour Technol. Barking. v. 85, n. 3, p. 257-261, 2002.
RAHMAT, N.; ABDULLAH, A. Z.; MOHAMED, A. R. Recent progress on innovative and
potential technologies for glycerol transformation into fuel additives: a critical review.
Renew Sust Energy Rev. Amsterdam. v. 14, n. 3, p. 987-1000, 2010.
RAVINDRA, K.; SOKHI, R.; VAN GRIEKEN, R. Atmospheric polycyclic aromatic
hydrocarbons: source attribution, emission factors and regulation. Atmos Environ. Oxford.
v. 42, n.13, p. 2895-2921, 2008.
REINER, E. J. The analysis of dioxins and related compounds. Mass Spectrom Rev. New
York. v. 29, n. 4, p. 526-559, 2009.
REMMLER, M.; KOPINKE, F-D. Thermal conversion of hydrocarbons on solid matrices.
Thermochim Acta. Amsterdam. v. 263, p. 113-121, 1995.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
171
RENTZ, J. A.; ALVAREZ, P. J. J.; SCHNOOR, J. L. Benzo[a]pyrene degradation by
Sphingomonas yanoikuyae JAR02. Environ Pollut. Barking. v. 151, n. 3, p. 669-677,
2008.
REYNOSO-CUERVAS, L.; GALLEGOS-MARTNEZ, M. E.; CRUZ-SOSA, F.;
GUTIRREZ-ROJAS, M. In vitro evaluation of germination and growth of five plant
species on medium supplemented with hydrocarbons associated with contaminated soils.
Bioresour Technol. Barking. v. 99, n. 14, p. 6379-6385, 2008.
RICHNOW, H. H.; SEIFERT, R.; KSTNER, M.; MAHRO, B.; HORSFIELD, B.;
TIEDGEN, U.; BHM, S.; MICHAELIS, W. Rapid screening of PAH-residues in
bioremediated soils. Chemosphere. Oxford. v. 31, n. 8, p. 3991-3999, 1995.
RINGELBERG, D. B.; TALLEY, J. W.; PERKINGS, G. J.; TUCKER, S. G.; LUTHY, R. G.;
BOUWER, E. J.; FREDRICKSON, H. L. Succession of phenotypic, genotypic and
metabolic community characteristics during in vitro bioslurry treatment of polycyclic
aromatic hydrocarbon-contaminated sediments. Appl Environ Microbiol. Washington. v.
67, n. 4, p. 1542-1550, 2001.
RINK, K. K.; LARSEN, F. S.; KOZISKI, J. A. Thermal treatment of hazardous wastes: a
comparison of fluidized bed and rotary kiln incineration. Energy Fuels. Washington. v. 7,
n. 6, p. 803-813, 1993.
RISOUL, V.; RITCHTER, H.; LAFLEUR, A. L.; PLUMMER, E. F.; GILOT, P.; HOWARD,
J. B. Effect of temperature and soil components on emissions from pyrolisis of pyrene-
contaminated soil. J Hazard Mat. Amsterdam. v. 126, n. 1-3, p. 128-140, 2005,
(suplemento).
RITTER, E.; DA MOTA, M. F. P.; CAMPOS, J. C.; VENTURA, M. A. A contaminao do
solo no permetro do antigo lixo da Marambaia-Nova Iguau-RJ. Revista Cincia &
Tecnologia. Nova Iguau. v. 6, n. 1, p. 46-56, 2006.
RIVALDI, J. D.; SARROUB, B. F.; FIORILO, R.; DA SILVA, S. S. Glicerol de biodiesel.
Biotecnologia Cincia & Desenvolvimento. Braslia. v. 10, n. 37, p. 44-51, 2009.
RIVAS, R. F. Polycyclic aromatic hydrocarbons sorbed on soils: a short review of chemical
oxidation based treatments. J Hazard Mat. Amsterdam. v. 138, n. 2, p. 234-251, 2006,
(suplemento).
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
172
ROBINSON, J. P.; SNAPE, C. G.; KINGMAN, S. W.; SHANE, H. Thermal desorption and
pyrolysis of oil contaminated drill cuttings by microwave heating. J Anal Appl Pyrol.
Amsterdam. v. 81, n. 1, p. 27-32, 2008.
ROMANTCHUK, M.; SARAND, I.; PETNEN, T.; PELTOLA, R.; JONSSON-VIHANNE,
M.; KOIVULA, T; YRJL, K.; HAAHTELA, K. Means to improve the effect of in situ
bioremediation of contaminated soil: an overview of novel approaches. Environ Pollut.
Barking. v. 107, n. 2, p. 179-185, 2000.
RMBKE, J.; BREURE, A. M.; MULDER, C.; RUTGERS, M. Legislation and ecologic
quality assessment of soil: implementation of ecological indication systems in Europe.
Ecotoxicol Environ Tox. New York. v. 62, n. 2, p. 201-210, 2005.
ROMERO, N. C.; URRUTIA, M. I.; REINOSO, H. E.; KIERNAN, M. M. Benzo[a]pyrene
degradation by soil filamentous fungi. J Yeast Fungal Res. Nairobi. v. 1, n. 2, p. 25-29,
2010.
ROWLAND, A. P.; LINDLEY, D. K.; HALL, E. H.; ROSSALL, M. J.; WILSON, D. R.;
BENHAM, D. G.; HARRISON, A. F.; DANIELS, R. E. Effects of beach sand properties,
temperature, rainfall on the degradation rates of oil in buried oil/beach sand mixtures.
Environ Pollut. Barking. v. 109, n. 1, p. 109-118, 2000.
SABBAH, I.; REBHUN, M.; GERSTL, Z. An independent prediction of the effect of
dissolved organic matter on the transport of polycyclic aromatic hydrocarbons. J Contam
Hydrol. Amsterdam. v. 75, n. 1-2, p. 55-70, 2004.
SAMANTA, S. K.; SINGH, O. V.; JAIN, R. K. Polycyclic aromatic hydrocarbons:
environmental pollution and bioremediation. Trends Biotechnol. Barking. v. 20, n. 6, p.
243-248, 2002.
SARKAR, D.; FERGUSON, N. M.; DATTA, R.; BIRNBAUM, S. Bioremediation of
petroleum hydrocarbons in contaminated soils: comparison of biosolids addition, carbon
supplementation, and monitored natural attenuation. Environ Pollut. Barking. v. 136, n. 1,
p. 187-195, 2005.
SARMA, P. M.; BHATTACHARYA, D.; KRISHNAN, S.; LAL, B. Degradation of
polycyclic aromatic hydrocarbons by a newly discovered enteric bacterium, Leclercia
adecarboxylata. Appl Environ Microbiol. Washington. v. 70, n. 5, p. 3163-3166, 2004.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
173
SATOH, H.; OKABE, S.; YAMAGUCHI, Y.; WATANEBE, Y. Evaluation of the impact of
bioaugmentation and biostimulation by in situ hybridization and microelectrode. Wat Res.
Oxford. v. 37, n. 9, p. 2206-2216, 2003.
SAXENA, S. C.; JOTSHI, C. K. Management and combustion of hazardous waste. Prog
Energ Combust Sci. Amsterdam. v. 22, n. 5, p. 401-425, 1996.
SCHERR, K.; AICHBERGER, H.; BRAUN, R.; LOIBNER, A. P. Influence of soil fractions
on microbial degradation behavior of mineral hydrocarbons. Eur J Soil Biol. Paris. v. 43,
n. 5-6, p. 341-350, 2007.
SCHNEIDER, J.; GROSSER, R.; JAYASIMHULU, K.; XUE, W.; WARSHAWSKY, D.
Degradation of pyrene, benzo[a]anthracene and benzo[a]pyrene by Mycobacterium sp.
Strain GII-135 isolated from a former coal gasification site. Appl Environ Microbiol.
Washington. v. 62, n. 1, p. 13-19, 1996.
SDA - THE SOAP AND DETERGENT ASSOCIATION. Glycerine: an overview. New
York: SDA Glycerine & Oleochemical Division, 1990, 27p.
SECOND generation thermal desorption reprocesses oily waste. Hydrocarbon Proc. Huston,
October, p. 33, 2000.
SEMPLE, K. J.; DOICK, K. J.; WICK, L. Y.; HARMS, H. Microbial interactions with
organic contaminant in soil: definitions processes and measurement. Environ Pollut.
Barking. v. 150, n. 1, p. 166-176, 2007.
SENEVIRATNE, G.; ZAVAHIR, J. S.; BANDARA, W. M. M. S. Fungal-bacterial biofilms:
their development for a novel biotechnological applications. World J Microbiol
Biotechnolol. Dordrecht. v. 24, n. 6, p. 739-743, 2008.
SERVDRUP, L. E.; KROGH, P. H.; NIELSEN, T.; KJR, C. Toxicity of eight polycyclic
aromatic compounds to red clover (Trifolium pretense), ryegrass (Lolium perenne), and
mustard (Sinapsis alba). Chemosphere. Amsterdam. v. 53, n. 8, p. 993-1003, 2003.
SHEN, F-T.; YOUNG, L-S.; HSIEH, M-F.; LIN, S-Y.; YOUNG, C-C. Molecular detection
and phylogenetic analysis of the alkane 1-monooxygenase gene from Gordonia spp. Syst
Appl Microbiol. Stuttgart. v. 33, n. 2, p. 53-59, 2010.
SILVA, A. C. da; OLIVEIRA, F. J. S.; BERNARDES, D. S.; DE FRANA, F. P.
Bioremediation of marine sediments impacted by petroleum. Appl Biochem Biotechnolol.
Clifton. v. 153, n. 1-3, p. 58-66, 2009.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
174
SILVER, S.; PHUNG, LE T.; SILVER G. Silver as biocides in burns and wound dressings
and bacterial resistance to silver compounds. J Ind Microbiol Biotechnol. Houndmills. v.
33, n. 7, p. 627-634, 2006.
SINGH, A.; VAN HAMME, J. D.; WARD, O. P. Surfactant in microbiology and
biotechnology part 2: application aspects. Biotechnol Adv. Oxford. v. 25, n. 1, p. 99-121,
2007.
SMETS, B. F.; PRITCHARD, P. H. Elucidating the microbial component of natural
attenuation. Curr Opin Biotechnol. London. v. 14, n. 3, p. 283-288, 2003.
SMITH, M. J.; FLOWERS, T. H.; DUNCAN, H. J.; ALDER, J. Effects of polycyclic
aromatic hydrocarbons on germination and subsequent growth of grasses and legumes in
freshly contaminated soil and soil with aged PAHs residues. Environ Pollut. Barking. v.
141, n. 3, p. 519-525, 2006.
SPACCIAPOLI, P.; BUXTON, D.; ROTHSTEIN, D.; FRIDEN, P. Antimicrobial activity of
silver nitrate against periodontal pathogens. J Periodontal Res. Copenhagen. v. 36, 2, p.
108-113, 2001.
SPAIN, J. C.; VAN VELD, P. A. Adaptation of natural microbial communities to degradation
of xenobiotic compounds: effects of concentration, exposure time, inoculum and chemical
structure. Appl Environ Microbiol. Washington. v. 45, n. 2, p. 428-435, 1983.
SPRATT, D. A.; PRATTEN, J. Carbon substrate utilization as a method of studying biofilm
development. Biofilms. Cambridge. v. 2, n. 4, p. 239-243, 2005.
SUPAPHOL, S.; PANICHSAKPATANA, S.; TRAKULNALEAMSAI, S.;
TUNGKANANURUK, N.; ROUGHJANAJIRAPA, P.; ODONNEL, A. G. The selection
of mixed microbial inocula in environmental biotechnology: example using petroleum
contaminated tropical soils. J Microbiol Methods. Amsterdam. v. 65, n. 3, p. 432-441,
2006.
SZKLO, A. S. Fundamentos do refino de petrleo. 1. ed. Rio de Janeiro: Intercincia, 2005.
207p.
TAO, X-Q.; LU, G-N.; DANE, Z.; YANG, C.; YI, X-Y. A phenanthrene-degrading strain
Sphingomonas sp GY2B isolated from contaminated soils. Bioresour Technol. Barking. v.
42, n. 3, p. 401-408, 2007.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
175
TENG, Y.; LUO, Y. SUN, M.; LIU, Z.; LI, Z; CRISTIE, P. Effect of bioaugmentation by
Paracoccus sp. Strain HPD-2 on the soil microbial community and removal of polycyclic
aromatic hydrocarbons from an aged contaminated soil. Bioresour Technol. Barking. v.
101, n. 10, p. 3437-3443, 2010.
TAVARES, W. Manual de antibiticos e quimioterpicos antiinfecciosos. 3 ed. So Paulo:
Atheneu, 2001. p. 810-811.
THOMAS, J. E. (Org.) Fundamentos de Engenharia de Petrleo. 2 ed. Rio de janeiro:
Intercincia, 2001. 271p.
THOMAS, S.; WORNAT, M. J. The effects of oxygen on the yields of polycyclic aromatic
hydrocarbons formed during the pyrolysis and fuel-rich oxidation of cathecol. Fuel.
Amsterdam. v. 87, n. 6, p. 768-781, 2008.
TIEDJE, J. M.; ASUMING-BREMPONG, S.; NSSLEIN, K.; MARSH, T. L.; FLYNN, S. J.
Opening the black box of soil microbial diversity. Appl Soil Ecol. Amsterdam. v. 13, n. 2,
p. 109-122, 1999.
TILMAN, D. Causes, consequences and ethics of biodiversity. Nature. London. v. 405, n.
6783, p. 208-211, 2000.
TIQUIA, S. M.; TAM, N. F. Y.; HODGKISS, I. J. Effects of composting on phytotoxicity of
spent pig-manure sawdust litter. Environ Pollut. Barking. v. 93, n. 3, p. 249-256, 1996.
TOBOR-KAPLON, M. A.; BLOEM, J.; RMKENS, P. F. A. M.; DE RUITER, P. C.
Functional stability of microbial communities in contaminated soils. Oikos. Lund. v. 62, n.
11, p. 119-129, 2005.
TOLEDO, F. L.; CALVO, C.; RODELAS, B.; GONZLES-LPEZ, J. Selection and
identification of bacteria isolated from waste crude oil with polycyclic aromatic
hydrocarbons removal capacities. Syst Appl Microbiol. Stuttgart, v. 29, n. 3, p. 244-252,
2006.
TOLUN, L.; MARTENS, D.; OKAY, O. S.; SCHRAMM, K. W. Polycyclic aromatic
hydrocarbon contamination in coastal sediments of the Izmit bay (Marmara sea): case
studies before and after the Izmit earthquake. Environ Pollut. Barking. v. 32, n. 6, p. 758-
765, 2006.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
176
TURKOSKAYA, O. V.; DMITRIEVA, T. V.; MURATOVA, A. Yu. A biosurfactant-
producing Pseudomonas aeruginosa strain. Appl Biochem Biotechnolol. Clifton. v. 37, n.
1, p. 71-75, 2001.
USEPA - UNITED STATES ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY. Method
351.2. Determination of total Kjeldahl nitrogen by semi-automatic colorimetric, revision
2.0. Washington: U. S. Government Printing Office, 1993.
USEPA - UNITED STATES ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY. Method
365.3. Phosphorus, all forms (colorimetric, ascorbic acid, two reagents). Washington: U.
S. Government Printing Office, 1978.
USEPA - UNITED STATES ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY. Method 1613.
Tetra- though Octa-chlorinated dioxins and furans by isotope dilution HRGS/HRMS,
revision B. Washington: U. S. Government Printing Office, 1994.
USEPA - UNITED STATES ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY. Method
3540C. Soxhlet extraction, v. I-B. Washington: U. S. Government Printing Office, 1996.
USEPA - UNITED STATES ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY. Method
3630C. Silica gel clean-up, v. I-B. Washington: U. S. Government Printing Office, 1996.
USEPA - UNITED STATES ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY. Method
8015B. Nonhalogenated Organics by Gas Chromatography/Flame Ionization Detector,
revision 2. Washington: U. S. Government Printing Office, 1996.
USEPA - UNITED STATES ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY. Method
8270C. Semivolatile Organic Compounds by Gas Chromatography/Mass Spectrometry,
3
rd
ed. Washington: U. S. Government Printing Office, 1996.
USEPA - UNITED STATES ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY. Method
8290A. Polychlorinated dibenzo-p-dioxins (PCDDs) and polychlorinated dibenzofurans
(PCDFs) by high-resolution gas chromatography/high-resolution mass spectrometry
(HRGS/HRMS), revision 1. Washington: U. S. Government Printing Office, 2007.
USEPA - UNITED STATES ENVIRONMENTAL PROTECTION AGENCY. Method 9060.
Total Organic Carbon, 3
rd
ed. Washington: U. S. Government Printing Office, 1996.
VAN HAMME, J. D.; SINGH, A.; WARD, O. P. Recent advances in petroleum
microbiology. Microbiol Mol Biol Rev. Washington. v. 67, n. 4, p. 503-549, 2003.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
177
VASCONCELOS, U.; LIMA, M. A. G. A.; CALAZANS, G. M. T. Pseudomonas aeruginosa
associated with negative interactions on coliform bacteria growth. Can J Pure Appl Sci.
Burnaby. v. 4, n. 2, p. 1133-1139, 2010.
VASUDEVAN, N.; RAJARAM, P. Bioremediation of oil-sludge contaminated soil. Environ
Int. New York. v. 26, n. 5-6, p. 409-411, 2001.
VERDIN, A.; SAHRAOUI, A. L-H.; NEWSAM, R.; ROBINSON, G.; DURAND, R.
Polycyclic aromatic hydrocarbons storage by Fusarium solani in intracellular lipid
vesicles. Environ Pollut. Barking. v. 133, n. 2, p. 283-291, 2005.
VICENTE, G.; COTERON, A.; MARTINEZ, M.; ARACIL, J. Application of factorial design
of experiments and response surface methodology to optimize biodiesel production. Ind
Crops Prod. Amsterdam. v. 8, n. 1, p. 29-35, 1998.
VIAS, M.; SABAT, J.; ESPUNY, M. J.; SOLANAS, A. M. Bacterial community
dynamics and polycyclic aromatic hydrocarbons degradation during bioremediation of
heavily creosote-contaminated soil. Appl Environ Microbiol. Washington. v. 71, n. 11, p.
7008-7018, 2005.
VISVANATHAN, C. Hazardous waste disposal. Res Conserv Recyc. Amsterdam. v. 16, n. 1-
4, p. 201-212, 1996.
VO-DINH, T.; FETZER, J.; CAMPIGLIA, A. D. Monitoring and characterization of
polyaromatic compounds in the environment. Talanta. New York. v. 47, n. 4, p. 943-969,
1998.
VOGEL, T. M. Bioaugmentation as a soil bioremediation approach. Curr Opion Biotechnol.
London. v. 7, n. 3, p. 311-316, 1996.
WANG, X.; SUN, C.; WANG, Y.; WANG, L. Quantitative structure-activity relationships for
the inhibition toxicity to root elongation of Cucumis sativus of selected phenols and
interspecies correlation with Tetrahymena pyriformis. Chemosphere. Amsterdam. v. 46, n.
2, p. 153-161, 2002.
WARD, O.; SINGH, A.; VAN HAMME, J. Accelerated biodegradation of petroleum
hydrocarbon waste. J Ind Microbiol Biotechnol. Houndmills. v. 30, n. 5, p. 260-270, 2003.
WATANABE, K. Microorganisms relevant in bioremediation. Curr Opin Biotechnol.
London. v. 12, n. 3, p. 237-241, 2001.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
178
WATANABE, K.; HAMAMURA, N. Molecular and physiological approaches to
understanding the ecology of pollutant degradation. Curr Opin Biotechnol. London. v. 14,
n. 3, p. 289-295, 2003.
WATSON, J. S.; JONES, D. M.; SWANNELL, R. P. J.; VAN DUIN, A. C. T. Formation of
carboxylic acids during aerobic biodegradation of crude oil and evidence of microbial
oxidation of hopanes. Org Geochem. Oxford. v. 33, n. 8, p. 1153-1169, 2002.
WATWOOD, M. E.; WHITE, C. S.; DAHN, C. N. Methodological modifications for accurate
and efficient determination of contaminant biodegradation in unsaturated calcareous soil.
Appl Environ Microbiol. Washington. v. 57, n. 3, p. 717-720, 1991.
WEBER, R.; IINO, F.; IMAGAWA, T.; TAKEUCHI, M.; SAKURAI, T.; SADAKATA, M.
Formation of PCDF, PCDD, PCB and PCN in de novo synthesis from PAH: mechanistic
aspects and correlation to fluidized bed incinerators. Chemosphere. Oxford. v. 44, n. 6, p.
1429-1438, 2001.
WELSH, D. T. Ecological significance of compatible solute accumulation by micro-
organisms: from single cells to global climate. FEMS Microbiol Rev. Amsterdam. v. 24, n.
3, p. 263-290, 2000.
WHO-ECEH/IPCS WORLD HEALTH ORGANIZATION; EUROPEAN CENTRE FOR
ENVIRONMENTAL AND HEALTHS INTERNATIONAL PROGRAMME ON
CHEMICAL SAFETY. Consultation on assessment of health risk of dioxins: re-
evaluation of daily tolerable intake (TDI). Geneva: WHO, 1998.
WIECZOREK, J. K.; WIECZOREK, Z. J. Phytotoxicity and accumulation of anthracene
applied to the foliage and sandy substrate in lettuce and radish plant. Ecotoxicol Environ
Saf. New York. v. 66, n. 3, p. 369-377, 2007.
WILCKE, W. Global patterns of polycyclic aromatic hydrocarbons (PAH) in soil. Geoderma.
Amsterdam. v. 141, n. 3-4, p. 157-166, 2007.
WILSON, V. L.; TATFORD, B. C.; YIN, X.; RAJKI, S. C.; WALSH, M. M; LaROCK, P.
Species-specific detection of hydrocarbon-utilizing bacteria. J Microbiol Methods.
Amsterdam. v. 39, n. 1, p. 59-78, 1999.
WOLFSON, A.; LITVAK, G.; DLUGY, C.; SHOTLAND, Y.; TAVOR, D. Employing crude
glycerol from biodiesel production as an alternative green reaction medium. Ind Crops
Prod. Amsterdam. v. 30, n. 1, p. 78-81, 2009.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
179
WORLD OIL. Thermal desorption: an alternative OBM cuttings treatment. World Oil.
Houston. v. 222, n. 2, p. 104-107, 2001.
WRIGHT, J. B.; LAM, K.; HANSEN, D.; BURRELL, R. E. Efficacy of topical silver against
fungal burn wound pathogens. Am J Infect Control. St. Louis. v. 27, n. 4, p. 344-350,
1999.
XU, R.; OBBARD, J. P. Biodegradation of polycyclic aromatic hydrocarbons in oil-
contaminated beach sediments treated with nutrient amendments. J Environ Qual.
Madison. v. 33, n. 3, p. 861-867, 2004.
YE, J-S.; YIN, H.; QIANG, J.; PENG, H.; QIN, H-M.; ZHANG, N.; HE, B-H.
Biodegradation of anthracene by Aspergillus fumigates. J Hazard Mat. Amsterdam. v.
185, n. 1, p. 174-181, 2011.
YUSTE, L.; CORBELLA, M. E.; TURIGANO, M. J.; KARLSON, U.; PUYET, A.; ROJO,
F. Characterization of bacterial strains able to grow on high molecular mass residues from
crude oil processing. FEMS Microbiol Ecol. Amsterdam. v. 32, n. 1, p. 69-75, 2000.
ZHANG, G-L.; WU, Y-T.; QIAN, X-P.; MENG, Q. Biodegradation of crude oil by
Pseudomonas aeruginosa in the presence of rhamnolipds. J Zhejiang Univ Sci. Zhjiang. v.
6, n. 8, p. 725-730, 2005, (suplemento).
ZHANG, S.; PENG, P.; HUANG, W.; LI, X.; ZHANG, G. PCDD/PCDF pollution in soils
and sediments from the Pearl River delta of China. Chemosphere. Oxford. v. 75, n. 9, p.
1186-1195, 2009.
ZHANG, X-X.; CHENG, S-P.; ZHU, C-J.; SUN, S-L. Microbial PAH-degradation in soil:
degradation pathways and contributing factors. Pedosphere. Amsterdam. v. 16, n. 5, p.
555-565, 2006.
ZOCCA, C.; Di GREGORIO, S.; VISENTINI, F.; VALLINI, G. Biodiversity amongst
cultivable polycyclic aromatic hydrocarbon-transforming bacteria isolated from an
abandoned industrial site. FEMS Microbiol Lett. Amsterdam. v. 238, n. 2, p. 375-382,
2004.
ZUCCHI, M.; ANGIOLINI, L.; BORIN, S.; BRUSETTI, L.; DIETRICH, N.; GIGLIOTTI,
C.; BARBIERI, P.; SORLINI, C.; DAFFONCHIO, D. Response of bacterial community
during bioremediation of an oil-polluted soil. J Appl Microbiol. Oxford. v. 94, n. 2, p.
248-257, 2003.
Tratamento Microbiolgico Sequencial de solo... Vasconcelos, U. (nome para citao)
180

ANEXO A Produo bibliogrfica

Trabalho publicado

VASCONCELOS, U.; OLIVEIRA, F. J. S.; DE FRANA, F. P. Evaluacin de la eficacia del
tratamiento por desercin trmica de un suelo contaminado con residuos aceitosos. Revista
Ingineria Sanitaria y Ambiental. Buenos Aires. v. julio-agosto, n. 110, p. 59-63, 2010.

Trabalho aceito para publicao

VASCONCELOS, U.; DE FRANA, F. P.; OLIVEIRA, F. J. S. Removal of high-molecular
weight polycyclic aromatic hydrocarbons. Qumica Nova. So Paulo. In Press, 2011.

Trabalhos completos em eventos

VASCONCELOS, U.; OLIVEIRA, F. J. S.; DE FRANA, F. P. Potencialidade do glicerol na
biorremediao de fluoreno e benzo[a]pireno presentes em solo pr-tratado por dessoro
trmica. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE ENGENHARIA QUMICA, 18., 2010, Foz do
Iguau. Anais... So Carlos: Cubo Multimidia, p. 9277-9285, 2010.

VASCONCELOS, U.; DA SILVA, L. J.; DE FRANA, F. P. Obteno de linhagens de
microorganismos hidrocarbonoclsticos. In: CONGRESSO BRASILEIRO DE
ENGENHARIA QUMICA, 17., 2008, Recife. Anais Recife : ABEQ, 2008.


EvaluacindeIaeficaciadeItratamientopor desorcin
trmicadeun sueIocontaminadoconresiduosaceitosos
Ulrich Vasconcelos, Fernando J. S. Oliveira y Francisca P.de Frana
RESUMEN
Se investig Ia eficiencia deI proceso de tratamiento de suelos
contaminados con residuos aceitosos, por desorcin trmica, a
travs de ensayos ffsico-qumicos y de pruebas de ecotoxicidad.
La operacin de tratamiento trmico, a escala industrial, remo-
vi 98% de los Hidrocarburos Totales de Petrleo (HTP)y e197%
deI total de Ias concentraciones de los 16Hidrocarburos Polic-
clicos Aromticos (HPA),prioritarios listados por Ia EPA.Las pro-
piedades importantes deI suelo como textura, pH y capacidad de
retencin de agua sufrieron alteraciones significativas con el pro-
ceso de tratamiento. Se seleccion Cucumis anguria, entre tres
vegetales sometidos a prueba, como Iaespecie ms sensible a Ia
presencia de los contaminantes, debido a que present germina-
cin relativa nula en Ias muestras deI suelo contaminado. EItra-
tamiento trmico hizo aumentar en 41 :t 1%el fndice de Germi-
nacinRelativo(lGR)y en60:t 1%eldeElongamientoRelativode
Ias Races (ERR),de Ias semillas de C. anguria.
Palabras clave
Tratamiento desuelos, desorcintrmica,residuosaceitosos,
fitotoxicidad
AIDls ARGENTINA .Ingenlerfa Sanitariay Amblental . N110
INTRODUCCIN
Los residuos aceitosos generados en operaciones indus-
triales son peligrosos y su gestin correcta representa un
desafo para Ia industria. Estos residuos comprenden una
mezcla de sustancias hidrfobas, recalcitrantes en distintos
grados y, a veces, carcinognicas. EItratamiento y Ia dispo-
sicin final incorrectos de estos materiales pueden ocasio-
nar impactos adversos importantes, principalmente a sue-
los y cuerpos hdricos diversos (Das y Mukherjee, 2007).
Una de Ias tcnicas para el tratamiento de residuos aceito-
sos es Ia disposicin o incorporacin en suelos para propi-
ciar una degradacin natural controlada. Sin embargo, en
muchos casos, Ia ejecucin de esa tcnica es equivocada o
insegura causando danos ai ambiente. En algunos casos, Ia
accin dei tiempo puede potenciar impactos negativos en
el acceso de Ia micro biota nativa dei suelo y en Ia biodis-
ponibilidad de ciertas molculas (Sempie et aI.,2007). EItra-
tamiento de suelo contaminado con aceites tiene como
objetivo Ia reduccin dei volumen dei contaminante y Ia
desintoxicacin. Considerando que en algunos casos el
biotratamiento no puede ser eficiente, los tratamientos tr-
micos vienen a ser Ias tcnicas ms utilizadas y disponibles
comercialmente para Ia remocin de contaminantes en
suelos impactados por aceites. En funcin de Ia temperatu-
ra utilizada, los tratamientos trmicos se clasifican en dos
tipos: (1) tcnicas de desorcin, operando en un rango de
temperatura entre 100 - 500C, Ias cuales promueven el
secado dei suelo y Ia separacin fsica por transferencia de
masa hacia Ia fase gaseosa; y (2) tcnicas de destruccin,
operando a temperaturas mayores de 500C, promovien-
do el grado elevado de modificacin qumica de los conta-
minantes (Merino y Bucal, 2006).
La desorcin trmica es un proceso de remocin de mol-
culas, basado en el fenmeno de volatilizacin de los cons-
tituyentes adheridos a Ia superficie, contenidas en los mi-
croporos y mesoporos de los slidos, a travs de Ia aplica-
cin de energa trmica. EItratamiento de suelos contami-
nados utilizando el proceso de desorcin trmica es consi-
derado una de Ias tcnicas de remediacin mas populares
y verstiles, entre Ias existentes, debido ai amplio espectro
de contaminantes orgnicos y algunos metales que pue-
den ser convertidos a sus formas voltiles (Dazyet aI.,2009).
Dentro dei horno de desorcin, el proceso ocurre en tres
etapas: (1) liberacin de compuestos orgnicos voltiles y
agua; (2) liberacin lenta dei aceite con el aumento gradual
de Ia temperatura y, (3) prdida de masa representada por
Ia prdida de agua, hidrocarburos, humus, metales y algu-
Tratamlentodesuelos I 59
nos minerales como carbonatos (Lee et ai., 1998). Luego dei
tratamiento de suelos por desorcin, en general, dichos
materiales son reubicados en su lugar de origen, dado que
ya poseen concentracin reducida de los contaminantes
aceitosos.
Las oscilaciones intrnsecas aios procedimientos en escala
industrial, el tipo de suelo, grado y antigedad de Ia conta-
minacin pueden figurar, entre otros factores, como Ias cau-
sas directas de Ia presencia de compuestos remanentes,
influenciando Ia eficiencia de remocin de los contami-
nantes. Considerando Ias parUculas finas de suelos y el
gradiente de temperatura, pueden ocurrir algunas reaccio-
nes qumicas de forma marginal y eso, tambin, puede in-
fluenciar Ia eficacia de Ia reduccin de Ia toxicidad. Estos
factores resaltan Ia necesidad de estudios para verificar Ia
capacidad de remocin de los compuestos de petrleo as
como Ia reduccin de Ia toxicidad de los suelos tratados
por desorcin trmica.
EIobjetivo de este trabajo fue el de evaluar Ia eficacia dei
tratamiento trmico de suelos contaminados con residuos
aceitosos en relacin a Ia remocin de los contaminantes y
Ia fitotoxicidad de los suelos.
MATERIALESYMttODOS
Unidad de Desorcin Trmica (UDT)
La UDTautomatizada industrial estaba compuesta de cua-
tro sistemas: preparacin y adicin de suelos contamina-
dos, desorcin de los compuestos orgnicos, tratamiento
de los efluentes gaseosos y, control e intertrabamiento de
Ia planta. EIequipo con lIama directa alimentada por GLp,
tena un volumen de trabajo de 200 m3/d, en un rango de
temperatura de 300 - 350 CYcon un tiempo de residencia
de Ia mezcla de 12 minutos.
Suelos yensayos fsico-quimicos de Ias muestras
Se tomaron muestras de suelo preparado para su entrada
ai horno de Ia UDTy tambin de suelo considerado como
tratado. EIsuelo a ser tratado estaba altamente impactado
con residuo de fondo de columna de destilacin ai vado
en un evento que ocurri hace ms de 50 aflos. Cada una
de Ias muestras contena 50 kg de suelo y fueron recolecta-
das con Ia ayuda de palas, acondicionadas en blsas pls-
ticas, selladas y transportadas para ellaboratorio bajo refri-
geracin. Una vez que Ias muestras fueron homogeneiza-
das en el laboratorio, se usaron parte de Ias mismas, acon-
dicionadas en recipientes de vidrio para realizar anlisis
fsico-qumicos. La caracterizacin de Ias muestras de suelo
comprendi anlisis fsico-qumicos determinados a tra-
vs de ensayos, aplicando metodologas estndar de Ia
Agencia de Protecdon Ambiental de los Estados Unidos
(EPA), de IaAsociacin Brasileflade RegiasTcnicas (ABNT)y
de Ia Empresa Brasilefla de Investigadon Agroganadera
(EMBRAPA), Ias cuales se encuentran listadas en Ia seccin
de referencias. Para determinacin de Ias concentraciones
de HPAen Ias muestras suelos, alicuotas fueron extradas
60 I Tratamlento de suelos
en Soxhlet y Ia purificadon de los extractos fue hecha usan-
do columna de silica gel, como descrito en Ias metodolo-
gas EPA3540 YEPA3630, respectivamente.
Ensayo de fitotoxicidad
EI primer objetivo de Ias pruebas de fitotoxicidad fue el de
identificar una especie muy sensible a Ia presencia de los
contaminantes de los suelos. Para esto, se utilizaron espe-
cies de los vegetales Alliumporrum, Cucum;sangur;a, Cucu-
m;s sat;vus e Cucum;s meio, Ias cuales fueron cultivadas en
estratos obtenidos a partir dei suelo contaminado, tal como
fue descrito por Tiquia et ai., (1996). Se cuantificaron ellndi-
ce de Germinacin Relativo (lGR)de Ias semillas y el de
Elongamiento Relativo de Ias Races (ERR).A partir de Ia
seleccin de Ias especies ms sensibles ai contaminante, se
realizaron pruebas de fitotoxicidad utilizando estratos de
suelo tratado, con el objetivo de verificar Ia eficacia dei
tratamiento trmico en cuanto a Ia desintoxicacin. Todas
Ias pruebas fueron ejecutadas por triplicado, con el uso de
diez semillas de cada especie y con tiempo de incubacin de
5 das a 22 :t 1De.Los resultados de IGRy de ERRtoman en
consideracin ensayos en blanco usando agua destilada.
RESULTADOS Y DISCUSIN
La caracterizacin fsico-qumica de Ias muestras de suelo
antes y despus dei tratamiento trmico se presenta en Ia
Tabla 1. Lacomposicin granulomtrica revel que el estu-
dio fue realizado con suelo con contenido elevado de ma-
terial fino, tratndose de suei os intemperizados. Las part-
culas finas de los suelos poseen reas superficiales eleva-
das y cargas parciales que favorecen los procesos de ad-
sorcin de los contaminantes y Ia formacin de agregados
que dificultan Ia accin de Ia mayora de los agentes de
remediacin de suelos.
Se verific que Ia accin dei calor en el suelo promovi el
aumento de, aproximadamente, 20% en el contenido de
limo y de 60% en el contenido de arcilla con Ia conse-
cuente reduccin dei porcentaje de partculas ms grue-
sas. De hecho, Ia presencia de aceites en los suelos favore-
ce fenmenos de aumento de finos con generacin de
agregados estables y con dimetros mayores, dificultan-
do Ia biodegradacin de los compuestos adsorbidos (Ara-
runa Jr.et ai.,2004).
La capacidad de retencin de agua dei suelo tambin
sufri alteraciones significativas debido ai procesamien-
to trmico. La accin dei calor promovi una reduccin
media dei 29% en ese parmetro, probablemente, relacio-
nada con variaciones en Ia micro estructura dei suelo, des-
truccin de parte de Ia materia orgnica y de Ia conver-
sin dei suelo hacia partculas sin cohesin. Estos resulta-
dos corroboran aios presentados por Abu-Zreig et ai.,
(2001)que estudiaron el comportamiento de suelos bajo
Ia influencia de diferentes temperaturas utilizadas en el
tratamiento de suei os por desorcin trmica.
Ntese que Ia accin dei calor promovi Ia reduccin en
AIDISARGENTINA. Ingenierfa Sanitarla y Ambiental . N110
Tabla 1. Caracteristicas fisico-quimicas delsuelo (1995), quienes reportan Ia eli-
minacin total de TPH y HPA
de suei os que pasaron por
desorcin trmica, probable-
mente debido a Ias diferen-
cias de textura y composicin
qumica de los suelos y en los
equipos utilizados. Por otra
parte, Remmler y Kopinke
(1995) observaron Ia vaporiza-
cin completa de todos los
HPAde hasta cuatro anillos en
el suelo, luego dei tratamien-
to mediante desorcin trmi-
ca. Sinembargo, por encima de
270C, diversas reacciones
pueden promover el aumen-
to de Ias cadenas o Ia forma-
cin de ismeros de HPA,tan-
to de baja como de alta masa
molecular (Pope et aI., 2000).
Estos hechos resaltan Ia nece-
sidad de estudios especificos
para el tratamiento adecuado
de suelos impactados y expli-
can Ia presencia de compuestos orgnicos residuales en el
suelo estudiado.
La presencia de compuestos remanentes en el suelo y
otras modificaciones de algunas de sus propiedades im-
pulsaron Ia realizacin de estudios de fitotoxicidad con el
uso de especies sensibles aios contaminantes. Se escogi
Ia prueba de ecotoxicidad con uso de plantas basado en
Ia premisa de que Ias plantas constituyen una de Ias rutas
de Ia remocin de hidrocarburos de los suelos. Estos com-
puestos orgnicos pueden ser, an, bioacumulados y bio-
magnificados y, por eso, algunas especies son bastante
sensibles a Ia presencia de esos compuestos (Juhasz et aI.,
2010). La sensibilidad aios contaminantes de algunas es-
pecies de vegetales puede ser expresada de varias formas,
destacndose el porcentaje de germinacin de Ias semi-
lias y el elongamiento de Ias races.
Los resultados de Ias pruebas ecotoxicolgicas para Ia
seleccin de especies vegetales sensibles aios contami-
nantes demostraron los efectos adversos de estos mate-
riales sobre Ias tres especies estudiadas, Figura 1. Queda
verificado que Ia presencia dei contaminante hace reducir
tanto el IGRde Ias semillas como el ERR,siendo, de esta
forma, C. anguria Ia especie ms sensible ai contaminante,
pues el IGRde Ias semillas fue prcticamente nulo, moti-
vando Ia seleccin de ese vegetal como indicador para el
anlisis dei grado de desintoxicacin dei suelo.
EItratamiento trmico dei suelo promovi Ia reduccin de
los efectos fitotxicos sobre todos Ias especies vegetales
sometidas a prueba, Figura 2. Comparando Ias Figuras 1 y 2,
se destaca, sin embargo, que hubo aun aumento significa-
tivo dellGR de Iassemillas de C.anguria, 41 :t 1%(p<0,05), y
*COT = Carbono Orgnico Total, "*CRA = Capacidad de retencin de agua
Ias concentraciones de Ny P.de 7%e 15%,respectivamen-
te. Esto indica que el N y el P contenidos en los suelos
estaban probablemente asociados a Ias matrices inorg-
nicas, dado que el contaminante, residuo de vaco, era
muy pobre en compuestos nitrogenados y/o fosforados.
La reduccin de Ia concentracin de carbono orgnico y
mantenimiento de tenores de nitrgeno y fsforo impli-
caron un aumento de Ia relacin C:N:Pde los suelos trata-
dos en Ia UDT.Se observ tambin, un aumento dei pH de
Ias muestras dei suelo tratado y eso puede estar relacio-
nado con el consumo de compuestos cidos presentes
en el contaminante y a Ia propia incorporacin de ceni-
zas, originadas en Ia quema de los gases.
EIproceso trmico promovi Ia remocin de cerca dei 70%
dei carbono orgnico dei suelo con Ia reduccin significa-
tiva de losTPH,98%Yde los HPA, 97%.Cabe destacar que, el
mtodo utilizado para Ia cuantificacin de los TPHusa Ia
combustin de los compuestos extrados en presencia de
lIama y cromatografa gaseosa; y, que los resultados fue-
ron expresados considerando tanto 'Ia fraccin resuelta
dei cromatograma (hidrocarburos lineales) como Ia mezcla
compleja no resuelta (hidrocarburos y otros compuestos
orgnicos apoiares extrables con diclorometano) y, sien-
do as, es un buen indicador para materiales orgnicos.
Entonces, el proceso a escala industrial de desorcin trmi-
ca cumpli el objetivo de reducir el contenido de hidrocar-
buros de petrleo en el suelo impactado, permaneciendo
compuestos orgnicos pesados que no fueron extrados
de Ias matrices o identificados por los mtodos analticos
utilizados. Cabe destacar que estos resultados no corrobo-
ran a Robinson et aI., (2008);Leeet aI.,(1998)y George et aI.,
AIDIS ARGENTINA . Ingenierlll Sllnltarlll y Amblentlll . N 110
Tratamientodesuelos I 61
Resultado
Parmetro Suelo Suelo Referenda
contaminado tratado
Granulometra
ABNT(1984)
Arcilla (%)
3:t2 9:t5
Silte (%)
27 :t 1 33 :t 1
Arena fina (%)
29 :t 2 22 :t 2
Arena media (%)
22:t 1 19:tl
Arena gruesa (%)
15:t4 12:t4
Grava (%)
4:t3 5:t5
COT*(mg/kg)
75.500:t 1000 23.000:!: 1000
EPA9060
Nitrgeno Total (mg/kg)
1.591:t 110 1.397:t 130
EPA351.2
Fsforo Total (mg/kg)
914:t 10 777 :t 11
EPA351.3
16 HPA(mg/kg)
193,4:t 1,13 8,43 :t 0,59 EPA8270C
TPH(mg/kg)
58.047:t 1000 699 :t 50
EPA8015B
pH (en HP)
5,9 :t 0,1 7,8:t0,1
EMBRAPA(1979)
Humedad (%) 12,7:t 0,1 10,0:!:0,1
EMBRAPA(1979)
CRA**(%)
30,2:t0,1 21,4:!:0,1
Watwood etal., (1991)
C:N:P
100:2:1 100:6:3
EPA9060, 351.2 Y351.3
-----
60
I
~ I
"- I
::! 40 I
... I
oi.
!2
20
.-
A.porrvm C arrgllria
C wwlo
Vegetal
Figura 1. Pruebas de fitotoxicidad de 10suelo contamina-
do con residuos aceitosos. (O)Indice de Germinacin Rela-
tivo de Ias semillas (lGR).([::oIndice de Elongamiento Rela-
tivo de Ias Ralces (ERR).
80 r -----.--.--.
Figura 2. Pruebas de fitotoxicidad de 10suei o tratado
por desorcin trmica. (O) Indice de Germinacin Rela-
tivo de Ias semlllas (lGR). (O) Indice de Elongamiento Re-
lativo de Ias Ralces (ERR).
promocin dei ERR,60 :t 1% (p<O,OS), indicadores muy po-
sitivos dei tratamiento. De esta manera, queda claro que
Ia disminucin dei efecto inhibidor sobre C. anguria coin-
cidi con Ia reduccin significativa de Ia concentracin de
los contaminantes dei suelo.
EI estudio comprob, por 10tanto, que Ia evaluacin dei
grado de eficiencia de Ia operacin de desorcin trmica
realizada depende de Ia manera como se ab<?rda Ia eva-
luacin, bien mediante el uso de ensayos fsico-quimicos
o mediante el uso de ensayos biolgicos. Adems, este
estudio contribuy a apoyar Ia prueba de fitotoxicidad
como una pe Ias formas ms simples y rpidas dei diag-
nstico de Ia recuperacin dei funcionamiento natural
dei suelo, luego dei tratamiento. EIconjunto de los resul-
tados indica Ia necesidad de estudio de alternativas para
el tratamiento secuencial de los suelos con el objetivo de
mejorar su calidad.
CONCLUSIONES
La desorcin trmica puede remover 98% dei conteni-
62 I Tratamlentodesuelos
do de TPHdei suelo y 97% de Ia suma de Ias masas de
los 16 HPAprioritarios, listados por Ia EPA.A pesar de
que este resultado sea significativo, el suelo tratado
propici el incremento dei 41 % de Ias semillas de C.
anguria. De esa manera, es evidente Ia necesidad de tra-
tamiento secuencial de los suelos para su rehabilita-
cin y que el anlisis de Ia eficiencia de operaciones de
tratamiento de suei os impactados necesita de una eva-
luacin cuyo enfoque considere tanto pruebas fisico-
qumicas como biolgicas.
AGRADECIMIENTOS
Los autores agradecen a Petrleo Brasilelio S.A. (PETRO-
BRAS), Coordinacin ai Personal de Nivel Superior (CAPES),
Consejo Nacional de Desarrollo Cientfico y Tecnolgico
(CNPq) y a Ia Fundacin de Apoyo a Pesquisa dei Estado
de Riode Janeiro (FAPERJ).]
BIBLIOGRAFIA
AssociaoBrasileirade Normas Tcnicas (1984).Solo. Anlisegranulo-
mtrica. NBR7181. Riode Janeiro, 13p.
Abu-Zreig, M.M.;AI-Akhas,N.M.;Attom, M.F.(2001) Influence of heat
treatment on behavior of elayey soils. Applied Clay Science. 20, 129-
135 p.
Araruna Jr,J.T.; Portes,V.L.O.; Soares,A.P.L; Silva,M.G.;Sthel,M.S.;Schramm,
D.U.;Tibana, S.;Vasgas, H.(2004). Oil spills debris elean up by thermal
desorption. Journal of Hazardous Materiais. 11O,161-171 p.
Das, K; Mukherjee, A.K (2006). Crude petroleum-oil biodegradation
efficiency of Bacillussubtilis and Pseudomonas aeruginosa strains iso-
lated from petroleum oil contaminated soil from north-east India. Blo-
resourse and Technology. 98, 1339-134S p.
(S] Dazy,M.;Frard.J-F;Masfaraud,J-F.(2009).Useo a plant multiple-species
experiment for assessing the habitat function of a coke factory soil
before and after thermal desorption treatment. Ecology Enginering. 35,
1493-1SOOp.
(6] EMBRAPA.Manual de mtodos de anlisede solo.5NLCS:Rio de Janeiro,1979.
(7] George, C.E.;Azwell, D.E.;Adamis, P.A.;Rao,G.V.N.;Averett, D.E.(1995).
Evaluation of steam as a sweep gas in lowtemperature thermal desorp-
tion processes used for contaminated soil elean up. Waste Manage-
ment. 1S, 407-416 p.
(8] Juhasz.A.L;Smith, E.;Waller,N~Stewart.~Weber,J. (2010).Bioavailability
of residual polycyelicaromatic hydrocarbons following enhanced natu-
ral attenuation of creosote-contaminated soil. Environmental Pollutlon.
158, 58S-591 p.
(9] Lee,J.K; ParI<. D.;Kim,B-U.;Dong, J-I.;Lee, S.(1998). Remediation of pe-
troleum-contaminated soilsbyfluidized thermal desorption. Waste Ma-
nagement. 18, 503-507 p.
[10] Merino, J.; Bucal, V.(2007). Effect of temperature on the release of
hexadecane from soil by thermal desorptlon. Journal of Hazardous
Materiais. 143, 45S-461 p.
[11] Pope, CJ.; Peters, W.A.;Howard, J.B.(2000).Thermodynamic driving for-
ces for PAHisomerization and growth during themal treatment of
polluted soils. Journal of Hazardous Materiais. 79, 189-208 p.
(12] Remmler,M.;Kopinke, F-D.(199S).Thermal conversion of hydrocarbons
on solid matrices. Thermochimica Acta. 263,113-121 p.
[13] Robinson, J.P.;Snape, c.G.; Kingman, S.W.;Shane, H.(2008). Thermal
desorption and pyrolisis of oil contaminated drill cuttings by mi-
crowave heating.Journal of Analytical and Applied Pyrolysis. 81, 27-
32 p.
[14] Semple, KJ.;Doicl<. KJ.;Wicl<. LY.;Harms, H.(2oo7).Mlcrobiallnteractions
with organic contaminant in soil: detinitions processes and measure-
AIDIS ARGENTINA .Ingenlerfa Sanltarla y Amblental . N110
60
t
I
IIJ!i! ilikVf;'!itl I
i
[1]
ffi 40
I
oi.
I - I R:!;"t I ti;ZA'1 (2]
!2 I
20
I
I "". I f'!4; I ri0!!!:'1
i
I
(3]
I
o -
A.porrvm C. QlIgJlria
C. wwlo
[4]
Vegetal
ment. Environmental Pollution. 150. 166-176 p.
[15] Tiquia, S.M.;Tam. N.F.Y.;Hodgkiss,lJ. (1996). Effects of composting on
phytotoxicity of spent pig-manure sawdust liner. Environmental Pollu-
tion. 93, 249-256 p.
[16] USEPA351.2.Determination ohotal Kjeldahl nitrogen by semi-automa-
tic colorimetric. revision 2.0. Methods for the chemical analysis of water
and wastes (MCAWW) (EPN600/4-79/020). U. S. Government Printing
Office: Washington. OC.
[17] USEPA 365.3. Phosphorus, ali forms (colorimetric. ascorbic acid, two
reagent). Methods for the chemical analysis of water and wastes
(MCAWW) (EPN600/4-79/020). U. S. Government Printing Office: Was-
hington. OC.
[18] USEPA 3540(. Soxhlet extraction - In CD: Test method for evaluation
solid waste physical/chemical methods. Laboratory manual. Voll-B. En-
vironmental Protection Agency.
[19] USEPA 363OC. (1996). Silica gel cleanup.ln CD:Test method for evalua-
tion solid waste physical/chemical methods. Laboratory manual. Voll-B.
Envionmental Protection Agency.
[20] USEPA 8015B. (1996). Nonhalogenated Organics by Gas Chromatogra-
phy/Flame lonization Detector. EPA.revision 2, U. S. Government Prin-
ting Office: Washington. OC. pp 28.
[21] USEPA 827OC. (1996). Semivolatile Organic Compounds by Gas Chro-
matography/Mass Spectrometry.EPA, Test Methods for Evaluating Solid
Waste, Physical/Chemical Methods. SW-846, 3rd ed.; U. S. Government
Printing Office: Washington. OC.
[22] USEPA9060. (1996). Total Organic Carbono EPA.Test Methods for Evalua-
ting Solid Waste, Physical/Chemical Methods, SW-846. 3rd ed.; U. S. Go-
vernment Printing Office: Washington, OC.
[23] Watwood, M.E.; White. c.s~ Dahn. C.N. (1991). Methodological modifica-
tions for accurate and efficient determination of contaminant biode-
gradation in unsaturated calcareous soll. Applied and Environmental
Microbiology. S7, 717-720 p.
Sobre Ias autores:
Ulrich Vasconcelos es Magister en Ciendas, egresado de Ia Uni-
versidad Federal de Pernambueo, Brasil.Alumno de Ia Carrerade
Doetorado en Teenologia de Proeesos Quimicos y Bioquimieos
en Ia Universidad Federal de Rio de Janeiro, Brasil. Se 10puede
eontaetaren Ia direccin eleetrniea <ulvaseo@gmail.eom>
FernandoJ. S. Oliveira es Doetor en Ciendas en Teenologia de
Proeesos Quimicos y Bioquimicos, egresado de Ia Universidad
Federal de Rio de Janeiro, Brasil. Se desempena en Petrleo Bra-
sileiro S.A., Gerencia Corporativa de Medio Ambiente, Rio de
Janeiro. Se 10 puede eontaetar en Ia direccin eleetrnica
<f.oliveira@petrobras.eom>
Francisca P. de Frana es Doetora en Ciencias, egresada deI
Instituto de Microbiologia de Ia Universidad Federal de Rio de
Janeiro, Brasil. Se desempena en Ia Escuela de Quimiea de Ia Uni-
versidad Federal de Rio de Janeiro, Brasil. Se Iapuede eontaetar
en Ia direccin eleetrnica <fpfranea@eq.ufrj.br>
~
RECONAlDIS
RIiCi:($,ljRQ ~t; ~Q.N~.t)LTQRES~
Q,~. ~,:t~:t~~R.G.ENTINA
I
AIDIS
ARGENTINA
BENEFICIOPARALOSSOCIOSDEAIDISARGENTINA
Como parte de su permanente quehacer en Ia promocin y difusinde temas sanitarios y
ambientales y ante el permanente requerimiento dei mercado en bsqueda de profesionales
especializados en Iastemticas manejadas por nuestra Asociacin,el Consejo Directivode AIDIS
ARGENTINAha creado un Registrode Consultores (RECONAIDIS) para congregar a todos sus
profesionales socios que deseen incorporarse voluntariamente ai mismo.
Es nuestra intencin brindar a Iasociedad una base de informacin que identifique especialis-
tas con antecedentes amplios y actualizados en Iasdiversas especialidades dei sector.
Portodo 10expuesto,AIDISARGENTINA convocaaios sociosquedeseenintegrarIaRECONAI-
DIS (Registro de Consultores de AIDISARGENTINA), a que ingresen a nuestra pgina
www.aidisar.org.ar. donde encontrarn detalles y Iasinstrucciones para registrarse.
AIDISARGENTINA. Ingenierla Sanitarla y Amblental . N 110
Ing. Juan Pablo Schifini
Presidente de AIDISArgentina
Tratamlentodesuelos I 63