ESCUELA POLITECNICA NACIONAL FACULTAD DE INGENIERA CIVIL Y AMBIENTAL INGENIERA AMBIENTAL LABORATORIO DE ECOTOXICOLOGA Integrantes: Lenin Cazares Christian

Vaca Obando Ricardo Valencia Gudio Tema: Bioensayos de toxicidad aguda utilizando Daphnia magna Straus (Cladocera, Daphniidae) desarrollada en medio de cultivo modificado 1. Marco terico Los bioindicadores de contaminacin son sistemas biolgicos que responden a los txicos ambientales con cambios especficos y ms o menos duraderos. Complementan y superan la medicin directa del txico en el ambiente por dos motivos: 1.1 Guardan memoria de la emisin txica, ya que aunque sta sea de muy corta duracin, los cambios producidos en el bioindicador son duraderos 1.2. Porque muchos bioindicadores son tambin bioconcentradores, lo que permite detectar el txico en ellos con ms facilidad que en el medio, y aun despus que el txico haya desaparecido del ambiente. Para el desarrollo de pruebas de toxicidad aguda con D. magna se emplean neonatos (< 24 h nacidos), expuestos a diferentes concentraciones de una muestra o de un agente txico durante un periodo de 48 h, la Daphnia magna es utilizada como bioindicador ambiental de efluentes dulciacucolas en ensayos eco toxicolgicos. 2. Objetivos: Analizar la toxicidad aguda del Cianuro de Potasio mediante el uso de Daphnia magna Straus como bioindicador. Verificar si la Daphnia magna Straus puede ser utilizada como un bioindicador de toxicidad mediante el clculo probit del EC50.

3. Materiales y reactivos 3.1. Reactivos

Cianuro de Potasio Materiales

3.2. -

Vasos de precipitacin de 200 ml Baln aforado de 1000 ml

Probeta de 1000 ml Esptulas Balanza electrnica Pipeta Propipeta 50 individuos de Daphnia magna straus

4. Procedimiento 4.1. 4.2. Elaboracin de las soluciones de cianuro de potasio. Estas soluciones se colocan en vasos de precipitacin de 100 ml c/u (una solucin por cada vaso de precipitacin), y en uno de ellos colocamos agua sin contaminante con el fin de evaluar el progreso con la muestar libre de contaminante o muestra blanco. Se colocan 10 individuos de Daphnia magna Straus en cada vaso de precipitacin con la ayuda de la esptula y se los deja reposar por 24 horas. Al cabo de 24 y 48 h de realizada la prctica, se verifica el estado de los individuos para cada concentracin.

4.3.

4.4.

5. Resultados Logaritmo supervivientes -0,69897 -0,30103 0 0,397940009

Supervivientes Blanco 0,2 0,5 1 2,5 8 8 8 3 0

% supervivientes 0,8 0,8 0,8 0,3 0

Probit 5,84 5,84 5,84 4,48 -

Dosis-Respuesta
90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 -1 -0.5 0 0.5

Dosis-Respuesta

probit
7 6 5 Probit 4 3 2 1 0 -0.8 -0.6 -0.4 Log Dosis -0.2 0 probit Linear (probit) y = -1.844x + 4.772 R = 0.6779

0,75 mg/l 6. Clculos El peso molecular del cianuro de potasio es de 65.1 mg/L y el reactivo tiene una pureza de 97% Concentracin

Como las concentraciones son muy pequeas por lo que solo se peso la concentracin ms alta, para posteriormente realizar diluciones, con la siguiente ecuacin:

tomando como la primera muestra la concentracin de 2,5 mg/l

7. Conclusiones 1) El resultado obtenido de EC50 no es determinante ya que solo se realizo una medicin a las 24 horas. 2) Las Daphnia magna straus son poco sensibles al cianuro de potasio ya que los individuos no murieron en su totalidad. 8. Recomendaciones 1) Realizar las mediciones respectivas a las 24 y 48 horas para tener un mejor conjunto de datos para la estimacin de EC. 9. Consulta

ENSAYOS TOXICOLGICOS Y MTODOS DE EVALUACIN DE CALIDAD DE AGUAS: ESTANDARIZACIN, INTERCALIBRACIN, RESULTADOS Y APLICACIONES
Para el desarrollo de pruebas de toxicidad aguda con D. magna se emplean neonatos (< 24 h nacidos) expuestos a diferentes concentraciones de una muestra o de un agente txico durante un periodo de 48 h. Como resultado de dicha exposicin es posible determinar la concentracin de la muestra o compuesto problema, que produce la muerte al 50% de la poblacin de neonatos expuestos (concentracin letal media o CL50), con un nivel de confiabilidad del 95 por ciento. Tambin puede determinarse la concentracin mnima donde an se observa efecto de mortalidad (Lower Observable Effect Concentration, LOEC), as como aquella donde la muestra no produce la muerte de neonatos (No Observable Effect Concentration, NOEC). Cuando no hay un conocimiento de la toxicidad de las muestras es recomendable llevar a cabo una Ensayos toxicolgicos y mtodos de evaluacin de calidad de aguas prueba preliminar, en la cual se prepara un amplio nmero de concentraciones sin rplicas (por ejemplo: 0,001; 0,01; 0,1; 1; 10 y 100%). Para la prueba se colocan 30 mL de cada una de las diluciones en los vasos de prueba, se transfieren diez neonatos y a las 24 h se registra el nmero de organismos muertos. Con esta informacin podr establecerse el intervalo de concentracin en el cual se puede esperar el 0 y el 100% de mortalidad. Este intervalo se utiliza como gua para la preparacin de las diluciones en las pruebas definitivas. Para la preparacin de las diluciones de las muestras se utiliza como medio de dilucin agua dura reconstituida (180 y 160 mg/L CaCO3), sin ningn suplemento. En la preparacin del agua se deben determinar los parmetros (numeral 4.2.3) sealados anteriormente (APHA, 1998).

Bibliogrfica 1. El Mundo de la Naturaleza, 2012, "La pulga de agua", obtenido de la pagina web: http://www.botanical-online.com/animales/pulgadeagua.htm (Abril 2012) 2. Saldaa Pilar, Congreso Interamericano de Ingeniera Sanitaria y Ambiental Cancn, Mxico, 2002, " CALIDAD DEL AGUA EN COLECTORES DE LA CIUDAD DE PUEBLA Y LA APLICACIN DE ANLISIS DE TOXICIDAD", obtenido de la pagina web: http://www.bvsde.paho.org/bvsaidis/mexico26/xii-ii-006.pdf (Abril 2012) 3. Castillo M. Gabriela, 2004, "Ensayos toxicolgicos y mtodos de evaluacin de calidad de aguas", obtenido de la pgina web: http://www.ibcperu.org/doc/isis/6271.pdf (Abril 2012)