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UNIVERSIDADE DE BRASLIA FACULDADE DE TECNOLOGIA DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA CIVIL E AMBIENTAL

REMOO DOS CONTAMINANTES ORGNICOS -ESTRADIOL E SAXITOXINAS (STX, Neo-STX E dc-STX) POR MEIO DE NANOFILTRAO:AVALIAO EM ESCALA DE BANCADA

FLAVIA FERREIRA AMORIM

ORIENTADORA: CRISTINA CELIA SILVEIRA BRANDO

DISSERTAO DE MESTRADO EM TECNOLOGIA AMBIENTAL E RECURSOS HDRICOS

PUBLICAO: PTARH.DM 109/07 BRASLIA/DF: NOVEMBRO/2007

UNIVERSIDADE DE BRASLIA FACULDADE DE TECNOLOGIA DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA CIVIL E AMBIENTAL

REMOO DOS CONTAMINANTES ORGNICOS -ESTRADIOL E SAXITOXINAS (STX, Neo-STX E dc-STX) POR MEIO DE NANOFILTRAO: AVALIAO EM ESCALA DE BANCADA

FLAVIA FERREIRA AMORIM DISSERTAO FACULDADE DE DE MESTRADO DA SUBMETIDA UNIVERSIDADE AO DE

DEPARTAMENTO DE ENGENHARIA CIVIL E AMBIENTAL DA TECNOLOGIA BRASLIA COMO PARTE DOS REQUISITOS NECESSRIOS PARA OBTENO DO GRAU DE MESTRE. APROVADA POR:
_________________________________________________________________________

Prof. Cristina Celia Silveira Brando, PhD (ENC UnB) (ORIENTADORA)


_________________________________________________________________________

Prof. Ariuska Karla Barbosa Amorim, DSc (ENC UnB) (EXAMINADOR INTERNO)
_________________________________________________________________________

Prof. Jos Carlos Mierzwa, DSc (PHD/POLI- USP) (EXAMINADOR EXTERNO)


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FICHA CATALOGRFICA AMORIM, FLAVIA FERREIRA Remoo dos Contaminates Orgnicos -estradiol e Saxitoxinas (STX, Neo-STX e dc-STX) por meio de Nanofiltrao: Avaliao em Escala de Bancada. xiii, 133p., 210 x 297 mm (ENC/FT/UnB, Mestre, Tecnologia Ambiental e Recursos Hdricos, 2007). Dissertao de Mestrado Universidade de Braslia. Faculdade de Tecnologia. Departamento de Engenharia Civil e Ambiental. 1. Nanofiltrao 3. Saxitoxinas I. ENC/FT/UnB REFERNCIA BIBLIOGRFICA AMORIM, F.F. (2007). Remoo dos Contaminates Orgnicos -estradiol e Saxitoxinas (STX, Neo-STX e dC-STX) por meio de Nanofiltrao: Avaliao em Escala de Bancada. Dissertao de Mestrado em Tecnologia Ambiental e Recursos Hdricos, Publicao PTARH.DM-109/07, Departamento de Engenharia Civil e Ambiental, Universidade de Braslia, Braslia, DF, 133p. CESSO DE DIREITOS AUTOR: Flavia Ferreira Amorim. TTULO: Remoo dos Contaminantes Orgnicos -estradiol e Saxitoxinas (STX, neoSTX e dC-STX) por meio de Nanofiltrao: Avaliao em Escala de Bancada. GRAU: Mestre ANO: 2007 2. -estradiol 4. Tratamento de gua II. Ttulo (srie)

concedida Universidade de Braslia permisso para reproduzir cpias desta dissertao de mestrado e para emprestar ou vender tais cpias somente para propsitos acadmicos e cientficos. O autor reserva outros direitos de publicao e nenhuma parte dessa dissertao de mestrado pode ser reproduzida sem autorizao por escrito do autor. __________________________ Flavia Ferreira Amorim ffamorim2@yahoo.com.br

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AGRADECIMENTOS
Agradeo aos meus pais, Milton e Izaura, pelos preciosos ensinamentos e valores que recebi ao longo da minha vida e pelo constante incentivo aos estudos. Por despertarem em mim a curiosidade, o respeito e a admirao pela cincia e pelas diversas formas de compreenso do mundo. professora Cristina Brando pela orientao desta dissertao e por sua amizade. Sua sensibilidade, transparncia, honestidade e compromisso em trabalhar para uma sociedade mais digna, no s colaboraram para meu crescimento cientfico, mas principalmente, para meu desenvolvimento como ser humano. A todos meus amigos, do mestrado, da engenharia, irmos, amigos de infncia... Cada um com um papel especial em todas as situaes da minha vida, sempre contribuindo para minha felicidade. Ao Gus e Mari, por estarem presentes em, literalmente, todos os momentos da minha jornada no mestrado. impossvel pensar na minha passagem pelo mestrado sem lembrar de vocs com muita alegria, amigos! Aos companheiros do laboratrio Marcilene, Roseli, Boy, Carol, Jaque, Lilica, Yovanka e Junior, pelo apoio, carinho e pacincia. Ao CNPq pelo auxlio financeiro e UnB pela disponibilizao da estrutura necessria ao desenvolvimento deste trabalho. empresa Vanbro pelo fornecimento da bomba para montagem do sistema experimental.

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RESUMO
REMOO DOS CONTAMINANTES ORGNICOS -ESTRADIOL E SAXITOXINAS (STX, Neo-STX e dc-STX) POR MEIO DE NANOFILTRAO: AVALIAO EM ESCALA DE BANCADA Autora: Flavia Ferreira Amorim Orientadora: Cristina Celia Silveira Brando Programa de Ps-Graduao Tecnologia Ambiental e Recursos Hdricos Braslia, 08 de novembro de 2007. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a remoo dos contaminantes orgnicos estradiol e das saxitoxinas (STX, dc-STX e Neo-STX) por nanofiltrao. A escolha dos contaminantes foi motivada pela crescente presena desses compostos em mananciais de abastecimento e o potencial de causar danos sade humana mesmo em baixas concentraes. Pesquisas demonstram que a eficincia de remoo pelo tratamento convencional no suficiente para evitar os possveis efeitos adversos e por isso um tratamento avanado precisa ser considerado para remoo desses contaminantes. Os ensaios de nanofiltrao foram realizados em um sistema com dispositivo de separao em membranas de fluxo tangencial, em escala de bancada, com recirculao do concentrado. A presso de trabalho aplicada no sistema foi de 689kPa e a velocidade tangencial constante foi de aproximadamente 0,4m/s. A temperatura da gua de alimentao foi mantida em cerca de 25C. Foram testados dois tipos de membranas, uma de acetato de celulose e outra composta de poliamida sobre suporte de polissulfona. Dois tipos de guas de estudo foram utilizados e, alm disso, a influncia do valor do pH da gua no processo de remoo dos contaminantes foi avaliada. A gua de estudo tipo I consistia de gua deionizada contaminada com -estradiol em concentrao constante de aproximadamente 10 g/L. A gua tipo II consistia de gua deionizada contaminada com saxitoxinas originadas da cepa de Cylindropermopsis raciborskii. A concentrao de saxitoxinas foi varivel, dependendo da concentrao resultante do cultivo da cianobactria. A quantificao do -estradiol foi realizada pelo mtodo Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA) e das saxitoxinas pela Cromatografia Lquida de Alto Desempenho (CLAE). Os resultados dos ensaios demonstraram que o mecanismo de adsoro contribuiu para remoo tanto do -estradiol, quanto das saxitoxinas. As remoes de -estradiol foram maiores para a membrana composta do que para a membrana de acetato de celulose, no entanto a porcentagem de remoo real no pode ser avaliada, pois no se alcanou o equilbrio na remoo. Para as saxitoxinas as remoes foram maiores para a membrana de acetato de celulose do que para a membrana composta. A elevao do valor de pH promoveu a reduo do fenmeno da adsoro na membrana para os contaminantes estudados e influenciou positivamente o processo, elevando bastante as eficincias de remoo de -estradiol e saxitoxinas. PALAVRAS-CHAVE: nanofiltrao, -estradiol, saxitoxinas, tratamento de gua. v

ABSTRACT

REMOVAL OF THE ORGANIC CONTAMINANTS -ESTRADIOL AND SAXITOXINS (STX, Neo-STX and dc-STX) BY NANOFILTRATION: BENCH SCALE Author: Flavia Ferreira Amorim Supervisor: Cristina Celia Silveira Brando Pos-graduated Program in Environmental Technology and Water Resources Braslia-DF, November, 2007. The aim of work was to investigate the removal of -estradiol and saxitoxins (STX, dcSTX and Neo-STX) by nanofiltration. These contaminants were selected due to its growing detection in drinking water reservoirs and their potential risk to human health, even at low concentrations. According to the literature, these substances are only poorly removed by conventional water and wastewater treatments and it is necessary to consider advanced treatment processes for efficient removal. The experiments were carried out in a laboratory scale cross-flow filtration system with recirculation of the concentrate. The applied pressure was fixed at 689kPa and the constant cross-flow velocity was 0,4m/s. The temperature of feed solution was kept at about 25C. Two nanofiltration membranes, polyamide thin film composite and cellulose acetate, were tested for the removal of -estradiol and saxitoxins. The influence of pH solution on contaminants retention was also examined. Feed water type I was prepared by spiking estradiol into mili-Q water to make up a solution containing about 10g/L of -estradiol. Feed water type II contained variable concentration of saxitoxins extracted from Cylindropermopsis raciborskii culture. -estradiol and saxitoxins concentrations were quantified by Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay (ELISA) method and High Performance Liquid Cromatography (HPLC), respectively. The results suggest that the adsorption mechanism contributes for the removal of both estradiol and saxitoxins by nanofiltration. The thin film composite membrane exhibited higher performance in terms of -estradiol rejection, but the actual percentage removed was not obtained because the steady-state was not reached. The cellulose acetate exhibited a higher performance in terms of the saxitoxins rejection. The adsorption of both estradiol and saxitoxins on the membranes decreased when the pH of the feed water was increased. At the higher pH value, -estradiol and saxitoxins rejections also increased. Keywords: nanofiltration, -estradiol, saxitoxins, water treatment.

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SUMRIO 1 - INTRODUO .......................................................................................... 1 2 - OBJETIVOS ............................................................................................... 5 3 - REVISO BIBLIOGRFICA ................................................................. 6


3.1 - PERTURBADORES ENDCRINOS ...................................................................... 6 3.1.1 - Ao dos perturbadores endcrinos no organismo ............................................ 7 3.1.2 - Efeitos causados por perturbadores endcrinos ................................................. 8 3.1.3 - Ocorrncia de perturbadores em meios aquticos ............................................ 13 3.1.4 - Caractersticas do -estradiol ........................................................................... 17 3.2 - CIANOBACTRIAS E CIANOTOXINAS ........................................................... 19 3.2.1 - Cianobactrias .................................................................................................. 19 3.2.2 - Cianotoxinas ..................................................................................................... 22 3.2.3 - Caractersticas das Saxitoxinas ........................................................................ 24 3.2.4 - Efeitos causados por cianotoxinas sade ....................................................... 28 3.3 - PROCESSOS DE TRATAMENTO POR MEMBRANA FUNDAMENTOS TERICOS...................................................................................................................... 29 3.3.1 - Consideraes iniciais ...................................................................................... 29 3.3.2 - Caractersticas fsicas e qumicas das membranas ........................................... 30 3.3.3 - Tipos de processos de tratamento com membranas ......................................... 32 3.3.4 - Utilizao dos processos de membrana no saneamento. .................................. 34 3.3.5 - Operao de sistemas de membranas ............................................................... 37 3.3.6 - Fatores que afetam a rejeio de solutos orgnicos no processo de nanofiltrao ..................................................................................................................................... 43 3.4 - REMOO DE PERTURBADORES POR PROCESSOS DE TRATAMENTO COM MEMBRANAS ..................................................................................................... 52 3.5 - REMOO DE SAXITOXINAS POR PROCESSO DE TRATAMENTO COM MEMBRANAS ............................................................................................................... 57

4 - METODOLOGIA .................................................................................... 59
4.1 - EQUIPAMENTOS E MATERIAIS ....................................................................... 60 4.1.1 - Sistema experimental de separao por membrana.......................................... 60 4.1.2 - Membranas ....................................................................................................... 63 4.1.3 - Contaminantes .................................................................................................. 64 vii

4.2 - DESENVOLVIMENTO DOS EXPERIMENTOS ................................................. 67 4.2.1 - Consideraes Gerais ....................................................................................... 67 4.2.2 - Etapa Preliminar ............................................................................................... 71 4.2.3 - Etapa 1-Ensaios de nanofiltrao para gua do Tipo I ..................................... 74 4.2.4 - Etapa 2 - Ensaios de nanofiltrao para gua do Tipo II ................................. 75 4.3 - MTODOS ANALTICOS .................................................................................... 76 4.3.1 - ELISA .............................................................................................................. 76 4.3.2 - Cromatografia Lquida de Alta Eficincia - CLAE ......................................... 79

5 - APRESENTAO E DISCUSSO DOS RESULTADOS ................. 82


5.1 - ETAPA 1 - ENSAIOS DE NANOFILTRAO PARA GUA DO TIPO I (MILI-Q + -ESTRADIOL) ........................................................................................................... 82 5.1.1 - Consideraes iniciais ...................................................................................... 82 5.1.2 - Eficincia de remoo e mecanismos............................................................... 90 5.1.3 - Influncia do pH na remoo do -estradiol .................................................... 95 5.2 - ETAPA 2 - ENSAIOS DE NANOFILTRAO PARA GUA DO TIPO II (MILI-Q+SAXITOXINAS) ............................................................................................ 99 5.2.1 - Consideraes iniciais ...................................................................................... 99 5.2.2 - Eficincia de remoo e mecanismos............................................................. 104 5.2.3 - Influncia do pH na remoo das saxitoxinas ................................................ 110

6 - CONCLUSES E RECOMENDAES............................................ 118 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ...................................................... 123

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LISTA DE TABELAS
Tabela 3.1 - Resumo das principais caractersticas do -estradiol (Johnson e Harvey, 2002; Kimura et al., 2004; McCallum, 2005 e Nghiem et al., 2004a) ..................... 18 Tabela 3.2 - Tipos de saxitoxinas caracterizadas a partir de diferentes cepas de cianobactrias (baseado em Sivonen e Jones, 1999). ..................................... 25 Tabela 3.3 - Pesos moleculares de diferentes saxitoxinas (Llewellyn, 2006) ..................... 26 Tabela 3.4 - Caractersticas dos principais processos de membranas utilizados no tratamento de gua e esgoto (Nbrega et al., 2005, Kawamura, 2000, Schneider e Tsutiya, 2001 e AWWA, 1998, Weber, 1972). .......................... 36 Tabela 3.5 - Valores tpicos para taxa de fluxo em membranas (Wagner, 2001; Mierzwa, 2006) ............................................................................................................... 39 Tabela 3.6 - Parmetros mais comumente utilizados para auxiliar no entendimento da remoo de contaminantes orgnicos por nanofiltrao................................. 44 Tabela 3.7 - Eficincia de remoo de perturbadores endcrinos e condies dos estudos exemplos da literatura..................................................................................... 53 Tabela 4.1 - Principais caractersticas das membranas utilizadas nos ensaios de nanofiltrao. .................................................................................................. 63 Tabela 4.2 - Condies que foram adotadas para a anlise de saxitoxinas (Oshima et al., 1995). .............................................................................................................. 80 Tabela 5.1 - Principais resultados dos ensaios de nanofiltrao para gua tipo I, pH em torno de 5 e membranas de acetato de celulose (tipo A) ................................ 82 Tabela 5.2 - Principais resultados dos ensaios de nanofiltrao para gua tipo I, valor de pH em torno de 5 e membranas compostas (tipo B)....................................... 88 Tabela 5.3 - Principais resultados dos ensaios de nanofiltrao para gua Tipo I, valor de pH em torno de 10,5 e membranas compostas (tipo B).................................. 96 Tabela 5.4 - Principais resultados dos ensaios de nanofiltrao para gua tipo II, pH7. ...... 100 Tabela 5.5 - Principais resultados dos ensaios de nanofiltrao para gua tipo II, com correo de pH e para membrana de acetato de celulose (tipo A) ............... 111

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LISTA DE FIGURAS
Figura 3.1 - Mecanismos de ao dos perturbadores endcrinos. (a) resposta natural, (b) efeito agonista, (c) efeito antagonista (Ghiselli e Jardim, 2007) ...................... 8 Figura 3.2 - Estrutura geral das saxitoxinas. ....................................................................... 25 Figura 3.3 - Esquema bsico de funcionamento de uma membrana (Aptel e Buckley, 1996) ........................................................................................................................ 31 Figura 3.4 - Esquema do funcionamento dos processos de separao por membrana (Mierzwa, 2006) ............................................................................................. 33 Figura 3.5 - Dimenses dos principais componentes microscpicos e moleculares presentes em guas naturais e tipos de membranas utilizveis para a sua separao. (Schneider e Tsutiya, 2001 modificado). ....................................................... 34 Figura 3.6 Operao em fluxos frontal e tangencial (Schneider e Tsutiya, 2001) ........... 37 Figura 3.7 - Arranjos para os vasos de presso e taxas de recuperao de gua (Mierzwa, 2006). .............................................................................................................. 39 Figura 3.8 - Diagrama de rejeio para micropoluentes orgnicos (para membranas de osmose reversa e nanofiltrao) baseado nas propriedades dos solutos (Bellona et al.,2004, modificado) ................................................................... 51 Figura 4.1 - Esquema simplificado do sistema de nanofiltrao ......................................... 60 Figura 4.2 - Vista geral do sistema de nanofiltrao ........................................................... 61 Figura 4.3 - Clula de separao tangencial. (a) componentes da clula de separao. (b) Suporte da clula de separao. (c) base da clula, detalhe do espaador. (d) clula de separao com carreador de permeado e membrana instalados ...... 62 Figura 4.4 - Vista geral do cultivo de Cylindrospermopsis raciborkii do Laboratrio de Anlise de guas da UnB............................................................................... 65 Figura 4.5 Cultivo de Cylindrospermopsis raciborskii (T3) antes do processo de lise. (Microscpio ptico, aumento de 100 vezes (a) e 200 vezes (b)) .................. 65 Figura 4.6 - Cultivo de Cylindrospermopsis raciborskii (T3) aps lise pelo processo de gelo/degelo. (Microscpio ptico, aumento de 100 vezes (a) e 200 vezes (b)) ........................................................................................................................ 66 Figura 4.7 Bancada de separao ..................................................................................... 66 Figura 4.8 - Distribuio dos experimentos de nanofiltrao.............................................. 68 Figura 4.9 - Rotina dos ensaios de nanofiltrao ................................................................ 68

Figura 4.10 - Fotos do esquema de refrigerao da gua de estudo .................................... 73 Figura 4.11 - Etapas do ensaio ELISA (Japan EnviroChemicals, 2005 - modificado). ...... 77 Figura 4.12 - Vista da placa de Elisa (a) aps adio do substrato de cor, (b) aps adio da soluo de parada ........................................................................................... 78 Figura 4.13 - Leitor de ELISA............................................................................................. 78 Figura 4.14 - Equipamento de CLAE utilizado na pesquisa ............................................... 79 Figura 4.15 - Sistema de CLAE com reator ps-coluna para a anlise de saxitoxinas ....... 81 Figura 5.1 - Ensaios de nanofiltrao para gua tipo I (mili-Q+ -estradiol) e membrana de acetato de celulose (tipo A), velocidade tangencial= 0,4m/s, presso=689kPa, pH 5. (a) ensaioMAC1, (b) ensaioMAC2. .................................................. 85 Figura 5.2 - Ensaios de nanofiltrao para gua tipo I (mili-Q+ -estradiol ) e membrana de acetato de celulose (tipo A), velocidade tangencial= 0,4m/s, presso=689kPa, pH 5. (a) ensaioMAC3, (b) ensaioMAC4 ................................................... 86 Figura 5.3 - Comparao entre amostras retiradas do concentrado e reservatrio de alimentao ........................................................................................................................ 87 Figura 5.4 - Ensaios de nanofiltrao para gua tipo I (mili-Q+ -estradiol) e membrana composta (tipo B), velocidade tangencial=0,4m/s, presso=689kPa, pH5. (a) ensaio MCP1, (b) ensaio MCP2, (c) ensaio MCP3 ........................................ 89 Figura 5.5 - Remoo de -estradiol para gua tipo I (mili-Q+ -estradiol), velocidade tangencial=0,4m/s, presso=689kPa, pH5. Ensaio MCA4 para membrana de acetato de celulose (tipo A) e ensaio MCP2 para membrana composta (tipo B) ........................................................................................................................ 91 Figura 5.6 - Ensaios de dessoro. Velocidade tangencial=0,4 m/s. presso=689kPa, pH 5. (a) Ensaio MAC3, membrana de acetato de celulose (tipo A); (b) Ensaio MCP3, membrana composta (tipo B) ............................................................. 94 Figura 5.7 - Ensaios de nanofiltrao para gua tipo I, com alterao de pH (10,5) para membranas compostas (Tipo B). Velocidade superficial=0,4m/s, presso=689kPa. (a) ensaio MCP4 (b) ensaio MCP5 .................................... 97 Figura 5.8 - Remoo de -estradiol para o ensaio MCP5 com membrana composta (tipo B) e valor de pH em torno de 10,5. presso=689kPa, velocidade tangencial=0,4 m/s. ......................................................................................... 98 Figura 5.9 - Ensaios de nanofiltrao para gua tipo II (mili-Q+saxitoxinas) e pH7, presso=689kPa, velocidade tangencial=0,4 m/s. (a) ensaioMAC5-membrana de acetato de celulose (tipo A), (b) ensaio MAC6- membrana tipo A. ........ 102 xi

Figura 5.10 - Ensaios de nanofiltrao para gua tipo II (mili-Q+saxitoxinas) e pH7, presso=689kPa, velocidade tangencial=0,4 m/s. (a) ensaio MCP6-membrana composta (tipo B), (b) ensaio MCP7 membrana tipo B ............................ 103 Figura 5.11 - Amostra de permeado coletada na dcima hora de durao do ensaio e de concentrado coletada no incio do ensaio de remoo de saxitoxinas por nanofiltrao. ................................................................................................ 105 Figura 5.12 - Cromatogramas de ensaios de nanofiltrao. (a) ensaio MAC5 para a membrana de acetato de celulose (tipo A); (b) ensaio MCP6 para a membrana composta (tipo B). ......................................................................................................... 106 Figura 5.13 - Remoo de Neo-STX para gua tipo II (mili-Q+material da lise celular includo saxitoxinas), pH7. Ensaio MAC6 - membrana tipo A e ensaio MCP6-membrana tipo B............................................................................... 107 Figura 5.14 - Ensaios de nanofiltrao para gua tipo II, com alterao de pH e para membrana tipo A. presso=689kPa, velocidade tangencial=0,4 m/s (a) ensaio MAC7 (pH5) (b) ensaio MAC8 (pH10,5)................................................ 112 Figura 5.15 - Cromatogramas do teste de degradao natural do ensaio para membrana tipo A pH=5 ......................................................................................................... 114 Figura 5.16 - Cromatograma de remoo de saxitoxinas com valor de pH 10,5 para membrana de acetato de celulose (tipo A).................................................... 115 Figura 5.17 - Cromatogramas do teste de degradao natural de saxitoxinas do ensaio para membrana de acetato de celulose (tipo A) e valor de pH em torno de 10,5 . 117

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LISTA DE SMBOLOS, NOMENCLATURAS E ABREVIAES


ASTM C Ca CAS CE CLAE COPPE Cp dc-STX DDT E2 EDSP EDSTAC ELISA ETE GTX JEA Kow LAA LETC LWTX MCT MF MWCO Neo-STX NF OMS OR pKa American Society for Testing and Materials C-toxinas Concentrao de material na alimentao Servio de compndio de substncias qumicas Comisso Europia Cromatografia Lquida de Alto Desempenho Coordenao dos Programas de Ps-Graduao de Engenharia Concentrao de material no permeado Decarbamoil saxitoxina Diclorodifeniltricloroetano -estradiol Endocrine Disruption Screening Program Endocrine Screening and Testing Advsory Commitee Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay Estao de Tratamento de Esgotos Goniautoxinas Japan Environmental Agency Constante de partio octanol-gua Laboratrio de Anlise da gua do Departamento de Engenharia Civil e Ambiental da Universidade de Braslia Laboratrio de Ecofisiologia e Toxicologia de Cianobactrias do Instituto Carlos Chagas Filho da Universidade Federal do Rio de Janeiro Toxinas de Lyngbya wollei Ministrio da Cincia e Tecnologia Microfiltrao Molecular Weight Cut-off (peso molecular de corte) Neosaxitoxina Nanofiltrao Organizao Mundial de Sade Osmose reversa Logaritmo da constante de dissociao cida

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PVDF PCB PES PSP STX T3 TFC UF UFRJ UnB USEPA VTG

Fluoreto de polivinilideno Bisfenol policlorinado Polietersulfona hidrolisada Venenos paralisantes de moluscos Saxitoxina Cepa da Cylindrospermopsis raciborskii Thin-film composite Ultrafiltrao Universidade Federal do Rio de Janeiro Universidade de Braslia United Estates Environmental Protection Agency Vitelogenina

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1 - INTRODUO
Um dos problemas ambientais causados pelo o crescimento das cidades e das atividades agrcolas e industriais que essas atividades, ao introduzirem nutrientes no meio aqutico, promovem um enriquecimento artificial do ecossistema, contribuindo para a ocorrncia de acelerados processos de eutrofizao. Essa eutrofizao artificial produz mudanas na qualidade da gua, incluindo um intenso crescimento da comunidade fitoplanctnica, geralmente com predominncia do grupo de cianobactrias em relao s demais espcies de algas. A elevada presena de cianobactrias nos mananciais de abastecimento pblico causa problemas operacionais nas estaes de tratamento de gua, proporcionando conseqncias negativas sobre a eficincia e custo do tratamento de gua. Entretanto, a principal preocupao com aumento da ocorrncia de floraes de cianobactrias esta relacionada capacidade que esses microrganismos tm de produzir e liberar para o meio lquido toxinas (cianotoxinas), que podem afetar tanto a sade humana quanto animal. O primeiro caso comprovado de intoxicao fatal de seres humanos por cianotoxinas, ocorreu em Caruaru (PE), em 1996, quando 130 pacientes renais crnicos, aps terem sido submetidos a sesses de hemodilise (exposio intravenosa), passaram a apresentar um quadro clnico compatvel com grave hepatotoxicose. Desses, 60 vieram a falecer at 10 meses aps o incio dos sintomas. Testes realizados na gua utilizada na hemodilise indicaram a presena de cianotoxinas, dos grupos da microcistina e cilindrospermopsina. Esse incidente contribuiu para a incluso das cianotoxinas no padro de potabilidade brasileiro objeto da Portaria n 1469 do Ministrio da Sade - MS, de 29/12/2000 que posteriormente foi substituda pela Portaria MS n 518, de 25/03/2004. Essa Portaria adota o limite de concentrao de 1,0 g/L de microcistina em guas de abastecimento. Com relao s cilindrospermopsinas e saxitoxinas, devido a no existncia de dados suficientes para o estabelecimento de um limite de concentrao mximo aceitvel em gua potvel para estas toxinas, a Portaria traz somente uma recomendao de um limite de cilindrospermopsina e saxitoxinas de 15,0 g/L e 3,0 g/L, respectivamente.

A Microcystis aeruginosa, produtoras de toxinas denominadas microcistinas, a espcie que apresenta a distribuio mais ampla no Brasil. Entretanto, nas ltimas dcadas documenta-se a frequente ocorrncia de Cylindrospermopsis raciborskii nos reservatrios de gua em diversos estados brasileiros. Foi demonstrado que cepas brasileiras de Cylindrospermopsis raciborskii, isoladas de diferentes regies, na sua vasta maioria, so produtoras de saxitoxinas. Essas substncias apresentam toxicidade aguda maior do que as microcistinas. Alm do enriquecimento artificial do ecossistema aqutico, que pode causar floraes de cianobactrias, os resduos de origem domstica e das atividades industriais e agrcolas contribuem para o aporte de uma vasta gama de contaminantes aos corpos de gua. Um grupo de contaminantes associados a essas fontes que vm despertando o interesse de vrios pesquisadores so os perturbadores endcrinos, que possuem essa denominao, pois agem simulando a ao de hormnios naturais, inibindo ou modificando a sntese, transporte e funo dos hormnios e, consequentemente, alterando as funes regulares normais dos sistemas endcrinos. As substncias perturbadoras do sistema hormonal podem ser de origem natural (hormnios, fitoestrognios, etc) ou de compostos qumicos sintticos, advindos dos mais variados usos industriais, incluindo solventes, pesticidas, hormnios sintticos, etc. Dentre esses perturbadores, o hormnio 17-estradiol desperta a ateno de pesquisadores da rea de saneamento pela freqente ocorrncia em efluentes de ETEs e guas superficiais e por ter sido considerado um dos mais potentes perturbadores endcrinos. Os impactos dos perturbadores endcrinos relatados em animais abrangem, em geral, desenvolvimento anormal da funo tireide em pssaros e peixes, diminuio da fertilidade e alteraes sexuais e imunolgicas em crustceos, peixes, pssaros e rpteis. Em humanos, h indcios de que o desenvolvimento de algumas doenas como cncer de mama e de prstata, reduo de fertilidade masculina, mau formao congnita em crianas, entre outros, podem ter como uma das causas, a exposio aos perturbadores endcrinos. No entanto, a relao entre alteraes na sade humana e perturbadores endcrinos ainda pouco entendida e cientificamente controversa. Vrios desses efeitos tm sido causados com concentraes muito baixa das substncias, em geral da ordem de nanograma por litro. 2

A preocupao com a crescente presena de contaminantes orgnicos na gua de abastecimento e os efeitos destes sobre a sade humana, mesmo quando se encontram em baixas concentraes, motivou este estudo. Foram selecionados o -estradiol e as saxitoxinas (STX, dc-STX e Neo-STX), pois alm de terem grande potencial de causarem danos a sade, ainda so pouco estudados. Alm disso, apesar de serem de naturezas diferentes, ambos so orgnicos e apresentam pesos moleculares baixos e de valores semelhantes. Diversos estudos demonstram que a eficincia de remoo pelo tratamento convencional, tanto da frao dissolvida das cianotoxinas quanto dos hormnios no so suficientes para evitarem seus efeitos adversos em organismos. Nesse contexto, um tratamento avanado precisa ser considerado para a remoo desses compostos. A oxidao com oznio e a adsoro em carvo ativado granular mostram-se bastante efetivos na remoo de vrias cianotoxinas quando essas se encontram dissolvidas na gua. No entanto, com relao as variantes de saxitoxinas estudadas no presente trabalho poucos estudos foram realizados. Quanto remoo de hormnios poucos processos de tratamentos so eficientes na remoo dessas substncias, destacando-se o carvo ativado e o processo de tratamento por membranas. O processo de tratamento por membrana tem mostrado ser o mais eficiente na remoo de hormnios. No Brasil, o tipo de processo de separao por membranas mais difundido no tratamento de gua a osmose reversa, usada, principalmente, para dessalinizao. No entanto, nos ltimos anos o desenvolvimento tecnolgico desse tratamento trouxe para o mercado, variantes que atuam com presses menores e podem remover uma grande variedade de poluentes. Entre elas destacam-se a microfiltrao, ultrafiltrao e nanofiltrao. A nanofiltrao, segundo estudos, a mais eficiente na remoo de hormnios. Alm de sua eficincia, o tratamento por processos de membranas bastante verstil e dispensa, em geral, o uso de produtos qumicos. Por sua caracterstica de barreira absoluta e por mostrar-se eficiente na remoo de diversos contaminantes, acredita-se que o processo de tratamento com membranas possa ser efetivo, tambm, na remoo de saxitoxinas. Alguns estudos recentes apontam favoravelmente a nanofiltrao para 3

remoo de microcistinas, mas ainda no h estudos que relatem a remoo para saxitoxinas. Dessa forma, esta pesquisa, de carter experimental, tem o intuito de fornecer contribuies para o conhecimento do processo de remoo dos contaminantes -estradiol e saxitoxinas por meio da nanofiltrao e iniciar uma linha de pesquisa nesse tema especfico dentro do Programa de Ps-graduao em Tecnologia Ambiental e Recursos Hdricos da Universidade de Braslia.

2 - OBJETIVOS
O trabalho proposto tem como objetivo geral avaliar a eficincia de remoo do perturbador endcrino -estradiol e das saxitoxinas (STX, dc-STX e Neo-STX) por meio do processo de nanofiltrao em dispositivo de fluxo tangencial em escala de bancada. Em termos mais especficos, os objetivos so: 1 - Avaliar a influncia de dois diferentes materiais de membrana (acetato de celulose e
filme fino de poliamida sobre suporte de polissulfona) no processo de remoo dos

contaminantes; 2 - Avaliar a influncia da adoo de valor de pH acima do pKa do composto no processo de remoo dos contaminantes estudados; 3 - Discutir os possveis mecanismos envolvidos no processo de remoo, por nanofiltrao, de contaminantes orgnicos de naturezas diferentes, porm de pesos moleculares semelhantes: as saxitoxinas e o -estradiol.

3 - REVISO BIBLIOGRFICA
3.1 - PERTURBADORES ENDCRINOS Um perturbador endcrino uma substncia exgena ou uma mistura que altera funes do sistema endcrino e, consequentemente, causa efeitos adversos sade de indivduos, de seus descendentes e/ou de populaes (Comisso Europia, 1999). De acordo com a Comisso Europia (2006) os compostos estrognicos, potenciais perturbadores endcrinos incluem: hormnios naturais (estradiol, estrona, estriol) liberados no ambiente por animais e humanos; compostos qumicos naturais, que incluem toxinas produzidas por plantas (fitoestrognios) e por alguns fungos; produtos farmacuticos sintticos, produzidos intencionalmente para serem hormonalmente ativos (por exemplo, plulas anticoncepcionais) e produtos qumicos sintticos, que incluem os pesticidas, produtos qumicos industriais (alquilfenis, bisfenois policlorinados-PCBs, dioxinas, entre outros) e seus resduos. Coille et al. (2002), de forma similar, classificam os perturbadores endcrinos em quatro tipos: estrognios naturais (ex. estrona, estradiol, estriol); estrognios sintticos (ex. frmacos); fitoestrognios; xenoestrognios (ex. qumicos industriais como, bisfenol A, pnonilfenol, DDT). Cabe salientar que estrogenicidade (atividade hormonal) por si, no um efeito adverso, um mecanismo natural da ao hormonal controlado pela homeostase. No entanto, substncias qumicas com propriedades estrognicas agindo no sistema endcrino fora do contexto natural so potencialmente indutoras de um efeito adverso (Fischer, 2004). A exposio aos perturbadores endcrinos pode ocorrer a partir de diversas fontes. Assim, seres vivos esto expostos a alguns fitoestrognios por meio de sua dieta diria; no contato com ar e solo contaminado; ao utilizar produtos comerciais, como detergentes, tintas, pesticidas, cosmticos, plulas anticoncepcionais ou ingerir gua com resduos desses compostos.

3.1.1 - Ao dos perturbadores endcrinos no organismo O sistema hormonal ou endcrino est primariamente relacionado com o controle das funes metablicas do organismo, regulando a velocidade das reaes qumicas das clulas, o transporte de substncias atravs de membranas celulares ou outros aspectos do metabolismo celular, como crescimento e secreo. O hormnio uma substncia qumica que secretada nos lquidos corporais por glndulas, e que exerce efeito de controle fisiolgico sobre outras clulas do organismo (Guyton, 1989). O mecanismo do sistema endcrino acionado por reaes das clulas nervosas a algum estmulo externo (exemplo: fome, medo, etc), ou seja, o sistema nervoso envia um sinal desencadeador hipfise que liberar um determinado hormnio, o qual atuar sobre uma glndula endcrina especfica, estimulando esta a produzir e liberar seu hormnio especfico para a corrente sangunea ou para ao local. Esses ltimos hormnios produzidos levam instrues s clulas-alvos onde se ligaro a receptores especficos. O conjunto receptor-hormnio interpreta a mensagem hormonal e faz a transduo, isto , a transformao do sinal numa reao qumica que determinar o efeito hormonal (Veras, 2006). Acredita-se que a alterao no sistema endcrino causada por perturbadores endcrinos pode estar associada , pelo menos, trs mecanismos (Comisso Europia,1999): Simulao da ao de hormnios naturais (Figura 3.1b), como o estrognio e a testosterona, desencadeando um estmulo falso de modo exagerado ou em tempo inadequado (efeito agonista); Bloqueio (Figura 3.1c) dos receptores especficos de determinados hormnios (efeito antagonista); Alterao na sntese, transporte, metabolismo e excreo dos hormnios, causando, portanto, alterao na concentrao de hormnios naturais.

Figura 3.1 - Mecanismos de ao dos perturbadores endcrinos. (a) resposta natural, (b) efeito agonista, (c) efeito antagonista (Ghiselli e Jardim, 2007) Cabe salientar, entretanto, que a questo dos mecanismos de ao dessas substncias no organismo ainda no foi totalmente entendida. 3.1.2 - Efeitos causados por perturbadores endcrinos Existem diversos estudos que apontam impactos associados exposio aos perturbadores endcrinos em animais silvestres, aquticos e em humanos. As evidncias de que essas substncias podem afetar a vida de alguns animais forte, no entanto, os efeitos em humanos ainda so controversos. Os efeitos na vida de animais variam de mudanas sutis na fisiologia e comportamento sexual de espcies, a alteraes permanentes na diferenciao sexual. A maioria dos estudos foi realizada na Europa e Amrica do Norte e apontam as espcies aquticas como as mais afetadas. Os impactos relatados em animais abrangem, em geral, desenvolvimento anormal da funo tireide em pssaros e peixes, diminuio da fertilidade e alteraes sexuais e imunolgicas em crustceos, peixes, aves, rpteis e mamferos (Castro, 2002). Em humanos, a exposio aos perturbadores endcrinos tem sido indicada como uma das causas de diminuio na contagem de espermas, mau formao congnita em crianas (anormalidades na uretra dentro do pnis, escrotos, etc), cncer (mama, ovrio, prstata, etc), atraso no desenvolvimento sexual, distrbios no comportamento neurolgico e endometriose (Comisso europia, 2006).

Apesar de a preocupao ser recente, o fenmeno de perturbao endcrina por substncias naturais e sintticas relatado h dcadas. A descoberta de que certos compostos podem simular hormnios endgenos foi relatada na dcada de 1930 (Walker e Janney, 1930 apud Snyder et al., 2003a). A capacidade de compostos estrognicos e andrognicos interferirem na metamorfose de anfbios foi relatada em 1948 (Sluezewski e Roth, 1948 apud Snyder et al., 2003a). A atividade estrognica de compostos orgnicos foi de pouco interesse ambiental at a descoberta de que o DDT (Diclorodifeniltricloroetano), um pesticida organoclorado, e seus metablitos tinham propriedades de desregulao endcrina. Evidncias de perturbao endcrina por DDT foram, segundo Snyder et al. (2003a), descritas em pesquisas realizadas na Flrida, ligando alteraes reprodutivas em jacars com derramamentos de DDTs no lago Apopka. Recentemente, estudos tm demonstrado que os esterides liberados de humanos so os principais agentes causadores de feminizao de peixes em meios onde existem lanamentos de esgotos (Christiansen et al., 2002). Os peixes so um dos grupos de organismos mais estudados em termos de efeito de substncias com atividade estrognica no desenvolvimento de anomalias no sistema reprodutivo. Bila e Dezotti, em 2003 publicaram um levantamento de estudos que abordaram efeitos de frmacos no meio ambiente, principalmente no meio aqutico. Segundo esse levantamento, foi observado que alguns organismos aquticos respondem exposio a determinadas concentraes de estrognio com um aumento na sntese de vitelogenina (VTG). Vitelogenina uma protena que desempenha um importante papel no sistema reprodutivo de vertebrados ovparos fmeas. O aumento de VTG no plasma de um organismo considerado uma evidncia da exposio deste substncias com atividade estrognica. Induo do hermafroditismo ou a feminizao completa foram observadas, por exemplo, em peixes da espcie Oryzias latipes quando expostos ao estrognio 17-estradiol. A exposio ao 17-estradiol e estrona em concentraes similares s encontradas em efluentes, tambm causaram profundos efeitos em peixes machos da espcie Pinephales promelas. Os efeitos relatados foram a sntese de VTG e a inibio testicular.

Outra questo relevante que vrios dos efeitos relatados resultam da exposio de organismos a concentraes muito baixas (traos) de estrognios. Na reviso sobre feminizao de peixes realizada por Christiansen et al. (2002), foi relatado que estrognios podem induzir hermafroditismo em peixes em concentraes de cerca de 0,1 ng/L, no caso do etinilestradiol (estrognio sinttico) e 10 ng/L no caso do 17-estradiol. Uma concentrao de 5 ng/L de 17-estradiol pode induzir outros efeitos adversos sade de peixes. A interao de efeitos toxicolgicos de diversos perturbadores misturados tambm vem sendo estudada, embora em menor escala. Silva et al. (2002) testaram o potencial estrognico de uma mistura de oito xenoestrognios que, individualmente, possuam concentraes abaixo dos nveis em que podem induzir atividade hormonal. Os autores concluram que perturbadores podem agir em conjunto para produzir significativos efeitos quando combinados, mesmo que cada um apresente concentraes menores que aquelas do seu potencial estrognico. Alm de efeitos diretos, impactos indiretos ao meio ambiente podem ser considerados. Alguns antibiticos podem contribuir no desenvolvimento de bactrias resistentes que podem ser prejudiciais a sade. Segundo Jorgensen et al. (2000 apud Bila e Dezotti, 2003), h indcios de que o desenvolvimento dessa resistncia antibitica favorecido por baixas concentraes. McLachlan et al. (2006) fizeram uma reviso com o relato de diversos efeitos de perturbadores endcrinos no sistema reprodutivo de fmeas de animais e em mulheres. Os autores salientam a importncia de realizao de pesquisas sobre efeitos no sistema reprodutivo de humanos, j que a grande sensibilidade dos tecidos da mama e tero aos estrognios faz deste sistema um alvo vulnervel aos compostos ambientais que simulam a ao desses hormnios. Alm disso, alguns estudos sugerem que os efeitos podem ser transgeracionais e, portanto, mesmo que as fontes de exposio sejam removidas, a populao pode ser impactada por dcadas. A relao entre perturbao endcrina e efeitos adversos em humanos bem exemplificada na prescrio do estrognio sinttico diestilbestrol a milhares de mulheres como antiabortivo na dcada de 1930, um exemplo de uma exposio no como contaminante 10

ambiental, mas sim, como um uso farmacutico. Dcadas mais tarde, foi descoberto que esse fato resultou em muitos problemas reprodutivos em homens e mulheres, incluindo anormalidades congnitas e cncer. Esse foi o primeiro exemplo documentado de substncia qumica que quando ministrada a me pode causar cncer em seus filhos (Comisso Europia, 1999). Diversos autores (Sharpe e Irvine, 2004; Matthiessen, 2000; Safe, 2004) acreditam na possibilidade dos perturbadores endcrinos causarem srios efeitos sobre a sade humana, mas consideram os estudos inconclusivos, indicativo da necessidade de pesquisas mais rigorosas. De fato, h algumas questes que so alvos de discusso com relao aos efeitos dos perturbadores endcrios em humanos. As condies nas quais os perturbadores causam efeitos adversos envolvem vrios fatores insuficientemente explicados, como doses, carga gentica, forma e durao da exposio, relaes entre a potncia e estrutura de cada substncia, se agem de forma crnica ou aguda e se provocam efeitos reversveis ou no (Castro, 2002). Alm disso, muitas vezes difcil comparar e integralizar os diversos resultados dos estudos realizados por causa da diferena de metodologia de experimentao, inconsistncia no padro de repetio dos experimentos, informaes coletadas em diferentes perodos e sob diferentes condies de exposio (IPCS, 2002). Deve-se atentar, tambm, para extrapolao dos dados de efeitos de testes realizados in vitro para in vivo e extrapolao de dados experimentais para situaes com humanos. Outros questionamentos so levantados com relao ao impacto dos perturbadores endcrinos sobre os seres humanos. Por exemplo, se perturbadores endcrinos causam efeitos adversos em humanos, improvvel que esses efeitos sejam causados por produtos qumicos na gua, devido s diminutas concentraes que resultam em doses, que so pequenas, se comparadas a fitoestrognios e outros perturbadores presentes nos alimentos (Snyder et al., 2003a). Com intuito de esclarecer quais e como so os efeitos dessas substncias e padronizar os mtodos de anlises, com adequao dos tradicionais paradigmas de testes de toxicologia s especificidades dos perturbadores, diversas associaes e rgos ambientais tm estabelecido programas voltados para o desenvolvimento de metodologias e pesquisas de monitoramento desses contaminantes e procuram elaborar regulamentaes.

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Em 1996, a USEPA, agncia ambiental americana, criou um grupo de trabalho (EDSTACEndocrine Screening and Testing Advsory Commitee) para desenvolver recomendaes sobre testes e ensaios relacionados a perturbadores endcrinos. Um dos programas desenvolvidos (Endocrine Disruption Screening Program EDSP) foi concebido para validar mtodos de anlise e testes para identificar o potencial de perturbadores endcrinos; determinar efeitos adversos, dose-resposta, avaliaes de risco, bem como extrapolar testes em mamferos para efeitos em humanos. Esses mtodos ou ensaios, uma vez validados, devem subsidiar a USEPA para identificar e caracterizar a atividade endcrina de pesticidas, produtos qumicos e contaminantes ambientais. Foram criadas duas linhas de testes. Uma linha para identificar se o composto tem potencial para interagir no sistema endcrino. Outra, para determinar efeitos especficos causados por uma substncia considerada perturbadora e estabelecer a dose nas quais os efeitos ocorrem. Vrios protocolos esto em estgio de validao e fornecero um nvel adicional de avaliao segura da gama de produtos qumicos. O estgio de desenvolvimento dos ensaios encontra-se na pgina eletrnica da USEPA (USEPA, 2006). Segundo Harvey e Everett (2006) os atuais protocolos de toxicologia da USEPA podem detectar a toxicidade dos perturbadores endcrinos, mas testes especficos so necessrios para confirmar seus mecanismos de atuao. Ainda segundo esses autores, uma estratgia para avaliao de perturbadores endcrinos tambm est sendo elaborada no mbito da Comisso Europia - CE. No entanto, existem diferenas na filosofia geral dessas agncias que afetam a avaliao dos dados gerados pelos testes de toxicidade e de riscos. A estratgia da CE para avaliar os potenciais de impactos ao meio ambiente e sade humana causados por perturbadores endcrinos foi divulgada em 1999 (Comisso Europia, 1999) e delimita aes em curto, mdio e longo prazo para identificar essas substncias e pesquis-las. Um estudo publicado em 2000 pela Comisso Europia apresentou uma lista de 553 substncias suspeitas de serem perturbadores endcrinos, das quais 118 substncias apresentaram evidncias ou potencial de desregulao endcrina. O estudo foi submetido opinio do Comit Cientfico para Toxicidade, Ecotoxicidade e Meio Ambiente e a especialistas consultores. Baseados nas recomendaes desses analistas, dois novos 12

estudos foram iniciados. Um deles analisou nove substncias potencialmente consideradas como perturbadores endcrinos, entre elas o estradiol e estrona. A seleo foi feita aps anlise das 118 substncias mencionadas. O estudo concluiu que o estrona, 17 -estradiol e o hormnio sinttico 17-etinilestradiol so, evidentemente, causadores de efeitos na reproduo e desenvolvimento de peixes (Comisso Europia, 2004). Por enquanto, no foi recomendado nenhum limite de valores de perturbadores na gua de abastecimento, apesar de existirem problemas ligados liberao desses compostos na gua. No Japo, a agncia ambiental (JEA) publicou programas estratgicos sobre perturbadores endcrinos ambientais (Komori et al., 2004), com uma lista de mais de 70 contaminantes suspeitos de causar anormalidades em animais em concentraes muito pequenas. Cabe salientar, que as legislaes que estabelecem limites de contaminates em gua para consumo humano contemplam substncias consideradas potenciais perturbadores endcrinos, porm esses limites ainda no esto estabelecidos em funo de seus efeitos de perturbao endcrina, mesmo porque ainda no se chegou a um consenso de uma lista bem definida desses poluentes e seus efeitos. Como exemplo pode-se citar os pesticidas (que tambm funcionam como perturbadores). No Brasil, a avaliao de perturbadores ainda incipiente. Enquanto que em outros pases h programas oficiais para estudar os efeitos e regulamentar a questo dos perturbadores endcrinos, no Brasil, ainda no se observa a preocupao em se lanar propostas oficiais para estudo e regulao do tema e as iniciativas acabam ficando isoladas em alguns estudos no mbito acadmico. 3.1.3 - Ocorrncia de perturbadores em meios aquticos Parte dos micropoluentes absorvidos pelo organismo humano est sujeito a reaes metablicas. Entretanto, quantidade significativa dessas substncias originais e seus metablitos so excretados na urina, fezes, sendo frequentemente encontrados no esgoto. Assim, o interesse por pesquisas relacionadas a perturbadores endcrinos voltadas para a rea de saneamento tem aumentado. Os efluentes domsticos e industriais so considerados uma das principais fontes de contaminao de estrognios naturais e sintticos.

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Vrias substncias persistentes no so completamente removidas nas ETEs e podem poluir cursos de gua e mananciais, acabando por se tornar uma preocupao, tambm, para o tratamento de gua de abastecimento. Alm disso, tem sido relatado que formas conjugadas (glucoronidos e sulfatos) menos ativas de estrognio excretadas por animais, podem ser desconjugadas durante o processo de tratamento de esgoto e gerar formas mais potentes. (Ternes et al., 1999). A presena tanto de estrognios e progesteronas naturais, quanto de sintticos nas guas tem, em sua maioria, sido relatada em faixas de ocorrncias abaixo de 1 ng/L at 10 ng/L, e somente em poucos casos as concentraes so mais altas, da ordem de g/L (Ternes et al., 1999). Wang et al. (2005) analisaram amostras de estao de tratamento para reso de gua de Tianjin, na China, para verificar a concentrao de nove perturbadores endcrinos entre eles a estrona, o 17-estradiol, o bisfenol A e o 4-nonilfenol, alm de alguns ftalatos. A Estao de Reso em questo recebe esgoto secundrio de uma estao de lodos ativados e trata por coagulao-floculao, microfiltrao em membrana e ozonizao e as amostras foram retiradas em cada um desses estgios. Concentraes de esterides, alquilfenois e ftalatos no afluente da estao de reso (sada da estao de lodos ativados) variaram, respectivamente, entre abaixo do limite de deteco at 8,1 ng/L, abaixo do limite de deteco at 14,2 ng/L e de 1g/L a 23,8 g/L. A mdia de eficincia de remoo dessas substncias em todas as etapas da estao de reso foi entre 30% a 82%. Esses resultados indicam que esses compostos no so completamente removidos, e, portanto, podem ser carreados para o meio ambiente. As concentraes encontradas j podem provocar, de acordo com a literatura, efeitos adversos em organismos e, alm disso, podem ocorrer efeitos toxicolgicos sinergticos entre os diferentes compostos. No Japo, Komori et al. (2004) analisaram amostras de 20 estaes de tratamento de esgotos, a maioria com processos convencionais de lodos ativados, para avaliar a ocorrncia de estrognios livres e seus conjugados. A concentrao das substncias conjugadas (por exemplo, estrone-3-sulfate (E1-S); -estradiol 3-sulfate (E2-S); estriol 3sulfate (E3-S) e -estradiol 17-(-D)-glucuronide (E2-G)) foi mais alta que aquelas dos estrognios livres (estriol, estrona, 17-estradiol). Dentre os estrognios livres as concentraes mais altas no efluente do decantador secundrio foram de estrona (em mdia 14

12 ng/L). As redues dos estrognios nas estaes foram elevadas, aproximadamente 100% e 99% para estriol e estradiol, enquanto que para a estrona foi menos eficiente (45%) sugerindo que sua taxa de degradao nos processos de tratamento menor. No Canad, Servos et al. (2005) estudaram a deteco dos hormnios naturais (17estradiol e estrona) em 18 estaes de tratamento de esgoto, que incluam processos de lodo ativado ou tratamento por lagoas de estabilizao. Nos afluentes foram encontradas significativas concentraes das substncias (15,6 ng/L de 17-estradiol e 49 ng/L de estrona). No efluente final as concentraes reduziram para 1,8 ng/L e 17 ng/L, demonstrando, de forma similar ao relatado por Komori et al. (2004), uma boa eficincia de remoo para o estradiol e uma remoo mais difcil da estrona, com eficincias muito variveis. Os autores salientam que a remoo de estrgenos em estaes de tratamento complexa e pouco entendida. Os efluentes podem conter outros estrognios como alquilfenol e bisfenol e todas essas misturas de substncias podem interagir com o efluente e impactar o meio ambiente. Alguns estudos em gua superficial tambm foram realizados. Furuichi et al. (2004) verificaram a presena de alguns perturbadores (entre eles, 4-nonilfenol, 4-tert-octilfenol, bisfenol, etinilestradiol, estrona e 17-estradiol) em cinco pontos do rio Tama, no Japo. Apesar de algumas substncias como o nonilfenol, octilfenol e bisfenol terem sido encontradas em concentraes superiores aos dos hormnios (51,6-147ng/L, 6,9-81,9 ng/L e 8,2-73,9 ng/L, repectivamente), a maior causa de atividade estrognica no rio Tama foi atribudo estrona e 17-estradiol que sugere o maior potencial de perturbador endcrino desta substncia. Na ustria amostras de gua foram coletadas em locais de rotina do controle de qualidade da gua perfazendo um total de 27 pontos de medidas em guas superficiais e 59 em guas subterrneas. Os perturbadores analisados foram: 17-estradiol, estriol, estrona, 17etinilestradiol, 4-nonilfenol, 4-nonilfenoletoxilato e produtos de suas degradaes, octilfenol e octifenol-etoxilato, alm, do bisfenol. Em mais da metade das amostras em guas superficiais o 17-estradiol e a estrona puderam ser detectados, porm, em baixas concentraes, em mdia, de 0,13 e 0,35ng/L, repectivamente. O bisfenol e o nonilfenol foram encontrados em concentraes mdias de 11 ng/L em 25% das amostras. Nas amostras de gua subterrnea, o 17-estradiol foi detectado em 50% das amostras com 15

valor mximo de 0,79ng/L. Nonilfenoletoxilato e carboxilato foram detectados em um tero das amostras em concentraes mais altas (mdia de 35ng/L para o nonilfenol) do que para os hormnios naturais (Bursch et al., 2004). No Brasil, no estado do Rio de Janeiro, Stumpf et al. (1999) detectaram diversos frmacos, usados como analgsicos e anti-inflamatrios, em amostras de afluentes e efluentes de 10 diferentes ETEs, dos 17 maiores rios (incluindo o rio Paraba do Sul) e, ainda, da baa de Guanabara. A maioria das drogas investigadas nos efluentes de ETEs encontrou-se na faixa de concentrao de 100 a 1000 ng/L e a taxa de remoo de frmacos durante a passagem pelas ETEs variou de 12 a 90%. Nas guas superficiais, as concentraes mdias situaramse entre 20 e 40 ng/L, como conseqncia da remoo incompleta dos frmacos durante o tratamento em ETE e pelo descarte de esgoto in natura. Em outro estudo, tambm relacionado ao Brasil, discutido por Ternes et al. (1999) foram encontrados estrognios naturais e contraceptivos sintticos na ETE da Penha-Rio de Janeiro. No afluente, o 17-estradiol e o estrona foram detectados em concentraes significativas de 21 ng/L e 4 ng/L, respectivamente. A eficincia de remoo dos hormnios no tratamento por lodo ativado foi mais alta do que a remoo por filtros biolgicos. As eficincias de remoo do contraceptivo 17--etinilestradiol foram de 64% e 78%, respectivamente, no filtro biolgico e no lodo ativado. A estrona foi removida com eficincia de 67% no filtro biolgico e 83% no processo de lodo ativado e para o 17estradiol eficincias foram de 92 e 99,9% no filtro biolgico e no processo de lodo ativado, respectivamente. Os estudos mostram que, em geral, dentre os perturbadores endcrinos, os hormnios naturais, apesar de apresentarem menores concentraes so encontrados com mais freqncia na natureza, alm de possurem maior potencial estrognico, o que sugere maior potencial de perturbao endcrina. Por esse motivo, o perturbador endcrino avaliado nesse trabalho ser o hormnio -estradiol. O estradiol tem tido eficincias de remoo variadas em ETEs, no entanto, as concentraes residuais, segundo a literatura, ainda podem ser suficientes para causarem efeitos adversos em organismos.

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3.1.4 - Caractersticas do -estradiol O -estradiol um hormnio da classe dos esterides. Os esterides so lipossolveis (por esse motivo atravessam facilmente a membrana celular) e incluem os hormnios do crtex adrenal, andrgenos (hormnios sexuais masculinos) e estrgenos (hormnios femininos) (Lehninger, 1985). Dentro do sistema hormonal feminino existem dois tipos de hormnios ovarianos: os estrognios e as progestinas. As progestinas esto relacionadas quase que totalmente com a preparao final do tero para a gravidez e das mamas para a lactao. A mais importante das progestinas a progesterona. Os estrognios favorecem, principalmente, a proliferao celular e o crescimento dos tecidos dos rgos sexuais e de outros tecidos relacionados com a reproduo, sendo responsveis pelo desenvolvimento da maioria dos caracteres sexuais secundrios da mulher. Sem dvida alguma, o estradiol o estrognio mais importante (Guyton, 1989). Na mulher apenas trs estrognios ocorrem em quantidades significativas no plasma: o estradiol, a estrona e o estriol. A potncia estrognica do -estradiol 12 vezes maior que a da estrona e 80 vezes maior que a do estriol (Guyton, 1989). Os estrognios naturais, incluindo o -estradiol, so usados na medicina humana, particularmente na terapia de reposio hormonal e para o tratamento de outras desordens ginecolgicas. Eles tambm so usados no tratamento de cncer de prstata e de mama em mulheres na ps-menopausa (Johnson e Harvey, 2002). As principais caractersticas fsico-qumicas do -estradiol so apresentadas na Tabela 3.1.

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Tabela 3.1 - Resumo das principais caractersticas do -estradiol (Johnson e Harvey, 2002; Kimura et al., 2004; McCallum, 2005 e Nghiem et al., 2004a) Nomes 17-estradiol, estradiol, E2, oestradiol, -estradiol Nmero do CAS(a) Peso molecular Frmula qumica Solubilidade em gua pKa (constante de dissociao cida) Comprimento da molcula (L) Carga no pH 7 Kow) Momento de dipolo Constante da lei de Henry Estrutura qumica
H H OH H

50-28-2 272,4 g/mol C18H24O2 13mg/L em 20oC 10,4 1,285nm neutro

Coeficiente de partio octanol-gua (log 4,01 0,798 debye 3,64.10-11 atm.m3/mol


CH3 OH H

(a) O CAS (Servio de Compndio de Substncias Qumicas) o rgo que faz o registro de todas as substncias qumicas desenvolvidas e utilizadas no mundo.

Segundo Jin et al. (2007) o coeficiente de partio octanol-gua de 3,43 da estrona sugere que esta prontamente adsorvida em materiais hidrofbicos como macromolculas em gua e membranas polimricas. Na Tabela 3.1 observa-se que o mesmo ocorre para o estradiol, j que um Kow>2 caracteriza uma substncia como hidrofbica (Kimura et al., 2003a). O log D (frao ionizvel+no-ionizvel) para o -estradiol de 4,13 para uma faixa de pH de 1 a 9 e 3,94 no pH 10 (SciFinder, 2004). A rota de entrada dos estrognios naturais no meio aqutico principalmente por meio da excreo de animais e humana e subsequente transporte pelos efluentes de estaes de tratamento de esgotos.

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Geralmente a excreo de hormnios por mulheres saudveis na pr-menopausa reportada na faixa de 10 a 100 g/dia. Depois da menopausa, a excreo fica entre 5 e 10 g/dia. Mulheres grvidas podem excretar mais de 30 mg/dia, mas valores mdios ficam em torno de 250 g/dia (Johnson et al., 1999 apud Danish EPA, 2003). Os valores para homens normais variam de 2 a 25 g/dia (Williams et al., 1996 apud Danish EPA, 2003). Mulheres em uso de plulas anticoncepcionais usualmente excretam uma dose de 25 a 50g/dia. A bioacumulao de -estradiol em organismos aquticos esperada que seja baixa por causa de seu baixo coeficiente de partio octanol-gua (ver Tabela 3.1), mas poucos dados so relatados (Johnson e Harvey, 2002). No entanto, Johnson e Harvey (2002) relatam um estudo que foi conduzido por Larsson et al. (1999), no qual trutas dos dois sexos foram presas e colocadas a montante e jusante de uma estao de tratamento de esgotos domsticos sueca. Efluentes da ETE foram analisados em relao ao -estradiol, estrona e etinilestradiol, e apresentaram concentraes da ordem de ng/L. Depois de 2 a 4 semanas de exposio, amostras da bile dos peixes foram coletadas. As biles dos peixes a jusante da estao de tratamento apresentaram os hormnios em concentraes 104-106 vezes mais altas do que as concentraes na gua. 3.2 - CIANOBACTRIAS E CIANOTOXINAS 3.2.1 - Cianobactrias Cianobactrias so microrganismos de origem extremamente remota, com registros fsseis que remontam h cerca de 3,5 bilhes de anos (Carmichael,1994). So geralmente aquticas e realizam fotossntese. Por esse motivo e por possurem pigmento azulado (ficocianina), as cianobactrias eram conhecidas como algas azuis. No entanto, depois do advento da microscopia eletrnica verificou-se que esses organismos no eram algas, j que no eram eucariontes (membrana nuclear definida e presena de mitocndrias e outras organelas), e sim, bactrias que so organismos mais simples do grupo procarionte, sem membrana envolvendo o material nuclear (Carmichael, 1994). As cianobactrias constituem o grupo maior e mais diverso dos microrganismos procariticos, incluindo cerca de 150 gneros, com aproximadamente 2000 espcies 19

(Ceballos et al., 2006). Apresentam formas variadas devido s adaptaes morfolgicas, bioqumicas e fisiolgicas adquiridas durante sua evoluo, e diferentes nveis de organizao (Bittencourt-Oliveira e Molica, 2003). So exemplos de gneros unicelulares: Synechococus e Aphanothece; formam estruturas coloniais (clulas individuais agregadas pela mucilagem de polissacardeos) Microcystis, Gomphospheria e Merismopedium. Dentre as formas filamentosas destacam-se: Oscillatoria, Planktohrix, Anabaena, Cylindrospermopsis e Nostoc. Nas espcies filamentosas, a presena de heterocitos (clulas diferenciadas para fixao de nitrognio) um importante carter taxonmico (BittencourtOliveira e Molica, 2003). Acredita-se que as cianobactrias foram as responsveis pelo incio da formao da atmosfera atual, rica em oxignio, e pela evoluo de todos os organismos fotossintetizantes (Bittencourt-Oliveira e Molica, 2003). Apesar da importncia ambiental histrica, de existirem espcies benficas, as quais produzem alguns metablitos secundrios com potencial de uso em frmacos, inclusive para cura de doenas como mal de Alzhimer (Carmichael, 1992 e 1994), e de sua aplicao biotecnolgica (Falch et al., 1992 apud Ceballos et al., 2006), as cianobactrias tm sido mais conhecidas pelos desequilbrios ecolgicos que suas floraes (decorrentes principalmente do aumento de cargas poluidoras nos ambientes aquticos) causam e, principalmente, pela sua capacidade de sintetizar toxinas que podem prejudicar a sade. As cianobactrias se desenvolvem melhor e formam mais floraes quando o ambiente aqutico rico em nutrientes (nitrognio e fsforo), alm de mais trs condies: ventos fracos a moderados, temperatura da gua de 15 a 30C e pH alcalino (de 6 a 9) (Carmichael, 1994). Por essas caractersticas, a maioria dos reservatrios do Brasil propcia ao desenvolvimento de cianobactrias durante o ano todo (Azevedo et al., 1994). As floraes de cianobactrias podem causar gosto e odor desagradveis na gua, alm de alterar o equilbrio ecolgico do ecossistema aqutico. O maior problema, entretanto, est no fato de que as cianobactrias presentes podem produzir toxinas potentes (cianotoxinas) que causam intoxicaes, com conseqncias nem sempre bem conhecidas (Azevedo e Brando, 2003).

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Diversas espcies potencialmente txicas j foram identificadas enquanto em outras, at hoje, no foram identificadas linhagens produtoras de toxinas. Linhagens (ou cepas) de uma mesma espcie podem ou no produzir cianotoxinas, em diferentes condies de pH, temperatura, etc (Ceballos et al., 2006). SantAnna e Azevedo (2000) realizaram uma compilao de dados de estudos sobre cianobactrias potencialmente txicas e sua distribuio geogrfica no territrio brasileiro. De acordo com o estudo, todas as regies da federao apresentam ocorrncias de cianobactrias, entretanto esses valores representam somente os casos registrados na literatura especfica. Certos estados como So Paulo e Rio Grande do Sul, apresentaram elevado ndice de ocorrncias dessas floraes, entretanto muitos estados tm graves problemas de floraes de cianobactrias no devidamente registrados. A espcie Microcystis aeruginosa apresentou o maior nmero de ocorrncia no Brasil, alm de possuir uma ampla distribuio nos estados brasileiros. Entretanto, identifica-se um aumento da presena de Cylindrospermopsis raciborskii em diferentes regies brasileiras (Chellapa e Costa, 2003; Carvalho et al., 1999; Silvestre et al., 1999; Yunes et al., 2003; Molica et al., 2005). Pelo menos um tero dos mais de 50 gneros de cianobactrias encontradas em gua doce apresentam produo de toxinas, chamadas cianotoxinas, mas no existe um mtodo simples que distinga se um gnero, espcie ou cepa txica ou no-txica. Pesquisadores geralmente concordam que 50 a 60% das floraes de cianobactrias so txicas, por isso prefervel a preveno de qualquer florao de cianobactrias para o controle da produo de cianotoxinas nas guas de abastecimento (Yoo et al., 1995). Para previnir e minimizar esses efeitos, a Portaria n 518 do Ministrio da Sade (Brasil, 2004) estabelece em seu Captulo 5, Artigo 19, Inciso 1 que o monitoramento de cianobactrias na gua do manancial, no ponto de captao, deve obedecer freqncia mensal, quando o nmero de cianobactrias no exceder 10.000 clulas/mL (ou 1 mm3/L de biovolume), e semanal, quando o nmero de cinobactrias exceder este valor.

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3.2.2 - Cianotoxinas As cianotoxinas so compostos intracelulares ou particulados, ou seja, so produzidas e armazenadas no interior das clulas viveis de cianobactrias. A liberao das cianotoxinas para o meio aqutico, para formao da toxina dissolvida extracelular, ocorre principalmente durante o processo de senescncia, morte e lise das clulas, ao invs de uma contnua excreo dos compostos (Sivonen e Jones, 1999). Uma mesma cianobactria pode produzir uma ou mais cianotoxinas. Entretanto, ainda no foram devidamente esclarecidas as causas de sua produo e sua funo para clula produtora. Considera-se, como mais provvel, que as cianotoxinas tenham funo protetora contra a herbivoria, assim como muitos metablitos secundrios agem em plantas vasculares. (Carmichael, 1992). Segundo sua estrutura qumica, as cianotoxinas se classificam em trs grandes grupos: os peptdeos cclicos, os alcalides e os lipopolissacardeos. As cianotoxinas tambm podem ser agrupadas de acordo com seu modo de toxicidade, as principais classes de cianotoxinas so: neurotoxinas, hepatoxinas e dermotoxinas. As dermatotoxinas agem irritando a pele, os olhos e causando asma quando ocorre exposio por meio do contato com guas contaminadas por cianobactrias (Falconer, 1994). A cianobactria marinha Lyngbya majuscula, por exemplo, libera cianotoxinas que causam irritaes cutneas agudas (eritema, bolhas e escamao) em perodos de mais de 12 horas de exposio a essa cianobactria (Kuiper-Goodman et al., 1999). As hepatotoxinas so responsveis pela maioria das intoxicaes causadas por cianobactrias. Apresentam uma ao mais lenta que as neurotoxinas, mas podem causar a morte num intervalo de poucas horas a poucos dias, por choque circulatrio ou pela interferncia no funcionamento normal do fgado (Carmichael, 1994). As espcies j identificadas como produtoras dessas hepatotoxinas pertencem aos gneros Microcystis, Anabaena, Nodularia, Oscillatoria, Nostoc e Cylindrospermopsis (Carmichael, 1992b). No Brasil, a portaria no 518/2004, do Ministrio da Sade (BRASIL, 2004) estabelece o valor de 1g/L como padro de potabilidade para hepatotoxina do tipo microcistina nas 22

guas de abastecimento, sendo aceitvel a concentrao de at 10 g/L de microcistinas em at 3 (trs) amostras, consecutivas ou no, nas anlises realizadas nos ltimos 12 (doze) meses. Adicionalmente, recomenda-se que a concentrao de cilindrospermopsina, tambm uma hepatotoxina, no exceda 15g/L. As neurotoxinas, grupo de alcalides ou organofosforados, representam um grupo de cianotoxinas que agem sobre o sistema nervoso central e podem levar parada respiratria, causando a morte em alguns minutos. Alm de cianobactrias, os alcalides neurotxicos tambm podem ser produzidos por bactrias e plantas (Ceballos et al., 2006). As neurotoxinas produzidas por cianobactrias esto includas em um grande grupo de compostos nitrogenados heterocclicos com peso molecular<1000 g/mol. Possuem estruturas qumicas diversificadas e com diferentes efeitos txicos em mamferos (Ceballos et al., 2006). Segundo vrios autores (Carmichael, 1992a e 1992b; Sivonen e Jones, 1999; entre outros), as neurotoxinas j identificas podem ser agrupadas em trs famlias: Anatoxina-a (e homoanatoxina-a), que inibe o efeito da acetilcolina, so produzidas pelas espcies Anabaena flos-aquae, Aphanizomenon flos-aquae e Oscillatoria sp.; Anatoxina-a(s), um composto organofosforado com propriedades anticolinesterase, produzida pela espcie Anabaena flos-quae; Saxitoxinas, tambm conhecida como veneno paralisante de moluscos (PSPs), produzida pelos gneros Anabaena, Aphanizomenon, Lyngbya e Cylindrospermopsis, e por certos microrganismos marinhos. As saxitoxinas isoladas so oriundas de cianobactrias dos gneros Aphanizomenon, Anabaena, Lyngbia, Cylindrospermopsis, e, j confirmadas das espcies, Aphanizomenon flos-aquae, Anabaena circinalis, Lyngbia wollei e Cylindrospermopsis raciborskii. Algumas dessas espcies podem produzir mais de um tipo de saxitoxinas (Ceballos et al., 2006) No Brasil, identifica-se um aumento da ocorrncia de Cylindrospermopsis, produtora de saxitoxinas, desde a regio nordeste at o sul, o que torna de extrema importncia a anlise 23

desse grupo de neurotoxinas em amostras de gua para abastecimento pblico (Lagos et al., 1999; Molica et al., 2005). Dentre os diversos tipos de cianotoxinas, so de interesse para este estudo as saxitoxinas, detalhadas a seguir. 3.2.3 - Caractersticas das Saxitoxinas Saxitoxinas, tambm conhecidas como venenos paralisantes de moluscos (toxinas do tipo PSP) uma generalizao para um grupo de neurotoxinas isoladas inicialmente de dinoflagelados marinhos que causam mars vermelhas, embora sejam encontradas em cepas de diversos gneros de cianobactrias (Carmichael, 1994). As saxitoxinas so grupos de alcalides (contm em sua frmula basicamente oxignio, hidrognio e carbono) carbamatos e decarbamoil que podem ser no sulfatados (saxitoxina), com um nico grupamento sulfato (G-toxinas) ou dois grupamentos sulfatados (C-toxinas). O grupo decarbamoil est nas molculas com denominao iniciada com as letras dc: dcSTX ou dcGTX. Novas toxinas (neotoxinas), de estrutura qumica relacionada com o tipo no sulfatado (saxitoxina) foram isoladas recentemente (Ceballos et al., 2006). A Figura 3.2 apresenta a estrutura geral das saxitoxinas. Nessa Figura as letras R1 a R5 correspondem a grupos qumicos variveis na molcula. A Tabela 3.2 relaciona as saxitoxinas.

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Figura 3.2 - Estrutura geral das saxitoxinas. Tabela 3.2 - Tipos de saxitoxinas caracterizadas a partir de diferentes cepas de cianobactrias (baseado em Sivonen e Jones, 1999). Grupos qumicos variveis nas toxinas Nome da toxina R1 R2 R3 R4 R5 STX H H H CONH2 OH GTX2 H H OSO3CONH2 OH GTX3 H OSO3 H CONH2 OH GTX5 H H H CONHSO3 OH C1 H H OSO3CONHSO3OH C2 H OSO3 H CONHSO3 OH neoSTX OH H H CONH2 OH GTX1 OH H OSO3 CONH2 OH GTX4 OH OSO3 H CONH2 OH GTX6 OH H H CONHSO3OH dcSTX H H H H OH dcGTX2 H H OSO3H OH dcGTX3 H OSO3 H H OH LWTX1 H OSO3H COCH3 H LWTX2 H OSO3 H COCH3 OH LWTX3 H H OSO3 COCH3 OH LWTX4 H H H H H LWTX5 H H H COCH3 OH LWTX6 H H H COCH3 H
Legenda: STX saxitoxina dcSTX decarbamoilsaxitoxinas GTX goniautoxinas C C-toxinas LWTX toxinas de Lyngbya wollei neoSTX - neosaxitoxina

Llewellyn (2006) ainda cita mais seis tipos de saxitoxinas: dcneoSTX, GC1, GC2, GC3, dcGTX1, dcGTX4, C3, C4, e Zetekitoxina.

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As saxitoxinas so molculas tricclicas e a sua estrutura base uma tetrahidropurina com dois grupos guanidnicos (grupo funcional, geralmente de forte alcalinidade). O grupo 1,2,3-guanidino, a pH fisiolgico (aproximadamente 7,4) possui carga positiva, enquanto o grupo 7,8,9 est parcialmente desprotonado a pH fisiolgico. Em solues aquosas a STX possui dois pKas de 8,22 e 11,28 os quais pertencem ao 7,8,9 e 1,2,3 grupo guanidino, respectivamente. Essa natureza polar explica a imediata solubilidade em gua, menores solubilidades em lcoois e insolubilidade em solventes orgnicos (Llewellyn, 2006). A NeoSTX possui um adicional pKa (6,75) que pertence ao N-1 hidroxila e os pKas do 1,2,3 e 7,8,9 grupos guanidinos so alterados para 11,65 e 8,65, respectivamente. Para dcSTX os pKas so de 8,10 e 10,84 para os grupos 7,8,9 e 1,2,3 respectivamente (Llewellyn, 2006). Os pesos moleculares das saxitoxinas so menores que 500g/mol, como apresentado na Tabela 3.3. Tabela 3.3 - Pesos moleculares de diferentes saxitoxinas (Llewellyn, 2006) Toxina Peso molecular (g/mol) STX dcSTX neoSTX GC1 GC3 GTX1 GTX2 dcGTX2 C1 299,134 256,128 315,286 471,093 376,150 411,081 395,086 351,072 473,027

O logaritmo do coeficiente de partio octanol-gua (log P ou log Kow) da STX e da NeoSTX so respectivamente, -3,5 e -3,727 (Scifinder, 2007), indicando que essas variantes so hidroflicas. O log D para a saxitoxina (STX) sempre negativo numa faixa de pH de 1 a 10 (variando de -4,58 no pH 10 a -6,50 no pH1). Para Neo-STX esses coeficientes tambm so sempre negativos (SciFinder, 2004).

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As saxitoxinas possuem toxicidades bastante variadas, sendo a saxitoxina (STX) a mais potente, seguidas da GTX-1, Neosaxitoxina (Neo-STX), dc-saxitoxina (dc-STX), outras variantes da G-toxinas e sendo as C-toxinas as menos txicas (Jones e Negri, 1997). A dose letal que causa morte a 50% da populao de camundongos - DL50 (intraperitonial) para a saxitoxina purificada de 10g/kg de peso corpreo e, por consumo oral a DL50 de aproximadamente de 263g/kg de peso corpreo (Chorus e Bartran, 1999). Embora a Organizao Mundial de Sade (OMS) considere que ainda no h dados suficientes para o estabelecimento de um limite de concentrao mximo aceitvel para as saxitoxinas em gua potvel (Kuiper-Goodman, 1999), uma anlise dos dados dos eventos de intoxicaes humanas, demonstra que a maioria dos casos esteve associada ao consumo de aproximadamente 200g de saxitoxinas por pessoa. Baseado nesses dados e considerando 60 Kg como peso corpreo, 2L de gua como consumo dirio e fatores de incerteza para variaes entre espcies distintas e entre organismos da mesma espcie, Fitzgerald et al. (1999) propuseram 3g/L como o limite mximo aceitvel de saxitoxinas em gua para consumo humano. Esse valor foi incorporado portaria no 518/2004, do Ministrio da Sade (BRASIL, 2004), onde recomenda-se que as anlises para cianotoxinas incluam a determinao de saxitoxinas, observando, o valor limite de 3,0 g/L expressos em equivalentes de STX. As saxitoxinas agem nas membranas dos axnios nervosos inibindo a conduo nervosa por bloqueamento dos canais de sdio, afetando a permeabilidade ao potssio ou a resistncia das membranas, impedindo, assim, a comunicao entre o crebro e as clulas musculares. Estudos de efeitos em gatos mostraram que a saxitoxina afeta o sistema nervoso central, produz aumentos da presso arterial, falhas no funcionamento do corao e at paradas cardacas (Andrinolo et al.1999 apud Ceballos et al., 2006). Os sinais clnicos de intoxicao humana por saxitoxinas incluem: tontura, adormecimento da boca e extremidades, fraqueza muscular, nusea, vmito, sede e taquicardia (Carmichael, 1994; Kuiper-Goodman et al., 1999). Os sintomas podem comear 5 minutos aps a ingesto e a morte pode ocorer entre 2 e 12 horas. Em caso de intoxicao com dose no letal, geralmente os sintomas desaparecem de 1 a 6 dias (Carmichael, 1994). No existe conhecimento sobre os efeitos crnicos por falta de estudos de longa durao em animais (Ceballos et al., 2006). 27

3.2.4 - Efeitos causados por cianotoxinas sade A presena de cianotoxinas nos corpos dgua representa problema prioritariamente de sade pblica. A intoxicao por cianotoxinas ocorre principalmente por via oral e cutnea, atravs do consumo de gua, ingesto de pescados contaminados e durante atividades recreacionais em corpos dgua. Entretanto, existem casos, ainda que raros, de exposio s cianotoxinas pela inalao (durante o banho e em certas atividades esportivas na gua), por via intravenosa (hemodilise) e pela alimentao direta de cianobactrias, pois em alguns pases a dieta da populao inclui algas e cianobactrias (Kuiper-Goodman et al.,1994; Falconer et al., 1999). Alm disso, existem diversos registros de amplificao biolgica de cianotoxinas ao longo da cadeia alimentar de comunidades aquticas, incluindo zooplncton, mexilhes e peixes (Falconer et al., 1994; Chorus e Bartram, 1999; Ceballos et al., 2006). difcil definir o nvel-limite de toxinas bioacumuladas que pode afetar os seres humanos. Essa concentrao depender da quantidade consumida no alimento contaminado, da severidade das floraes txicas onde os peixes ou moluscos foram criados e da quantidade acumulada por estes. Recomendaes preventivas e importantes a serem seguidas referemse a no ingesto das vsceras e preferncia por peixes e mariscos de guas no eutrofizadas. (Ceballos et al., 2006) Com relao ao Brasil, o trabalho de Teixeira et al. (1993) descreve uma forte evidncia de correlao entre a ocorrncia de floraes de cianobactrias, no reservatrio de Itaparica (Bahia) e a morte de 88 pessoas, entre as mais de 2.000 intoxicadas, pelo consumo de gua do reservatrio, entre maro e abril de 1988. A epidemia ocorreu logo aps o alagamento do reservatrio de Itaparica e durou, aproximadamente, dois meses. A anlise da gua revelou a presena de cianobactrias dos gneros Anabaena e Microcystis, porm no foram realizadas anlises nos rgos das pessoas intoxicadas para confirmar a origem da epidemia. Entretanto, o primeiro caso confirmado de mortes humanas causadas por intoxicao por cianotoxinas ocorreu no incio de 1996, em Caruaru (PE), quando 130 pacientes renais crnicos, aps terem sido submetidos a sesses de hemodilise passaram a apresentar 28

sintomas de grave hepatotoxicose. Desses 130 pacientes, 60 vieram a falecer at 10 meses aps o incio dos sintomas. O episdio ocorreu, durante a poca da estiagem, quando a clnica no recebeu gua tratada. Cabe salientar que a hemodilise representa um risco adicional neste caso, pois neste processo, as toxinas presentes na gua entram diretamente na circulao, causando desde a falha do funcionamento do fgado at doenas neurotxicas agudas, podendo levar o paciente morte. Sendo assim, a hemodilise foi provavelmente a via de contaminao, pois nenhum parente ou pessoas que entraram em contato com os pacientes foram afetados e ainda, as anlises laboratoriais confirmaram a presena de microcistinas no carvo ativado utilizado no sistema de purificao de gua da clnica, bem como em amostras de sangue e fgado dos pacientes intoxicados (Azevedo, 1996). 3.3 - PROCESSOS DE TRATAMENTO POR MEMBRANA FUNDAMENTOS TERICOS 3.3.1 - Consideraes iniciais A tecnologia de separao por membrana foi inicialmente comercializada para dessalinizao de gua do mar, no incio da dcada de 60. Na dcada de 80, uma variante dessa tecnologia que opera a presses menores (nanofiltrao) comeou a ser instalada em escala comercial para remoo de dureza de guas subterrneas no estado da Flrida-EUA. No entanto, o grande avano dessas variantes comeou no incio dos anos 90, quando foram lanadas no mercado de saneamento, membranas de separao de partculas (microfiltrao e ultrafiltrao) (Schneider e Tsutiya, 2001). Hoje, em pases desenvolvidos, sistemas de tratamento com membranas esto sendo projetados para substituir sistemas convencionais de tratamento de gua em grandes escalas (7m3/s). Os principais fatores que impulsionam a adoo de tecnologias de membranas so (Schneider e Tsutiya, 2001, Nobrega et al., 2005): Reduo do custo de construo e operao. Apesar de ainda elevados, os custos vem diminuindo aproximadamente 20% nos ltimos anos; Legislao mais restritiva. Os limites para patgenos e de contaminantes qumicos em guas de consumo humano esto progressivamente sendo reduzidos. Em 29

pases desenvolvidos a capacidade da tecnologia convencional para atender uma legislao mais restritiva est se esgotando; Simplicidade de operao e de ampliao de escala (os sistemas so modulares). O uso dos processos de separao por membranas no campo do saneamento, entretanto, no se restringe ao tratamento de gua de abastecimento. Uma grande demanda do setor de tratamento de efluentes vem crescendo. Reatores aerbios e anaerbios, utilizando membranas submersas acopladas vm produzindo efluentes de alta qualidade. Utilizam-se membranas, tambm, no tratamento para reso industrial, agrcola, recarga de aqferos e outros usos caracterizados como no potveis (Schneider e Tsutiya, 2001). No Brasil, a tecnologia de membranas ainda no utilizada em escala real para tratamento de gua para abastecimento pblico. Entretanto, pesquisas voltadas para essa aplicao comeam a surgir no pas. So estudos em escala de bancada, por exemplo, o de Ribeiro (2002) que avalia a remoo de compostos orgnicos por ultrafiltrao e nanofiltrao do tipo fontral e em escala piloto (Mierzwa, 2006), utilizando ultrafiltrao com mdulo em espiral, como tratamento direto da gua do reservatrio Guarapiranga, em So Paulo. Com relao produo de membranas em escala comercial, ocoreem algumas iniciativas de grupos de pesquisa como, por exemplo, o grupo do Programa de Engenharia Qumica da COPPE/UFRJ dentro de seu programa de incubadoras de empresas (Pan membranas seletivas) e o grupo do Laboratrio de Membranas do Instituto Nacional de Energia Nuclear, ligado ao Ministrio da Cincia e Tecnologia MCT. 3.3.2 - Caractersticas fsicas e qumicas das membranas Membrana um filme fino slido que capaz de separar materiais em funo de suas caractersticas fsicas e qumicas quando uma fora externa aplicada a ela (Aptel e Buckley, 1996). Ela funciona como uma barreira seletiva, ou seja, no ocorre transformao qumica ou biolgica de componentes durante a separao. O esquema bsico de funcionamento apresentado na Figura 3.3.

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Figura 3.3 - Esquema bsico de funcionamento de uma membrana (Aptel e Buckley, 1996) A produo de membranas pode ser feita a partir de materiais orgnicos (polmeros) e inorgnicos (metais, cermicas, etc). O mercado de saneamento dominado por membranas fabricadas com polmeros orgnicos, em funo dos menores custos envolvidos (Schneider e Tsutiya, 2001). O acetato de celulose foi o primeiro material de alto desempenho descoberto para uso na osmose reversa (Baker, 2004). O fluxo e a capacidade de rejeio desses polmeros tm sido ultrapassados pelas modernas membranas compostas. No entanto, segundo Baker (2004), as membranas de acetato de celulose ainda mantm uma frao do mercado, pois so fceis de ser confeccionadas e de baixo custo, mecanicamente fortes e resistentes degradao por cloro e outros oxidantes, um dos problemas das membranas compostas. Apesar de sua sensibilidade temperatura, pHs alcalinos e degradao biolgica, so amplamente usadas para dessalinizao, desinfeco, clarificao (Aptel e Buckley, 1996). Outra importante classe de polmeros so as poliamidas que tambm so usadas na dessalinizao por causa de suas propriedades permosseletivas e melhores estabilidades trmicas, qumicas e hidrolticas que os acetatos. O grupo das amidas, no entanto, tem sensibilidade a degradao oxidativa e possuem menores tolerncias a exposies ao cloro. Outros polmeros orgnicos, tambm bastante utilizados, so: poliacrilonitrila, polissulfona (grande tendncia adsoro, mas boa estabilidade qumica, mecnica e trmica), polipropileno, etc. Inicialmente as membranas orgnicas eram simtricas, com poros regulares, quase cilndricos que atravessavam toda a estrutura das membranas. A produtividade e

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porosidade dessas membranas eram muito pequenas pela necessidade de limitar o volume ocupado pelos poros, para evitar colapso das membranas quando pressurizadas. Atualmente, so utilizadas membranas anisotrpicas caracterizadas por um gradiente de porosidade interno gerado pelo controle das condies de polimerizao da membrana. A membrana, na forma de uma fina pelcula filtrante, fica situada sobre uma estrutura mais grossa e bem mais porosa e resistente responsvel pela estabilidade mecnica do conjunto. A resistncia separao e a seletividade so determinadas inteiramente pela fina pelcula do topo, cuja espessura varia entre 0,1 m e 0,5 m e corresponde a cerca de 1 % da espessura do suporte poroso. Segundo Aptel e Buckley (1996), comum a distino entre dois tipos de membranas anisotrpicas: membranas assimtricas e compostas. As membranas assimtricas so membranas anisotrpicas preparadas com um nico tipo de material. Nas membranas compostas o material utilizado na confeco do filme fino difere do polmero utilizado na camada suporte e geralmente esta camada porosa de suporte tambm uma membrana assimtrica. Fabricantes de membranas compostas, denominadas de thin film composite (TFC) adicionam grupos qumicos funcionais como os sulfnicos e carboxlicos para melhorar a rejeio de solutos e ao mesmo tempo obter membranas mais finas e que exigem menores presses (Bellona et al., 2004). 3.3.3 - Tipos de processos de tratamento com membranas Existem diversos tipos de processos de separao por membranas que so classificados, principalmente, a partir dos seguintes parmetros: fora-motriz aplicada e mecanismos de separao. Segundo AWWA (1998), as foras que geralmente so aplicadas membrana para impulsionar a separao de materiais so: presso, potencial eltrico, temperatura, gradiente de concentrao. Dentre elas, a presso e o potencial eltrico so as comumente usadas para o tratamento na rea de saneamento e, portanto, de interesse para este trabalho. Os outros processos podem ser aplicados para separao de gases, lquido/ vapor, entre outros, e destacam-se em outros campos de atuao (por exemplo, medicina).

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As operaes que utilizam a diferena de presso como fora-motriz so: osmose reversa (OR), nanofiltrao (NF), ultrafiltrao (UF) e microfiltrao (MF). A Figura 3.4 apresenta um esquema do funcionamento desses processos de separao por membrana. Nesses processos as membranas so permeveis ao solvente (gua), mas no s substncias a serem removidas, separando, assim, a gua de alimentao (gua a ser tratada) em dois fluxos. O fluxo do permeado (OR, NF, UF) ou filtrado (MF) passa atravs da membrana e a corrente do concentrado (ou retido) contm as substncias removidas da gua de alimentao depois de serem rejeitadas pela membrana. Dentre os processos que utilizam o potencial eltrico como fora-motriz, destaca-se, no saneamento, a eletrodilise. Nesse processo o soluto que atravessa a membrana.

Figura 3.4 - Esquema do funcionamento dos processos de separao por membrana (Mierzwa, 2006) Segundo Aptel e Buckley (1996), as diversas membranas funcionam por, basicamente, trs tipos de mecanismos: separao baseada nas diferenas de tamanho das partculas, no qual a membrana exerce um efeito de peneira, separao baseada nas diferenas de solubilidade, difuso e adsoro dos materiais pela membrana (mecanismo de difuso), separao baseada nas diferenas de cargas eltricas (efeito eletroqumico), como ocorre na eletrodilise. No entanto, esses mecanismos ainda no so completamente entendidos. Ainda segundo Aptel e Buckley (1996), a classificao pelos mecanismos de separao induz as trs principais classes de estruturas de membranas: porosas (efeito de peneira), no-porosas ou densas (mecanismo de difuso, principalmente), que o caso da osmose reversa e nanofiltrao, e membranas eletricamente carregadas, tambm chamadas de membranas de troca inica. As membranas de troca inica so tipos especiais de membranas no porosas.

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3.3.4 - Utilizao dos processos de membrana no saneamento. A escala geomtrica dos contaminantes removidos nos processos de tratamento de gua, e esgoto, segundo Schneider e Tsutiya (2001), varia de material macroscpico, material particulado microscpico (bactrias, algas, vrus, material coloidal), molculas orgnicas (pesticidas, componentes de combustveis, solventes, etc) e ons (metais pesados, dureza, salinidade excessiva). A Figura 3.5 apresenta os tipos de membranas utilizveis no saneamento em termos do tamanho do contaminante considerado.

(a) D= Dalton, medida de peso molecular e um D aproximadamente 1 g/mol.

Figura 3.5 - Dimenses dos principais componentes microscpicos e moleculares presentes em guas naturais e tipos de membranas utilizveis para a sua separao. (Schneider e Tsutiya, 2001 modificado). Da Figura 3.5, observa-se que a grande vantagem de processos de membranas sobre sistemas convencionais de tratamento a caracterstica de barreira absoluta, sendo eficientes na separao de partculas slidas de pequenas dimenses e compostos orgnicos

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e inorgnicos dissolvidos, os quais so removidos de forma limitada pelo tratamento convencional. Alm disso, possuem as seguintes vantagens com relao ao tratamento convencional: unidades mais compactas e mais fceis de automatizar, produo de gua tratada de alta qualidade capaz de atender aos parmetros mais restritivos de legislao de gua para abastecimento e, em geral, no necessria a utilizao de produtos qumicos para o tratamento (Kawamura, 2000). Uma outra vantagem a simplicidade de operao e ampliao de escala. Os sistemas so modulares e os dados para o dimensionamento de uma planta podem ser obtidos a partir de escala piloto que operam com mdulos de membranas com as mesmas caractersticas dos mdulos industriais (Nbrega et al., 2005). No entanto, algumas limitaes devem ser salientadas. Dependendo das caractersticas da gua bruta, algumas membranas necessitam de pr-tratamento, sofrem problemas de depsitos de solutos na membrana, entupimento de poros e de compactao, que diminuem a eficincia da membrana e podem inutiliz-las. Alm disso, possuem custos elevados (principalmente no Brasil, que no produz membranas em escala comercial) e altos consumos de energia. Sistemas de pr-tratamento podem melhorar o desempenho das membranas e proteg-las, principalmente nos processos de nanofiltrao, osmose reversa e eletrodilise, visto que estes so utilizados para a separao de contaminantes solveis (Mierzwa, 2006). A seleo da membrana a ser utilizada depende, principalmente, do grau de purificao que se deseja alcanar e da qualidade da gua bruta. Na Tabela 3.4 esto resumidas as principais caractersticas dos processos mais comuns de tratamento com membranas, utilizados no saneamento.

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Tabela 3.4 - Caractersticas dos principais processos de membranas utilizados no tratamento de gua e esgoto (Nbrega et al., 2005, Kawamura, 2000, Schneider e Tsutiya, 2001 e AWWA, 1998, Weber, 1972).

Processo

Presso (kPa)

Poros (m)

Materiais retidos

Osmose Reversa

ons, praticamente toda a matria orgnica, compostos 1500_______8000 < 0,001 inorgnicos (nitrato, nitrito, fosfato, fluoridos, etc), produtos qumicos sintticos. Dureza, compostos orgnicos (trialometanos e outros

Nanofiltrao

500_______2500

0,001______0,002

subprodutos da desinfeco; pesticidas, cor, etc), ons divalentes e trivalentes. Material removido na MF, colides, totalidade de

Ultrafiltrao

100_______700

0,001______0,1

vrus, compostos orgnicos de alto peso molecular (em geral, acima de 500g/mol) Protozorios, bactrias, alguns vrus, turbidez, slidos suspensos.

Microfiltrao

50_______200

0,1_______5

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3.3.5 - Operao de sistemas de membranas O mdulo o elemento bsico de um sistema de membrana e congrega todas as estruturas necessrias para viabilizar a operao com membranas (membranas, estruturas de suporte da presso ou corrente eltrica, canais de alimentao e remoo do permeado e do concentrado). Os mdulos devem ser projetados de forma a maximizar a superfcie da membrana por volume de mdulo, limitar o acmulo de material retido pela membrana e evitar a contaminao do permeado com material do concentrado. Alm disso, os mdulos devem ser de simples manuseio, permitir limpeza eficiente da membrana e de baixo volume morto. O lquido pode ser bombeado atravs do mdulo em direo paralela membrana, operao em fluxo tangencial (cross-flow), ou perpendicular, operao em fluxo frontal ou convencional (dead-ed), conforme representado na Figura 3.6.

Figura 3.6 Operao em fluxos frontal e tangencial (Schneider e Tsutiya, 2001) Na operao convencional uma soluo pressionada contra a membrana. O solvente passa atravs da membrana e os solutos ficam retidos, acumulando-se prximo a superfcie da membrana, no fenmeno chamado polarizao da concentrao. Trata-se de um modo de operao fundamentalmente transiente, uma vez que a polarizao aumenta sempre e o fluxo de permeado decresce de modo contnuo com o tempo. Na operao tangencial, possvel minimizar esse efeito da polarizao da concentrao, em particular alterando a velocidade de escoamento da corrente de alimentao. Nesse caso, o que se observa uma queda rpida e inicial no fluxo de permeado, devido polarizao da concentrao, e uma vez mantida a velocidade de escoamento, o fluxo tende a no se alterar mais com o tempo. (Nobrega. et al., 2005).

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Os principais tipos de mdulos so: tubulares, espirais, com fibras ocas, com placas e com discos rotatrios. Dentre eles, os comumente utilizados para o tratamento de gua so os trs primeiros (Aptel & Buckley, 1996). Diversos autores discutem caractersticas especficas de cada mdulo (Aptel & Buckley, 1996; Baker, 2004; Schneider e Tsutiya, 2001; Wagner, 2001). As principais caractersticas a serem consideradas no projeto do mdulo da membrana so: controle das condies de escoamento para minimizar efeitos da polarizao da concentrao, facilidade de limpeza do mdulo, uso de materiais de baixo custo quando possvel, maior relao entre a rea de membrana e volume do mdulo. Segundo Nobrega et al. (2005), os sistemas com membranas podem ser operados de modo contnuo, semicontnuo e descontnuo. As operaes em modo descontnuo fornecem informaes rpidas, mas o regime de transferncia de massa transiente. A clula de permeao, contendo a membrana, alimentada com um volume definido, como ocorre na operao com fluxo frontal. Na operao em modo semicontnuo, utilizada neste trabalho de mestrado, um determinado volume de soluo a ser processado escoa no interior de um mdulo de membrana dando origem ao concentrado, que retorna ao tanque de alimentao e ao permeado, que recolhido. Com o passar do tempo, a soluo de alimentao vai se concentrando. Assim, podem ser obtidas curvas de fluxos de permeado e de rejeio segundo a concentrao da espcie retida na membrana. Essas informaes so fundamentais para o dimensionamento de uma unidade industrial. Industrialmente, os sistemas so modulares e operados de maneira contnua. O nmero de mdulos e seus arranjos podem variar. O rendimento (recuperao do sistema) dos mdulos durante a operao do sistema, dado em porcentagem, o quociente entre a vazo do permeado e a vazo de alimentao (AWWA, 1998). Segundo Mierzwa (2006), a taxa de recuperao de gua da ordem de 10%, ou seja, apenas um dcimo da vazo alimentada convertida em permeado, por isso necessrio estudar arranjos que permitam uma maior recuperao, o que feito colocando-se membranas em srie ou trabalhando-se com recirculao do concentrado. Mierzwa exemplifica, na Figura 3.7, alguns arranjos de membranas enroladas em espiral.

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Figura 3.7 - Arranjos para os vasos de presso e taxas de recuperao de gua (Mierzwa, 2006). A capacidade de produo das membranas varia com o tipo de processo adotado, osmose reversa, nanofiltrao, ultrafiltrao ou microfiltrao. Na Tabela 3.5 so apresentados valores para as taxas de fluxos dos diferentes processos. Tabela 3.5 - Valores tpicos para taxa de fluxo em membranas (Wagner, 2001; Mierzwa, 2006)
Processo Osmose reversa Nanofiltrao Ultrafiltrao Microfiltrao (a) - Mierzwa (2006). Taxa de fluxo (L/m2/h) 15 a 25 20 a 30 25 a 50 No h uma regra geral, podem ser considerados valores entre 50 e 70a

Segundo AWWA (1998), as taxas de fluxos para osmose reversa e nanofiltrao especificados pelos fabricantes, a partir de ensaios padres em laboratrio, variam de 34 a 51 L/m2/h. No entanto, segundo esse autor raramente se atinge essas taxas durante a operao do sistema por causa dos fenmenos de polarizao da concentrao e problemas 39

como depsitos de solutos nas membranas e obstruo de poros. Taxas de fluxos tpicamente utilizadas para o tratamento de guas superficiais esto entre 14 a 20 L/m2/h. Alguns fatores so determinantes no fluxo de gua que passa atravs das membranas e, portanto, no seu rendimento. Quanto maior o volume de gua que passa atravs da membrana por unidade de tempo, menor rea de membrana ser necessria para atender vazo de projeto e mais econmico ser o sistema. O fluxo, como pode ser visto na Equao 3.1, condicionado, de forma geral, pela presso e pela resistncia da membrana separao, que por sua vez influenciada por caractersticas estruturais da membrana (porosidade, espessura da membrana, etc) e ao longo do tempo por fenmenos operacionais. p .Rm Equao (3.1)

J=

Onde: o fluxo (J) diretamente proporcional presso atravs da membrana (p), e inversamente proporcional viscosidade dinmica da gua () e resistncia da membrana separao (Rm, em m-1).

De uma forma geral, principalmente para as membranas porosas de MF e UF, o fluxo de gua inversamente proporcional espessura da membrana e tortuosidade de seus poros e diretamente proporcional sua porosidade. Essa descoberta foi um dos fatores que impulsionaram o desenvolvimento da tecnologia de membranas compostas, onde a membrana filtrante, que determina o fluxo de gua, reduzida a um filme fino sobre estrutura mais porosa e com boa resistncia. Os maiores fluxos so obtidos em membranas com grande quantidade de poros por unidade de rea (porosidade alta). O fluxo de gua , tambm, proporcional ao dimetro mdio dos poros. Cabe salientar que o dimetro efetivo do poro de uma membrana no igual ao dimetro geomtrico. Fatores eletrostticos e as interaes entre as molculas de gua com a superfcie da membrana podem reduzir significativamente o dimetro de poros. A Equao 3.1 descreve o fluxo para uma membrana limpa. Nos processos reais existem equaes que incluem fatores de resistncia associados aos mecanismos de reduo de

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eficincia da membrana. Cabe salientar, que o fator temporal tambm deve ser considerado j que a compactao da membrana ao longo do tempo afeta sua resistncia. Para cada tipo de membrana utilizada uma formulao especfica devido a maior ou menor influncia desses fatores. Existem diversos fatores que influenciam quantitativamente no fluxo de permeado e diminuem a eficincia da membrana, os principais so: temperatura, polarizao da concentrao, caractersticas da gua bruta e biofilme. O fluxo de permeado tende a aumentar com o decrscimo de viscosidade da gua permeada que afeta pela temperatura. Assim, de forma geral, taxas de fluxos maiores podem ser atingidas a temperaturas mais elevadas. Como referencial usualmente adota-se a temperatura de 20C (Wiesner e Aptel, 1996). A temperatura tambm pode influenciar nas caractersticas do material formador da membrana e, consequentemente, na sua vida til. O fenmeno da polarizao da concentrao um dos principais fatores de reduo de fluxo atravs da membrana. Esse fenmeno refere-se ao aumento da concentrao de solutos rejeitados pela membrana na camada-limite para valores acima dos que ocorrem na zona de mistura total do canal de alimentao, estabelecendo, assim, um gradiente de concentrao da superfcie da membrana em direo ao canal do concentrado. Esse efeito pode contribuir para formao de tortas de filtro, camadas de gel, sais precipitados ou de biofilmes microbianos. A qualidade da gua bruta tambm pode afetar o desempenho do tratamento com membranas. Dependendo da caracterstica da gua pode haver problemas de fouling, incrustaes, etc. Segundo Nbrega et al. (2005), alguns dos fenmenos que constituem o fouling so: entupimento de poros por molculas e partculas em suspenso, adsoro na membrana de espcies presentes e depsitos de solutos na superfcie da membrana. Esses fenmenos podem ser avaliados em testes especficos de determinao de ndices de fouling. O ndice mais utilizado, segundo AWWA (1998), o SDI (silt density index). O ndice determinado pela avaliao da variao do fluxo de permeado por meio de um sistema com filtros de 0,45m sob uma presso de 207kPa, conforme descrito na norma ASTM D4189. A determinao dos ndices de fouling essencial em todos os projetos

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de membrana. guas com ndices excessivos de fouling podem causar bloqueio irreversvel de mdulos e devem ser submetidas a algum tipo de pr-tratamento. Em processos de osmose reversa e nanofiltrao, por exemplo, deve-se evitar que a gua de alimentao possua altas concentraes de matria em suspenso, para previnir problemas de depsito na superfcie da membrana e bloqueio de poros. A precipitao de sais na superfcie dessas membranas, principalmente, carbonatos de clcio e sulfatos tambm deve ser considerada para se evitar problemas de incrustaes. O acmulo de material oriundo da gua de alimentao que fica retido na superfcie da membrana gera as chamadas tortas de filtro. Sua formao iniciada com partculas de dimetros maiores que os dos poros da membrana. Essa primeira camada passa a atuar como uma membrana adicional. No entanto, a torta cresce tambm pela incorporao de colides, partculas e molculas de tamanho menor do que os poros que so retidos por uma variedade de processos (adsoro, reteno fsica em canais tortuosos, etc). A resistncia causada por esse mecanismo pode agravar problemas de obstruo de membranas. O termo biofilme refere-se a todas as situaes onde a formao de um filme microbiano interfere com processos tecnolgicos. Esse problema um dos principais fatores de encarecimento do processo devido reduo do fluxo de operao, necessidade de implementao de pr-tratamento em nanofiltrao e osmose reversa, custo de limpeza qumica, reduo da vida til das membranas, etc. O biofilme difere do acmulo passivo de outros materiais na superfcie da membrana pela natureza dinmica do biofilme microbiano. Os biofilmes alm de poderem entupir os canais de alimentao podem degradar alguns materiais da membrana e contaminar o permeado. A formao de biofilmes pode ser detectada de forma direta por microscopia ou indireta pela anlise de material removido da superfcie da membrana. Essas tcnicas ficam restritas s situaes de comprometimento irreversvel da membrana. Durante a operao, a avaliao de biofilmes pode ser detectada indiretamente por contagem de microrganismos na entrada e sada dos mdulos. 42

O controle do biofilme pode ser por meio de adoo de pr-tratamentos, seleo de membranas apropriadas, otimizao da limpeza qumica, etc. 3.3.6 - Fatores que afetam a rejeio de solutos orgnicos no processo de nanofiltrao A eficcia dos processos de separao geralmente medida pelo parmetro taxa de rejeio (R), tambm chamado de remoo ou reteno, que relaciona a concentrao do material no permeado (Cp) e sua concentrao na alimentao (Ca), conforme demonstrado na Equao 3.2,

Cp R% = 100. 1- ( ) Ca

Equao (3.2)

Conforme apresentado no item, 3.3.3, a rejeio pelas membranas engloba mecanismos de excluso fsica de partculas, difuso e adsoro nas membranas. Alm disso, no caso do composto ser carregado, as interaes eletrostticas, tambm influenciam na remoo. A forma com que os parmetros e caractersticas da membrana e soluto influenciam nos mecanismos de remoo ainda controversa e pouco entendida. No entanto, a compreenso dessas influncias fundamental para garantir o desempenho nos tratamentos por membrana, dando subsdios para a escolha da membrana mais apropriada para a qualidade da gua que se quer tratar. A Tabela 3.6 apresenta algumas caractersticas da membrana e do contaminante que so importantes para avaliar o processo de remoo e em seguida, so discutidos alguns estudos que avaliaram a influncia dessas caractersticas. Cabe salientar que, alm das caractersticas intrnsicas s membranas e solutos, fatores externos como as caractersticas da gua de alimentao (pH, temperatura, dureza, presena de matria orgnica e outros interferentes, etc) e fatores operacionais, como a presso, velocidade tangencial e concentrao do contaminate na alimentao, tambm influenciam o processo de remoo.

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Tabela 3.6 - Parmetros mais comumente utilizados para auxiliar no entendimento da remoo de contaminantes orgnicos por nanofiltrao.
parmetro ngulo de contato MEMBRANA importncia Usado para representar hidrofobicidade (a) da membrana. ngulo igual a zero a membrana totalmente hidroflica. Em geral membranas com ngulos de contato entre 10 e 30 so consideradas hidroflicas e entre 70 e 90, hidrofbicas. parmetro log Kow Coeficiente de partio octanol-gua (razo da concentrao de um composto nas duas fases imiscveis: octanol e gua) CONTAMINANTE ORGNICO importncia usado para representar a hidrofobicidade(a). Kow>2 so considerados hidrofbicos (Kimura et al. (2003a). No clculo do log kow (ou log P) considerado apenas a frao no ionizvel do composto. Para medidas de log kow de solutos ionizveis, o pH da fase aquosa ajustado para que a frao no ionizvel seja predominante. O clculo do coeficiente de distribuio (log D) inclui a somatria de todas as formas do composto (ionizvel + noionizvel) e, portanto especfico para cada pH. As interaes hidrofbicas entre soluto e membrana podem interferir na adsoro e na difuso do soluto atravs da membrana. Importantes, principalmente, quando o processo de remoo dominado pelo peneiramento. Alguns estudos encontram melhores relaes entre a membrana e o peso molecular e outros com outras caractersitcas da membrana, como comprimento e largura da molcula. A habilidade da molcula em perder prtons pode ser medida pelo pKa. Quanto menor o pKa, mais forte o cido (entende-se como cido uma espcie que doa prton) e maior sua tendncia em liberar prton (Bruice, 2006). Quando o pH da soluo for igual ao pKa da substncia que passa por dissociao, a concentrao da substncia na forma cida e na bsica sero iguais. A ionizao de um composto altera seu comportamento fsico e propriedades como a solubilidade. Filtraes em pHs maiores que o pKa da substncia podem causar sua dissociao e aumento de carga, influenciando nas interaes eletrostticas entre membrana e soluto e, consequentemente, na remoo.

Peso molecular de corte (MWCO) peso molecular de um soluto que foi rejeitado em 90% Tamanho do poro e morfologia da membrana

Usada pelos fabricantes para quantificar a rejeio da membrana. No deve ser considerada como determinante na remoo e deve ser analisada em conjunto com outras caractersticas, j que alguns estudos mostram que molculas com peso molecular maior que o MWCO podem ser fracamente removidas. Alguns estudos obtm melhores correlaes de remoo pela relao entre o tamanho do soluto e tamanho do poro da membrana ao invs de peso molecular de corte. O tamanho efetivo do poro pode ser alterado por possveis obstrues do mesmo de acordo com as caractersticas da gua de alimentao. Algumas vezes a alterao de pH da soluo tambm influencia no tamanho efetivo do poro da membrana.

Peso molecular e geometria da molcula

pKa logaritmo da constante de dissociao cida

Rejeio ao sal porcentagem de rejeio de um sal especfico Potencial zeta

Juntamente com o WMCO, indicado pelo fabricante para quantificar a remoo. Da mesma forma que para o MWCO muitos estudos no confirmam a relao entre alta rejeio a sal com alta remoo dos contaminates. Reflete a carga da superfcie da membrana que pode influenciar na remoo, por causa das interaes eletrostticas desta com o contaminante. Geralmente influenciado pelo pH (Al-Amoudi et al., 2007)

(a) hidrofobia uma propriedade da molcula em repelir a gua. Geralmente hidrfobos no so eletricamente carregados (apolares) e no tem habilidade para formar pontes de hidrognio. Assim, a gua repele os hidrfobos para fazer pontes de hidrognio com ela mesma. De uma forma geral, compostos hidrofbicos tendem a ser apolares e hidroflicos polares. (Wikipedia.org).

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Segundo Schafer et al. (2003) o mecanismo de adsoro no est muito claro, mas pode refletir uma interao hidrofbica com a superfcie orgnica da membrana ou mais especificamente por interaes como a ponte de hidrognio. Angeson e Urase (2007) tambm acreditam que as interaes hidrofbicas entre o soluto e a membrana e as pontes de hidrognio do soluto com os grupos funcionais da membrana podem influenciar no processo de remoo de contaminantes. Segundo Nghiem et al. (2001) no existe uma clara correlao entre adsoro e remoo. O aumento da adsoro no necessariamente significa um aumento da rejeio. A influncia da adsoro na rejeio dependente da membrana e deve ser investigado para cada tipo de membrana. No entanto, Kiso et al. (2001 apud Bellona et al., 2004) reportaram que a rejeio da maioria das molculas hidrofbicas por membranas de acetato de celulose aumenta com o aumento da afinidade do soluto pela membrana (expressado pelo Kow). Segundo Nghiem e Schafer (2006) os compostos que possuem grupos hidroxila ou carbonila so capazes de realizar pontes de hidrognio com membranas, e um Kow alto significa que so favorveis a adsorverem em materiais hidrofbicos. No entanto, os autores observaram que para uma das membranas avaliadas em seu estudo houve uma relao fraca entre a massa de perturbadores endcrinos adsorvidos e o Log Kow. Isso pode indicar que a adsoro conduzida por interaes hidrofbicas somente at certo ponto. Outros parmetros do soluto, como momento de dipolo e constante dieltrica, tambm podem influenciar a adsoro, mas so parmetros mais difceis de serem obtidas. A adsoro tambm depende de caractersticas da membrana como a natureza do material polimrico e sua hidrofobicidade. Alguns estudos indicam que a capacidade adsortiva da membrana se torna saturada com o tempo, visto que a soluo continuamente filtrada atravs da membrana e o mecanismo de peneiramento passa a ter um papel predominante na remoo em longo perodo (Nghiem et al., 2004). Muitos estudos que examinaram adsoro de compostos hidrofbicos em membranas de nanofiltrao e osmose reversa mostraram que a adsoro de contaminantes no considerada um mecanismo de remoo de longo-perodo (Nghiem
et al., 2002, 2003; Kimura et al., 2003a,b). Assim, segundo Kimura et al. (2003a), no

razovel contar com a capacidade de adsoro das membranas de nanofiltrao no clculo 45

da remoo, pois essa capacidade finita. Uma forma de analisar e eliminar a influncia da adsoro na contabilizao da remoo pela coleta de amostras do concentrado e do permeado nas condies de equilbrio das concentraes (steady-state). Nghiem et al. (2003) lembra que a massa adsorvida nas membranas pode ser liberada em certas ocasies, fazendo da adsoro de compostos estrognicos um risco para o tratamento. Kimura et al. (2003a) verificaram que a adsoro de compostos hidrofbicos em tratamento por nanofiltrao/Osmose reversa em operao com fluxo tangencial foi significativa para compostos neutros e as condies de operao, como o fluxo de permeado tem significativo efeito no grau de adsoro do composto. Em estudo realizado por Yoon et al. (2007), a remoo de diversos perturbadores endcrinos, em fluxo frontal com membrana composta de poliamida aromtica, aumentou com o aumento do valor do log Kow (hidrofobicidade). Isso indicou que a remoo de membranas hidrofbicas foi influenciada pela adsoro. Por outro lado, em estudo realizado por Moons e Bruggen (2006), o composto mais hidroflico, a salicina, apresentou maior porcentagem de remoo do que os compostos hidrofbicos, como estrona e -estradiol. Alm disso, segundo os autores, a influncia da hidrofobicidade maior para compostos com menores pesos moleculares que o peso molecular de corte da membrana. Braeken et al. (2005) tambm verificaram que solutos hidrofbicos em geral exibem menores rejeies se comparados com solutos hidroflicos de mesmo tamanho principalmente se o peso molecular do soluto for menor que o MWCO da membrana. Verliefde et al. (2007) verrificaram que o valor de remoo decai com o aumento da hidrofobicidade para compostos neutros e com carga positiva. Isso porque os solutos podem adsorver e ento permear atravs da membrana. Para solutos de carga negativa no houve uma clara relao entre hidrofobicidade e rejeio, as repulses eletrostticas impedem o soluto de se aproximar da membrana, inibindo as interaes hidrofbicas entre a membrana e o soluto. Essas interaes tambm aumentam quanto mais hidrofbica for a membrana. Os autores tambm verificaram que a remoo de compostos positivos aumentou com o aumento da concentrao de alimentao por causa da proteo contra o

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efeito de cargas, levando a menores foras de atrao. O efeito parece ser menos pronunciado nos compostos negativos. Para compostos no carregados e hidroflicos, o impedimento fsico parece ser o mecanismo que mais predomina. Solutos hidroflicos de cargas negativas podem tambm ser removidos por repulso eletrosttica das superfcies da membrana carregadas negativamente (Bellona et al., 2004). Interaes eletrostticas entre a carga do soluto e a membrana porosa tm sido reportadas como importante mecanismo de remoo. A maioria das membranas de filme fino compostas tem suas superfcies carregadas negativamente para minimizar a adsoro de substncias que obstruem a membrana (carregadas negativamente) presentes na gua de alimentao e para aumentar a rejeio de sais dissolvidos. A carga negativa da superfcie da membrana usualmente causada por grupos de sulfonas e/ou cidos carboxlicos que so desprotonados em pH neutro (Bellona et al., 2004). Estudos tm mostrado que o pH tem efeito na carga da membrana devido dissociao de grupos funcionais. Nos estudos de Teixeira et al. (2005) e Al-Amoudi et al. (2007) o potencial zeta de diversas membranas compostas se tornou mais negativo com o aumento do pH. O impacto do pH na carga da superfcie da membrana pode tambm influenciar na rejeio e fluxo do permeado. Teixeira et al. (2005) verificaram que o mximo fluxo de permeado e mnima rejeio foram obtidas para a membrana no carregada. Com o aumento do pH e, conseqente aumento da carga negativa da membrana, no entanto, o fluxo decaiu e a rejeio aumentou. O estudo desses autores, no entanto, foi para avaliao do tratamento de gua com dureza elevada e as espcies removidas incluam os ons de clcio, magnsio e tambm ons monovalentes, como de potssio e cloreto. Segundo Bellona et al. (2004) a literatura mostra que o efeito da carga da membrana na rejeio mais estudado para compostos inorgnicos do que para compostos orgnicos. Manttari et al. (2006) estudaram, alm da rejeio de compostos inorgnicos (sais monovalentes), a rejeio de um composto orgnico hidroflico (glucose) por diversas membranas, em sua maioria de poliamida sobre suporte de polissulfona. Esses autores verificaram que, para algumas membranas, o aumento do pH aumentou o fluxo de permeado e a rejeio da glucose caiu. Para outras membranas a permeabilidade manteve-se estvel numa faixa de valor de pH entre 2 e 11. Esses autores concluram que se a membrana possui grupos dissociveis em 47

sua superfcie, ento a membrana pode tornar-se mais aberta em pHs elevados. Esse fenmeno pode ser resultado do aumento do tamanho do poro causado pela repulso eletrosttica entre grupo funcional cido dentro da membrana. Kimura et al. (2003a) verificaram que a carga das molculas afeta a rejeio das membranas. Avaliando um contaminate neutro e um carregado negativamente com pesos moleculares semelhantes, os autores observaram que rejeies maiores foram obtidas no caso do composto negativamente carregado por causa da repulso eletrosttica entre a molcula e a membrana. Segundo Manttari e Nystrom (2006), compostos capazes de dissociarem-se foram melhores retidos quando o valor do pH da soluo aumentou. Nghiem et al. (2006) verificaram a influncia das interaes eletrostticas na remoo de frmacos por nanofiltrao. Maiores remoes foram obtidas em maiores pHs, exceto para uma substncia que se manteve neutra em toda faixa de pH e, portanto, teve sua remoo constante. A transformao da carga neutra para negativa quando o valor de pH foi elevado acima dos seus valores de pKas, fez com que a repulso eletrosttica entre eles e a membrana favorecesse a remoo. Alem disso, no valor de pH mais elevado, a adsoro tendeu a diminuir. Para frmacos de cargas positivas, Verliefde et al. (2007), verificaram que a fora atrativa entre a superfcie da membrana negativa e os frmacos causa um aumento da concentrao na superfcie da membrana, levando a menores rejeies. A alta afinidade entre a carga positiva e a membrana permite que os solutos se aproximem da membrana mais facilmente e por isso a permeao facilitada. Os compostos negativos apresentaram maiores remoes e os neutros, remoes intermedirias. Para compostos neutros foi verificado um aumento da rejeio com aumento do peso molecular, enquanto que para os compostos carregados no houve uma clara relao entre o peso molecular e a rejeio porque nesse caso os efeitos da carga predominaram. Para os compostos neutros a rejeio principalmente determinada por peneiramento e efeitos hidrofbicos. A quantificao do peso molecular, geometria do soluto, juntamente com o tamanho do poro da membrana e o grau de rejeio a sais tambm so importantes. No entanto, estudos verificaram relaes distintas desses parmetros com a rejeio.

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Alguns autores verificaram que o tamanho molecular foi melhor indicador do que o peso molecular quanto ao potencial de um composto ser removido pelos processos de separao por membrana. Segundo Agenson e Urase (2007), o peso molecular convencional no leva em considerao a forma e os grupos funcionais das molculas, e sempre deficiente na explicao da rejeio do soluto. O tamanho molecular funcionou melhor para a predio da rejeio dos compostos estudados. Nessa linha, Berger et al (1997 apud Bellona et al., 2004) determinaram que a estrutura molecular, como o nmero de grupos metila do composto, pode ser importante parmetro na predio de rejeio de molculas no carregadas. Molculas no carregadas com muitos grupos metila tiveram mais altas rejeies que a com menores nmeros desse grupo. A caracterstica de rejeio de uma membrana de nanofiltrao usualmente expressa pelo fabricante por meio do peso molecular de corte (MWCO). No entanto, a variao nas caractersticas do soluto, solvente e parmetros da operao dificultam a comparao entre os fabricantes. Van der Bruggen et al (1998 e 1999 apud Bellona et al., 2004) demonstraram que o MWCO de uma membrana de nanofiltrao foi pouco relacionado com a rejeio dos compostos estudados. Outro parmetro caracterstico da membrana, o grau de rejeio a sais pode ser um parmetro para auxiliar na estimativa de remoo de alguns compostos. Tanto o MWCO quanto o grau de rejeio a sais devem ser considerados na seleo da membrana porque membranas com mesmo MWCO podem ter graus de rejeio a sais bem diferentes. Segundo Agenson et al. (2003), as membranas com rejeio a sal mais alta retiveram mais os contaminates do que as com baixa rejeio a sal, dentre 36 contaminantes orgnicos estudados. Mas em alguns casos a rejeio no foi to alta quanto porcentagem de rejeio ao sal. Schafer et al. (2003) tambm encontraram uma pior remoo de estrona para membranas com menores rejeies a sdio. No entanto, esses autores encontraram, tambm, remoes altas para membranas com rejeies a ons no to altas. Em Kimura et
al. (2004) uma membrana de acetato de celulose com rejeio mais alta a sal que outra

membrana de poliamida apresentou remoes piores de -estradiol e outros compostos. Porosidade outro parmetro usado nos estudos prvios de estimativa de separao de compostos orgnicos. expressa como densidade de poros ou nmero efetivo de poros na 49

superfcie da membrana. Kosutic et al. (2000 apud Bellona et al., 2004) estudaram a porosidade de algumas membranas de osmose reversa e nanofiltrao de poliamida composta. Os autores concluram que a estrutura porosa da membrana foi dominante na determinao do desempenho da membrana e que a rejeio do soluto poderia ser explicada por parmetros de porosidade. O nmero efetivo de poros na fina camada superficial de membranas de osmose reversa e nanofiltrao aumentam com o aumento da presso. Algumas membranas foram mais sensveis troca de presses do que outras. Avanos recentes na microscopia, com microscpios eletrnicos e de fora atmica podem prover diretamente a caracterizao do tamanho do poro com anlise de imagens. Quanto aos fatores externos, a composio da gua de alimentao pode ter um efeito significativo na adsoro e rejeio. Esse assunto complexo e envolve os aspectos de depsitos de material na superfcie da membrana, entupimento de poros, concentrao dos compostos alvos, competio com outros compostos presentes na gua, entre outros, que so especficos de cada gua bruta. Alguns desses aspectos sero abordados no item 3.4, quando se considera a remoo dos perturbadores endcrinos por meio de processos de membranas. Bellona et al. (2004) fizeram uma ampla reviso dos fatores que influenciam na rejeio e propuseram um diagrama (Figura 3.8) para ilustrar a variedade de caractersticas fsicoqumicas de solutos e membranas importantes na definio da rejeio por membranas de alta presso (nanofiltrao e osmose reversa). De acordo com o diagrama, se as caractersticas fsico-qumicas do soluto e membrana so conhecidas os fatores que regem a rejeio poderiam ser predeterminados um grau de rejeio baixo, moderado ou alto de acordo com os parmetros.

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Legenda: PM = peso molecular LM = largura da molcula


pH <pKa

C o m p o sto o rg n ico PM <M W CO pH >pKa F ra o d o sso cia d a < 50% > 50%

PM >M W C O pH<pKa Log Kow >2 pH >pKa Log Kow <2 C o n sid e ra r L a rg u ra d a m o l cu la M e m b ra n a co m ca rg a d e su p e rf. a lta R e je i o a lta d e vid o a re p u ls o e le tro st tica LM < p o ro m em b. R e je i o b a ixa a m o d e ra d a LM > p o ro m em b. R e je i o m o d e ra d a a a lta

Log Kow >2 C o n sid e ra r L a rg u ra d a m o l cu la LM > p o ro m em b. LM < p o ro m em b.

Log Kow<2 C o n sid e ra r L a rg u ra d a m o l cu la LM < p o ro m em b. LM > p o ro m em b.

M e m b ra n a co m ca rg a d e su p e rf. b a ixa

R e je i o in icia l d e vid o a a d so r o d e ca i le n ta m e n te ; re je i o m o d e ra d a , m a s d e p e n d e d a d ifu s o

R e je i o fra ca

R e je i o m o d e ra d a

R e je i o in icia l d e vid o a a d so r o d e ca i; re je i o fra ca , m a s d e p e n d e d a d ifu s o

R e p u ls o e le tro st tica n o t o a lta ; re je i o m o d e ra d a

R e je i o m o d e ra d a a a lta , m a s depende da d ifu s o

R e je i o m u ito a lta , d e vid o a o p e n e ira m e n to e e xclu s o e le tro st tica

Figura 3.8 - Diagrama de rejeio para micropoluentes orgnicos (para membranas de osmose reversa e nanofiltrao) baseado nas propriedades dos solutos (Bellona et al.,2004, modificado)

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3.4 - REMOO DE PERTURBADORES POR PROCESSOS DE TRATAMENTO COM MEMBRANAS

Porcentagens variadas de remoo de perturbadores endcrinos em ETEs tm sido encontradas, no entanto, os nveis de eficincia ainda so considerados insuficientes para evitar que essas substncias causem impactos negativos em peixes. Nesse contexto, processos de tratamento com membrana, principalmente osmose reversa e nanofiltrao, tem sido objeto de pesquisas com resultados favorveis. A Tabela 3.7 apresenta as eficincias de remoo de contaminantes por processos de separao por membranas e as caractersticas de diversos trabalhos encontrados na literatura. Schafer et al. (2003), por exemplo, encontraram valores de remoo de estrona por membrana de nanofiltrao e osmose reversa entre 95 e 99%. A remoo de estrona por um tipo de membrana de poliamida com suporte de polissulfona (TFC-S) foi reportada por Nghiem et al. (2002) como sendo entre 90% a 100%. Excelentes remoes podem ocorrer em determinadas condies, mas diversos fatores, ainda pouco entendidos, podem influenciar no desempenho dos tratamentos por membranas. As caractersticas da membrana, tais como: material da membrana; taxas de fluxo; resistncia obstruo de poros, adsoro de espcies e depsitos de solutos na sua superfcie; bem como a qualidade da gua de alimentao, presso de operao, entre outros, podem interferir na eficincia do tratamento. Kimura et al. (2004) verificaram maiores eficincia de remoo para 11 compostos qumicos, entre eles o -estradiol, nas membranas de osmose reversa de poliamida apesar de a remoo no ter sido completa (57 a 91%), do que nas membranas de acetato de celulose. Weber et al. (2004) verificaram que a remoo de esterides pela membrana de nanofiltrao de poliamida (LFC1) foi maior que 99% enquanto que a remoo por uma membrana de polietersulfona hidrolisada (PES 10) ficou entre 40 e 90%. O ngulo de contato das membranas era praticamente o mesmo e esses autores atriburam as diferenas de remoes diferena de material das membranas que implicaram em tamanhos de poros e permeabilidades diferentes.

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Tabela 3.7 - Eficincia de remoo de perturbadores endcrinos e condies dos estudos exemplos da literatura
Referncia Schafer et al. (2003) Tipo de membrana 8 membranas de nanofiltrao/osmose reversa. Todas de poliamida sobre suporte de polissulfona Osmose reversa: TFC-S-Composta: poliamida sobre suporte de polissulfona X-20 poliamida-ureia composta Nanofiltrao/Osmose reversa: -4 membranas de poliamida sobre suporte de polissulfona e 4 de poliamida-ureia composta Osmose Reversa: XLE-Poliamida SC-3100 acetato de celulose Nanofiltrao: LFC1-Poliamida PES-10-polietersulfona hidrolisada Nanofiltrao composta poliamida aromtica; Ultrafiltrao poliamida sobre polietersulfona 2 membranas de nanofiltrao de poliamida sobre polissulfona 2 membranas de nanofiltrao: Poliamida composta (DL Osmonics) Acetato de celulose (CK-Osmonics) 4 de nanofiltrao composta de poliamida 2 de ultrafiltrao-polissulfona e outra de filme fino de material no indicado 2 de nanofiltrao/osmose reversa de poliamida Contaminante/concentrao inicial Estrona (100 ng/L) gua de estudo Mili-Q+ base eletroltica (NaHCO3+NaCl+CaCl2) Caractersitcas operacionais Fluxo convencional, presso=500kPa e 1000kPa (para se obter valores de fluxos compatveis entre as membranas) Fluxo convencional, presso=500kPa (TFC-S) e 1000kPa (X-20) Eficincia de remoo 95 a 99%, com exceo da membrana XN40 (80%) Cerca de 95% para X-20 cerca de 100% para TFC-S (caiu 10% com pH>10,5) Estrona na gua tipo 1 - de 43% a 90% para poliamidauria e 34 a 97% para as outras (-estradiol cerca de 3% de diferena). 57 a 83% para XLE e 0 a 29% para SC-3100. As remoes mximas foram para o -estradiol >99% para LFC1 e entre 40 e 90% para PES-10

Nghiem et al. (2002)

Estrona (100ng/L)

Mili-Q+ base eletroltica (NaHCO3+NaCl) 1) Mili-Q+ base eletroltica (NaHCO3+NaCl); 2) efluente de trat. secundrio de ETE+ base eletroltica; 3) gua superficial sinttica(matria orgnica natural concentrada)+ base eletroltica contaminante+gua Mili-Q (contaminantes separados em cada gua) hormnio+gua Mili-Q 4 tipos: 1) matria orgnica natural isolada +gua deionizada+contaminante, 2,3 e 4) trs diferentes mananciais que abastecem ETAs pr-filtradas em 0,7m +contaminante Mili-Q+ base eletroltica (NaHCO3+NaCl)+ hormnio (analisados em separado) 1)Mili-Q+ base eletroltica (NaHCO3+NaCl)+ estrona 2) Mili-Q+ base eletroltica +estrona+ mat. org. dissolvida buffer de fosfato +mili-Q+estradiol Mili-Q+composto(analisados separadamente)

Nghiem et al. (2004)

-estradiol e estrona (separadamente)(100ng/L)

Fluxo tangencial, presso=1000kPa, 5horas de ensaio

Kimura et al. (2004) Weber et al. (2004)

11 contaminantes, entre eles o 17-estradiol (100g/L) 8 hormnios, entre eles o 17estradiol (100g/L) 52 compostos. Grupo I- compostos mais polares, menos voltil e menos hidrofbicos, inclusive o estradiol (16 a 94ng/L) grupo II - menos polar, mais voltil e mais hidrofbico (52 a 234 ng/L) estrona e -estradiol (100 ng/L)

Fluxo tangencial, 500kPa, 24 horas de ensaio Separao em reator de membranas, presso=2500kPa Fluxo convencional, presso=724 a 779 kPa para nanofiltrao e 445-504kPa para ultrafiltrao Fluxo convencional, presso=500kPa

Yoon et al. (2006)

44 a 93% para nanofiltrao e <40% para ultrafiltrao Cerca de 55% (pH12) a 93%(pH3) para uma membrana e 87% (pH12) e 100% (pH3) para a outra. 17% (DL) a 8,9%(CK) para gua tipo 1) e 16,7 a 48% (DL) e 10,3 a 22,5% (CK) a depender da mat. org. usada para gua tipo 2) Pouca ou nenhuma rejeio na ultrafiltrao; 70 a >97% na nanofiltrao (estado de equilbrio) 91 a 96% - compostos com carga negativa e 12 a 99% compostos no carregados

Nghiem et al. (2003)

Jin et al. (2007)

estrona (100ng/L)

Fluxo tangencial, ensaio de 24 horas Fluxo tangencial, presso=138kPa e 965kPa para ultrafiltrao e 483kPa e 965kPa para nanofiltrao Fluxo tangencial, presso=551kPa

McCallum (2005) Kimura et al. (2003b)

-estradiol (100g/L)

9 compostos (100g/L)

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No caso do estudo apresentado por Weber et al. (2004) foi avaliada, tambm, a relao de variaes na presso do permeado e alteraes na permeabilidade da membrana. Os resultados preliminares indicaram que presses mais altas podem causar perda na remoo. Similarmente, Nghiem et al. (2004) verificaram que para uma membrana composta de poliamida-uria a remoo de hormnios diminuiu quando se aumentou a presso de operao (remoo caiu 15% quando a presso aumentou de 1000kPa para 2500kPa). O mecanismo de remoo das membranas tem sido alvo de pesquisas. O peso molecular dos solutos orgnicos e a remoo de sal pelas membranas de nanofiltrao e osmose reversa podem ser prognsticos insuficientes da remoo, sendo necessrio a considerao da adsoro pela membrana. A remoo desses compostos por membranas de osmose reversa e nanofiltrao pode ser governada por uma complexa interao qumica entre soluto-membrana. O transporte atravs da membrana pode sempre ser descrito em termos da afinidade do material da membrana e o transporte difusivo dentro da membrana (Wiesner e Aptel, 1996). Nghiem et al. (2002) investigaram a adsoro e remoo de duas membranas de osmose reversa, TFC-S e X-20 de mesmo material, sendo a primeira com maior fluxo na gua pura (portanto, provavelmente poros maiores). Enquanto o processo de adsoro parece ter governado a remoo de estrona pela TFC-S, o mecanismo de peneiramento foi responsvel pela remoo de estrona pela X-20. Isso porque foi especulado que o poro da X-20 provavelmente menor que a molcula de estrona, no favorecendo a difuso de estrona da gua para a membrana. Segundo os autores, parece que a adsoro de trao de contaminantes nas membranas um efeito que ocorre nos estgios iniciais da separao. Schafer et al. (2003) tambm verificaram que o efeito de peneiramento e adsoro em membranas de nanofiltrao e osmose reversa so importantes, sendo que o mecanismo de peneiramento dominante em membranas de poros menores. Esses estudos consideraram apenas o estgio inicial, antes do equilbrio. No entanto, Kimura et al. (2004) atribuiram a rejeio de diversos compostos, inclusive hormnios, ao peso molecular (efeito peneira) no estado de equilbrio de membranas de poliamida. Para membranas de acetato de celulose, a polaridade indicou melhor as tendncias de remoo dos compostos selecionados.

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Yoon et al. (2006) analisaram a remoo por nanofiltrao e ultrafiltrao de 52 perturbadores com diferentes propriedades qumicas e que foram divididos em dois grupos. O Grupo I (compostos mais polares, menos volteis e menos hidrofbicos) teve menor remoo que o grupo II (menos polar, mais voltil e mais hidrofbico), indicando uma remoo governada pela adsoro hidrofbica. No entanto, no estado de equilbrio de operao a excluso por tamanho (efeito peneira) pode ser dominante para a remoo. As membranas de nanofiltrao foram mais eficientes na remoo do que aquelas de ultrafiltrao, implicando que a remoo influenciada pelo poro da membrana. A remoo pela nanofiltrao foi entre 44 e 93%, (exceto para um composto o naproxeno) e a remoo por ultrafiltrao foi, em geral, menor que 40% (exceto triclosan 87%, oxybenzeno 77% e progesterona 56%). A influncia do pH foi analisada por Nghiem et al. (2002). Nesse estudo, a remoo da membrana do tipo TFC-S caiu 10% quando o pH excedeu o valor de pKa (constante de dissociao cida) da estrona, que igual a 10,5. A remoo da membrana X-20 no foi afetada pela mudana de pH. Segundo Nghiem et al. (2003) em fluxo frontal (dead-end) a remoo do estrona, assim como a adsoro, decaem bastante com pH acima do pKa. Os autores explicam que as pontes de hidrognio so responsveis pelo mecanismo de adsoro da estrona pela membrana. Os grupos hidroxila da estrona (e tambm do -estradiol) so os mais provveis pontos da interao com a membrana, devido estrutura ressonante de grupos aromticos. Quando dissociado (pH acima do pKa), estrona perde seu prton e se torna incapaz de estabelecer pontes de hidrognio com os grupos funcionais da membrana, resultando numa reduo da adsoro e segundo ele da remoo (Nghiem et al., 2002 e 2003). Nghiem et al. (2004) estudaram oito tipo de membranas de nanofiltrao e osmose reversa e verificaram que os mecanismos de separao da estrona e -estradiol so similares. Nghiem et al. (2004) voltam a destacar que grupos funcionais do -estradiol podem facilitar a formao de pontes de hidrognio entre molcula e superfcie da membrana. Teoricamente o -estradiol pode funcionar como um doador de prton. As concentraes de perturbadores encontradas no ambiente so muito pequenas e de difcil anlise. Face essa dificuldade comum utilizar-se concentraes mais elevadas 55

desses compostos em experimentos controlados que utilizam membranas. No entanto, especula-se que o uso de altas concentraes pode no necessariamente refletir o comportamento do poluente. Schafer et al. (2003) verificaram que numa faixa de 1 a 1000 ng/L o efeito da concentrao de -estradiol na alimentao mnimo quando os valores de remoo foram comparados em membranas de poliamida sobre suporte de polissulfona. No entanto, esse estudo s considerou a rejeio no estgio inicial e no no equilbrio. Kimura et al. (2003b) salientam que experimentos conduzidos em concentraes diferentes podem dar resultados diferentes j que o transporte de soluto atravs das membranas pode ser governado pela difuso, que altamente dependente da concentrao. Esses autores verificaram que a remoo de diversos micropoluentes orgnicos por nanofiltrao e osmose reversa foi maior em experimentos conduzidos com concentrao inicial de 100g/L do que com a concentrao de 100 ng/L. Vale observar que parece haver uma contradio entre os resultados obtitidos por Kimura
et al. (2003b) e os efeitos da difuso. O aumento da concentrao de contaminante na

alimentao tende a favorecer a difuso e, portanto, em condies de equilbrio, tende a promover o aumento da concentrao de contaminante no permeado, diminuindo a eficincia de remoo pela membrana. Schafer et al. (2003) salientam que efeitos da presena de matria orgnica nos efluentes no grau de remoo do estrona devem ser avaliados, ou seja, a qualidade da gua de alimentao pode influenciar na eficincia de remoo da membrana. A matria orgnica pode competir por pontos adsortivos da superfcie da membrana e resultar em menores graus de remoo do contaminante. Alternativamente, contaminantes como a estrona podem se ligar matria orgnica podendo favorecer as retenes. Nghiem et al. (2004) verificaram que a remoo do estrona aumentou com a presena de matria orgnica na gua estudada. Yoon et al. (2006) ao analisarem a nanofiltrao e ultrafiltrao de perturbadores usando quatro tipos de gua de alimentao (ver tabela 3.7), tambm verificaram que a remoo pode ser influenciada pela qualidade da gua. Jin et al. (2007) verificaram, por sua vez, que a remoo da estrona alterada na presena de matria orgnica dissolvida. Tanto para uma membrana de acetato de celulose quanto 56

para uma membrana de poliamida as remoes foram mais altas na presena de matria orgnica dissolvida (polissacardeos e substncias hmicas) do que para a estrona livre. Entre as diferentes substncias que representaram a matria orgnica dissolvida houve diferenas na remoo, dependendo da interao dessa substncia com a estrona e a membrana, como caractersticas hidrofbicas ou hidroflicas, podendo melhorar ou piorar sua remoo. Segundo os autores, na presena de matria orgnica com mais grupos fenlicos, e consequentemente, mais facilidade de realizar pontes de hidrognio com a estrona, a remoo de estrona foi maior do que na presena das outras matrias orgnicas. Quanto influncia da velocidade tangencial na remoo do -estradiol, a literatura controversa. McCallum (2005) observou menores remoes do -estradiol, no estado de equilbrio, com a velocidade de 0,13 m/s (70% de remoo), do que para a velocidade de 0,4 m/s (80-85%), sendo esta ltima a mesma utilizada nesta pesquisa de mestrado. Nghiem et al. (2004) no verificaram alterao na remoo do estrona (hormnio com estrutura muito similar ao -estradiol) numa faixa de variao de 0,073m/s a 0,24m/s.
3.5 - REMOO DE SAXITOXINAS POR PROCESSO DE TRATAMENTO COM MEMBRANAS

A remoo de cianotoxinas por processos de tratamento por membranas ainda no foi profundamente estudada. Os estudos de remoo de cianotoxinas por processos de nanofiltrao tm se limitado, principalmente, s microcistinas e anatoxina-a e mesmo assim ainda so poucos os trabalhos publicados. Nenhum trabalho com remoo de saxitoxina por processos de membrana foi encontrado. Poucos trabalhos sobre remoo de cianobactrias tambm foram publicados. Teixeira e Rosa (2005) avaliaram a remoo de microcistina dissolvida em trs tipos de gua (ozonizada e do decantador de uma ETA e contaminada com matria orgnica natural) pelo processo de nanofiltrao sob presso de 1000kPa e fluxo tangencial. Todas as variantes de microcistinas (MC-LR, MC-LY e MC-LF) foram quase completamente removidas (>97%). As microcistinas revelaram uma forte tendncia obstruo da membrana para concentraes elevadas de 150 g/L, sendo este comportamento atenuado para concentraes menores, de 16 g/L.

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Posteriormente, Teixeira e Rosa (2006) analisaram, alm da remoo da microcistina, a remoo da neurotoxina, anatoxina-a, por nanofiltrao em membranas compostas de amida de polipiperazina sobre suporte de polisulfona e polister (MWCO=150 g/mol) e verificaram que essa toxina tambm foi quase completamente removida. A gua de estudo foi preparada com efluente do decantador de uma ETA, adicionado de matria orgnica natural. Esses autores avaliaram a influncia de caractersticas qumicas da anatoxina-a (alcalide positivamente carregado, 166g/mol) e da hepatotoxina microcistina (pepitdeo cclico, carregado negativamente e de cerca de 1000 g/mol) na eficincia de remoo dessas toxinas. A remoo da Anatoxina-a foi governada por interaes eletroestticas e por impedimento fsico (peneiramento), enquanto que para a microcistina este ltimo foi o principal mecanismo. As duas toxinas foram quase completamente removidas, mesmo com variaes na qualidade da gua, taxa de recuperao de gua e diferentes valores de pH. Segundo Gijsbertsen-Abrahanse et al. (2006), a ultrafiltrao capaz de remover microrganismos em geral (>99,99%). No entanto, no caso de cianobactrias possvel a liberao de cianotoxinas das clulas devido lise que a bomba de alimentao pode causar. As toxinas dissolvidas foram melhores removidas com a nanofiltrao do que com a ultrafiltrao. Nesse estudo, com membranas de nanofiltrao em espiral a rejeio de microcistinas foi de pelo menos 99% e para anatoxina-a, (menor peso molecular 165g/mol), com o peso molecular menor que o de corte da membrana utilizada (200g/mol) a rejeio foi ainda de 96%. Os autores observaram, ainda, um decaimento na concentrao de alimentao com o tempo, principalmente com relao anatoxina-a, o qual atriburam a adsoro da toxina na membrana. Os autores salientam, ainda, que a rejeio foi alta, mas deve-se lembrar que foi resultado em escala pequena. A recuperao do permeado foi de 10%. Numa escala real a recuperao ser de cerca de 75%, resultando em mais altas concentraes de compostos dissolvidos no concentrado. A transferncia de massa dos compostos atravs da membrana de nanofiltrao, no depende s do tamanho das molculas, mas tambm de outras propriedades fsicas e na escala real, com aumento da concentrao de dissolvidos no concentrado importante que essas propriedades sejam conhecidas.

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4 - METODOLOGIA
Neste trabalho, as eficincias de remoo do hormnio -estradiol e das saxitoxinas por nanofiltrao foram avaliadas em escala de bancada por um sistema de separao em membranas de fluxo tangencial (cross-flow). O estudo foi desenvolvido no Laboratrio de Anlise de gua LAA do Departamento de Engenharia Civil e Ambiental da Universidade de Braslia - UnB. Os contaminantes foram escolhidos por serem pouco estudados no Brasil, serem suspeitos de estar associados a problemas de sade humana, poder estar presentes em um mesmo manancial. Alm disso, apesar de possurem naturezas bem diferentes, os dois contaminantes so orgnicos e possuem pesos moleculares prximos. Assim, podem ser verificadas algumas influncias da estrutura molecular na remoo de contaminates orgnicos pela nanofiltrao. Foram realizados experimentos que consistiram da avaliao do comportamento de duas diferentes membranas de nanofiltrao quando alimentadas com dois tipos de gua conforme descrito a seguir. Tipo I: gua deionizada contaminada com -estradiol; Tipo II: gua deionizada contaminada com saxitoxina; A concentrao do hormnio -estradiol na gua do Tipo I foi constante de aproximadamente 10 g/L. Na gua do Tipo II a concentrao de saxitoxina foi varivel, dependendo da concentrao resultante do cultivo da cianobactria. Alm da avaliao da influncia dos diferentes materiais constituintes das membranas, tambm foi investigado o efeito da variao de pH na eficincia de remoo dos poluentes. A seguir, detalhada a concepo do equipamento de bancada, materiais utilizados, bem como o desenvolvimento dos experimentos realizados.

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4.1 - EQUIPAMENTOS E MATERIAIS 4.1.1 - Sistema experimental de separao por membrana

O tipo de fluxo escolhido para os experimentos de nanofiltrao foi o tangencial, utilizado em diversos trabalhos de bancada (Nghiem et al., 2004; McCallum, 2005; Kimura et al., 2004) e em escala real. Esse tipo de operao possui, em geral, uma recuperao quantitativa da gua de alimentao menor que a obtida no fluxo frontal, no entanto, a operao em fluxo tangencial resulta em menos problemas de depsitos na membrana. O esquema geral do sistema de separao por membranas utilizado no trabalho apresentado na Figura 4.1. Na Figura 4.2 apresentada uma foto do sistema montado. O sistema consiste, portanto, de uma clula de separao operada em fluxo tangencial, manmetro, rotmetro, reservatrio de alimentao, bomba centrfuga e um inversor de freqncia.

Figura 4.1 - Esquema simplificado do sistema de nanofiltrao

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RESERVATRIO
RAD CENT CO N O

PERMEADO

T AL IMEN

AO

INVERSOR DE FREQUNCIA

BOMBA

Figura 4.2 - Vista geral do sistema de nanofiltrao A clula de separao, corao do sistema experimental, da marca Osmonics, modelo Sepa II-Cross-Flow e foi importado da empresa Sterlitech. O detalhe e os componentes da clula so apresentados na Figura 4.3. A clula de separao toda confeccionada em ao inox, com exceo do espaador, carreador do permeado e membranas. O espaador utilizado nesse trabalho possui espessura de 1,65mm e sua estrutura em forma de rede promove turbulncia no canal do concentrado e reduz a polarizao da concentrao de soluto prximo superfcie da membrana (Figura 4.3c). O carreador do permeado conduz a gua permeada para o centro da parte superior da clula onde se localizam os orifcios para sada do permeado (Figura 4.3d). A dimenso da membrana a ser acoplada na clula de 19,1 x 14cm, no entanto a rea efetiva de separao de 140 cm2. A clula de separao inserida em um suporte que pressurizado, por meio de uma bomba hidrulica manual, para evitar que a clula se abra durante a operao (Figura 4.3b). A presso mxima suportada pela clula de 6900kPa.

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Sada do permeado

Tampa da clula

Carreador do permeado Membrana Espaador Guias Sada do concentrado Alimentao


Suporte da clula de filtrao Bomba para pressurizar a clula

Anis de Manmetro vedao

Base da clula

(a)

(b)

Orifcios de sada do permeado


Espaador

Carreador do permeado

Membrana

(c)

(d)

Figura 4.3 - Clula de separao tangencial. (a) componentes da clula de separao. (b) Suporte da clula de separao. (c) base da clula, detalhe do espaador. (d) clula de separao com carreador de permeado e membrana instalados Do reservatrio de alimentao, confeccionado em ao inox, com capacidade de at 20 L, a gua conduzida sob presso para a clula de separao em membrana. A presso de trabalho, 689kPa (100psi), mantida por uma bomba centrfuga de 16 estgios da marca Vanbro, que atinge uma presso mxima de 116 mca para uma vazo de 0,8 m3/h. A presso era controlada por um manmetro e registro instalados na tubulao de sada do concentrado (Figuras 4.2 e 4.3a). Aps passar pela clula de separao, o concentrado retornava ao reservatrio de alimentao. Como a vazo de permeado era baixa, grande parte do volume era coletado para realizao das anlises e por isso no foi prevista uma tubulao de retorno para essa frao. As tubulaes utilizadas no sistema, bem como, o reservatrio e conexes (com exceo dos registros), foram de ao inox para minimizar 62

perdas por adsoro do contaminante na tubulao. No foi previsto dispositivo de medio de vazo para o permeado, a qual foi estimada por medidas volumtricas.
4.1.2 - Membranas

Foram testados dois tipos de membranas polimricas de nanofiltrao fabricadas pela DESAL-Osmonics adquiridas da mesma empresa da qual foi importado o equipamento de separao. As principais caractersticas das membranas esto apresentadas na Tabela 4.1. Neste trabalho, a membrana de acetato de celulose foi designada como tipo A e a membrana composta como tipo B. Tabela 4.1 - Principais caractersticas das membranas utilizadas nos ensaios de nanofiltrao.
Designao da membrana Material constituinte YMCKSP1905 Tipo A acetato de celulosea YMDKSP1905 Tipo B membrana composta - TFC (filme fino de poliamida sobre suporte de polissulfona b) -15 (pH=6,5) d neutro (pH=3,9)e -23,0 (pH=10,35)f 58,3h 98%-(MgSO4) 150-300 para solutos orgnicos no carregados 37,4 L/m2/h em 100psi (689kPa) 2-11 Referncias a- Fabricante b-Bowen et al., (2002); Wagner, (2001); Mazzoni e Bandini (2006);

Potencial Zeta (mV) ngulo de contato (C) Rejeio Peso molecular de corte (g/mol) Fluxo tpico em determinada presso Faixa de pH em 25C

-6,0c (pH=7) 54,2g 92% - Na2SO4 560i 47,5 L/m2/h em 220psi (1517kPa) 2-8

c Jin et al. (2007) d, e, f Al-amoudi et al. (2007). g - Jin et al. (2007) h Norberg et al. (2007). Fabricante i - Jin et al. (2007) para pH=7

Fabricante Fabricante

Como pode ser observado na Tabela 4.1, a seleo das membranas utilizadas nesta pesquisa foi feita com intuito de se obter caractersticas de materiais diferentes para avaliar a influncia do composto formador na remoo dos poluentes. Para facilitar questes de importao optou-se em escolher as membranas dentre aquelas existentes na mesma empresa da qual foi adquirido equipamento de separao.

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4.1.3 - Contaminantes

Os contaminantes orgnicos analisados nesta pesquisa foram o hormnio -estradiol e as saxitoxinas STX, Neo-STX e dc-STX. O perturbador endcrino estudado, o hormnio -estradiol, foi adquirido da empresa Sigma, na forma slida e solvel em gua (produto E4389, lote nmero 065K1250). Originalmente, o -estradiol pouco solvel em gua, mas esse produto adquirido para os ensaios possui molculas de ciclodextrinas (oligossacardeos cclicos) que facilitam sua dissoluo em gua. O -estradiol fica encapsulado pela ciclodextrina, deixando a molcula solvel em gua. Quando esse complexo diludo em grande volume de gua o processo revertido e o -estradiol liberado para a soluo. Optou-se por esse composto porque dispensa o uso de solventes como metanol, ou etanol para dissoluo do hormnio, o que facilita o preparo da amostra e minimiza o risco de ataque da membrana por esses solventes. O frasco de 2,1 gramas do hormnio solvel possua, efetivamente, 100mg de -estradiol. Preparou-se, ento, uma soluo estoque pela diluio das 2,1 gramas em 100 ml de gua deionizada, o que resulta numa concentrao total de 21 mg/mL e uma concentrao de estradiol de 1mg/mL. A contaminao com o hormnio na gua em estudo foi feita a partir da soluo estoque para alcanar uma concentrao de cerca de 10 g/L de -estradiol. Como os ensaios foram realizados com um volume total inicial de15 L, eram colocados nesse volume 150L da soluo estoque. As concentraes usualmente encontradas na natureza so da ordem de ng/L e alguns trabalhos tm realizado seus experimentos com 100 ng/L (Nghiem et al., 2001, 2003 e 2004). No entanto, uma concentrao maior foi escolhida para facilitar os ensaios quanto ao aspecto de deteco, dispensando necessidade de etapa de extrao e concentrao, e tambm por ter sido observado a utilizao de concentraes de at 100 g/L em algumas pesquisas sobre o tema (Weber et al., 2004 e Kimura et al., 2004). As saxitoxinas estudadas na gua do Tipo II foram extradas de clulas de cepas txicas de
Cylindrospermopsis raciborskii (cepa T3) que foram cultivadas no prprio Laboratrio de

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Anlise de gua LAA do Departamento de Engenharia Civil e Ambiental da Universidade de Braslia-UnB (Figura 4.4). Essa cepa foi inicialmente fornecida pelo Laboratrio de Ecofisiologia e Toxicologia de Cianobactrias (LETC) do Instituto de Biofsica Carlos Chagas Filho da UFRJ, tendo sido isolada no ano de 1996 no reservatrio de gua da represa Billing no estado de So Paulo.

Figura 4.4 - Vista geral do cultivo de Cylindrospermopsis raciborkii do Laboratrio de Anlise de guas da UnB. Para liberao da toxina intracelular a ser usada nos experimentos, as clulas de
Cylindrospermopsis raciborskii eram submetidas ao processo de gelo/degelo por trs vezes

consecutivas. Esse processo provoca o rompimento da membrana celular (lise) e conseqentemente a liberao de toxina e de outros compostos intracelulares para o meio lquido. Fotos do cultivo antes e aps a lise das clulas so apresentadas, respectivamnte, nas Figuras 4.5 e 4.6

(a)

(b)

Figura 4.5 Cultivo de Cylindrospermopsis raciborskii (T3) antes do processo de lise. (Microscpio ptico, aumento de 100 vezes (a) e 200 vezes (b))

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(a)

(b)

Figura 4.6 - Cultivo de Cylindrospermopsis raciborskii (T3) aps lise pelo processo de gelo/degelo. (Microscpio ptico, aumento de 100 vezes (a) e 200 vezes (b)) Aps o processo de lise, o lquido era submetido a uma seqncia de separao (ver figura 4.7) para remoo dos fragmentos de clulas lisadas e para evitar a obstruo da membrana durante o processo de nanofiltrao. A separao era realizada em filtro de 8 m, em seguida por membrana com reteno de 1 m de microfibra de vidro e por ltimo em membrana de ster de celulose com reteno de 0,45 m. O material filtrado era armazenado no congelador e era retirado para descongelamento um dia antes de sua utilizao nos ensaios. O procedimento de separao consumia tempo significativo e era bastante oneroso em funo do nmero de membranas de 0,45 m gasto. Esse processo, juntamente com a produo do cultivo, limitou o nmero de experimentos realizados.

Figura 4.7 Bancada de separao

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A concentrao da saxitoxina adotada nos experimentos variou a depender do cultivo utilizado para sua produo. Trabalho anterior (Silva, 2005), que utilizou a mesma cepa, indicava que a concentrao de saxitoxinas, produzida a partir da lise do cultivo, variava entre 50 e 80g/L. Levando em considerao esse dado e os limites de deteco do CLAE, optou-se em utilizar para os experimentos de nanofiltrao uma gua de estudo com 50% do cultivo filtrado e 50% de gua deionizada, ou seja, 7,5L de cada um desses componentes.
4.2 - DESENVOLVIMENTO DOS EXPERIMENTOS 4.2.1 - Consideraes Gerais

Os ensaios de nanofiltrao foram concebidos de forma a possibilitar a avaliao do comportamento da remoo dos contaminantes sob variaes de material da membrana e do valor de pH da gua de estudo. O desenvolvimento experimental do trabalho foi iniciado com uma etapa preliminar de instalao e teste do sistema e s depois foram iniciados os ensaios de nanofiltrao, propriamente ditos. Foram realizados ensaios para as duas guas de estudo conforme apresentado no fluxograma da Figura 4.8. Na primeira etapa foram realizados todos os ensaios com a gua contaminada com -estradiol e na segunda etapa com a contaminao do material filtrado aps processo de lise da Cylindrospermopsis raciborskii, incluindo as saxitoxinas. Na fase 1 das duas etapas, as duas membranas foram testadas nas amostras sem correo de pH. Para a gua de estudo tipo I o valor de pH era 5 e valor de pH de 7 foi encontrado na gua de estudo tipo II. Na fase 2 das duas etapas, a membrana que apresentou melhor remoo de cada composto na fase 1, foi utilizada para os ensaios de verificao da influncia do pH na remoo dos contaminantes. Para cada ensaio foi utilizada uma membrana nova para que a comparao entre os resultados fosse realizada sob condies iniciais similares entre as membranas.

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Experimentos de nanofiltrao

ETAPA 1 gua Tipo I (mili-Q+estradiol) -9 ensaios-

ETAPA 2 gua Tipo II (mili-Q+saxitoxina) -6 ensaios-

FASE 1 Ensaios de nanofiltrao sem correo de pH

FASE 2 Ensaios para verificao da influncia do pH

FASE 1 Ensaios de nanofiltrao sem correo de pH

FASE 2 Ensaios para verificao da influncia do pH

Membrana Tipo A Acetato de Celulose

Membrana Tipo B Composta

Membrana com melhor remoo na Fase 1-Etapa 1

Membrana Tipo A Acetato de Celulose

Membrana Tipo B Composta

Membrana com melhor remoo na Fase 1-Etapa2

Figura 4.8 - Distribuio dos experimentos de nanofiltrao. Os ensaios foram realizados em sala climatizada (com temperatura em torno dos 22C) e ao longo dos ensaios eram monitorados a temperatura do ambiente, a temperatura e o valor de pH da gua no reservatrio de alimentao. Os ensaios da Fase 1 (sem correo do pH) foram, primeiramente, realizados para a membrana de acetato de celulose (tipo A) e depois para a membrana composta (tipo B). Conforme apresentado na Figura 4.9, de uma forma geral o desenvolvimento dos ensaios englobou a seguinte rotina experimental: preparao do sistema de separao, que incluiu a limpeza da bomba e preparao da clula de separao com colocao da membrana, espaadores e carreador do permeado; condicionamento da membrana; ensaio de nanofiltrao propriamente dito; ensaio de dessoro (em casos especficos) e deteco do contaminante em estudo em cada etapa, -estradiol e saxitoxinas. A seguir cada uma dessas fases descrita com mais detalhes.

Figura 4.9 - Rotina dos ensaios de nanofiltrao

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Fase 1 Preparao do sistema de separao: A limpeza da bomba era executada

imediatamente antes de cada ensaio. O procedimento consistia em colocar 20 litros de gua destilada no tanque de alimentao e ligar a bomba de forma que a gua passasse pela tubulao e pela bomba para depois ser descartada. Esse procedimento era repetido duas vezes. O objetivo dessa fase era a retirada de eventuais resduos de amostra de ensaios anteriores depositados na bomba. Aps a limpeza, toda gua restante era retirada da tubulao e tanque para se iniciar o ensaio. Antes do incio do ensaio a membrana era lavada com gua deionizada, para remover a cobertura de proteo, e colocada na clula de separao juntamente com o espaador (1,65mm) e carreador do permeado. A rotina adotada nos ensaios de nanofiltrao tomou como base os procedimentos descritos por Nighiem et al. (2004), McCalum (2005), Kimura (2004) e Angenson et al. (2003) e consistiu das seguintes fases.
Fase 2 - Condicionamento da membrana: Depois da preparao do sistema, o

reservatrio de alimentao era preenchido com 15 L de gua mili-Q e a membrana era comprimida por uma hora sob presso constante de 1000kPa e vazo do concentrado de 3,6 L/min com intuito de se obter um fluxo mais estabilizado. Nessa fase, a vazo do permeado tambm era medida por mtodo volumtrico (medida do volume de permeado em uma proveta a cada 15 minutos) para se obter o fluxo da membrana em gua limpa.
Fase 3 Ensaio de nanofiltrao propriamente dito: Depois de esvaziado, o

reservatrio de alimentao era preenchido com um volume de 15 L da gua de estudo e a mesma era filtrada na presso de trabalho (689kPa) em vazo constante de concentrado de cerca 3,6 L/min, o que considerando a dimenso do espaador e membrana resulta numa velocidade tangencial de aproximadamente 0,4 m/s. A gua de estudo era preparada aps a fase 2 em um recipiente de vidro com capacidade para 20 litros, onde eram colocados o contaminante e gua mili-Q nas quantidades especficas para cada gua de estudo, completando um volume de 15L. No caso dos ensaios para avaliao da influncia do valor de pH, o valor de pH da gua de estudo era corrigido com NaOH ou HCl, de acordo com a necessidade. Antes do incio do ensaio propriamente dito, retirava-se uma amostra do tanque para controle da concentrao inicial do ensaio. 69

Durante todos os ensaios a presso de trabalho foi mantida constante, assim como a temperatura da gua no reservatrio de alimentao, que ficou em torno de 25oC. O procedimento foi o mesmo em todos os ensaios com os dois tipos de membrana e para cada ensaio foi utilizada uma nova membrana. A presso de trabalho foi escolhida com base nos limites usuais adotados para nanofiltrao em baixa presso e em trabalhos da mesma natureza (Nghien et al. 2001,2003 e 2004; Kimura et al., 2004).
Fase 4 - Dessoro: Essa fase da rotina experimental foi realizada em alguns ensaios,

adotando procedimento descrito por McCalum (2005) com o objetivo de monitorar a dessoro do contaminante da membrana. Aps o trmino da fase 3 o reservatrio de alimentao e tubulaes de alimentao eram drenadas e enxaguadas com gua mili-Q e a membrana foi mantida na clula de separao. O reservatrio foi, ento, preenchido com 15 litros de gua deionizada e realizou-se uma separao mantendo-se os mesmos parmetros da fase 3, ou seja, presso de 689kPa e fluxo de concentrado de 3,6 L/min. Durante o primeiro minuto de operao, o concentrado foi descartado para limpar a clula de separao e tubulao do concentrado. Da mesma forma que na fase 2, antes do incio da separao retirou-se uma amostra do tanque para controle negativo da concentrao no tanque de alimentao. Durante todos os ensaios foram coletadas amostras do permeado e do concentrado a cada duas horas (com exceo do primeiro experimento da gua de Estudo tipo I). Por causa de sua vazo baixa, as amostras de permeado foram compostas, ou seja, coletava-se continuamente o permeado numa proveta e a cada duas horas retirava-se uma alquota do volume total coletado nas duas horas. As amostras do concentrado foram pontuais, coletadas em proveta por meio de um registro aberto a cada duas horas somente para retirada da amostra. O tempo de durao dos ensaios variou, conforme explicado nos itens 4.2.3 e 4.2.4. Como j foi mencionado, a vazo do permeado foi monitorada por medida volumtrica em funo do tempo e a vazo do concentrado, mantida constante, foi monitorada por um rotmetro. 70

Todos os experimentos foram executados com recirculao total do concentrado, a menos das quantidades retiradas para amostragem. Apesar de a maioria dos trabalhos da literatura recircularem, tambm, o permeado, optou-se em descartar o volume de permeado que no fosse coletado para amostra para uma simulao mais prxima do que acontece em escala real. Para anlise dos dados e verificao da eficincia de remoo, a taxa de remoo ou rejeio (R) foi calculada para cada intervalo de tempo da amostragem utilizando-se a Equao 3.2. Cabe observar que uma aproximao foi adotada, j que no caso do presente trabalho, foram utilizados dados da concentrao de amostras coletadas do concentrado ao invs de amostras coletadas da alimentao. No entanto, devido baixa recuperao de gua e o fato de o concentrado ser recirculado, essa diferena pode ser desprezada. As medidas das concentraes dos contaminantes nas amostras foram obtidas pelo mtodo ELISA, para o -estradiol e pela Cromatografia Lquida de Alta Eficincia CLAE para as saxitoxinas, conforme descrito no item 4.3. Depois de cada ensaio as amostras eram mantidas congeladas at serem analisadas por esses mtodos. Esse perodo de armazenamento (o usual foi a anlise no dia seguinte ao ensaio) nunca ultrapassou uma semana em nenhum dos ensaios, minimizando, assim, influncia de possveis degradaes. Outra observao importante, que como os ensaios foram relaizados em operao semicontnua e o volume do permeado no foi retornado para o reservatrio de alimentao, e portanto, h uma pequena diferena entre o volume inicial e o volume final de alimentao. Como essa diferena foi pequena, j que a recuperao foi baixa, essa diferena foi desprezada no caso deste estudo j que a importncia maior foi dada a valores comparativos de remoo dos contaminates.
4.2.2 - Etapa Preliminar

Aps a importao e chegada do equipamento, foi iniciada a etapa de montagem do sistema experimental. Como a nanofiltrao utiliza presses elevadas (em torno de 1000kPa), para funcionamento do sistema foi necessrio a utilizao de tubulaes, conexes e uma bomba com caractersticas compatveis com essas presses. 71

Quanto s tubulaes e conexes, para minimizar a adsoro do contaminante no sistema, optou-se por peas em ao inox. Houve dificuldade de se encontrar essas peas em Braslia, principalmente conexes, que tiveram que ser adquiridas de uma empresa em So Paulo. A confeco das roscas nas tubulaes para encaixe das conexes foi realizada na prpria Universidade de Braslia. Inicialmente, optou-se por aproveitar uma bomba da marca Leeson/Procon de 1HP, j existente no laboratrio de Anlise de gua da UnB e que fazia parte de um sistema de Osmose Reversa (portanto com caractersticas suficientes para nanofiltrao) doado ao LAA. Como a bomba era importada e sua ligao era em corrente contnua, com voltagem e amperagem no comumente utilizadas no Brasil (24 volts, 50 A), houve a necessidade de confeco de uma fonte especfica para ligao eltrica da bomba. Infelizmente, aps diversas tentativas foi descartada a hiptese de uso dessa bomba, pois o ajuste da fonte no ficou adequado, o que estava comprometendo o funcionamento da bomba, que esquentava excessivamente e no suportaria o tempo de execuo dos ensaios. Assim, foram pesquisados diversos tipos de bombas e optou-se pela aquisio de uma nova bomba centrfuga com 16 estgios, que aps diversos contatos, foi gentilmente cedida para Universidade de Braslia pela empresa Vanbro. Com todo o sistema de separao instalado, foram iniciados os testes preliminares que tinham objetivo de avaliar a ocorrncia de vazamentos e o comportamento trmico do sistema trabalhando sob presso. A preocupao especial com o comportamento trmico do sistema estava associada ao fato de que havia recirculao do concentrado e com isso a possibilidade de ocorrncia de aquecimento excessivo na gua de estudo. De fato, essas suspeitas se mostraram com fundamento uma vez que no primeiro teste com circulao de gua mili-Q, a temperatura da gua de estudo no reservatrio de alimentao atingiu cerca de 40C em apenas 20 min, com uma vazo de concentrado de cerca de 4 L/min. Assim, novos testes, que incluam a avaliao de um sistema simples de controle de temperatura no reservatrio de alimentao, foram realizados. Optou-se, tambm, por utilizar um inversor de freqncia para controlar a rotao da bomba e evitar um aquecimento excessivo do motor por causa de evetuais estrangulamentos no registro para controle da vazo. 72

Esses testes foram realizados com 15 L de gua mili-Q filtrados atravs de membrana de acetato de celulose, mais sensvel temperatura, durante 5 horas, uma hora sob presso de 1000kPa (a ser utilizada no condicionamento da membrana) e o restante, na presso de trabalho de cerca de 689kPa. A vazo do concentrado foi de cerca de 4 L/min (controlada pelo rotmetro). Foi testada a utilizao de gelo dentro de alguns recipientes e intervalos de tempo adequados para a troca desse agente refrigerante. Com objetivo de manter a temperatura da gua no reservatrio em torno de 25C ao longo da durao de cada ensaio, concluiu-se que a forma de refrigerao utilizada seria por meio da introduo de um recipiente cilndrico de inox, para evitar contaminao da amostra, no reservatrio de alimentao (Figura 4.10). Esse recipiente era preenchido com gua e cubo de gelo (de aproximadamente 2L), que era trocado a cada 30/35min. Com essa conformao obteve-se uma temperatura de 25C (no mximo 26C) para a presso de trabalho. Para a presso de 1000kPa a temperatura ficou em mdia igual a 27C. Como essa presso seria utilizada num perodo curto de tempo (1hora) e s para condicionamento da membrana optou-se em no mudar a refrigerao escolhida. Cogitou-se, tambm, a utilizao de outras opes de refrigerao que poderiam ser mais eficientes, como o uso de serpentinas. No entanto, a viabilizao dessa opo demandava tempo e recursos financeiros no disponveis naquele momento. Durante os testes tambm, foram realizados os ltimos ajustes na instalao para correo de vazamentos ainda existentes.

Figura 4.10 - Fotos do esquema de refrigerao da gua de estudo

73

4.2.3 - Etapa 1-Ensaios de nanofiltrao para gua do Tipo I

Os procedimentos e rotina de ensaios executadas na Etapa 1 foram as descritas no item 4.2.1 com as especificidades descritas a seguir. Como comentado no item 4.1.3 a gua de estudo da Etapa 1 foi contaminada com 10g/L de -estradiol , portanto a preparao da gua de estudo consistia da colocao de 150 L em 15L de gua mili-Q. Nos ensaios da Fase1-Etapa1 o pH da gua de estudo no foi corrigido, ficando em torno de 5 e monitorado a cada 2 horas. Aps execuo de todos os ensaios dessa Fase, a membrana que apresentou melhor remoo de -estradiol foi utilizada para se testar a influncia do pH na eficincia de remoo do contaminante. Os testes para avaliao da influncia do pH foram realizados com pH em torno de 10,5. Esse valor de pH foi escolhido com base nos resultados dos estudos realizados por Nghiem
et al. (2003) e Bellona et al., (2004) que indicavam que a adoo de um valor de pH da

soluo acima do valor de pKa da substncia (10,4 o valor do pKa do estradiol), a adsoro da substncia era reduzida e a eficincia de remoo prejudicada. O estudo de Nghiem et al. (2003) sugeria que o -estradiol poderia ter o mesmo comportamento que a estrona que foi o composto avaliado em seu estudo. No entanto, cabe salientar que esse valor de pH no comumente usado para o tratamento de gua para abastecimento e foi utilizado neste trabalho para avaliao e entendimento do impacto de um valor de pH elevado nos mecanismos de remoo da membrana. Para se obter o valor de pH prximo de 10,5, o valor de pH da amostra foi corrigido com adio de soluo 1M NaOH. Todos os outros porcedimentos descritos nas fases da rotina de ensaios (item 4.2.1) foram realizados. A Fase 4 da rotina experimental (Dessoro) foi realizada apenas em ensaios realizados com valor de pH igual a 5. Para o primeiro ensaio da Fase1-Etapa1 (pH5) a durao total foi de 4 horas com retirada de amostra a cada uma hora. Nos ensaios seguintes, esse tempo foi ampliado para at 12 horas em funo da verificao de que em quatro horas a remoo do -estradiol no alcanava uma estabilidade. Em todos os outros ensaios as amostras foram retiradas a cada 74

duas horas. O volume de cada amostra do concentrado e do permeado retirado para quantificao do -estradiol foi de 10 mL. Amostras do tanque de alimentao, depois do incio do ensaio, foram retiradas somente nos dois primeiros ensaios. Depois disso, optou-se, por causa da facilidade na retirada da amostra, por coletar somente amostras do concentrado, j que as duas representavam quase a mesma informao.
4.2.4 - Etapa 2 - Ensaios de nanofiltrao para gua do Tipo II

A gua de estudo da Etapa 2 foi contaminada com soluo produzida a partir da lise e posterior separao do cultivo de Cylindrospermopsis raciborskii, que contm saxitoxinas e outros compostos intracelulares. Como mencionado no item 4.1.3, a concentrao das saxitoxinas na gua de estudo variou em funo do cultivo da cianobactria, e a preparao da gua de estudo consistiu na mistura de 7,5L de gua mili-Q e 7,5L do cultivo submetido a lise e remoo de resduos por separao. Na Etapa 2, o pH da gua de estudo na Fase 1 (sem correo de pH) ficou em torno de 7. Durante a Fase 2 - Etapa 2 a influncia do pH foi avaliada, para a membrana com melhor remoo de saxitoxinas na Fase 1, em dois ensaios realizados com pH da gua de estudo corrigidos para valor de pH igual 5 (com aplicao de HCl) e valor de pH igual a 10,5 (com aplicao de NaOH). Esses valores de pH foram escolhidos para permitir melhor comparao dos ensaios de remoo de saxitoxinas com os resultados da gua contaminada com -estradiol. O ensaio de Dessoro (fase 4 da rotina de experimental) foi realizado somente para os ensaios em pH 5 e 10,5. Baseando-se nos ensaios realizados com -estradiol, o tempo de durao dos ensaios com gua contendo saxitoxinas (Fase1-Etapa2) foi de 10h. Esse tempo foi posteriormente reduzido para 8h nos ensaios com correo do pH (Fase 2), visto que a remoo das saxitoxinas parecia alcanar um equilbrio mais rapidamente do que o -Estradiol. A retirada das amostras para anlise foi sempre a cada duas horas. Nos ensaios da Fase 2-etapa2 foi, tambm, realizada uma avaliao da degradao natural das saxitoxinas. Antes do incio do experimento foi retirada do tanque de alimentao uma 75

amostra de 100 ml e colocada num bequer que ficou sobre agitao durante todo experimento. Alquotas de 10 ml desse bequer foram retiradas no incio e final do experimento para verificar se o valor de pH, por si, favorecia na degradao da toxina. Esse controle foi realizado com base nas informaes da literatura de que sob condio de pH alcalino as saxitoxinas tornam-se mais instveis.
4.3 - MTODOS ANALTICOS 4.3.1 - ELISA

O mtodo de deteco do hormnio -estradiol adotado neste trabalho foi o ELISA (Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay), por causa de sua alta sensibilidade e pela rapidez na execuo dos ensaios e anlises. Rubio et al. (2002), por exemplo, analisaram, com excelentes resultados quanto acurcia e sensibilidade o uso do ELISA para deteco do -Estradiol. Foram adquiridos Kits ELISA comerciais especficos para anlise do estradiol e foram seguidos os procedimentos fornecidos pelo manual do fabricante. Os kits so fabricados pela Japan Enviro Chemical conhecida como Environmental Diagnosis. A reatividade do Kit de 100% para o -estradiol e com limites de deteco entre 0,05 a 1,00 g/L. O manual do kit recomenda um pr-tratamento da amostra por meio de separao, no entanto como a gua de estudo era preparada com gua mili-Q tal procedimento no se fazia necessrio. A base de deteco dos imunensaios a capacidade de anticorpos em reconhecer e formar complexos estveis com antgenos. Imunoensaios empregam anticorpos como reagentes analticos. Os anticorpos especficos so capazes de se ligar ao analito, no caso o estradiol, da amostra, enquanto os conjugados antgeno-enzima competem com o analito pelos stios de ligao disponveis nos anticorpos (Figura 4.11).

76

Figura 4.11 - Etapas do ensaio ELISA (Japan EnviroChemicals, 2005 - modificado). Assim, o procedimento do ensaio consite em colocar uma mistura de amostra e conjugado antgeno-enzima numa placa sensibilizada com o anticorpo e incub-la por um perodo determinado para garantir que todos os stios de ligao foram ocupados. Em seguida, promovida uma lavagem da placa para retirada do excesso de analito e conjugado antgeno-enzima que no se ligaram aos anticorpos, para evitar interferncias na anlise. Aps a lavagem, adiciona-se um substrato de cor (Figura 4.12a). Esse substrato em presena da enzima do conjugado promove a colorao da mistura, assim quanto menor a concentrao de -estradiol, mais intensa a cor, pois os stios dos anticorpos estaro ocupados com o conjugado antgeno-enzima. Aps perodo de incubao, deve ser adicionada uma soluo de parada (Figura 4.12b) para cessar a ao da enzima que promove a cor e permitir a leitura da intensidade de cor. A intensidade da cor quantificada pela medida da densidade tica da mistura (absorbncia). Para fazer essa medida, utilizou-se de uma leitora ELISA (Bio-Rad, modelo 550) e um filtro especial para leitura em comprimento de onda de 450nm. Na Figura 4.13, tem-se a ilustrao da leitora ELISA utilizada nos ensaios. 77

(a)

(b)

Figura 4.12 - Vista da placa de Elisa (a) aps adio do substrato de cor, (b) aps adio da soluo de parada

Figura 4.13 - Leitor de ELISA Com o valor da densidade tica possvel determinar a concentrao do contaminante presente na amostra. Para isso deve-se traar, para cada ensaio proposto, a curva de calibrao padro. Essa curva relaciona de forma inversamente proporcional a concentrao do contaminante e a densidade tica, dentro do intervalo limite de anlise proposto pelo kit. O kit fornece cinco calibradores (0,00 g -estradiol/L;0,05 g estradiol/L; 0,15 g -estradiol/L; 0,40 g -estradiol/L e 1,00 g -estradiol/L). Com o intuito de fornecer mais segurana ao resultado obtido, cada amostra foi analisada no ELISA no mnimo em duplicata, pois mudanas de temperatura e falta de preciso ao pipetar as amostras podem gerar erros. Da, tambm, a importncia de se repetir curva de calibrao em todos os ensaios. Nesse trabalho no foi necessrio fazer extrao/concentrao das amostras, tendo em vista que os experimentos foram previamente elaborados para que se atingissem concentraes residuais dentro dos limites dos kits. 78

4.3.2 - Cromatografia Lquida de Alta Eficincia - CLAE

No caso das saxitoxinas, o mtodo utilizado para anlise foi o da Cromatografia Lquida de Alta Eficincia (CLAE) com detector de fluorescncia, por ser o mtodo analtico mais comumente empregado (Oshima et al.,1995). A metodologia usada para deteco de saxitoxinas baseou-se na rotina descrita por Oshima
et al. (1995). A nica diferena entre o mtodo proposto por Oshima et al.(1995) e o

empregado neste trabalho reside na utilizao da coluna C-18 ao invs da C-8, pelo fato da coluna C-18 ter demonstrado uma maior capacidade de separao das fraes cromatogrficas, quando testes foram realizados no Laboratrio de Toxinologia/UnB para anlise de saxitoxinas (Arantes, 2004). O sistema CLAE para anlise de saxitoxinas consiste de trs bombas (Shimadzu LC-20AT), uma para alimentao da fase mvel, uma para injeo do reagente oxidante e a outra para injeo do reagente acidificante; um injetor de amostra com loop de 20L; uma coluna de fase reversa (Fusion-RP 80A, C-18, 150 x 4,6 mm, 4 micron - Phenomenex); um reator ps-coluna constitudo de um tubo de Teflon aquecido a 80C (Forno Shimadzu CTO20A) e um detector de fluorescncia (Shimadzu RF-10AXL). Alm de um sistema de controle (Shimadzu CBM-20A) e um degasseificador (Shimadzu DGU-20A5). A Figura 4.14 apresenta uma foto do equipamento utilizado e a Tabela 4.2 mostra as principais caractersticas do mtodo.

Figura 4.14 - Equipamento de CLAE utilizado na pesquisa

79

Tabela 4.2 - Condies que foram adotadas para a anlise de saxitoxinas (Oshima et al., 1995). Parmetro Condio ou descrio Coluna Fase mvel (para saxitoxinas) Vazo Composio 0,8 mL/min Heptanosulfonato de sdio (2mM) em tampo fosfato de amnio (30mM), pH 7,1 Reagente oxidante Vazo Composio Reao Acidificante Vazo Composio Deteco Excitao Emisso 330 nm 390 nm 0,4 mL/min cido Actico (500mM) 0,4 mL/min cido peridico (7mM) em tampo fosfato de sdio (10mM ), pH 9,0 Tubo de Teflon (10m, 0,5mm d.i) aquecido a 80C Coluna de fase reversa C-18 - phenomenex

Para realizao da anlise, injeta-se um volume de 20 L da amostra no equipamento de CLAE. A amostra conduzida at a coluna por meio da fase mvel. As substncias que constituem a fase mvel, que so apresentadas na Tabela 4.6, permitem que as saxitoxinas e compostos interferentes adsorvam na coluna, promovendo a separao desses compostos em um dado tempo de reteno, o que permite sua posterior deteco. A amostra aps passar pela coluna, recebe continuamente o agente oxidante e durante a passagem pelo tubo de Teflon oxidada formando produtos que apresentam fluorescncia, o que permite a deteco das saxitoxinas no fluormetro. O reagente acidificante utilizado para parar a reao antes da deteco no fluormetro. A informao obtida no detector enviada para um microcomputador acoplado ao aparelho de CLAE e obtm-se uma curva (cromatograma), cuja rea sob os picos especficos, identificados pelo tempo de reteno, fornece a concentrao das saxitoxinas presentes na amostra. A Figura 4.15 apresenta, de forma esquemtica, o sistema CLAE descrito.

80

Figura 4.15 - Sistema de CLAE com reator ps-coluna para a anlise de saxitoxinas (Chen e Chou 2002, modificado) Para quantificao das saxitoxinas, faz-se necessria a construo de curvas de calibrao para cada variante das saxitoxinas, utilizando-se padres com concentraes conhecidas. Nesta pesquisa foram construdas e analisadas as curvas de calibrao da saxitoxina (STX), dc-saxitoxina (dc-STX) e neo-saxitoxina (Neo-STX). Apesar de indcios de que a cepa T3 da Cylindrospermopsis raciborskii cultivada no LAA tambm produza GTX, confirmada por testes feitos com um padro de GTX e a comparao dos tempos de reteno deste e de uma amostra do experimento, essa toxina no foi avaliada visto que a fase mvel utilizada no permite a separao das variantes de GTX e sua quantificao. O limite mnimo de deteco do CLAE utilizado foi de 6g/L para a Neo-STX e de 3 g/L para a STX e dc-STX. Devido aos baixos limites, as amostras no foram submetidas ao processo de concentrao e, tambm, pela no existncia de um mtodo padronizado ou reconhecidamente efetivo para concentrao de saxitoxinas. O nico pr-tratamento realizado precedendo a injeo da amostra no equipamento, foi a separao em filtro de PVDF (fluoreto de polivinilideno) com 0,22 m de abertura para retirada de possveis particulados que podem prejudicar a coluna cromatogrfica.

81

5 - APRESENTAO E DISCUSSO DOS RESULTADOS


5.1 - ETAPA 1 - ENSAIOS DE NANOFILTRAO PARA GUA DO TIPO I (MILI-Q + -ESTRADIOL) 5.1.1 - Consideraes iniciais

Primeiramente, foram realizados os ensaios com a membrana de acetato de celulose (tipo A), cujas caractersticas foram descritas no item 4.1.2. A Tabela 5.1 apresenta algumas caractersticas dos quatro ensaios realizados. A presso de trabalho foi de 689kPa e a vazo de alimentao constante e igual a 3,6 L/min, o que, levando em considerao as dimenses da clula de separao e espaador, resulta numa velocidade tangencial de aproximadamente 0,4 m/s.

Tabela 5.1 - Principais resultados dos ensaios de nanofiltrao para gua tipo I, pH em torno de 5 e membranas de acetato de celulose (tipo A) Ensaio MAC1 Durao do ensaio (h) Valor de pH Temperatura da gua no reservatrio durante o ensaio propriamente dito Vazo do permeado durante a condicionamento(a) (mL/min) Mdia da vazo do permeado durante ensaio (mL/min) Concentrao final do permeado (g/L) Concentrao inicial do concentrado (g/L) (b) Concentrao final do concentrado (g/L) (c) 4 5,0 -5,5 23C-25C 6,0 2,8 0,44 9,0 3,6 Ensaio MAC2 6 4,8-5,5 24C -25C 6,7 3,4 2,64 8,6 5,0 Ensaio MAC3 6 4,9-5,5 24C -25C 6,4 3,5 2,3 16,4 4,4 Ensaio MAC4 10 4,8-5,4 24C -26C 6,5 3,5 2,45 7,2 5,5

(a) condicionamento realizado durante 1 hora com gua mili-Q sob presso de 1000kPa; (b)medida pela amostra coletada no reservatrio; (c)medida pela amostra coletada no concentrado.

82

Cada ensaio foi realizado com uma membrana nova e valor de pH em torno de 5, valor este do pH natural da gua mili-Q, uma vez que no houve correo de pH nessa fase. A temperatura da gua foi mantida prxima a 25C por meio de processo de controle. O volume de amostra coletado para anlise da concentrao de -estradiol pelo ELISA foi de 10mL para cada amostra, tanto do permeado, quanto do concentrado. Importante observar que embora a proposta original fosse de realizar os ensaios com uma concentrao de 10 g/L na gua de estudo, isso no aconteceu, provavelmente devido a falhas na medio do volume de soluo estoque de -estradiol a ser adicionada gua mili-Q. A concentrao inicial em nenhum dos casos alcanou os 10 g/L, ficando em sua maioria, entre 7 e 9 g/L. A concentrao inicial do concentrado no ensaio MAC3 fugiu tendncia dos demais ensaios, o que pode ser devido a erros de diluies durante a determinao do -estradiol pelo mtodo ELISA. A vazo do permeado apresentada na Tabela 5.1 para cada ensaio de nanofiltrao propriamente dito foi calculada pela mdia das medies dos volumes de permeado produzidos em cada intervalo de tempo das amostragens. Durante os ensaios, observou-se, que na primeira hora de operao o volume de permeado era menor do que nas horas seguintes, pois o sistema ainda no se encontrava estabilizado. Observao vlida tambm para os resultados da membrana composta (Tipo B) apresentados no item 5.2. Levando em considerao a rea efetiva de separao de 140 cm2 da membrana e a vazo de 3,5 mL/min (valor predominante nos ensaios), obtm-se uma taxa de fluxo de permeado de 15 L/m2.h. Considerando a vazo do concentrado, que foi mantida aproximadamente constante em todos os experimentos (3,6 L/min), a taxa de recuperao de gua (vazo permeado/vazo concentrado) nos ensaios da gua tipo I com a membrana de acetato de celulose foi cerca de 0,1%, considerada muito baixa se comparada a mdulos comerciais (10% ou mais dependendo do arranjo adotado, segundo Mierzwa, 2006) Uma recuperao um pouco maior, sem alterao da presso e do espaador da membrana, poderia ter sido alcanada se a vazo de alimentao (concentrado) fosse menor. No entanto, optou-se por uma vazo maior e, portanto, uma velocidade tangencial maior para se evitar os efeitos da polarizao da concentrao na superfcie da membrana. Cabe salientar, que a vazo de alimentao no altera diretamente a vazo do permeado, ento, como a vazo de permeado j baixa seria necessrio uma reduo muito grande para uma 83

vazo de concentrado de cerca de 0,035L/min para se obter um recuperao de 10%, o que reduziria muito a velocidade. Quanto influncia da velocidade tangencial na eficincia de remoo do -estradiol, a literatura controversa, como discutido no Captulo 3. McCallum (2005) observou menores remoes do -estradiol em membranas de nanofiltrao do tipo composta de poliamida, no estado de equilbrio, com a velocidade tangencial de 0,13 m/s (70% de remoo), do que para a velocidade de 0,4 m/s (80-85%), sendo esta ltima a mesma velocidade tangencial adotada no presente trabalho. Nghiem et al. (2004a) no verificaram alterao na remoo do estrona (hormnio com estrutura similar ao do -estradiol) por membrana de nanofiltrao do tipo composta de poliamida-uria numa faixa de variao de 0,073m/s a 0,24m/s. As Figuras 5.1 e 5.2 apresentam as concentraes de -estradiol no permeado e no concentrado ao longo da durao de cada ensaio apresentado na Tabela 5.1. Como pode ser visto na Figura 5.1(a), a concentrao de -estradiol no permeado e no concentrado no atingiram um estado de equilbrio aps 4 horas de durao do ensaio. Dessa forma, com o objetivo de se atingir estado de equilbrio e buscar obter um valor de remoo de estradiol mais prximo do real, aumentou-se o tempo de durao do ensaio para at dez horas (ver Tabela 5.1).

84

1 0 9

-estradiol (g/L)

8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

tem (h) po concentrado permeado

(a)

1 0 9

-estradiol (g/L)

8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

tem (h) po concentrado

permeado

(b) Figura 5.1 - Ensaios de nanofiltrao para gua tipo I (mili-Q+ -estradiol) e membrana de acetato de celulose (tipo A), velocidade tangencial= 0,4m/s, presso=689kPa, pH 5. (a) ensaioMAC1, (b) ensaioMAC2.

85

1 7 1 6 1 5 1 4 1 3 1 2 1 1 1 0 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

-estradiol(g/L )

tem (h) po concentrado permeado

(a)

-estradiol (g/L)

1 0 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

tem (h) po concentrado. permeado

(b) Figura 5.2 - Ensaios de nanofiltrao para gua tipo I (mili-Q+ -estradiol ) e membrana de acetato de celulose (tipo A), velocidade tangencial= 0,4m/s, presso=689kPa, pH 5. (a) ensaioMAC3, (b) ensaioMAC4 Apesar de resultados absolutos diferentes, as curvas mostradas nas Figuras 5.1 e 5.2 apresentam comportamentos qualitativos semelhantes. A concentrao de -estradiol no permeado foi bastante baixa nas duas primeiras horas e cresceu com o tempo de durao do ensaio at que se aproximou de um equilbrio em torno da oitava hora, mantendo a concentrao em torno de 2,5 g/L entre a oitava e dcima hora (Figura 5.2 (b)). A concentrao de -estradiol no concentrado apresentou um decaimento sensvel com relao concentrao inicial, o que sugere a ocorrncia de adsoro de -estradiol na membrana, aspecto que discutido com mais detalhe no item 5.1.2. Esse decaimento, de um modo geral, foi mais acentuado nas duas primeiras horas.

86

Como pode ser visto dos resultados mostrados nas Figuras 5.1 e 5.2, durante os ensaios foram coletadas somente amostras do permeado e concentrado, optando-se por no coletar amostras do reservatrio de alimentao, com exceo de uma amostra para controle da concentrao inicial. Como houve recirculao do concentrado, as informaes obtidas das amostras do concentrado e do reservatrio seriam a mesma. Isso pde ser confirmado durante a realizao de um dos ensaios no qual se coletou as amostras tanto do concentrado como do reservatrio de alimentao (Figura 5.3). Na Figura 5.3 pode-se observar que as concentraes so bem semelhantes.

1 0

-estradiol (g/L)

9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

tempo (h) concentrado reservatorio de alim entao

Figura 5.3 - Comparao entre amostras retiradas do concentrado e reservatrio de alimentao Da mesma forma que para a membrana de acetato de celulose (tipo A), os ensaios para a membrana composta (tipo B), cujas caractersticas foram apresentadas no item 4.1.2, foram realizados sob presso de trabalho de 689kPa, vazo do concentrado igual a 3,6 L/min e valor de pH em torno de 5. No entanto, para membrana tipo B os ensaios j tiveram, inicialmente, duraes maiores. A Tabela 5.2 apresenta algumas caractersticas dos trs ensaios realizados. Comparando-se a Tabela 5.2 com a Tabela 5.1, pode-se observar que a produo de gua na membrana composta (vazo do permeado) foi, em geral, um pouco maior que na membrana de acetato de celulose tanto para gua limpa, durante o condicionamento, quanto para gua contaminada com -estradiol, durante o ensaio propriamente dito. A taxa de fluxo de permeado para a membrana composta durante o ensaio apresentou um valor mnimo de 15,9 L/m2.h no ensaio MCP1 e um valor mximo de 18,9 L/m2.h no ensaio MCP3. No entanto, o aumento no foi suficiente para notadamente afetar a taxa de 87

recuperao de gua que continuou baixa, em cerca de 0,1%. Houve uma diferena de cerca de 19% entre a vazo do permeado da membrana utilizada no ensaio MCP3 e no ensaio MCP2. Acredita-se que essa diferena possa ocorrer entre membranas de lotes e cortes diferentes.
Tabela 5.2 - Principais resultados dos ensaios de nanofiltrao para gua tipo I, valor de pH em torno de 5 e membranas compostas (tipo B) Ensaio Ensaio Ensaio MCP1 MCP2 MCP3 Durao do ensaio (h) Valor de pH Temperatura da gua no reservatrio durante o ensaio propriamente dito Vazo do permeado durante o condicionamento (mL/min) Mdia da vazo do permeado durante ensaio (mL/min) Concentrao final do permeado (g/L) Concentrao inicial do concentrado (g/L) Concentrao final do concentrado (g/L) 10 4,7-5,5 24C-25C 7,3 4,0 1,3 6,8 5,5 10 4,8-5,6 24C-25C 5,9 3,7 1,2 7,8 5,5 12 5,0-5,8 24C-26C 7,2 4,4 2,6 9,6 6,4

Outra observao, vlida tanto para os ensaios com a membrana de acetato de celulose (tipo A) quanto para os ensaios com a membrana composta (tipo B), que no houve reduo da vazo de permeado, que se manteve praticamente constante ao longo do tempo de durao do ensaio, com exceo da primeira hora quando o sistema estava em fase de estabilizao. Como os outros parmetros operacionais (presso e velocidade tangencial) foram mantidos constantes, isso indica que no houve problema de depsitos na membrana e obstrues de poros e nem alteraes em suas caractersticas fsicas que pudessem alterar a vazo. Esse comportamento era esperado j que a concentrao de -estradiol era baixa e para composio da gua de estudo foi utilizada gua deionizada, no havendo particulados, matria orgnica ou outras substncias que pudessem causar depsitos na membrana. A Figura 5.4 apresenta as concentraes de -estradiol no permeado e no concentrado ao longo da durao de cada ensaio com a membrana composta (tipo B).

88

-estradiol (g/L)

1 0 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

tem (h) po concentrado permeado

(a)

-estradiol (g/L)

1 0 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

tem (h) po concentrado permeado

(b)

1 1 1 0 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2 1 4

-estradiol (g/L)

tem (h) po concentrado permeado

(c) Figura 5.4 - Ensaios de nanofiltrao para gua tipo I (mili-Q+ -estradiol) e membrana composta (tipo B), velocidade tangencial=0,4m/s, presso=689kPa, pH5. (a) ensaio MCP1, (b) ensaio MCP2, (c) ensaio MCP3 89

Os resultados dos ensaios com a membrana composta (Figura 5.4) tambm apresentaram comportamentos qualitativos similares entre si, sendo que o ensaio MCP1 e MCP2 foram mais semelhantes, parecendo traduzir melhor o comportamento desta membrana composta do que o ensaio MCP3, apesar de que seriam necessrios mais repeties dos ensaios para essa confirmao. A concentrao de -estradiol no permeado, da mesma forma que para membrana de acetato de celulose (tipo A), cresceu com o tempo de durao do ensaio, tendendo a um equilbrio entre a oitava e dcima hora. A concentrao de -estradiol no concentrado tambm apresentou uma diminuio com relao concentrao inicial, o que sugere adsoro de -estradiol, tambm, na membrana composta. Essa diminuio foi mais acentuada nas duas primeiras horas, com exceo do ensaio MCP3 (Figura 5.4c). A concentrao inicial em nenhum dos casos alcanou os 10 g/L previstos, como mostra a Tabela 5.2.
5.1.2 - Eficincia de remoo e mecanismos

Como visto no Captulo 3, a adsoro e peneiramento so os mecanismos que geralmente fundamentam o processo de remoo de contaminantes orgnicos em membranas de nanofiltrao. Alm, disso, se o contaminante for eletricamente carregado poder haver interaes eletrostticas que interferem na remoo. A partir dos dados e das observaes iniciais sobre os ensaios, descritas no item 5.1.1, so discutidos no presente item as hipteses sobre os mecanismos atuantes na remoo do estradiol pelas membranas estudadas e alguns fatores que podem ter influenciado esses mecanismos. Salienta-se que seria necessrio um nmero maior de repeties dos ensaios, talvez com durao ainda maior, para se chegar a uma concluso definitiva a cerca do comportamento das membranas e do -estradiol no processo de remoo deste contaminante. A remoo de -estradiol pelas membranas estudadas neste trabalho foi calculada com base na equao 3.2. A Figura 5.5 apresenta as curvas de remoo de -estradiol ao longo do tempo de durao do ensaio MAC4, para a membrana de acetato de celulose (tipo A) e do ensaio MCP2 para a membrana composta (tipo B). Dentre os ensaios realizados, esses dois foram selecionados, pois parecem melhor representar o comportamento das

90

membranas. Alm disso, no caso da membrana tipo A, os ensaios de menores duraes resultariam numa superestimao da remoo da membrana.

Remoo de -estradiol (%)

1 00 90 80 70 60 50 40 30 20 1 0 0 0 2 4

tem (h) po

1 0

1 2

rem oo m brana tipo A em

rem oo m brana tipo B em

Figura 5.5 - Remoo de -estradiol para gua tipo I (mili-Q+ -estradiol), velocidade tangencial=0,4m/s, presso=689kPa, pH5. Ensaio MCA4 para membrana de acetato de celulose (tipo A) e ensaio MCP2 para membrana composta (tipo B) A membrana composta (tipo B) apresentou maior porcentagem final de remoo do estradiol (aproximadamente 79%) do que a membrana de acetato de celulose (tipo A) (aproximadamente 55%). Provavelmente, os valores calculados ainda so superestimados, pois como se observa na Figura 5.4, no se chegou a uma estabilizao plena na remoo. Jin et al. (2007) utilizaram para a remoo do hormnio estrona (estrutura molecular parecida com o -estradiol), a mesma membrana de acetato de celulose utilizada no presente estudo e uma membrana composta de poliamida do mesmo material e fabricante da membrana utilizada no presente trabalho, mas de modelo diferente (MWCO=490g/mol). Nesse estudo, os autores tambm obtiveram melhor eficincia de remoo para a membrana composta do que para a membrana de acetato de celulose. No entanto, as remoes foram menores do que as do presente trabalho, cerca de 17% de remoo de estrona para a membrana composta e 9% para a membrana de acetato de celulose. interessante observar, tambm, que o padro de comportamento da concentrao do permeado e do concentrado ao longo do tempo foi similar ao do presente trabalho (diminuio da concentrao do concentrado e aumento da concentrao do permeado), no entanto, o equilbrio na concentrao do concentrado e do permeado no trabalho de Jin et
al. (2007), diferentemente do presente trabalho, foi alcanado com cerca de 10h de durao

91

para as duas membranas estudadas. Cabe salientar que no estudo dos autores citados, a concentrao inicial da estrona era menor que no presente trabalho (100 ng/L) e no foram informados dados de presso de trabalho e velocidade tangencial para comparaes mais detalhadas. A partir da anlise das curvas apresentadas nas Figuras 5.1, 5.2, 5.4 e 5.5 verifica-se que alcanar o estado de equilbrio nos ensaios uma condio importante para se verificar a real capacidade de remoo da membrana, principalmente se o contaminante apresentar tendncia a adsorver na membrana, como j discutido por diversos autores (McCallum, 2005; Kimura et al., 2004, Agenson et al., 2003; Nghiem et al., 2004a). As duraes dos ensaios no presente trabalho foram limitadas pela disponibilidade e custos do kit ELISA utilizado para determinao da concentrao de -estradiol. O tempo inicial de durao dos ensaios no presente trabalho baseou-se no relato de alguns autores (McCallum, 2005; Nghiem et al., 2004a), que utilizaram membranas do mesmo material das utilizadas neste trabalho (porm de fabricantes diferentes) e obtiveram o estado de equilbrio em torno de 4 ou 5h de durao na remoo de hormnios similares. No entanto, McCallum (2005) no primeiro ensaio, para uma membrana de poliamida, utilizou uma durao de ensaio mais longa (24h) para identificar o tempo em que a remoo de estradiol estaria estabilizada (cerca de 4h). Sugere-se que esse procedimento seja adotado em trabalhos futuros para verificar a remoo do -estradiol, no estado de equilbrio. No caso dos ensaios realizados no presente trabalho com valor de pH da gua em torno 5, os mecanismos que parecem ter influenciado na remoo do -estradiol foram a adsoro e o peneiramento, j que nesse valor de pH o -estradiol neutro e, portanto, no h tendncia a haver interaes eletrostticas entre este contaminante e as membranas. O fenmeno da adsoro de -estradiol ocorreu para os dois tipos de membranas estudadas, o que pde ser visualizado pela diminuio na concentrao do concentrado ao longo do tempo de durao dos ensaios (Figuras 5.1, 5.2 e 5.4). Como o sistema foi construdo em ao inox, e considera-se que a adsoro pelo sistema desprezvel, pode se considerar que foi adsorvida na membrana uma massa total igual a diferena verificada entre a massa do concentrado no incio e no final do ensaio (somado a esta ltima a massa total do permeado, que era um valor muito pequeno).

92

Para a membrana de acetato de celulose (tipo A) no ensaio MAC4, a massa adsorvida de estradiol foi de aproximadamente 34 g, ou seja, uma adsoro de 0,24 g/cm2 de membrana. Para a membrana composta (tipo B) no ensaio MCP2 a adsoro de -estradiol foi de aproximadamente 45 g, ou seja, uma adsoro de 0,32 g /cm2 de membrana. Observa-se tambm que a maior adsoro ocorreu, em geral, nas duas primeiras horas de ensaio. Para a membrana composta (tipo B), por exemplo, nas duas primeiras horas, houve uma reduo de cerca de 33 g de -estradiol na massa do concentrado, cerca de 75% do total adsorvido pela membrana. Esses valores no devem ser considerados em termos absolutos, pois se acredita que esto subestimados j que, principalmente para a membrana de acetato de celulose, a concentrao do concentrado permaneceu com tendncia decrescente at o tempo final do ensaio o que sugere que a adsoro do contaminante na membrana poderia ser maior. Outra observao, que uma pequena parte da adsoro do -estradiol possa ter ocorrido no espaador e carreador de permeado, partes do sistema de separao que no so produzidas em ao inox. Segundo fabricante, a presena desses elementos no sistema de fluxo tangencial utilizado neste trabalho procura simular unidades em escala real que utilizam membranas em espirais, onde esses elementos (espaador e carreador de permeado) podem ser considerados, portanto, parte da membrana. Aconselha-se que em estudos especficos sobre adsoro de contaminantes em membranas de nanofiltrao sejam realizadas anlises mais detalhadas para se saber a real taxa de adsoro do contaminante especificamente na membrana e no aparato experimental, o que no era objetivo do presente trabalho. McCallum (2005) em seu trabalho com nanofiltrao em membranas compostas de poliamida para remoo de -estradiol, estimou a massa adsorvida na membrana por meio de um ensaio que denominou de ensaio de dessoro. Alimentando gua deionizada no sistema por um perodo de tempo similar ao de operao, o autor sugere que a massa de estradiol presente no permeado resultante desse processo equivale a dessoro do estradiol adsorvido na membrana durante o ensaio para verificao da remoo do estradiol. No caso dos experimentos de McCallum (2004) os resultados da massa adsorvida estimada pelo ensaio de dessoro e pela diferena na concentrao do concentrado durante o ensaio de separao foram similares.

93

No presente trabalho, dois ensaios de dessoro foram realizados para a membrana de acetato de celulose e um para membrana composta. Alm das amostras do permeado, foram retiradas amostras iniciais e finais do tanque para se confirmar a concentrao nula de -estradiol na gua de alimentao e concentrado. Em todos os casos essas concentraes foram abaixo de 0,8 g/L de -estradiol. O primeiro ensaio realizado foi descartado j que as concentraes de -estradiol nas amostras do permeado ficaram acima do limite de deteco do ELISA, pois no foram realizadas as diluies necessrias. Os resultados dos outros dois ensaios so apresentados na Figura 5.6.
1 0 9

-estradiol (g/L)

8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

tem (h) po permeado dessoro permeado nanofiltrao

(a)
1 0 9

-estradiol (g/L)

8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2 1 4 1 6 1 8 20 22 24

tem (h) po permeado dessoro permeado nanofiltrao

(b) Figura 5.6 - Ensaios de dessoro. Velocidade tangencial=0,4 m/s. presso=689kPa, pH 5. (a) Ensaio MAC3, membrana de acetato de celulose (tipo A); (b) Ensaio MCP3, membrana composta (tipo B)

94

Para a membrana tipo A, a soma das massas foi de apenas 3 g e para a membrana tipo B foi de 3,2 g, portanto muito inferior ao calculado pela diferena entre a massa do concentrado no incio e no final do ensaio. Isso pode ter ocorrido pelo fato de que, o tempo de durao do ensaio de dessoro no foi suficiente para promover a dessoro de todo estradiol. Apesar disso, o fato da concentrao de -estradiol no permeado no ensaio de dessoro ser significativa, indica a possibilidade do -estradiol difundir, permear atravs da membrana e contaminar o permeado. Nghiem et al. (2003) tambm salientam que a massa de hormnios adsorvida nas membranas pode ser liberada, fazendo da adsoro de compostos estrognicos na membrana um risco para o tratamento de gua. De acordo com diversos autores (Schafer et al., 2003, Nghiem et al., 2003), o mecanismo de adsoro de hormnios no muito claro, mas pode ser resultado de interaes hidrofbicas entre a superfcie orgnica da membrana e o hormnio ou pode ser descrito por interaes mais especficas, como as pontes de hidrognio, sendo os grupos hidroxila e carbonilas dos hormnios os provveis radicais envolvidos nessa interao devido estrutura ressonante de grupos aromticos desses compostos. No presente trabalho, os grupos hidroxilas presentes no -estradiol podem ter favorecido a formao de pontes de hidrognio e, portanto, provavelmente colaboraram para adsoro do -estradiol na membrana. Apesar da influncia significativa da adsoro nas duas membranas analisadas no presente trabalho, segundo diversos autores (Nghiem et al., 2004, Jin et al, 2007) medida que a capacidade adsortiva da membrana vai atingindo a saturao com o tempo de separao, o mecanismo de peneiramento passa a dominar o processo de remoo de hormnios em condio neutra. Como o peso molecular de corte da membrana de acetato de celulose (tipo A) maior que o peso molecular do -estradiol, ela no foi capaz de promover uma maior remoo por meio do peneiramento, apresentando uma porcentagem de remoo de -estradiol menor do que a apresentada pela membrana composta (tipo B).
5.1.3 - Influncia do pH na remoo do -estradiol

Para a membrana composta (tipo B), que apresentou uma maior remoo de -estradiol, foram realizados duas rplicas de ensaios para avalliar a influncia do valor de pH na remoo do -estradiol. O valor de pH adotado foi de cerca de 10,5. Os resultados 95

encontram-se detalhados na Tabela 5.3. Cabe salientar que o valor de pH foi selecionado com o objetivo de manter o pH da soluo acima do pKa do -estradiol (10,4). No entanto, verificou-se que durante o ensaio houve uma diminuio do valor do pH que exigiu correo ao longo do ensaio. Observando-se a Tabela 5.3, percebe-se que a vazo do permeado durante o ensaio MCP4 foi maior do que no ensaio MCP5, mas acredita-se que sejam diferenas normais entre diferentes lotes das membranas, j que o fluxo no condicionamento em gua limpa tambm foi maior. A vazo do permeado manteve-se constante durante toda a durao de cada um dos dois ensaios propriamente dito (MCP4 e MCP5), como ocorreu para os demais ensaios com os dois tipos de membrana utilizados neste trabalho. Alm disso, como pode ser visto na comparao entre a Tabela 5.2 e 5.3, a vazo do permeado no foi notadamente alterada com o aumento do valor de pH, j que as vazes do permeado para os ensaios com valor de pH em torno de 10,5 (MCP4 e MCP5) foram prximas s vazes do permeado dos ensaios para a membrana composta (tipo B) sem correo do pH (Tabela 5.2).
Tabela 5.3 - Principais resultados dos ensaios de nanofiltrao para gua Tipo I, valor de pH em torno de 10,5 e membranas compostas (tipo B) Ensaio MCP4 Durao do ensaio (h) Valor de pH Temperatura da gua no reservatrio durante o ensaio propriamente dito Vazo do permeado durante o condicionamento (a) (mL/min) Mdia da vazo do permeado durante ensaio (mL/min) Concentrao final do permeado (g/L) Concentrao inicial do concentrado (g/L) (b) Concentrao final do concentrado (g/L) (c) 10 10,3-10,7 24C-25C 8,0 5,3 1,05 6,8 6,2 Ensaio MCP5 10 10,4-10,8 25C-26C 5,7 4,0 0,8 6,4 6,4

(a) condicionamento realizado durante 1 hora com gua mili-Q sob presso de 1000kPa; (b) medida pela amostra coletada no reservatrio; (c)medida pela amostra coletada no concentrado.

96

A Figura 5.7 apresenta as concentraes de -estradiol no permeado e no concentrado ao longo da durao dos dois ensaios realizados com a membrana composta (tipo B) para valor de pH em torno de 10,5.

1 0 9

-estradiol (g/L)

8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

tem (h) po concentrado permeado

(a)

1 0 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

-estradiol (g/L)

tem (h) po

concentrado

permeado

(b) Figura 5.7 - Ensaios de nanofiltrao para gua tipo I, com alterao de pH (10,5) para membranas compostas (Tipo B). Velocidade superficial=0,4m/s, presso=689kPa. (a) ensaio MCP4 (b) ensaio MCP5 Na Figura 5.7, observa-se que o comportamento qualitativo das duas rplicas foi similar, a concentrao do permeado foi crescente ao longo do tempo de durao dos ensaios e a concentrao do concentrado apresentou uma tendncia estabilidade. Comparando-se a Figura 5.7 com a Figura 5.4, observa-se que a grande diferena entre os resultados dos ensaios da membrana composta (tipo B) com valor de pH em torno de 5 e os ensaios com essa membrana no valor em torno de 10,5 foi o comportamento da concentrao do 97

concentrado, indicando que no valor de pH 10,5 houve menor adsoro de -estradiol na membrana composta do que nos ensaios dessa membrana com valor de em torno de pH 5. A curva de remoo de -estradiol calculada a partir do ensaio MCP5 mostrada na Figura 5.8. Comparando a Figura 5.8 com a Figura 5.5, percebe-se que a remoo de -estradiol pela membrana composta (tipo B) foi um pouco maior com o valor de pH mais elevado, aproximadamente 87%, do que para o valor de pH em torno de 5 (79%).

1 00 90 80

-estradiol%) (

Remoo de

70 60 50 40 30 20 1 0 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

tem (h) po remoo de estradiol - ensaio MCP5

Figura 5.8 - Remoo de -estradiol para o ensaio MCP5 com membrana composta (tipo B) e valor de pH em torno de 10,5. presso=689kPa, velocidade tangencial=0,4 m/s. Segundo Nghiem et al. (2002, 2003) em experimentos realizados com dispositivos de fluxo frontal (dead-end) e membranas de poliamida, a remoo da estrona, assim como a adsoro diminuem bastante com valor de pH acima do valor de pKa. Os autores sugerem que a formao das pontes de hidrognio o mecanismo de adsoro da estrona na membrana em valores de pH prximos da neutralidade. Quando dissociado (valor de pH da soluo acima do valor de pKa do hormnio), a estrona perde seus prtons dos grupos hidroxilas e se torna incapaz de estabelecer pontes de hidrognio com os grupos funcionais da membrana, resultando numa reduo da adsoro e segundo ele da remoo do hormnio (Nghiem et al. (2003,2002). Schafer et al. (2003) tambm consideram que as pontes de hidrognio interferem na adsoro dos hormnios na membrana, mas salientam, tambm, que a repulso eletrosttica diminui a proximidade entre a membrana e o hormnio, o que prejudica o potencial adsortivo da membrana.

98

Essas explicaes parecem plausveis para o caso do presente estudo, onde tambm houve uma reduo da adsoro porque tanto o -estradiol quanto a membrana composta (tipo B) tm suas cargas negativas aumentadas com o aumento do valor de pH, causando uma repulso eletrosttica entre a membrana e o composto. A carga negativa do -estradiol causada pela desprotonao do mesmo que ocorre em pH acima do valor do pKa desse hormnio (por causa de sua dissociao) e o aumento da carga negativa da membrana composta (tipo B) com elevao do pH foi verificado por Al-amoudi et al. (2007), como pode ser visto pelos valores do potencial zeta apresentados na Tabela 4.1 do Captulo 4. Entretanto, parece que outros aspectos no entendidos podem estar envolvidos no processo de remoo dos hormnios. Diferentemente do presente trabalho, no estudo de Nghiem et
al. (2003), a remoo de -estradiol diminuiu com elevao do valor de pH. O mesmo

ocorreu no trabalho de Schafer et al. (2003) que relatam que a remoo da estrona diminui para uma membrana de poliamida sobre suporte de polissulfona em valores de pH acima do pKa da substncia. J McCallum (2005), em concordncia com o presente trabalho, verificou um aumento da remoo de -estradiol por uma membrana de poliamida com aumento do valor de pH para valor acima do pKa dessa substncia em separao tangencial.
5.2 - ETAPA 2 - ENSAIOS DE NANOFILTRAO PARA GUA DO TIPO II (MILI-Q+SAXITOXINAS) 5.2.1 - Consideraes iniciais

A Tabela 5.4 apresenta as principais caractersticas dos ensaios realizados para a gua do tipo II. Nesses ensaios o valor de pH da amostra no foi alterado, permanecendo em torno da neutralidade (pH=7) em funo das caractersticas do material lisado. A presso de trabalho em todos os ensaios foi de cerca de 689kPa, vazo de alimentao constante igual a 3,6 L/min e velocidade tangencial de cerca de 0,4 m/s. A temperatura da gua foi mantida prxima de 25C. O volume de amostra coletado para anlise da concentrao de saxitoxinas foi de 200 ml para cada amostra, tanto do permeado, quanto do concentrado. O maior volume de amostra coletada em relao aos ensaios com -estradiol foi motivado pela possibilidade de se fazer necessrio uma etapa de concentrao e purificao da amostra para determinao de 99

saxitoxinas por CLAE. No entanto, essa etapa no se fez necessria em funo dos limites de deteco do equipamento. Alm disso, testes preliminares do procedimento de purificao e concentrao mostraram uma falta de reprodutibilidade no processo, que prejudicariam a interpretao dos resultados.
Tabela 5.4 Principais resultados dos ensaios de nanofiltrao para gua tipo II, pH7. Membrana tipo A Ensaio Durao do ensaio (h) Valor de pH Ensaio MAC5 10 6,9-7,1 Ensaio MAC6 10 7,1-7,3 Membrana tipo B Ensaio MCP6 10 6,6-7,4 Ensaio MCP7 10 7,0-7,5

Temperatura da gua no reservatrio durante o ensaio 24C-26C 25C-26C 25C-27C 25C-26C propriamente dito Vazo do permeado durante a 4,8 5,5 7,5 6,0 compactao (a) (mL/min) Mdia da vazo do permeado 2,7 3,0 4,1 3,6 durante ensaio (mL/min) Concentrao final do permeado 22,8 35,6 43,7 57,7 de Neo-STX (g/L) Concentrao inicial do concentrado (g/L)
(b)

Neo-STX dC-STX STX Neo dC-STX STX

63,7 9,2 8,2 39,8 9,4 7,2

76,5 8,0 8,8 53,4 7,2 7,8

68,6 7,1 8,4 56,3 9,0 9,0

85,9 4,4 5,0 64,3 7,8 6,9

Concentrao final do concentrado (g/L) (c)

(a) compactao (condicionamento) realizado durante 1 hora com gua mili-Q sob presso de 1000kPa; (b)medida pela amostra coletada no reservatrio de alimentao; (c)medida pela amostra coletada no concentrado.

A primeira observao geral que a cepa T3 de Cylindrospermopsis raciborkii cultivada no LAA produz mais Neo-STX do que STX e dc-STX, j que as concentraes iniciais de Neo-STX no reservatrio de alimentao, na maioria dos ensaios, foram cerca de 9 vezes maiores do que para as demais variantes analisadas. Com relao ao comportamento operacional a membrana composta apresentou maior fluxo de permeado do que a membrana de acetato de celulose. Segundo o fabricante, para a membrana de acetato de celulose (tipo A), a taxa de fluxo de permeado de 47,5 L/m2/h em 1517kPa e para a membrana composta tipo B de 37,35 L/m2/h em 689kPa. Como os 100

dados do fabricante foram fornecidos em presses diferentes, pode-se esperar que em presso similar a membrana composta produza maior fluxo, mesmo considerando que a membrana composta utilizada neste trabalho um pouco mais hidrofbica (ngulo de contato de 58,3) do que a de acetato de celulose (54,2), pois a diferena pequena. As taxas de fluxos de permeado em gua deionizada, obtidos no presente estudo na fase de condicionamento sob presso de trabalho de 1000kPa foram de 20,6 e 23,6 L/m2/h para a membrana de acetato de celulose (tipo A) e de 32,1 e 25,7 L/m2/h para a membrana composta (tipo B). No se pode comparar diretamente esses valores com os dados do fabricante. No entanto, esperava-se um fluxo maior para a membrana tipo B j que a presso de trabalho era maior que a presso de referncia do fabricante. O fato da taxa de fluxo ter sido medido na primeira hora (o sistema podia no estar completamente estabilizado), as diferenas comuns entre diferentes cortes de membrana e as diferenas entre a produo em sistemas diferentes (mdulo espiral, plano, etc) podem ser a explicao para essas diferenas. Nos dois tipos de membrana, a vazo do permeado durante a fase de condicionamento foi maior do que no ensaio de nanofiltrao propriamente dito, o que era de se esperar j que a presso na compactao era maior e a gua era pura. No foi verificada reduo do fluxo de permeado durante o tempo de durao de nenhum dos ensaios apresentados na Tabela 5.4, o que leva a crer que no houve problema de obstruo e nem mudanas nas caractersticas fsicas da membrana, por exemplo, diminuio do tamanho de poros, que pudessem levar a diminuio do fluxo do permeado. Comparando a vazo do permeado entre os ensaios com um mesmo tipo de membrana, verificou-se uma variao na vazo do permeado na fase de condicionamento tanto entre as membranas de acetato, quanto entre as membranas compostas, o que parece ser normal para membranas de cortes diferentes, j que as variaes foram proporcionais tambm durante os ensaios de nanofiltrao. Levando em considerao a rea de 140 cm2 da membrana obtem-se uma taxa de fluxo de permeado de 11,7 L/m2.h. e 12,73 L/m2.h durante os ensaios de nanofiltrao com a membrana de acetato de celulose (tipo A) e taxas de fluxo maiores, 17,66 L/m2.h e 15,51 L/m2.h, para as membranas compostas (tipo B). interessante observar que os fluxos de 101

permeado no caso dos ensaios com -estradiol (Tabelas 5.1 e 5.2) foram prximos a esses valores, principalmente para a membrana composta. Considerando que a vazo do concentrado foi mantida constante em todos os experimentos (3,6 L/min), a taxa de recuperao de gua (vazo permeado/vazo concentrado) nos ensaios da gua tipo II foi cerca de 0,1%, considerada muito baixa se comparada a mdulos comerciais (10% ou mais dependendo do arranjo), da mesma forma que ocorreu para os ensaios com -estradiol, j comentado no item 5.1. As Figuras 5.9 e 5.10 apresentam as concentraes de saxitoxinas no permeado e no concentrado ao longo da durao de cada ensaio apresentado na Tabela 5.4.
1 00 90 80

saxitoxinas (g/L)

70 60 50 40 30 20 1 0 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

tem (h) po

concentrado N eo concentrado dC-STX

permeado N eo concentrado STX

(a)
1 00 90 80

saxitoxinas (g/L)

70 60 50 40 30 20 1 0 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

tem (h) po concentrado N eo concentrado dC-STX permeado N eo concentrado STX

(b)
Figura 5.9 - Ensaios de nanofiltrao para gua tipo II (mili-Q+saxitoxinas) e pH7, presso=689kPa, velocidade tangencial=0,4 m/s. (a) ensaioMAC5-membrana de acetato de celulose (tipo A), (b) ensaio MAC6- membrana tipo A.

102

1 00 90

saxitoxinas (g/L)

80 70 60 50 40 30 20 1 0 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

tem (h) po

concentrado N eo concentrado dC-STX

permeado N eo Concentrado STX

(a)
1 00 90 80

saxitoxinas (g/L)

70 60 50 40 30 20 1 0 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

tem (h) po

concentrado N eo concentrado dC-STX

permeado N eo concentrdo STX

(b) Figura 5.10 - Ensaios de nanofiltrao para gua tipo II (mili-Q+saxitoxinas) e pH7, presso=689kPa, velocidade tangencial=0,4 m/s. (a) ensaio MCP6-membrana composta (tipo B), (b) ensaio MCP7 membrana tipo B Avaliando-se qualitativamente o comportamento das membranas, observa-se que, no caso das membranas de acetato de celulose (Figura 5.9), a variante Neo-STX apresentou uma diminuio de concentrao no concentrado ao longo do tempo de durao do ensaio e, tambm, uma leve diminuio de concentrao no permeado. Nas membranas compostas (Figura 5.10), a concentrao de Neo-STX no permeado tendeu a permanecer constante, ao passo que a concentrao no concentrado apresentou um intenso decaimento inicial e posteriormente uma tendncia a estabilizao. Para os dois tipos de membranas o decaimento da concentrao do concentrado sugere a ocorrncia do fenmeno de adsoro

103

de Neo-STX nas membranas. Os dados sugerem que a membrana composta trabalhou muito prximo do equilbrio aps 2 a 4h de operao, enquanto que a membrana de acetato de celulose no atingiu o equilbrio de adsoro de Neo-STX at 10h de operao do sistema. No caso das variantes STX e dc-STX o comportamento foi diferente. Para essas saxitoxinas a concentrao do concentrado permaneceu mais constante ao longo do tempo para a membrana de acetato de celulose (tipo A), com uma tendncia a elevar-se com o tempo no caso dos ensaios com membrana composta (tipo B), sugerindo que, praticamente, no houve adsoro desses compostos nas membranas. interessante observar que para o -estradiol, com concentraes iniciais na alimentao mais prximas dessas variantes e tambm peso molecular mais semelhante, houve tendncia a adsoro nos dois tipos de membrana. No entanto, no se pode afirmar que essas duas variantes de saxitoxinas (STX e dc-STX) no tenham tendncia a adsoro nas membranas estudadas, pois o fato da NeoSTX se apresentar em maior concentrao pode ter influenciado na competitividade por pontos adsortivos da membrana, alm de que as caractersticas da Neo-STX podem ser mais favorveis a adsoro nessas membranas do que as outras variantes de saxitoxinas medidas. Alm disso, a concentrao tanto da STX quanto da dC-STX no permeado ficaram abaixo do limite de deteco do HPLC (3 g/L) na maioria do tempo de durao do ensaio, por isso no foram apresentadas nas Figura 5.9 e 5.10. Somente para a membrana composta (tipo B), no ensaio MCP6, as concentraes de dc-STX e STX no permeado na dcima hora foram iguais a 3,7 e 3,5 g/L, respectivamente. No ensaio MCP7 da membrana composta (tipo B), tambm na dcima hora, a concentrao de dc-STX no permeado foi de 3,2 g/L e a de STX continuou abaixo do limite de detecco.
5.2.2 - Eficincia de remoo e mecanismos

A partir dos dados e das observaes iniciais sobre os ensaios com a gua do tipo II, descritas no item 5.2.1, so discutidos no presente item as hipteses sobre os mecanismos atuantes na remoo das saxitoxinas pelas membranas estudadas e alguns fatores que podem ter influenciado esses mecanismos. Salienta-se que seria necessrio um nmero maior de repeties dos ensaios para se chegar a uma concluso definitiva a cerca do 104

comportamento das membranas e das saxitoxinas no processo de remoo deste contaminante. Diferentemente dos ensaios com -estradiol, onde a gua de alimentao era composta apenas do contaminante -estradiol e gua deionizada, nos ensaios voltados para avaliao da remoo de saxitoxinas (STX, dc-STX e neo-STX) esto presentes na gua tipo II outros compostos intracelulares dissolvidos originados da lise das clulas de
Cylindrospermopsis raciborkii cultivadas, alm, provavelmente, de outras variantes de

toxinas no identificadas. A presena, portanto, de outros compostos intracelulares pode ter interferido na remoo das saxitoxinas analisadas neste trabalho, mas ao mesmo tempo cabe mencionar que vrios compostos no conhecidos foram, tambm, removidos de forma eficiente no processo, o que importante quando se considera que a gua de abastecimento deve ser desinfetada e que os compostos intracelulares das algas e cianobactrias so considerados precursores de sub-produtos potencialmente txicos da desinfeco. Um exemplo claro da remoo de outros compostos intracelulares vem da observao visual da colorao do permeado com o tempo de durao do ensaio. A cor amarela/esverdeada tpica do cultivo foi eliminada dando lugar a um permeado de aspecto transparente e incolor, indicando a remoo de pigmentos que causavam cor. Esse aspecto pode ser visualizado na Figura 5.11.

Figura 5.11 - Amostra de permeado coletada na dcima hora de durao do ensaio e de concentrado coletada no incio do ensaio de remoo de saxitoxinas por nanofiltrao.

105

Outro exemplo de remoo de outros compostos intracelulares vem da observao dos cromatogramas gerados durante a deteco de saxitoxinas (STX, dc-STX, neo-STX). Verifica-se nos cromatogramas da Figura 5.12, a presena de vrios picos no concentrado que no esto presentes no permeado, que so outros compostos orgnicos ou outras variantes de saxitoxinas. Esses compostos parecem ter sido quase que completamente removidos pela membrana de acetato de celulose (tipo A) e bastante reduzidos para membrana composta (tipo B), visto por suas curvas do permeado nos cromatogramas. Apesar de ter sido apresentado apenas um exemplo, esse comportamento, de uma forma geral foi verificado em todos os ensaios mostrados nas Figuras 5.9 e 5.10.
mV
5000

Ensaio MAC5- membrana tipo A-Concentrado-10h

Ensaio MAC5- membrana tipo A-Permeado-10h

4000

3000

2000

X NeoSTX

1000

dc-STX

STX

0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 min

mV
5000

(a)

Ensaio MCP6- membrana tipo B-Permeado-10h

Ensaio MCP6- membrana tipo B-Concentrado-10h

4000

3000

2000

1000

NeoSTX dc-STX STX

0 0.0 2.5 5. 0 7.5 10.0 12.5 min

(b)

Figura 5.12 - Cromatogramas de ensaios de nanofiltrao. (a) ensaio MAC5 para a membrana de acetato de celulose (tipo A); (b) ensaio MCP6 para a membrana composta (tipo B).

106

Acredita-se que o pico identificado como X na Figura 5.12 possa ser um conjunto de variantes de saxitoxinas GTX. Em um teste preliminar, que consistiu da injeo de um padro de GTX no CLAE usando a fase mvel e demais condies cromatogrficas para deteco de STX, dc-STX e Neo-STX, obteve-se um pico no mesmo tempo de reteno do pico X. Importante comentar que para efetiva quantificao das variantes de GTX seria necessria nova injeo das amostras com fase mvel e condies cromatogrficas apropriadas, diferentes da utilizada neste trabalho. Para as variantes Neo-STX, STX e dc-STX, a remoo de saxitoxinas pelas membranas foi calculada com base na equao 4.1, apresentada no Captulo 4. Como as rplicas apresentaram comportamentos qualitativos semelhantes foram escolhidos para a anlise o ensaio MAC6 da membrana de acetato de celulose (tipo A) e o ensaio MCP7 da membrana composta (tipo B) por apresentarem porcentagens de remoes mais conservadoras. As curvas de remoo ao longo do tempo de durao desses ensaios so apresentadas na Figura 5.13.
1 00

Remoo de Neo-STX (%)

90 80 70 60 50 40 30 20 1 0 0 0 2 4 6 8 1 0 1 2

tem (h) po remoo N eo-STX-Membrana tipo B remoo N eo-STX-Membrana tipo A

Figura 5.13 - Remoo de Neo-STX para gua tipo II (mili-Q+material da lise celular includo saxitoxinas), pH7. Ensaio MAC6 - membrana tipo A e ensaio MCP6-membrana tipo B. Como pode ser observado na Figura 5.13, a remoo apresentada apenas da variante Neo-STX, j que as concentraes de dc-STX e STX nos permeados ficaram, em sua maioria, abaixo do limite de deteco do CLAE (3 g/L). Dessa forma no foi possvel calcular a remoo dessas variaes de saxitoxina. Lana-se aqui, tendo em vista o comportamento da membrana composta na dcima hora de operao do ensaio MCP6, em 107

que detectou a concentrao de dc-STX e STX no permeado iguais a 3,7 e 3,5 g/L, respectivamente, a hiptese de que a membrana composta utilizada neste trabalho apresenta menor eficincia de remoo para essas variantes do que a membrana de acetato de celulose. Para comprovar essa hiptese, seria necessrio trabalhar com gua bruta com concentraes de STX e dc-STX maiores que as avaliadas neste trabalho, se fossem mantidos os valores de todos os outros parmetros. A membrana composta (tipo B) apresentou porcentagem de remoo final de Neo-STX, nos ensaios com valor de pH em torno de 7, de aproximadamente 10%, enquanto que para a membrana de acetato de celulose (tipo A) a remoo de Neo-STX foi de cerca de 33%. As porcentagens de remoes foram menores do que para o -estradiol nos ensaios sem correo de pH. No entanto, as curvas de remoes dos ensaios para saxitoxinas (Figura 5.13) tenderam a ser constantes ao longo do tempo de durao dos ensaios, enquanto que nos ensaios com o -estradiol sem correo de pH, as curvas apresentaram tendncia decrescente ao longo do tempo de duraao dos ensaios. Dessa forma, no se podem comparar os valores absolutos de porcentagens de remoo entre os ensaios com estradiol e saxitoxinas. Alm disso, o fato de a concentrao inicial de Neo-STX ser bem maior do que a concentrao de -estradiol e de existirem outros interferentes na gua de Estudo tipo II (que continha a saxitoxinas), pode ter influenciado no processo de remoo das saxitoxinas tanto positivamente quanto negativamente. Cabe destacar, tambm, que, apesar dos dois compostos serem orgnicos e apresentarem pesos moleculares semelhantes, a estrutura molecular e grupos funcionais so diferentes e, portanto, o comportamento na nanofiltrao tende tambm a ser diferente. Nesse sentido, cabe salientar duas diferenas entre o -estradiol e as saxitoxinas que parecem, segundo a literatura analisada no Capitulo 3, interferir na remoo de compostos orgnicos. As saxitoxinas so hidroflicas (log P negativo) e em pH neutro o grupo guanidino 1,2,3 possui carga positiva e o 7,8,9 parcialmente desprotonado, enquanto que o -estradiol hidrofbico e neutro no valor de pH em torno de 5 (valor no qual foram realizados os ensaios). As remoes de Neo-STX (hidroflica) foram menores do que para o -estradiol (hidrofbico). Segundo Braeken et al. (2005) solutos hidrofbicos podem adsover nas membranas e permear atravs das membranas mais facilmente, enquanto molculas 108

hidroflicas, que possuem alta afinidade pela gua, apresentam melhores remoes por membranas de nanofiltrao do que os solutos hidrofbicos tamanhos semelhantes. Para explicar a correlao entre hidrofobicidade e remoo por membranas de nanofiltrao, Braeken et al. (2005), consideram a estrutura molecular dos compostos orgnicos em geral. Molculas hidroflicas, geralmente, possuem mais grupos hidroxilas (-OH) ou carbonila (=O), os quais podem formar pontes de hidrognio com molculas de gua. Devido a esses grupos polares, compostos hidroflicos tm mais alta afinidade pela gua e permeiam menos atravs da estrutura da membrana. Assim, quando esses compostos se associam com as molculas de gua, o dimetro efetivo (hidratado) da molcula pode aumentar. Para compostos hidrofbicos que possuem menos grupos polares, podero pemear mais facilmente atravs de membranas. No caso do presente estudo a molcula de Neo-STX possui mais grupos hidroxilas (trs) e carbonila (um) do que o composto hidrofbico estradiol, portanto com mais possibilidades de formao de pontes de hidrognio, mas apresentou menores porcentagens de remoo. Contradizendo as observaes de Braeken
et al. (2005) e em concordncia com o presente trabalho de mestrado, Yoon et al. (2007)

verificaram aumento de remoo de diversas substncias com o aumento do log Kow (hidrofobicidade). Alm das concentraes iniciais e interferentes que podem ter influenciado na remoo, a interao eletrosttica deve ser levada em considerao para explicar, tambm, as baixas taxas de remoo das saxitoxinas. As hipteses de Braeken et al. (2005) parecem ser coerentes para solutos neutros, no entanto a saxitoxina possui carga e isso pode ter influenciado negativamente no processo de remoo. As foras de atrao entre soluto e membrana permitem que o soluto se difunda e permeie mais facilmente atravs da membrana (Verliefde et al, 2007). O fato da Neo-STX apresentar uma carga positiva no grupo guanidino 1,2,3, facilita a proximidade da saxitoxina com a membrana e favorece as interaes hidrofbicas podendo facilitar a permeao deste contaminante atravs das membranas. Interessante observar, tambm, que o peso molecular da Neo-STX (315,3g/mol) menor que o peso molecular de corte da membrana de acetato de celulose (tipo A) e esta membrana apresentou maior remoo desse composto do que a membrana composta (tipo B), com peso molecular de corte mais baixo, inclusive abaixo do peso molecular da NeoSTX. Como discutido por alguns autores, nem sempre o peso molecular do contaminante e 109

o MWCO da membrana so os melhores parmetros para predizer a remoo de um contaminante. No caso de molculas carregadas a rejeio parece ser governada por efeitos eletrostticos e o efeito de peneiramento parece ser menos pronunciado (Verliefde et al.,
2007). No entanto, interessante que em trabalhos futuros se obtenha, tambm, o tamanho

do poro da membrana e compare este com o tamanho da molcula, com intuito de se entender melhor o efeito do peneiramento. No se encontrou uma explicao para a melhor rejeio de Neo-STX na membrana tipo A do que para a membrana tipo B. Os ngulos de contato das duas (que representa a hidrofobicidade) so bem prximos e parece no ser a razo. A membrana composta (tipo B) possui uma carga negativa maior do que a membrana de acetato de celulose (tipo A) e esse fato pode ter contribudo para uma maior atrao entre a neo-STX e a membrana composta, prejudicando, assim, a eficincia de remoo de Neo-STX por esta membrana.
5.2.3 - Influncia do pH na remoo das saxitoxinas

Para a membrana de acetato de celulose, que apresentou melhor remoo das saxitoxinas avaliadas, foram realizados novos ensaios para verificao da influncia do valor de pH na remoo. Foram realizados dois ensaios, um com valor de pH em torno de 5 e outro com valor de em torno de pH 10,5. Cabe mencionar, que o fabricante recomenda para a membrana de acetato de celulose uma faixa de valor de pH de trabalho entre 2 e 8. No entanto, para avaliar o efeito de um pH acima do pKa dos contaminantes e para obter o mesmo pH utilizado nos ensaios com -estradiol , utilizou-se o pH 10,5. Embora o uso prolongado da membrana nesse valor de pH possa causar danos a sua estrutura, em funo do tempo de durao do ensaio estima-se que nenhum dano tenha ocorrido. O valor de pH 5 foi escolhido para efeitos de comparao com os ensaios com -estradiol. No caso destes ensaios com correo de valor de pH da gua tipo II, foi realizado um controle de degradao natural das saxitoxinas por meio da observao do comportamento da concentrao da amostra inicial de concentrado ao longo do tempo de durao do ensaio, j que a literatura aborda bastante a questo de intertransformaes das saxitoxinas, principalmente em valores de pH elevados (Ceballos et al., 2006; Jones e Negri, 1997; Castro et al., 2004; Indrasena e Gill, 1999; Indrasena e Gill, 2000). Foram retiradas trs amostras da gua de estudo, antes do incio do ensaio. Uma, antes da correo do pH e 110

duas depois da correo do valor de pH. Depois do pH corrigido, dos 200 ml retirados do reservatrio de alimentao, um volume de 100 ml foi separado e imediatamente congelado para posterior anlise da concentrao inicial das saxitoxinas. Os outros 100 ml foram colocados em um bequer (fora do sistema de separao) que ficou sob agitao durante todo o perodo ensaio. Ao final do ensaio (aps oito horas), uma amostra dessa alquota do bequer foi retirada para anlise da concentrao de saxitoxinas. A Tabela 5.5 e a Figura 5.14 apresentam os resultados obtidos nos ensaios realizados com pH corrigido.
Tabela 5.5 - Principais resultados dos ensaios de nanofiltrao para gua tipo II, com correo de pH e para membrana de acetato de celulose (tipo A) Ensaio MAC7 Ensaio MAC8 Ensaio pH em torno de 5 pH em torno de 10,5 Durao do ensaio (h) Valor de pH Temperatura da gua no reservatrio durante o ensaio de nanofiltrao propriamente dito Vazo do permeado durante a compactao (a) (mL/min) Mdia da vazo do permeado durante ensaio (mL/min) Concentrao final do permeado de Neo (g/L) Concentrao inicial do concentrado (g/L) (b) Neo dC-STX STX Neo dC-STX STX 8 4,8-5,7 23C-26C 5,2 3,0 44,4 109,4 9,7 9,9 74,3 11,6 12,1 8 10,4-11,0 23C -26C 5,1 3,0 17,8 99,3 6,0 4,2 129,8 7,1 8,4

Concentrao final do concentrado (g/L) (c)

(a) compactao (condicionamento) realizado durante 1 hora com gua mili-Q sob presso de 1000kPa; (b)medida pela amostra coletada no reservatrio de alimentao; (c)medida pela amostra coletada no concentrado.

111

Quanto aos parmetros operacionais (Tabela 5.5), observou-se que no houve reduo do fluxo do permeado durante os ensaios com valor de pH em torno de 5 e em torno de 10,5. A taxa de fluxo de permeado durante esses ensaios foi de cerca de 13 L/m2.h. A recuperao desses ensaios, da mesma forma que nos ensaios com valor de pH7, foi de cerca de 0,1%.

10 1 1 00 90

saxitoxinas (g/L)

80 70 60 50 40 30 20 1 0 0 0 2 4

tem (h) po

1 0

1 2

concentrado N eo concentrado dC-STX

permeado N eo concentrado STX

(a)
1 30 1 20 10 1

saxitoxinas (g/L)

1 00 90 80 70 60 50 40 30 20 1 0 0 0 2 4

tem (h) po

1 0

1 2

concentrado N eo concentrado dC-STX

permeado N eo concentrado STX

(b) Figura 5.14 - Ensaios de nanofiltrao para gua tipo II, com alterao de pH e para membrana tipo A. presso=689kPa, velocidade tangencial=0,4 m/s (a) ensaio MAC7 (pH5) (b) ensaio MAC8 (pH10,5) O comportamento qualitativo nos ensaios com saxitoxinas, no valor de pH em torno de 5 (Figura 5.14a) foi similar aos ensaios com valor de pH em torno de 7 para a mesma membrana (Figura 5.9), ou seja, a concentrao de Neo-STX no concentrado decaiu com o 112

tempo e a do permeado tambm. No entanto, no caso do pH 5 a reduo da concentrao de Neo-STX no concentrado foi mais evidente e mais rpida nas primeiras quatro horas. O comportamento da concentrao de dC-STX e STX tambm foi similar ao observado no pH 7, ou seja, praticamente no se verificou adsoro dessas variantes na membrana e a concentrao no permeado foi abaixo do limite de deteco do CLAE. A remoo final de Neo-STX foi de cerca de 40%, praticamente a mesma que no ensaio com valor de pH 7, na oitava hora (42%). Na avaliao da degradao natural da toxina com o tempo de durao do ensaio, observou-se que no houve diferenas significativas de concentrao de saxitoxinas (STX, dc-STX e Neo-STX) entre a amostra no tempo zero sem correo de pH, na amostra coletada com o pH corrigido para 5 no tempo zero e depois de oito horas no valor de pH em torno de 5, conforme pode ser visualizado nos cromatogramas da Figura 5.15. No entanto, observou-se uma pequena degradao no pico X depois de 8 horas. Conforme j comentado, esses picos podem ser da variante GTX, mas no foi objetivo desse trabalho analis-los. No ensaio com valor de pH em torno de 10,5, os comportamentos da membrana de acetato de celulose e dos compostos avaliados (STX, dc-STX e Neo-STX) foram diferentes dos outros ensaios. No h indcios de adsoro, uma vez que na Figura 5.14b verifica-se um aumento da concentrao de Neo-STX no concentrado e a concentrao dessa variante no permeado, apesar de tendncia ao crescimento com o tempo, foi bem menor que nos outros ensaios. Cabe salientar que na prtica, em operao contnua, a concentrao do concentrado tende a cair nos estgios iniciais de operao e quando o sistema estabiliza, essa concentrao tende a voltar quela inicial. No caso deste estudo, como o concentrado foi retornado constantemente para o reservatrio (operao semi-contnua), quando h um equilbrio do sistema a concentrao do concentrado tende a se elevar podendo atingir valores maiores do que os iniciais.

113

mV

2250 2000 1750 1500 1250 1000 750 500 250 0 0.0

Ensaio MAC7- membrana tipo A-Reservatrio 0h-sem corr. pH Pico X

Ensaio MAC7membrana tipo AReservatrio 0h-pH5

NeoSTX

dc-STX STX

2.5

5.0

7.5

10.0

12.5

min

mV
2500

Ensaio MAC7membrana tipo A-Becker8h-pH 5 Pico X

NeoSTX

Ensaio MAC7membrana tipo AReservatrio- 0h-pH5

2000

1500

1000

500

dc-STX STX

0 0.0

2.5

5.0

7.5

10.0

12.5

m in

Figura 5.15 - Cromatogramas do teste de degradao natural do ensaio para membrana tipo A pH=5

A remoo final de Neo-STX no ensaio com valor de pH em torno de 10,5 foi de cerca de 86%, bem maior que nos outros ensaios realizados com valor de pH mais baixo. A concentrao de STX e dC-STX no permeado ficou, mais uma vez, abaixo do limite de deteco do CLAE em todo o perodo de durao do ensaio e a concentrao no concentrado permaneceu constante. O cromatograma da Figura 5.16 ilustra a remoo dos diferentes compostos no ensaio com valor de pH 10,5, salientando-se que todos os picos iniciais foram praticamente eliminados durante o processo de nanofiltrao.

114

mV
5000

4000

Ensaio MAC8membrana tipo A concentrado 8h NeoSTX Pico X

Ensaio MAC8membrana tipo A permeado-8h

3000

2000

1000

dc-STX STX
0 0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 min

Figura 5.16 - Cromatograma de remoo de saxitoxinas com valor de pH 10,5 para membrana de acetato de celulose (tipo A).

Acredita-se que a maior remoo de saxitoxinas obtida com o aumento do valor de pH pode ser atribuda s interaes eletrostticas que dominaram o processo de remoo. Com elevao do pH acima do pKa do composto, ocorre dissociaes e as saxitoxinas vo se tornando desprotonadas e tendo suas cargas negativas aumentadas. Segundo Llewellyn (2006) os grupos guanidinos das saxitoxinas so essenciais na sua interao com outras molculas. O grupo 7,8,9, com pKa prximo de 8 nas trs variantes (STX, dc-STX e Neo), se torna desprotonado com pH acima desse valor. No valor de pH analisado (10,5), pode ser que a maior influncia tenha sido desse grupo, j que o grupo guanidino 1,2,3 possui pKa maior (cerca de 11,5) que o pH estudado. Para Neo-STX, no pH fisiolgico, o radical N1-hidroxila parcialmente desprotonado produzindo uma carga negativa prximo do grupo 1,2,3 guanidino, portanto provvel que essa carga negativa se eleve com pH acima do seu pKa, tambm. A repulso evita um maior contato do soluto com a membrana diminuindo, assim a influncia da adsoro como foi visto na Figura 5.14 e dificulta a possibilidade de contato com a membrana evitando que a Neo-STX permeie atravs dela. Comportamento similar ocorreu para o -estradiol nos ensaios com valor de pH em torno de 10,5.

115

Quanto avaliao da degradao natural das saxitoxinas no valor de pH em torno de 10,5 pode-se verificar pelos cromatogramas da Figura 5.17 que houve alterao principalmente no pico X (possvelmente variantes de GTX) e na STX. Analisando-se a Figura 5.17, observa-se que com a elevao do valor de pH para 10,5 a STX um pouco reduzida e surge um pico Y. Depois de 8 horas a STX aumenta novamente, o pico Y eliminado e o pico X um pouco reduzido. No caso da NeoSTX, houve pouca ou nenhuma variao. Esse comportamento deve ser confirmado por meio de maiores nmeros de repeties em trabalhos futuros. Como as variaes de STX nos cromatogramas foram pequenas pouco provvel que esse comportamento seja uma intertransformao de saxitoxinas. Alm disso, apesar de diversos autores relatarem transformaes de saxitoxinas, as condies de degradao mais rpida so em pHs elevados e altas temperaturas, por volta de 100 C (Indrasena e Gill, 1999). Alguns estudos verificaram degradaes de saxitoxinas em 25C (mesma temperatura utilizada no presente trabalho), mas depois de dias ou meses (Indrasena e Gill, 2000). No caso da anlise das saxitoxinas foram realizados ensaios de dessoro quando se testou os valores de pH 5 e pH 10,5. Em ambos, a concentrao no permeado foi abaixo do limite de deteco do CLAE e a distribuio de picos nos cromatogramas indicou que as concentraes de saxitoxinas tenderam a zero. Isso era de se esperar para o caso do ensaio com valor de pH em torno de 10,5 onde praticamente no houve adsoro. Para o caso do ensaio com valor de pH em torno de 5, talvez como o pH do ensaio de dessoro foi baixo (o da gua mili-Q) o tempo de dessoro no foi suficiente para dessorver todo material da membrana.

116

mV

3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0 0.0

Ensaio MAC8membrana tipo AReservatrio- 0h-sem corr. pH

Pico Y NeoSTX Pico X

Ensaio MAC8membrana tipo AReservatrio- 0hpH10,5

dc-STX STX
2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 min

(a)
3500

mV
3000 2500 2000 1500 1000 500 0 0.0

Ensaio MAC8membrana tipo Abecker-8h-pH 10,5

Pico Y NeoSTX

Ensaio MAC8membrana tipo Areservatrio- 0hpH10,5

Pico X

dc-STX

STX

2.5

5.0

7. 5

10.0

12.5

min

(b)

Figura 5.17 - Cromatogramas do teste de degradao natural de saxitoxinas do ensaio para membrana de acetato de celulose (tipo A) e valor de pH em torno de 10,5

117

6 - CONCLUSES E RECOMENDAES
Este trabalho avaliou a remoo dos contaminates orgnicos, -estradiol e saxitoxinas, em gua mili-Q, por meio de um sistema de separao por membranas em escala de bancada com fluxo do tipo tangencial, utilizando-se dois tipos de membrana, uma de acetato de celulose e outra composta (poliamida sobre suporte de polissulfona). A presso de trabalho foi mantida constante em cerca de 689kPa e a velocidade tangencial em 0,4 m/s. Com base nos resultados dos ensaios, algumas observaes podem ser apresentadas sobre parmetros operacionais, eficincias de remoo dos contaminantes, mecanismos envolvidos no processo de remoo, influncia do pH da soluo e dos diferentes tipos de membrana no processo de remoo. Essas observaes sero teis para abrir um leque de reflexes sobre a remoo dos contaminantes orgnicos estudados neste trabalho por nanofiltrao, questo ainda muito pouco estudada no Brasil. Entretanto, trata-se de um estudo de carter prospectivo e as concluses e observaes discutidas no presente Captulo devem ser validadas e complementadas em trabalhos futuros. Nas condies operacionais analisadas, observou-se uma recuperao de gua (vazo do permeado/vazo do concentrado) muito baixa (cerca de 0,1%) em todos os ensaios realizados neste trabalho se comparada a mdulos comerciais (cerca de 10% ou mais dependendo do arranjo). Esse resultado pode ter sido influenciado pela opo de se adotar uma velocidade tangencial maior para minimizar o efeito da polarizao da concentrao. O efeito da velocidade tangencial na remoo de contaminantes orgnicos controverso na literatura, por isso recomenda-se que em trabalhos futuros sejam avaliados outros cenrios de parmetros, como diferentes velocidades tangenciais e presses de trabalho maiores para verificar a influncia dessas caractersticas na eficincia de remoo das saxitoxinas e -estradiol pelas membranas de nanofiltrao estudadas, sob condio de maior recuperao de gua. As taxas de fluxo do permeado durante os ensaios de nanofiltrao foram um pouco maiores no caso das membranas compostas de poliamida do que para as membranas de acetato, tanto nos ensaios com gua contaminada com saxitoxinas quanto com gua

118

contaminada com -estradiol. O valor de pH da gua parece no ter tido influncia nas taxas de fluxo do permeado, j que para o mesmo contaminante, os ensaios em diferentes valores de pH de soluo no resultaram em fluxos de permeados notadamente diferentes. No houve reduo significativa da vazo do permeado ao longo do tempo de durao de cada um dos ensaios (mximo de 10 horas), com exceo da primeira hora, onde se acredita que o sistema no estava totalmente estabilizado. Isso indica que no houve problema de depsitos da membrana e nem mudanas na sua caracterstica, como alterao no dimetro dos poros que pudessem alterar a vazo. Esse fato foi observado independente da concentrao inicial de contaminate ser baixa (10 g/L na gua contaminada com estradiol) ou mais alta (mximo de cerca de 109 g/L de Neo-STX na gua contaminada com saxitoxinas e outros compostos intracelulares) e independente do valor de pH da gua de estudo do ensaio. A eficincia de remoo do -estradiol ao final de 10 horas (tempo de durao mximo dos ensaios) foi maior para a membrana composta (cerca de 79%) do que para a membrana de acetato de celulose (cerca de 55%). No entanto, como as curvas de remoo de -estradiol pelas duas membranas estudadas permaneceram decrescentes ao longo de todo ensaio, esses valores ainda esto superestimados e devem ser considerados apenas em termos relativos. Na remoo do -estradiol, o fenmeno da adsoro ocorreu nas duas membranas estudadas. A adsoro foi mais acentuada, em geral, nas duas primeiras horas, mas o equilbrio no foi alcanado at as 10 horas de operao analisadas. Assim, recomenda-se a realizao de ensaios com tempo de durao mais longo para se alcanar o limite de adsoro da membrana e para se obter a eficincia de remoo real das membranas estudadas. Alm disso, estudos da literatura alcanaram o equilbrio da remoo de hormnios similares em menos tempo, por isso interessante, tambm, realizar ensaios com alteraes nos parmetros, como concentrao inicial do contaminante, velocidade tangencial ou presso para verificar a influncia desses parmetros no tempo de alcance do equilbrio de adsoro. Os ensaios de dessoro realizados parecem no ter sido eficientes para verificao da massa de contaminante adsorvida na membrana. Apesar disso, o fato da concentrao de 119

estradiol no permeado ser significativa (cerca de 3ug/L) indica a possibilidade de o estradiol permear atravs da membrana e contaminar o permeado, fazendo da adsoro do -estradiol um risco para o tratamento de gua que deve ser avaliado com mais detalhes em trabalhos futuros. Alm da adsoro, acredita-se que o mecanismo de peneiramento contribuiu no processo de remoo do -estradiol. A membrana de acetato com peso MWCO maior que o peso molecular do estradiol apresentou menor porcentagem de remoo do que a membrana composta com menor MWCO. O efeito eletrosttico no foi considerado atuante nos ensaio com pH em torno de 5, pois a carga do estradiol neutra nessa condio. A adsoro do -estradiol na membrana composta foi bastante reduzida quando o valor de pH da soluo foi elevado de 5 para 10,5. Esse comportamento tambm foi verificado por diversos autores. No entanto, diferentemente de alguns autores as remoes nos ensaios com valor de pH 10,5 (cerca de 87%) foram superiores quelas em condies de valor de pH mais baixo. Atribui-se esse comportamento ao fato de que em valor de pH acima da constante de dissociao cida do -estradiol, este adquire uma carga negativa e a repulso eletrosttica parece ser o mecanismo que dominou o processo de remoo em detrimento da adsoro. Recomenda-se que sejam realizados experimentos com valores de pH na faixa utilizada comumente no tratamento de gua para avaliao de seus impactos na remoo do contaminante. Nos ensaios com valor de pH em torno de 7, a membrana de acetato de celulose mostrouse mais eficiente na remoo de saxitoxinas. A membrana composta apresentou porcentagem de remoo final (na dcima hora de ensaio) de Neo-STX de aproximadamente 10%, enquanto que para a membrana de acetato de celulose, a remoo de Neo-STX foi de cerca de 33%. As remoes das variantes dc-STX e STX no foram calculadas para nenhum dos ensaios, pois suas concentraes no permeado ficaram abaixo do limite de deteco do CLAE (3 g/L) na maioria das amostras coletadas. Cabe salientar que os outros compostos intracelulares dissolvidos originados da lise das clulas de Cylindrospermopsis raciborkii, alm, provavelmente, de outras variantes de toxinas no identificadas, foram removidos de forma eficiente no processo de nanofiltrao, o que importante quando se considera que a gua de abastecimento deve ser desinfetada e 120

que os compostos intracelulares das algas e cianobactrias so considerados precursores de sub-produtos potencialmente txicos da desinfeco. Recomenda-se que em estudos futuros sejam realizadas anlises quantitativas de matria orgnica, cor, outras variantes de saxitoxinas para uma melhor avaliao do potencial da membrana e das interferncias cruzadas. Tanto nos ensaios com valor de pH 7 quanto no valor de pH 5, a variante Neo-STX apresentou uma reduo de concentrao no concentrado ao longo do tempo de durao do ensaio para a membrana de acetato de celulose. Nas membranas compostas, a concentrao no concentrado apresentou uma intensa diminuio inicial e posteriormente uma tendncia estabilizao. Para os dois tipos de membranas o decaimento da concentrao do concentrado sugere a ocorrncia do fenmeno de adsoro de Neo-STX nas membranas. No caso das variantes STX e dc-STX a concentrao do concentrado permaneceu mais constante ao longo do tempo, indicando que, praticamente, no houve adsoro desses compostos em nenhuma das duas membranas. No entanto, o fato da Neo-STX se apresentar em maior concentrao na gua de estudo pode ter influenciado na competitividade por pontos adsortivos da membrana. Recomenda-se o estudo isolado dessas variantes para se avaliar seu potencial de adsoro nas membranas. A membrana com maior peso molecular de corte (acetato de celulose), maior inclusive do que o peso molecular da Neo-STX, apresentou maior porcentagem de remoo dessa variante de saxitoxina do que a membrana composta. No se encontrou uma explicao para essa melhor rejeio de Neo-STX. Os ngulos de contato (que representa a hidrofobicidade) das duas membranas so bem prximos e parece no ser a razo. A membrana composta possui uma carga negativa maior do que a membrana de acetato de celulose e esse fato pode ter contribudo para uma maior atrao entre a neo-STX e a membrana composta, prejudicando, assim, a eficincia de remoo de Neo-STX por esta membrana. A elevao do valor de pH da soluo de 7 para 10,5 influenciou positivamente na remoo das saxitoxinas pela membrana de acetato de celulose e praticamente eliminou a adsoro de Neo-STX nesta membrana. A remoo final de Neo-STX foi de cerca de 86%, bem maior que nos outros ensaios realizados com valor de pH mais baixo. Salienta-se, 121

ainda, que todos os picos observados no cromatograma da gua de estudo foram praticamente eliminados durante a nanofiltrao nesse valor de pH. Isso indica a remoo dos diferentes compostos presentes. Da mesma forma que para o -estradiol, recomenda-se que sejam realizados ensaios com valores de pH na faixa utilizada comumente no tratamento de gua para avaliar seus impactos na remoo das saxitoxinas. O fato de, por um lado, o -estradiol ser hidrofbico e as saxitoxinas serem hidroflicas, e por outro lado, as saxitoxinas apresentarem carga positiva no grupo guanidino 1,2,3 enquanto o -estradiol neutro, em valores de pH da gua mais prximos da neutralidade, podem justificar as diferenas nos processos de remoo dos dois compostos. No entanto, o papel desses parmetros na remoo ainda pouco entendido e merece estudos mais aprofundados. Apesar de as saxitoxinas apresentarem mais grupos funcionais capazes de formar pontes de hidrognio, no presente trabalho, as saxitoxinas apresentaram menores eficincias de remoes do que o -estradiol. Uma hiptese que a carga positiva, associada ao grupamento guanidino, pode ter facilitado a aproximao das saxitoxinas da membrana, favorecendo uma posterior permeao atravs da membrana. A elevao do valor de pH, a cerca de 10,5, influenciou positivamente a remoo do estradiol e das saxitoxinas, provavelmente pela alterao nas cargas eltricas desses compostos, aumentando a eficincia de remoo dos contaminantes estudados para valores bem semelhantes entre si, mesmo a avaliao tendo sido realizada para a membrana composta no caso do -estradiol e para a membrana de acetato de celulose no caso das saxitoxinas. Esse comportamento pode indicar que o efeito eletrosttico exerce uma funo importante no processo de remoo dos contaminantes estudados.

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