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captulo

PROTENAS

Funes das protenas:

Catalticas (enzimas) Estruturais (colagnio, elastina, -queratina) Transporte (imunoglobolinas, interfero) Contrcteis (actina e miosina) Hormonas (insulina) Toxinas

Em geral o tema protena usado para molculas composta por mais de 50 aminocidos e o termo pptido para molculas com menos de 50 aminocidos. Alguns polipptidos tm um baixo peso molecular (< 5000) e so referidos como pptidos.

Protenas so polmeros de aminocidos

Todos os diferentes tipos de protenas so inicialmente sintetizados como polmeros de apenas 20 aminocidos. Estes aminocidos comuns definem-se como aqueles para o qual existe pelo menos um codo especfico no cdigo gentico. Alm dos aminocidos comuns, as protenas podem conter aminocidos derivados, que so geralmente formados por uma reaco enzimtica entre aminocidos comuns depois de estes estarem incorporados na estrutura da protena (ex: cistina, desmosina, isodesmosina que se encontram na elastina; hidroxiprolina e hidroxilizina no colagnio).

 Estrutura geral de um aminocido Ao carbono (pois est ligado a um grupo carboxilo) esto ligados um grupo carboxilo, um grupo amina, um tomo de hidrognio e um grupo qumico especfico, chamado R ou cadeia lateral, que a estrutura que define e diferencia os 20 aminocidos.

Os aminocidos tm um carbono assimtrico Os aminocidos comuns tm 4 substituintes (R, H, COO, NH3 ) covalentemente ligados ao C. A um carbono com quatro substituintes todos diferentes e dispostos em forma tetradrica diz-se carbono assimtrico e existe em duas formas enantiomricas. Assim, todos ao aminocidos comuns exibem isomerismo ptico excepto a glicina, cujo R=H. Um aminocido pode projectar o grupo -NH3 para a esquerda ou para a direita do esqueleto da molcula. Se o - NH3 projectado para a esquerda dizse que um L-aminocido. O seu enantimero ptico, que projecta o - NH3 para a direita do esqueleto da molcula chama-se D-aminocido. A designao L e D refere-se ao sentido da rotao da molcula quando nela incide luz polarizada. Como os aminocidos as protenas so assimtricos, as protenas que os contm vo tambm exibir propriedades assimtricas. CONFIGURAO L vs CONFIGURAO D

Aminocidos formam polmeros atravs da ligao peptdica Quimicamente a reaco de polimerizao das protenas uma condensao + desidratao. O grupo carboxilo de um aminocido liga-se ao grupo amina de outro aminocido, eliminando uma molcula de gua e formando uma ligao covalente, a ligao peptdica, ou grupo amida. A conjugao de vrios aminocidos gera dipptidos, tripptidos ou polipptidos e protenas de sequncias de aminocidos especficos. A sequncia de aminocidos de uma cadeira polipeptdica corresponde estruttura primria da protena.

Uma ligao peptdica pode ser representada por dois ismeros ressonantes. As ligaes peptdicas so hbridas ressonantes destes dois ismeros tendo um carcter parcial de ligaes dupla intermdia entre C-N e C=N. Como consequncia de este carcter da dupla ligao no h rotao dos tomos de C e N, uma vez que os tomos ligados ao C-N esto todos no mesmo plano. A ligao peptdica pode ter uma configurao trans entre os tomos de O e H, que a mais estvel, ou configurao cis que coloca as cadeias laterais do mesmo lado o que provoca foras repulsivas entre elas. As ligaes peptdicas das protenas so todas do tipo trans excepto quando h resduos de prolina (R heterocclico). Uma cadeia de aminocidos sequencialmente numerada a partir da extremidade que contm o NH2 terminal. Resduo aminocido o nome que se d ao aminocido quando est numa cadeia peptdica. Uma cadeia peptdica sozinha no determina por si s a formao de um polipptido.

Cistina, um aminocido derivado

A cistina um aminocido derivado encontrado em muitas protenas. formado a partir da oxidao de dois grupos tiol (SH ) das cadeias laterais de duas cistenas, dando origem a uma ligao covalente do tipo dissulfito. Ligao dissulfito intercadeia e intracadeia tm um papel importante na estabilizao das estruturas proteicas.

Carga e propriedades qumicas dos aminocidos e protenas

Aminocidos e protenas tm grupos de tomos ionizveis (grupos amina e carboxilo). Para formar a base conjugada, a forma cida de um aminocido

liberta um proto e vice-versa. A dissociao de um proto de um aminocido caracterizada pela constante de dissociao de um cido (k a) com o seu valor de pka correspondente.

Os aminocidos cujo grupo R contm tomos de azoto (LIS e ARG) so considerados aminocidos bsicos uma vez que as suas cadeias tm pkas relativamente elevados, estando geralmente na sua forma cida e carregados positivamente a pH fisiolgico. Aminocidos cujas cadeias laterais formam um grupo carboxilo tm um pka relativamente baixo e so chamados aminocidos cidos. Esto geralmente na forma bsica e carregados negativamente a pH fisiolgico. Protenas em cuja relao superior a 1 refere-se a uma protena bsica. Se for menor que um refere-se a uma protena cida.

Titulao de um aminocido. Determinao do ponto isoelctrico Como exemplo vejamos a titulao dos grupos ionizveis de um aminocido simples, a lucina. A lucina contem uma -COOH cujo pka=2,4 e um -NH3 cujo pka=9,6. A pH 1 a forma predominante a forma inica carregada positivamente (cida) que migra para o ctodo num campo elctrico.

Ao adicionar o -COOH vai libertando protes at um ponto em que o COOH completamente titulado. A forma resultante tem um grupo carregado positivamente, o -NH3 e outro carregada negativamente, o -COO , grupos esses que se anulam sendo a carga inica do aminocido igual a zero. Chama-se a esta forma zwitterio ou io didolar. O pH para o qual o aminocido electricamente neutro diz-se ponto isoelctrico deixando de ter actividade electrofortica.

A pH>6 a lucina assume carga negativa que, ao aumentar o pH, passa a carga (-1). A carga parcial a qualquer pH pode ser calculada pela frmula ou atravs da leitura directa da curva de titulao

Determinao do pI de um aminicido dicarboxilco

Numa soluo cujo pH menor que o pI, o aminocido est carregado positivamente, enquanto que numa soluo de pH>pI o aminocido est carregado negativamente. Para protenas no d para utilizar os valores dos pk as. Os valores de pI so experimentalmente medidos determinando o pH a que uma protena no se move num campo elctrico.

pH>pI protena carregada negativamente nodo + pH<pI protena carregada positivamente ctodo As tcnicas de electroforese, cromatografia de troca inica utilizam as diferenas face ao pI para reforar e caracterizar biomolculas.

As cadeias laterais podem ser polares ou apolares

A relativa da hidrofobia das cadeias laterais dos aminocidos crtica para a definio da estrutura nativa de uma protena e para a sua estabilidade. Os grupos laterais hidrofbicos so gradualmente orientados para o interior da molcula, para minimizar o contacto com a gua pelo que cadeias laterais hidroflicas, polares se localizam superfcie da molcula para interactuarem com a gua.

Estrutura primria das protenas

A estrutura primria de uma protena refere-se sequncia de aminocidos que a constituem e que determina a estrutura da protena, o seu mecanismo de aco ao nvel molecular e a sua relao com outras protenas com funes fisiolgicas semelhantes. A comparao de estruturas primrias igualmente usada para prever o grau de semelhanas entre estrutura e funo de diferentes protenas. Se um aminocido encontrado sempre na mesma posio neste tipo de comparaes designa-se por resduo invariante e podemos concluir que esse resduo tem um papel essencial na estrutura e funo da protena. Substituio de um aminocido por outro de polaridade semelhante denominada uma substituio consertiva, no alterando a funo da protena. Pelo contrrio uma substituio no consertiva pode determinar alteraes profundas nas propriedades de uma protena. A estrutura primria de uma protena tem presentes as ligaes peptdicas e as ligaes do tipo dissulfito (entre cistinas) intra e intercadeias. Nveis mais elevados de organizao proteica diminuem a interaces nocovalentes entre diversas estruturas primrias (sequncias de aminocidos).

 Nveis superiores de organizao proteica

A estrutura secundria refere-se conformao que a cadeia polipeptdica adopta no espao. As cadeias laterais no so consideradas ao nvel secundrio. A estrutura terciria refere-se estrutura tridimensional da cadeia polipeptdica incluindo as interaces entre cadeias laterais e a relao entre regies distantes da cadeia. A estrutura quaternria refere-se estrutura e interaco no-covalente de subunidades proteicas, os polipptidos, numa protena maior, oligomrica. Nem todas as protenas possuem estrutura quaternria. As protenas geralmente assumem uma nica conformao secundria, terciria e quaternria de acordo com a sequncia particular de aminocidos que as constituem, determinando a sua estrutura nativa. A passagem da estrutura primria conformao nativa ocorre espontaneamente atravs de ligaes no-covalentes. Esta estrutura nativa a que assegura o nvel mais baixo de energia cintica cadeia polipeptdica, em determinadas condies de pH e temperatura.

Estrutura secundria
A conformao de uma cadeia polipeptdica pode ser descrita pelos ngulos de rotao das ligaes covalentes que contribuem para a cadeia polipeptdica: PSI () entre C-C=O e o FI() entre C-NH. Uma estrutura secundria regular quando todos os ngulos FI so iguais e todos os PSI tambm o so. As estruturas secundrias mais estveis termodinamicamente so a -hlice e a folha -pragueada.

-Hlice
Caractersticas da conformao em -hlice o nmero de aminocidos por volta, que de 3,6. Cada aminocido forma uma ligao por ponte de hidrognio. As cadeias laterais numa conformao em -hlice esto do lado de fora da espiral polipeptdica, espiral essa que geralmente d a curva pela direita, por ser assim mais estvel.