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UNIVERSIDADE DE CAXIAS DO SUL CENTRO DE CINCIAS EXATAS E TECNOLOGIA CURSO DE ENGENHARIA AMBIENTAL DISCIPLINA DE BIOQUMICA APLICADA A ENGENHARIA AMBIENTAL

BRENDA CARMINATTI BORGES

RELATRIO DA AULA PRTICA: DEGRADAO DE CORANTE POR Pleurotus sajor-caju e TESTE DE HIDRLISE DE AMIDO, TESTE DE HIDRLISE COM AMILASE SALIVAR

Trabalho apresentado como parte dos requisitos para obteno da aprovao na disciplina de Bioqumica Aplicada A Engenharia AmbientalI do Curso de Engenharia Ambiental. Professora: Eloane Malvessi

Caxias do Sul 2012

1.

INTRODUO

No dia 16 e 22 de maro de 2012, os alunos do curso de Engenharia Ambiental, turma de Bioqumica Aplicada a Engenharia Ambiental participaram da aula prtica no laboratrio do bloco 57 da Universidade de Caxias do Sul (UCS), esta foi sobre a degradao de corantes por Pleurotus sajor-caju, e testes de hidrlise de amido e amilase salivar. 1- Degradao de corante por: Pleurotus Sajor-caju Pleurotus sajor-caju um fungo, constituido por um complexo enzimatico capaz de atuar sobre os principais componentes estruturais lignoceluscos, encontrados em corantes, propondo a descolorao destes. Este fungo capaz de produzir uma ampla faixa de enzimas ligninoceluloliticas quando cultivado em meio adequado. O P. sajor-caju foi o microorganismo utilizado no presente trabalho para ensaio de biodegradao de corantes. 2 - Teste de hidrlise de amido O amido um polissacardeo de elevado peso molecular. Para ser transportado para o interior da clula e ser utilizado, necessrio, primeiro, que ele seja quebrado em unidades menores. A habilidade para hidrolisar esse polmero depende da produo e secreo de vrias amilases. A quebra do amido detectada utilizando-se culturas em gar amido. 2.1 Teste de Hidrlise com amilase salivar A amilase salivar uma enzima que atua provocando a hidrlise do amido, um polissacardeo muito abundante na alimentao, estando

presente,sobretudo, em alimentos de origem vegetal, nos quais constitui a principal substncia de armazenamento.Em termos funcionais, esta enzima uma (1-4) glicosidase, provocando a quebra da molcula de amido em dissacardeos, nomeadamente, maltose, a qual, posteriormente, ser

simplificada a unidades de glicose, um monossacardeo, por enzimas especficas no duodeno. A glicose o principal substrato energtico das clulas.

2.

OBJETIVO DA AULA PRATICA

1- Degradao de corante por: Pleurotus Sajor-caju Avaliar se a biodegradao de corantes utilizando Pleurotus sajor-caju. 2 - Teste de hidrlise de amido Observar se h crescimento de culturas em um meio com amido, assim observando de estas produzem a enzima amilase. 2.1 Teste de Hidrlise com amilase salivar Demonstrar que o amido pode ser hidrolisado por enzimas contidas na saliva, interpretar os resultados dos testes em funo das cores.

3.

PROCEDIMENTOS UTILIZADOS

1 - Degradao de corante por: Pleurotus Sajor-caju Utilizamos uma placa contendo meio de cultivo slido (0,01% corante Reactive Blue, 2 % Agar, 2% glicose; 0,2% extrato de levedura; 1% (NH 4)2SO4, em seguida nas placas de Petri foi inoculado um disco de 0,5cm de dimetro de cultura de Pleurotus sajor-caju no centro da placa. Posteriormente, as placas foram incubadas a 25C por cerca de 48-72h. Qual observamos na aula seguinte.

2 - Teste de hidrlise de amido Para o teste utilizamos placas de Petri com meio de cultivo slido (gar simples extrato de carne e peptona acrescentado de 0,2% de amido). Nesta inoculamos os microorganismos (Culturas de Bacillus cereus, Escherichia coli, Saccharomycescerevisae, Staphylococcus aureus), intermdio de uma ala estril. Incubamos as placas inoculadas a 35C por pelo menos 48 horas. Aps o perodo de incubao, cobrimos a superfcie da placa com soluo de iodo (Lugol) para a revelao da prova.

2.1 Teste de Hidrlise com amilase salivar Preparamos 4 tubos, cada um com: 1) 1ml de amido e 1ml H2O.

2) 1ml de soluo de amido; 3) 1ml soluo de sacarose; 4) 1ml de H2O; Para avaliar especificidade enzimtica, aps 20 minutos incubados a 37C foi posto 1ml de amilase salivar nos tubos 2, 3 e 4, em seguida adicionado lugol.

4. 1-

RESULTADOS DE DISCUSSOES Degradao de corante por: Pleurotus Sajor-caju

Na analise final da amostra percebemos que o fungo muito sensvel a contaminao, durante a manipulao houve a contaminao por

microorganismos no deixando o fungo se desenvolver. Outro microorganismo ao mesmo tempo se desenvolveu com a mesma propriedade (enzima), qual conseguiu degradar o corante. 2 - Teste de hidrlise de amido Aps o crescimento das colnias, coloca-se lugol sobre o meio e verifica se houve ou no a digesto do amido, se o microorganismo produz ou no a enzima amilase; caso tenha havido, poder ser observada uma descolorao em torno da colnia que se contrastar com o restante do meio que estar com uma colorao roxo-escura, obtendo-se resultado positivo. Mas no caso no observamos esta descolorao pois nenhum dos microorganismos utilizados produziu amilase o que vizualizamos so apenas contaminates. 2.1 Teste de Hidrlise com amilase salivar Para dar-se incio ao experimento foi incubada as solues a uma temperatura em torno de 37 C, para que esta ficasse com uma temperatura relativamente aproximada ao do corpo humano, e assim fazendo com que a enzima (amilase salivar) estivesse com seu melhor desempenho. Aps adicionamos a enzima amilase salivar no tubo 2, 3 e 4, e em sequencia colocamos lugol para ver o que acontece. No tubo 1 a soluo ficou com colorao roxo escuro pois no havia enzima para reagir.
No tubo 2 houve reao e apresentou colorao rosa, isto porque a enzima quebra o amido, tendo menos amido livre, para reagir com o lugol.

No tubo 3 com a reao ele ficou amarelo claro, porque a enzima no reage com a sacarose e a cor deve-se a colorao do lugol. No tubo 4 no houve alterao, pois no havia nada com que a enzima pudesse reagir.

Sendo assim conclumos que a enzima amilase salivar um catalisador especfico para quebrar molculas de amido transformando em glicose.

BIBLIOGRAFIA http://pt.scribd.com/doc/69014300/Relatorio-Hidrolise-do-amido http://bervieira.sites.uol.com.br/amido.htm http://dspace.c3sl.ufpr.br/dspace/bitstream/handle/1884/16899/JulianaRe ginaKloss.pdf;jsessionid=4D75AC5E5CD6F966A145A7CF6CCD6F36?sequenc e=1 http://www.periodicos.rc.biblioteca.unesp.br/index.php/holos/article/viewF ile/2156/3762