PRACTICO N 1

Seguridad en el laboratorio y conocimiento del material

Objetivos: - Acercar al estudiante a los materiales, mtodos y equipos usados en un laboratorio de Biologa. - Lograr que los alumnos aprendan a utilizar el equipo de laboratorio y as ser capaces de aplicarlo en sus respectivos prcticos. - Conocer las reglas de seguridad bsicas en el trabajo de laboratorio. REQUERIMIENTOS A CUMPLIR DENTRO DEL LABORATORIO: En la realizacin del trabajo de laboratorio debern observarse las siguientes normas: 1.- Es necesario utilizar una bata de laboratorio; la misma protege tu ropa y tu piel del contacto con reactivos. 2.- Un par de guantes para cuando sea necesario tocar algn instrumento que se haya expuesto a una llama. 3.- Queda prohibido fumar, comer y beber en los laboratorios. 4.- Los objetos personales (bolsos, libros, etc.) no se abandonarn en las mesas de trabajo. 5.- Es obligatoria la utilizacin de gafas de seguridad (aunque se usen gafas graduadas), siempre que se manipulen productos qumicos o biolgicos que supongan riesgo para el manipulador. 6.- Los equipos de laboratorio son costosos y de uso delicado. Es necesario que aprendamos a usarlos adecuadamente, siguiendo paso a paso las instrucciones dadas por tu maestro. Al terminar cualquier experimento todos los instrumentos deben quedar limpios y en el lugar destinados para ellos 7.- Durante el trabajo en el laboratorio no es aconsejable llevar lentes de contacto, ya que en caso de accidente por salpicaduras o vapores, stas pueden fundirse y el tiempo necesario para retirarlas puede aumentar el riesgo de lesiones oculares. Adems, los compuestos orgnicos tienden a acumularse entre la lente de contacto y el ojo. Se recomienda el uso de gafas graduadas.

8.- Se evitar el uso de pulseras, anillos, colgantes o mangas anchas que pudieran introducirse o engancharse en los objetos o montajes de trabajo. Los cabellos se llevarn recogidos. 9.- Tomar todas las precauciones necesarias al momento de tocar una sustancia en el laboratorio. 10.- No inhalar directamente los vapores que se desprenden de una sustancia qumica. Cuando es necesario hacerlo se procede de la siguiente manera: se sujeta el recipiente con una mano y con la otra se produce un movimiento sobre los vapores, de manera que los acerquemos hacia nosotros. De esa forma no nos llegan de manera directa. 11.- Nunca llevarse las manos a la cara, los ojos, la boca, mientras se est trabajando en el laboratorio; con esto se evitan posibles daos si en las manos han quedado restos de algunas sustancias. 12.- No mezclar sustancias desconocidas, ya que muchas veces, sustancias inofensivas producen reacciones violentas. 13.- No usar el gotero de una sustancia en otra distinta, ya que las mismas pueden daarse y perder la efectividad. 14.- Al desarrollar cualquier experimento de laboratorio es necesario que ests atento y en silencio para que puedas desarrollar tu trabajo como todo un cientfico. Las instrucciones del maestro y las orientaciones que aparecen en el manual con fundamentales para alcanzar en xito en tu trabajo. 15.- Nunca probar ninguna sustancia, si no es con el consentimiento del profesor. 16.- Utilizar cuidadosamente el material de vidrio para evitar heridas por corte. 17.- Leer con atencin los rtulos o etiquetas de los frascos antes de usar su contenido. 18.- No calentar sustancias inflamables con llama directa, hacerlo a Bao de Mara. 19.- Utilizar siempre la cantidad mnima de sustancia. 20.- Consultar al maestro en caso de dudas.

PRECAUCIONES GENERALES PARA LA MANIPULACION DE EQUIPOS OPTICOS. 1.- Evite mover el equipo de un mesn a otro. Cuando deba trasladar el equipo (microscopio o lupa), sostenga el aparato con una mano por la columna y con la otra por su base o pie. En este caso trasprtelo en posicin vertical, puesto que al inclinarlo puede dejar caer alguna pieza. 2.- Antes de comenzar a trabajar, asegure el equipo colocndolo al centro del mesn de trabajo y disponga el cable de manera que este no cuelgue. Nunca deje el equipo en el borde del mesn, ni deje el cable colgando debido a que aumenta el riesgo de cada frente a un posible roce o empujn. 3.- Si alguna pieza del microscopio o lupa falta o se encuentra suelta, informe de inmediato a su profesor para que lo resuelva y/o informe a los encargados de laboratorio. Para evitar daos de equipos y/o muestras por manipulacin inadecuada, no saque o mueva piezas de los equipos (por ej. tornillos) amenos que el profesor se lo haya indicado expresamente. Con el objetivo de evitar daos por cada o suciedad, no saque los oculares ni los objetivos. 4.- Las preparaciones deben colocarse sobre la platina con el cubreobjetos hacia arriba. 5.- Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se engrasen. 6.- Cada vez que conecte y desconecte el equipo verifique previamente que sus manos estn secas. 7.- Cuando termine de usar el equipo debe revisar que los objetivos, oculares y platina estn limpios, y que el instrumento se encuentre posicin de reposo Esto significa que el aparato debe dejar su equipo del siguiente modo: objetivo de menor aumento, platina abajo, diafragma abierto, condensador en el tope inferior y cable enrollado sobre la base. OBSERVACIONES AL MICROSCOPIO DE LUZ Objetivos: Conocer la estructura y el funcionamiento del microscopio de luz. Aplicar las normas de uso y cuidado del microscopio ptico. Observar distintos tipos de muestras para comprender su funcionamiento.

El microscopio se invento, hacia 1610, por Galileo segn los italianos, o por Jansen, segn los holandeses. Las primeras publicaciones importantes en el campo de la microscopia aparecen en 1660 y 1665 cuando Malpighi observa al microscopio los capilares sanguneos. A mediados del siglo XVII, Leenwenhoek, utilizando microscopios simples de fabricacin propia, describi por primera vez protozoos, bacterias,

espermatozoides y glbulos rojos. Durante el siglo XVIII el microscopio sufri diversos adelantos mecnicos que aumentaron su estabilidad y su facilidad de uso, aunque no se desarrollaron mejoras pticas. Las mejoras ms importantes de la ptica surgieron en 1877 cuando Abbe publica su teora del microscopio y por encargo de Carl Zeiss mejora la microscopa de inmersin sustituyendo el agua por aceite de cedro lo que permite obtener aumentos de 2000 A. A principios de los aos 30 se haba alcanzado el limite terico para los microscopios pticos, sin conseguir aumentos superiores a 500X o 1000X. Actualmente, el desarrollo de la ptica ha permitido mejorar la definicin de los microscopios de luz, contando con una amplia gama de microscopios de este tipo. Sin embargo, el lmite de resolucin de estos microscopios no permite observar estructuras que estn a una distancia menor a 0,2 m, por lo que se han desarrollado otros tipos de este instrumento tales como microscopio electrnico. El tipo de microscopio ms utilizado es el microscopio ptico, que se sirve de la luz visible para crear una imagen aumentada del objeto. El microscopio ptico ms simple es la lente convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan microscopios compuestos, que disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos microscopios pticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces, lo que resulta de gran utilidad considerando, por ejemplo, que una clula animal tpica mide entre 10 y 20 m de dimetro. Todo microscopio cuenta con un sistema mecnico que esta conformado por: a) El pie o base de sustentacin: Sirve como base del microscopio y tiene un peso suficiente para dar estabilidad al aparato. En los microscopios antiguos tena forma de herradura o de trpode pero en la actualidad suele ser una plataforma rectangular. En l se integra la fuente luminosa. b) El brazo o columna: Es tambin llamado columna o asa, es una pieza que generalmente tiene forma de C. El brazo se une en su parte inferior a la base, en la parte media va anclada la pletina y en la parte superior del brazo se encuentra el sistema de tubos pticos (oculares y revolver con objetivos). Tambin van unidas al brazo otras partes del microscopio como el condensador, diafragma, tornillos macro y micromtricos, etc. c) La platina: es la parte del microscopio dnde se coloca la muestra a observar. Es una pieza plana con un orificio a travs del cul pasar la luz que ilumina la muestra para que pueda ser observada. La platina puede ser fija o mvil horizontalmente. Siempre se mueve verticalmente mediante los tornillos macro y micromtricos para enfocar la muestra.

d) Pinzas: van unidas a la platina y se utilizan para sujetar la muestra. e) Los tornillos de focalizacin: el enfoque se realiza modificado la distancia entre la preparacin y el objetivo. Adems, mueven la platina hacia arriba y hacia abajo. Este ajuste se realiza con dos tornillos: - Macromtrico que se usa para los ajustes gruesos y mueve la platina de forma rpida. - Micromtrico para el ajuste fino o de precisin y tiene una escala graduada, en donde cada marca representa un avance de dos micrones. Este tornillo mueve la platina de forma lenta. f) Revlver: es una pieza giratoria que posee diferentes lentes objetivos, cada uno de ellos posee un aumento distinto. Al girar esta pieza es posible utilizar estos lentes para la observacin. Los microscopios cuenta con un sistema ptico que esta conformado por: a) Lentes oculares: se encuentran en la parte superior del tubo, por lo general tienen un aumento de 8X, 10X 12X. Los oculares estn formados generalmente por un sistema de dos lentes plano convexas simples o compuestas, separadas por un diafragma interno. El lente inferior se denomina "lente de campo" y tiene por funcin recoger la mayor cantidad de rayos divergentes que vienen del objetivo. Tiene su foco en el diafragma y ah la imagen es aumentada por el lente superior. b) Lentes objetivos: se encuentran montadas en el revlver que permite su intercambio durante la observacin. Las diferentes lentes estn marcadas con su aumento y la apertura numrica, vale decir el lente tiene la marca 10:1:AN 0.25 significa que ese objetivo tiene un aumento de 10, siendo su apertura numrica 0.25. La lupa u objetivo menor tiene un aumento de 4X, los otros generalmente son 10X, 40X y 100X. En ocasiones tambin se habla de "objetivos a seco" y de "objetivos de inmersin", haciendo referencia a lo que se encuentra entre la preparacin y el objetivo. As el objetivo a seco se refiere a que entre la preparacin la lente existe aire, mientras que los objetivos de inmersin requieren que exista entre la lente y la preparacin una sustancia conocida como aceite de inmersin. Su funcin es concentrar los rayos que se habran perdido por refraccin en el portaobjetos. Los microscopios cuenta con un sistema iluminacin que esta conformado por: a) La fuente luminosa: se ubica bajo el condensador y se trata de una lmpara halgena de intensidad graduable. Esta situada en el pie del microscopio. Se enciende y se apaga con un interruptor y en su superficie externa puede tener una especie de anillo para colocar filtros que facilitan la visualizacin.

b) Condensador: consiste en un sistema de lentes que concentra la luz en la preparacin. Posee un tornillo de control que permite mover este dispositivo. Del condensador sale un cono de rayos de luz que ha de tener el mismo ngulo que el ngulo del campo del objetivo utilizado. c) Diafragma o iris: sirve para reducir o ampliar el dimetro de la abertura por la que pasa la luz. Hay que regular esta abertura para ajustarla a la abertura del objetivo y as conseguir un contraste adecuado. Si la abertura del diafragma es mayor que el campo de observacin habr menos contraste al haber ms luces parsitas. d) Anillo porta filtro: permite colocar un filtro de color anexo al condensador para destacar alguna estructura de inters en la preparacin.

El objeto que queremos observar se coloca en un vidrio transparente que llamamos portaobjetos y lo cubrimos con otro vidrio ms fino que llamamos cubreobjetos. El enfoque del objeto se realiza con el tornillo macromtrico, y despus se afina con el tornillo micromtrico, hasta conseguir una visin perfecta. Una vez enfocado el objeto, se pasa al objetivo inmediatamente superior, hasta obtener el aumento deseado. Cada vez que cambies de objetivo cuida de no tocar la preparacin, el vidrio se puede romper. La luminosidad para observar la muestra la puedes regular moviendo el diafragma hasta conseguir la ms adecuada para cada caso. Como unidad de medida, en microscopia se utiliza la micra (). Su equivalencia es: 1 = 1/1000 mm; por tanto, 1 mm = 1000

ACTIVIDADES

1.- Cada alumno deber sacar un microscopio con mucho cuidado y ponerlo en el mesn. Se le entregar una preparacin con hilos de colores en ella deber: a) Enfocar con el menor objetivo. Distingue que hilo se encuentra sobre otro? b) Enfocar con el objetivo siguiente. Que observa?, que ha cambiado? Dibjalo. c) Enfocar con el objetivo siguiente: Resuma los cambios observados 2.- Cada alumno, observar una muestra de papel milimetrado con una letra impresa. Al enfocar la letra con la lupa (4,5x u otro segn el caso) deber responder lo siguiente: a) Con una regla mida la distancia entre el lente objetivo y la preparacin en el portaobjeto. b) Usando las lneas del papel milimetrado determine el dimetro del campo observado, luego el radio y a partir de ste calcule el rea del campo. c) Usando las lneas del papel milimetrado determine el tamao de la letra. Al enfocar la letra con el objetivo de 10x deber responder lo siguiente: a) b) c) d) Mida la distancia entre el lente objetivo y la preparacin La letra se ve derecha y invertida? Al desplazar la platina a la derecha en que direccin se mueve la letra? Usando las lneas del papel milimetrado calcule el rea del campo observado y comprelo con el observado a travs de la lupa

Pasar al objetivo de 40x y responder lo siguiente: a) La iluminacin experimenta cambio? b) Mida la distancia entre el lente objetivo y la preparacin y comprela con las distancias obtenidas con la lupa y el objetivo de 10x

Preparacin de una muestra ptica Para observar perfectamente un objeto es necesario someterla a un proceso de preparacin que destaque aquellas partes que nos interesen. Tambin, que conserve la muestra para observaciones posteriores. Dos fases de este proceso son: la fijacin y la tincin. Con la fijacin se consigue que la muestra que queremos observar no se mueva. Se suele utilizar diferentes lquidos: alcohol etlico 70%, lquido de Bouin, cido actico, reactivo de Carnoy, cido smico. Tambin se utiliza altas temperaturas que ayudan a deshidratar la muestra. El objeto, una vez fijado, debe lavarse en un medio apropiado como alcohol o agua. La tincin consiste en colorar la muestra que queremos observar para, as, destacar aquellas partes que nos interesen observar. La gamma de colorantes es muy variada, y cada uno resalta una parte diferente del objeto. Los colorantes siguientes suelen utilizarse para resaltar las partes de la clula: - La estructura celular: azul de metileno, orcena actica. - El citoplasma celular: eosina-I, fucsina cida, verde luz. - El ncleo celular: fucsina bsica, verde metilo. Datos prcticos Al comenzar a trabajar se debe: - Indicar alguna alteracin que se encuentre en el microscopio que va a usar. - Recorrer y enfocar la preparacin con 10 x. - Verificar la limpieza de los lentes oculares, objetivos y condensador. No usar cualquier artculo para limpiar los oculares o los objetivos. - Si con 40x no logra enfocar, revise si el cubreobjeto esta hacia arriba. Al finalizar el trabajo y antes de guardar el microscopio, usted debe verificar que: - Se encuentre centrada la lente de menor aumento. - La platina este arriba y el diafragma abierto. - Luz apagada.

PRACTICO N 2

Observacin de clulas de catafilo de cebolla en microscopio ptico

Objetivos: Hacer una comprobacin de que todos los organismos vivos estn formados por clulas. Observar clulas vegetales de la epidermis de cebolla al microscopio ptico. Reconocer las partes de la clula vegetal. Apreciar el tamao de las clulas.

Introduccin: La clula es la unidad bsica y fundamental de los tejidos y por tanto, de los rganos. Esta puede constituir por s sola un individuo u organismo unicelular. La clula no es esttica, es excepcionalmente dinmica. Todas sus actividades se realizan en un medio acuoso e implican un desplazamiento de solutos en la clula misma (medio intracelular),entre clulas, y entre la clula y su medio externo (medio extracelular). Su forma es variada, segn se trate de individuos unicelulares que viven libremente o de individuos pluricelulares. La clula vegetal tpica presenta, por fuera de la membrana plasmtica, la pared celular, compuesta fundamentalmente por celulosa y secretada por el protoplasto. Esta pared celular delimita a la clula vegetal, determina su forma y confina al protoplasma, en el cual se distribuye una serie de organelos bien definidos morfolgicamente y limitados por membranas especiales que cumplen funciones vitales especficas. Otra caracterstica tpica de la clula vegetal es la presencia de plastidios, los cuales pueden ser pigmentados (cloroplastos y cromoplastos) o no pigmentados (leucoplastos). La clorofila es el pigmento fundamental de los cloroplastos. Dentro de los plastidios no pigmentados se encuentran los amiloplastos, que almacenan almidn (los podemos encontrar por ejemplo, en la papa); stos ltimos pueden tener formas diversas. El ncleo, los cloroplastos y las mitocondrias tienen capacidad de auto divisin, mientras que el resto de las diferenciaciones celulares, por lo general de menor tamao que las mencionadas, pueden ser formadas de nuevo por el protoplasto en el curso del metabolismo y ser luego destruidas. Las vacuolas, son muy importantes en la clula vegetal; su contenido acuoso se denomina jugo celular.

Materiales: Microscopio Portaobjetos Cubreobjetos (laminillas) Gotarios Bistur Pinzas Lugol Azul de metileno Cebolla Agua Solucin salina

Procedimiento: 1. Cortar la cebolla por la mitad y separarla por capas, hasta llegar a la capa mas interna. 2. Con unas pinzas, arranca un trozo de epidermis transparente de la cara interior la cebolla. 3. Corta este trozo, delicadamente, en un cuadrado de 1cm x 1cm. 4. Con las pinzas coloca esta lmina de cebolla en el centro del portaobjetos, de manera que quede perfectamente extendida, sin formar arrugas. Si no queda bien, repite la misma operacin. 5. Vierte una gota de agua sobre la lmina, con el gotario, y deja que se impregne. 6. Con un papel absorbente, limpia los bordes de la preparacin para absorber los excesos de agua. Procura no arrastrar la lmina que queremos observar. 7. Ubique la muestra el microscopio y observe. - Dibuje varias clulas con los 3 aumentos totales posible y responda: Qu forma tienen las clulas? Qu puedo distinguir en ellas? Ahora repita el procedimiento anteriormente descrito, pero en el paso 5 y 6 haga lo siguiente: 5. Vierte una gota de azul de metileno sobre la lmina, con el gotario, y deja que el colorante la impregne. 6. Con un papel absorbente, limpia los bordes de la preparacin para absorber los excesos de la tincin. Procura no arrastrar la lmina que queremos observar. 7. Ubique la muestra el microscopio y observe. - Observa y responde: - Qu partes de la clula resalta el colorante? - Localiza las cuatro partes fundamentales de la clula vegetal. - Fjate en una clula y dibjala. A continuacin, ayudndote del modelo de una clula vegetal, seala las partes observadas. Ahora repita el procedimiento anteriormente descrito, pero en el paso 5 haga lo siguiente: 5. Vierte una gota de solucin salina sobre la lmina, con el gotario, y deja que se impregne.

6. Con un papel absorbente, limpia los bordes de la preparacin para absorber los excesos de agua. Procura no arrastrar la lmina que queremos observar. 7. Ubique la muestra el microscopio y observe. - Dibuje varias clulas con los 3 aumentos totales posible y responda: Qu forma tienen las clulas? Qu puedo distinguir en ellas? Observo algn cambio en ellas?