Determinacin de Fe, Cu, Mn, Co y Ni, por espectrofotometrade absorcin atmica, en tejidos vegetales

BLAGO RAZMILlC B. y LEONARDO FIGUEROA T. Lab. Qumicos, Depto. Agricultura U. del Norte, Arica

ABSTRAGT Several advantages result when solvent extraction methods are used for Atomic Absorption. We have extracted Gu, Fe, Co, Mn, and Ni from a concentrated solution using Sodium Diethilditiocarbamate and 8-Hidroxiquinoline mixture, with chloroform.

1. INTRODUCCION Este trabajo es una contribucin ms al amplio campo de la Qumica Analtica Aplicada. El estudio de los elementos trazas, indispensables para el crecimiento y desarrollo de las plantas, ocupa un lugar importante en el diagnstico foliar y tambin en otras aplicaciones de la Qumica Agrcola. Entregamos una nueva tcnica de mineralizacin del tejido vegetal, basada en la digestin oxidativa de ste y la posterior extraccin de los elementos trazas Fe, Co, Cu, Mn y Ni, como quelatos organometlicos en un solvente orgnico.

n. REVISION DE LITERATURA
La revisin de otras publicaciones nos seala que: Durante las mineralizaciones por va seca se acentan las contaminaciones y prdidas de algunos elementos, tal como lo determin Gorsuch, en 19701, debido a los bajos puntos de fusin de algunas sales, especialmente los cloruros, al ser sometida la muestra a calcinaciones entre 500 y 600 grados Celcius. Baker (et al.) en 19742, cita a Slavin, W. quien demostr que se producen interferencias durante la terminacin por Absorcin Atmica, debidas

58

DEPTO.

AGRICULTURA,

UNIVERSIDAD

DEL NORTE-ARlCA.

N9 4, MATIZO 1976

IDESIA

principalmente a: Fondo, producido por substancias indeseables presentes en la disolucin que provocan interferencias qumicas, de Absorcin Molecular, Ionizacin, Atomizacin y dispersin de luz. El mismo autor (O~p118 cit.), hace referencia a una interferencia debida a las propiedades fsicas de la disolucin, denominada Matriz. La interferencia de Matriz, ocasionada por la elevada viscosidad de la disohlOin influye en el flujo de vapor atmico en la llama, con la correspondiente prdida de sensibilidad. Las interferencias de Fondo y Matriz, se presentan como una consecuencia de la elevada salinidad resultante, de atacar o disolver residuos provenientes de las calcinaciones. Por lo general se deben tomar cantidades demasiado grandes del tejido, y posteriormente llevar estos concentrados salinos a volmenes de aforo muy reducidos, para alcanzar los lmites de deteccin de aque-Hos elementos vestigiales. De todos estos aspectos mencionados, se podrn apreciar las ventajas del estudio realizado.

III.

ANALITICA

Slavin, W. en 19643, hace una amplia referencia a este problema y seala a varios autores que han propuesto excelentes tcnicas, utilizando extracciones y quelaciones tales como, por ejemplo, las quelaciones con APDe (Amonio, Pyrrolidine Dithiocarbaunato) y su extraccin COn MIBK (metil isobutilketona); sin embargo, la gran variedad de reactivos quelantes y el enorme campo de las posibilidades analticas, hacen muy atractivo el estudio de esta materia. Kolthoff (et al. 4), entrega una detallada lista sobre las propiedades quelantes de la 8-Ridroxiquinolena, de acuerdo a rangos de pR. Tambin menciona la gran solubilidad de algunos de estos compuestos en cloroformo. Oherkashina V., T. y Petrova 1., E. en 19705, se refieren a las prcpiedades quelantes del Dietilditiocarbamato de Sodio y de la dependencia de estas propiedades con la concentracin de iones hidrgeno y la temperatura, como tambin, de la solubilidad de estos compuestos en cloroformo. Kuz'min M., 1. en 1967, ha recalcado las propiedades extractivas de una mezcla de ambos acomplejantes orgnicos en concentraciones 0.1 M, que compensa las prdidas obtenidas con cada uno de ellos en forma aislada, para que a un pR de 8.0 + 0.2 la extraccin del Fe, Cu, Co, Mn y Ni sea cuantitativa. Este mismo autor (et al.) (op'UScit.), ha demostrado que la extraccin de estos complejos se ve favorecida por una alta concentracin salina, la que promueve esta separacin actuando COmoun agente deshidratante 7. Kuz'min y Zhuravlev (et al.) 6, comprobaron que prcticamente el 99,0% de los macrocomponentes (salinidad) permanecen en la fase acuosa despus de la extraccin cOn el solvente orgnico, no miscible con el agua y que el gran coeficiente de reparto de los oxinatos y dietilditiocarbamatos, desde la fase acuosa a la fase orgnica, permite su rpida extraccin. Utilizando toda esta informacin, se ha proyectado en un mtodo analtico, donde las trazas SOn tratadas como una determinacin de impurezas, logrando separarlascuantitativamente y de paso dejando atrs a todas aquellas substancias que provocaban, de una forma -u otra, interferencias, para realizar

IDESIA

DEPTO.

AGRICULTURA,

UNIVERSIDAD

DEL

NORTE-ARICA.

NQ 4, MARZO

1976

59

fina,lmente las lecturas en el espectrofotmetro, lmite de deteccin.

libres de Fondo y con buen

TABLA DE RESULTADOS

NQ 1

ENSAYO DE CUANTITIVIDAD Serie de muestras tratadas A B C p.g en contrados. Estndard sin Tratar D E

[1.g agregados tericamente. Blanco ([1.g) Adicin Sto B,C,DyE. Reactivos utilizados Cu

[1.g recuperados -[1.g A.

!tg recuperados -[1.g A.

[1.g recuperados -[1.g A.

3.0

10.0

ll.O

ll.O

ll.O

ll.O

Fe

5.0

10.0

10.0

12.0

12.0

Ca

0.0

10.0

ll.O

ll.O

10.0

ll.O

Ni

0.0

10.0

10.0

ll.O

10.0

ll.O

Mn

0.0

10.0

10.0

ll.O

10.0

10.0

TABLA DE RESULTADOS

NQ 2

CALCULO DE LOS PORCENTAJES DE ERROR Y RECUPERACION

% Error Cu Fe Ca Ni 0.0 + 20.0

% de Recuperacin 100.0 120.0 97.0

ds.

3.0

0.6 0.6 0.6

+ +

6.6
3.3

106.6
103.3

Mn

60

DEPTO.

AGRICULTURA,

UNIVERSIDAD

DEL

NORTE-ARICA.

NQ

4, MARZO

1976

IDESIA

IV.

INSTRUMENTACION
de absorcin atmica, marca perkin-Elmer mo-

Se utiliz delo 503.

un equipo

Premix de alta conveniencia, de acero inoxidable, con cmara forrada en plstico Penton, helicoidal forrado en Penton. Cabeza de mechero de Titanio (quemador), con una ranura de 10 cm/0.06 cm (040-0146). N ebulizador anticorrosin. Lmpara de ctodo hueco, multielemental, Modelo de alta brillantez marca Intensitron. de Fe, Gu, Mn, Co, Ni y Cr.

Los flujos de salida de aire y acetileno se mantuvieron en 35.0 psi y 60.0 psi, respectivamente, lo que proporciona una llama oxidante, azul y limpia. Las lecturas se realizaron COn una integracin de 3 segundos a escala expandida, por el mtodo de alta precisin. Las condiciones experimentales para cada elemento se resumen en el cuadro siguiente:

CUADRO

DE CONDICIONES

EXPERIMENTALES

Lnea de
Resonancia A A')

1nt. corrien- Resolute Lmpara cin M. A. A AQ

Rango U Slit.

Calibrado Sol. acuoso

Sensibilidad para IX de absorcin

Fe

2483

35.0

UV-3

5.0 !J.g/ml 0.18 ABS.

0.12 !J.g/m]

Cu

3247

35.0

UV.4

5.0 !J.g/ml 0.25 ABS.

0.09

!J.g/ml

Mn

2795

35.0

UV-3

2.0 !J.g/ml

0.06 !J.g/mI

0.16 ABS.

Ni

2320

35.0

UV.3

5.0 !J.g/ml 0.15 ABS.

0.15

!J.g/ml

Co

2407

35.0

UV-3

5.0 !J.g/mI 0.15 ABS.

0.15 !1g/mI

Nota:

Este equipo Perkin-Elmer fue adquirido por el Depto. de Agricultura de la Universidad Agrcola; taminstalado en

del Norte-Arica,para reforzarla lnea de investigacinde su especialidaden Qumica Chile (1974).

bin es utilizado, actualmente,n la prestacin servicios. el primer modelo 503 e de Es

lDESIA

DEPTO.

AGRICULTURA,

UNIVERSIDAD

DEL

NORTE..ARICA.

NQ 4, MARZO 1976

61

V.

MATERIALES Y METODOS

Se han utilizado materiales de uso corriente en el laboratorio, como por ejemplo Balones de Kjeldhal, crisoles de porcelana, embudos de separacin, vasos de pp, tubos de centrfuga graduados, pipetas clase A, de aforo, pipetas graduadas y otros. Los mtodos son originales y su aplicacin se plantea y discute en la continuacin de este punto. Brevemente podemos resumir las tcnicas: a) Recoleccin de las muestras. b) Molienda, secado y clculo de materia seca. c) Mineralizacin por va hmeda. d) Ajuste de pH y quelacin. e) Extraccin y destruccin de los quelatos. f) Aforo y determinacin espedrofotomtrica.

VI.

LAS MUESTRAS

Se ha tomado para este ensayo grano de maz recolectado desde su almacenaje para semilla, tom~ndo muestras al azar, del total de cosechas obtenidas de un estudio de mejoramiento gentico en estudio (Proyecto CI-

CA)

(>,

eligindose finalmente diez de ellas.

VII. MINERALIZACION

Se sugiere una digestin cida compuesta por cinco partes de KNOg y 20 partes de H2S04 d. 1.84 para 1 g de tejido (5.0 g: 20.00 g: 1.0 g) a) La muestra exactamente pesada se introduce en un matraz Kjeldhal de 100 mI, luego el KNOg, perlas de vidrio y fina1mente el cido, esto bajo campana. b) El proceso comienza de inmediato, can abundante desprendimiento de humos rojos (xidos nitrosos). Durante eS'te paso la temperatura debe mantenerse entre 60 y 700 C. Luego se aumenta la temperatura a 12()O iniC cindose la etapa de carbonizacin, para aumentar finalmente a 35()0C, de modo que la mezcla hierva tranquilamente durante dos horas. Al cabo de este perodo, debe quedar una disolucin cristalina e incolora. c) An tibia (700 C) se diluye 20 veces con agua bidestilada. Enfriar y transvasar a un embudo de separacin, filtrando si hubiera residuo de slice. d) La neutralizacin se consigue con solucin de NHg al 25%,utilizando un electrodo de vidrio mixto (micra elect.) y un pH-metro, hasta pH 8.0 + 0.2 (tambin se puede utilizar fenoftalena como indicador del pH).

. Centro de Investigacin y Capacitacin Agrcola, Depto. AgricnItura.

62

DEPTO.

AGRICULTURA,

UNIVERSIDAD

DEL NORTE-ARICA.

NQ 4, MARZO. 1976

IDESIA

VIII.

QUELACION

y EXTRACCION

DE LOS ELEMENTOS

TRAZA

La disolucin se neutraliza can reaccin 8()<> , temperatura ptima para laquelacin. C

exatl1mica alcanzando. casi

a) Rpidamente se agregan 2.0 mI de solucin alcahlica (alcahal absaluta), 0.1 M de S..Hidraxiquinalena y 2.0 mI de dietilditiacarbamata de Sadia, 0.1 M, ambas preparadas en el mamenta. b) Extraer can das parciones de 5.0 mI de Clorafarma y slo. si fuese indispensable ensaye una tercera extraccin. (La disalucin acuasa debe permanecer a 50<> ). C c) El salvente se recibe en un vaso. pequea de pp, conteniendo. 2.0 mI de agua bidestilada. d) El CHCl3 se evapara a SODC sabre una placa calefactara y las camplejas arganametlicas se destruyen para liberar las catianes, mediante un reflujo. can HN03 fumante. e) La disalucin clara se afara a un valumen canvenente.

IX. PUREZA DE LOS REACTIVOS

Es muy importante zarn y, si las candicianes se presenten dudasas. De en blanco para cada serie certificar la pureza de las reactivas que se utilide labarataria la permiten, purificar aquellas que tadas modas es muy canveniente llevar un ensaya de determinaoianes.

X. PREPARACION DE LOS ESTANDARS

Se prepararan salucianes stack de 1000 f-tg/ml utilizando. las sales de mayar pureza a elementas puras en estada metlica. Pasteriarmente se certific esta preparacin valaranda las salucianes stock, can una de etilen diaminatetraactica patrn. Las salucianes diluidas para la calibracin, se prepararan en HN03, de acuerda a la concentracin cida de las muestras experimentales.

lDESIA DEPTO. AGRICULTURA, UNIVERSIDAD DEL NORTE-ARICA. NI' 4, MARZO 1976 TABLA DE RESULTADOS DETERMINACIONES NI' 3

63

DE Gu, Fe, Mn, Go y Ni

Promedios finales de resultados N9 Fecha Variedad Cu Fe

([tg/ g en base seca) Mn Co

'"

Ni 00
0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0

Cosecha 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 5/11/69 Lluteo " 2/10/73 " 5/11/69 " 10/11/74 10/11/74 20/4/74 20/10/74 20/10/74 10/11/74 19/3/74
"

3.3 4.0 4.4 7.4 4.9 2.8 2.0 2.8 1.6 6.3

17.7 14.1 27,2 23.6 24.6 12.4 6.2 18.5 17.5 17.6

8.3 6.4 9,2 7.5 8.4 7.1 8.6 7.6 8.2 13.3

0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 1.0 0.0

" " " " Reventn

o No fue detectable con una sensibilidad de 0.15 [tg/ml (excepto la muestra 9). 00 No fue detectable con una sensibilidad de 0.15 [tg/ml.

TABLA DE RESULTADOS DE'J1ERMINAGION DEL PORCENTAJE

NI' 4 DE CENIZAS Y

PORCENTAJE DE HUMEDAD MAIZ. (Expresados

DE LAS MUESTRAS en base seca)

DE

N9 .l! 2 3 4 5 6

% Humedad 10.2 11.0 10.4 10.6 10.6 11.4

% Cenizas 1.7 1.8 1.7 1.6

1.6 1.7 1.4 1.6 1.4 2.6

7 8 9 10

10.2 10.3 11.0 10.0

64

DEPTO.

AGRICULTURA.

UNIVERSIDAD

DEL NORTE-ARICA.

NQ 4, MARZO. 1976

IDESIA

XI. COMPARACION ESTADISTICA DE LA MINERALIZACION

Si bien es cierto que la recuperacin de los elementos es totalmente cuantitativa (cuadro 1), se debe verificar si esta mineralizacin de tejidos vegetales es reproducible con algn mtodo de uso ms corriente. Con el objeto de analizar la significancia de los datos eXiperimentales en relacin a otros tomados como controles. Se eligi como referencia el mtodo de la calcinacin en mufla a 5500 C por 4 horas, disolviendo el residuo, mediante un reflujo de HCl 1:1 v/v. La extraccin se realiz tal como se detalla en: VIII, (a).

TABLA DE RESULTADOS NI? 5 DETEHMINACION DE COBRE (f1./g base seca) Muestra Maz
1 2 Mtodo de C Qntrol Cenizas 5500 C 4.3 4.2

Mtodo Experimental Digestin KN03_H2S04

3.3 4.0

3 4 5 6

6.9

4.4

5.7
10.0 2.8

7.4
4.9 2.8 2.0 2.8 1.6

7
8 9

3.7 3.3 2.7

ANALISIS DE VARIANZA

x
Fuentes de Varianza
Entre los Mtodos

4.8

X' : 3.7

gl 1 16 17

SC 6.0 69.6 75.6

MC 6.0

1.4

0.01

Dentro de los Mtodos

Total

4.3 >

>

0.01

IDESIA

DEPTO.

AGRICULTURA,

UNIVERSIDAD

DEL

NORTE-ARICA.

NI? 4,

MARZO

1976

65

TABLA DE RESULTADOS DETERMINACION DE HIERRO

NQ 6 base seca)

(ttg/g.

Muestras Maz

Mtodo de Control Cenizas 550" C.

Mtodo Experimental Digestin KN03-H2SO~

17.0

17.7

15.2

14.1

22.1

27.2

22.6

23.6

18.3

24.6

24.0

12.4

19.1

6.2

24.7

18.5

18.5

17.5

Anlisis de Varianza:

20.2

X'

18.0

Fuentes de Varianza

gl

SC

MC

fJ

Entre los Mtodos Dentro de los Mtodos

1 16

25.2 429.4

25.2 0.94 26.8 0.01

Total

17

454.6

>

>

0.01

Idesia - 5

66

DEPTO.

AGRICULTURA,

UNIVERSIDAD

DEL NORTE-ARICA.

NQ 4, MARZO 1976

lDESIA

CUADRO

DE RESULTADOS

NQ 7

DETERMINACION DE MANGANESO (fJ.g/g. base seca). Muestra Maz 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Anlisis de Varianza:

X : 6.4

Mtodo de Control Cenizas 5500 C. 7.4 4.9 6.6 6.0 5.5 7.1 6.8 7.9 5.6

Mtodo Experimental Digestin KNO s-H 2S04 8.3 6.4 9.2 7.5 8.4 7.1 8.6 7.6 8.2

X'

7.9

Fuentes de Varianza
Entre Dentro los Mtodos de las Muestras

gl
1 16

SC 10.2 13.8 p

MC 10.2

11.3 0.9

.oen

>

.001

XII. DISCUSION DE LOS RESULTADOS

Tabla 1: En esta tabla se han representado los valores obtenidos en el ensayo de cuantividad, que satisfacen totalmente los lmites aceptados para este tipo de anlisis, y por el orden de ttg (nano gramos). Tabla 2: Aqu se pueden apreciar los porcentajes de recuperacin obtenidos para las adiciones estndard. El caso del hierro merece un comentario, ya que se presenta una contaminacin al azar, resultando valores altos ( +20.0%), en todo caso, incluso valores de este tipo deben aceptarse coma vlidos, por tratarse de trazas. Tabla 3: Se resumen los valores obtenidos de los promedios calculados luego de haber procesado las muestras por triplicado. Uno de estos triplicados

IDESIA

DEPTO.

AGRICULTURA.

UNIVERSIDAD

DEL

NORTE-ARICA.

No 4, MARZO 1976

67

fue tratado por el mtodo de las adiciones. La muestra nmero 10, presenta valores ms altos que las dems por tratarse de un maz del tipo Reventn, con un contenido mayor en sales minerales que el resto que es una variedad del tipo Lluteo. Tambin puede apreciarse en esta tabla, que no se detectaron cobalto (a excepcin de una muestra) y nquel, elementos menores de poca importancia para el desarrollo de las plantas, segn la literatura consultada. Sin embargo, se practic una calcinacin para estos elementos, adicionando cantidades estndar y la recuperacin fue del orden de un 100%. Tablas 5, 6 Y 7: El anlisis de Varianza confirma la hiptesis (al no haber significancia al nivel del 1%para las comparaciones estadsticas), acerca de que el mtodo experimental nO difiere del mtodo tradicional de Cenizas, y que la diferencia entre las medias no es por tanto significativa. Hay, sin embargo, un dato que no debemos pasar por alto, y este es la baja general de los resultados de manganeso, el que podra ser afectado por la calefaccin a 550 grados. Por otro lado resultan altos los valores obtenidos para Cu y Fe, a pesar de que el mtodo experimental demostr excelentes resultados de recuperacin (ver tabla 2), lo que podra estar relacionado COn una contaminacin a nivel de mufla, o bien por fuentes del azar. ( Ver discusin para la recuperacin del Fe).

XIII.

CONCLUSIONES

Se ha desarrollado un mtodo de mineralizacin para tejidos vegetales, basado en la digestin oxidativa con la mezcla nitrato-sulfrica, cuyas ventajas se pueden resumir en: a) Mayor rapidez y proteccin a las contaminaciones, que en los procesos por va seca (calcinacin). b) Menor peligrosidad que los tratamientos cOn cido perclrico. c) Se evitan prdidas por volatilizacin, problema ocasionado por los procesos por va seca. d) No se requiere de aparataje complicado o escaso. Luego, se han extrado cinco elementos traza, quelndolos con una mezcla de oxina y dietilditiocarbamato de sodio, extrayendo estos complejos en Cloroformo. Se ha eliminado as: a) atmica. Interferencias de Fondo y Matriz, en las lecturas por absorcin

b) Se ha incrementado la sensibilidad, logrando lecturas directas sobre la dilucin, sin necesidad de utilizar el mtodo de las adiciones. c) Se ha demostrado la cuantitividad de las extracciones.

AGRADECIMIENTOS: Al acadmico seor Jos Weinborn, Jefe de la especialidad de este Estudo.

seor Luis Gmez, quien facilit las muestras. Al acadmico de Qumca Agrcola, por su constante apoyo al desarrollo de Agricultura, por sus

Al acadmico seor Maurcio Jmnez, Jefe de Investigacin del Depto. numerosas sugerencias. Al Laboratorista Qumico Jos Larach, por su cooperacin en el laboratorio.

68

DEPTO.

AGRICULTURA,

UNIVERSIDAD

DEL NORTE-ARICA.

Nq 4, MARZO 1976

IDESIA

LITERATURA
1.
2. 3. 4. 5. 6. 7.

CITADA

Baker, et al. Journal of Agricultural and Food Ghemistry, 22(1): 103-104, 1974. Idem 1. Slavin, W. At. Absorption Newslett. N9 24: 15, 1964. Kolthoff, et al. Textbook of Quantitative Inorganic Analysis. 3~ Ed. Cap. VI, pp. 72-105. Cherkashina V., T. et al. UDC 543.70, Journal of Analytical Chemistry of the USSR. 23 (9): 1178. Kuz'min M., l. et al. UDC N9 543, pp. 310, Journal of Analytical Chem. of the USSR. Idem 6.

LITERATURA

CONSULTADA

Mansell, R. At. Absorption Newslett. 4 (5), 276 pp., 1965. Tserkouniskaya, l. et al. UDC 543.70. J. of Analytical Chem. of The USSR 20 (9): 47-48. Furman, et al. Texbook of Analytical Chem. 1950. Russell & Russell, Soil conditions & Plant growth, 2~ Ed. (59). Gonzlez O., C. et al. La nutricin Mineral de los vegetales. U. Chile y U. Catlica. 1973. E. Merck, valorac.iones con EDT A, reactivos orgnicos para el anlisis Inorgnic.o. Kahn L., H. Topics in Ghemical Instrumentation, Journal of Chemical Education 43 (1), 1966; (2) 1966.