Aislamiento de enterobacterias

Pamela Conde Pumarimay

2010-35142

Profesora:

Amelia Castro

AISLAMIENTO DE ENTEROBACTERIAS

2010-35142

Aislar entero bacterias en medios adecuados y desarrollar y desarrollar la prueba de IMVIC

Las Enterobacterias son una familia heterognea y amplia de bacilos gram negativos que residen en el colon del hombre sin causar enfermedad aunque con frecuencia son causantes de un nmero considerable de infecciones, tanto en pacientes con inmunidad conservada como en inmuno deprimidos ya que en el paciente hospitalizado las enterobacterias colonizan el tubo digestivo, la orofaringe, el aparato genitourinario y la piel. Escherichia coli es la especie ms comnmente encontrada en la flora normal, seguida en orden de importancia por Klebsiella, Proteus y Enterobacter.Los gneros Salmonella, Shigella y Yersinia son patgenos primarios para el hombre y no forman parte de la flora normal. Ciertos serotipos de E.coli son patgenos primarios. Las enterobacterias forman parte del 80 % de infecciones por GRAM (-)y adems constituyen el 50 % de los aislamientos clnicos relevante

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E.M.B. Agar. Este medio (tambin denominado E.A.M.) es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rpido desarrollo y escasas exigencias nutricionales. Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae. Fundamento Este medio combina las frmulas de Holt-Harris y Teague con la de Levine, para obtener un mejor rendimiento en el aislamiento selectivo de enterobacterias y otras especies de bacilos Gram negativos. La diferenciacin entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa, y aquellos que son incapaces de hacerlo, est dada por los indicadores eosina y azul de metileno; stos ejercen un efecto inhibitorio sobre muchas bacterias Gram positivas. Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. Presentan un caracterstico brillo metlico. Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o rosada, mientras que las que no lo hacen son incoloras. Este medio permite el crecimiento de Candida spp. Como colonias rosadas y puntiformes; la siembra en profundidad permite el desarrollo de clamidosporas en C. albicans. Enterococcus spp. crece en este medio como colonias puntiformes y transparentes, mientras que Acinetobacter spp. y otras bacterias oxidativas pueden dar colonias de color azul lavanda; esto puede ocurrir aunque las cepas no sean capaces de acidificar a partir de lactosa al 0.5% y ello se debe a la incorporacin de azul de metileno a sus membranas. En este medio se obtiene adems, un buen desarrollo de especies de Salmonella y Shigella.

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AISLAMIENTO DE ENTEROBACTERIAS Frmula (en gramos por litro) Peptona Lactosa Sacarosa Fosfato dipotsico Agar Eosina Azul de metileno 10.0 5.0 5.0 2.0 13.5 0.4 0.065

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Estufa Autoclave Mechero bao Mara Asas bacteriolgicas Placas Petri con medios de cultivo (EBM, BPLS, VRBA, VRBA GLUCOSADO Y SS) Tubos con caldos de enriquecimiento Brilla y tetrationato inoculados. Medios de cultivo para la prueba de IMVIC.

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Sembrar en estra del Caldo Brilla al VRBA y EBM Sembrar en estra del caldo tetrationato al BPLS y SS De ambos caldos puede sembrar al VRBA Glucosado Luego de incubar a las temperaturas y tiempos adecuados realizar la prueba de IMVIC para una colonia representativa de E. coli.

LISTA DE PRUEBAS

Prueba de Indol:

Inocular en tubos con caldo peptonado o triptosa Incubar por 24 horas de 2 a 3 gotas de reactivo las paredes Dejar los tubos en reposo y observar la formacin de un anillo de color rojo negativo para el resultado positivo, o anillo color amarillo para el de kovacs por

Prueba del rojo de metilo:

Inocular los tubos conteniendo caldo MRVP Incubar a los tubos por 72 horas a 37C

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Despus de las 72 horas adicionar a 5 gotas de solucin rojo de metilo y agitar Anotar como el rojo de metilo positivo, la aparicin de un color roja y como negativo la aparicin de un color amarillo

Prueba de Vogues-Proskauer:
Inocular los tubos del caldo MRVP Incubar a 37 por 48 horas A 1 ml de cultivo aadir 0,6 ml de solucin de -naftol y 0,2 ml de solucin KOH al 40 % Agitar. Dejar reposar de 2 a 4 horas Reaccin positiva: coloracin rosada a carmes

Prueba de citrato:

Inocular los tubos de citrato de Simmons Incubar a 37C por 24 horas Anotar como positivo un crecimiento visible, acompaado de un cambio de color del verde al azul

EMB agar- eosina azul de metileno- lactosa - sacarosa:

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Colonias
Transparentes, de color ambarino Verdosas con brillo metlico a la

Microorganismos
Salmonela y Shigella luz Escherichia coli

reflejada, con el centro negro azulado a la

luz transmitida Mas grandes que las de E. Coli mucosas, Enterobacter, klebsiella y otros confluentes, con el centro pardo grisceo a

la luz transmitida

VRBA agar- violeta cristal-rojo neutro-bilis

Colonias
1-2 mm de dimetro Colonias como puntas de alfiler rosadas Incoloras

Microorganismos
lactosa positivas: Coliformes, E.coli Enterococos, eventualmente Klebsiella Enterobacterias lactosa negativas

Rojos con halo de precipitacin rojizo: de Enterobacterias

BPLS agar-verde brillante- rojo de fenol- lactosa sacarosa

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Colonias
Rojo-rosadas con halo rojo

Microorganismos
Lactosa negativos y sacarosa negativos, salmonella y otros

Verde

amarillentas

con

halo

verde Lactosa positivos o sacarosa positivos:

e.coli, Citrobacter, Proreus vulgarius, Klebsiella y otros. No obstante a veces inhibicin completa

amarillento

SS agar para Salmonella y Shigella

Colonias
Incoloras, transparentes

Microorganismos
Shigella y la mayora de salmonella

Transparentes con centro negro Rosadas hasta rojas

Proteus y algunas salmonellas E. coli

Mayores que las de e. coli rosadas hasta Enterobacter aergenas color cremoso-blanquecinas opacas y mucosas

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AISLAMIENTO DE ENTEROBACTERIAS Hay dos grupos:

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Lactosa +(gram -)
E.coli:

Lactosa (gram +)
Salmonella

Crece en el

Caldo Brilla, consume

lactosa y cambia a color verde cuando hay crecimiento, de verde botella a verde claro y gas.

Por 48 horas a 37C

Aerobacter o citrobacter: Shigella

Se sembrara de la muestra fecal de nio sano sin enfermedades, en los cultivos siguientes:

BPLS
Muy comn no especifico

EMB
Colonias verdes De mayor inters,

SS
Como chiquitas colonias y o con

por 24 horas y a
37 C

transparentes
rosadas punto negro

Lactosa + Lactosa Crecen los dos

Lactosa +

Lactosa

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Caldos

Sembrando cultivo.

en

medios

de

Placas Petri ya sembradas

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Caldo peptonado triptfano : degrada y convierte en indol, cuando hay crecimiento de E. coli. Se le agrega reactivo de kovacs y tiene que resultar IMVIC: Prueba de Indol, metilo, goves y citrato

un anillo rojo.

Los medios de cultivo ambos estuvieron por 24 a 48 horas a 37 C

EMB
Verde fosforescente por las

BPLS y SS
Verde brillante.

e. coli, con cierto azulado

No se detecto Salmonela

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Caldo

brilla:

Turbio,

Caldo

tetrationato:
de las lactosa ,

crecimiento de coliformes, formacin crecimiento de espuma y gas , las lactosa +

como la shigela.

Medio de Cultivo EMB: Escherichia coli al microscopio

Las pruebas de Voges proskauer y citrato son negativos: La prueba de Vogues Proskauer dio un color rojo en todos los tubos menos los testigos, eso quiere decir que hay produccin de acido por q el rojo de metilo se vuelve amarillo en medio base, si hay cido hay proceso de fermentacin y que el ph ha disminuido Los testigos no tuvieron crecimiento,

La prueba de indol y de rojo de metilo, son de resultado positivo Patgeno si forma el anillo, por eso se realizo las pruebas.

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El agar EMB como la bibliografa lo indica es un agar especial para aislar enterobacterias patgenas, por lo que nos centramos en este agar, ya que inhibe a bacterias gram positivas. Las colonias de e. coli se diferencian por forma el pigmento metlico tal como nos resulto a nosotros, como se sabe la e. coli es un indicador de contaminacin fecal, y por eso la empleamos para confirmar la presencia de coliformes con el agar EMB que es selectivo para esto. La tincin Gram se realizo debido a que tiene que coliforme No se utilizo la prueba de EMB porque resulta caro y se uso la prueba de indol agregando el reactivo de kovacs. resultar un organismo gram

negativo no formador de esporas y hay recin se habr confirmado que es un

Las E. coli son coliformes, y lactosa + El agar EMB pone al descubierto el crecimiento de E. coli cuando se colorea de verde metlico. La tincin Gram es importante para confirmar si un microorganismo es coliforme

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http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/embagar.htm Manual de practicas de Microbiologa bsica y Microbiologa de alimentos Escrito por Luis Roberto Alarcn http://es.scribd.com/doc/51434495/AISLAMIENTO-DE-ENTEROBACTERIAS http://dspace.utpl.edu.ec//handle/123456789/1876

http://es.scribd.com/doc/6467706/ENTEROBACTERIAS

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