TENDENCIAS ACTUALES ASERCA DE LA MICROPROPAGACION IN VITRO EN ORQUIDEAS. Chrystian Jareth Saavedra Santos. Biotecnologa Vegetal. Licenciatura de Ingeniero Biotecnologo.

Universidad Autnoma de Chiapas. Campus IV. c.j.s.s_8@hotmail.com Palabras clave: Medio MS, micropropagacin, se llaman epfitas (SCO, 1965). Por otro lado, aquellas orqudeas que se desarrollan a nivel de suelo, en este caso el pseudobulbo se ha modificado y las races cumplen la funcin de almacenamiento, estas orqudeas se llaman terrestres. Existen otras que se llaman litfitas las cuales crecen sobre rocas (SCO, 1965). A partir del tipo de crecimiento que presente una orqudea se clasifican en monopodial y simpodial; las primeras crecen de manera erguida cuyo tallo no se ramifica, al cual se insertan las hojas y no presentan pseudobulbos; las segundas presentan un rizoma que crece de forma horizontal, del cual surgen pseudobulbos con crecimiento vertical y a medida que crece el rizoma surgen nuevos pseudobulbos que dan origen a otra planta y por ltimo, las orqudeas que crecen a lo largo y hacia arriba sostenindose de un tutor, tal crecimiento es trepador, probablemente se puede considerar un cuarto caso y es el rastrero tal crecimiento se da a nivel del suelo (SCO, 1965). Descripcin morfolgica de las orqudeas Las orqudeas se consideran como la familia ms evolucionada dentro del reino vegetal, ya que presentan una gran complejidad y especializacin en su morfologa floral y en sus tipos de polinizacin. Asimismo existen dentro de la familia muy diversas formas de vida y desde el punto de vista ecolgico muchos de sus integrantes son componentes importantes en diversos tipos de vegetacin (Espejo, 2002). La caracterstica principal de las races de orqudeas es que presentan alrededor de la raz autntica una capa de tejido esponjoso llamado velamen, que se desarrolla en las especies terrestres, epfitas o litfilas (Gil, 2007).

Introduccin. Mxico cuenta con una gran variedad de orqudeas. Las especies de esta familia, en extremo hermosas, extraas y frgiles, se caracterizan por una difcil domesticacin, resultado del fuerte arraigo hacia sus entornos. Las Orquidceas son indicadoras del equilibrio entre el desarrollo de la civilizacin y el respeto a la naturaleza, pues la alteracin de un nicho ecolgico suele significar, desde la prdida de una gran cantidad de estas plantas, hasta la desaparicin de especies endmicas (Sarmiento, 2000). Las orqudeas constituyen un punto importante dentro de la realeza en el mundo de las plantas ornamentales. Se trata de una de las especies ms mimadas y ocupan las primeras posiciones entre todas las plantas con flores por su valor en la produccin de flor de corte, alcanzando un precio muy alto en el mercado internacional (Winkelmann et al., 2006). Cuando la utilidad de un recurso bitico es regida por sus caractersticas biolgicas y por el entorno cultural, es importante emprender estrategias para su conservacin; en particular, si son endmicos de nuestro pas, ello requiere cuidado especial al ser estos organismos sometidos a colectas intensivas de individuos silvestres y a la perturbacin del hbitat (Santos et al., 2006). Hbitat de desarrollo y tipo de crecimiento De acuerdo al lugar de desarrollo de una orqudea se determina su hbitat. Por tanto, aquellas orqudeas que se desarrollan nicamente sobre ramas y troncos de los rboles sin penetrarlos (slo cumpliendo la funcin de soporte) y cuyo alimento lo obtienen del aire, agua de lluvia y desechos de la corteza del rbol,

Las races son de color gris a blanco, presentando un pice meristemtico que absorbe la humedad y las pequeas cantidades de nutrimentos que la planta necesita. Este pice tiene una coloracin verde, lo cual cumple con la funcin de realizar parte de la fotosntesis de la planta. Las modificaciones y tipos de races que pueden presentarse en las orqudeas son: fibrosas, tuberosas, tipo bulbo, carnosas sin rizoma, carnosas con rizoma, races areas (Gil, 2007) La orqudea tiene como regla general un aspecto herbceo, aunque las hay en una variadsima gama de formas; ello se debe principalmente a su clima y hbitos caractersticos en su medio natural (SCO, 1965). Las hojas de las orqudeas son las que ms carcter herbceo presenta de todas las plantas. Como todas las monocotiledneas las nervaduras en la hoja se distribuyen paralelas entre s a lo largo de ella (SCO, 1965). Varan mucho en tamao y consistencia, pudiendo ser simples, paralelinerves, ssiles o pediceladas, alargadas y generalmente persistentes. Por su colocacin pueden ser alterna helicoidal, opuestas y en algunos casos slo presentan una hoja verdadera. Las hojas pueden ser terminales, insertadas a lo largo del pseudobulbo, en forma de roseta y solitarias variando en nmero (Gil, 2007) Las orqudeas presentan dos tipos de tallo: monopodial y simpodial. Las orqudeas monopoidales poseen un tallo con un eje que continua ininterrumpidamente su crecimiento terminal y produce hojas a medida que crece; en las axilas de las hojas, se desarrollan en forma peridica las flores (Soto, 1993). En las orqudeas simpodiales, se distinguen dos tipos de ejes: un rizoma rastrero u horizontal que a intervalos tiene callos carnosos, verticales o pseudobulbos, con hojas y flores terminales. Los tallos verticales de las orqudeas simpodiales tienen crecimiento determinado; es decir, despus de la produccin de cierto nmero de 4 hojas, se detiene abruptamente el crecimiento, o termina con la produccin de inflorescencias. Despus de la floracin, una yema vegetativa comienza a crecer en la base del pseudobulbo formando nuevamente un rizoma postrado, con pseudobulbo, hojas y flores (Soto, 1993).

Los pseudobulbos pueden tener formas muy variables de acuerdo a su gnero y/o especie siendo las ms comunes: globoso, ovoide, oblongo, cilndrico y segmentado, claviforme y fusiforme (Gil, 2007). Las flores de las orqudeas tienen una alta variabilidad puesto que han evolucionado en funcin de facilitar la fecundacin. Pese a la gran variedad de flores en la familia, todas tienen su diagrama floral idntico consistente en: un labelo, esto es tres ptalos y dos ptalos laterales, tres spalos, rganos sexuales fusionados formando una columna y ovario nfero (SCO, 1965). El labelo, ste es un ptalo modificado, el cual presenta modificaciones en color y forma, de mayor tamao y vistosidad, ya que es el encargado de atraer a los agentes polinizadores (Gil, 2007). La flor de orqudea es un tipo especial de flor irregular que tiene simetra bilateral (zigomorfa). Se puede cortar solamente en un plano y se dividir en dos mitades iguales. Cortando la flor en cualquier otro plano resultara en dos trozos irregulares (Larson, 2004). Estas son hermafroditas, en el interior se encuentran las estructuras reproductivas de la orqudea (antera y pistilo) que se han unido en una estructura cerosa llamada columna o ginandrio (Gil, 2007). Dentro de la flor los granos de polen se aglutinan en pequeos paquetes llamados polinias, el nmero de polinias depende de la especie , por tanto el nmero de stos y su disposicin dentro de la flor pueden ser utilizados para la identificacin de la misma, por ejemplo, Cattleya tiene cuatro, mientras que Laelia tiene ocho (Larson, 2004). Las flores de orqudea producen copiosas cantidades de semillas. Una sola vaina puede contener entre 500 000 y un milln de semillas diminutas, dichas semillas carecen de endospermo y con frecuencia se les llama semillas desnudas. Como no contienen endospermo, no pueden germinar en estado silvestre sin ayuda de algn hongo, mientras que en condiciones de laboratorio tienen que ser germinadas aspticamente con abastecimiento de todas las sustancias qumicas para su nutricin contenidas en un medio de germinacin (Larson, 2004).

El fruto de las orqudeas es una cpsula cuadro 1 dehiscente aunque en algunos casos puede ser una vaina, del mismo tipo de la vainilla (Vanilla spp.). Comnmente las cpsulas son de formas ovoides, elpticas, cilndricas o piriformes, pueden medir de 0.5 a 5 cm de dimetro y de 0.5 hasta casi 15 cm de largo dependiendo del gnero y la especie (Sheehan, 1994). Requerimientos climticos El cultivo de las orqudeas se desarrolla en gran variedad de climas y condiciones ambientales. Las diferentes especies de orqudeas tienen requerimientos climticos distintos y lo mejor para lograr xito en su cultivo es el estudio perseverante de las necesidades en particular (FUNPROVER, 2004). El cultivo de las orqudeas en invernadero, se debe regular adecuadamente humedad, luminosidad y temperatura. La humedad relativa debe ser de 70%; cuando sta sube demasiado, se favorece el desarrollo de enfermedades fungosas en las flores, por lo que es muy importante el constante movimiento del aire dentro del invernadero, que se logra mediante ventiladores . Por regla general, la humedad ambiental para el cultivo de orqudeas debe aumentarse en la estacin estival y disminuirse en la invernal, ya que estas variaciones se presentan en la naturaleza (Gil, 2007). Cuando la transpiracin es intensa, como consecuencia de la falta de humedad en el ambiente o por las altas temperaturas, puede ocurrir mayor concentracin de sales en las partes donde se realiza la fotosntesis y quedar disminuida esta funcin (Salisbury y Ross, 1994). Las orqudeas requieren temperaturas diurnas de 13 a 32 C y temperaturas nocturnas de 10 a 21 C, dependiendo, como antes se dijo, de necesidades particulares de cultivo. Las orqudeas, en trminos generales, se pueden dividir en tres categoras: de clima fro, intermedio y clido, segn donde crecen en su estado natural (Murgua, 2004). En el Cuadro 1 se presentan las temperaturas ptimas para algunos tipos de orqudeas. Una orqudea requiere la mxima cantidad de luz, sin lesionar la planta, la cual es necesaria para que sta crezca y se desarrolle bien. La cantidad de luz que los diferentes gneros de orqudeas pueden tolerar, sin lesionarse, vara grandemente, siendo importante considerar la etapa de crecimiento de la planta (Murgua, 2004). De acuerdo con los conocedores, una manera de saber cunta luz darle a nuestras plantas, es observando sus caractersticas, si tiene hojas duras y carnosas necesita ms luz y si sus hojas son blandas, anchas y finas necesita ms sombra. Demasiada luz decolora el verde de las hojas tornndolas amarillentas y dificultando su crecimiento, por lo contrario la poca luz da a las hojas un tono verde obscuro, impidiendo el desarrollo y anulando la floracin. En ambos casos se retrasa el crecimiento y se reduce o evita la floracin. La cantidad correcta de luz produce una coloracin verde lechuga generando una superficie brillosa, en los brotes nuevos y la planta florece regularmente (Gil, 2007). En el Cuadro 2 se dan algunos ejemplos por gneros de intervalos de intensidad luminosa.

Diversos son los factores a considerar en la conservacin de las orqudeas y sin duda la determinacin de parmetros de intensidad luminosa es un elemento considerar dependiendo el gnero.

Las orqudeas son de lento crecimiento y con periodos largos de descanso, adems las orqudeas tienen la dificultad para captar agua y nutrientes , sobre todo aquellas que viven sobre los rboles, por ello, estas plantas tienen bajos requerimientos nutrimentales y su fertilizacin es relativamente sencilla (Gil, 2007). El gnero Cattleya

La Familia Orchidaceae se divide en seis Subfamilias, y una de las ms importantes es la Epidendroideae ya que es la ms evolucionada (derivada) y adems comprende al 90% de las especies de las orqudeas americanas. Dentro de Epidendroideae existen varias tribus y subtribus, una de las cuales es la Subtribu Laeliinae, que incluye el gnero Cattleya y a sus parientes (Brassavola, Encyclia, Epidendrum, Laelia, Rhyncholaelia, Schomburgkia, Sophronitis, etc) (Garca, 1995) El nombre del gnero Cattleya se dio en honor al botnico y horticultor ingls William Cattley, el cual en 1818 recibi unos musgos y lquenes provenientes de Brasil que venan envueltos en unas hojas de lo que hoy se conoce como Cattleya labiata. El seor Cattley cultiv las hojas hasta obtener floracin, siendo la primera cattleya en descubrirse (Horich, 1980). Las cattleyas son originarias de las alturas medias de Amrica Central y Sur Amrica. En el mundo se encuentran cerca de 65 especies diferentes (Kuan y Gonzlez, 1993) Las especies de este gnero se han dividido en dos grupos: las cattleyas labiatas o unifoliadas (generalmente de Sur Amrica), que tienen una sola hoja que sale del pice del seudobulbo, sus flores son grandes y de ptalos anchos y vistosos. Normalmente producen dos o tres flores, que se mantienen por 1 a 4 semanas, ocurriendo un mximo de dos floraciones al ao. El requerimiento de luz de stas cattleyas es mayor que el de la bifoliadas (Kuan y Gonzlez, 1993).

Las especies ms representativas de este tipo son C.mossaie,. C. trianaei, C. dowiana, C. gaskelliana, C. lawranceana, C. lueddmanniana, C. mendellii, C. percivaliana, C. schroederae, C. warnerii, C. warscewiczii, C luteola, C. maxima (Horich, 1980). El otro grupo es el de las bifoliadas, porque tienen dos y algunas veces tres hojas, muy diferentes al tipo labiata(Horich, 1980). Las cattleyas bifoliadas (Centroamrica), tiene flores pequeas (en racimos de veinte o ms flores) pero frecuentemente de ms intenso y variado color que las unifoliadas, adems de tener mejor textura. Dentro de este grupo se puede encontrar entre otros a C. bicolor y C. skinneri. Los hbridos entre estos dos grupos han producido flores donde se combinan las mejores caractersticas de ambas (Kuan y Gonzlez, 1993).

Ecologa y descripcin La mayora de este grupo crecen como epfitas en el lindero de los bosques o en la copa de los rboles, donde reciben luz fuerte pero indirecta (Kuan y Gonzlez, 1993). Son plantas perennes con rizoma corto cubierto por brcteas apergaminadas y caducas. Las races son cilndricas, verdes al inicio formando un velamen de varias capas, grisceo o blanco verdoso en la madurez Los seudobulbos son redondeados, cilndricos o fusiformes, cubiertos por brcteas papirceas basales caducas, los cuales constituyen una defensa contra la sequa peridica. Las hojas pueden ser lanceoladas o elpticas, obtusas, coriceas o carnosas, lisas, ssiles y con venacin conduplicada. (Rodrguez et al, 1986). En el caso de cattleyas con inflorescencia, esta es terminal, racemosa, subtendida por una brctea espatcea, generalmente con pocas flores, grandes y llamativas, resupinadas. Las flores poseen un ovario pedicelado y cilndrico. Los spalos son iguales, libres, patentes o ligeramente reflexos. Los ptalos son semejantes a los spalos aunque generalmente ms anchos.

El labelo es ssil, simple o trilobulado, libre o ligeramente adnato a la base de la columna. Los lbulos laterales envuelven la columna. En algunas especies los lbulos laterales y el medio son totalmente diferentes, en otras son continuos. La columna es fuerte, cilndrica o subclaviforme, ligeramente arqueada, terminada en tres dientes. La antera es terminal, incumbente, operculada de dos celdas, cada una de ellas divididas por unsepto longitudinal. Los polinios son 4, creos, elptico-ovados, paralelos y ligeramente comprimidos, con caudculas prominentes. El estigma es entero (Rodrguez et al, 1986). Para florecer bien, las cattleyas necesitan luz abundante pero no directa entre 2000 y 3000 pies buja. La luz acelera el proceso de crecimiento de la planta para que esta luego florezca bien (Horich, 1980).

Los resultados han sido logrados con una gran variedad de orqudeas, la mayora focalizado en una nutricin inorgnica y con el uso de reguladores de crecimiento, entonces cada especie y gnero requiere una diferente composicin de medio y condiciones de cultivo para su crecimiento (Hahn y Paek, 2001). En cuanto a requerimientos comerciales y conservacin de especies en peligro de extincin, esto es deseable para el establecimiento de mtodos in vitro para la rpida y larga escala de propagacin (Pedroza y Mican, 2006). Reproduccin in vitro El cultivo de tejidos, micropropagacin o cultivo in vitro es una tcnica de cultivo artificial que permite producir organismos similares a partir de un explante , es decir una porcin de planta (tejido, rgano,clulas o parte de una masa callosa) tomada para el cultivo in vitro, bajo condiciones controladas. Esta tcnica naci hace cerca de 150 aos cuando Saks y Knop (en 1860 y 1861) observaron que los principales nutrientes de las plantas superiores eran sustancias inorgnicas y no orgnicas como se crea desde la poca de los griegos, dando origen al desarrollo del primer caldo o medio nutritivo (Gonzlez, 2008). Los pioneros en el trabajo de micropropagacin fueron F. Skoog y T. Murashige, este ltimo es considerado actualmente una autoridad en procedimientos y componentes del medio estril para un gran nmero de cultivos hortcolas. En los siguientes aos, estudios sobre polaridad de las plantas (Vochting, 1898) y la primera obtencin de callo (tejido vegetal que se divide activamente en el cultivo de tejidos) (Rechinger, 1893), propiciaron que muchos fisilogos vegetales iniciaran estudios de lo que se llamara posteriormente totipotencialidad. Ms tarde, en 1902 el fisilogo y botnico alemn Haberland propone por primera vez el cultivo de clulas vegetales in vitro desarrollando ms adelante la teora de totipotencialida razn por la cual se le considera el padre del cultivo de tejidos (Gonzlez, 2008).

REPRODUCCIN in vitro

Antecedentes de la reproduccin in vitro de orqudeas

La micropropagacin de orqudeas, de forma moderna comienza en 1949, con un nuevo (cultivo de tejidos o in vitro) simple y prctico mtodo de propagacin vegetativa (clonal) de Phalaenopsis (orqudea) que fue desarrollado en la Universidad de Cornell (Arditti, 1996). El medio nutritivo utilizado para este cultivo fue el Knudson C (KC), formulado para la germinacin asimbitica de semillas de orqudeas por Lewis Knudson, Profesor de Fisiologa de Plantas de la Universidad de Cornell (Arditti, 1996). Desde que Knudson desarroll un mtodo de cultivo in vitro asimbitico para la germinacin de semillas de orqudeas, el cultivo de tejido (in vitro) tuvo un papel importante y significativo en el cultivo, propagacin, crecimiento y conservacin de especies de orqudeas y de hbridos (Yoneo, 1991). La solucin Knudson C todava se utiliza para la germinacin de semillas de orqudeas y en la micropropagacin de algunas orqudeas. Las tcnicas de cultivo in vitro tienen que ser exitosamente adaptada para la propagacin masiva de plantas de orqudeas.

Toda clula vegetal viva, cualquiera que sea su especializacin, posee un ncleo que es capaz de reproducir las caractersticas de la planta de la cual proviene. A esta notable capacidad de la clula vegetal, el cultivo in vitro debe toda su Extensin. La introduccin de un mtodo de germinacin de semillas por Knudson (1946) y el cultivo de un fragmento de vstago por Morel (1960) ha ayudado en el desarrollo de mtodos para la propagacin de orqudeas (Sheelavantmath, 2000). La micropropagacin presenta importantes ventajas sobre los mtodos tradicionales de propagacin, entre ellas se puede citar: a. Incremento acelerado del nmero de plantas derivadas por genotipo b. Reduccin del tiempo de multiplicacin c. Posibilidad de multiplicar grandes cantidades de plantas en una superficie reducida, a bajos costos y en un tiempo econmicamente costeable. d. Mayor control sobre la sanidad del material que se propaga .e. Facilidad para transportar el material in vitro de un pas a otro, con menos restricciones aduaneras. f. Posibilidad de multiplicar rpidamente una variedad de la cual slo existan pocos individuos (Villalobos y Thorpe, 1991). Debido a que la micropropagacin se refiere a un fenmeno de reproduccin asexual, el riesgo de tener variantes fenotpcas o genticas es bajo. Sin embargo eso puede suceder cuando no se domina el proceso in vitro. Las plantas que vienen de un mismo meristemo, pice, o estaca son llamadas clones (Krikorian, 1991b). La obtencin de una planta entera puede ocurrir a travs de 3 vas diferentes: a partir de brotes, primordio, meristemo y embriones pre-existentes en el explante utilizado. a partir de un brote o meristemo iniciado dentro de un callo o directamente sobre el explante inicial. En este caso los brotes o meristemos se forman in vitro (brotes adventicios o de novo)

a partir de un embrin somtico formado a partir de tejido somtico (embriognesis somtica) (Abdelnour y Vincent, 1994).

Murashige (1974; 1977) encontr que era til destacar la secuencia de eventos asociados con la multiplicacin de plantas mediante las tcnicas de cultivo asptico, de la siguiente manera: Etapa I. Iniciacin o establecimiento (se establece el cultivo inicial o primario) Etapa II. multiplicacin de brotes o multiplicacin de plantas. Etapa III. Corresponde al enraizamiento o etapa de pretransplante; tiene como objetivo producir una planta autotrfica que pueda sobrevivir en las condiciones del transplante al suelo (Krikorian, 1991b). Adems de las anteriores, pueden considerarse otras dos etapas como parte integral del procedimiento: Etapa IV: Transferencia final a la etapa de medio ambiente Etapa 0. Etapa inicial, que comprende la seleccin de la planta madre y la seleccin de una modalidad de pretratamiento para volver funcional la estrategia que se adopte (Krikorian, 1991b).

Micropropagacin de orqudeas

Reproduccin a partir de semillas

Debido a que las semillas de orqudeas son muy pequeas y contienen poca o nula reserva alimenticia, la germinacin y el subsiguiente desarrollo de la planta, dependen en la naturaleza, de la relacin simbitica con un hongo, sin embargo, es posible sustituir la accin del hongo por un medio nutritivo. Ha esta germinacin se denomina asimbitica (Gil, 2007).

En el caso de orqudeas raras o las que estn en peligro de extincin, metodologas in vitro de propagacin pueden ser necesarios, donde el cultivo de semillas es una razonable estrategia de propagacin masiva de un muestreo no destructivo de explante (Krikorian, 1991; Zettler et al., 2001). De acuerdo a Wagner et al. (2006) la propagacin de orqudeas se puede realizar por la germinacin de semillas de forma asimbitica o bien por la multiplicacin convencional vegetativa. Tambin las micorrizas proveen a las plantas jvenes de azcares y nutrimentos que necesitan en su desarrollo hasta ser autosuficientes (McKendrick, 2000). Las semillas requieren establecer relaciones simbiticas con microorganismos, como es el caso de un hongo especfico, conocido como Rhizoctonia, ya que la capa de la cpsula es gruesa, la accin del hongo consiste en la degradacin de dicha capa, sin que altere las clulas interiores y permite la germinacin. La germinacin de la semilla en el medio de cultivo, produce una masa indiferenciada, llamada protocormo; bajo condiciones ptimas, el protocormo continuar su crecimiento por semanas, meses o incluso aos, hasta alcanzar el desarrollo de races y hojas. Son diversos los medios nutritivos usados para la germinacin de semillas y desarrollo de varios gneros y especies de orqudeas. Las orqudeas terrestres requieren un medio pobre en sales, mientras las epfitas necesitan un medio ms rico en sales (Gil, 2007). La germinacin in vitro de semillas permite un gran nmero de plntulas para se producidas en un pequeo lapso de tiempo. De hecho, diversos mtodos han sido reportados para la micropropagacin de orqudeas (Pedroza y Mican, 2006). Reproduccin asexual Se pueden reproducir las orqudeas por va vegetativa, o sea, por particin esquejes o meristemos (que es como se producen la mayora de las plantas que estn en el mercado).

En todos estos casos estamos obteniendo clones idnticos a la planta madre. La reproduccin asexual o vegetativa se efecta sin transferencia de material gentico, se realiza tomando una parte de la planta a reproducir mediante un instrumento de cortar y sembrando en un medio adecuado, dependiendo de la especie (Gil, 2007). Desde Morel y Wimber, demostraron la aplicacin del cultivo de tejidos como una rpida propagacin clonal de orqudeas, esta tecnologa fue exitosamente aplicada a la produccin comercial de plantas de orqudeas seleccionadas. Grandes cantidades de plantas, establecimiento de nuevos hbridos y la multiplicacin y preservacin del germoplasma son algunos beneficios que derivan de la aplicacin de esta tecnologa (Yoneo, 1991) Los explantes son exitosos a partir de fragmentos vegetativos, inflorescencias jvenes, hojas y races. Sobre la preferencia del origen del explante es terminal o axilar de las yemas de la accin vegetativa de los brotes de las plantas superiores. El explante de yemas apicales incluye el meristemo apical con 3 a 4 nudos con la presencia de hojas jvenes. Brotes axilares como explantes, consiste del cubo del brote adherido al nudo. Los explantes por races consisten de 3 a 5 mm de extensin de raz (Yoneo, 1991). En la reproduccin a partir de meristemos se extraen clulas meristemticas de la yema de crecimiento de la planta bajo condiciones ambientales estriles, su posterior multiplicacin y transferencia final de las nuevas plantas. Este mtodo es utilizado para clonar variedades destacadas por su inters botnico y calidad y floracin, tal tcnica presenta varias ventajas: permite multiplicar a voluntad los ejemplares de una orqudea, ya que el proceso de divisin puede repetirse a medida que crecen los fragmentos. Estos meristemos clonados se desarrollan en un medio nutritivo y dichos individuos presentan caractersticas idnticas a la de sus progenitores (Gil, 2007).

mg L -1; en el caso del mioinositol se encuentra presente en concentraciones de 10 a 100 mg L-1, su funcin es mejorar el crecimiento, pero no parece ser esencial. Con respecto a los requerimientos de aminocidos, stos se agregan en forma de una mezcla compleja a la que se le Los componentes del medio de cultivo se conoce como casena hidrolizada, pero se puede clasifican en cuatro categoras: adicionar asparagina, glutamina, arginina, cido asprtico, cido glutmico y tirosina, solos o 1. Sales minerales mezclados. Se deben usar los ismeros L, los ismeros D son ineficaces. 2. Sustancias orgnicas Los tejidos muestran necesidades especficas en 3. Reguladores de crecimiento lo que se refiere a los reguladores del crecimiento o fitohormonas, se ha demostrado 4. Productos naturales complejos que a concentraciones bajas (0.01 mg L-1), influyen de manera sensible en el crecimiento de los tejidos vegetales. Los tejidos cultivados tienen necesidades especficas con respecto a los siguientes iones: En los medios de cultivo se utilizan cuatro K+, NO3-, NH4+, Ca2+ y Mg2+; los iones K+, citocininas: 2- isopenteniladenina (2iP) y la NO3- y NH4+ son los que ejercen influencia zeatina, que son naturales; y la N6 importante en el crecimiento de los tejidos benciladenina (BA o BAP) y la cinetina (6 (Vidalie, 1976),con frecuencia se aade fsforo furfuril- aminopurina), que son sintticas. El en bajas concentraciones (Vidalie, 1976). caso de la cinetina resulta ser menos eficiente si se le compara con las otras tres citocininas. La En lo que respecta a los micronutrimentos, se concentraciones ms usadas de los reguladores sabe que el hierro es esencial para el crecimiento de crecimiento descritos es de 0.01 a 10 mg L -1. tisular, que generalmente se agrega en forma de quelato (FeEDTA) a una concentracin de 20 a El uso de giberelinas es recurrente, pero slo el 40 mg L -1. En el caso de otros cido giberlico 3 (AG3), se utiliza en forma micronutrimentos, algunos tejidos son sensibles frecuente, se adiciona en el medio de cultivo al cido brico (H3BO3), al manganeso y al para estimular el crecimiento de los meristemos, zinc, estos elementos se introducen al medio de inducir el alargamiento de los tallos o incluso cultivo en concentraciones del orden de 0.02 a para activar el crecimiento de los embriones 0.10 mM L-1. somticos (Vidalie, 1976). El metabolismo de los tejidos se puede modificar Siguiendo en la lnea de micronutrimentos, se por completo, dependiendo de que se encuentren desconoce o se sabe muy poco acerca de la en un medio slido o en uno lquido, la decisin influencia del Cu, Mo, Co, I y Na sobre el acerca de qu tipo de medio elegir, no tiene que crecimiento de los tejidos; sin embargo, se ser una decisin arbitraria (Vidalie, 1976). agregan al medio de cultivo como medida de El pH del medio tambin se considera como un precaucin en concentraciones bajas, del orden factor crtico. En la prctica el pH inicial se de 0.00003 a 0.03 mM L -1. ajusta a valores comprendidos entre 5.5 y 5.8 El uso de sustancias orgnicas como azcares, durante la preparacin del medio, durante el vitaminas y aminocidos dentro del cultivo de proceso el pH frecuentemente disminuye; sin tejidos es importante; con respecto a los embargo, se sabe muy poco sobre los efectos de azcares, las necesidades suelen cubrirse con esta variacin. concentraciones de 2 a 3%; las necesidades de vitaminas se cubren con el uso de vitaminas del grupo B, es el caso de la vitamina B1, que es esencial, presente en concentraciones de 0.1 a 10 Medios de cultivo El medio de cultivo es el que le confiere al material vegetal los nutrimentos necesarios para su desarrollo, se define por sus propiedades qumicas y fsica (Vidalie, 1976).

Aunque en muchos casos la composicin mineral de Murashige y Skoog (1962) da Bibliografia: resultados satisfactorios, se debe considerar que no siempre es la mejor opcin, lo conveniente es 1. Abdelnour, A. y Muoz, A. 1997. seleccionar una composicin en funcin del Rescate, establecimiento, multiplicacin conocimiento de la fisiologa de la especie con y conservacin in vitro de germoplasma respecto a la nutricin mineral. El medio MS es de orqudeas en vas de extincin. muy rico en sales totales y a menudo se le puede Cartago, Costa Rica. Instituto diluir a la mitad. Tecnolgico de Costa Rica, Vicerrectora Las tcnicas biotecnolgicas, en la actualidad de Investigacin y Extensin. Pp 4-10. han tomado mayor auge, sin embargo hasta el momento para muchas especies vegetales, los sistemas de propagacin tradicional no 2. Arditti, J. 1982. Orchid seed germination satisfacen las diversas demandas de estos and seedling culture: A manual. In: cultivos, al igual que existen especies endmicas Arditti, J. (Ed.), Orchid biology: Reviews y/o en peligro de extincin, que como va and perspectives. Ithaca: Comstock alternativa para su rescate y conservacin no publishing associates 2:244-370. logran satisfacer las demandas de conservacin y propagacin (Rosales et al., 2003). 3. Espejo, S. A., Garca, C. J., Lpez, F. R. y Snchez S. L. 2002. Orqudeas de Estado de Morelos. Herbario AMOConclusin: UAM Iztapalapa. Mxico. pp: 4-13. Diversas son las especies de flora y fauna que convergen en Mxico, producto de la ubicacin 4. Gil I. V., Bastida A. T., Flores G. E., y geogrfica de nuestro pas, as como su compleja Navarro E. L. 2007. Reproduccin y orografa e historia biogeogrfica y presencia de manejo de orqudeas mexicanas. diversos climas. En el caso de las orqudeas, se Universidad Autnoma Chapingo. calcula que existen 400 especies o subespecies Mxico. Pp: 31- 42. endmicas, las cuales corresponden al 40% del total registrado en nuestro pas. 5. Gonzlez, J. 2008. Cultivo de tejidos: Relacionar la conservacin de las especies con la una herramienta para el accin del ser humano, implica una actividad de fitomejoramiento.Contacto Nuclear. conciencia y actuar; diversas pueden ser las ININ.49: 37-40. opciones en el acto de conservar las especies endmicas de nuestro pas. 6. Hahn E. J. and Paek, K. Y. 2001. High La propagacin in vitro de material vegetal photosynthetic flux and high CO2 aporta resultados en la conservacin de especies. concentration under increased number of No obstante, es evidente a partir de la literatura air exchanges promote growth and citada, que diversos son los factores que photosynthesis of four kinds of orchid intervienen en el xito en la propagacin y es plantlets in vitro. In vitro Cellular and. evidente que los resultados obtenidos dependen Developmental Biology Plant. en gran medida de la especie con que se trabaja. SeptemberOctober. Society for In vitro Biology pp: 37:678682. 7. Horich, C. 1980. Las Cattleyas en Costa Rica. En: Orqudeas: su cultivo en Costa Rica. Ed. por la Asociacin Costarricense de Orquideologa. San Jos, Costa Rica, Impresora Delta, S.A. Pp 9-11.

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