UNIVERSIDADE ESTADUAL DE MARING CENTRO DE CINCIAS BIOLGICAS DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA CELULAR E GENTICA

Roteiro de aula prtica DIFERENAS ENTRE CLULAS ANIMAIS E VEGETAIS Prtica - Observao da mucosa bucal. Raspar a mucosa bucal com o auxlio de uma esptula de madeira. Com o material colhido fazer um esfregao fino e transparente sobre uma lmina seca. Deixar a lmina secar movimentando-a no ar. Corar o material com azul de metileno ou orcena actica durante 5 minutos. Cobrir com lamnula e observar ao microscpio com objetivas de 10x e 40x. Esquematizar o material observado. Prtica - Observao da epiderme de pimento (Capsicum annuum). Faa um corte fino, pequeno e transparente na casca do pimento. Deposite sobre a lmina e adicione uma gota de cloreto de zinco iodado. Cubra com lamnula (retirar excesso de corante com papel filtro se necessrio) e observe ao microscpio com objetivas de 10x e 40x. Na objetiva de 40x fechar levemente o diafragma. Faa outro corte, corando-o com hidrxido de amnia. Aguarde alguns segundos, cubra com lamnula (retirar excesso de corante com papel filtro se necessrio) e observe ao microscpio como anteriormente. Esquematize as observaes. ESTUDO DE CLULAS VEGETAIS Prtica - Clulas da epiderme inferior de Setcreasea purpurea. Retirar um pedao da epiderme inferior da folha de Setcreasea e colocar em uma lmina contendo uma gota de gua destilada. Cobrir com lamnula. Retirar o excesso de gua se necessrio. Observar ao microscpio com objetivas de 10x e 40x. Retirar a lmina do microscpio e pingar uma gota de cloreto de zinco iodado ao lado da lamnula. Sem retirar a lamnula e com o auxlio de papel filtro, faa o cloreto de zinco substituir a gua debaixo da lamnula. Aguarde alguns minutos e observe novamente ao microscpio. Esquematize as observaes. Prtica - Epiderme do catfilo de Allium cepa (cebola) Destacar um pedao da epiderme do catfilo da cebola e colocar em uma lmina contendo uma gota de cloreto de zinco iodado. No deixar o catfilo enrugado, esticando-o se necessrio. Cobrir com lamnula (retirar excesso de corante com papel filtro se necessrio) e observar ao microscpio com objetivas de 10x e 40x. Esquematize as observaes. Prtica - Folha de Anacharis sp (Eldea) Destacar um fololo de Anacharis e colocar em uma lmina contendo gua. Cobrir com lamnula e observar em objetiva de 10x e 40x. Esquematize as observaes. Relatrio: Entregar ao final da aula. Observar todas as lminas nas objetivas de 4x, 10x e 40x. Desenhar com a objetiva de 40x, identificando as estruturas celulares observadas.

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Roteiro de aula prtica OBSERVAO DE ORGANISMOS PROCARIONTES: Prtica - Bactria da coalhada (iogurte - Bacilo lacteo). Sob uma lmina coletar uma pequena poro de coalhada. Pingar uma gota de gua e dissolver bem. Fazer um esfregao, tomando-se o cuidado de identificar o lado da lmina no qual encontra-se o esfregao. Secar bem a lmina, podendo utilizar chapa aquecida. Pingar 3-4 gotas da mistura lcool-clorofrmio. Secar o preparado movimentando a lmina no ar. Em seguida, pingar 2 gotas de azul de metileno, espalhando-o pela lmina. Aguardar 5 minutos, lavando com gua destilada. Limpar o excesso de gua e levar ao microscpio para observao em objetiva de 10x e 40x. Fechar um pouco o diafragma aps a localizao do material. Represente o material observado. Prtica - Bactrias do vinagre (Acetobacter aceti). Sob uma lmina coletar pequena poro da madre do vinagre azedado (pelcula formada na superfcie) Faz-se um esfregao, secando-o lentamente em chama ou placa aquecida. Pingar 2-3 gotas de azul de metileno, fazendo-o correr pela lmina. Aguardar 10 minutos, e lavar a lmina em gua corrente. Adicionar glicerina e cobrir com lamnula. Observar em objetiva de 10x e 40x. Prtica - Reconhecimento de bactria e algas azuis. Prepare as culturas A e B com antecedncia de 3 a 4 dias. No frasco A coloque cerca de 10 gro de pimenta do reino e 100ml de gua filtrada. Fechar o frasco, deixando-o em local pouco iluminado. No frasco B coloque grama com raiz, bem picada, forrando o fundo do frasco. Acrescente 100 ml de gua filtrada. Deixar o frasco aberto em local areja do e iluminado. Coloque uma gota de cada cultura, tomando-se o cuidado de no misturar os conta-gotas, em lminas (diferentes) limpas, cobrindo-as com lamnula. Observe ao microscpio em objetiva de 10x e 40x. Faa esquemas do que encontrar. OBSERVAO DE ORGANISMOS EUCARIONTES: Prtica - Clulas de levedo. Tome uma poro de fermento de po, dissolvendo-o em gua morna. Junte acar, deixando descansar por 15 a 20 minutos. Pingue uma gota da suspenso sobre uma lmina, cubra com lamnula e observe ao microscpio. Em seguida, fixe o material passando a lmina sobre uma chama. Corar 5 minutos com violeta genciana. Lavar rapidamente em gua corrente, cobrir com lamnula e observar ao microscpio com as objetivas de 10x e 40x. Esquematize as observaes. Prtica - Identificao de vrios tipos de protistas. Com antecedncia de 6 a 7 dias prepare as culturas A e B. Coloque alface picada em uma frasco (A) e grama picada em outro (B). Acrescente a ambos alguns gros de arroz cru e 100 ml de gua filtrada. Deixe os frascos em local arejado e iluminado, sem exposio direta ao sol. Depois de alguns dias cobrir os frascos com papel filtro ou algodo. Coloque uma gota da cultura (A ou B - colha a pelcula que se forma na superfcie ou o sedimento do fundo) em uma lmina, cubra com lamnula e observe ao microscpio com objetivas de 10x e 40x. Esquematize as observaes. Relatrio: Entregar ao final da aula. Observar todas as lminas nas objetivas de 4x, 10x e 40x. Desenhar com a objetiva de 40x, identificando as estruturas celulares observadas.

Clula Eucaritica: vrios compartimentos (organelas)

Membrana plasmtica: CITOPLASMA: gua RNAs (mensageiro, transportadores) Aminocidos Protenas (livres, do citoesqueleto, etc) Enzimas Coenzimas Vitaminas NCLEO: Sais minerais DNA. RNAs ons Protenas. ATP Enzimas. Nucleotdeos ons. gua. c. Graxo Carboidratos Glicognio Amido (Polissacardeos) molculas diversas (acetil Coa; piruvato, etc) gorduras de reserva (gotas de triglicrides) Ribossomos (RNA ribossomal + protenas) Etc. fosfolipdios glicolipdios colesterol protenas glicoprotenas

Membrana das organelas: fosfolipdios glicolipdios colesterol protenas glicoprotenas Lmen das organelas: Vrias molculas diferentes, dependendo da organela em questo. Protenas Enzimas ons Lipdios Carboidratos gua Etc.

Clula procaritica: um nico compartimento

DNA. Protenas, enzimas, RNAs, aminocidos, nucleotdeos, gua. Enzimas. Coenzimas. Vitaminas. Sais minerais. ons. ATP. Nucleotdeos. c. Graxo. Carboidratos. Polissacardeos. molculas diversas. gorduras de reserva (gotas de triglicrides) Ribossomos (RNA ribossomal + protenas) Etc.

Membrana plasmtica: fosfolipdios glicolipdios protenas glicoprotenas

Roteiro de aula prtica IDENTIFICAO DE COMPONENTES QUMICOS CELULARES Extrao de DNA

Material: cebola grande - 250 gramas Sal de cozinha - 3gramas Detergente neutro - 10ml lcool etlico 95% gelado Papel filtro, tubos de ensaio, funil banho-maria a 60oC Metodologia: Picar a cebola em pedaos pequenos. Bater no liqidificador e reservar 25g Preparar 100ml da soluo de extrao: 3g de sal, 10ml de detergente. Completar com gua destilada at 100ml. Junte a cebola com a soluo de extrao em um frasco e deixar em banho-maria a 60o C durante 15 minutos. Em seguida, resfrie colocando o recipiente em gelo. Coe a mistura em papel filtro e recolha o filtrado em um tubo de ensaio. Despeje, delicadamente, o etanol 95% no tubo de ensaio. O DNA sobe para o etanol, no qual insolvel, ficando preservado e visvel

Roteiro de aula prtica IDENTIFICAO DE COMPONENTES QUMICOS CELULARES Carboidratos: O amido um polissacardeo cuja unidade monossacardica a glicose. Apresenta-se sob duas formas: amilose, que consiste de longas cadeias no ramificadas e que na presena de iodo, do colorao roxo-azulada, e amilopectina, que contm cadeias altamente ramificadas e do colorao marrom-avermelhada. Ambas esto presentes em propores variveis nos tecidos vegetais de reserva. 01 - Teste de colorao do amido - Tuberculus tuberosae (batata inglesa) Cortar, com a gilete, um pedao muito fino e pequeno do interior da batata e colocar sobre uma lmina. Corar o material com Lugol por 5 minutos. Cobrir com lamnula. Observar. 02 - Euforbia splendens (coroa de Cristo) Pingar sobre a lmina uma gota de ltex da coroa de Cristo dissolvido em gua. Pingar uma gota de Lugol. Cobrir com lamnula. Observar. Lipdios Os lipdio se classificam em simples e compostos. Entre os compostos podem ser diferenciados os lipdios figurados, que so visveis em forma de gotas refringentes e os mascarados, que so demonstrados por anlises qumicas. 03 - Citrus sp (laranja e limo) Fazer um corte tangencial bem fino na casca da laranja ou limo de maneira que possa passar a luz que nele incidir. Colocar sobre um vidro de relgio e pingar algumas gotas de Sudan IV e corar por sete minutos. Retirar o corte com um pincel e coloc-lo sobre uma lmina. Cobrir com lamnula. Observar. Protenas Reao de biureto: o sulfato de cobre (CuSO 4) em meio alcalino reage com compostos contendo duas ou mais ligaes peptdicas, resultando um complexo de colorao violeta. A intensidade da cor proporcional ao nmero de ligaes peptdicas existentes. 04 - Leite e clara de ovo Pipetar 0,5ml de: 1)soluo de clara de ovo diluda em gua; 2)leite; 3)gua e 4)gelatina. Colocar em tubos de ensaios separados. Adicionar 05 gotas de CuSO4 a 1% e 05 gotas de NaOH 2,5N. Observar se ocorrem alteraes de cores e explicar. Reao Xantoproteica: o cido ntrico (HNO3) reage com os anis benznicos dos aminocidos triptofano, tirosina e fenilalanina, formando nitro compostos amarelos em meio alcalino. Realizar em conjunto com a prtica 06. 05 - Leite e clara de ovo Pipetar 0,5ml de: 1) soluo de clara de ovo diluda em gua; 2)leite; 3)gua e 4)gelatina. Colocar em tubos de ensaios separados. Adicionar 05 gotas de HNO3 concentrado e 05 gotas de NaOH 20%. Observar se ocorrem alteraes de cores e explicar. OBS.: Evitar respirar os odores (gases) liberados pelo HNO 3. Manuseie-o com cuidado!! Realizar em conjunto com a prtica 06. Identificao de pH Para determinar o pH de solues usamos indicadores e uma tabela de pH. Os valores da escala (0-14) referem-se as propores de H + e de OH- presentes na soluo. 06 - Molhar as fitas de papel tornassol nas solues qumicas separadas e misturadas utilizadas nas prticas anteriores (04 e 05). Observar a colorao das fitas e explicar. Relatrio: Entregar ao final da aula. Observar todas as lminas nas objetivas de 4x, 10x e 40x. Desenhar com a objetiva de 40x, identificando as estruturas celulares observadas. Identificar os amiloplastos e a morfologia dos gros de amido. Identificar as bolsas de leo ou depsitos de lipdios e verificar se a concentrao de lipdios a mesma em todas a sua extenso.