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Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento

BINAGRI - SISLEGIS

Portaria MAPA 84/1992 (D.O.U. 22/10/1992)

MINISTRIO DA AGRICULTURA, PECURIA E ABASTECIMENTO SECRETARIA NACIONAL DE DEFESA AGROPECURIA PORTARIA N 84, DE 19 DE OUTUBRO DE 1992. O SECRETRIO NACIONAL DE DEFESA AGROPECURIA, no uso da atribuio que lhe confere o art. 78, inciso VII do Regimento Interno da Secretaria Nacional de Defesa Agropecuria, aprovado pela Portaria Ministerial n 212 de 21 de agosto de 1992, resolve: Art. 1. Aprovar as "Normas de Credenciamento e Monitoramento de Laboratrios de Anemia Infecciosa Eqina" em anexo. Art. 2. Esta Portaria entra em vigor na data de sua publicao, revogando-se as disposies em contrrio. JOS PEDRO GONZALES ANEXO NORMAS PARA CREDENCIAMENTO E MONITORAMENTO DE LABORATORIOS DE DIAGNSTICO DE ANEMIA INFECCIOSA EQINA Para efeito de credenciamento e monitoramento de laboratrios de diagnstico de Anemia Infecciosa Eqina, sero obedecidas as determinaes constantes das Portarias n 53 da Secretaria Nacional de Defesa Agropecuria (SNAD) de 20 de maio de 1991 e n 1 da Diviso de Laboratrio Animal (DLA) de 14 de agosto de 1991. 1. MATERIAL: 1.1. Antgeno e soro padro: 1.1.1. S podero ser utilizados antgenos (Ag) e o soro controle positivo (SCP) registrados na Coordenao de Produtos Veterinrios Departamento de Defesa Animal, observado o prazo de validade. 1.1.2. O Ag e o SCP devem ser, dependendo da demanda dos testes, divididos em fraes menores, identificadas e estocadas a - 20oC. 1.2. Amostra a ser testada : Soro sangneo 2. RECEBIMENTO DAS AMOSTRAS: 2.1. As amostras devero estar devidamente identificadas e acondicionadas em caixas isotrmicas. 2.2. As amostras devero estar acompanhadas de requisio de exame assinada por mdico veterinrio com sua identificao profissional (modelo Portaria 77). 2.3. No sero recebidas amostras com evidncia de contaminao. 2.4. As amostras sero registradas em livro prprio, conforme modelo indicado pela CLA.(Anexo V). 2.5. As amostras sero obrigatoriamente divididas em duas alquotas de 2ml e identificadas, uma para prova e outra para contra-prova na presena do Mdico Veterinrio requisitante ou seu portador nomeado. 2.6. A declarao de contra-prova (Anexo II) ser preenchida e assinada pelo Mdico Veterinrio requisitante ou seu portador nomeado. 2.7. A tarjeta de identificao da contra-prova (Anexo IV) ser preenchida e lacrada juntamente com as amostras para contra-prova; o lacre ser plstico, numerado e inviolvel. 2.8. No caso de recebimento de sangue, o mesmo dever ser centrifugado, e o soro receber o tratamento dos itens anteriores. 3. NOMEAO DE PORTADOR: O Mdico Veterinrio requisitante, caso no seja portador do material coletado, deve nomear um portador conforme modelo indicado pela CGLA (Anexo III). 4. CONSERVAAO E ESTOCAGEM: 4.1. A amostra a ser testada dever ser conservada sob refrigerao at a realizao da prova e destruda aps a realizao do exame. 4.2. As amostras destinadas a contra-prova devero ser estocadas em congelador a -20C, devendo ser mantidas estocadas durante um perodo de 30 dias aps a realizao dos exames. 5. SEGURANA BIOLGICA: 5.1. Devero ser respeitadas as normas de segurana biolgica em todos os procedimentos realizados com o material de exame. 5.2. As amostras destinadas prova e contra-prova, sero destrudas aps decorrido o prazo estabelecido para sua estocagem, obrigatoriamente atravs de autoclavao a 120C, com uma libra de presso durante 30 minutos. 6. MTODOS: 6.1. O teste de imunodifuso em gel de gar (IDGA) para o diagnstico da Anemia Infecciosa Equina (AIE), conforme descrito no Anexo I, o teste indicado pela Coordenao-Geral de Apoio Laboratorial (CGAL) da Secretaria de Defesa Agropecuria (SDA) do Ministrio da Agricultura, Pecuria e Abastecimento (MAPA), para o diagnstico desta enfermidade. (Redao dada pelo(a) Portaria 495/2010/SDA/MAPA) _______________________________________________ Redao(es) Anterior(es) 6.2. No caso de utilizao de kits importados dever ser seguida a instruo do protocolo constante da bula do distribuidor. (Acrescentado(a) pelo(a) Portaria 495/2010/SDA/MAPA) 7. RESULTADOS E RELATRIOS: 7.1. Os resultados dos exames devero ser emitidos em formulrios prprios, segundo modelo estabelecido pela CLA e de acordo com o fluxograma determinado:

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7.1.1. Resultado POSITIVO: Imediata e obrigatoriamente comunicado ao Servio de Defesa Sanitria Animal (SSA) Diretoria Federal de Agricultura e Reforma Agrria (DFARA) da Unidade Federativa onde se encontra o animal reagente. Outro procedimento poder ser adotado por instruo da DFARA. 7.1.2. Resultado NEGATIVO: Ser comunicado ao Mdico Veterinrio que assinou o pedido de exames e/ou ao interessado. 7.1.3. Todo laboratrio credenciado dever encaminhar at o quinto dia til do ms subseqente, relatrios das atividades mensais, em formulrios prprios (Anexo VI e Anexo III da portaria SNAD no 77 de 28/09/92, publicada no D.O.U. em 13/10/92) a DFARA e ao laboratrio da CGLA responsvel pela Coordenao da Unidade Federativa onde se localiza o laboratrio credenciado. 8. REALIZAO DOS EXAMES NA CONTRA-PROVA: 8.1. A realizao de contra-prova somente ser efetuada no laboratrio realizador do exame. 8.2. A solicitao dever obedecer ao prazo mximo de 8 dias a contar da data do recebimento do resultado. 8.3. A contra-prova ser solicitada ao Servio de Sanidade Animal / DFARA da Unidade Federativa onde se encontra o animal reagente. Este a encaminhar ao laboratrio realizador do exame. 8.4. O Mdico Veterinrio requisitante do exame obriga-se a pessoalmente, ou por seu representante, a acompanhar, assistido ou no por tcnicos de sua confiana, aos exames que sero realizados na contra-prova. 8.5. Cabe ao tcnico indicado pelo Mdico Veterinrio requisitante do exame apenas assistir, fiscalizar e observar a exatido do resultado dos exames. 8.6. obrigatria a comunicao ao Servio de Defesa Sanitria Animal / DFARA, da data e horrio da realizao do exame da contra-prova, podendo o tcnico daquele Servio assistir, fiscalizar e observar a exatido do resultado. 8.7. A ausncia do representante do Servio de Defesa Sanitria Animal / DFARA no constitui bice para a realizao do mesmo, desde que tenha sido observado o disposto no item 8.6. 8.8. Aps a realizao do exame, ser lavrada uma ata assinada pelos interessados presentes, onde constar o resultado desse exame e a descrio de todo mtodo analtico nele utilizado. 8.9. A desistncia do Mdico Veterinrio requisitante do exame, ou seu representante,mediante declarao escrita, ou a sua ausncia na realizao do exame da contraprova, importar no prevalecimento do resultado obtido no primeiro exame. 9. DO LABORATRIO: 9.1. O laboratrio deve possuir instalaes e equipamentos adequados para a realizao da prova de imunodifuso em Gel de Agar e responsvel tcnico e substituto deste, devidamente habilitado pela CGLA para a realizao da prova para diagnstico de AIE. 9.2. As instalaes devem fazer parte da mesma base fsica do laboratrio e atender as normas de segurana biolgica. 9.3. Somente poder assinar o formulrio de resultado do exame e o Relatrio Mensal, o responsvel tcnico ou seu substituto. 10. INSTALAES E EQUIPAMENTOS: 10.1. Instalaes: 10.1.1.Protocolo: Sala destinada ao recebimento das amostras, registro, expedio dos resultados e arquivos dos mesmos . No requer instalaes especiais. 10.1.2.Sala de exame: Neste local as amostras sero processadas, incluindo-se a identificao, a centrifugao, a diviso em amostras de exames e contra-prova e a realizao das etapas do exame propriamente dito. Dever estar provido de bancada, fontes de eletricidade e gs, persianas ou cortinas (para diminuir a intensidade da luz) e paredes com superfcie lavvel. 10.1.3.Esterilizao e Lavagem: Dever estar provido de fonte de alimentao eltrica, de gua e de gs, tanques ou pias que permitam a esterilizao e a lavagem de todo material utilizado na realizao da prova de diagnstico. As paredes devem estar revestidas por superfcie lavvel. 10.2. Equipamentos: 10.2.1.Protocolo: - Arquivo com chave - Mquina de escrever 10.2.2.Sala de exame: - Balana analtica ou semi analtica; - Banho-maria; - Cuba com gua sanitria; - Cmara mida; - Iluminador com fundo preto, para leitura das lminas; - Pipetas automticas de 25 microlitros; - Bico de Bunsen; - Vidraria; - Cortador padro; - Geladeira; - Freezer a -20; - Centrfuga clnica;

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- pH de teste; 10.2.3.Lavagem e Esterilizao: - Autoclave - Depsito para gua sanitria - Destilador de gua 11. DO RESPONSVEL TCNICO E SUBSTITUTO Para efeito de credenciamento e monitoramento, o responsvel tcnico e seu substituto sero submetidos a exames tericos e / ou prticos em um laboratrio especialmente designado pela CGLA para esta finalidade. 11.1. Prtico: 11.1.1.Preparo de material de trabalho compreendendo: - Tampo - Gel 11.1.2.Realizao do teste : - Distribuio do gel na lmina - Corte do gel com furador - Distribuio dos reagentes e / ou; - Leitura de 36 reaes com amostras desconhecidas dos candidatos. 11.1.3.Para efeito de monitoramento podero ser realizados exames a distncia, com a efetivao das provas com 36 soros que sero entregues ou enviados ao laboratrio. A resposta dever ser encaminhada ao laboratrio da CGLA, responsvel pela coordenao da Unidade Federativa onde se localiza o laboratrio, em um mximo de 120 horas aps o recebimento do teste, em envelope lacrado, com AVISO DE POSTAGEM E RECEBIMENTO (AR). 11.1.4.Para efeito de credenciamento e monitoramento o ndice para aprovao no exame prtico de 100% de acerto . 11.2. Terico: Entrevista e / ou prova escrita sobre assuntos ligados etiologia, patogenia, patologia e provas diagnosticas da AIE. ANEXO I TCNICA DE IMUNODIFUSO EM GEL DE GAR PARA DIAGNSTICO DE ANEMIA INFECCISA EQINA A tcnica baseia-se na migrao radial dupla de antgeno (Ag) e anticorpo (Ac), atravs do gel de gar. O encontro dos reagentes, em propores timas, leva formao de complexos Ag-Ac, insolveis que precipitam, tornando-se visveis sob a forma de uma linha ou banda de precipitao. Uma extrema variao na concentrao de Ag e Ac pode alterar a localizao ou inibir a formao da mesma. Esta reao pode ser, ainda, influenciada por uma variedade de condies fsico qumicas, dentre elas, concentrao eletroltica, tampo, pH e temperatura .Alteraes bruscas de temperatura, durante a incubao, levam a formao de artefatos de tcnicas indejveis para o teste. Altos nveis de lipdeos e protdeos nos reagentes podem afetar a formao e observao da linha de precipitao. 1. MEIOS E SOLUES: 1.1. Gel 1% - gar Noble ou agarose 1g - Tampo borato 100ml Aquecer em banho-maria ou vapor fluente at a completa fuso do gar. 1.2. Tampo borato : - NaOH 2g - H3BO3 9g - gua destilada q.s.p 1.000 ml OBSERVAES: As substncias a serem utilizadas na preparao das solues devero ser padro pr anlise (p.a.) . - O tampo borato dever ter seu pH entre 8,5 e 8,7. - O gel dever ser dividido em alquotas de acordo com a demanda do laboratrio. - No devem ser efetuadas sucessivas fuses do gel, desprezando-se o volume no utilizado. 2. PREPARO DE LMINAS: Em lminas para microscpio, medindo 25 x 75mm, colocar 4,5ml do gel. Aps solidificao do gel, fazer os furos com o cortador padro, com 7 furos, medindo 4mm de dimetro e 3mm de distncia entre os mesmos. OBSERVAES: As lminas no utilizadas devem ser desprezadas. Se houver presena de umidade nas cavidades, as lminas no devero ser utilizadas at a sua evaporao. 3. REALIZAO DA PROVA: 3.1. Distribuio dos reagentes: 3.1.1.Soro a ser testado: Colocar nas cavidades laterais, alternadamente 25 microlitros dos soros a serem testados. 3.1.2.Soro padro: Colocar nas cavidades laterais, alternadamente 25 microlitros do soro controle positivo. 3.1.3.Antgeno: Colocar na cavidade central 25 microlitros de antgeno padro. 3.2.Incubao: As lminas devem ser incubadas, em cmara mida, em temperatura entre 20 e 25C, durante 48 horas . 7 3.3.Leitura: Devero ser feitas leituras dirias, usando-se uma fonte de luz de intensidade varivel com feixe estreito, contra um fundo preto. 4. INTERPRETAO DA PROVA:

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O tipo de reao varia com a concentrao da amostra testada . A linha formada com SCP a base para a leitura do teste . Se ela no estiver ntida o teste no vlido e deve ser repetido. 4.1.NEGATIVA: As linhas formadas entre o Ag e o SCP se dirigem para a cavidade onde se encontram as amostras testadas (Fig. 1). 4.2.Positiva: As linhas formadas entre o Ag e o SCP se fundem com aquelas formadas pelas amostras testadas e formam uma linha contnua de identidade total (Fig.2). 4.3.FRACA POSITIVA: A linha de precipitao de uma amostra fraca positiva tende a se formar mais prximo cavidade onde se encontra a amostra que est sendo testada. Em casos de ttulos baixos de Ac pode-se visualizar somente uma convergncia das duas linhas do controle, na direo da cavidade, onde se encontra o soro que est sendo testado (Fig. 3 ). 4.4.FORTE POSITIVA: A linha de precipitao de uma amostra com ttulo alto de Ac apresenta-se como uma faixa difusa, entre as duas linhas de controle. Em casos extremos, pode haver a inibio da formao desta faixa e s sero visualizadas as duas linhas de controle, interrompidas, a mesma distncia do soro testado, no se verificando nenhuma precipitao entre estas linhas. As amostras que apresentaram reaes forte positiva devem ser diludas em tampo borato e retestadas nas diluies, 1/4 e 1/8 (Fig. 4). 4.5. LINHAS INESPECFICAS: A reao inespecfica no forma uma linha contnua com as do controle. Elas so formadas por outras reaes Ag-Ac que no aquela especfica para AIE. Uma amostra pode produzir uma reao especfica de AIE (positiva) e uma linha de precipitao inespecfica (Fig. 5).

ANEXO II

ANEXO III

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ANEXO IV

ANEXO V

D.O.U., 22/10/1992

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