PRODUCCIN DE ETANOL POR SACCHAROMYCES CEREVISIAE INMOVILIZADA EN AGAR

I. OBJETIVOS: 1.1. 1.2. 1.3. 1.4. 1.5. Comprende los principios bsicos de la inmovilizacin de clulas. Explica la inmovilizacin de Saccharomyces cerevisiae en soporte de agar. Explica el proceso de obtencin de etanol a partir de materia prima fermentable y levaduras inmovilizadas en agar. Evala por refractometra el grado alcohlico del producto de la fermentacin. Enfatiza en el proceso enseanza-aprendizaje valores de puntualidad, responsabilidad, cooperacin y perseverancia.

II.

MARCO TERICO: El uso de biocatalizadores para llevar a cabo biotransformaciones es un rea de la Ing. Biotecnolgica en continua expansin. Un aspecto clave del proceso es el uso de catalizadores: clulas o enzimas en un sistema continuo que permite extender el uso del mismo en el tiempo dando como resultado una disminucin de los costos del proceso y otras ventajas como una mayor pureza del producto y mayor productividad. Para lograr este objetivo los biocatalizadores se inmovilizan, segn la European Federation of Biotechnology (1983) define a los biocatalizadores inmovilizados como enzimas, clulas u organelos (o combinacin de ellos) confinados o localizados en cierta regin definida del espacio, con retencin de su actividad cataltica y, si es necesario, de su viabilidad, y que pueden ser usados de modo repetido y continuo. Las levaduras del gnero Saccharomyces cerevisiae han sido utilizadas tradicionalmente en la industria de la produccin de etanol, adems de la obtencin de ste metabolito, las propias clulas de levaduras, por su contenido en protenas y vitaminas, se han utilizado en la alimentacin animal y, ocasionalmente, en la alimentacin humana, como un subproducto industrial. Con el propsito de incrementar los niveles productivos uno de los procedimientos biotecnolgicos ms tiles es inmovilizar las levaduras en diferentes soportes como agar, alginato de calcio, astillas de madera de blsamo, etc. El objetivo es incrementar la produccin de etanol, simultneamente con el mantenimiento del nivel proteico mediante la utilizacin de las tcnicas de inmovilizacin.

III.

MATERIALES: 3.1. Material biolgico: Levadura liofilizada, Saccharomyces cerevisiae. 3.2. Materia prima fermentable: Mosto de uvas, jugo de meln, jugo de manzana, etc. 3.3. Insumos: Aceite. 3.4. Reactivos: Agar-agar. 3.5. Material de vidrio: Baguetas. Balones de 250 mL. Beakers de 250, 400 y 600 mL. Matraces de 250 mL. Probetas de 50 y 100 mL. Pipetas Pasteur. 3.6. Otros: Agitador magntico. Esptula. Gasa Jeringa hipodrmica (20 mL) Papel toalla. Picetas. Morteros. 3.7. Equipos: Balanza analtica. Bao termosttico. Hotplate. Refractmetro.

IV.

METODOLOGA: 4.1. Acondicionamiento de materiales:

Solubilizar la levadura liofilizada en agua destilada. En un baln disolver el agar en agua destilada, con calentamiento y agitacin constante. Calibrar el Bao Mara a 50C, para mantener el agar licuado. Colocar en una probeta de 100 mL, 50 mL de aceite vegetal. 4.2. Inmovilizacin de la enzima: Mezclar 50 mL de la suspensin de levaduras y 50 mL de agar-agar licuado. Homogenizar. Tomar en una jeringa hipodrmica 20 mL de la mezcla y dejar caer gota a gota en la probeta que contiene el aceite. Repetir el paso anterior hasta agotar la mezcla. Decantar los pellets y lavarlos tres veces con agua destilada con movimientos rotatorios suaves. Secar los pellets en papel toalla. 4.3. Obtencin de la materia prima fermentable: Obtener por prensado jugo a partir de materia prima fermentable. Filtrar con una gasa el jugo obtenido. Tomar una alcuota, considerando la muestra a tiempo cero y leer los grados Brix o porcentaje de azcar en el refractmetro. 4.4. Obtencin del etanol: En un beaker, colocar los pellets y la materia prima fermentable. Agitar la mezcla en un hot plate. Tomar alcuotas y leer los grados Brix en el refractmetro, cada da durante una semana.