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Objectivo Separao de uma mistura de corantes (alaranjado de metilo e azul de metileno),

por cromatografia de adsoro em coluna e em camada fina, Determinar o solvente apropriado para a uma tcnica cromatogrfica; Testar a eficincia dessas duas diferentes cromatografias; Reconhecer a cromatografia em camada fina como uma tcnica para a visualizar o progresso de uma reaco e monitorizar uma cromatografia em coluna.

Resumo
Neste procedimento experimental separou-se corantes, utilizando dois tipos de cromatografia de adsoro: a cromatografia em camada fina e a cromatografia em coluna. Em ambos os casos a fase estacionria um slido e a fase mvel um lquido. Para a cromatografia em camada fina foi utilizada a slica gel (SiO2) e na cromatografia em coluna a alumina (Al2O3). Na cromatografia em camada fina usou-se dois diferentes eluentes afim de saber qual o mais adequado para tal separao. Posteriormente fez-se a separao dos mesmos corantes pela cromatografia em coluna usando a forma de empacotamento molhado. Foi-se retirado cerca de 14 amostras e avaliou-se atravs de uma cromatografia em camada fina e depois retirou-se mais 4 amostras e efectuou-se o mesmo procedimento afim de eluir o alaranjado de metilo.

INTRUDOO Cromatografia uma tcnica de separao de misturas e identificao de seus componentes. Esta separao baseia-se na diferente distribuio dos vrios componentes de uma mistura entre duas fases - a fase mvel e a fase estacionria. A adsoro tem uma importncia em alguns processos cromatogrficos muito utilizados com fins analticos e preparativos. Trata-se de mtodos que permitem a separao de substncias muito semelhantes entre si, qumica e fisicamente. Eles caracterizam-se pelo facto de se poder trabalhar com quantidades de substncias extremamente pequenas. A cromatografia foi descoberta em 1903 pelo bilogo russo Tswett ao fazer passar por uma coluna cheia de cal uma soluo de corantes vegetais verdes. Ele verificou que os corantes eram decompostos em cada um dos seus constituintes ao passarem pela coluna a velocidades diferentes, formando assim zonas distintas uma das outras. Na prtica distinguem se formas especiais de cromatografia no com base nos fenmenos fsicos e qumicos que esto na origem da separao, mas em virtude da tcnica utilizada. Por isso se fala de cromatografia em coluna, cromatografia em fase gasosa, cromatografia de papel ou cromatografia em camada fina. Na cromatografia de absoro e de partio ocorre um equilbrio contnuo entre as fases estacionrias e mvel. O eluente entra na coluna e o eluato sai da coluna. As colunas podem ser empacotadas com a fase estacionria ou podem ser capilares com a fase estacionria ligada parede interna da coluna. Neste trabalho focalizou-se sobre a cromatografia de absoro, nomeadamente a cromatografia em camada fina e a cromatografia em coluna. A cromatografia em coluna conta com a gravidade ou sistemas de bombagem a baixas presses para o fornecimento de eluente coluna. As velocidades de fluxos obtidas so relativamente pequenas, conduzindo a cromatografias demoradas e ao alargamento das bandas por difuso simples. A capacidade de resoluo de uma cromatografia aumenta com o comprimento da coluna e com a diminuio do tamanho dos grnulos da fase estacionria. A utilizao de velocidade de fluxo mais rpidos no permitida nos sistemas convencionais, porque se gera uma presso que suficiente para destruir ou danificar a estrutura dos grnulos da fase estacionria. Na cromatografia em coluna, a fase mvel (eluente) obrigada a percorrer uma coluna cheia com a fase estacionria. A

separao baseia-se nas interaces entre molculas do soluto da fase mvel lquida e a superfcie da fase estacionria. Na cromatografia em camada fina o suporte da fase estacionria pode ser de vidro, metal (folha de alumnio) ou plstico. A fase mvel um lquido puro ou uma mistura de vrios lquidos cuja composio depende da polaridade dos compostos a serem separados. A cromatografia em camada fina uma tcnica simples, barata, rpida, eficiente e razoavelmente sensvel e apenas requer alguns miligramas de material. Atravs desta tcnica pode-se determinar o nmero de componentes na mistura, pode-se conhecer o solvente adequado para a separao. Podemos monitorizar a cromatografia em coluna atravs de cromatografia em camada fina e essa tcnica tem tambm a vantagem de permitir controlar o progresso de uma reaco. Por outro lado, uma cromatografia em camada fina limitada a compostos volteis pois pode haver perda de amostra. Tambm essa tcnica no conveniente para compostos termicamente instveis e apresenta dificuldades para amostras abundantes. A ligao dos compostos fase estacionria deve-se a foras intermoleculares. Por vezes aps a eluio os componentes da mistura apresentam manchas incolores qua, para que se possa visualizar essas manchas na placa cromatogrfica usam-se as seguintes tcnicas: 1- Se a placa for impregnada com o indicador fluorescente pode-se utilizar a radiao ultravioleta, 2- Colocar a placa dentro de uma cmara com sais de iodo forma-se um complexo de cor castanho com os compostos permitindo a sua deteco; 3- Fazendo reagir com um reagente cujo produto da reaco um composto colorido. A razo que avalia a distncia percorrida pela substncia e pelo eluente denominada de razo de frente (Rf), esse valor por sua vez depende da sua estrutura e uma caracterstica tal como o ponto de fuso.

Um solvente ideal para uma tcnica cromatogrfica necessita de ser de grande volatilidade pare que se possa evaporar quase imediatamente, deve-se usar um solvente no polar para um composto no polar e um solvente polar para compostos polares. Para assegurar uma boa resoluo cromatogrfica, a cmara cromatogrfica de desenvolvimento tem que estar saturada com os vapores do solvente de modo a prevenir evaporao do solvente assim que ele atinge a placa da cromatografia em camada fina.

Materiais e reagentes empregados 1 tina cromatogrfica, capilares, coluna com placa porosa, pipeta de Pasteur, pipeta graduada, tubos de ensaio e seu respectivo suporte, placas cromatogrficas de slica gel para cromatografia em camada fina e alumina para a cromatografia em coluna, copos. Etanol Frases de risco e segurana: R: 11-facilmente inflamvel; S: 7/9- manter o recipiente bem fechado e em local ventilado; S: 12- no fechar o recipiente hermeticamente; S: 13- manter afastado de alimentos e bebidas, incluindo dos animais; S: 14- manter ao abrigo de (materiais incompatveis a indicar pelo produtor); S: 15- manter afastado do calor; S: 16- manter afastado de qualquer chama ou fonte de ignio no fumar Azul de metileno R: 22- nocivo por ingesto, Amonaco concentrado R: 34- provoca queimaduras; R: 35-provoca queimaduras graves; R: 36- irritante para os olhos; R: 37- irritante para as vias respiratrias; S: 7- manter o recipiente bem fechado;

S: 26-em caso de contacto com os olhos, lavar imediata e abundantemente com gua e consultar um especialista; S: 45- em caso de acidente ou indisposio, consultar imediatamente um mdico (se possvel mostrar-lhe o rtulo) Alaranjado de metilo; gua destilada; Alumina; Procedimento experimental Parte A. Cromatografia em camada fina. 1. Numa placa cromatogrfica de 3x7 cm, traou-se a lpis uma linha paralela a um dos topos e a uma distncia deste de cerca de 0,5 cm, tendo o cuidado de no danificar a slica. 2. 2. Com a ajuda de um capilar colocou-se cuidadosamente uma pequena gota da soluo mistura e, de cada um dos lados, uma gota de cada uma das solues de alaranjado de metilo e de azul de metileno (as gotas devero ficar bem separadas). 3. Sequiu-se as gotas com um secador. 4. Introduziu-se a placa na cmara cromatogrfica contendo a soluo eluente (copo com um pouco de etanol), tendo o cuidado de verificar que os pontos de aplicao das amostras no fiquem, no incio, mergulhados no eluente. Tapou-se a cmara. 5. Quando o eluente subiu at cerca de 1 cm do topo da placa, retirou-se da cmara e secou-se.

Parte B. Cromatografia em coluna Forma de empacotamento Molhado 1. Num copo de 100 mL preparou-se uma papa etanlica, utilizando areia e etanol; 2 Introduziu-se uma pequena quantidade de eluente na coluna e de seguida e verteu-se a papa etanlica preparada para uma coluna de vidro com placa porosa (no tendo a placa porosa, usa-se algodo), em posio vertical, com a ajuda de um funil. 2. Depositou-se a mistura gradualmente na coluna deixando simultaneamente o etanol fluir muito lentamente atravs dela. Se for necessrio, adicione mais etanol no topo da coluna. Nunca deixe secar. O enchimento da coluna deve ser o mais homogneo possvel, sem apresentar bolhas de ar. A altura final deve ser de aproximadamente 8 cm. 3. Verteu-se cuidadosamente a soluo mistura (1 mL), tendo o cuidado de no perturbar a superfcie da fase estacionria. 5. Passou-se etanol atravs da coluna, tendo o cuidado de a no deixar secar (revelao do cromatograma). Elui-se desta forma o azul de metileno. Recolheu-se o eluente contendo este corante numa srie de tubos e em volumes aproximadamente iguais ( 1mL), at a soluo sair incolor.

6.Eluiu-se em seguida o alaranjado de metilo com gua destilada contendo umas gotas de amnia concentrada (1 a 2 gotas por 100 mL de gua), como descrito em 3.

Anlise e discusso dos resultados Cromatografia me camada fina Separou-se os corantes usando dois diferentes eluentes e os resultados podem ser observados nas tabelas a seguir: Tabela 1: distncia percorrida por diferentes substncias numa cromatografia em camada fina, usando como eluente o etanol 1 Ensaio Distncia percorrida pelo eluente 4,8cm 2 Ensaio 4,2cm 0,2cm

Distncia percorrida pelo azul-de- 0,2cm metileno Distncia percorrida pelo 4,2cm

3,75cm

alaranjado de metilo Distncia percorrida pelo azul de 0,1cm metileno na mistura Distncia percorrida pelo 4,2cm 3,8cm 0,1cm

alaranjado de metilo na mistura

Clculo da razo da frente (Rf) = distncia percorrida pelo composto/distncia percorrida pelo eluente 1ensaio Azul de metileno Alaranjado de metilo Azul mistura Alaranjado de metilo na 0,875 mistura 0,9047 de metileno 0,042 0,875 na 0,021 2 ensaio 0,0476 0,8928 0,0238

Tabela 2: distncia percorrida por diferentes substncias numa cromatografia em camada fina, usando como eluente 5 mL de 2 propanol + 1 mL de cido actico. 1 Ensaio Distncia percorrida pelo 3,2 eluente Distncia percorrida pelo 0,1 azul de metileno Distncia percorrida pelo 2 azul de metileno na mistura Distncia percorrida pelo 0,1 azul de metileno na mistura Distncia percorrida pelo 1,7 alaranjado de metilo na mistura 1,8 0,1 1,7 0,1 2 Ensaio 2,1

Tabela 3: distncia percorrida por diferentes substncias numa cromatografia em camada fina, usando como eluente 4 mL de 2 propanol + 1 mL de cido actico. 1 Ensaio Distncia percorrida pelo 3,1 eluente Distncia percorrida pelo 0,5 azul de metileno Distncia percorrida pelo 2,6 azul de metileno na mistura Distncia percorrida pelo 0,5 azul de metileno na mistura Distncia percorrida pelo 2 alaranjado de metilo na mistura 2 0,3 2,6 0,4 2 Ensaio 3,1

Obs: O clculo da razo da frente pelo mesmo procedimento. Pelos resultados obtidos pde-se constatar que, usando como solvente o 2 propanol mais o cido actico consegue-se obter uma maior deslocalizao do azul de metileno, ou seja, consegue-se retir-lo da linha paralela a uma das extremidades da placa cromatogrfica. A deslocalizao da amostra processa-se conforme a afinidade da minha amostra com a fase estacionria. O azul de metileno uma base, logo interage fortemente com a slica gel que por sua vez tem um carcter cido por isso se desloca menos ou de certa forma fica presa fase estacionria. Por outro lado a alaranjado de metilo por ser um cido no reage com a slica gel logo desloca-se facilmente. Cromatografia em coluna: forma de empacotamento Ao introduzir os corantes na coluna j preparada em alumina, observou-se a sada de um corante azul, o depsito de uma colorao incolor em baixo e o deposito do corante amarelado por cima. Se o corante alaranjado de metilo mais fortemente absorvido pelas partculas slidas do que o corante azul de metileno, ento o alaranjado de metilo passa menos tempo livre em soluo. Consequentemente o corante alaranjado de metilo se movimenta para baixo atravs da coluna mais lentamente do que o corante azul de metileno. Por outras palavras, o azul de metileno desloca-se mais rapidamente, pelo facto de ter um carcter bsico, e uma base no reage com uma base por isso desloca-se facilmente. J o alaranjado de metilo tem um carcter cido, interage fortemente com a alumina, de uma certa forma fica presa alumina e desloca-se menos. Como uma cromatografia em coluna vem sempre acompanhada de uma cromatografia em camada fina, retirou-se cerca de 14 amostras em tubos de ensaio e efectuou-se a cromatografia em camada fina para saber que de facto compostos havia em cada amostra. No tubo 1,no havia nem azul de metileno nem alaranjado de metilo; No tubo 2, comeou-se a ter uma pequena quantidade de azul de metileno;

Nos tubos 3 e 4 aumenta a concentrao do azul de metileno e comea-se a ter uma pequena poro de alaranjado de metilo; No tubo 5, iniciou-se a diminuio do azul de metileno e do alaranjado de metilo. J no tubo 6 no viu-se quase nada do azul de metileno e no tubo 8 v-se uma ligeira colorao amarela, mas a partir dali at a amostra contida no tubo 15 no observou-se nenhuma colorao. Aps isso fez-se uma soluo com gua destilada e amonaco de forma a provocar a eluio do alaranjado de metilo, onde se retirou 4 amostras onde se observou que tubo 15 tem-se uma maior quantidade de alaranjado de metilo se comparado com as amostras contidas nos tubos 16 e 17. No tubo 18 no se tem nenhuma quantidade de alaranjado de metilo.

Concluso Na cromatografia de adsoro, o soluto absorvido na superfcie das partculas slidas. Quando mais fortemente um soluto absorvido, mais lentamente ele se deslocar atravs da coluna. Pode-se dizer que a eficincia de uma cromatografia de adsoro est na compactao da coluna (introduo de ar na coluna), e isso se faz de forma a aumentar a velocidade da sada de lquidos. Ao fazer subir o eluente na placa cromatografica acima, verificou-se que os corantes so arrastados conforme as suas afinidades com a fase estacionria, os pigmentos iguais so arrastados com a mesma velocidade e os corantes diferentes so arrastados com velocidades diferentes. Atravs da cromatografia em camada fina pde-se constatar que o cido actico mais o 2 propanol um solvente mais adequado para a separao dos corantes, pois conseguiu-se retirar mais o azul de metileno da zona onde estavam as solues. Em termos de eficincia pode-se dizer que a cromatografia em coluna mais eficiente que a cromatografia em camada fina, pois uma cromatografia em coluna vem sempre acompanhado de uma cromatografia em camada fina, logo ao separar-se uma mistura atravs da coluna posteriormente separa-se a mesma amostra pela cromatografia em camada fina, por isso pode-se dizer que consegue-se isolar-se mais o composto ou seja consegue-se t-la na sua forma mais pura por uma cromatografia em coluna.

Bibliografia

DANIEL, C. Harris, Anlise qumica quantitativa, 7 edio GERD, Wedler, Manual de qumica fsica.