Ministrio da Sade Administrao Regional de Sade de Lisboa e Vale do Tejo, I.P.

TCNICAS DE COLHEITA DE AMOSTRAS

Nota vestibular. O estudo de edifcios e de instalaes, visando determinar a situao existente em relao produo de aerossis contaminados com legionelas, dever ser um procedimento cuidadoso, susceptvel de proporcionar a informao necessria para se poder realizar a colheita de amostras. Por outras palavras, h que concretizar, previamente, a caracterizao das instalaes, dos sistemas e dos equipamentos, com o objectivo de se vir a identificar os nichos ambientais de risco. De facto, no s os sistemas podero variar acentuadamente de edifcio para edifcio como as tipologias dos equipamentos podem, no geral, apresentar uma grande diversidade. Por outro lado, h que estar familiarizado com as caractersticas e o funcionamento dos equipamentos para se poder interpretar o que se passa, em termos microbiolgicos, nesse contexto. Assim, cada local e cada sistema devero ser estudados cuidadosamente e em particular. Em qualquer doena transmitida pela gua, tal como o caso da doena dos legionrios, importante estabelecer-se a relao entre os vrios servios de gua incluindo nestes o do abastecimento ao edifcio e a rede predial de gua fria sanitria. portanto conveniente recorrer a um diagrama esquemtico representando os vrios servios de gua. Tambm ser importante verificar as condies das canalizaes e das juntas, identificar troos de canalizao desactivados e, ou, em fundo de saco tal como torneiras no utilizadas, detectar a presena de fugas, de fontes de calor ou de cruzamentos com outros sistemas. Estas averiguaes visam procurar locais onde possam existir gua estagnada ou gua suja, locais que possam actuar como fonte de crescimento microbiano e que facultem um risco de refluxo de gua contaminada para o percurso (canalizao) principal ou para condutas de ar ou, ainda, de outras formas de inquinao.
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Localizao de pontos de colheita. Nas redes prediais de gua. Os pontos de colheita de amostras sero os definidos tendo como base o estudo do diagrama esquemtico dos servios de gua e a observao das redes. Na rede predial de gua quente sanitria recirculante. Em princpio, devero ser sempre considerados pontos de colheita que incluam o dreno de fundo de depsitos de aquecimento, o percurso de retorno nomeadamente o dreno de colectores de retorno, e pontos de consumo quer rotativamente quer em funo de risco particular no qual podem relevar a menor frequncia de utilizao e a maior distncia ao depsito de aquecimento.

Em torres de arrefecimento. - Na entrada do fornecimento de gua, para pesquisa e determinao doutros parmetros. - No tanque: no seu interior em ponto distante da entrada da gua de compensao, no dreno de fundo ou no tubo de descarga. - No circuito prprio da torre, num ponto ligado canalizao da gua de retorno ao topo da torre. - No bloco evaporativo (biofilme). No tanque (biofilme, depsitos ou sedimentos). - Em qualquer reservatrio de gua existente no sistema.

Em equipamentos de climatizao do ar. - Amostra de gua de condensao com ou sem acumulao, nos tabuleiros de condensados. - Amostra de biofilme ou de depsito, obtida nos tabuleiros de condensados ou nos seus drenos. - Amostra de gua em circuito fechado, arrefecida (gelada), para climatizao de ar em ventiloconvectores, unidades de tratamento de ar e unidades de tratamento de ar novo. - Amostra de gua em circuito fechado, moderadamente aquecida, para climatizao de ar em ventiloconvectores, unidades de tratamento de ar e unidades de tratamento de ar novo.

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Material
Equipamentos e reagentes para determinar o cloro e o pH. Termmetro. Fichas para registo de dados. Zaragatoas em tubo. Frascos de um litro esterilizados, em mangas. Frascos de meio litro e de um litro esterilizados. Frascos de mergulho esterilizados. Termoacumuladores. Malas trmicas. Mscaras de proteco respiratria capazes de reter partculas com 1 mcron de dimetro. Botas para imerso. Luvas. Pina, algodo e lcool, ou maarico. Sacos de plstico esterilizados (chuveiros). Outra pina. Bomba para colheita de ar.

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Procedimentos de colheita de amostra de gua em torneiras, em torneiras de dreno e em chuveiros, destinada pesquisa de legionela.
1. No desmontar acessrios da torneira, caso existam. 2. No deixar correr a gua. 3. No desinfectar interior e exteriormente o bocal da torneira com algodo embebido em lcool. 4. No flamejar a torneira. 5. Destapar o frasco (1 litro) na proximidade da torneira, conservando a tampa virada para baixo. 6. Encher o frasco at meia altura com o fluxo inicial, mantendo-o inclinado e sem contacto com a torneira. Fechar o frasco. 7. Realizar a colheita de biofilme com zaragatoa de acordo com os respectivos procedimentos. 8. Repetir a recolha de gua, enchendo o resto do frasco, que receber o raspado trazido pela gua (no encher o frasco na totalidade deixando um vazio de 1 cm de altura). 9. Fechar o frasco. 10. Identificar o frasco. 11. Colocar o frasco em mala de transporte ou saco, opacos. O transporte feito temperatura ambiente e ao abrigo da luz solar. Nota - No caso em que o ponto de colheita um chuveiro, introduzir a cabea do chuveiro dentro de um saco de plstico esterilizado, cortar um canto do fundo do saco e inseri-lo no bocal do frasco.

Parmetros a determinar no ponto de colheita, imediatamente a seguir A temperatura - Aps o procedimento anterior, encher um recipiente com gua, mergulhar a sonda e registar a temperatura indicada. O cloro residual livre.

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Procedimentos de colheita de amostra de gua em depsitos sem torneira de dreno, destinada pesquisa de legionela.
1. Prender as cordas aos dispositivos da armao do frasco, mantendo-o dentro da caixa de proteco. Utilizar um frasco de 1 litro ou dois frascos de 0,5 litro ou quatro frascos de 0,25 litro. 2. Retirar a tira de papel que impede a tampa de colar ao gargalo, sem tocar neste. 3. Submergir o frasco o mais abaixo possvel, at ao limite das cordas mas sem tocar no fundo. 4. Accionar a corda de abertura do frasco. 5. Depois de cheio, fechar o frasco e retir-lo da gua. 6. Identificar o frasco. 7. Colocar o frasco em mala de transporte ou saco, opacos. O transporte feito temperatura ambiente e ao abrigo da luz solar.

Parmetros a determinar no ponto de colheita, imediatamente a seguir A temperatura - Aps o procedimento anterior, encher um recipiente com gua, mergulhar a sonda e registar a temperatura indicada. O cloro residual livre.

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Procedimentos de colheita de amostra de gua em depsitos de pouca profundidade (por exemplo, de tanque de torre de arrefecimento), destinada pesquisa de legionela.
1. Calar as luvas. 2. Na proximidade da gua destapar o frasco (1 litro) tambm esterilizado exteriormente, conservando a tampa virada para baixo sem a pousar. 3. Mergulhar o frasco em posio invertida e vertical at profundidade pretendida, inclinando-o para o encher. 4. Retirar o frasco e fech-lo. 5. Identificar o frasco. 6. Colocar o frasco em mala de transporte ou saco, opacos. O transporte feito temperatura ambiente e ao abrigo da luz solar. Nota Nos tanques das torres de arrefecimento, as amostras podero ser colhidas aspirando a gua com um tubo de borracha de silicone, previamente esterilizado.

Parmetros a determinar no ponto de colheita, imediatamente a seguir A temperatura - Aps o procedimento anterior, encher um recipiente com gua, mergulhar a sonda e registar a temperatura indicada. O cloro residual livre.

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Procedimentos de colheita de amostra de gua destinada pesquisa de outros parmetros microbiolgicos.

1. Desmontar acessrios da torneira, caso existam. 2. Deixar correr a gua durante o tempo necessrio de modo a eliminar a gua parada na canalizao. 3. Desinfectar o bocal da torneira interior e exteriormente com algodo embebido em lcool, flamejando aquele de seguida. 4. Deixar correr o fluxo de gua em que ir ser efectuada a colheita, at arrefecer a torneira. 5. Destapar o frasco (0,5 litro, 1 litro para gua termal) na proximidade da torneira conservando a tampa virada para baixo e recolher a amostra (no encher o frasco na totalidade). Manter o frasco inclinado e sem contacto com a torneira, durante toda a operao. 6. Fechar o frasco. 7. Identificar o frasco. 8. Colocar o frasco em mala trmica com acumulador de frio, conservando-o a 5 C 3. Entreg-lo de forma a que se proceda ao incio da anlise num prazo mximo de 6 horas.

Parmetros a determinar no ponto de colheita, imediatamente a seguir A temperatura - Aps o procedimento anterior, encher um recipiente com gua, mergulhar a sonda e registar a temperatura indicada. O cloro residual livre. O cloro residual combinado. O pH.

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Procedimentos de colheita de gua de condensao, de biofilme ou de sedimentos, para a pesquisa de legionela.

COM ZARAGATOA 1. Retirar a zaragatoa da manga ou do tubo, tocando-lhe s na extremidade da pega. 2. Esfregar as superfcies pretendidas com a zaragatoa. 3. De seguida, coloc-la dentro do tubo apropriado (10 ml) com gua colhida na localizao de onde se est a efectuar o esfregao. A gua poder ser obtida com pipeta ou usar-se-, em alternativa, soluto de Ringer a 1/40. Nos casos de torneiras e de chuveiros, recolher a gua directamente do jacto da torneira ou do chuveiro. Nos tabuleiros de condensados tentar obter a gua, directamente, com pipeta. 4. Identificar o tubo. 5. Colocar o tubo em mala de transporte ou saco, opacos. O transporte feito temperatura ambiente e ao abrigo da luz solar. NOTA Na hiptese da zaragatoa ser do tipo tradicional, rejeitar-se- o segmento da pega usado no manejo. Parmetros a determinar no ponto de colheita, imediatamente a seguir A temperatura - Aps o procedimento anterior, encher um recipiente com gua, mergulhar a sonda e registar a temperatura indicada. O cloro residual livre. COM PINA 1. Utilizar pina esterilizada, eventualmente por flamejamento, para recolha de partculas e de sedimentos. 2. A amostra deve ser colocada num recipiente estril mesmo exteriormente, contendo 10 ml de gua colhida na localizao de onde se est a efectuar a recolha ou soluto de Ringer a 1/40. A gua poder ser obtida com pipeta ou por mergulho. Neste ltimo caso, usar luvas esterilizadas. 3. Identificar o frasco. 4. Colocar o frasco em mala de transporte ou saco, opacos. O transporte feito temperatura ambiente e ao abrigo da luz solar. Parmetros a determinar no ponto de colheita, imediatamente a seguir A temperatura - Aps o procedimento anterior, encher um recipiente com gua, mergulhar a sonda e registar a temperatura indicada. O cloro residual livre.
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