BRUCELOSIS CAPRINA

NDICE
1. INTRODUCCIN ...................................................................................................................... 1 1.1. 2. Signos clnicos................................................................................................................ 1

REVISIN DE LITERATURA ................................................................................................. 1 2.1. 2.2. 2.3. Diagnstico ........................................................................................................................ 3 Diagnstico bacteriolgico .............................................................................................. 3 Pruebas de diagnostico ................................................................................................... 4

3. 4. 5. 6.

HIPTESIS ............................................................................................................................... 6 JUSTIFICACIN....................................................................................................................... 7 OBJETIVOS .............................................................................................................................. 8 MATERIALES Y MTODOS .................................................................................................. 9 6.1. 6.2. 6.3. Localizacin y rea de trabajo ........................................................................................ 9 Tipo y manejo de los animales ....................................................................................... 9 Prueba de laboratorio .................................................................................................... 11 Objetivo..................................................................................................................... 11 Generalidades ........................................................................................................... 11 Equipo e instrumentos ............................................................................................. 11 Reactivos ................................................................................................................... 11 Preparacin y acondicionamiento de la muestra .................................................... 11 Procedimiento .......................................................................................................... 12

6.3.1. 6.3.2. 6.3.3. 6.3.4. 6.3.5. 6.3.6. 7. 8. 9.

RESULTADOS Y DISCUSIN ............................................................................................. 15 CONCLUSIN ........................................................................................................................ 17 BIBLIOGRAFA ....................................................................................................................... 18

1. INTRODUCCIN La Brucelosis caprina es una enfermedad infecto-contagiosa, crnica producida por Brucella melitensis, bacteria que fuera aislada por primera vez en 1887 por Bruce a partir de muestras de bazo de soldados enfermos en la isla de Malta. Brucella melitensis, tiene al caprino y al ovino como sus huspedes naturales, pero al ser la especie de brucella ms inespecfica del gnero, puede infectar una gran cantidad de otras especies animales y entre ellos al ser humano, siendo la causante de la Fiebre ondulante o Fiebre de Malta. La brucelosis afecta fundamentalmente a caprinos sexualmente maduros, siendo el principal sntoma en la hembra el aborto en el ltimo tercio de la gestacin y orquioepidimitis en el macho. La enfermedad tiene una amplia distribucin mundial, siendo endmica en todos los pases europeos y africanos de la cuenca del Mediterrneo, pases del Medio Oriente, Latinoamrica, centro y oeste de Asia y espordicamente en pases de frica e India. La enfermedad es causa de grandes prdidas econmicas a nivel mundial, para los productores de ganado caprino. 1.1. Signos clnicos El principal signo es el aborto en el ltimo tercio de la gestacin, debido a la especial afinidad de la brucella por el endometrio grvido y la placenta fetal. Tambin se puede observar acumulacin de liquido, inflamacin de las articulaciones, osteomielitis en las vertebras (espondilitis) e inflamacin en los testculos. A diferencia de lo que sucede con las hembras de otras especies infectadas con brcelas, en cabras la mastitis es comn y en un hato puede ser el primer signo que llame la atencin. Se puede observar cogulos en la leche, as como pequeos ndulos en la glndula mamaria.

2. REVISIN DE LITERATURA Las especies domsticas afectadas por Brucella incluyen, entre otras, los bovinos y los pequeos rumiantes, en relacin con la brucelosis caprina hay que sealar que ha recibido poca atencin, sin embargo, la economa de muchas zonas ridas o semiridas depende en gran medida de estos animales. Hay que tener en cuenta, adems, que la brucelosis humana est causada sobre todo por B. melitensis y que el ganado caprino es el husped preferente de esta especie. La distribucin geogrfica de la B. melitensis se presenta principalmente en los pases del Mediterrneo, en Asia Central, en Amrica Latina, especialmente Mxico, Per y el norte de Argentina, tiene presencia espordica en India y frica. En los E.U.A. hay brotes espordicos en la frontera con Mxico.

Los pases considerados libres son Canad, Norte de Europa, sur de Asia, Australia y Nueva Zelanda. De los tres diferentes biotipos de B. melitensis, el biotipo 1 predomina en Amrica Latina y Malta, donde las cabras son la principal especie afectada. El biotipo 2 es aislado en ocasiones junto con el biotipo 1, en lugares donde predominan los ovinos como en Italia y Grecia. El biotipo 3 ha sido descrito aunque en menor proporcin en reas donde los biotipos 2 y 3 estn presentes. Las prcticas habituales de manejo de las cabras; prstamo de sementales, pastoreo de rebaos en lugares comunes, reposicin con animales de otros rebaos, facilitan la diseminacin de la enfermedad. Las vas de contagio son mltiples y no muy conocidas. Sin embargo, la mayor cantidad de los animales se infectan a travs de las vas oral y respiratoria, bien por ingestin de materias contaminadas o bien por inhalacin del polvo de los establos. Aunque la cabra despus de sufrir un aborto por Brucella se recupera aparentemente de la enfermedad y sus partos subsecuentes suelen ser normales, se ha demostrado que los animales quedan como portadores crnicos de la enfermedad durante toda su vida siendo estos animales los responsables de la perpetuacin de la enfermedad en el rebao. En hatos afectados por primera vez del 50 al 90% de las cabras gestantes pueden abortar, y en hatos con brucelosis endmica, del 10 al 20% de las cabras gestantes abortan. En ovejas infectadas por B. melitensis, se ha visto que aborten o no, al momento del aborto o parto y hasta 60 das siguientes, excretan miles de millones de brucelas que contaminan el medio y facilitan la diseminacin de la enfermedad. La ubre es el sitio de predileccin para la B. melitensis en la infeccin de cabras no gestantes, producindose eliminacin de las bacterias por la leche. Generalmente se acepta que los animales recin nacidos son resistentes a la infeccin y, en consecuencia la transmisin por medio de la leche no se considera importante, las cabritas nacidas de madres brucelosas padecen tambin la enfermedad, pero la infeccin generalmente desaparece a los dos meses de edad, aunque en bovinos se ha probado que el 10% de este tipo de cras pueden llegar a desarrollar la infeccin al primer parto. En la cabra, se pensaba que la orina era una va frecuente para la eliminacin de brucelas, pero se ha desestimado esta idea. La brucelosis se conoce en Mxico desde 1905, cuando el Dr. Valenzuela sospechaba de la presencia de Micrococus melitensis en humanos. Las sospechas tomaron cuerpo en 1912, cuando el Dr. Resndiz relacion la aparicin de una enfermedad extraa, caracterizada por fiebre recurrente con la importacin de cabras murcianas en 1910. En 1921, Placeres demostr mediante estudios bacteriolgicos y serolgicos la presencia de la enfermedad en Mxico. En Mxico se conoce la presencia de brucelosis en cabras desde 1917 en los estados de Guanajuato y San Luis Potos. En 1962 se encontr que los estados con mayor prevalencia de brucelosis caprina eran Coahuila, Nuevo Len y Zacatecas. En Mxico la poblacin de cabezas de ganado caprino en 1989 era de 11 millones y la cobertura diagnstica entre 1982 y 1992 no alcanz nunca el 1% de este censo. Actualmente se cuenta con la Campaa Nacional contra la Brucelosis instituida en agosto de 1970, y modificada declarndola como de carcter obligatorio, general y permanente en todo el territorio nacional a partir de agosto de 1981. En 1993, se

elabor la Norma Oficial Mexicana (NOM) referente al control de esta enfermedad, buscando actualizar sus lineamientos segn los adelantos en la investigacin desarrollada a nivel mundial. En lo que respecta al diagnstico serolgico de la brucelosis en caprinos, este se basa en la prueba de tarjeta como tamiz, utilizando el antgeno con una concentracin celular del 8%, como prueba confirmatoria se recomienda la fijacin del complemento considerando como positivos a los animales que tengan ttulos iguales o mayores a 1:4. Las pruebas de rivanol y de anillo de leche que son ampliamente recomendadas en bovinos, no han sido debidamente evaluadas en los caprinos, por lo que no se recomienda su utilizacin en estas especies. Ahora bien, las pruebas confirmatorias como son la inmunodifusin radial con hapteno nativo y el ELISA que han demostrado una lata sensibilidad y especificidad en caprinos, son una excelente opcin para llegar a suplir a la fijacin del complemento, ya que son sencillas de realizar y con menos problemas de estandarizacin meses como en los bovinos, obedece a que los productores generalmente carecen de registros y a que la determinacin de la edad por medio de la denticin no ofrece exactitud, adems de que debido a la precocidad sexual de estas especies en muchos casos se vacunan animales que pueden abortar al quedar gestantes poco despus. 2.1. Diagnstico Actualmente, el diagnstico inequvoco de la brucelosis animal es mediante el aislamiento e identificacin del germen a partir de la leche, sangre y tejidos. Sin embargo, el aislamiento no siempre se logra y es laborioso, por lo que generalmente el diagnstico se hace por mtodos indirectos, de deteccin de la respuesta inmune frente a Brucella. Si bien, en la respuesta inmune intervienen mecanismos efectores humorales y celulares, hasta el momento las pruebas serolgicas son las que han recibido mayor atencin. 2.2. Diagnstico bacteriolgico El aislamiento de Brucella es prueba indiscutible de una brucelosis. La mejor muestra es el hisopo tomado directamente de la vagina de animales que abortan (hasta 15 a 70 das despus del aborto). Tambin puede realizarse el aislamiento a partir de la placenta o de los fetos abortados (hgado, bazo, pulmn y contenido gstrico). El aislamiento de B. melitensis puede realizarse tambin tras la autopsia, siendo los rganos ms adecuados los ganglios linfticos, glndula mamaria, tero y bazo. En cabras lecheras puede intentarse el aislamiento bacteriolgico a partir de la leche. Tras el anlisis de un elevado nmero de cepas, Blasco y Marn recomiendan el uso del medio de Farrell para el aislamiento de B. melitensis, esto ha sido corroborado por diferentes grupos de trabajo, ya que se han conseguido un gran nmero de aislamientos de B. melitensis en caprinos utilizando ese medio.

2.3.

Pruebas de diagnostico

Diagnstico serolgico Salvo en pases en los que se ha erradicado la enfermedad, el objetivo de las pruebas serolgicas no es meramente identificar los animales que han estado en contacto con el antgeno. Es preciso poder diferenciar los animales que han sido vacunados y estn sanos de aquellos que, habiendo sido vacunados o no, estn infectados. Esto debido a que la vacunacin, incluida la realizada con cepas vivas, que es generalmente aceptada como la ms efectiva, no protege al cien por ciento de los animales. Por lo tanto, la prueba serolgica ideal sera aquella que fuese capaz de diferenciar los animales infectados de los vacunados con Rev 1, fuese simple de realizar y proporcionase los resultados con rapidez y repetibilidad. Las pruebas serolgicas ms significativas, por el tipo de antgeno o frecuencia de uso, que se han empleado en la brucelosis animal son: A. Rosa de Bengala (RB) o prueba de tarjeta En caprinos, como con el resto de las pruebas serolgicas, los ensayos comparativos de sensibilidad y especificidad son muy limitados. El RB aplicado en caprinos detecta principalmente la IgG1, aunque tambin la IgM. RB tiene la desventaja de que slo da positivas a las cabras cuando los ttulos de aglutinacin en tubo o placa son altos en 2,500 pruebas en caprinos sospechosos, encontr un 6% de resultados positivos, y le atribuye al RB ineficacia para hatos con problema de brucelosis. Daz-Aparicio, determinaron con sueros de cabras con aislamiento de B. melitensis la sensibilidad del antgeno de rosa de bengala fabricado por PRONABIVE (que tiene una concentracin celular del 8%), encontrando una sensibilidad del 79%; al evaluar un antgeno experimental preparado con una concentracin celular del 3% la sensibilidad aument a un 98%, la especificidad en ambos casos fue del 100%. Trap y Gaumont reportan en ovinos que la sensibilidad del RB aumenta al disminuir la concentracin celular de 8% al 5%. La prueba de RB presenta variacin en su sensibilidad de acuerdo a la concentracin celular del antgeno utilizado, la sensibilidad del RB tiende a aumentar cuando la prevalencia es ms baja. La prueba de tarjeta es reconocida por la norma oficial mexicana como prueba tamiz para el diagnostico dela brucelosis en caprinos, como prueba confirmatoria se recomienda la fijacin del complemento (FC). Para la realizacin de la prueba de tarjeta se utiliza antgeno preparado con la sepa 1119-3 de Brucella abortus, la cual es til para la deteccin de anticuerpos inducidos tanto por B. abortus como por B. melitensis, ya que estas especies bacterianas comparten antgenos de superficie. B. Fijacin del complemento (FC). La FC es de las pruebas ms utilizadas y, aunque se han descrito un gran nmero de procedimientos distintos para su realizacin, los ms empleados son el mtodo compuesto, con sus variantes macro y microtcnica, y el mtodo de FC en caliente. Sin embargo, la FC es laboriosa, difcil de estandarizar y no puede realizarse con sueros hemolizados o anticomplementarios. El antgeno celular e

inmunoglobulinas que intervienen en la fijacin del complemento son el LPS y al menos en la brucelosis bovina, las IgG1.

3. HIPTESIS En la comunidad del Terrero, Cuajinicuilapa, Guerrero, no se encontraran casos de brucella mellitensis y brucella ovis.

4. JUSTIFICACIN En la actualidad en el Estado de Guerrero hay una la enfermedad producida por Brucella spp. Se encuentra en estado de control, por lo tanto es necesario hacer pruebas serolgicas para determinar la presencia o ausencia de esta bacteria. En un estudio realizado en 1999 no se diagnosticaron caprinos positivos a brucelosis en el Estado de Guerrero, sin embargo, se identificaron 6 muestras positivas en la prueba de Rosa de Bengala, en la costa grande y costa chica, incluyendo al municipio de Ometepec, Guerrero, mismas que fueron negativas en la prueba de Fijacin por Complemento.

5. OBJETIVOS Tomar muestras de la vena yugular a ovinos y caprinos para su diagnostico en laboratorio de las bacterias brucella mellitensis y brucella ovis. Identificar por medio de prueba de laboratorio, la bacteria de brucella mellitensis y brucella ovis. Aprender la tcnica de identificacin de las bacterias brucella mellitensis y brucella ovis, por medio de la prueba de tarjeta rosa de bengala.

6. MATERIALES Y MTODOS 6.1. Localizacin y rea de trabajo El siguiente estudio se realizara en la comunidad del Terrero municipio de Cuajinicuilapa, Guerrero. El cual se encuentra ubicado en la regin costa chica, al sureste de Chilpancingo, a 8 kilmetros del municipio, situado en las coordenadas 1608y 1636 de la latitud norte y entre los 9823 y 9840 de longitud oeste, respecto al meridiano de Greenwich. Se encuentra a una mediana altura de 10 metros sobre el nivel del mar. Cuenta con una superficie de 51.19 kilmetros cuadrados. Registra un solo tipo de clima, que es el subhmedo-clido con una temperatura de 34C mxima en los meses de abril y mayo, mientras que en diciembre y enero se dan temperaturas de 22C que es cuando se presenta el fro. La poblacin total es de 724 personas, de cuales 355 son masculinos y 369 femeninas.

En el siguiente trabajo se utilizaran rebaos de cabras y borregos de la poblacin, a los cuales se le realizaran muestras de sangre, para el diagnstico de brucella mellitensis y brucella ovis. 6.2. Tipo y manejo de los animales Para la realizacin del trabajo se utilizaron 8 rebaos de ovinos y caprinos, que se escogieron al azar; de los cuales las razas eran del tipo criollo. Se les extrajo muestra de sangre por la vena yugular, utilizando tubos vacutainer

de corcho rojo de 6 ml, con agujas para vacutainer. De los 8 rebaos se escogieron el 25% de los animales del total del rebao para la toma de muestras. El procedimiento para la toma de muestras fue el siguiente: Se sujet al animal con las piernas alrededor de la caja torcica, con las manos se sujet el hocico. Otra persona se dirigi a la yugular con el tubo y aguja para la extraccin de la muestra.

Para cada animal se utilizo un tubo vacutainer y una aguja, teniendo en cuenta no utilizar la misma aguja para la toma de muestra en dos animales.

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6.3. Prueba de laboratorio Deteccin de anticuerpos contra brucelosis por la prueba de tarjeta o rosa de bengala. 6.3.1. Objetivo Deteccin de anticuerpos contra cepas lisas de Brucella spp. en sueros de animales sospechosos. 6.3.2. Generalidades Es un procedimiento cualitativo, rpido, de aglutinacin macroscpica que se efecta en una sola dilucin y que detecta principalmente anticuerpos IgG1 y en menor grado IgM. Sirve como prueba tamiz por su alta sensibilidad y permite reducir el nmero de pruebas diagnsticas necesarias para controlar y/o erradicar la brucelosis en un rebao o hato. 6.3.3. Equipo e instrumentos Micropipeta de volumen de 50 microlitros Puntas para micropipeta Palillos de madera. Placa de vidrio con divisiones para la prueba de tarjeta Tubos de 1ml Gradilla Centrfuga Bata Guantes de ltex Macroscpico 6.3.4. Reactivos Aba test tarjeta al antgeno brucella abortus Suero testigo positivo. Suero testigo negativo. Muestras de suero de animales sospechosos. 6.3.5. Preparacin y acondicionamiento de la muestra Los sueros de animales sospechosos debern ser de preferencia recin obtenidos, conservados en refrigeracin y no debern presentar hemlisis ni contaminacin. Asimismo el antgeno y los sueros testigos deben mantenerse en refrigeracin a 4C, para realizar la prueba deben estar a temperatura ambiente

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6.3.6. Procedimiento Se centrifugan las muestras de sangre a 3500 rpm durante 10 minutos para obtener las muestras.

Una vez centrifugadas las muestras se obtiene el suero sanguneo y se depositan con la ayuda de la micropipeta en los tubos de 1ml, se identifican cada una de las muestras. Las muestras obtenidas se guardaron en el refrigerador a 4 C, hasta que se realizo la prueba con Rosa de Bengala.

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Se colocan 50 microlitros de cada muestra de suero en un crculo sucesivo de la placa de vidrio de izquierda a derecha, se colocaron 5 muestras por vez utilizando diferentes puntas de la micropipeta.

En seguida se aplica a cada muestra, a un lado, 50 microlitros del reactivo Rosa de Bengala y se agita con un palillo de madera hasta ver una muestra homognea.

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Se mezclar durante 4 minutos por rotacin manual suave de la placa, evitando que las muestras de los cuadros adyacentes se pongan en contacto entre s.

Proceder a realizar la lectura por medio de observacin en el macroscpico.

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7. RESULTADOS Y DISCUSIN A continuacin se detallan los resultados obtenidos de las muestras tomadas.
REBAO 1 MUESTRA RESULTADO 1 No procedi 2 Negativo 3 Negativo 4 Negativo 5 Negativo 6 Negativo REBAO 2 MUESTRA RESULTADO 1 Negativo 2 Negativo 3 Negativo 4 Negativo 5 Negativo

REBAO 3 MUESTRA RESULTADO 1 Negativo 2 Negativo

REBAO 4 MUESTRA RESULTADO 1 Negativo 2 Negativo 3 No procedi 4 Negativo 5 Negativo 6 Negativo 7 Negativo 8 Negativo

REBAO 5 MUESTRA RESULTADO 1 Negativo 2 Negativo 3 Negativo 4 Negativo 5 Negativo 6 Negativo

REBAO 6 MUESTRA RESULTADO 1 Negativo 2 Negativo

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REBAO 7 MUESTRA RESULTADO 1 No procedi 2 Negativo 3 Negativo 4 Negativo 5 Negativo

REBAO 8 MUESTRA RESULTADO 1 No procedi 2 Negativo 3 Negativo 4 Negativo 5 Negativo 6 No procedi 7 Negativo 8 Negativo 9 Negativo

Como se muestra en las tablas anteriores los rebaos muestreados en la comunidad del Terrero, Cuajinicuilapa Guerrero, no presentaron resultados positivos a la prueba de Rosa de Bengala. Las muestras a las que no se le pudo aplicar el procedimiento de la prueba de Rosa de Bengala, se muestran como no procedi ya que al momento del centrifugado presentaron hemolisis, por lo tanto no podan reaccionar con el reactivo y se descartaron para la prueba.

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8. CONCLUSIN En vista de los resultados negativos obtenidos en la muestra realizada en el terrero, nuestra hiptesis se muestra como correcta ya que no se encontr ningn caso de brucella spp. en los diferentes hatos que se muestrearon, se recomienda hacer vacunacin preventiva cada ao contra la bacteria de brucella spp . Se dio asesoramiento a las personas sobre el manejo y la sanidad de sus animales para as evitar tener problemas de patas en sus rebaos como es el gabarro que es muy comn en ese lugar debido a la alta humedad que se encuentra en esa rea.

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9. BIBLIOGRAFA 1.- R. A. Carlos. Brucelosis caprina. Instituto Nacional de Tecnologa Agropecuaria. Centro Regional Patagonia Norte. 2009. Bariloche, Chile. 2.- Secretaria de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural. Norma Oficial Mexicana NOM-041-ZOO-1995, Campaa Nacional contra la Brucelosis en los Animales. Diario Oficial de la Federacin. Mxico. 3.- Secretaria de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural. Norma Oficial Mexicana NOM-056-ZOO-1995, Especificaciones tcnicas para las pruebas diagnsticas que realicen los laboratorios de pruebas aprobados en materia zoosanitaria. Diario oficial de la federacin. Mxico. 4.- Secretaria de Agricultura, Ganadera y Desarrollo Rural. Norma Oficial Mexicana NOM-053-ZOO-1995, Requisitos mnimos para las vacunas, antgenos y reactivos empleados en la prevencin y control de la brucelosis en los animales. Diario Oficial de la Federacin. Mxico. 5.- D. A. Efrn, B. M. Jos Mara, S. G. Francisco. Prueba de tarjeta modificada para el diagnostico de la brucelosis caprina. Veterinaria Mxico. Vol. 30. Nm. 004. Universidad autnoma de Mxico. Distrito Federal, Mxico. 1999. 6.- C. H. Eleuterio, G. S. Isidro, A. V. Ma. Trinidad. Brucelosis caprina en el Estado de Guerrero. Fundacin produce del Estado de Guerrero, UAGRO. FMVZ. Sistema de investigacin Benito Jurez. Guerrero, Mxico. 1999 7.- SAGARPA, SENASICA, CPA, Direccin general de salud animal. Situacin zoosanitaria en los Estados de la Republica Mexicana. 14 de enero de 2012.

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