CINETICA DEL SISTEMA PERDISULFATO-YODURO

I.

OBJETIVO

Investigar el efecto de la concentracin, temperatura y catalizador en la velocidad de una reaccin qumica. II. TEORICA

La reaccin que se investiga se realiza entre el ion yoduro y el ion perdisulfato. 2I- + S2O82- 2SO42- + I2 (1)

En la experimento la concentracin de ion yoduro se mantiene constante reduciendo rpidamente el I2 formado (ecuacin (1)) a I- con tiosulfato S2O32-, I2 + 2S2O32- 2I- + S4O62(2)

Por tanto, la velocidad de la ecuacin (1) es funcin de la concentracin de perdisulfato. La cantidad de perdisulfato que reacciona esta controlada por la cantidad de S2O32- que se agrega al sistema. Tambin se aade a la solucin indicador de almidn. Se combina con el I2 despus de la destruccin de todo el S2O32- formando un color azul intenso. En este experimento, se adiciona a cada sistema una cantidad fija conocida de S2O32-. Se determina el tiempo que tarda en aparecer el color azul; este es inversamente proporcional a la velocidad de reaccin (mientras mas corto es el tiempo, mas rpida es la reaccin). La temperatura se mantiene constante. La velocidad general para la ecuacin (1) es Velocidad =
[ ]

= -k[ ] [

(3)

Donde a es el orden de reaccin a I- y b es el orden de reaccin respecto a S2 . Como [ ] se mantiene constante en todo el experimento, se define una constante de pseudovelocidad. k = k[ ] y Velocidad = Y log (velocidad)= logk + b log [ ] (6)
[ ]

(4)

(5)

PROCEDIMIENTO A. Efecto de la concentracin de reaccin. 1. En diez tubos de ensayo limpios y secos, adicionar utilizando una pipeta 10,9,8,7,6,5,4,3,2, y 1 ml respectivamente de la solucin de . En los ltimos nueve tubos agregar agua destilada hasta completar el volumen de cada uno a 10 ml. Utilizar tambin una pipeta. 2. Agregar al primer tubo rpidamente 10 ml de solucin KI-almidn empezando a la vez a cronometrar el tiempo. Mezclar perfectamente las soluciones (inmediatamente despus de poner en marcha el cronometro). Registrar el tiempo de la primera aparicin de un color azul. 3. Repetir este procedimiento con los otros nuevos, adicionando cada vez rpidamente 10 ml de solucin KI-almidn . Si el tiempo lo permite repetir el experimento y utilizar los valores promedio en los clculos. B. Efecto de las temperaturas sobre la velocidad de reaccin. 1. A un tubo de ensayo limpio y seco aadir con una pipeta 4 ml de solucin 0.02 M de K2S2O8 y 6 ml de agua destilada. En un segundo tubo de ensayo colocar 10 ml de solucin KI-almidn . Colocar ambos tubos en un vaso de precipitado con agua y hielo. Cuando la temperatura de ambos tubos sea constante, verter el contenido del tubo de KIalmidn - -S2O3 dentro del otro y cronometrar el tiempo. Mezclar el contenido de los tubos por agitacin. Registrar el tiempo que tarda en aparecer el primer color azul en la solucin. Registrar la temperatura de los soluciones antes y despus de iniciar la reaccin. 2. Repetir el procedimiento anterior sumergiendo ambos tubos en agua a una temperatura aproximada de 10C. (Medir la temperatura exacta). 3. Repetir el procedimiento anterior a temperatura ambiente (alrededor de 20C). (Medirla temperatura exacta.) 4. Repetir el procedimiento anterior para sumergir los tubos en un vaso de precipitado o un bao de agua que se mantenga a una temperatura aproximada de 40C. (Medir la temperatura exacta). Mantngase el calentamiento con un mechero Bunsen. C. EFECTO DE LA CATALISIS SOBRE LA VELOCIDAD DE REACCION 1. Preparar dos tubos de la misma manera que se describi en la parte B antes, a temperatura ambiente. Agregar unas cuantas gotas de solucin de catalizador FeSO4 CuSO4 a la solucin de perdisulfato. Mezclar las soluciones y medir el tiempo en que aparece el primer color azul. Anlisis de datos 1. Calcular la concentracin de ion perdisulfato en cada uno de los 10 tubos de la parte A. 2. A partir de la concentracin de tiosulfato de sodio en la solucin de KI-almidn S2O32- y de la estequiometria de la reaccin, calcular la cantidad y la velocidad de consumo (mol/1] /dt es seg) de S2O82- en cada uno de los diez sistemas. Por qu suponerse que d[ constante en cada sistema?

3. Representar grficamente log (velocidad de reaccin) respecto a log (concentracin de ion perdisulfato) Cual es el orden de la reaccin respecto a la concentracin de ion perdisulfato? (Ver ecuacin (6)). 4. Calcular las velocidades de reaccin para la parte B de la misma manera que la parte A. Cual es el efecto de la temperatura sobre la velocidad de esta reaccin? Trace una grafica en ln (K) respecto al reciproco de la temperatura absoluta (1/T). A partir de la pendiente determine el valor del factor preexponencial. A, en la ecuacin de Arrhenius. K = A exp (-Ea /RT) 5. Describa el efecto del catalizador en la velocidad de esta reaccin Cul es su efecto en Ea en la ecuacin de Arrhenius? 6. Sugiera un mtodo para determinar K y a, el orden de reaccin con respecto a I-, (ver ecuacin (3) y (4)). Aparatos Reactivos Perdisulfato de potasio, K2S2O8, 0.02 M: Agregar 5.4 g de K2S2O8 a agua destilada y diluir a 1 litro. Reactivo de yoduro de potasio/almidn/tiosulfato: Disolver 49,8 g de KI, 50 ml de solucin de almidn (ver Experimento 23) y 0.200g de NaS2O3 en agua destilada y diluir a 1 litro. Este reactivo es 8.06 x 10-4 M en S2O32- y 0.3 M en KI. Solucin de catalizador sulfato ferroso-sulfato de cobre: Disolver 25g de FeSO4 7H2O y 30g de CuSO4 -5H2O en 200 ml de agua destilada. Bibliografa 1. Snoeyink, V.L. y D. Jenkins, Qumica del agua, Limusa, 1983 capitulo 2. 2. Moews, P.C.,Jr., y R.H.Petrucci. The Oxidation of lodide lon by Persulfate Ion, J.Chem.Ed., 41. 1964,pp. 549-551. Tubos de ensayo, 30 ml con tapones de corcho (20 por equipo de estudiantes). Cronometro. Bao de agua, 40C. Bao de hielo. Termmetro, 0-100C Pipetas

DEMOSTRACION DE LA VELOCIDAD DE HIDRATACIN DEL DIXIDO DE CARBONO I. OBJETIVO

Demostrar que la hidratacin del dixido de carbono y la deshidratacin del acido carbnico requieren un tiempo de reaccin que puede determinarse. II. TEORIA

El dixido de carbono no es un acido en el sentido de Brnsted porque no contiene protones. Se hace dibasico por hidratacin a H2CO3 donde por reaccin de transferencia de protones se producen iones HCO3 y CO32-. H2CO3 + OHHCO3 + OHCO32- + H2O CO32- + H2O (1) (2)

La velocidad de hidratacin del dixido de carbn disuelto. CO2(ac) + H2O H2CO3 (3)

Puede ser observarse visualmente en soluciones acuosas fras saturadas con CO2(ac) porque la baja temperatura disminuye la velocidad de reaccin. La reaccin puede seguirse en forma visual por el cambio de color de un indicador de pH como es el azul de bromotimol que es amarillo a un pH 6, verde a un pH de 7, y azul a un pH de 8. Se prepara una solucin saturada fra de CO2(ac) disolviendo un poco de hielo seco en agua destilada que contiene azul de bromotimol. Inicialmente esta solucin es amarilla. El proceso de adicionar base y formar un color azul que se desvanece puede repetirse hasta que por ultimo se ha agregado tanta base que la solucin permanecer de color azul. La interpretacin de estos fenmenos es la siguiente: el acido carbnico, H2CO3, reacciona muy rpidamente (microsegundos) con ion CH- para formar HCO3 y algo de CO32-. Esta reaccin nunca determina la velocidad. Como la mayora del acido carbnico esta presente en forma de CO2 anhidro, debe hidratarse (ecuacin 3) antes de que pueda reaccionar con el ion OH-. Este proceso de hidratacin es el que requiere de un tiempo apreciable. El H2CO3 formado por la hidratacin de CO2 reacciona de inmediato con el exceso de OH-. Contina formndose ms H2CO3 hasta que toda la base presente se neutraliza o hasta que todo el CO2 presente se consume. El curso de la reaccin se ve con ms claridad en una solucin fra ya que la reaccin de hidratacin es mas lenta que a la temperatura ambiente. En soluciones con pH 8 no hay intercambio de CO2 entre el lquido y la fase gaseosa durante el proceso, la cintica de la reaccin puede expresarse mediante la ecuacin para la velocidad de cambio de concentracin de CO2 con el tiempo. = -kf [ ]+ kf [ ]

Donde kf es la constante de velocidad para la reaccin directa (ecuacin 3) y kf es la constante de velocidad para la reaccin inversa (ecuacin 3). El CO2 desaparece porque se hidrata a una velocidad proporcional a su propia concentracin instantnea, mientras que se forma a partir de H2CO3 a una velocidad proporcional a la concentracin de este ultimo. La concentracin del agua es alta y esencialmente constante, y se incluye implcitamente en kr. PROCEDIMIENTO Se le proporcionara una solucin fra que se ha saturado con CO2. Tomar aproximadamente 200 ml y colocarlos en un matraz Erlenmeyer. Agregar suficiente indicador de azul bromotimol para que el color de la solucin sea amarillo (3 4 gotas). Ahora agregar 1 2 ml de NaOH 0.1M y mezclar suavemente por rotacin del matraz. El color cambiara de amarillo a azul y despus volver al tono amarillo. Repetir la adicin de NaOH varias veces notando que cada vez la reversin a amarillo es ms lenta. Preguntas 1. Comentar el concepto de la etapa limitante de la velocidad en una serie de reacciones utilizando como ejemplo el sistema que se estudia. 2. Disear un experimento que demostrara la reaccin de deshidratacin: H2CO3 H2O + CO2 3. Cul esperara que fuera la etapa limitante de la velocidad en esta serie de reacciones inversas? 4. Qu factores cinticos se modifican por la baja temperatura? Qu otros parmetros pueden ser sensibles a la temperatura en la reaccin CO2.agua? Aparatos Matraces Erlenmeyer, 500ml, pipetas y probetas graduadas, 250 ml. Reactivos Hidrxido de sodio, aproximadamente 0.1 M: Disolver 4g de NaOH en 250ml de agua destilada y diluir a 1 litro. Solucin de indicador para pH con azul de bromotimol: Solucin acuosa al 1 porciento. Solucin saturada de CO2: Agregar hielo seco a agua destilada, dejar disolver. Mantener la solucin refrigerada en una botella completamente llena y tapada hasta su uso. (2) Otra forma de preparar esta solucin es agregar 3g de NaHCO3 a 1 litro de agua destilada fra (4C) y acidificar a pH 4 con HCl M. Almacenar de la misma manera que en el mtodo (1). BIBLIOGRAFIA 1. Kern,D., M., J. Chem. Educ., 37, 14 (1960). 2. Snoeyink,V. L., y D. Jenkins, Quimica del agua, Limusa, 1983, capitulo 4.

CINTICA DE LA HIDRLISIS DEL PIROFOSFATO

OBJETIVO Verificar la forma de la ley de la velocidad para la hidrolisis de pirofosfato e investigar el efecto de la temperatura en esta reaccin. TEORIA Los pilofosfatos son fosfatos que contienen mas de un grupo fosfato enlazado por la unin fosfato condensada (P-O-P). Estos compuestos son de uso comn como constituyentes en detergentes sintticos y en tratamientos de agua como agentes de umbral para evitar la precipitacin de CaCO3(s) en soluciones sobresaturadas. En agua tienden a hidrolizarse a ortofosfato, hecho que interesa por que el ortofosfato puede ser un nutriente limitante para los organismos fotosintticos en ciertas aguas receptoras. Para el estudio de la hidrolisis de polifosfatos se ha seleccionado el pirofosfato, HnP2O7n-4 HnP2O7(n-4) + H2O 2HmPO4m-3 + (2m-n-2) H+ (1)

Donde n, el numero de protones enlazados a P2O74-, y m, el numero de protones en donde n, el numero de protones en PO43- dependen del pH del sistema. La velocidad de esta reaccin es de primer orden respecto de cada uno de los reactantes o de segunda orden en general (Referencia 4). Sin embargo en solucin acuosa diluida puede analizarse como una reaccin de pseudoprimer orden. Por tanto, la ley de velocidad
[ ]

= -k [

][

(2)

Puede determinarse en forma aproximada como

[ ]

= -k [

(3) ]

Donde k es una constante de velocidad de pseudoprimer orden, t es el tiempo de reaccin y [ representa la concentracin total de pirofosfato, sin tomar en cuenta el grado de protonacion.

Como el procedimiento analtico que se utiliza en este experimento mide solo el ortofosfato, es conveniente escribir la ley de la velocidad en trminos de la concentracin inicial de pirofosfato, [ ]0, y la concentracin del ortofosfato, [ ], producido por la reaccin, donde [ Y [ ]= [ ]+[ ]+[ ]+[ ] ]= [ ]+[ ]+[ ]+[ ]+[ ]

]= [

]0 [ ]

(4)

Por tanto, Puesto que | | = 0 a t=0 Sustituyendo la ecuacin (4) en la Ec. (3).
[ ] [ ]

= -k ([

[ ])

(5)

Por reordenamiento e integracin

Log

[ [ ]

] [ ]

(6)

Log ([

] -1/2 [ ]

+ log [

(7)

As pues, una grafica de log[ ] -1/2 [ ] respecto a t producir una lnea recta con pendiente k/2.3 e interseccin de log [ ] en t= 0. La velocidad de reaccin depende en gran forma de pH, y la reaccin es mucho mas rpida a pH bajo. En apariencia el ion hidronio, H3O+, reacciona con el polifosfato para hacer mas fcil la ruptura del enlace P-O-P (Referencia 3). La velocidad de reaccin vara tambin con la temperatura. La ecuacin de Arrhenius describe el efecto de la temperatura sobre la constante de velocidad K. logk = + loga (8)

Donde Ea es la energa de activacin en cal/mol, T es la temperatura absoluta en K, R es la constante de los gases ideales, 1.99 cal/mol K y a es una constante llamada el factor de frecuencia, o factor preexponencial, cuyas dimensiones son seg1-. Una grafica de log k respecto q 1/T produce una lnea con pendiente Ea/2.3R. Se ha encontrado que Ea varia con el pH y la composicin inica de la solucin: los valores tpicos para sistemas diluidos estn en el intervalo de 10-25 kcal/mol. En este experimento se utiliza el mtodo de anlisis de ortofosfato que utiliza acido vanadomolibfosforico (vanse los detalles en el experimento 3). Este mtodo se basa en la reaccin de molibdato de amonio con ortofosfato en solucin acida para formar acido molibdofosforico. En presencia de vanadio se forma un color amarillo cuya intensidad es proporcional a la concentracin de ortofosfato. Este mtodo es satisfactorio para concentraciones de P-P04 entre 4 y 18 mg/l (1.29 x 10-4 a 5.8 x 10-4 M).

PROCEDIMIENTO NOTA: Este experimento puede llevarse a cabo en una sesin de laboratorio como un trabajo con el todo el grupo. A cada equipo de estudiantes se le asignara la experimentacin a una temperatura. Los datos se combinan y los estudiantes harn el anlisis individual. 1. Preparacin de la curva patrn. a) En matraces volumtricas de 50 ml se agrega un volumen de solucin bsica de ortofosfato para abarcar un intervalo de concentracin de P-PO4 entre 25 y 600 g/50 ml (3-23 x 10-5 a 1.12 x 10-3 M) si el intervalo de temperaturas va de 35 a 100C. Sera suficiente utilizar seis a ocho muestras. A cada una de estas muestras y a un matraz adicional en blanco, agregar 10 ml de reactivo de vanadato molibdato y diluir a 50 ml con agua destilada. b) Despus de 10 min, medir la absorbancia utilizando un espectrofotmetro visible. Seleccionar la longitud de onda para la determinacin de absorbancia en base a la temperatura que se utilice para el experimento de velocidad de acuerdo con las siguientes normas: 420 nm a 5C, 420 nm a 25C, 470 nm a 50C y 490 nm a 70-100C. Ajustar el espectrofotmetro a cero utilizando el blanco. c) Trazar la grafica de absorbancia respecto a concentracin de fosfato (moles PO4/1). 2. Relacin entre la velocidad de reaccin y la concentracin de pirofosfato a temperatura ambiente. a) Pesar 900 mg de pirofosfato de sodio (NaP2O7, 10H2O) y disolver en aproximadamente 100 ml de agua destilada. b) Agregar 600 a 650 ml de agua destilada a un matraz volumtrico de 1000 ml. Agregar a este, cuidadosamente 200 ml de HCl concentrado. Enfriar a temperatura ambiente. Medir y registrar la temperatura exacta. c) Agregar solucin de Na4P2O7 a la solucin de HCl en el matraz volumtrico de 1000 ml. Empezar a registrar el tiempo tan pronto como se haya agregado la solucin de Na4P2O7. Diluir con rapidez a la marca utilizando agua destilada. d) Despus de 5 min retirar exactamente 10 ml del recipiente de reaccin y colocarlo en un vaso de precipitado pequeo. Agregar de inmediato de 12 a 14 ml de NaOH 1 M, segn sea apropiado y ajustar el pH al intervalo de 4 a 10(esto es muy importante) gota a gota con NaOH o HCl 1M. Al elevar el pH la reaccin se detiene. Debe registrarse el tiempo exacto en que se agregue la mayor parte de la base fuerte. Este tiempo se utiliza en los clculos de la velocidad de reaccin.

e) Transfiera esta solucin a un matraz volumtrico de 50 ml, agregue 10 ml del reactivo de vanadato molibdato y diluya a la marca con agua destilada. Diez minutos despus de la adicion del reactivo vanadato molibdato, lea y registre la absorbancia. Ajuste a cero el espectrofotmetro utilizando un blanco (vase parte 1. Procedimiento). f) Repita los pasos d y e despus de transcurrido un tiempo de 15, 30, 45, 60, 90, 105, 120 y 150 min. g) La concentracin de fosfato determinada de la curva patrn es un 1/5 de la concentracin en el recipiente de reaccin por la dilucin 1:5 de la concentracin en el recipiente de reaccin por la dilucin 1:5 que se realizo en la etapa 3.e. Corrija las concentraciones para obtener la concentracin efectiva en el matraz de reaccin. h) Calcule | | a partir de la informacin proporcionada en la parte 2.a. 3. Velocidad de reaccin a otras temperaturas. a) Seguir el procedimiento dado en la parte 2 para las temperaturas aproximadas 5, 50 y 70C utilizando la curva patrn y la longitud de onda apropiada. No agregue la solucin de Na4P2O7 al acido hasta que la temperatura de la solucin de acido, la solucin de fosfato y el agua dilucin haya llegado a la temperatura del experimento. Despus de diluir a 1000 ml, transferir el contenido del matraz volumtrico a un vaso de precipitado para mayor facilidad en el control de la temperatura y en el muestreo. b) Haga determinaciones a los 5, 15, 30, 45, 60, 105, 120 y 150 min (o aun mas si el tiempo lo permite) en la muestra a 5C; a los 5, 10, 15, 25, 35, 45, 55, 65, 75, y 90 min en la muestra a 50C y a los 2, 4, 6, 8, 10, 12 y 15 min en la muestra a 70C. Repita estas determinaciones en la muestra a 70C si el tiempo lo permite. ANLISIS DE DATOS 1. En la misma grafica trace las curvas de log ([ ] [ ]) respecto al tiempo para

cada una de las temperaturas. Determine si la ley de velocidad es de pseudoprimer orden y describa sus datos en forma satisfactoria. 2. Determine las constante de velocidad, k, para cada temperatura. 3. Determine la energa de activacin, Ea, representada log k respecto a 1/T. Describa la ecuacin de Arrhenius en forma apropiada al efecto de la temperatura?

Aparatos Bao de agua (2). Bao de hielo. Potencimetro. Espectrofotmetro: Bausch and Lamb Spectronic 20 o su equivalente. Matraces volumtrico, 50 ml y 1 litro. Pipetas, 25 ml y vasos de precipitado, 500 ml, embudos.

Reactivos 1. Solucin de hidrxido de potasio (2M): Disolver 224.4 de KOH en 500-600 ml de agua destilada en un vaso de precipitado. Transferir a 1 matraz volumtrico de 2 litros y diluir a 2 litros (tambin puede utilizarse NaOH.) (Aproximadamente 125 ml por grupo de estudiantes). 2. Reactivo de vanadato molibdato: Ver experimento 3. 3. Solucin base de ortofosfato: Ver experimento 3. 4. Pirofosfato de sodio, Na4P2O7 10 H2O. 5. HCl, concentrado. 6. HCl, 1 M: Diluir 43 ml de HCl concentrado a 500 ml en un matraz volumtrico. 30 ml en un frasco gotero por grupo de estudiantes. 7. KOH, 1 M: (Tambin puede utilizarse NaOH). 30 ml en un frasco gotero por grupo de estudiantes. Bibliografa 1. Snoeyink, V.L., y D Jenkins, Quimica del Agua, Limusa, 1983, capitulo 2. 2. Standard Mathods for the Examination of Water and Wastewater, 14a.ed., American Public Health Association, 1976, pp. 466-4883. 3. Van Wazer, J.R., E. J. Griffith, y J.F. McCullouhg, Structure and Properties of the Condensed Phosphates. VII. Hydrolytic Degradation of Pyro-and Tripolyphosphate, J. Amer. Chem. Soc., 77, 1955, pp. 287-291. 4. Campbell, D.O., y M.L. Kirkpatrick, A Kinetic Study of the Hidrolysys of pyrophosphates, J. Amer, Chem. Soc., 76, 1954, pp. 893-901.

CINTICA DE LA ACTIVIDAD DE LA ENZIMA DE FOSFATASA ALCALINA EN LODOS ACTIVADOS AGOTADOS EN FOSFATO

OBJETIVO Determinar la actividad de las enzimas de fosfatasa alcalina en lodos activados agotados en fosfatos y relacionar esta actividad al substrato y a la concentracin de enzima. TEORIA Las fosfatasas alcalinas son un grupo de enzimas que catalizan la reaccin general. Monoester de ortofosfato + H2O alcohol + H3PO4 (1)

En lodos activados y algas, estas enzimas se producen en cantidades importantes solo cuando estos cultivos se desarrollan en un medio limitado en fosfatos inorgnicos. Cuando hay un suministro suficiente de fosfato inorgnico las enzimas se reprime. La actividad de estas enzimas puede determinarse por un anlisis en donde la enzima hidroliza el fosfato de p-nitrofenol (PNPP) transformndolo en el anion p-nitrofenol (PNP) y acido fosfrico. Fosfatasa alcalina 35C

(NO2C6H4O)3 PO + 5 OH-

3 NO2C6H4O- + HPO42- + 2 H2O

(2)

El color amarillo del PNP a pH > 7 permite su determinacin colorimtrica. La cintica de muchas reacciones enzimticas puede describirse por: E+S ES E + P (3)

El mtodo de Michaelis Menten que sigue la reaccin general: Donde E = enzima S= substrato ES = complejo enzima substrato P = producto La relacin entre las concentraciones de enzima y substrato y la velocidad de formacin del producto con frecuencia pueden expresarse por la ecuacin de Michaelis Menten (Referencia 2) en la siguiente forma: Para el subtrato, cuando la concentracin de enzima esta en exceso y es constante (no limita la velocidad).

Velocidad de formacin del producto = R=

| |

| |

(4)

Para la enzima, cuando la concentracin de substrato esta en exceso y es constante (no limita la velocidad). R= Donde
| |

(5) = velocidad mxima de formacin del producto.

Ks = concentracin del substrato a 0.5 KE = concentracin de enzima a 0.5

En este procedimiento se utiliza como fuente disponible de enzima un cultivo de lodos activados que se ha agotado en fosfato inorgnico hacindolo desarrollarse en un medio deficiente en fosfato inorgnico. No se utiliza fosfotasa alcalina por razones econmicas. Se supone que la concentracin de enzima es proporcional a la masa de lodos activados. PROCEDIMIENTO Este experimento deber llevarse a cabo con toda la clase: uno de los equipos de estudiante mide la cinetica del substrato y otros grupos determinan la cinetica de la enzima. 1. Homogenizar el lodo activado agotado en fosfatos que contiene 1500-2000 mg/1 de solidos suspendidos durante 1 minuto, utilizando una licuadora a baja velocidad. 2. Extraer muestras mezcladas de 10 ml por triplicado y filtrar a travs de filtros Whatman GF/C previamente tarados para determinar los solidos totales suspendidos en el lodo activado. 3. Cintica del substrato. a) De la solucin base PNPP, preparar volmenes de 100 ml con 700, 350, 200, 100, 30 y 10 mg/1 de PNPP y colocarlos en vasos de precipitado de 200 ml. b) Ajustar el pH de las soluciones de PNPP a 9 agregando gota a gota regulador Tris. c) Dejar reposar las soluciones regulada de PNPP para que alcancen el equilibrio en un bao de agua a 35C. d) Filtrar porciones de 5 ml de lodos activados mezclados a travs de filtros Whatman GF/C inmediatamente antes de usarlas y colocar los filtros en las soluciones reguladas de PNPP a 35C. Espacie los tiempos en que inicie los experimentos de manera que sea posible efectuar determinaciones posteriores a intervalos de tiempo convenientes. e) Incubar las muestras con lodos activados en la solucin de PNPP durante 15 min. f) Verter 20 ml de solucin de PNPP incubado bien mezclada, a travs de filtro Wahtman GF/C. Medir rpidamente la concentracin de PNP en el filtrado utilizando un espectrofotmetro.

g) Repetir las operaciones de la parte 3F a intervalos de tiempo de 30, 60 y 90 minutos desde el tiempo inicial de experimentacin, regresando en cada ocasin el filtrado y la solucin al matraz de incubacin. 4. Cintica de la enzima a) Colocar 100 ml de la solucin bsica con 70 mg/L de solucin de PNPP en cada uno de 7 vasos precipitados de 200 ml. b) Ajustar el ph de las soluciones de PNPP a 9.0 agregando gota a gota el regulador tris. c) Equilibrar las soluciones reguladas de PNPP en un bao de agua a 35C. d) Inmediatamente antes del experimento filtrar volmenes de lodos activados mezclados y homegenizados atraves del filtro Whatman para obtener masa de solidos suspendidos de 2, 5, 10, 15, 20, 25 y 30 mg. Agregue los activados para separar volmenes de 100 ml de solucin con 700 ml/L de PNPP espaciando los tiempos iniciales de los experimentos lo mismo que en 3d. 5. Estandarizacin de PNPP Preparar una curva estndar para la concentracin de PNP (mol/1) respecto a absorbancia a 400 nm utilizando un espectrofotmetro visible con una celda de media pulgada. Preparar concentraciones de PNP desde 1-20 moles de PNP/L diluyendo la solucin estndar 1mM de PNP. Ajustar el pH de las muestras utilizadas para preparar la curva estndar hasta un pH minimo de 9 por adicin gota a gota de regulador tris. Analisis de datos 1. Preparar la grafica de un mol de PNP producido/(litro-mg lodos activados) respecto a tiempo para cada concentracin inicial de PNPP utilizada en la parte 3 del procedimiento. 2. Medir la pendiente de cada una de estas curvas. Graficar la pendiente (mol PNP/ litro producido/ mg lodos activados-hora). 3. Determinar el R mximo y Ks apartir de la pendiente y interseccin de una grafica de la forma inversa de la ecuacin (4):

| |

(5)

4. Repetir el anlisis de datos en la parte 1 a 3 para los datos obtenidos en la parte 4 del experimento. Preguntas 1. Se ajusta en forma satisfactoria la ecuacin de Michaells-Menten a los datos de variacin en la concentracin de enzima y substrato? Si no es asi, intente ajustar los datos con alguna otra relacin apropiada.

2. Si las ecuaciones de Michaells-Menten proporcionan un buen ajuste de los datos Cules son los valores de Ke, Ks y Rmax? 3. Qu variacin en la actividad de fosfatasa alcalina esperara a observar si la concentracin del fosfato en el medio utilizado para cultivar fuera (a) doble (b) triple (c) cudruple mientras que los otros constituyentes permaneceran al mismo nivel. 4. Cual seria la estimacin de la importancia de la actividad de la fosfotasa alcalina en el tratamiento de los lodos activados en una agua negra domestica tpica (DBO5 = 200mg/L, P-PO4 =10 mg/L, N = 30 mg/L)? Aparatos Reactivos 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. a) b) Regulador Tris. (NH2C(CH2OH)3) 0.1M. Solucin de p-nitrofenol, 0.001 M. Solucin de fosfato de p-nitrofenol, 700 mg/1 (1500 ml por grupo de estudiantes). Solucin glucosa, 20 g/L. Solucin de NaHPO4 5g/L. Solucin de NH4Cl, 7.5 g/L. Preparacin de los lodos activados deficientes en fosfatos (agotados). Aproximadamente 1 semana antes de iniciar el experimento obtenido 2 litros de lodos activados de la planta de tratamiento de aguas municipales residuales. Colocar los 2 litros de lodos activados en una probeta graduada de 2 litros a la que se le ha ajustado un difusor de aire y se le hace pasar aire atraves de un litro de lana de vidrio para evitar que la grasa y el aceite entren al cultivo. Permitir que los 2 litros de lodos activados se sedimenten durante 1 hora cortando la corriente de aire. Verter el sobrenadante. A 2 litros de agua corriente agregar 20 ml de solucin de glucosa, 2 ml de solucin de NH4Cl y 2 ml de solucin de Na2HPO4. Bao de agua a 35C, para contener hastam12 vasos de precipitado de 200 ml. Spectronic 20 de Bausch and lomb o equivalente para lecturas a 400 nm. Vasos de precipitado 200 ml (15 por grupo de estudiantes). Potencimetro. Aparato con filtro Millipore con un tubo de ensayo a insertado en matraz Buchner para recibir el filtrado. Termmetro, 0-100C. Filtros de fibra de vidrio Whatman GF/C 47 mm de dimetro, Probeta graduada, 2 litros, para llenar y extraer material de una unidad de lodos activados. Licuadora con baja velocidad y capacidad para 1 litro.

c) d) e)

f)

Agregar esta solucin bien mezclada al lado activado sedimentado y aerear durante 23 horas. g) Sedimentar durante 1 hora. h) Repetir los pasos 7 de d) a g) durante una semana aproximadamente, verificando de vez en cuando los niveles de solidos suspendidos en el lodo activado para determinar si permanecen en el intervalo de 1500 a 2000 mg/L. si el nivel de solidos sobrepasa esta cifra descartar algo de los solidos del cultivo. Si los niveles de solidos son inferiores, ajustar la cantidad de muestra filtrada para obtener el nivel deseado en el experimento de la enzima. Bibliografa 1. Fruh, E. G., W. E. Morgan, H.G. Moore, Jr., R. B. Higgins, y M.L. Shashan, An Enzymatic Technique to Defect Surplus phosphorus Uptake by Activated Sludge, Proc. 5th Internat. Cont. on Water Polln, Res..1. 1970, pp.11 2/1-14. 2. Snoeyink, V.L., y D. Jenkins, Quimica del agua, Limusa, 1983, capitulo 2. 3. Fitzgerald, G.P.,Nelson, T.C., Extractive and Enzymatic Analyses for Limiting or Surplus Plosphorus in Algae, J. Phycology, 2 1966, p.32.

CINTICA DE LA OXIDACION DE HIERRO FERROSO OBJETIVO Ilustrar la cintica qumica de la oxidacin del hierro ferroso: verificar los efectos de la concentracin de oxigeno y de ion hidrogeno sobre la velocidad de oxidacin de Fe(II) y determinar la constante de velocidad para la reaccin. TEORIA Las reacciones qumicas pueden llevarse a cabo lentamente a bien no verificarse, aun cuando la termodinmica las favorezca. En ausencia de catalizadores la oxidacin del hierro ferroso por oxigeno es muy rpida a valores alcalinos de pH, pero en solucin acida se lleva a cabo con suma lentitud. La reaccin puede representarse mediante las dos ecuaciones siguientes, aunque en realidad es ms complejo: Fe2+ + O2 + H+ Fe3+ + H2O Fe3+ + 3 OH- Fe(OH)3(s) (1) (2)

La primera reaccin limita a la velocidad. La hidrolisis y precipitacin de ion frrico es rpida. El hidrxido frrico es muy insoluble entre pH 5 y 11. A concentraciones elevadas de Fe 2+ y valores de pH superiores 7.5, la reaccin de la ecuacin (1) puede estar limitada por la velocidad de transferencia de oxigeno a la solucin. A valores de pH neutros, la velocidad de la primera reaccin se representa por la ecuacin (3) (Referencia 3).
[ ]

][

(3)

La velocidad de oxidacin de Fe (II) es de primer orden, respecto a la concentracin de Fe(II) y a ]. La expresin de velocidad tambin puede escribirse en PO2 y de segundo orden respecto a [ forma logartmica.
[ ]

(4)

| ) hasta (t, | | a pH y PO4 Que puede integrarse entre las condiciones lmite (O, | constantes. A continuacin se representan los datos para la oxidacin de Fe (II) en funcin del tiempo para un pH constante, PO2 = 0,21 atm y T= 20C (Referencia 2). Procedimiento El experimento se llevara a cabo como un ejercicio de toda la clase. Cada equipo de estudiantes realizara dos experimentos de cintica de la Tabla 1.

Tabla 33.1 El tiempo aproximado para el muestreo (minutos) en la determinacin de las condiciones de pH y O2. pH 7.4 7.2 7 6.8 6.7 1 3 5 5 3 5 10 10 6 10 15 20 Aire 9 15 20 30 Oxigeno 12 20 25 40 15 25 30 50 20 30 40 60 2 3 5 5 5 6 10 10 8 9 15 15 11 12 20 20 14 16 25 25 17 20 30 30 20 25 35 40

1. Agregar 125 ml de regulador Tris y 350 ml de agua destilada a un vaso de precipitado de 1 litro. 2. Ajustar el contenido del vaso de precipitado al pH deseado agregando NaOH 1.0 M. 3. Airear energticamente con aire o con oxigeno puro durante cuando menos 5 minutos. Reajustar el pH cuando sea necesario. Medir y registrar la temperatura. 4. A la solucin aireada agregar 25 ml de solucin de sulfato ferroso amnico. Empezar a cronometrar el tiempo. 5. A los tiempos de muestreo indicados en la tabla 1 registrar el tiempo exacto, el pH y la temperatura. Tomar una muestra de 5 ml y colocarla en un matraz volumtrico de 50 ml. Agregar de inmediato 10 ml de solucin de a-fenantrolina y 5 ml de regulador de acetato de amonio. 6. Una vez tomadas todas las muestras leer la absorbancia de cada una a 510 nm. 7. Elaborar una curva estndar para Fe (II) utilizando alrededor de 8 estndares desde 0 a 32 mg/L. 8. Determinar la concentracin inicial de Fe (II) ejecutando las etapas 1, 3, 4, 5 al Ph establecido por el regulador Tris en la etapa 1. Analizar 4 muestras en replica y determinar el promedio. Anlisis de datos El anlisis de datos se divide en dos partes. Primero se supondrn validas las ecuaciones de velocidad (3) y (4) y se determinaran los valores de k. En segundo lugar, se supondr valida la ecuacin (5) y se utilizaran los datos para calcular el orden de reaccin respecto a Fe (II).
[ ]

][

] ] respecto a tiempo y calcular k = k [

(5) ] PO2 para cada

1. Trazar la grafica de log [

experimento. 2. Si PO2 y pH son constantes, la ecuacin (5) puede escribirse en forma logartmica: log (| |

) = logK + a log[

(6)

Donde K = K[

] PO2
[ ]

Trazar la grafica de

respecto a t y ajustar a los datos una curva continua. Utilizar

[ ]

los datos de esta curva para representar la grafica de log (

) respecto a log [

a los tiempos en que se determino Fe (II). A partir de la pendiente de esta ltima grafica determinar el orden de la reaccin respecto a Fe (II). Preguntas 1. El valor que Stumm y Lee (Referencia 3) obtuvieron para k es 8.0 (2.5) x 10+13 min-1 atm-1 a 20C en un sistema regulado con bicarbonato. Sugiera la razn de que existan diferencias entre su valor experimental de k y el mencionado por estos autores. 2. Convierta la constante de velocidad determinada en forma experimental (k) a un valor ] en lugar de valido para la expresin de velocidad expresada en funcin de [ PO2 y de [ ] en lugar de [ ] . 3. Estudie los factores que influyen en la eliminacin de Fe (II) en agua fretica anoxica con un pH de 7.5 y un contenido de Fe (II) de 10-4M. Aparatos Reactivos Solucin estndar de Fe (II) 0.01 M: Agregar 1 ml de HNO3 IM a de 500 ml de agua destilada. Agregar 3.922 g de sulfato ferroso amoniaco (Fe(NH4)2 (SO4)2 6 H2O), mezclar y diluir a 1 litro. H SO, concentrado. NaOH: 1M. Regulador Tris, 0,1 M, ajustado a pH 6.0 con H2SO4 concentrado solucin de o.fenantrolina: Disolver 100 mg de monohidrato de 1,10- fenantrolina, C12H8N2 H2O en 100 ml de agua destilada agitando y calentando a 80C; no permitir la ebullicin. Descartar si la solucin se oscurece. Si se agregan al agua 2 gotas de HCl concentrado no es necesario el calentamiento. Vasos de precipitado, 1 litro (1 por equipo de estudiantes). Pipetas. Tanque de oxigeno con regulador. Suministro de aire comprimido. Tubera de, 3/16 plg d.i. Conexiones de vidrio en Y plg d.e. Tubera de vidrio, plg de d.e. Cronometro ( 1 por equipo de estudiantes). Espectrofotmetro Bausch and Lomb Spectronic 20 o equivalente. Cubetas (celdas). Matraces volumtricas, 50 ml (10 por equipo de estudiantes).

Solucin reguladoras de acetato de amonio: Disolver 250 g de acetato de amonio NH4C2H3O2 en 150 ml de agua destilada. Agregar 700 ml de acido actico concentrado (glacial) hasta que el volumen de la solucin sea ligeramente superior a 1 lito.