HOSPITAL I ANDAHUAYLAS

DEPARTAMENTO DE PATOLOGICA CLINICA

AREA DE HEMATOLOGA

MANUAL DE
TCNICAS BSICAS DE HEMATOLOGA

INDICE.
PRESENTACIN 3 INTRODUCCION ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------- 4

MARCO TERORICO ----------------------------------------------------------------------------------- 5

Sangre Plaquetas

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GENERALIDADES

OBTENCION DE LA MUESTRA --------------------------------------------------------------------12 ANTICOAGULANTES ---------------------------------------------------------------------------------16 TINCIN Y FROTIS SANGUINEO -----------------------------------------------------------------18 HEMOGRAMA- HEMOGLOBINA HEMATOCRITO -----------------------------------------21

Recuento de Glbulos rojos ---------------------------------------------------------------24 Constantes Corpusculares ---------------------------------------------------------------28 Dosaje de Hemoglobina ---------------------------------------------------------------31 Frotis de sangre perifrica ---------------------------------------------------------------33 Perfil Hemostasia - -------------------------------------------------------------36 Recuento de Plaquetas ---------------------------------------------------------------47 Leucograma ---------------------------------------------------------------51 Alteraciones Eritrocitarias --------------------------------------------------------------59

GRUPO SANGUINEO --------------------------------------------------------------------------------63 PREPARACIN DE COLORANTES Y SOLUCIONES ---------------------------------------64 USADOS EN HEMATOLOGIA BIBLIOGRAFIA -----------------------------------------------------------------------------------------67

PRESENTACIN

Con el propsito de uniformizar los procedimientos hematolgicos que se realizan en los diversos laboratorios clnicos a nivel Nacional , el Instituto Nacional de Salud pone a disposicin de la comunidad tcnico-cientfica nacional el Manual de Procedimientos de Laboratorio en Tcnicas Bsicas de Hematologa, en el cual se incluyen todos los mtodos empleados en el campo hematolgico bsico. De este modo se contribuye a mejorar la calidad de diagnstico en los laboratorios de los servicios de salud. El Area de de hematologa con este manual utiliza las tcnicas bsicas empleadas en estas reas partiendo de la toma de muestra hasta la realizacin de las pruebas respectivas. Es necesario enfatizar que para obtener resultados ms confiables es importante, pero no imprescindible, automatizar el laboratorio, debido a que ello evitar el posible error humano, sobre todo en lo referente a recuentos celulares, valores de hemoglobina y constantes corpusculares ya que en estas variables se trabaja con cantidades exactas de sangre, hecho que es muy difcil de lograr cuando se usan los mtodos manuales, lo mismo sucede al tratarse de las pruebas de hemostasia. Esperamos que este manual constituya una gua para el personal de laboratorio en general.

INTRODUCCIN
El presente manual ha sido elaborado en forma prctica para que su contenido sea fcil de entender por el personal que labora en el Area de hematologa. El objetivo principal es protocolizar y estandarizar los procedimientos hematolgicos que empiezan con la toma de muestra (siguiendo las pautas de control de calidad preanaltica) hasta el procesamiento de sta (fase analtica) en la determinacin correspondiente, y por ltimo, en la emisin de los resultados (fase postanaltica). Debemos recalcar que cuando se realizan pruebas de hemostasia debe tenerse en consideracin los cuidados comunes a toda prueba de laboratorio, es decir, las muestras deben obtenerse en condiciones apropiadas y rotularse debidamente. Esperamos que el presente manual sirva de gua efectiva y que pueda ser enriquecido con nuevos aportes con la finalidad de alcanzar un trabajo de calidad.

MARCO TEORICO

SANGRE
Sangre, sustancia lquida que circula por las arterias y las venas del organismo. La sangre es roja brillante o escarlata cuando ha sido oxigenada en los pulmones y pasa a las arterias; adquiere una tonalidad ms azulada cuando ha cedido su oxgeno para nutrir los tejidos del organismo y regresa a los pulmones a travs de las venas y de los pequeos vasos denominados capilares. En los pulmones, la sangre cede el dixido de carbono que ha captado procedente de los tejidos, recibe un nuevo aporte de oxgeno e inicia un nuevo ciclo. Este movimiento circulatorio de sangre tiene lugar gracias a la actividad coordinada del corazn, los pulmones y las paredes de los vasos sanguneos. El cuerpo humano posee cinco litros de sangre en su totalidad. COMPOSICIN DE LA SANGRE: En una persona normal sana, el 45% del volumen de su sangre son clulas, glbulos rojos (la mayora), glbulos blancos y plaquetas. Un fluido claro y amarillento, llamado plasma, constituye el resto de la sangre. El plasma, del cual el 95% es agua, contiene tambin nutrientes como glucosa, grasas, protenas, vitaminas, minerales y los aminocidos necesarios para la sntesis de protenas. GLBULOS ROJOS, ERITROCITOS O HEMATES: Son clulas de forma discoidea y bicncava con un dimetro promedio de 7,5 m y un espesor que llega a 2 m en sus bordes y que no alcanza 1 m en el centro y constituyen el 99% del total de clulas en la sangre.

El eritrocito maduro no es una verdadera clula: no posee ncleo, no se reproduce y consume una cantidad mnima de oxgeno. Su membrana est compuesta de una combinacin de lpidos y protenas, que le confieren propiedades especiales de permeabilidad. La funcin principal de la clula roja es transportar oxgeno hacia los tejidos y traer de vuelta dixido de carbono de stos hacia los pulmones. Contiene alrededor de un 60% de agua, el in predominante en su interior es el potasio y el 34% de su peso corresponde a la hemoglobina, la cual constituye el 90% de las sustancias slidas contenidas en ste. Adems, contiene numerosas enzimas que son necesarias para el transporte de oxgeno y la viabilidad de la clula. La hemoglobina es el pigmento respiratorio de la sangre, est contenida exclusivamente dentro de los eritrocitos y se une aproximadamente al 97% de todo el oxgeno en el cuerpo. Es una protena conjugada formada por la globina, un grupo hem y un tomo de hierro. Cada molcula de hemoglobina puede unir cuatro molculas de oxgeno, por lo que le permite a la sangre humana transportar ms de 70 veces la cantidad de dicho gas que pudiera acarrearse de cualquier otra manera. La forma particular bicncava del glbulo rojo le permite una absorcin de oxgeno en los pulmones, as como su liberacin eficiente en los capilares de todos los tejidos del cuerpo. De hecho, se calcula que un eritrocito se satura totalmente de oxgeno en menos de un centsimo de segundo. GLBULOS BLANCOS O LEUCOCITOS:

Los glbulos blancos son una vital fuerza de defensa contra organismos extraos. Tambin funcionan como nuestro "aseo urbano" ya que limpian y eliminan clulas muertas y desechos tisulares que de otra manera se acumularan. Los leucocitos son clulas de forma redondeada mientras circulan en la sangre y adoptan formas muy variadas cuando salen de los vasos sanguneos y su dimetro oscila entre 6 y 18 m. Muchas infecciones estimulan a la mdula sea a liberar a la corriente sangunea grandes nmeros de leucocitos que normalmente estn en reserva, lo que se evidencia como un aumento en el nmero de clulas blancas en la sangre perifrica. Este incremento es fcilmente detectado con una simple hematologa y contribuye notablemente en una primera aproximacin diagnstica. Algunas clulas blancas pueden morir en el proceso de lucha contra una infeccin y sus cuerpos muertos se acumulan y contribuyen a formar una sustancia blanca que es comnmente vista en el sitio de una infeccin, llamada "pus". No todas las infecciones llevan a un incremento en el nmero de clulas blancas; el virus responsable por el SIDA conlleva a su reduccin, especficamente en el nmero de linfocitos y a una consiguiente minusvala en la habilidad para luchar contra otras infecciones. De acuerdo a su apariencia al microscopio luego de su tincin, existen 5 clases de leucocitos: granulocitos (neutrfilos, eosinfilos y basfilos), linfocitos y monocitos. NEUTROFILO: La principal funcin de los neutrfilos es la de detener o retardar la accin de agentes infecciosos o materiales extraos. Su propiedad

8 ms importante es la fagocitosis y son capaces de ingerir bacterias y pequeas partculas. En muchas oportunidades, cuando se trata de combatir infecciones bacterianas severas, pueden aumentar su nmero, ya que la mdula sea los libera en virtud de la emergencia, antes de terminar su maduracin. Los neutrfilos, adems de defender el organismo contra las infecciones, pueden ser dainos tambin, al liberar los componentes de sus grnulos txicos en diversos tejidos. EOSINFILOS: Los eosinfilos tienen una igual actividad motriz que los neutrfilos y aunque poseen propiedades fagocticas, participan menos en la ingestin y muerte de las bacterias. Un aumento en su nmero frecuentemente acompaa a reacciones alrgicas o procesos inmunolgicos, al igual que presencia de parasitos. BASFILOS : son los que tienen menos movilidad y menor capacidad fagoctica. Participan en reacciones de hipersensibilidad (picaduras). LINFOCITOS: El linfocito es una de las clulas ms intrigantes de la sangre humana y bajo ese nombre se engloban varios tipos diferentes de clulas linfoides, que encierran diferencias estructurales y funcionales an no bien esclarecidas. Las funciones del sistema linftico son en general la produccin de anticuerpos circulantes y la expresin de la inmunidad celular, refirindose esto ltimas al autorreconocimiento inmune, hipersensibilidad retardada, rechazo de los injertos y reacciones injerto contra husped. Dos tipos funcionalmente diferentes de linfocitos han sido descritos: los linfocitos T o timo-dependientes y los linfocitos B o mdula sea dependientes. Aproximadamente el 70 a 80% de los linfocitos en sangre perifrica muestran caractersticas de clulas T. Estos tienen una vida media de varios aos, as como una gran capacidad y velocidad para recircular entre la sangre y los tejidos. Tambin almacenan y conservan la "memoria inmunolgica" (clulas T de memoria). Adems, una vez activadas, son las clulas efectoras o ejecutoras (clulas asesinas) de la inmunidad celular y secretan sustancias

biolgicamente activas (linfoquinas) que sirven de mediadores solubles de inmunidad en la respuesta inflamatoria. MONOCITOS: Los monocitos son los grandes fagocitos mononucleares de la sangre perifrica. Son un sistema de clulas fagocticas producidas en la mdula sea, que viajan como tales por la sangre, para luego emigrar a diferentes tejidos como hgado, bazo, pulmones, ganglios linfticos, hueso, cavidades serosas, etc., para convertirse en esos tejidos en macrfagos libres o fijos, cuyas funciones se corresponden con lo que se conoce como sistema mononuclear-fagocitara. LAS PLAQUETAS O TROMBOCITOS:

Las plaquetas son fragmentos de citoplasma de megacariocitos, que circulan como pequeos discos en la sangre perifrica. En promedio, tienen un dimetro entre 1 a 4 m, su citoplasma se tie azul claro a prpura y es muy granular. No tienen ncleo y su concentracin normal en sangre perifrica es entre 150.000 y 450.000/l. Su duracin en circulacin es de 8 a 11 das Plaqueta, tambin denominada trombocito, fragmento citoplasmtico de un megacariocito (la clula de mayor tamao presente en la mdula sea), que se

10 encuentra en la sangre perifrica, donde interviene en el proceso de coagulacin de la sangre. Si se produce un dao a un vaso sanguneo, las plaquetas circulantes inmediatamente quedan atrapadas en el sitio de la lesin, formndose un tapn, primer paso en el control del dao vascular. Este mecanismo es suplementado por el sistema de coagulacin sangunea, el cual es el ms importante medio de defensa contra las hemorragias.

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GENERALIDADES OBJETIVO Establecer y estandarizar los procedimientos bsicos de un examen de hemograma, hemoglobina, hematocrito, recuento de plaquetas, velocidad de sedimentacin y recuento de reticulocitos que sirvan de ayuda diagnstica al clnico. CAMPO DE APLICACIN La aplicacin de las tcnicas hematolgicas nos sirve para estandarizar los procedimientos a nivel nacional y para que sea de utilidad al personal tcnico y profesional del Departamento de Patologa Clnica y Anatoma Patolgica del Hospital Sub Regional Andahuaylas. RESPONSABILIDADES

El Centro Nacional de Laboratorios en Salud Pblica, a travs de su Direccin

Ejecutiva de Laboratorios de Referencia, es responsable de autorizar la elaboracin, la revisin y la actualizacin del presente manual, de acuerdo con los procedimientos aprobados por el Instituto Nacional de Salud.

Los directores de los Hospitales y establecimientos de salud son responsables

de autorizar, proporcionar los recursos necesarios, y designar al personal responsable para la aplicacin de las disposiciones contenidas en el presente manual.

El personal de los Hospitales y establecimientos de salud es responsable de

planificar las acciones, organizar, controlar y capacitar al personal para cumplir las disposiciones contenidas en el presente manual.

Los jefes o responsables de los laboratorios deben asegurar el control interno

de la calidad, la idoneidad del personal, equipos, materiales, reactivos e instalaciones.

El personal mdico, profesional y tcnico, es responsable de seguir las

especificaciones contenidas en el presente manual y aplicar los procedimientos especficos indicados OBTENCIN DE MUESTRAS SANGUNEAS

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OBJETIVO Establecer y uniformizar criterios en el procedimiento de obtencin de muestras sanguneas con un adecuado control de calidad, ya que de ello depende que el resultado del anlisis de la muestra sea el correcto. Se efectuar en ayunas o no, dependiendo de la prueba a usar. OBTENCIN DE SANGRE VENOSA CON JERINGA Materiales y equipos requeridos Algodn. Alcohol al 70%. Ligadura o torniquete de 25 a 30 cm de largo. Jeringas de 5 mL. Viales con anticoagulante EDTA.
SELECCIN DEL SITIO DE PUNCIN

1. Asegrese que el paciente se ubique en una posicin segura y cmoda. 2. Nunca practique una puncin sangunea en un paciente que se encuentre de pie (La posicin de pie es inestable y en caso que el paciente pierda el conocimiento o se desmaye, ser mas difcil evitar que se lesione). 3. No elija una extremidad en donde est colocada algn tipo de venoclisis. 4. Inspecciones la vena que se va a puncionar. 5. Coloque el torniquete con suficiente tensin. No se exceda (Un torniquete muy apretado produce hemlisis, colapso venoso, dolor, etc.) 6. Si la vena no es muy visible ni palpable, realice un suave masaje en el antebrazo (si es el caso), con movimientos desde la mueca hacia el codo. 7. Observe siempre las dos extremidades superiores (brazos), para elegir el mejor sitio de puncin. 8. Al finalizar el procedimiento, indquele al paciente que debe hacer presin en el sitio punzado por lo menos durante cinco (5) minutos. Coloque finalmente una banda adhesiva sobre la herida de la puncin. 9. Si el sangrado no se detiene, aplique presin constante sobre la herida durante 10 minutos ms. Si el problema an no se soluciona, comunquese con sus superior inmediato o directamente con el medico tratante. 10. Deposite y destruya todo el material desechable en los recipientes diseados para este propsito.(Cajas Descartex).

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11. Asegrese de que los recipientes que contengan las muestras del paciente estn debidamente rotulados, marcados o identificados antes de atender a un nuevo paciente o realizar cualquier tarea. EN NIOS Seguir correctamente las indicaciones propuestas anteriormente. Realizar el procedimiento valindose de ayuda de compaeros (as) de trabajo. Sujetar firmemente el brazo del nio, aun cuando el pequeo paciente no oponga resistencia al procedimiento, usualmente los nios tienden a reaccionar bruscamente al someterlos a procedimientos de extraccin de sangre. Esta reaccin puede producir una herida mayor en el nio, como el rompimiento de la aguja dentro de la vena. EN RECIEN NACIDOS. Si la puncin de la vena del antebrazo del beb no es viable, se pueden recolectar muestras de sangre en la puncin del taln de uno de los pies. Debe sujetarse firmemente el pie del paciente, aplicar algo de presin en el taln del mismo y esperar a que haya congestin venosa evidente. Realizar la puncin con la lanceta estril desechable y recolectar las gotas de sangre en tubo, en capilar o simplemente colocarlas en una lamina portaobjetos, segn sean las necesidades. Es recomendable, en la medida que sea posible, que la madre del beb no presencie el procedimiento. QUE HACER SI UN PACIENTE PIERDE EL CONOCIMIENTO DURANTE EL PROCEDIMIENTO? Retire inmediatamente la aguja del lugar de la puncin. Sostenga al apaciente con fuerza para evitar que caiga y se golpee. Solicite ayuda. Coloque sobre la herida de la puncin, un apsito, algodn o gasa con sostenida presin, para evitar que siga sangrando. Puede acostarse al paciente en el suelo o en una camilla y deben levantarse sus piernas (Posicin de Trendelemburg). Coloque un algodn impregnado con alcohol frente a la nariz del paciente. Permita que el paciente tenga buena ventilacin. Abra el cuello de su camisa y desajuste la corbata si es el caso.

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El paciente por si solo sabr cuando podr incorporarse. Si las circunstancias lo permiten, haga medicin de la presin sangunea Obtencin de la muestra

Verificar que los elementos por utilizar estn listos, y que el paciente se sienta
cmodo.

Aplicar el torniquete aproximadamente cuatro dedos por encima de la flexin

del codo o a 10 cm del codo, sujetar con un medio nudo .

Limpiar la zona con alcohol al 70% o alcohol yodado, en un rea de 2

pulgadas

El paciente deber abrir y cerrar la mano durante unos segundos y despus la

mantendr cerrada, esto ayudar a visualizar las venas superficiales.

Se retira el estuche protector de la aguja y se coge la jeringa de tal manera

que el bisel se encuentre hacia arriba.

Se coloca la aguja en direccin paralela a la vena, se perfora la piel haciendo

avanzar la aguja 0,5-1 cm en el tejido subcutneo, luego se perfora la vena Se aspira la jeringa hasta el volumen requerido.

Retirar el torniquete e indicar al paciente que deje de hacer puo. Se coloca el

algodn seco encima de la puncin y se retira la aguja

Retirar la aguja de la jeringa. Verter la muestra lentamente por las paredes del
vial con anticoagulante. No olvidar colocar una gota en la lmina portaobjeto para realizar el frotis.

Agitar el vial en crculos sobre la mesa para homogeneizar la muestra con el

anticoagulante. OBTENCIN DE SANGRE DE LA VENA YUGULAR EXTERNA Materiales requeridos Algodn. Alcohol al 70%. Jeringas de 5 mL. Viales con anticoagulante EDTA. Obtencin de la muestra El paciente es cubierto por una sbana de manera que los brazos permanezcan inmovilizados a lo largo del cuerpo.

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Al paciente se le coloca de cbito dorsal sobre la mesa de examen o una camilla, de manera que la cabeza cuelgue sobre el final de la mesa y el cuerpo sea sujetado por un asistente. Cuando el paciente grita la vena yugular externa se marca claramente. Limpiar la zona en un rea de 2 pulgadas con alcohol al 70% o alcohol yodado. Retirar la aguja de la vena y presionar suavemente con un algodn seco, aproximadamente de 3 a 5 minutos. Pedir al paciente que permanezca echado diez minutos. Ventajas Constituye un buen mtodo para la obtencin de sangre en pacientes con shock con venas colapsadas. Desventajas Por lo delicado en su procedimiento no se recomienda como rutina, slo en casos en que no se pueda obtener la muestra por mtodos convencionales. OBTENCIN DE SANGRE CAPILAR Cuando la cantidad de sangre que se precisa es muy pequea o cuando por diferentes motivos no pueda practicarse una puncin venosa, debe recurrirse a la puncin capilar. Materiales requeridos Algodn. Alcohol al 70%. Lancetas desechables

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ANTICOAGULANTES
Una vez extrada la sangre, sta puede conservarse coagulada o mantenida incoagulable mediante la adicin de un anticoagulante. CARACTERSTICAS BSICAS DE LOS ANTICOAGULANTES MS USADOS EN HEMATOLOGA No alterar el tamao de los hemates. No producir hemlisis. Evitar al mximo la agregacin plaquetaria. No alterar la morfologa de los leucocitos. La sangre tratada con anticoagulante debe procesarse lo antes posible, incluso mantenida bajo refrigeracin (4 C) si no pasan de las 2 horas. El tiempo mximo entre la extraccin de la sangre y su procesamiento depende del coagulante de eleccin y no debe ser ms de 4 horas, a excepcin del anticoagulante EDTA (etilendiaminotetractico) que puede ser hasta 24 horas (en refrigeracin a 4 C). Los anticoagulantes pueden emplearse en forma slida o lquida. Los primeros estn indicados para la determinacin de los parmetros hematolgicos, ya que no producen, como los anticoagulantes lquidos, dilucin de la sangre. ANTICOAGULANTES SLIDOS EDTA Es la sal disdica o tripotsica del cido etilendiaminotetractico. La sal disdica (Na2EDTA) es menos soluble que la sal tripotsica (K3EDTA). Estos compuestos realizan su accin a travs de un efecto quelante sobre el calcio, al fijarlo impiden su activacin y, por ende, la coagulacin sangunea. Ventajas

17 Respeta la morfologa eritrocitaria (especialmente la sal tripotsica) y

leucocitaria, de manera que permite una demora de dos horas en la realizacin del frotis sanguneo despus de la extraccin sangunea.

Asegura la conservacin de los elementos formes sanguneos durante 24

horas si la sangre se mantiene a 4 C.

Al inhibir la aglutinacin de las plaquetas, facilita su recuento o su expresin

semicuantitativa a partir del frotis.

La concentracin recomendada de EDTA es de 1,5 mg/mL. de sangre. Una

mayor cantidad de anticoagulante puede producir retraccin celular, con disminucin del hematocrito, y un aumento de la concentracin media de la hemoglobina. Un exceso de sangre con relacin al anticoagulante produce formacin de microagregados que pueden alterar los resultados. El empleo de tubos al vaco con una gota (50mL) de EDTA tripotsica comercial para 5 mL de sangre es de inters prctico dado que es cien veces ms soluble facilitando la mezcla de sangre con anticoagulante. Desventajas Usado en exceso afecta a los eritrocitos y a los leucocitos, a los cuales les produce encogimiento y cambios en su forma, por ello debe cuidarse de agregar la cantidad correcta de sangre al anticoagulante. ANTICOAGULANTES LQUIDOS Citrato trisdico Es de eleccin para las pruebas de hemostasia y la velocidad de sedimentacin. Acta a travs de la precipitacin del calcio. La concentracin depende de la prueba por realizar.

Para pruebas de hemostasia se emplea en proporcin de 1: 9 (0,5 mL de

anticoagulante para 4,5 mL de sangre total).

Para la determinacin de la VSG (Velocidad de Sedimentacin Globular) es 1:4

(0,5 mL de anticoagulante para 2 mL de sangre).

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TINCIN DEL FROTIS SANGUNEO

La prctica del frotis sanguneo, tambin llamado extendido, es de gran importancia en hematologa ya que el diagnstico de muchas enfermedades hematolgicas puede realizarse con slo observar las caractersticas morfolgicas de las clulas sanguneas, de manera que ste no debe ser excesivamente grueso ni excesivamente fino. Todas las lminas por usar, sobre todo nuevas, deben ser limpiadas con algodn y alcohol al 70% para eliminar la grasa que viene adherida. MTODO DE LOS DOS PORTAOBJETOS Materiales - Alcohol al 70%. - Algodn. - Lanceta descartable. - Portaobjetos de vidrios limpios y desgrasados (25 x 75 mm). Fundamento Consiste en la extensin de una gota de sangre sobre un portaobjeto (25 x 75), empleando el canto biselado de otro portaobjeto de igual dimensin Procedimiento

Una vez extrada la sangre con cualquiera de las metodologas, se coloca una
pequea gota de sangre (5mL) (aprox. 3 mm de dimetro) sobre un portaobjeto a 2 cm aproximadamente de uno de los extremos.

19 Colocar el canto de otro portaobjeto esmerilado sobre la superficie del primer

portaobjeto (en la que se encuentra la gota de sangre) formando un ngulo de 45.

Deslizar suavemente y a velocidad moderada el portaobjeto sobre el otro en

sentido longitudinal, hasta que la gota de sangre quede bien extendida sobre la superficie del primer portaobjeto. El grosor del frotis sanguneo puede variar segn sea el ngulo que formen entre s ambos portaobjetos. As, si es superior a 45, la extensin obtenida ser gruesa y corta, si es inferior a 45 ser larga y fina. El secado del frotis es a temperatura ambiente y en posicin horizontal. Zona excesivamente gruesa: Se halla en la regin inmediata al punto de partida de la extensin (cabeza). En ella se aprecia siempre un aumento de linfocitos. Zona excesivamente fina: Corresponde al final de la extensin y termina en un rea donde las clulas adoptan una posicin acartonada (barbas). En esta regin existe un exceso de granulositos y monocitos. Zona ideal: Corresponde a la regin intermedia del frotis y en ella existe un reparto equilibrado de clulas.

COLORACIONES USADAS
de Romanowsky, constituido por la mezcla de eosina y azul de metileno. Dentro Una vez seco el frotis, se procede a la tincin hematolgica con el colorante de stas tenemos: Colorante de Giemsa. Colorante de May-Grunwald. Colorante de Wright. Colorante de Leishman. TINCIN CON COLORANTE DE WRIGHT Fundamento El colorante de Wright va a permitir suministrar un medio para estudiar la sangre y determinar las variaciones y anormalidades de estructura, forma y tamao de los eritrocitos, su contenido de hemoglobina y sus propiedades de coloracin. La informacin obtenida de un frotis de sangre perifrica depende en gran parte de la calidad del extendido y la coloracin. Materiales Colorante de Wright

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Frasco gotero. Solucin amortiguada tamponada Procedimiento

Una vez obtenido el frotis sanguneo, se le dejar secar entre 15 y 20 minutos. Luego se coloca la preparacin en un soporte y se cubre con el colorante de
Wright, dejndolo por espacio de 5 minutos.

Posteriormente se aade solucin amortiguada tamponada en partes iguales

hasta obtener un brillo metlico, dejando 6 minutos adicionales. Finalmente se lava con agua corriente y se deja secar.

Se coloca en el microscopio y, con pequeo aumento, se revisa la calidad de

la coloracin, la cantidad aproximada de glbulos blancos y se escoge el sitio para iniciar el recuento. Se coloca una gota de aceite de inmersin y se enfoca a un aumento de 100x

La forma de los glbulos rojos se examinar detenidamente observando

adems del color (cantidad de hemoglobina), presencia de plaquetas, su agrupacin y distribucin.

Posteriormente, se hace el recuento diferencial de glbulos blancos en 100

clulas, para lo cual se deber conocer las diferencias entre neutrfilos, eosinfilos, linfocitos y monocitos.

Una extensin de sangre bien teida debe caracterizarse por una buena
diferenciacin de las estructuras subcelulares en los leucocitos, una coloracin rosada de los hemates y la ausencia de precipitados. Los defectos ms frecuentes observados en la tincin del frotis sanguneo son: Coloracin excesivamente azul, debido a:

Frotis excesivamente grueso. Lavado insuficiente. Tincin muy prolongada. Empleo de colorante excesivamente alcalino.

Coloracin con una tonalidad rosada: El colorante, el tampn o el agua de lavado tienen un pH demasiado cido. Presencia de precipitados:

Obedecen a una accin excesiva del colorante. Esto se puede evitar con la filtracin.

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HEMOGRAMA-HEMOGLOBINA-HEMATOCRITO
El hemograma de Shilling constituye uno de los exmenes de laboratorio ms usados en el campo de la hematologa. Comprende las siguientes pruebas: RECUENTO LEUCOCITARIO Principio La sangre anticoagulada se deposita en un lquido que permite evidenciar los leucocitos, mantenindolos visibles, mientras que los eritrocitos son hemolizados. El recuento del nmero de leucocitos o glbulos blancos se expresa por mm3 (milmetro cbico). Equipos - Microscopio. - Hemocitmetro (Cmara de Neubauer). Consta de los siguientes elementos:

Una lmina portaobjeto gruesa, en el centro se hallan dos superficies

cuadriculadas iguales separadas del resto de la lmina por surcos y dos barras transversales algo ms elevadas.

Una laminilla cubreobjetos pticamente plana, que, al colocarse sobre las

barras elevadas de la lmina forma una cmara entre el cubreobjetos y la superficie cuadriculada.

La altura entre el cubreobjetos y la lmina portaobjetos es de 0,1 mm. Cada

cuadrcula mide 3 mm de lado y se divide en 9 cuadrados grandes. Cada uno de los cuales mide 1 mm2 de superficie, que se subdivide a su vez en 16 cuadrados medianos. El cuadrado grande central se divide en 25 cuadrados pequeos y cada uno de ellos en 16 cuadraditos. Cada cuadrado pequeo mide 0,2 mm de lado (0,04 mm2 de superficie), y cada cuadradito mide 0,05 mm de lado (0,0025 mm2 de superficie).

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Materiales y reactivos requeridos

Pipeta de glbulos blancos (de Thoma) o pipeta automtica (de 0 a 100 mL).
Presenta cerca del extremo superior una marca de 11, inmediatamente contina una dilatacin (bulbo) que contiene una perla que funciona como mezcladora, luego sigue el extremo ms largo de la pipeta (tallo) que est dividida en 10 partes, con 2 marcas: 1 (parte final del bulbo) y 0,5 (a la mitad del tallo). Se le acopla a su extremo superior 1 tubo de goma y una bombilla para aspirar. Diluyente de glbulos blancos: Solucin de Turk al 1%. Contador manual (Slo si fuera necesario). Papel filtro. Procedimiento

Una vez obtenida la sangre con anticoagulante o sangre capilar del

dedo, se procede a aspirar la sangre con la pipeta de glbulos blancos hasta la marca de 0,5 y a limpiar la punta con papel absorbente.

Introducir la pipeta en el tubo que contenga solucin de Turk y absorber

hasta la marca de 11 (no debe haber burbujas).

Tapar ambos extremos y proceder a mezclar manualmente o en un

rotador automtico por 2 3 minutos. Monte la laminilla de vidrio en la cmara para recuento que debe estar limpia y seca. Agitar la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luego colocar una gota pequea de esta solucin en la cmara. Deje reposar por espacio de 3 minutos para que las clulas se sedimenten. Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4 cuadrados grandes angulares.

Cuando se usa la pipeta automtica, se toma 20 mL (0,02 mL) de

sangre total con anticoagulante o sangre capilar con anticoagulante y se diluye en un tubo que contenga 380 mL de solucin de Turk (aqu tenemos una dilucin 1:20).

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La lectura se realiza en los campos 1, 3, 7 y 9 como est

indicado en la figura. Adems de los leucocitos contados dentro de cada uno de los cuadrantes, se deben contar todos los leucocitos que se encuentren adheridos en la lnea horizontal superior y vertical exterior, o de lo contrario, todos los leucocitos, adheridos a la lnea horizontal inferior y vertical interior. Resultados N de leucocitos x mm3 = leucocitos contados en 4 campos x 50 Valores de referencia 5000 - 10 000 leucocitos / mm3 Correccin de valores para restar eritrocitos nucleados Los normoblastos no se destruyen (lisis) en el lquido de dilucin, por lo tanto pueden observarse al realizar el recuento leucocitario y confundirse con los leucocitos, de tal manera que se debe emplear la siguiente frmula: Clculo: La concentracin del nmero de normoblastos (por litro) es: Nmero de normoblatos contados x concentracin o nmero de leucocitos 100 + N de normoblastos contados Ejemplo: Si se cuentan 50 normoblastos y la concentracin del nmero de leucocitos es 16 x 109/l, la concentracin del nmero de normoblastos ser:

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50 100 + 50 y la concentracin de leucocitos corregida ser: 16 - 5,3 = 10,7 x 109/l En unidades tradicionales las concentraciones de normoblastos y leucocitos se expresan por milmetro cbico. En tales unidades el clculo correspondiente al ejemplo que se ha dado sera: 50 100 + 50 Recuento corregido de glbulos blancos o leucocitos = 16 000 - 5300 = 10 700 / mm3 x 16000 = 5300/mm3 x 16= 5,3 x 109/l

RECUENTO DE GLBULOS ROJOS

Principio La sangre se diluye en un lquido que nos permite observar claramente los hemates, luego esta dilucin se coloca en una cmara de Neubauer con la ayuda de una pipeta automtica o pipeta Pasteur y se cuentan en el microscopio a un objetivo de 40x para calcular el nmero de glbulos rojos por mm3. Equipos - Microscopio. - Hemocitmetro (cmara de Neubauer). Materiales y reactivos requeridos Pipeta de glbulos rojos (De Thoma) o pipeta automtica (de 0-100 mL).

Presenta cerca del extremo superior una marca de 101, inmediatamente

contina una dilatacin (bulbo) que contiene una perla roja mezcladora, luego sigue el tallo (extremo ms largo), el cual est dividido en 10 partes con 2 marcas: 1 acabando el bulbo y 0,5 a la mitad del tallo. Se requiere igual que el recuento de leucocitos una boquilla para aspirar. Diluyente de glbulos rojos: Cloruro de Sodio al 0,9% Diluyente de Hayem Contador manual (slo si fuera necesario). Papel filtro. Procedimiento Mezclar la sangre obtenida con el anticoagulante o tomar sangre capilar.

25 Llenar la pipeta de glbulos rojos con sangre hasta la marca de 0,5 para
realizar una dilucin de 1/200, y si se carga hasta 1, la dilucin ser 1/100. Limpiar la punta con gasa o papel absorbente. Introducir la pipeta en el tubo o frasquito conteniendo diluyente (Hayem) y llenar de lquido de dilucin hasta la marca de 101.

Se coloca en un rotador automtico o se hace rotar manualmente de 2 a 3

minutos.

Agitar bien la pipeta y descartar 3 a 4 gotas del tallo, luego colocar una gota
pequea cerca de un extremo de la cmara para que por capilaridad se llene exactamente. Hacer el recuento con objetivo de 40x.

Se puede realizar con la pipeta automtica, se toma 20 mL (0,02mL) de sangre

total con anticoagulante, o sangre capilar y se deposita en un tubo de 12 x 75 que contenga 4 mL de solucin de Hayem (aqu se tiene una dilucin de 1:200). Se deja reposar aproximadamente 5 minutos y se procede a cargar la cmara con la misma pipeta usando un nuevo tip. El inconveniente aqu es el gasto de reactivo (4 mL) pero las medidas son mas exactas. Dejar en reposo por 3 minutos.

Enfocar la cuadrcula a 10x, luego con el objetivo de 40x contar sobre el

cuadrado grande central de la cmara slo en 5 cuadrados pequeos: uno central y cuatro angulares (80 cuadraditos en total).

En el recuento se incluyen las clulas que cubren o tocan por dentro o por
fuera las lneas limitantes superior e izquierda en el cuadradopequeo de recuento y no se consideran los correspondientes a los lmites inferior y derecho.Se hace el recuento en los puntos ABCD y E y se sigue los mismos parmetros del recuento de leucocitos.

26

Resultados N de hemates x mm3 = hemates contados en 5 cuadrados pequeos altura x dilucin X rea Reemplazando = hemates contados en 5 cuadrados pequeos 1/10 x 1/200 x 1/5 = hemates contados en 5 cuadrados pequeos 1/10 000 = hemates contados x 10 000 Valores de referencia (Unidades tradicionales millones de clulas/mm3). Hombres 4 500 000 - 5 500 000 Mujeres 4 000 000 - 5 000 000 Nios (4 aos) 4 200 000 - 5 200 000 Lactantes (1 - 6 meses) 3 800 000 - 5 200 000 Recin nacidos 5 000 000 - 6 000 000

DETERMINACIN DEL VOLUMEN GLOBULAR (Hematocrito)

Mide la fraccin que comprende a los glbulos rojos (masa globular), respecto al volumen total de la muestra de sangre venosa o capilar. Puede expresarse en porcentaje o como valor decimal. Hto = altura de la columna de glbulos rojos altura de la columna de sangre total (glbulos rojos ms plasma)

27
Mtodo de Wintrobe Materiales requeridos: - Tubo de Wintrobe graduado de 0 - 100 mm. - Pipetas Pasteur o pipetas de transferencia. - Tapn de goma. Procedimiento:

Llenar la sangre extrada con anticoagulante con una pipeta pasteur,

comenzando desde el fondo hasta la marca superior de 100 mm, teniendo cuidado de no provocar espuma. Tapar el tubo con un tapn de goma para evitar la evaporacin.

Centrifugar a 3000 rpm por 30 minutos.

Resultados (lectura): Del tubo graduado se mide directamente el nivel de la columna de glbulos rojos. Valores de referencia: Hombres : 40% - 54% Mujeres : 38% - 48% Mtodo de microhematocrito Materiales requeridos: - Capilares rojos y azules (75 mm x 1,5 mm). - Plastilina. Procedimiento:

Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del pulpejo del

dedo, o utilizar capilares azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante de Wintrobe o EDTA. Debe llenarse aproximadamente 70% 80% del capilar.

Ocluir (tapar) un extremo del capilar con plastilina. Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de una centrfuga de
microhematocrito, con el extremo ocluido adherido al reborde externo de la plataforma. Centrifugar por 5 minutos entre 10 000 - 12 000 rpm. Resultados (lectura) La lectura se realiza con una escala estandarizada que expenden en el comercio. Uso de la escala:

Sostenga el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna de

eritrocitos (no el extremo inferior del tubo) quede exactamente al mismo nivel de la lnea horizontal correspondiente al cero.

28 Desplace el tubo a travs de la escala hasta que la lnea marcada con el

nmero 1,0 quede al nivel del tope de la columna de plasma. Vigile que el fondo de la columna de eritrocitos contine sobre la lnea cero. El tubo debe encontrarse completamente en posicin vertical.

La lnea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicar la

fraccin de volumen de stos. Valores de referencia: Hombres 40% - 50% Mujeres 38% - 44% Nios (5 aos) 38% - 44% Lactantes (3 meses) 37% - 42% Recin nacidos 50% - 58%

La disposicin celular es: Parte superior, una columna de plasma.

En la interfase estn los leucocitos y plaquetas. Parte inferior est la columna de eritrocitos CONSTANTES CORPUSCULARES VOLUMEN CORPUSCULAR MEDIO (V.C.M)
Para conocer las dimensiones, el espacio de los eritrocitos, no basta la determinacin del tamao de los hemates por la medicin microscpica de su dimetro, dada la morfologa discoidea de ests clulas y las variaciones de unas a otras. V.C.M = Valor Hematocrito (en ml/1000) Hemates(en millones/mm cbicos) El resultado expresado en micrones cbicos, oscila normalmente entre 80 y 94 ; volumen corpuscular normoctico

29
Resultados: Valores superiores a 94 se observan en las anemias macrocticas, inferiores a los 80 en las microcticas. Ejemplo: Volumen globular : 39.2% Recuento eritrocitos: 3 600,000 Volumen Corpuscular Medio= 39.2 X100 = 109 u3 36 CONTENIDO HEMOGLOBINICO DE LOS HEMATIES (ndice Calorimtrico) (valor globular) V.G. = Hb 2x E Hemoglobina en porcentaje E = Recuento de eritrocitos por m.m cbico Resultados: V. G normal es 1, con oscilaciones entre o.9 y 1.1 Un V:G bajo, inferior a 0.9 se observa en anemias hipocromas Alto, superior a 1.1 se observa en las hipercromas, perniciosa, etc. Ejemplo: Hemoglobina : 90% Eritrocitos = 4500,000 Indice colorimtrico = 90 = 1 90 Hemoglobina corpuscular Media (M.C.H.) Mide la proporcin real de la hemoglobina que corresponde, por trmino medio a cada hemate en cifras absolutas H.C.M. = Resultado: Normal es 29.5 con lmites de 27 y 32 Ejemplo: Hemoglobina : 15% Recuento eritrocitos : 5000,000 Hemoglobina Corpuscular Media = 15 x 100 = 30 uug 50 Hb (en grs/1000ml) E (en millones/mm3)

30
Concentracin Corpuscular media de Hemoglobina ( M.C.H.C) C.C.M.H = Hb ( en gr/100 ml) X 100

Hematocrito(en ml/100ml) Resultado: Concentracin normal es de 35%, con lmites de 35 y 38 %. Se considera hipocromas las anemias cuya concentracin corpuscular de Hb es inferior a 30. Ejemplo: Hemoglobina : 15% Volumen globular : 45% C.H.C.M = 15 X 100 = 33 % 45 Relacin entre los valores Normales del Volumen Globular por el Hematocrito Hematocrito 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 4.5 46 47 48 No Hemates 2 200,000 2 310,000 2 420,000 2 530,000 2 640,000 2 750,000 2 860,000 2 970,000 3 080,000 3 190,000 3 300,000 3 410,000 3 520,000 3 630,000 3 740,000 3 850,000 3 960,000 4 070,000 4 180,000 4 290,000 4 400,000 4 510,000 4 620,000 4 730,000 4 840,000 4 950,000 5 000,000 5 060,000 5 170,000 5 280,000 Hb % 44 46 48 50 52 54 56 58 60 63 66 68 70 73 75 77 79 81 84 86 88 90 92 95 97 99 100 101 103 105 Hbg% 6.80 7.10 7.40 7.72 8.03 8.35 8.65 8.95 9.38 9.75 10.1 10.3 10.8 11.25 11.58 11.88 12.2 12.5 12.97 13.27 13.6 13.9 14.2 14.62 15.0 15.24 15.40 15.55 15.86 16.17

31
49 50 5 390,000 5 500,000 108 110 16.63 16.94

DOSAJE DE HEMOGLOBINA: Es el componente principal de los glbulos rojos, es una protena conjugada que sirve de vehculo para el transporte de O2 y CO2. Se aumenta en hemoconcentracin, en estados de shock, quemaduras, por diarrea, vomito y poliglobulina primaria.
METODO CIANMETAHEMOGLOBINA

Principio La sangre se diluye en lquido de Drabkin, el cual hemoliza los hemates y convierte la hemoglobina en cianometahemoglobina (cianuro de hemiglobina). La solucin que se produce se lee por medio de un espectrofotmetro o fotocolormetro. Su grado de absorbancia es proporcional a la cantidad de hemoglobina que contenga la sangre. Materiales y reactivos Un colormetro fotoelctrico o un espectrofotmetro. Pipetas:

Una pipeta para sangre (pipeta de Sahli) graduada hasta 0,02 mL, con tubo de
goma y boquilla.

Una pipeta de vidrio graduada de 5 mL.

32
Tubos de ensayo. Reactivo de Drabkin para dilucin.

Este reactivo se adquirir preparado en los laboratorios de la capital y se

desecha cuando se enturbia, se debe guardar en frascos de color oscuro.

En las soluciones de referencia comerciales casi siempre indica la

concentracin en miligramos por 100 mL (generalmente en mg%).

Se preparan diluciones con reactivo de Drabkin de tal manera que los patrones
contengan concentraciones de 60 mg, 40 mg, 20 mg de CNHi. Leer los tubos en absorbancia con filtro verde a 540 nm, llevando el fotmetro a cero con el reactivo de Drabkin.

Para calcular la concentracin de hemoglobina en cada tubo, realizar el

siguiente clculo:

Hb en g/100 mL =
1000

PxD

P = Concentracin del patrn.

D = Dilucin de la muestra de sangre, que es 251 veces.

Para una concentracin de patrn de : 60 mg 15 g/100 mL 40 mg 10 g/100 mL 20 mg 5 g/100 mL Luego graficar una curva patrn colocando en el eje de las ordenadas las lecturas en absorbancia y en la abcisa la concentracin de hemoglobina en g/100 mL. Calibracin del colormetro

Antes de usar el colormetro para calcular la hemoglobina se debe elaborar una

curva de calibracin. Con esta curva se puede preparar un grfico y un cuadro de valores de hemoglobina.

En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 mL de reactivo de Drabkin. La sangre que puede utilizarse es de puncin del dedo (sangre capilar) o de
sangre venosa recin extrada.

Con una pipeta automtica o pipeta de Salhi se toma exactamente 0,02 mL (20
mL) de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta y se vierte en el tubo que contenga reactivo de Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla. Dejar en reposo por espacio de 5 a 15 minutos.

33 Leer en absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a cero el fotmetro con
agua destilada / Drabkin. Resultados La lectura en absorbancia del problema debe ser comparada en la curva patrn para encontrar a que concentracin de hemoglobina corresponde expresndose en g/100 mL. Valores de referencia: Nios al nacer 13,6 - 19,6 g/dL Nios de 1 ao 11,3 - 13,0 g/dL Nios de 10 -12 aos 11,5 - 14,8 g/dL Mujeres 11,5 - 16,5 g/dL Hombres 14,0 - 18,0 g/dL

FROTIS DE SANGRE PERIFRICA

Se debe considerar lo siguiente: Calidad del frotis Debe abarcar 80% de la lmina con cabeza, cuerpo y cola. Extensiones gruesas dificultan la visualizacin e identificacin celular, mientras que las delgadas originan una distribucin anormal de los elementos. Eritrocitos Se estudia su tamao, forma, color y si existen inclusiones o elementos extraos como se ver ms adelante. Plaquetas Estudiar tanto cualitativa como cuantitativamente, debiendo observarse de 3 a 10 plaquetas aproximadamente por 100 glbulos rojos o varias plaquetas y grupos ocasionales por campo. Visto con objetivo de inmersin, no debe existir menos de una plaqueta por campo. FRMULA LEUCOCITARIA

34
La frmula leucocitaria tiene por objetivo determinar los porcentajes de las distintas clases de leucocitos normales y anormales en la sangre. A partir de los porcentajes puede incluso calcularse el nmero real de cada clase de leucocitos por mm3 de sangre (valor absoluto), conocindose el total de leucocitos. Por ejemplo: Si se tiene 60% de neutrfilos segmentados y el recuento total de leucocitos total es de 20 000, entonces la cifra absoluta de neutrfilos segmentados sera: 60/100 x 20 000 = 12 000 (valor absoluto) Valores de referencia absolutos de neutrfilos segmentados = 3000 - 5000 Conclusin: Los valores relativos slo nos sirven cuando los valores totales de leucocitos se encuentran dentro del valor normal. En caso contrario (leucocitosis o leucopenia) se debe emplear la frmula para obtener el valor real, y as determinar que elemento celular se encuentra fuera del rango normal, sea elevado o disminuido. Procedimiento

Se examina la lmina a pequeo aumento para comprobar si los elementos

celulares estn bien distribuidos.

Si es favorable se examina con el objetivo de inmersin. La parte ideal para

visualizar clulas para la frmula leucocitaria es en la parte final del cuerpo y comienzos de la cola, recorriendo la lmina de izquierda a derecha o de arriba hacia abajo hasta contar 100 leucocitos incluidos los agranulocitos y granulocitos. Aqu no se incluyen los elementos inmaduros de sangre roja.

A medida que se va contando, se va anotando el nmero de cada una de las

clases de glbulos blancos observados.

Se determina luego los porcentajes de cada uno de ellos para luego comparar
con los porcentajes normales.

Si se tiene en el recuento de leucocitos valores por encima de 10 000 y por

debajo de 5000 se debe repetir el recuento. VALORES RELATIVOS (%) VALORES ABSOLUTOS LEUCOCITOS Neutrfilos segmentados Neutrfilos abastonados Eosinfilos Basfilos Monocitos Linfocitos 55-65 3-5 0,5-4,0 0-0,5 4-8 25-35 3000-5000 150-400 20-350 10-60 100-500 1500-4000

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VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN La velocidad de sedimentacin es un examen hematolgico que no est incluido en el desarrollo de un hemograma; sin embargo, es una prueba muy importante por su gran sensibilidad, pues resulta normal en las enfermedades funcionales, as como en los procesos inactivos o estrictamente locales. MTODO DE WESTERGREN Fundamento Este examen mide la tendencia de los eritrocitos a sedimentar, al colocar sangre anticoagulada en un tubo en posicin vertical. Se lee macroscpicamente la columna de plasma al cabo de una hora de reposo. Materiales - Tubos de Westergren. - Soporte para tubos de Westergren. Procedimiento

En un tubo que contiene 0,5 ml de anticoagulante citrato de sodio al 3,8% se

extrae sangre venosa, se mezcla mediante movimientos rotatorios sobre una superficie lisa.

Se vierte mediante una pipeta Pasteur o una jeringa de metal en el tubo de

Westergren, el cual tiene una graduacin de 0 a 200 mm de arriba hacia abajo y presenta ambos extremos abiertos.

La sangre debe llenarse hasta la marca cero, se coloca en posicin vertical

sobre una gradilla especial que obtura ambos extremos. Resultados Medir los milmetros descendidos de glbulos rojos mediante la columna de plasma por encima del paquete globular. Valores de referencia Hombres : 1 - 10 mm de altura/hora Mujeres : 3 - 14 mm de altura/hora MTODO DE WINTROBE Fundamento Al igual que el mtodo de Westergren, este mtodo mide la tendencia de los eritrocitos a la sedimentacin al colocar sangre anticoagulada en un tubo pequeo. Se lee la columna de plasma al cabo de una hora de reposo. Procedimiento El mismo que para el mtodo de Westergren.

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Resultados Medir los milmetros descendidos de glbulos rojos mediante la columna de plasma por encima del paquete globular. Valores de referencia Hombres : 0 - 5 mm/hora Mujeres : 0 - 10 mm/hora

PERFIL DE HEMOSTASIA
PRINCIPIOS GENERALES

Cuando se realizan pruebas de hemostasia se debe considerar los cuidados

comunes a toda prueba de laboratorio. Entre estos tenemos:

Uso de anticoagulantes indicados: El tipo y la proporcin del anticoagulante

deben ser evaluados para cada muestra.

Luego de centrifugar la sangre, el plasma obtenido es activado por contacto

con el vidrio. Esto puede alterar algunas pruebas, por ello se sugiere usar recipientes de superficies no humedecibles, como el plstico o el vidrio siliconizado.

El material debe estar escrupulosamente lavado, ya que residuos de protenas

pueden contener sustancias tromboplsticas.

37 El material de vidrio debe lavarse tres veces con detergente y luego ser puesto
en mezcla sulfocrmica por lo menos durante seis horas, luego debe enjuagarse con agua destilada varias veces.

Las pruebas deben realizarse lo antes posible y, si hay demora, las muestras
se podrn en congelacin a 4 C.

Las pruebas se realizan siempre en duplicado y usando controles. Las

muestras controles sern obtenidas usando la misma tcnica empleada para obtener las muestras problema (pool de plasmas) o en forma comercial. MECANISMO DE COAGULACIN Didcticamente podemos dividir el mecanismo de activacin de la coagulacin en tres etapas:

La generacin de la tromboplastina o activador de la protrombina (primera fase

de la coagulacin sangunea). La generacin de la trombina (segunda fase de la coagulacin sangunea). La formacin de la fibrina (tercera fase de la coagulacin sangunea). EXPLORACIN DE LA COAGULACIN INTRODUCCIN La exploracin global de la coagulacin sangunea puede realizarse mediante varias pruebas que miden el tiempo que tarda en coagular la sangre o el plasma. No sirve para el diagnstico del dficit de un factor en particular, pero suministra una idea general sobre el estado de la va intrnseca y de la va comn. Para ello existe un conjunto de principios elementales y comunes a todas las tcnicas que es preciso conocer para evitar errores en las determinaciones. Limpieza del material de vidrio Las pipetas y los tubos de hemlisis deben estar muy limpios. Los restos de detergente o de plasma influyen sensiblemente en el anlisis. Disolucin y conservacin de los reactivos Para disolver los reactivos debe emplearse agua bidestilada procurando no agitar (evitar la formacin de espuma y burbujas). Cuando se emplee plasma control, el tiempo indicado por las diferentes firmas comerciales debe ser respetado. Los reactivos que deben conservarse a unos 4 C se guardarn en la nevera. Si existe algn tiempo de caducidad, ste viene siempre indicado en el lote correspondiente. Asimismo, la estabilidad de los reactivos una vez disueltos est indicada en cada una

38
de las correspondientes metodologas de trabajo. Antes de su empleo, los reactivos deben estabilizarse a la temperatura indicada en la normativa correspondiente. OBTENCIN DEL PLASMA A una parte de citrato trisdico estril 0,1 mol/L se le aade nueve partes de sangre (1/10). La puncin debe ser directa en la vena. No debe aspirarse violentamente para evitar la formacin de espuma y con ello la existencia de un cierto grado de hemlisis, lo que hara inservible el plasma para la realizacin de las diferentes pruebas. Una vez extrada la sangre, se centrifuga durante 15 minutos a 3500 rpm. El plasma sobrenadante se trasvasa cuidadosamente a otro tubo de hemlisis y puede conservarse hasta cuatro horas a 4 C antes de su utilizacin. Tiempo de incubacin El tiempo de incubacin del plasma con los reactivos correspondientes debe ser muy exacto y la temperatura siempre a 37 C. Cuando no se empleen mtodos automatizados, el tiempo se medir mediante un cronmetro, el cual debe dispararse simultneamente con la adicin del reactivo y pararse en el instante en que se inicia la coagulacin. Causas de error En la obtencin del plasma Estasis venosa prolongada. Favorece la fibrinlisis local. Puncin venosa inadecuada. Dilucin errnea del plasma. Proporcin de sangre-anticoagulante inexacta.

Esta proporcin (una parte de citrato trisdico + nueve partes de sangre) debe
mantenerse con toda exactitud. Tiempo de centrifugacin inadecuado. Presencia de hemlisis en el plasma.

Conservacin prolongada del plasma antes de realizar la prueba. Ello conduce

a un descenso de la actividad de los factores lbiles (V y VIII) y, por tanto, el plasma debe ser analizado dentro de las dos o cuatro horas de practicada la extraccin. En la realizacin de la tcnica Errores de pipeteo. Empleo de los reactivos inadecuados o caducados.

Empleo de los reactivos mal preparados.

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Empleo de una temperatura inadecuada. Tiempos de incubacin inexactos. Empleo de agua no destilada.

TIEMPO DE SANGRA:
Mtodo de Ivy. Mtodo de Duke. Mtodo de Duke Con una lanceta se hace una pequea incisin en el lbulo de la oreja. La sangre fluye por esta incisin y se mide el tiempo que transcurre hasta que se detiene el sangrado. Este ensayo se lleva a cabo: Para diagnosticar ciertos padecimientos hemorrgicos. Antes de realizar operaciones quirrgicas.

Antes de efectuar una puncin en el hgado o el bazo.

Materiales Una lanceta estril. ter. Filtro de papel (o papel secante). Si es posible, un cronmetro o, en su lugar, un reloj con segundero. Mtodo 1. Limpie con suavidad el lbulo de la oreja utilizando una pieza de algodn embebida en ter. No frote. Djese secar

2. Haga la incisin en el lbulo de la oreja con cierta profundidad, al mismo tiempo cronometrar. La sangre deber fluir libremente sin que se necesite exprimir el lbulo de la oreja

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3. Despus de 30 segundos. Recoja la primera gota de sangre en una esquina del papel secante. No toque la piel con el papel

4. Espere otros 30 segundos y recoja la segunda gota de sangre con el papel secante, un poco ms adelante de la primera

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5. Cuando las gotas de sangre dejen de fluir, detener el cronmetro (o anote el tiempo transcurrido segn el reloj, o contar el nmero de gotas recogidas en el papel secante y multiplicarlo por 30 segundos)

Resultados Comunique el tiempo de sangrado redondendolo al medio minuto ms cercano. Observaciones Si el tiempo de sangrado se prolonga examine una extensin de sangre teida segn el mtodo de Romanowski para observar si las plaquetas son escasas. Interpretacin del resultado El valor de referencia del tiempo de sangra segn este mtodo es de 1 a 4 segundos. TIEMPO DE COAGULACIN DE SANGRE TOTAL (TCST): Mtodo de LeeWhite Principio Se observa la formacin del cogulo en tubos de vidrio en condiciones estandarizadas; esta prueba mide el mecanismo intrnseco de la coagulacin. Materiales Un bao mara a 37 C, o un matraz al vaco, con agua a la misma temperatura. Dos tubos de ensayo limpios, de 10 x 75 mm, del mismo calibre, marcados en el nivel de 1 mL. Un cronmetro. Utensilios y materiales para puncin venosa.

42

Mtodo 1. Mediante una jeringa de material plstico extraiga poco ms de 3 mL de sangre venosa, puncione la vena rpidamente, de la manera adecuada. Cronometrar el tiempo desde el momento que la sangre entre a la jeringa

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2. Llenar cada uno de los tubos de ensayo con 1 mL de sangre. Taponar con parafilm. Colocar en bao mara a 37 C

3. Despus de 3 a 5 minutos sacar el primer tubo del bao mara. Inclinar hacia un plano de 90 en rotacin a intervalos de 30 segundos hasta que la sangre coagule (la sangre no fluye cuando el tubo est en posicin horizontal 4. Examine el segundo tubo inmediatamente despus que haya coagulado la sangre del primero, lo que por lo general es inmediato. Cronometrar. Se notifica como tiempo de coagulacin la media de los dos tubos.

Resultados El tiempo normal de coagulacin en tubo es de 5 a 15 minutos a 37 C. Interpretacin

44 El tiempo de coagulacin est prolongado cuando hay severa deficiencia de

todos los factores de coagulacin, excepto en la trombocitopenia y deficiencia de factor VII o XIII. Tambin est prolongado en presencia de heparina o anticoagulantes circulantes endgenos. Un tiempo de coagulacin normal no excluye un desorden de la hemostasia.

Es una prueba muy poco dolorosa y es prolongada apenas cuando la

deficiencia es severa. El factor deficiente puede estar a 5% de lo normal sin afectar la prueba. TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (PTTK) Principio Esta prueba mide la fase intrnseca de la coagulacin, en presencia de una tromboplastina parcial (cefalina), la cual sustituye la accin del factor plaquetario tres. Se obtiene mximo efecto de contacto por la adicin del kaoln. Materiales: Plasma citratato del paciente. Plasma citratado control. Cefalina kaoln (comercial). Cloruro de calcio 0,025 M. Pipetas automticas de 0,1 mL. Cronmetro. Mtodo: Precalentar el cloruro de calcio a 37 C en bao mara por 5 minutos. En un tubo de 12 x 75 mm a 37 C, aadir 0,1 mL de plasma y 0,1 mL de la solucin de cefalina kaoln previamente agitada. Accionar el cronmetro. Agitar. Incubar a 37 C por 10 minutos. Aadir 0,1 mL de cloruro de calcio (Ca Cl2). Accionar el segundo cronmetro. Agitar los tubos suavemente a intervalos de 10 segundos, hasta 30 segundos, y Agitar rpidamente hasta la formacin del cogulo. Anotar el tiempo. Estudiar el plasma del paciente y control por duplicado. Varias pruebas pueden ser realizadas simultneamente a intervalos de dos minutos. Resultados Se anota el tiempo que tarda en coagular. Interpretacin El PTTK es una prueba importante de despistaje, detectando las deficiencias ms insignificantes (debajo de 25% de los niveles normales) de los factores

45
XII, XI, IX, VIII, X, V. Esta prueba es mucho ms sensible que el TCST para la deteccin de estas deficiencias. Su utilidad ms importante es en la deteccin de las deficiencias congnitas de los factores VIII y IX. No detecta deficiencias del factor plaquetario tres y factores VII y XIII. Esta prueba est alargada tambin en presencia de heparina. Valores de referencia De 30 a 45 segundos. Observacin En el mercado existen varios preparados comerciales. Si se utiliza cualquiera de estos preparados, seguir estrictamente las indicaciones del fabricante.

TIEMPO DE TROMBINA
Principio Mide el tiempo durante el cual el fibringeno presente en el plasma se transforma en fibrina por la adicin de una cantidad estandarizada de trombina. Explora la ltima fase de la coagulacin con excepcin del factor XIII. Material Plasma citratato del paciente. Plasma citratado control. Trombina en solucin salina 0,9% diluir con 6 mL. Cronmetro. Mtodo Colocar en un tubo de 12 x 75 mm en bao mara a 37 C 0,2 mL de plasma. Incubar un (1) minuto. Aadir 0,1 mL de trombina y poner en marcha el cronmetro. Medir el tiempo de coagulacin. Hacer igual con plasma control normal (ambos por duplicado). Resultados Se anota el tiempo que tarda en coagular. Interpretacin Son causas comunes de prolongacin del tiempo de trombina: presencia de heparina o aumento de los productos de degradacin del fibringeno/fibrina, hipofibrinogenemia, disfibrinogenemia o presencia de una paraprotena que interfiera con la polimerizacin del fibringeno. Valores de referencia De19 2 segundos.

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En los casos en que se desea demostrar si existe exceso de heparina se realiza el tiempo de trombina con adicin de sulfato de protamina. TIEMPO DE PROTROMBINA (Prueba de Quick) Principio Mide el tiempo que tarda en coagular una muestra de plasma, desprovisto de plaquetas y anticoagulado con citrato sdico, al ponerlo en contacto con una suspensin de tromboplastina clcica (sustituto de la tromboplastina tisular fisiolgica). El resultado se da en porcentaje referido al de un plasma testigo. Segn la relacin: INR = RISI En la que R = Tiempo de Quick muestra Tiempo de Quick testigo La prueba de Quick tambin se conoce con el nombre de tiempo de protrombina, explora la va extrnseca y comn de la coagulacin en las que intervienen los factores I (fibringeno), II (protrombina), V, VII y X. Es una prueba de gran inters y muy utilizada con fines de screening, diagnstico y control del tratamiento con anticoagulantes orales. Materiales Plasma citratado del paciente. Plasma normal de control. Pipetas de 0,1 mL y 0,2 mL. Cronmetro. Mtodo El tubo conteniendo la tromboplastina clcica (Ortho) debe ser incubado a 37 C (dependiendo del volumen 5 a 10 minutos). En un tubo de 10 x 75 mm aadir 0,1 mL de plasma del paciente. Incubar a 37 C por 1 2 minutos. Aadir 0,2 mL de tromboplastina previamente calentada en el tubo con el plasma del paciente; simultneamente, disparar el cronmetro. Mover el tubo para mezclar los reactivos. Dejar el tubo en reposo a 37 C por aproximadamente 8 10 segundos. Remover el tubo del bao mara y mover el tubo por inclinacin hasta que el cogulo se forme. Anotar el tiempo. Repetir duplicado del paciente y control. Resultados Se anota el tiempo que tarda en coagular. Interpretacin El tiempo de protrombina es expresado en segundos con el valor del control

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(cada cual es la media de pruebas duplicadas). El valor del control (y paciente) depende de la tromboplastina y de la concentracin del citrato y hematocrito. Un tiempo de protrombina prolongado indica deficiencia de los factores II, V, VII o X tambin est prolongado en la hipofibrinogenemia y heparinemia. El tiempo de protrombina es utilizado como una prueba de despistaje y tambin como control para pacientes anticoagulados con drogas antagonistas de la vitamina K. Valores de referencia 12 a 14 segundos.

RECUENTO DE RETICULOCITOS Y PLAQUETAS

RECUENTO DE RETICULOCITOS Los reticulocitos son glbulos rojos inmaduros formados por ARN y protoporfirina en el citoplasma. Fundamento Los reticulocitos contienen una fina red de ARN y protoporfirina que se puede teir con el azul de cresil brillante. Este colorante en combinacin con una misma cantidad de sangre anticoagulada se mezcla y con la ayuda de la temperatura (bao mara) se produce la coloracin de estos eritrocitos jvenes visualizndose en los frotices sanguneos por microscopa.

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Materiales Lminas portaobjetos. Tubos de ensayos de 12 x 75 mm. Embudo. Filtro de papel. Pipetas Pasteur con chupones. Contador manual (no imprescindible). Solucin saturada de azul de cresil brillante (filtrada). Procedimiento En el tubo de ensayo colocar dos gotas de sangre total con anticoagulante. Inmediatamente adicionar con la ayuda de una pipeta Pasteur la misma cantidad de colorante. Mezclar la solucin. Se coloca luego en bao mara por espacio de 10 a 15 minutos. Se realizan frotices sanguneos. Se lee con objetivo de 100x. Resultados Examine por lo menos 100 eritrocitos con el objetivo de inmersin. Cuente cuidadosamente: Cantidad total de glbulos rojos. Nmero total de reticulocitos que haya entre ellos. El recuento se ha venido haciendo clsicamente de forma manual mediante la observacin en el microscopio ptico. El resultado se da en porcentaje sobre cada 100 hemates. Es ms til calcular el nmero de reticulocitos por litro, mediante la frmula: Reticulocitos/L = % reticulocitos x nmero hemates/L 100 Observacin En la actualidad existe la posibilidad de hacer el recuento rutinario de forma automtica, mediante aparatos especficamente diseados al respecto, bien a travs de adaptaciones de los clsicos autoanalizadores para hemogramas. En estos casos se puede conocer, adems, las distintas proporciones de reticulocitos segn su grado de maduracin, su volumen medio y el ndice de maduracin. Valores de referencia Adultos 0,5 - 1,5% Al nacer 2,5 - 6,0% Causas de aumento

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El nmero de reticulocitos aumenta en todas las circunstancias en las que existe un incremento de la eritropoyesis, tales como en la hemlisis, como respuesta a angrados o tras el inicio de un tratamiento antianmico que ha resultado eficaz. Causas de disminucin Como la produccin de reticulocitos es necesaria para compensar las prdidas fisiolgicas de glbulos rojos maduros, una disminucin de su nmero es la expresin de un estado arregenerativo o hiporregenerativo de la serie roja. Esta circunstancia es tpica de anemias aplsicas, anemias carenciales y enfermedades inflamatorias y neoplsicas.

RECUENTO DE PLAQUETAS
Principio El recuento de plaquetas se realiza directamente en un microscopio de contraste de fases, previa lisis de los hemates, o tambin se puede observar en un microscopio convencional. Recuento en cmara Materiales Hemocitmetro o cmara de Neubauer. Solucin de procana Pipetas automticas de 100 a 1000 mL y 0 a 100 mL. Cmara hmeda. Tubos de plstico de 12 x 75. Microscopio convencional. Mtodo Mezclar bien la muestra de sangre obtenida con EDTA. Hacer una dilucin de 20 uL de sangre total con 380 uL de solucin de procana en un tubo de plstico de 12 x 75 (dilucin 1/20). Dejar en reposo por 15 minutos en una gradilla. De esta dilucin, llenar en cmara de Neubauer. Dejar en reposo por 15 minutos en cmara hmeda. Enfocar con objetivo de 45x y contar las plaquetas en el retculo central de 1 mm2 cuadrado. Calcular el nmero total de plaquetas segn la frmula que se lee a continuacin: Resultados Se aplica la siguiente frmula: N de plaquetas x mm3 = plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos altura x dilucin x rea

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Reemplazando = plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos 1/10 x 1/20 x 1/5 = plaquetas contadas en 5 cuadrados pequeos 1/1000 = plaquetas contadas x 1000 Valores de referencia 150 000 - 450 000 plaquetas/mm3 Recuento en lmina Se cuentan 10 campos con objetivo de 100x y se multiplica por 1000 que es la frmula convencional para recuento de plaquetas.
PLAQUETA X CAMPO 01 12 23 34 46 67 7 10 10 13 13 18 18 20 TOTAL 10,000 20,000 30,000 50,000 80,000 100,000 150,000 200,000 300,000 350,000 400,000

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Otro Mtodo: (plaquetas X campo) X 20,000 VALORES NORMALES: Oscilan entre 150.000 y 450.000 / mm3

Causas de aumento (trombocitosis) La trombocitosis puede ser secundaria a un estmulo medular inespecfico (posthemorrgica o tras una crisis hemoltica), paraneoplsica o posquirrgica. Es especialmente importante la que se produce tras la esplenectoma. La trombocitopenia esencial aislada es muy rara, pero puede aparecer asociada a trastornos mieloproliferativos. En estos casos, las plaquetas pueden ser funcionalmente inoperantes y cursar, paradjicamente, con hemorragias. Causas de disminucin (Trombopenia) Es fundamental descartar que no se haya producido un error de lectura como consecuencia de una agregacin parcial de las plaquetas en la muestra estudiada.

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Especialmente llamativos son los casos en los que existe una agregacin precisamente en presencia de EDTA, que es el anticoagulante utilizado para mantener incoagulable la muestra de sangre en la que se ha de realizar la lectura. Las verdaderas trombopenias pueden obedecer a una causa central (generalmente asociada a leucopenia y anemia), perifrica (inmunolgica, secuestro, consumo) o mixta (vrica). La prpura trombocitopnica idiomtica es relativamente frecuente.

LEUCOGRAMA
Los leucocitos de dividen en: GRANULOCITOS Aquellos que tienen grnulos especficos: neutrfilos, eosinfilos y basfilos. Los grnulos observados en extendido estn cargados de lisosomas y enzimas hidrosolubles que son agentes antibacterianos necesarios para la digestin de partculas fagocitarias. Aqu tenemos: Neutrfilos Neutrfilos abastonados

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Es el granulocito en banda. Mide de 10m a 14m, ncleo condensado que puede presentar una dos constricciones, pero no tiene puente de cromatina. El citoplasma presenta grnulos especficos e inespecficos, membrana celular lisa, citoplasma de color ligeramente rosado dependiendo de la coloracin. Neutrfilos segmentados Mide igualmente de 10m a 14m, ncleo que presenta mayor condensacin y est formado por varios lbulos (hasta 4) unidos por puentes de cromatina. El citoplasma est cargado de grnulos. Alteraciones leucocitarias de los neutrfilos Granulaciones txicas Son grnulos basfilos ms oscuros que lo normal y se observan durante el transcurso de infecciones severas y estadios txicos. Vacuolas txicas Se observan en el citoplasma de los neutrfilos durante infecciones severas y estados txicos. Cuerpos de Dohle Son reas teidas de azul en el citoplasma de los polimorfonucleares neutrfilos y se encuentra en infecciones, especialmente en neumonas. Palillo de tambor Es un pequeo apndice (cromatina sexual) que permite conocer el sexo del individuo mediante una simple observacin en un frotis de sangre perifrica en los neutrfilos. Se presenta en las mujeres. Polisegmentacin Son neutrfilos con 5 o ms lobulaciones. Se observa en las anemias por deficiencia de vitamina B-12 y cido flico, Sndrome de Down y otras anomalas. Adems existe aumento (neutrofilia) en: Infecciones bacterianas por agentes piognicos. Abscesos y septicemias. Procesos inflamatorios y necrosis tisular. Trastornos metablicos por intoxicacin. Procesos malignos: Carcinoma. Hemorragias y hemlisis. Postesplenectoma. Desviacin a la izquierda

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Significa el aumento de las formas inmaduras (en banda o cayado, y juveniles) dentro de los neutrfilos. Constituye un importante valor diagnstico y pronstico. Puede observarse en: infecciones e intoxicaciones. Desviacin a la derecha Corresponde a la hipersegmentacin nuclear. La mayora de PMN presentan ms de 5 lobulaciones. Ocurre en: Anemia perniciosa. Hipersegmentacin constitucional hereditaria. Reacciones mieloides de la sepsis. Afecciones hepticas. Leucemia mieloide. En la agona. Existe disminucin (neutropenia) en: Aplasia medular Mieloptisis de la mdula sea Agentes citotxicos

Granulopoyesis inefectiva (anemias megaloblsticas).

Eosinfilos Son parecidos a los neutrfilos, pero son algo mayores. Generalmente el ncleo es bilobulado y lo que ms caracteriza a esta clula es la presencia de grnulos color naranja-marrn vistos claramente, muchas veces estos grnulos hacen que se pierda la membrana celular por el rompimiento de sta, ya que estas clulas son muy frgiles. Patologa: Existe aumento en: Infecciones parasitarias. Reacciones alrgicas. Enfermedades cutneas. Neoplasias. Basfilos La caracterstica ms importante de esta clula es la cantidad de grnulos de color azul negruzco que se encuentra ocupando toda la clula (esto cuando la clula es madura) y parte de la clula cuando sta es inmadura. Presenta un ncleo que muchas veces no logra observarse por la cantidad de grnulos que contienen histamina y heparina. Patologa: Existe aumento en: Leucemia por basfilos. AGRANULOCITOS

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No poseen grnulos. Aqu tenemos a los linfocitos y monocitos. Linfocitos. Pueden ser: Linfocitos grandes. Linfocitos pequeos. Linfocitos grandes Miden de 15m a 25m, presentan generalmente un ncleo ligeramente oval discretamente indentado, la cromatina es densa pero no tanto como en el linfocito pequeo (esto lo puede confundir con el monocito). Citoplasma abundante, azul plido y puede contener grnulos azurfilos inespecficos. Patologa Linfocitos atpicos Llamados tambin virus linfocitos, clulas linfomonocitoides, clulas activadas de Turk, clulas de Turk, virocitos, inmunoblastos, etc. Miden de 15m a 30m, ncleo irregular, indentado, excntrico y puede observarse nucleolos. El citoplasma es amplio, color azul tenue, y puede presentar grnulos azurfilos y vacuolas. Estas clulas pueden observarse en mononucleosis infecciosa, hepatitis viral, herpes zoster, enfermedades autoinmunes y normalmente pueden hallarse hasta en 5%. Linfocitos con mitosis o binucleados Pueden encontrarse en enfermedades virales. Linfocitos vacuolados

En caso de linfocitos que reaccionan por efecto de la radiacin ultravioleta o

respuesta a tratamientos de quimioterapia. Linfocitos pequeos Miden de 9m a 15m, presentan un ncleo que ocupa casi toda la clula, excntrico, cromatina fuertemente densa. El citoplasma es escaso, basfilo y puede contener grnulos azurfilos inespecficos. Monocitos Son los leucocitos de mayor tamao en la sangre (14m a 20m). Su ncleo es generalmente excntrico, aunque puede ser central. Su cromatina nuclear es laxa, distribuida en forma regular, la forma del ncleo generalmente es de una madeja de lana o arrionada, aunque puede tener forma de un abastonado. El citoplasma es de color gris y puede presentar grnulos inespecficos (azurfilos) que carecen de significado clnico. Patologa: Estn elevados en: Tuberculosis. Endocarditis bacteriana.

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Enfermedades virales como sarampin, rubola, etc. Colagenosis, neoplasias, etc. CRITERIOS PARA EL DESARROLLO DE UN LEUCOGRAMA

Se considera leucocitosis cuando la cifra de glbulos blancos excede

de 10 000.

Se considera leucopenia cuando la cifra de glbulos blancos es inferior

a 5 000.

No olvidar que el ejercicio produce leucocitosis fisiolgica de

consideracin, de all que el recuento debe hacerse en condiciones basales.

En los granulocitos debe informarse el nmero de lobulaciones del

ncleo. A mayor edad de la clula mayor el nmero de lbulos y lo contrario.

Neutrfilo segmentado

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Granulaciones txicas

Vacuolas txicas

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Cuerpos de Dohle

Palillo de tambor

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Linfocitos atpicos

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Linfocitos en mitosis

JFDGHJFDHJFHJHJRFHH

Linfocitos vacuolados

Monocitos

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ALTERACIONES ERITROCITARIAS
Aqu se encuentran incluidas las clulas progenitoras de la serie roja que normalmente se encuentra en la mdula sea, pero cuando stas pasan a sangre perifrica antes de su maduracin en normocitos o hemates pueden indicar alguna patologa como leucemias, anemias u otras alteraciones celulares. Aqu tenemos: PRONORMOBLASTO Es una clula primitiva (inmadura) de aproximadamente 25m a 35m de dimetro, citoplasma basfilo, presencia de 1 a 2 nucleolos, existe una condensacin ligera de la cromatina, citoplasma ligeramente excntrico. Esta clula se divide en: NORMOBLASTO BASFILO Es ligeramente menor que el pronormoblasto, 12m a 18m, citoplasma igualmente basfilo, pero, se diferencia del anterior en que ya no presenta nucleolos y su cromatina nuclear es ms condensada ya que es un elemento menos inmaduro. El siguiente paso en la maduracin es: NORMOBLASTO POLICROMATFILO Es una clula que mide de 12m a 16m, aunque usualmente puede ser mayor que el normoblasto basfilo, presenta ncleo excntrico y lo que ms caracteriza a esta clula es que ya presenta pequeas cantidades de hemoglobina citoplasmtica que se traduce en un color violeta (azul y rojo). Su cromatina es ms condensada que la anterior. NORMOBLASTO ORTOCROMTICO Mide de 10m a 14m, esta clula es bien caracterstica y no debe confundirse con el linfocito ya que prcticamente es un hemate nucleado, como tambin se le conoce. Presenta su citoplasma rosado, ncleo totalmente excntrico como una bola maciza. Este normoblasto ya no se divide, sino que pierde su ncleo por un mecanismo de expulsin y se convierten en: RETICULOCITOS Estos todava presentan en su citoplasma restos de ARN y protoporfirina resultados de la conversin del normoblasto ortocromtico a reticulocito y solo se pueden observar con coloraciones especiales. En sangre perifrica se les puede observar como elementos macrocticos y policromatfilos. NORMOCITOS O HEMATES

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Discos cuya biconcavidad hace que aparezcan con cierta palidez central al no captar el colorante en esa zona. Miden aproximadamente de 7,2m a 7,4m y puede llegar hasta ocho. Presenta un pigmento respiratorio que le da el color rosado caracterstico que es la hemoglobina que se encarga del transporte de oxgeno. Ms adelante se explicarn las alteraciones ms frecuentes de estos elementos celulares. Se dividen en: Alteraciones en tamao. Alteraciones en su forma. Alteraciones de color. Inclusiones anormales. Alteraciones en el tamao Llamadas tambin anisocitosis. Pueden ser de dos tipos: Macrocitos.- Hemates que presentan un tamao superior al normal (ms de 9m) y su expresin mxima es el megalocito. Suelen aparecer en la anemia megaloblstica debida a dficit de vitamina B12 o cido flico. Se suele observar cuando hay un aumento de la actividad eritropoytica, como un mecanismo de compensacin a la prdida de los hemates, sea por anemia severa o hemorragias. En la sangre perifrica se pueden observar como hemates grandes policromatfilos o reticulocitos. Microcitos : Hemates que presentan un tamao inferior al normal (menos de 6m) y se encuentran en pacientes con anemia ferropnica y talasemias. Alteraciones en la forma Llamadas tambin poiquilocitosis. Entre stos tenemos: Esferocitos : Son hemates esfricos como unas pelotas, no son bicncavos, presentan un dimetro inferior al normal pero ms grueso. Su vida media es de 14 das, producen taponamiento de los vasos sanguneos. Se encuentran en la enfermedad esferocitosis hereditaria o enfermedad de MihkowskiChauffard (defecto congnito de la membrana eritrocitaria). Tambin pueden ser adquiridos por factores extraeritrocitarios. Codocitos : Llamados tambin dianocitos. En la regin central presentan un rea con mayor contenido hemoglobnico (zona densa). La interfase entre la membrana celular y el centro es transparente. Se encuentran en hemoglobinopatas, talacemias, anemia ferropnica y en algunas hepatopatas crnicas con aumento de colesterol y fosfolpidos. Drepanocitos : Son hemates cuya membrana hemtica se altera y se hace falciforme (forma de hoz o media luna). Su apariencia es propia del estado homocigoto de la hemoglobina S. Su enfermedad se conoce como drepanocitosis hereditaria.

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Eliptocito : Los hemates son alargados (ovalocitos). Se encuentran en la enfermedad llamada ovalocitosis hereditaria. Su presencia se debe a una alteracin congnita de la membrana del hemate, aunque puede ser adquirida en caso de una anemia megaloblstica, ferropnica o arregenerativa. Crenocitos : Son aquellos que presentan membrana ondulante e irregular. Se encuentran en algunas anemias hemolticas. Este fenmeno puede ser inducido in vitro exponiendo los hemates a una solucin hipertnica. Cuando la caracterstica es muy notable puede emplearse el trmino equinocito. Equinocitos: Tambin llamados acantocitos. Las prominencias de la membrana eritrocitaria son ms aguzadas (alargadas) y distribuidas irregularmente. Se encuentran en la acantocitosis que se caracterizan por la ausencia de lipoprotenas plasmticas. Dacriocitos : Son hemates en forma de lgrima. Se encuentran en la anemia ferropnica, anemia megaloblstica y talasemia. Esquistocitos : Son fragmentos hemticos. Se encuentran en anemias hemolticas, microangiopatas, quemaduras y con ms evidencias en individuos splenectomizados. Estomatocitos : Son hemates que en lugar de una deplecin central clara tienen una banda plida central que les da un aspecto de boca. Se hereda como carcter autosmico dominante. Esta enfermedad es causada por anormalidad hereditaria de la membrana eritrocitaria. Selenocitos : Son eritrocitos alterados que adoptan forma semilunar. Es un artificio de tcnica que aparece especialmente en frotices sanguneos de pacientes anmicos. Excentrocitos: Son hemates con distribucin irregular de la hemoglobina. Su tamao es inferior al normal y se caracteriza por poseer contornos parcialmente arrugados, pero adems se observa una distribucin irregular de la hemoglobina que aparece desplegada de la parte interna hacia uno de los extremos. Qnizocito: Son hemates que presentan un estoma o boca en la regin central completamente coloreada y lo dems incoloro. Morfolgicamente es todo lo contrario a las caractersticas del estomatocito. Se encuentran en algunas anemias como las ferropnicas. Alteraciones de color Aqu observamos las diferentes tonalidades de color de los hemates dependiendo del contenido hemoglobnico. Tenemos: Hipocroma: Son hemates con disminucin del contenido de la hemoglobina y dependiendo de la cantidad de este pigmento es que observamos a los hemates con diferentes caracteres de color. Aqu estn incluidos los anulocitos, que son hemates

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en forma de anillo en que solo la membrana eritrocitaria est coloreada y que se traduce en una hipocroma de grado severo (+++). Hipercroma : Son hemates vidos de hemoglobina. Pueden encontrarse en caso de enfermedades como la policitemia vera o la policitemia fisiolgica y esferocitosis hereditaria. Policromatofilia : Presencia de hemates con tonalidad (azul y rojo) morada. Se le relaciona con inmadurez celular, clulas nucleadas, presencia de reticulocitos, macrocitos, etc. Esto debido a su elevada cantidad de ARN. Anisocroma: Diferentes tonalidades de color como hemates hipocrmicos, hipercrmicos, normocrmicos y policromatfilos. Se encuentran en ciertas anemias refractarias. Inclusiones anormales Punteado basfilo : Son grnulos basfilos presentes en el citoplasma de los hemates. Puede tratarse de un reticulocito por su elevado contenido de ARN. Se encuentra en una intoxicacin por plomo llamada saturnismo. Cuerpos de Heinz : Son formaciones redondeadas de hasta 3m de dimetro localizadas habitualmente en la periferia de la clula. Se observan con colorantes para reticulocitos. Estos cuerpos son abundantes en sujetos esplenectomizados. Anillos de Cabot : Se cree que sean restos de membrana nuclear eritroblstica o restos despus de una mitosis anormal. Se observan en forma de anillo u ocho invertido. Pueden ser precipitados de ARN o protena carente de importancia diagnstica. Cuerpos de Howel-Jolly : Son restos de cromatina nuclear, resultados de la prdida del ncleo por parte del normoblasto ortocromtico hasta la conversin del hemate. Se les considera signos de regeneracin celular. Se observan en pacientes esplenectomizados. Siderocitos : Son hemates con contenido de hierro libre no hemoglobnico de color verde azulado. Grnulos de Shuffner: Son grnulos que presentan algunos hemates en caso de parasitismo por plasmodium vivax. Grnulos de Maurer: Son grnulos de color violeta oscuro que se encuentran en pacientes con parasitismo por plasmodium falciparum. Granulacion azurfila: Son pequeas granulaciones eritrocitarias color violeta prpura y corresponden a restos de normoblastos ortocromticos producto de la cariorrexis y del paso de un elemento inmaduro a otro maduro. Se observa tanto en sndromes diseritropoyticos congnitos o adquiridos.

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GRUPO SANGUINEO
FUNDAMENTO:

El suero humano contiene aglutininas, capaces de aglutinar los eritrocitos humanos, y hemolisinas que producen hemlisis en las clulas sanguneas por la presencia de un componente termolbil del suero que es el complemento.
PROCEDIMIENTO METODO DEL PORTAOBJETOS (Lee-Vincent)

1. En un portaobjetos marcar con un lpiz graso un A en la Izquierda, una B en el centro y O en la derecha. 2. Colocar una gota de suero testigo A (anti - B), otra igual de suero B (anti - A) y anti D, se transfiere una pequea cantidad de sangre a cada una de las gotas de suero 3. Mezclar bien con una varilla teniendo la precaucin de usar para cada gota un extremo distinto.

4. Se efectan suaves movimientos de rotacin durante 30 segundos observando las

reacciones, la aglutinacin aparece inmediatamente, o despus de 3 a 5 minutos.
RESULTADOS: ANTI- A AGLUTINA NO AGLUTINA AGLUTINA NO AGLUTINA AGLUTINA NO AGLUTINA AGLUTINA NO AGLUTINA ANTI- B NO AGLUTINA AGLUTINA AGLUTINA NO AGLUTINA NO AGLUTINA AGLUTINA AGLUTINA NO AGLUTINA ANTI D AGLUTINA AGLUTINA AGLUTINA AGLUTINA NO AGLUTINA NO AGLUTINA NO AGLUTINA NO AGLUTINA GRUPO FACTROR A POSITIVO B POSITIVO AB POSITIVO O POSITIVO A NEGATIVO B NEGATIVO AB NEGATIVO O NEGATIVO Y

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PREPARACIN DE COLORANTES Y SOLUCIONES MS USADOS EN HEMATOLOGA SOLUCIN DE HAYEM Reactivos Bicloruro de mercurio 0,5 g Sulfato de sodio 5,0 g Cloruro de sodio 1,0 g Agua destilada 200 mL Procedimiento Se mezclan todos los reactivos y se guarda en frasco de vidrio en lugar fresco. SOLUCIN SALINA FISIOLGICA AL 0,9% Reactivos Cloruro de sodio 0,9 g Agua destilada c.s.p. 100 mL Procedimiento Mezclar el cloruro de sodio en el agua destilada. Guardar en lugar fresco. SOLUCIN DE TURK Reactivos

cido actico glacial 2,0 mL

Solucin acuosa de violeta de genciana al 1% 1,0 mL Agua destilada c.s.p. 100 mL Procedimiento Mezclar los reactivos y guardar en frasco mbar en lugar fresco. REACTIVO DE DRABKIN Reactivos Bicarbonato de sodio 1,0 g Cianuro de potasio (KCN) 50 mg Ferricianuro de potasio (K3Fe2 (CN)6) 200 mg Agua destilada c.s.p. 1000 mL Procedimiento

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Mezclar todo y guardar en frasco oscuro protegido de la luz. Es estable un mes. SOLUCIN AMORTIGUADORA TAMPONADA Reactivos Hidrofosfato disdico (Na2HPO4 2H20) 3,76 g Fosfato de potasio dihidrogenado 2.10 g Agua destilada c.s.p. 1000 cc Ajustar a un pH de 7,2 para coloraciones de Wight o Leishman. Procedimiento Mezclar todos los reactivos y guardar en frasco de vidrio en lugar fresco. COLORANTE DE GIEMSA Reactivos Colorante Giemsa en polvo 1,0 Metanol (CH3 OH) 66,0 mL Glycerol 66,0 mL Procedimiento Disolver el colorante con el glicerol. Adicionar el metanol, mezclar bien y dejar a temperatura ambiente de 7 a 14 das (maduracin). Filtrar antes de su empleo. Guardar en frasco color caramelo. COLORANTE DE LEISHMAN Reactivos Colorante de Leishman 1,5 g Metanol (CH3 OH) 100 mL. Procedimiento Disolver el colorante en metanol y trasvasarlo a un frasco oscuro o color caramelo, agitar, luego filtrar. COLORANTE DE WRIGHT Reactivos Colorante de Wright 0,3 g Metanol (CH3 OH) 97,0 mL Glycerol 3,0 mL Procedimiento Disolver en un mortero el colorante con el glicerol. Una vez disuelto se adiciona el metanol trasvasndolo a un frasco oscuro (color caramelo), luego agite. Filtrar antes de usar.

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PREPARACIN DE ANTICOAGULANTES Reactivos Citrato de Sodio 3,8 g Agua destilada c.s.p. 100 mL Procedimiento Se mezcla el citrato de sodio en el agua destilada. Para pruebas de hemostasia se emplea a razn de 1/9 (1 volumen de anticoagulante para 9 volmenes de sangre) y para la VSG la proporcin de 1/4 (un volumen de anticoagulante para 4 volmenes de sangre).

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.BIBLIOGRAFIAS 1. Ministerio de Salud del Per- Instituto Nacional de Salud. Manual de normas de bioseguridad. Lima: MINSA - INS; 1996. Serie de Normas Tcnicas N 18. 2. Bauer J. Anlisis clnicos. Mtodos clnicos e interpretacin. 1 ed. barcelona: Editorial Revert S.A., 1986. 3. Hayhoe F, Flemans R. Atlas color de citologa hematolgica. 2 ed. Mxico: Editorial Mdica Panamericana, 1999. 4.-Muoz M. Guas de Prctica de hematologa y trombosis. Lima: Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Facultad de Medicina. Escuela Acadmico Profesional de Tecnologa Mdica, 1995. 5. Ministerio de Salud del Per - Instituto Nacional de Salud. Manual de procedimientos de laboratorio para la obtencin y envo de muestras. Lima: MINSA - INS, 1995. Serie de Normas Tcnicas N 15. 6.- Aldo Guerci Laboratorio. Mtodos de Anlisis Clnicos y su Interpretacin 3era Edicion .Editorial el Ateneo,1985 7.- A Balcells La Clnica y el Laboratorio. 9 edicin .Editorial Litoarte S. Naucalpan Edo do mexico 1973.

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